JPS61176572A - 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 - Google Patents
新規なトリアリールイミダゾール誘導体Info
- Publication number
- JPS61176572A JPS61176572A JP60017485A JP1748585A JPS61176572A JP S61176572 A JPS61176572 A JP S61176572A JP 60017485 A JP60017485 A JP 60017485A JP 1748585 A JP1748585 A JP 1748585A JP S61176572 A JPS61176572 A JP S61176572A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peroxidase
- hydrogen peroxide
- coloring
- formula
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000006103 coloring component Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 28
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- -1 4-diethylamino-2-methyl-pheny l Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 8
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims description 5
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 17
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 11
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 abstract description 6
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 abstract description 6
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 abstract description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- MNFZZNNFORDXSV-UHFFFAOYSA-N 4-(diethylamino)benzaldehyde Chemical compound CCN(CC)C1=CC=C(C=O)C=C1 MNFZZNNFORDXSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 2
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical class C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N triphenylmethane Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- FBSIYOSBHICLCL-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis[4-(diethylamino)-2-methylphenyl]ethane-1,2-dione Chemical compound CC1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(=O)C(=O)C1=CC=C(N(CC)CC)C=C1C FBSIYOSBHICLCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical class C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ANFPCIQHFZVDNO-UHFFFAOYSA-N 4-[4,5-bis[4-(diethylamino)-2-methylphenyl]-1H-imidazol-2-yl]-N,N-diethyl-2-methoxyaniline Chemical compound CCN(CC)C1=CC(=C(C=C1)C2=C(N=C(N2)C3=CC(=C(C=C3)N(CC)CC)OC)C4=C(C=C(C=C4)N(CC)CC)C)C ANFPCIQHFZVDNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000209761 Avena Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical group [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010012029 Guanine Deaminase Proteins 0.000 description 1
- 102000013587 Guanine deaminase Human genes 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N N-phenyl amine Natural products NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 description 1
- 241000736285 Sphagnum Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Chemical group 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- PEYVWSJAZONVQK-UHFFFAOYSA-N hydroperoxy(oxo)borane Chemical compound OOB=O PEYVWSJAZONVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940079865 intestinal antiinfectives imidazole derivative Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002572 propoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001174 sulfone group Chemical group 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、新規なトリアリルイミダゾール誘導体、及び
該化合物を発色成分として用いる酸化性物質の定量方法
並びにペルオキシダーゼ様物質の定量方法に関する。
該化合物を発色成分として用いる酸化性物質の定量方法
並びにペルオキシダーゼ様物質の定量方法に関する。
生体成分、例えば血液や尿などの体液成分を測定するこ
とは、その変動が疾病と大きく関連しているため、疾患
の診断、病態の解明、治療経過の判定を行なう上で、必
須なものとなっている。例えば、血液中のコレステロー
ル、トリグリセライド、グルコース、尿酸、リン脂質、
胆汁酸、モノアミンオキシダーゼなどを始め、非常に多
種類の微量成分の測定法が開発されており、疾病の診断
上役立っていることは周知の通りである。
とは、その変動が疾病と大きく関連しているため、疾患
の診断、病態の解明、治療経過の判定を行なう上で、必
須なものとなっている。例えば、血液中のコレステロー
ル、トリグリセライド、グルコース、尿酸、リン脂質、
胆汁酸、モノアミンオキシダーゼなどを始め、非常に多
種類の微量成分の測定法が開発されており、疾病の診断
上役立っていることは周知の通りである。
現在、血清成分の測定法としては、それが酵素以外のも
のである場合には、目的成分に特異的に作用する酵素を
用い、また、目的成分が酵素の場合には、その基質とな
るべき化合物を用いて、夫々酵素反応を行ない、これ忙
よる生成物を測定して目的成分量を求める、所謂”酵素
法″が一般に広く普及している。なかでも、H,O,生
成酵素、例えば、オキシダーゼを働かせて目的成分に相
当するルαを生成させ、これをペルオキシダーゼ、及び
発色成分である被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き
、これを比色定量することにより目的成分量を求める方
法が、被酸化性呈色試薬の開発と相まって増加しつつあ
る。例えば、コレステロール−コレステロールオキシダ
ーゼ、トリグリセライド−リボプロティンリパーゼ−グ
リセロールオキシダーゼ、尿酸−ウリカーゼなどの組合
せで発生するHI3.を、ペルオキシダーゼ(POD
)、被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き、その呈色
の吸光度を測定することにより目的成分量を求める方法
である。この方法に於て用いられる発色成分である被酸
化性呈色試薬の代表的なものとしては、4−アミノアン
チピリンと、フェノール系化合物又はN、N−ジ置換ア
ニリン系化合物とを組合せた被酸化性呈色試薬、3−メ
チルベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)とアニ
リン系化合物との組合せ試薬、2,2−アジノビス(3
−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸)(ABT
S)、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ヘジ゛ 〉うン誘導体、o−トリジン誘導体、ジフェニルアミン
誘導体10−フェニレンジーアアミ、ン等が挙げられる
。しかしながら、これら従来から用いられている被酸化
性呈色試薬は、ジフェニルアミン誘導体を除いてかずれ
もその呈色波長が700rm以下であり、ビリルビン、
ヘモグロビン等の血清ンチピリ/との組合せ試薬やトリ
フェニルメタン系ロイコ色素の一部を除いて、いずれも
色猥、体の安定性が低い等の問題点を有する。一方、比
較的色原体の安定性が良く、又呈色波長が比較的長波長
側にある色原体として染料前駆体(ロイコ色素)のトリ
アリルイミダゾール誘導体が開示されている。(特公昭
57−5519号公報、特公昭57−261)8号公報
、特開昭58−45557号公報、米国特許第3297
710号EAMB書等)しかしながら、これら既存のト
リアリルイミダゾール誘導体は、いずれもそのフェニル
基(D一つに一〇H基を有し、(ΣOHが−0−oとな
ることにより呈色するものであって、その呈色波長はい
ずれも依然として700nm以下である。従って、これ
らのトリアリルイミダゾール誘導体にしても、血液や尿
など生体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分とし
て用いて未だ充分満足のいくものであるとは言えない。
のである場合には、目的成分に特異的に作用する酵素を
用い、また、目的成分が酵素の場合には、その基質とな
るべき化合物を用いて、夫々酵素反応を行ない、これ忙
よる生成物を測定して目的成分量を求める、所謂”酵素
法″が一般に広く普及している。なかでも、H,O,生
成酵素、例えば、オキシダーゼを働かせて目的成分に相
当するルαを生成させ、これをペルオキシダーゼ、及び
発色成分である被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き
、これを比色定量することにより目的成分量を求める方
法が、被酸化性呈色試薬の開発と相まって増加しつつあ
る。例えば、コレステロール−コレステロールオキシダ
ーゼ、トリグリセライド−リボプロティンリパーゼ−グ
リセロールオキシダーゼ、尿酸−ウリカーゼなどの組合
せで発生するHI3.を、ペルオキシダーゼ(POD
)、被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き、その呈色
の吸光度を測定することにより目的成分量を求める方法
である。この方法に於て用いられる発色成分である被酸
化性呈色試薬の代表的なものとしては、4−アミノアン
チピリンと、フェノール系化合物又はN、N−ジ置換ア
ニリン系化合物とを組合せた被酸化性呈色試薬、3−メ
チルベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)とアニ
リン系化合物との組合せ試薬、2,2−アジノビス(3
−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸)(ABT
S)、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ヘジ゛ 〉うン誘導体、o−トリジン誘導体、ジフェニルアミン
誘導体10−フェニレンジーアアミ、ン等が挙げられる
。しかしながら、これら従来から用いられている被酸化
性呈色試薬は、ジフェニルアミン誘導体を除いてかずれ
もその呈色波長が700rm以下であり、ビリルビン、
ヘモグロビン等の血清ンチピリ/との組合せ試薬やトリ
フェニルメタン系ロイコ色素の一部を除いて、いずれも
色猥、体の安定性が低い等の問題点を有する。一方、比
較的色原体の安定性が良く、又呈色波長が比較的長波長
側にある色原体として染料前駆体(ロイコ色素)のトリ
アリルイミダゾール誘導体が開示されている。(特公昭
57−5519号公報、特公昭57−261)8号公報
、特開昭58−45557号公報、米国特許第3297
710号EAMB書等)しかしながら、これら既存のト
リアリルイミダゾール誘導体は、いずれもそのフェニル
基(D一つに一〇H基を有し、(ΣOHが−0−oとな
ることにより呈色するものであって、その呈色波長はい
ずれも依然として700nm以下である。従って、これ
らのトリアリルイミダゾール誘導体にしても、血液や尿
など生体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分とし
て用いて未だ充分満足のいくものであるとは言えない。
本発明の目的は、上記した如き従来法の問題点を解決し
た、極大吸収波長が700nm以上で、且つ色原体が安
定である新規な被酸化性呈色試薬の開発と、該化合物を
発色成分として用いることによの測定法を実現すること
にある。
た、極大吸収波長が700nm以上で、且つ色原体が安
定である新規な被酸化性呈色試薬の開発と、該化合物を
発色成分として用いることによの測定法を実現すること
にある。
本発明は、下記一般式〔I〕
〔式中 R1)R*及びR1は夫々独立して、少くとも
そのオルト位又はパラ位のどちらかが置洪基を有してい
てもよいアミン基で置換された置換フェニル基を表わす
。〕で示されるイミダゾール誘導体及び該化合物を発色
成分として用いる酸化性物質並びにペルオキシダーゼ様
物質の定量法である。
そのオルト位又はパラ位のどちらかが置洪基を有してい
てもよいアミン基で置換された置換フェニル基を表わす
。〕で示されるイミダゾール誘導体及び該化合物を発色
成分として用いる酸化性物質並びにペルオキシダーゼ様
物質の定量法である。
即ち、本発明は上記一般式(1)で示されるイミダゾー
ル誘導体が、いずれもその呈色波長が800韓上の表波
長側にあり、しかも、色原体として極めて安定であるこ
とを本発明者らが初めて見出し、これを血清や尿など生
体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分として用い
ることにより、上記した本発明の目的を達成し得ること
を見出して本発明を完成するに到ったものである。
ル誘導体が、いずれもその呈色波長が800韓上の表波
長側にあり、しかも、色原体として極めて安定であるこ
とを本発明者らが初めて見出し、これを血清や尿など生
体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分として用い
ることにより、上記した本発明の目的を達成し得ること
を見出して本発明を完成するに到ったものである。
一般式〔1〕で示される本発明のイミダゾール誘導体に
於て、R’、R”及びぼで表わされる、少くともそのオ
ルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有していてもよ
いアミノ基で置換された置換フェニル基に於ける置換ア
ミノ基の置換基としては例えば、メチル基、エチル基、
プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、−C,H,
OH基、−C,H,OH基、−C,H,N HS O,
CH,基、−C1H,N HC0Cf(。
於て、R’、R”及びぼで表わされる、少くともそのオ
ルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有していてもよ
いアミノ基で置換された置換フェニル基に於ける置換ア
ミノ基の置換基としては例えば、メチル基、エチル基、
プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、−C,H,
OH基、−C,H,OH基、−C,H,N HS O,
CH,基、−C1H,N HC0Cf(。
基、−〇、H,SO,H基(又は−Cx Ha S O
s Na基)、−〇、H,SO婁H基(又は−C,H,
S O,N昧)、−CH,CHCH!SO,H基(又は
−CH−CHCH−8o−NaOHOH 基)等の置換低級アルキル基等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。又、アミノ基又は置換アミ
ノ基以外の置換基としては、例えば、メチル基、エチル
基、プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、メトキ
シ基、エトキシ基、プロポキシ基等の低級アルコキシ基
、塩素、臭素、弗素、沃素等のハロゲン、ニトロ基、シ
アノ基、カルボキシル基、スルホン基等が挙げられるが
、水酸基はこれに含まれない。
s Na基)、−〇、H,SO婁H基(又は−C,H,
S O,N昧)、−CH,CHCH!SO,H基(又は
−CH−CHCH−8o−NaOHOH 基)等の置換低級アルキル基等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。又、アミノ基又は置換アミ
ノ基以外の置換基としては、例えば、メチル基、エチル
基、プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、メトキ
シ基、エトキシ基、プロポキシ基等の低級アルコキシ基
、塩素、臭素、弗素、沃素等のハロゲン、ニトロ基、シ
アノ基、カルボキシル基、スルホン基等が挙げられるが
、水酸基はこれに含まれない。
一般式〔1〕で示される本発明のイミダゾール誘導体は
、例えば一般式〔1〕に於て、 l 基を有していてもよいアミ ノ基を表わし、Xlはその他の置換基を表わす。)いア
ミノ基を表わし、Xlはその他の置換基を表わX“ いアミノ基を表わし XIはその他の置換基を表わす。
、例えば一般式〔1〕に於て、 l 基を有していてもよいアミ ノ基を表わし、Xlはその他の置換基を表わす。)いア
ミノ基を表わし、Xlはその他の置換基を表わX“ いアミノ基を表わし XIはその他の置換基を表わす。
)
とした場合、酸化により次の如き構造の染料を生なるこ
とにより生ずる色素よりもその呈色波長が更に長波長側
にシフトし、極大吸収波長はいずれも800rrnとな
る。
とにより生ずる色素よりもその呈色波長が更に長波長側
にシフトし、極大吸収波長はいずれも800rrnとな
る。
表1に、一般式〔I〕で示される本発明化合物の具体例
数例と、その呈色時の極大吸収波長を示すが、本発明化
合物はこれらに限定されるものではない。
数例と、その呈色時の極大吸収波長を示すが、本発明化
合物はこれらに限定されるものではない。
表 1
一般式mで示される本発明化合物は、公知の方法、例え
ば、米国特許第3297710号明細書に記載の方法に
準じて容易に合成することができる。
ば、米国特許第3297710号明細書に記載の方法に
準じて容易に合成することができる。
即ち、例えば、Organic 5yntheses
VoL 5.1)1頁 1973年に記載の方法に準じ
て、式〔■〕で示されるエタンジオンを合成し、 R”−C−C−R’ It II [:III] (式中、R″ BSは前記と同じ。) 次いで、これをR’−CHo(R’は前記と同じ)なる
アルデヒド類及び酢酸アンモンと酢酸溶媒中数時間加熱
(要すれば還流)反応させた後、常法に従って、中和、
晶出、p取、洗浄、乾燥等の後処理を行うことにより、
目的とするイミダゾール誘導体が得られる。
VoL 5.1)1頁 1973年に記載の方法に準じ
て、式〔■〕で示されるエタンジオンを合成し、 R”−C−C−R’ It II [:III] (式中、R″ BSは前記と同じ。) 次いで、これをR’−CHo(R’は前記と同じ)なる
アルデヒド類及び酢酸アンモンと酢酸溶媒中数時間加熱
(要すれば還流)反応させた後、常法に従って、中和、
晶出、p取、洗浄、乾燥等の後処理を行うことにより、
目的とするイミダゾール誘導体が得られる。
本発明のイミダゾール誘導体は、酸化性物質の定量やペ
ルオキシダーゼ様物質の定量に於ける発色成分として有
効に用い得るが、とりわけ酵素反応により生成した過酸
化水素をペルオキシダーゼの存在下発色系に導き、その
呈色を測定することによシ行う生体試料中の微量成分の
定量に於ける発色成分として特に有効に使用し得る。
ルオキシダーゼ様物質の定量に於ける発色成分として有
効に用い得るが、とりわけ酵素反応により生成した過酸
化水素をペルオキシダーゼの存在下発色系に導き、その
呈色を測定することによシ行う生体試料中の微量成分の
定量に於ける発色成分として特に有効に使用し得る。
即ち、本発明の酸化性物質の定量法は、基質、又は酵素
反応によシ生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
又は酵素活性の定量法として特に効果的に使用し得る。
反応によシ生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
又は酵素活性の定量法として特に効果的に使用し得る。
本発明の方法により測定可能な生体試料中の微量成分と
しては、例えば、コレステロール、グルコース、グリセ
リン、トリグリセライド、遊離脂肪酸、尿酸、リン脂質
、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、グアナーゼ、コリ
ンエステラーゼ等が挙げられるが、これらに限定される
ものではなく、酵素反応により生成する過酸化水素を定
量することによって測定が可能な生体成分は全て定量可
能である。
しては、例えば、コレステロール、グルコース、グリセ
リン、トリグリセライド、遊離脂肪酸、尿酸、リン脂質
、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、グアナーゼ、コリ
ンエステラーゼ等が挙げられるが、これらに限定される
ものではなく、酵素反応により生成する過酸化水素を定
量することによって測定が可能な生体成分は全て定量可
能である。
本発明の方法による生体成分の定量に於て、過酸化水素
を生成させる酵素として用いられる酸化酵素(オキシダ
ーゼ)及びその他の目的で用いられる酵素類並びに酵素
反応に関与する基質及びその他の物質の種類及び使用量
は被酸化性呈色試薬を用いる自体公知の生体成分の定量
法に準じて夫々測定対象となる物質に応じて適宜選択す
ればよい。又、本発明による過酸化水素の定量に於て用
いられるベルキオシダーゼとしては、その起源、由来に
特に限定はなく、植物、動物、微生物起源のペルオキシ
ダーゼ又はペルオキシダーゼ様物質が、一種若しくは要
すれば二種以上組合せて用いられる。又、その使用量は
目的に応じて適宜定められ、特に限定されない。
を生成させる酵素として用いられる酸化酵素(オキシダ
ーゼ)及びその他の目的で用いられる酵素類並びに酵素
反応に関与する基質及びその他の物質の種類及び使用量
は被酸化性呈色試薬を用いる自体公知の生体成分の定量
法に準じて夫々測定対象となる物質に応じて適宜選択す
ればよい。又、本発明による過酸化水素の定量に於て用
いられるベルキオシダーゼとしては、その起源、由来に
特に限定はなく、植物、動物、微生物起源のペルオキシ
ダーゼ又はペルオキシダーゼ様物質が、一種若しくは要
すれば二種以上組合せて用いられる。又、その使用量は
目的に応じて適宜定められ、特に限定されない。
本発明の方法による生体成分の定量は、通常、pH4,
0−10,0、より好ましくはn−6,0〜8.0で実
施される。用いられる緩衝剤としては、リン酸塩、クエ
ン酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、トリス緩衝液、グツド(G
oods )緩衝液などが挙げられるが、特にこれらに
限定されない。
0−10,0、より好ましくはn−6,0〜8.0で実
施される。用いられる緩衝剤としては、リン酸塩、クエ
ン酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、トリス緩衝液、グツド(G
oods )緩衝液などが挙げられるが、特にこれらに
限定されない。
本発明のイミダゾール誘導体は、過酸化水素等酸化性物
質の定量に有効に用い得るが、又、これと過酸化水素と
を組み合せることによりペルオキシダーゼ様物質の定量
を行うことも可能である。
質の定量に有効に用い得るが、又、これと過酸化水素と
を組み合せることによりペルオキシダーゼ様物質の定量
を行うことも可能である。
ペルオキシダーゼ様物質としては、ペルオキシダーゼそ
のものの他、ヘモグロビンその他のヘム化合物が挙げら
れる。
のものの他、ヘモグロビンその他のヘム化合物が挙げら
れる。
即ち、本発明のイミダゾール誘導体は、例えば、ペルオ
キシダーゼを標識化合物に用いた酵素免疫測定法にも応
用可能であシ、又、血清中のヘモグロビンを過酸化水素
若しくは過硼素酸す) IJウムのような酸化性物質を
用いて測定する場合などにも有効に使用し得る。
キシダーゼを標識化合物に用いた酵素免疫測定法にも応
用可能であシ、又、血清中のヘモグロビンを過酸化水素
若しくは過硼素酸す) IJウムのような酸化性物質を
用いて測定する場合などにも有効に使用し得る。
以下に実施例を挙げるが、本発明はこれら実施例により
何ら制約を受けるものではない。
何ら制約を受けるものではない。
実施例1. 2−(4−ジエチルアミノフェニル)−4
,5−ビス(4−ジエチルアミン−2−メチル−フェニ
ル)イミダゾール(本発明化合物(3))の合成 (+) 1.2−ビス(4−ジエチルアミノ−2−メ
チル−フェニル)エタン−1,2−シオンノ合成加え水
冷下、N、N−ジエチル−m−)ルイジン22fを滴下
した。さらに攪拌下、氷冷しながらオキザリルクロリド
1.5fを滴下し、60分間攪拌反応させた。反応後、
水50−及びクロロホルム100−を加え、分液して得
たクロロホルム層を減圧、濃縮して結晶を析出せしめた
。析出した結晶を戸数し酢酸エチルから再結晶して黄色
の目的物6.Ofを得た。
,5−ビス(4−ジエチルアミン−2−メチル−フェニ
ル)イミダゾール(本発明化合物(3))の合成 (+) 1.2−ビス(4−ジエチルアミノ−2−メ
チル−フェニル)エタン−1,2−シオンノ合成加え水
冷下、N、N−ジエチル−m−)ルイジン22fを滴下
した。さらに攪拌下、氷冷しながらオキザリルクロリド
1.5fを滴下し、60分間攪拌反応させた。反応後、
水50−及びクロロホルム100−を加え、分液して得
たクロロホルム層を減圧、濃縮して結晶を析出せしめた
。析出した結晶を戸数し酢酸エチルから再結晶して黄色
の目的物6.Ofを得た。
(ii) 2− (4−ジエチルアミノフェニル)−
4゜5−ビス(4−ジエチルアミノ−2−メチル−フェ
ニル)イミダゾールの合成 (1)で得た1、2−ビス(4−ジエチルアミノ−2−
メチル−フェニル)エタン−1,2−ジオン1.5tと
4−ジエチルアミノベンズアルデヒド1.Of酢酸アン
モニウム5tを酢酸3〇−中で2時間加熱還流して反応
させた。冷却後水60−を加え水冷下アンモニア水で中
和したところ結晶が析出した。析出した結晶を戸数し、
水洗、乾燥後酢酸エチルから再結晶し白色の目的化合物
0.52を得た。
4゜5−ビス(4−ジエチルアミノ−2−メチル−フェ
ニル)イミダゾールの合成 (1)で得た1、2−ビス(4−ジエチルアミノ−2−
メチル−フェニル)エタン−1,2−ジオン1.5tと
4−ジエチルアミノベンズアルデヒド1.Of酢酸アン
モニウム5tを酢酸3〇−中で2時間加熱還流して反応
させた。冷却後水60−を加え水冷下アンモニア水で中
和したところ結晶が析出した。析出した結晶を戸数し、
水洗、乾燥後酢酸エチルから再結晶し白色の目的化合物
0.52を得た。
NMR(TMS、CDC1m )δP pm :1.
10(18Hlt 、 C−CHs) 、 1.
90(IH,a。
10(18Hlt 、 C−CHs) 、 1.
90(IH,a。
3.1 〜3.4 (12H,broad、
CL CHs)。
CL CHs)。
2630.1705,1645,1605゜1520、
元素分析値C,,)Lw l’Jsとして計算値(%)
: 078.1?、 H8,81,N13.02実測
値(%) : C78,28,H8,84,N12.9
7酸化呈色時のλmax = 860 nm (g =
95,000)実施例2.2−(4−ジエチルアミノ
−3−メトキシフェニル) −4,5−ビス(4−ジエ
チルアミノ−2−メチル−フェニル)イミダゾール(本
発明化合物(4))の合成 実施例・1)の(i)で得た1、2−ビス(4−ジエチ
ルアミノ−2−メチル−フェニル)エタン−1,2−ジ
オン1.5fと4−ジエチルアミノ−3−メトキシベン
ズアルデヒド1.0f1酢酸アンモニウム5fを酢酸3
0−中で2時間加熱還流して反応させた。冷却後水60
dを加え詠冷下アンモニア水で中和したところ結晶が析
出した。析出した結晶を戸数し水洗乾燥後へキサンで処
理して白色の目的化合物0.6fを得た。
元素分析値C,,)Lw l’Jsとして計算値(%)
: 078.1?、 H8,81,N13.02実測
値(%) : C78,28,H8,84,N12.9
7酸化呈色時のλmax = 860 nm (g =
95,000)実施例2.2−(4−ジエチルアミノ
−3−メトキシフェニル) −4,5−ビス(4−ジエ
チルアミノ−2−メチル−フェニル)イミダゾール(本
発明化合物(4))の合成 実施例・1)の(i)で得た1、2−ビス(4−ジエチ
ルアミノ−2−メチル−フェニル)エタン−1,2−ジ
オン1.5fと4−ジエチルアミノ−3−メトキシベン
ズアルデヒド1.0f1酢酸アンモニウム5fを酢酸3
0−中で2時間加熱還流して反応させた。冷却後水60
dを加え詠冷下アンモニア水で中和したところ結晶が析
出した。析出した結晶を戸数し水洗乾燥後へキサンで処
理して白色の目的化合物0.6fを得た。
IRuKBr(cm−’): 3420,2960,1
640゜ax 1610.1520 元素分析値 Cs・H,、N、 0として、計算値(%
) : C76,15,1(8,70,Nl 2.33
・実測値(%): C76,10,H8,74,N
12.28酸化呈色時のλmax = 850 nmデ
ヒドに代えて4−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用
い、実施例1と同様に反応を行い2−(4−ジメチルア
ミノフェニル) −4,5−ビス(4−ジエチルアミノ
−2−メチル−フェニル)イミダゾール(本発明化合物
(2ン)を得た。
640゜ax 1610.1520 元素分析値 Cs・H,、N、 0として、計算値(%
) : C76,15,1(8,70,Nl 2.33
・実測値(%): C76,10,H8,74,N
12.28酸化呈色時のλmax = 850 nmデ
ヒドに代えて4−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用
い、実施例1と同様に反応を行い2−(4−ジメチルア
ミノフェニル) −4,5−ビス(4−ジエチルアミノ
−2−メチル−フェニル)イミダゾール(本発明化合物
(2ン)を得た。
KBr +l
IRν (副): 3400,2880,1605゜
ax 1520.1510 元素分析値 Css Has t’J爆として計算値(
チ’) : C77,76,H8,50,Nl 3.7
4実測値(俤):C77,90,H8,57,N13.
69酸化呈色時のλmax = 855 nm実施例4
゜ 実施例1に於けるN、N−ジエチル−m−)ルイジンに
代えてN、N−ジエチルアニ1)ンを用い、及び4−ジ
エチルアミノベンズアルデヒドに代えて4−ジエチルア
ミノベンズアルデヒドを用い、実施例1と同様に反応を
行い2−(4ジメチルアミノフエニル) −4,5−ビ
ス(4−ジエチルアミノフェニル)イミダゾール(本発
明化合物(1))を得た。
ax 1520.1510 元素分析値 Css Has t’J爆として計算値(
チ’) : C77,76,H8,50,Nl 3.7
4実測値(俤):C77,90,H8,57,N13.
69酸化呈色時のλmax = 855 nm実施例4
゜ 実施例1に於けるN、N−ジエチル−m−)ルイジンに
代えてN、N−ジエチルアニ1)ンを用い、及び4−ジ
エチルアミノベンズアルデヒドに代えて4−ジエチルア
ミノベンズアルデヒドを用い、実施例1と同様に反応を
行い2−(4ジメチルアミノフエニル) −4,5−ビ
ス(4−ジエチルアミノフェニル)イミダゾール(本発
明化合物(1))を得た。
元素分析値 C,、& N、とじて
計算値(%): C77,30,H8,16,Nl 4
.54実測値(%):C77,15,H8,20,Nl
4.46酸化呈色時のλmax == 820 nm実
施例5゜ 過酸化水素の定量 +1) 試薬 50 mmot/ Lリン酸緩衝液(
pl(7,0)にペルオキシダーゼ2000U/l、本
発明化合物(3) 100μmot/ lの濃度になる
ように調製した。
.54実測値(%):C77,15,H8,20,Nl
4.46酸化呈色時のλmax == 820 nm実
施例5゜ 過酸化水素の定量 +1) 試薬 50 mmot/ Lリン酸緩衝液(
pl(7,0)にペルオキシダーゼ2000U/l、本
発明化合物(3) 100μmot/ lの濃度になる
ように調製した。
(2) 試料 市販過酸化水素水を蒸留水で希釈し2
、0 、 1.5 、 1.0 、 0.5 m mo
t/ Lになるように調製した。
、0 、 1.5 、 1.0 、 0.5 m mo
t/ Lになるように調製した。
(3) 測定操作 各試料液及び蒸留水苔々2oat
に試薬3.0−を加え、37℃で5分間加温し、850
nmの吸光度を盲検を対照に測定した。
に試薬3.0−を加え、37℃で5分間加温し、850
nmの吸光度を盲検を対照に測定した。
各過酸化水素濃度に対してプロ、トシた吸光度を結ぶ検
量線は、第1図に示されるように、原点を通る直線とな
り、検量線は良好な定量性を示している。
量線は、第1図に示されるように、原点を通る直線とな
り、検量線は良好な定量性を示している。
実施例6゜
尿酸の定量
(1)試薬 50 mmot/ t ME S (2−
(N −モルホリノ)エタンスルホン酸)Ilili(
pH6,5)ニウリ1y−(/100 U/ L 、
ペルオキシダーゼ2,000 U/l、本発明化合物(
4) 100 pmoL/lの濃度になるように調製し
た。
(N −モルホリノ)エタンスルホン酸)Ilili(
pH6,5)ニウリ1y−(/100 U/ L 、
ペルオキシダーゼ2,000 U/l、本発明化合物(
4) 100 pmoL/lの濃度になるように調製し
た。
(2) 試料 尿酸を蒸留水で10. 7.5. 5
,2.5゜mg/dtになるように溶解し調製した。
,2.5゜mg/dtになるように溶解し調製した。
(3) 測定操作 各試料液及び蒸留水苔50 pt
’lc試薬3.0−を加え1.37℃で5分間加温し8
50nmの吸光度を盲検を対照に測定した。
’lc試薬3.0−を加え1.37℃で5分間加温し8
50nmの吸光度を盲検を対照に測定した。
各尿酸濃度に対してプロットした吸光度を結ぶ検量線は
、第2図に示されるように、原点を通る直線となり、検
量線は良好な定量性を示している。
、第2図に示されるように、原点を通る直線となり、検
量線は良好な定量性を示している。
〔発明の効果〕 。
以上述べた如く、本発明の新規イミダゾール誘導体は、
いずれもその呈色時の極大吸収波長が、800n+m以
上と長波長側にある為、血清、尿等生体試料中の微量成
分の定量に於ける発色成分としてこれを用いた場合には
、試料中に共存する有色の妨害物質の影響を全く受けず
に測定を行うことができるという点に顕著な効果を奏す
るものであり、斯業に貢献するところ大なるものである
。
いずれもその呈色時の極大吸収波長が、800n+m以
上と長波長側にある為、血清、尿等生体試料中の微量成
分の定量に於ける発色成分としてこれを用いた場合には
、試料中に共存する有色の妨害物質の影響を全く受けず
に測定を行うことができるという点に顕著な効果を奏す
るものであり、斯業に貢献するところ大なるものである
。
第1図は、実施例5に於て得られた検量線を表mo L
わし、横軸の各過酸化水素濃度(/l)について得られ
た吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだもので
ある。 第2図は、実施例6に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各尿酸濃度(mg /dL )について得られた吸
光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである
。 特許出願人 和光純薬工業株式会社−埴酸化水木儂度
(mmoJL71 ) 協2図 尿酸濃度(w′t/dl) 手続補正書 昭和10年 2月 2a )14和60午1尼31日≠弧の4寿か甥頃2 発明の
名称 1 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課(東京) 置 03−270−8571
5、 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 6、補正の内容 (1) 明細書1)頁2行目に記載の[800nmJ
を「800nm以上」と補正する。 (2)明細書12頁13行目に記載の「酢酸アンモン」
を「酢酸アンモニウム」と補正する。 (3)明細書19頁13行目から同頁15行目にかけて
記載の「2−(4ジメチルアミノフエニル)−4,5−
ビス(4−ジエチルアミン、フェニル)イミダゾール」
t−r2−(4−ジメチルアミノフェニル)−4,5−
ビス(4−ジエチルアミノフェニル)イミダゾール」と
補正する。 以上
た吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだもので
ある。 第2図は、実施例6に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各尿酸濃度(mg /dL )について得られた吸
光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである
。 特許出願人 和光純薬工業株式会社−埴酸化水木儂度
(mmoJL71 ) 協2図 尿酸濃度(w′t/dl) 手続補正書 昭和10年 2月 2a )14和60午1尼31日≠弧の4寿か甥頃2 発明の
名称 1 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課(東京) 置 03−270−8571
5、 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 6、補正の内容 (1) 明細書1)頁2行目に記載の[800nmJ
を「800nm以上」と補正する。 (2)明細書12頁13行目に記載の「酢酸アンモン」
を「酢酸アンモニウム」と補正する。 (3)明細書19頁13行目から同頁15行目にかけて
記載の「2−(4ジメチルアミノフエニル)−4,5−
ビス(4−ジエチルアミン、フェニル)イミダゾール」
t−r2−(4−ジメチルアミノフェニル)−4,5−
ビス(4−ジエチルアミノフェニル)イミダゾール」と
補正する。 以上
Claims (10)
- (1)下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、R^1、R^2及びR^3は夫々独立して、少
くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体。 - (2)下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、R^1、R^2及びR^3は夫々独立して、少
くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体を発色成分と
して用いることを特徴とする酸化性物質の定量法。 - (3)酸化性物質が過酸化水素である、特許請求の範囲
第2項記載の定量法。 - (4)ペルオキシダーゼの存在下、発色成分を酸化発色
させてその呈色を比色定量する特許請求の範囲第3項記
載の定量法。 - (5)過酸化水素が、酵素反応により生成する過酸化水
素である特許請求の範囲第3項又は第4項記載の定量法
。 - (6)過酸化水素が、生体試料中の微量成分の定量に於
て酵素反応により生成する過酸化水素である特許請求の
範囲第5項記載の定量法。 - (7)生体試料中の微量成分の定量が、基質、又は酵素
反応により生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
又は酵素活性の定量である特許請求の範囲第6項記載の
定量法。 - (8)下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、R^1、R^2及びR^3は夫々独立して、少
くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体を発色成分と
して用いることを特徴とするペルオキシダーゼ様物質の
定量法。 - (9)ペルオキシダーゼ様物質がペルオキシダーゼであ
る特許請求の範囲第8項記載の定量法。 - (10)ペルオキシダーゼ様物質がヘモグロビン又はそ
の他のヘム化合物である特許請求の範囲第8項記載の定
量法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60017485A JPH066577B2 (ja) | 1985-01-31 | 1985-01-31 | 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60017485A JPH066577B2 (ja) | 1985-01-31 | 1985-01-31 | 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61176572A true JPS61176572A (ja) | 1986-08-08 |
JPH066577B2 JPH066577B2 (ja) | 1994-01-26 |
Family
ID=11945301
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60017485A Expired - Lifetime JPH066577B2 (ja) | 1985-01-31 | 1985-01-31 | 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH066577B2 (ja) |
-
1985
- 1985-01-31 JP JP60017485A patent/JPH066577B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH066577B2 (ja) | 1994-01-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4251629A (en) | Determination of hydrogen peroxide | |
US5484708A (en) | Method for the colorimetric determination of an analyte with a PQQ-dependent dehydrogenase | |
EP0122641B1 (en) | Analytical reagent, analytical method, and multilayer chemical-analytical element | |
JPH0878B2 (ja) | 体液成分の測定方法 | |
JPS6134799B2 (ja) | ||
JPH0764986B2 (ja) | 新規な発色試薬 | |
JP2013136603A (ja) | 水溶性テトラゾリウム塩 | |
JPH0445510B2 (ja) | ||
US5041636A (en) | Urea derivatives | |
EP0488756B1 (en) | Oxidizable color producing reagent | |
JPS61176572A (ja) | 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 | |
JP2590124B2 (ja) | 水溶性テトラゾリウム化合物およびその化合物を用いる還元性物質の測定方法 | |
JPS61174267A (ja) | 新規なイミダゾール誘導体 | |
US4711963A (en) | 4-amino-2-methyl-3-phenyl-1-(2,4,6-trichlorophenyl)-3-pyrazolin-5-one | |
JPH062720B2 (ja) | 新規なジフェニルアミン誘導体 | |
US5164512A (en) | Oxidizable color producing reagent | |
JPS6184A (ja) | 新規なテトラゾリウム化合物 | |
JPH0625146B2 (ja) | 新規イミダゾ−ル誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 | |
JPH0770462A (ja) | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 | |
US5792619A (en) | Assay using oxidative chromogenic reagent | |
JPH01112155A (ja) | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 | |
JPS59126245A (ja) | 過酸化水素の定量方法 | |
JPH03206896A (ja) | 体液中の微量成分定量法 | |
JPS61229868A (ja) | イミダゾ−ル誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 | |
JPS6219100A (ja) | 胆汁酸の定量法 |