JPS61234780A - Production of aromatic amino acid decarboxylase - Google Patents
Production of aromatic amino acid decarboxylaseInfo
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- JPS61234780A JPS61234780A JP60078170A JP7817085A JPS61234780A JP S61234780 A JPS61234780 A JP S61234780A JP 60078170 A JP60078170 A JP 60078170A JP 7817085 A JP7817085 A JP 7817085A JP S61234780 A JPS61234780 A JP S61234780A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、フォリオタ属（Ｐｈｏｌｉｏｔａ属）に属す
る微生物を培養し、その培養物から芳香族アミノ酸デカ
ルボキシラーゼを生産する方法に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Application Field] The present invention relates to a method for culturing microorganisms belonging to the genus Pholiota and producing aromatic amino acid decarboxylase from the culture.
芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼは、芳香族アミノ酸
すなわちトリプト７７ン、フェニルアラニン、千ロジン
に特異的に作用する脱炭酸酵素で、各々の基質からトリ
プタミン、β−フェニルエチルアミン、チラミンと二酸
化炭素を生成する。Aromatic amino acid decarboxylase is a decarboxylase that specifically acts on aromatic amino acids, such as trypton-77, phenylalanine, and rosin, and produces tryptamine, β-phenylethylamine, tyramine, and carbon dioxide from each substrate.
従来、この芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼは、ブタ
腎臓などの動物臓器に存在が認められており〔Ｔｈｅ
ｅｎｚｙＩＩｌｅｓ”第３版、第６巻第２１７〜２５３
頁（１９７２） ）、また微生物にもその存在が知られ
ている。 たとえば、ミクロフッカス・ベルシトレウス
（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｒｃｉｔｒｅｕｓ）
（Ｈ，Ｎａｋａｚａｕ＋ａ ｅＬａｌ ； Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅ
５ｅｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａ−ｔｉｏｎ、 Ｖ＋１
．６１（１）、７５−８２（１９７４） ）があり、ミ
クロフッカス属以外でもアクロモバクタ−属（Ａｃｈｒ
ｏｍｏｂａｃｔｅｒ属）、スタフイロフッカス属（Ｓ
Ｌａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属）、サルシナ属（Ｓａｒ
ｃｉｎａ属）等にその存在が認められている（ Ｈ，Ｎ
ａｋａｚａｕ＋ａ ｅｔ ａｌ ： Ａｇ−ｒｉｃ、
Ｂｉｏｌ、 ＣｈｅＩＩｌ、 Ｖｌ、４１．２２４１−
２２４７（１９７７） ）。Conventionally, this aromatic amino acid decarboxylase has been recognized to exist in animal organs such as pig kidney [The
enzyIIles” 3rd edition, Volume 6, Nos. 217-253
(1972)), and its existence is also known in microorganisms. For example, Micrococcus percitreus
(H,Nakazau+a eLal; Bioch
chemical and biophysical Re
5erch Communica-tion, V+1
．． 61 (1), 75-82 (1974)), and in addition to Microfuccus, there is also a genus Achromobacter (Achr).
omobacter genus), Staphylococcus genus (S
Laphylococcus spp.), Sarcina spp.
cina genus), etc. (H,N
akazau+a et al: Ag-ric,
Biol, CheIIl, Vl, 41.2241-
2247 (1977)).
これらの中で、動物起源のものは、数量的に生産が限定
され多量に生産供給することは非常に困難であった。
また前記微生物から、芳香族アミノ酸デカルボキシラ
ーゼを生産する場合には、新たに培養しなければならな
いので設備費、培養コスト等が製品コストに反映する。Among these, those of animal origin are limited in quantity and are extremely difficult to produce and supply in large quantities.
Furthermore, when aromatic amino acid decarboxylase is produced from the microorganism, new cultivation is required, so equipment costs, culture costs, etc. are reflected in the product cost.
また、それらの菌と同じ種属には病原性を有するも
のも多（、衛生的にも大きな問題であった。In addition, many of the same species and genera as these bacteria are pathogenic (this was also a major hygienic problem).
上述の如く、従来方法によれば芳香族アミノ酸デカルボ
キシラーゼを製造する場合、新たに菌を培養しなければ
ならないので設備費、培養コストが製品の価格に影響を
与える。As mentioned above, when producing aromatic amino acid decarboxylase according to the conventional method, it is necessary to newly culture bacteria, so the equipment cost and culture cost affect the price of the product.
また、それらの菌の衛生的安全性は全く検討されていな
い。Furthermore, the sanitary safety of these bacteria has not been studied at all.
本発明は、前記問題点を解消し、産業的に安定的に生産
でき、製造コストが安価で、かつ衛生的に安全な芳香族
アミノ酸デカルボキシラーゼの製造方法を提供せんとす
るものである。The present invention aims to solve the above-mentioned problems and provide a method for producing aromatic amino acid decarboxylase that can be produced stably industrially, is inexpensive, and is hygienically safe.
本発明方法は、上記目的を達成するために次の如き構成
をとるものである。 すなわち、フォリオタ属（Ｐｈｏ
ｌｉｏＬａ属）に属する芳香族アミノ酸デカルボキシラ
ーゼ生産能を有する微生物を培養し、培養物から芳香族
アミノ酸デカルボキシラーゼを採取することを特徴とす
る芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼの製造方法である
。The method of the present invention has the following configuration to achieve the above object. That is, the genus Pho
The present invention is a method for producing aromatic amino acid decarboxylase, which comprises culturing a microorganism capable of producing aromatic amino acid decarboxylase belonging to the genus LioLa) and collecting aromatic amino acid decarboxylase from the culture.
本発明方法において使用するフォリオタ属微生物として
は、ナメコ〔学名（以ド同様）；フォリオタ・ナメコ：
Ｐｈｏｌｉｏｔ−ａ ｎａｍｅｋｏ ）、ヤケアドン
ムタケ〔フォリオタ・カンボナリア； Ｐｈｏｌｉｏｔ
ａ ｃａｎｂｏｎａｒｉａ ）、シロナメツムタケ〔フ
ォリオタ・レンツ； ＰｈｏｌｉｏＬａ １ｅｎｔａ）
、チャナメッムタヶ〔フォリオタ・ルブリカ： Ｐｈｏ
ｌｉｏｔａ １ｕｂｒｉｃａ）、キナメラムタケ〔フォ
リオタ・スブモサ： Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｓｐｕｍｏｓ
ａ ） 、 ’７チスギタケ〔７↑リオタ・テレストリ
ス： Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｔｅｒｒｅｓｔｒ＋ｓ：１７
カ゛ンムタケ〔フォリオタ・アスＦう〃リナ： Ｐｈｏ
ｌｉｏｔａａｓｔｒａｇａｌｉｎａ ］、ヌメリスギタ
ケ〔フォリオタ・アディボサ： Ｐｈｏｌｉｏｔａ ａ
ｄｉｐｏｓａ）、スギタケ〔フォリオタ・スクアロサ；
Ｐｈｏｌ １ｏｔａ ５ｑｕａｒｒｏｓａ ）、シブ
イロスギタケ〔フォリオタ・アルボクレヌラタ； Ｐｈ
ｏｌｉｏｔａ ａｌｂｏｃｒｅｎｕｌａｔａ〕、スギタ
ケモドキ〔フォリオタ・スフアロソイデス； Ｐｈｏｌ
ｉｏｔａｓｑｕａｒｒｏｓｏｉｄｅｓ ］、ヌメリスギ
タケモドキ［フォリオタ・アウリベラ； Ｐｈｏｌｉｏ
ｔａ ａｕｒｉｂｅｌｌａ］、ニセムクエタケ〔フォリ
オタ・アブストルサ； Ｐｈｏｌｉｏｔａ ａｂｓｔｒ
ｕｓａ）等がある。The microorganisms of the genus Foliota used in the method of the present invention include Nameco [scientific name (same hereafter); Foliota nameco:
Pholiot-a nameko), Pholiota cambonaria; Pholiot
a canbonaria), white name tsumutake (PholioLa 1 enta)
, Chanamemutaga [Foliota Rubrica: Pho
liota 1ubrica), Pholiota spumos
a), '7 Pholiota terrestris [7↑Pholiota terrestr+s:17
Kanmutake [Foliota Ass F] Lina: Pho
liotaastragalina], Pholiota adibosa
diposa), Sugitake [foliota squalosa;
Phol 1ota 5quarrosa), Pholiota arboculenulata;
oliota albocrenulata], Phol
iotasquarrosoides], Pholiota auribella [Foliota auribella;
ta auribella], Pholiota abstrusa
USA) etc.
上記フォリオタ属微生物は、ミズナラ、クリなどの切株
、枝枯れ部分に自生するほか、広葉樹や針葉樹のオガク
ズで子実体の人工栽培も行われており、いずれも食用菌
として知られているものである。 あるいは、例えばタ
イプカルチャーとしてナメ） （Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｎ
、ａｍｅｋｏ ） Ｉ Ｆ Ｏ３０３７３菌株（財団
法人発酵研究所にて保存されている）なども使用できる
。The above-mentioned microorganisms of the genus Foliota grow naturally on stumps and dead branches of Quercus oaks and chestnut trees, and fruiting bodies are also artificially cultivated using sawdust from broad-leaved trees and coniferous trees, and both are known as edible fungi. . Or, for example, as a type culture)
, ameko) IFO30373 strain (preserved at the Fermentation Research Institute) can also be used.
更に、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼの生産能をす
るフォリオタ属微生物であれば、上記以外のものも使用
でき、また、それから得られた変異株も使用できる。Furthermore, microorganisms of the genus Foliota that are capable of producing aromatic amino acid decarboxylase can be used, as well as mutants obtained from them.
本発明において使用するフオリオタ属微生物の培養には
、該微生物が資化し得る炭素源、窒素源、その他の微量
成分を含有する培地が用いられる。 炭素源としては、
特に米ヌカ、米粉、ふす主、大豆粉、トウモロコシカス
（コーンプラン）、穀粉、でんぷんなどが好ましい。
窒素源としては、ペプトン、酵素エキス、アンモニウム
塩類、硝酸塩類などの有機または無機含有物が用いられ
る。 その他に少量の無機塩類、例えば、リン酸類、カ
ルシウム、マグネシウム、マンガン、鉄などの金属塩類
、チアミンなどの微量栄養物質等が必要に応じて適宜に
添加できる。 培養は、静置または振どう培養のいずれ
でもよいが、好気的条件下で深部培養するのが好ましい
。 例えば、振とぅ培養の場合、培養温度１０〜４０’
Ｃ程度の範囲でｐＨ３〜８の範囲、好ましくはｐＨ６〜
７に保持し、約５〜１０日間の培養を行うことができる
。For culturing the microorganisms of the genus Foliota used in the present invention, a medium containing a carbon source, a nitrogen source, and other trace components that can be assimilated by the microorganisms is used. As a carbon source,
Particularly preferred are rice bran, rice flour, wheat bran, soybean flour, corn flour, grain flour, and starch.
As the nitrogen source, organic or inorganic substances such as peptone, enzyme extract, ammonium salts, nitrates, etc. are used. In addition, small amounts of inorganic salts, such as phosphoric acids, metal salts such as calcium, magnesium, manganese, and iron, micronutrients such as thiamine, etc. can be added as appropriate. The culture may be static or shaking, but it is preferable to culture in depth under aerobic conditions. For example, in the case of shaking culture, the culture temperature is 10-40'
In the range of about C, the pH is in the range of 3 to 8, preferably pH 6 to
7 and culture for about 5 to 10 days.
本発明方法における芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ
は、フォリオタ属微生物の子実体からも製造することが
できる。The aromatic amino acid decarboxylase in the method of the present invention can also be produced from fruiting bodies of microorganisms of the genus Foliota.
この子実体からの採取においては、まず通常用いられる
オ〃クズ栽培法によって子実体形成を行う。 すなわち
、クリ、コナラ、ミズナラなどの広葉樹またはスギなど
の針葉樹からのオガクズを使用し、これに栄養源として
米ヌカ、トウモロコシなどを添加して、それらを粉体混
合し、次いで水を加え、水分約５５〜８０％としたもの
を才がクズ培地とする。 この混合に際して、通気性を
高めるために、チップダストを混入することもできる。In collecting the fruiting body, first, the fruiting body is formed using the commonly used oak cultivation method. That is, we use sawdust from broad-leaved trees such as chestnut, Quercus Quercus, and Quercus Quercus, or from coniferous trees such as Japanese cedar, add rice bran, corn, etc. as a nutrient source, mix them into powder, and then add water. The content of about 55 to 80% is used as a kudzu culture medium. At the time of this mixing, chip dust can also be mixed in order to improve air permeability.
オガクズ培地は、殺菌後、フォリオタ属微生物種菌を
接種し、培養温度２０〜３０℃で約９０〜１８０日間静
置培養する。 次いで温度７〜２０℃、湿度８０〜９０
％程度の環境下で子実体の分化および生育を行ない、フ
ォリオタ属微生物子実体を得ることができる。 さらに
また、子実体を形成しなくとも、才がクズ培地で栄養菌
糸を培養し、この菌糸から本発明に係る酵素を採取する
ことができ、あるいは子実体を生育しこれ採取した後の
残存廃培地からも、本発明に係る酵素を採取することが
できる。After sterilization, the sawdust medium is inoculated with microorganisms of the genus Foliota and cultured stationary at a culture temperature of 20 to 30° C. for about 90 to 180 days. Then the temperature is 7-20℃ and the humidity is 80-90℃.
The fruiting body can be differentiated and grown in an environment of about 100% to obtain the fruiting body of a microorganism of the genus Foliota. Furthermore, even if fruiting bodies are not formed, vegetative mycelia can be cultured in a kudzu medium and the enzyme according to the present invention can be collected from this hyphae, or residual waste after fruiting bodies have been grown and collected. The enzyme according to the present invention can also be collected from the culture medium.
本発明に係る芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼは、フ
ォリオタ属微生物の菌糸体の中に存在するので、上述の
如くして得られた培養物（子実体、培地内菌糸、廃培地
を含む）は、水又は温水と共にホモデナイズし、遠心分
離あるいはろ過で抽出液を採集し、この抽出液を芳香族
アミノ酸デカルボキシラーゼの粗酵素原液とし、次いで
通常方法によって調製と精製を行う。 例えば、アルコ
ール、アセトンなどの有機溶媒沈澱法、硫安塩析法、イ
オン交換樹脂や吸着クロマトグラフィー、ゲルろ適法な
どを必要に応じ適宜組合わせて、上記粗酵素原液か駄本
発明に係る芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼを精製す
ることができる。Since the aromatic amino acid decarboxylase according to the present invention exists in the mycelium of microorganisms of the genus Foliota, the culture obtained as described above (including fruiting bodies, hyphae in the medium, and waste medium) is Alternatively, homodenize with hot water, collect the extract by centrifugation or filtration, use this extract as a crude enzyme stock solution of aromatic amino acid decarboxylase, and then prepare and purify it by conventional methods. For example, the aromatic amino acid according to the present invention can be prepared by combining the above-mentioned crude enzyme stock solution with an organic solvent precipitation method such as alcohol or acetone, ammonium sulfate salting-out method, ion exchange resin or adsorption chromatography, gel filtration method, etc. as necessary. Decarboxylase can be purified.
本発明は、上記の如き構成によって、芳香族アミノ酸デ
カルボキシラーゼ生産能を有するフォリオタ属微生物を
培養し、この培養物から芳香族アミノ酸デカルボキシラ
ーゼ（以下、本酵素と称す。）を製造するものである。According to the present invention, a microorganism of the genus Foliota having the ability to produce aromatic amino acid decarboxylase is cultured, and aromatic amino acid decarboxylase (hereinafter referred to as the present enzyme) is produced from this culture using the above-described configuration. .
本発明により得られる本酵素の性質について以下に述
べる。The properties of the present enzyme obtained by the present invention will be described below.
（１）本酵素の作用
本酵素をトリプトファン、フェニルアラニン、チロシン
に作用させたとき、各々トリプタミン、β−フェニルエ
チルアミン、チラミンを生版する。 すなわち、次のよ
うな反応を行う。(1) Action of this enzyme When this enzyme is allowed to act on tryptophan, phenylalanine, and tyrosine, tryptamine, β-phenylethylamine, and tyramine are produced, respectively. That is, the following reaction is performed.
芳香族アミノ酸
デカルボキシラーゼ
Ｒ−ＣＨ２ＣＯＯＨ−一一一→Ｒ−ＣＨ，ＮＨ，＋ＣＯ
□Ｎｌ２ アミン
芳香族アミノ酸
当−
（２）酵素活性の測定法
０．１Ｍ）リプドア７ン（またはフェニルアラニン、千
ロジン）０，１ｍｌ、０．５Ｍ ＩＪ ：／酸緩衝液（
ｐＨ６，０）０．１−１、オヨヒ本酵 （４）素０
．２ｍｌを加え、３５℃で４時間反応させる。 次いで
、反応液を少量サンプリングし、薄層クロマトグラフィ
ー（ＴＬＣ）で展開後、ニンヒドリンで発色させ、それ
ぞれの生成アミンのスポットの発色強度をスキャナー（
島原製作所製ＣＳ−９３０型）で測定し、生成アミンを
定量することによって酵素活性を測定する。 ＴＬＣは
、シリカゲル薄層（メルク社製、６０Ｆ−２５４）を用
い、展開溶媒は、ｎ−ブタノール：酢酸：水（７：１：
２）混液を使用した。 酵素活性は、１分間に１μｍｏ
ｌｅのアミンを生成する力価を１単位（ＩＵ）とした。Aromatic amino acid decarboxylase R-CH2COOH-111 → R-CH, NH, +CO
□Nl2 Amine Aromatic Amino Acid (2) Enzyme Activity Measuring Method 0.1M) Lipudor7an (or phenylalanine, 1,000 rosin) 0.1ml, 0.5M IJ:/Acid buffer (
pH6.0) 0.1-1, Oyohi yeast (4) element 0
．． Add 2 ml and react at 35°C for 4 hours. Next, a small amount of the reaction solution was sampled, developed by thin layer chromatography (TLC), and colored with ninhydrin, and the color intensity of each generated amine spot was measured using a scanner (
The enzymatic activity is measured by quantifying the amount of amine produced. For TLC, a thin layer of silica gel (manufactured by Merck & Co., Ltd., 60F-254) was used, and the developing solvent was n-butanol:acetic acid:water (7:1:
2) A mixed solution was used. Enzyme activity is 1 μmo per minute
The potency of le to form an amine was defined as 1 unit (IU).
至適ｐＨおよびｐＨ安定性
本酵素の至適ｐＨはｐＨ６〜７、作用ｐＨはｐＨ３〜８
である（第１図参照）。 本酵素を種々のｐＨで３５℃
、２４時間インキュベーションしたときの安定性を第２
図に示す。 第２図から明らかなように、ｐＨ３〜９で
安定であり、特にｐＨ６〜７で好ましい。Optimal pH and pH stability The optimal pH of this enzyme is pH 6-7, and the working pH is pH 3-8.
(See Figure 1). This enzyme was incubated at 35℃ at various pH.
, the stability when incubated for 24 hours was
As shown in the figure. As is clear from FIG. 2, it is stable at pH 3 to 9, particularly preferably at pH 6 to 7.
温度活性および温度安定性
本酵素の温度活性は、第３図に示される如く、作用温度
２０〜７０℃であった。 本酵素をｐＨ６，０で種々温
度の下〜６０分開インキュベーションした後の残存活性
を第４示す。 本酵素は、５５℃以下で安定である。Temperature Activity and Temperature Stability As shown in FIG. 3, the temperature activity of this enzyme was at an action temperature of 20 to 70°C. The fourth graph shows the residual activity after the enzyme was incubated at pH 6.0 for 60 minutes at various temperatures. This enzyme is stable at temperatures below 55°C.
（５）基質特異性
基質特異性の測定においては、各種アミノ酸を基質５て
、これに本酵素を作用させ、基質の減少量を自動ア；酸
分析叶で測定し、特異性を判定した。 この測定結１お
いて、トリプトファンに対する酵素活性を１ｏｏとしで
各々の基質に対する相対活性を〔第１表〕に示す、〔第
表〕から明らかなように本酵素は、トリプトファンに対
で非常に活性が高く、既知の芳香族アミノ酸デカルボキ
ラーゼと異なっている。 例えば、前記従来技術におけ
ミクロコツカスｏペルシトレウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｐｅｒｃｉｔ。(5) Substrate specificity In measuring substrate specificity, the present enzyme was applied to various amino acids as substrates, and the amount of substrate reduction was measured using an automatic acid analysis method to determine specificity. In this measurement result 1, the enzyme activity against tryptophan is set as 1oo, and the relative activity against each substrate is shown in [Table 1]. It is different from known aromatic amino acid decarboxylases. For example, in the prior art, Micrococcus persitreus
us permit.
ｕｓ）起源の芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼでは、
その１性はトリプトファン１００に対して、フェニルア
ラニン８７、チロシン１２０の比率であり、本酵素とは
異なる。In the aromatic amino acid decarboxylase of US) origin,
It has a ratio of 100 tryptophan to 87 phenylalanine and 120 tyrosine, which is different from the present enzyme.
、０ 〔第１表〕
耕こ
ニし
１に
、２慧）阻害剤などの効果
お 金属Ｉ″等０阻害効果を測定上＝ 阻害剤ｆ
ｔ ？ ｆ、）・、 １１５０°〜１１５°０
０の濃度になるように本酵素液に添加し・’ｅ−３５℃
で３０分間放置後、基質（７ｊｃニルアラニン）を加え
て反４ 応Ｒ・次い１・上記（２）ｏ方法″′酵素
活性を測定Ｌｈ。, 0 [Table 1] Tillage 1, 2) Effects of inhibitors, etc. Measurement of 0 inhibitory effects of metals I'', etc. = Inhibitor f
T? f, )・, 1150°~115°0
Add to this enzyme solution so that the concentration is 0.
After standing for 30 minutes, the substrate (7jc nylalanine) was added and the reaction R was followed by 1. Method (2) above ``Measure the enzyme activity Lh.
対照（阻害剤無添加）の酵素活性を１ｏｏとした場合の
各阻害剤における相対活性を〔第２表〕に示す。 〔
第２表〕から、明らかなように、本酵素は、Ａｇイオン
、ＰＣＭＢ〔第２表〕
本発明によれば、フォリオタ属微生物の液体培養したそ
の培養液はもとより、その子実体からも本酵素を得るこ
とができる。 さらに主だ、従来では廃棄するか堆肥と
するしか利用法のなかったナメコ等フォリオタ属微生物
の培養後の廃培地、例えばオがクズ廃培地を更に利用し
て、これからも本酵素を採取することができる。 し
たがって、非常に安価に本酵素を製造できる。 加えて
、フォリオタ属のナメコなどは、人工栽培によって安定
的に生産されるので、本酵素を得るための原料供給に不
安はなく、本酵素の製造安定化に問題は生じない。The relative activity of each inhibitor is shown in [Table 2] when the enzyme activity of the control (no inhibitor added) is set as 1oo. [
As is clear from Table 2, this enzyme is produced by Ag ions, PCMB [Table 2] According to the present invention, this enzyme can be extracted not only from the liquid culture of microorganisms of the genus Foliota, but also from their fruiting bodies. Obtainable. Furthermore, the main purpose is to continue to collect this enzyme by further utilizing the waste culture medium after culturing Foliota microorganisms such as Nameko, which in the past could only be used by discarding it or turning it into compost. I can do it. Therefore, this enzyme can be produced at a very low cost. In addition, since namekos of the genus Foliota are stably produced through artificial cultivation, there is no concern about the supply of raw materials for obtaining the present enzyme, and no problems arise in stabilizing the production of the present enzyme.
によって著しく活性を阻害される。The activity is significantly inhibited by
実施例１゜
ＧＰＹ培地（グルコース、５０ｇ、イーストエキストラ
クト５ｇ、ペプトン４ｇ％Ｋ ８２Ｐ ０４１．Ｏｇ−
ＭｇＳ ０４ ・７ Ｈ２ＯＱ、５ｇ、Ｃａ１１２６７
Ｈ２００，Ｉｇｌ水１見に溶解）にフォリオタ・ナメコ
（Ｉ Ｆ Ｏ３０３７３）を接種し、２５℃で７日間振
とぅ培養して種菌とした。 同様のＧＰＹ培地ｌｏｏシ
を５００シ容７ラスフに入れ、１２１’ｃで３０分間殺
菌した後、上記種菌を５４接種し、２５゛Ｃで２０日間
、毎分１２０回転で振どう培養した。次いで培養液から
菌糸をろ別し、これをウォーリング・ブレン９’−（Ｗ
ａｈｌ−ｉｎｇ ｂｌｅｎｃｌｅｒ）で本モゲナイズし
、その遠心上澄を限外ろ過して本酵素の粗酵素液０．０
４３単位／ＩＩＪ！を１シ得た。 活性測定には、基質
としてトリプトファンを用いた。Example 1 GPY medium (glucose, 50 g, yeast extract 5 g, peptone 4 g%K 82P 041.Og-
MgS 04 ・7 H2OQ, 5g, Ca11267
Foliota nameko (IFO30373) was inoculated into H200, Igl water (dissolved in 1 ml of water), and cultured with shaking at 25°C for 7 days to prepare a seed culture. The same 500 sheets of GPY medium were placed in 7 rasps and sterilized at 121'C for 30 minutes, then 54 of the above inoculum were inoculated and cultured at 25'C for 20 days with shaking at 120 revolutions per minute. Next, the mycelium was filtered from the culture solution, and this was mixed with Walling Bren 9'-(W
ahl-ing blender), and the centrifuged supernatant was ultrafiltered to obtain a crude enzyme solution of 0.0
43 credits/IIJ! I got 1 shi. Tryptophan was used as a substrate for activity measurement.
実施例２゜
オガクズ４部、米ヌカ１部、水７０〜８０％のオガクズ
培地（１２０℃、４０分間殺菌）５００ｇに、実施例１
の種菌１０台接種し、２５℃で３ケ月培養後、発茸室（
湿度９０％以上、温度１０〜１５℃）に移し、３０日間
静置して子実体を形成させた。 子実体を採取した後に
残存するオガクズ培地２８５ｇに水１塁を加えてつオー
リング・ブレングーで１分間ホモゲナイズし、遠心分離
後その上澄約８００ｍ１に硫酸アンモニウム４２５ｇを
溶解させ、−夜４゜５℃で放置した。 次いで、セライ
トを用いてろ過し、その残渣を少量の水に溶解後セロフ
ァン膜を用いて透析、更に限界ろ過膜（分子量５０００
０）で７＋ｎｌに濃縮し、本酵素の粗酵素液として得た
。活性は、０．２１単位／ｍｌであった（基質としてト
リプトファンを使用）。Example 2゜Example 1 was added to 500 g of a sawdust medium (sterilized at 120°C for 40 minutes) containing 4 parts of sawdust, 1 part of rice bran, and 70-80% water.
After inoculating 10 inoculum and culturing at 25℃ for 3 months, the mushroom growth chamber (
The seeds were transferred to a room with a humidity of 90% or more and a temperature of 10 to 15° C.) and allowed to stand for 30 days to form fruiting bodies. After collecting the fruiting bodies, add 1 base of water to the remaining 285 g of sawdust culture medium, homogenize for 1 minute using an Oring Brengu, and after centrifugation, dissolve 425 g of ammonium sulfate in approximately 800 ml of the supernatant, and incubate at -4°5°C. I left it there. Next, it was filtered using Celite, and the residue was dissolved in a small amount of water, and then dialyzed using a cellophane membrane.
0) to obtain a crude enzyme solution of the present enzyme. The activity was 0.21 units/ml (using tryptophan as substrate).
実施例３゜
実施例２．で得たナメコ子実体１０３５ｇを、水で洗浄
して粘着物を除去後、水２１００．．１と共にホモゲナ
イズした。 次いで硫酸アンモニウムを０．３飽和にな
るように添加して一夜放置し、これをろ過した。 次い
で、ろ過残渣をセロファン膜を用いて水に対して透析を
行い、その透析内液を遠心分離した後、遠心上澄を限外
ろ適法で濃縮して、本酵素の粗酵素液（１４，５１１＋
１）を得た。 この粗酵素液の活性は、約０．８２４単
位／ｍｊ、であった。 なお、活性測定には、基質とし
てトリプトファンを使用した。Example 3゜Example 2. After washing 1035 g of Nameko fruiting bodies obtained in 1 with water to remove sticky substances, 2100 g of water was washed with 2100 g of water. ．． Homogenized with 1. Next, ammonium sulfate was added to the mixture to give a saturation of 0.3, the mixture was left overnight, and the mixture was filtered. Next, the filtration residue was dialyzed against water using a cellophane membrane, the dialyzed fluid was centrifuged, and the centrifuged supernatant was concentrated using an ultrafiltration method to obtain a crude enzyme solution of the present enzyme (14, 511+
1) was obtained. The activity of this crude enzyme solution was approximately 0.824 units/mj. Note that tryptophan was used as a substrate for activity measurement.
第１図は、本発明によって得られる本酵素芳香族アミノ
酸デカルボキシラーゼのｐＨと活性との関係を示し、第
２図は、ｌ）Ｈ安定性を示す。 第３図は、本酵素の温
度活性を、第４図は、温度安定性を各々示す。FIG. 1 shows the relationship between pH and activity of the aromatic amino acid decarboxylase enzyme obtained by the present invention, and FIG. 2 shows l) H stability. FIG. 3 shows the temperature activity of this enzyme, and FIG. 4 shows the temperature stability.
Claims (1)
ミノ酸デカルボキシラーゼ生産能を有する微生物を培養
し、培養物から芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼを採
取することを特徴とする芳香族デカルボキシラーゼの製
造方法。A method for producing aromatic decarboxylase, which comprises culturing a microorganism having the ability to produce aromatic amino acid decarboxylase belonging to the genus Pholiota, and collecting aromatic amino acid decarboxylase from the culture.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60078170A JPS61234780A (en) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Production of aromatic amino acid decarboxylase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60078170A JPS61234780A (en) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Production of aromatic amino acid decarboxylase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61234780A true JPS61234780A (en) | 1986-10-20 |
| JPH0221798B2 JPH0221798B2 (en) | 1990-05-16 |
Family
ID=13654463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60078170A Granted JPS61234780A (en) | 1985-04-11 | 1985-04-11 | Production of aromatic amino acid decarboxylase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61234780A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6015698A (en) * | 1997-02-14 | 2000-01-18 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method of producing D-amino acid and method of producing amine |
-
1985
- 1985-04-11 JP JP60078170A patent/JPS61234780A/en active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6015698A (en) * | 1997-02-14 | 2000-01-18 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Method of producing D-amino acid and method of producing amine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0221798B2 (en) | 1990-05-16 |
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