JPS61176572A - 新規なトリアリールイミダゾール誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、新規なトリアリルイミダゾール誘導体、及び
該化合物を発色成分として用いる酸化性物質の定量方法
並びにペルオキシダーゼ様物質の定量方法に関する。

〔発明の背景〕

生体成分、例えば血液や尿などの体液成分を測定するこ
とは、その変動が疾病と大きく関連しているため、疾患
の診断、病態の解明、治療経過の判定を行なう上で、必
須なものとなっている。例えば、血液中のコレステロー
ル、トリグリセライド、グルコース、尿酸、リン脂質、
胆汁酸、モノアミンオキシダーゼなどを始め、非常に多
種類の微量成分の測定法が開発されており、疾病の診断
上役立っていることは周知の通りである。

現在、血清成分の測定法としては、それが酵素以外のも
のである場合には、目的成分に特異的に作用する酵素を
用い、また、目的成分が酵素の場合には、その基質とな
るべき化合物を用いて、夫々酵素反応を行ない、これ忙
よる生成物を測定して目的成分量を求める、所謂”酵素
法″が一般に広く普及している。なかでも、Ｈ，Ｏ，生
成酵素、例えば、オキシダーゼを働かせて目的成分に相
当するルαを生成させ、これをペルオキシダーゼ、及び
発色成分である被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き
、これを比色定量することにより目的成分量を求める方
法が、被酸化性呈色試薬の開発と相まって増加しつつあ
る。例えば、コレステロール−コレステロールオキシダ
ーゼ、トリグリセライド−リボプロティンリパーゼ−グ
リセロールオキシダーゼ、尿酸−ウリカーゼなどの組合
せで発生するＨＩ３．を、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ　
）、被酸化性呈色試薬を用いて発色系に導き、その呈色
の吸光度を測定することにより目的成分量を求める方法
である。この方法に於て用いられる発色成分である被酸
化性呈色試薬の代表的なものとしては、４−アミノアン
チピリンと、フェノール系化合物又はＮ、Ｎ−ジ置換ア
ニリン系化合物とを組合せた被酸化性呈色試薬、３−メ
チルベンゾチアゾリノンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）とアニ
リン系化合物との組合せ試薬、２，２−アジノビス（３
−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴ
Ｓ）、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ヘジ゛ 〉うン誘導体、ｏ−トリジン誘導体、ジフェニルアミン
誘導体１０−フェニレンジーアアミ、ン等が挙げられる
。しかしながら、これら従来から用いられている被酸化
性呈色試薬は、ジフェニルアミン誘導体を除いてかずれ
もその呈色波長が７００ｒｍ以下であり、ビリルビン、
ヘモグロビン等の血清ンチピリ／との組合せ試薬やトリ
フェニルメタン系ロイコ色素の一部を除いて、いずれも
色猥、体の安定性が低い等の問題点を有する。一方、比
較的色原体の安定性が良く、又呈色波長が比較的長波長
側にある色原体として染料前駆体（ロイコ色素）のトリ
アリルイミダゾール誘導体が開示されている。（特公昭
５７−５５１９号公報、特公昭５７−２６１）８号公報
、特開昭５８−４５５５７号公報、米国特許第３２９７
７１０号ＥＡＭＢ書等）しかしながら、これら既存のト
リアリルイミダゾール誘導体は、いずれもそのフェニル
基（Ｄ一つに一〇Ｈ基を有し、（ΣＯＨが−０−ｏとな
ることにより呈色するものであって、その呈色波長はい
ずれも依然として７００ｎｍ以下である。従って、これ
らのトリアリルイミダゾール誘導体にしても、血液や尿
など生体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分とし
て用いて未だ充分満足のいくものであるとは言えない。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、上記した如き従来法の問題点を解決し
た、極大吸収波長が７００ｎｍ以上で、且つ色原体が安
定である新規な被酸化性呈色試薬の開発と、該化合物を
発色成分として用いることによの測定法を実現すること
にある。

〔発明の構成〕

本発明は、下記一般式〔Ｉ〕 〔式中　Ｒ１）Ｒ＊及びＲ１は夫々独立して、少くとも
そのオルト位又はパラ位のどちらかが置洪基を有してい
てもよいアミン基で置換された置換フェニル基を表わす
。〕で示されるイミダゾール誘導体及び該化合物を発色
成分として用いる酸化性物質並びにペルオキシダーゼ様
物質の定量法である。

即ち、本発明は上記一般式（１）で示されるイミダゾー
ル誘導体が、いずれもその呈色波長が８００韓上の表波
長側にあり、しかも、色原体として極めて安定であるこ
とを本発明者らが初めて見出し、これを血清や尿など生
体試料中の微量成分の測定に於ける発色成分として用い
ることにより、上記した本発明の目的を達成し得ること
を見出して本発明を完成するに到ったものである。

一般式〔１〕で示される本発明のイミダゾール誘導体に
於て、Ｒ’、Ｒ”及びぼで表わされる、少くともそのオ
ルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有していてもよ
いアミノ基で置換された置換フェニル基に於ける置換ア
ミノ基の置換基としては例えば、メチル基、エチル基、
プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、−Ｃ，Ｈ，
ＯＨ基、−Ｃ，Ｈ，ＯＨ基、−Ｃ，Ｈ，Ｎ　ＨＳ　Ｏ，
ＣＨ，基、−Ｃ１Ｈ，Ｎ　ＨＣ０Ｃｆ（。

基、−〇、Ｈ，ＳＯ，Ｈ基（又は−Ｃｘ　Ｈａ　Ｓ　Ｏ
ｓ　Ｎａ基）、−〇、Ｈ，ＳＯ婁Ｈ基（又は−Ｃ，Ｈ，
Ｓ　Ｏ，Ｎ昧）、−ＣＨ，ＣＨＣＨ！ＳＯ，Ｈ基（又は
−ＣＨ−ＣＨＣＨ−８ｏ−ＮａＯＨＯＨ 基）等の置換低級アルキル基等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。又、アミノ基又は置換アミ
ノ基以外の置換基としては、例えば、メチル基、エチル
基、プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基、メトキ
シ基、エトキシ基、プロポキシ基等の低級アルコキシ基
、塩素、臭素、弗素、沃素等のハロゲン、ニトロ基、シ
アノ基、カルボキシル基、スルホン基等が挙げられるが
、水酸基はこれに含まれない。

一般式〔１〕で示される本発明のイミダゾール誘導体は
、例えば一般式〔１〕に於て、 ｌ 基を有していてもよいアミ ノ基を表わし、Ｘｌはその他の置換基を表わす。）いア
ミノ基を表わし、Ｘｌはその他の置換基を表わＸ“ いアミノ基を表わし　ＸＩはその他の置換基を表わす。

） とした場合、酸化により次の如き構造の染料を生なるこ
とにより生ずる色素よりもその呈色波長が更に長波長側
にシフトし、極大吸収波長はいずれも８００ｒｒｎとな
る。

表１に、一般式〔Ｉ〕で示される本発明化合物の具体例
数例と、その呈色時の極大吸収波長を示すが、本発明化
合物はこれらに限定されるものではない。

表　　　　１ 一般式ｍで示される本発明化合物は、公知の方法、例え
ば、米国特許第３２９７７１０号明細書に記載の方法に
準じて容易に合成することができる。

即ち、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｅｓ　
ＶｏＬ　５．１）１頁　１９７３年に記載の方法に準じ
て、式〔■〕で示されるエタンジオンを合成し、 Ｒ”−Ｃ−Ｃ−Ｒ’ Ｉｔ　　ＩＩ　　　　　［：ＩＩＩ］ （式中、Ｒ″　ＢＳは前記と同じ。） 次いで、これをＲ’−ＣＨｏ（Ｒ’は前記と同じ）なる
アルデヒド類及び酢酸アンモンと酢酸溶媒中数時間加熱
（要すれば還流）反応させた後、常法に従って、中和、
晶出、ｐ取、洗浄、乾燥等の後処理を行うことにより、
目的とするイミダゾール誘導体が得られる。

本発明のイミダゾール誘導体は、酸化性物質の定量やペ
ルオキシダーゼ様物質の定量に於ける発色成分として有
効に用い得るが、とりわけ酵素反応により生成した過酸
化水素をペルオキシダーゼの存在下発色系に導き、その
呈色を測定することによシ行う生体試料中の微量成分の
定量に於ける発色成分として特に有効に使用し得る。

即ち、本発明の酸化性物質の定量法は、基質、又は酵素
反応によシ生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
又は酵素活性の定量法として特に効果的に使用し得る。

本発明の方法により測定可能な生体試料中の微量成分と
しては、例えば、コレステロール、グルコース、グリセ
リン、トリグリセライド、遊離脂肪酸、尿酸、リン脂質
、胆汁酸、モノアミンオキシダーゼ、グアナーゼ、コリ
ンエステラーゼ等が挙げられるが、これらに限定される
ものではなく、酵素反応により生成する過酸化水素を定
量することによって測定が可能な生体成分は全て定量可
能である。

本発明の方法による生体成分の定量に於て、過酸化水素
を生成させる酵素として用いられる酸化酵素（オキシダ
ーゼ）及びその他の目的で用いられる酵素類並びに酵素
反応に関与する基質及びその他の物質の種類及び使用量
は被酸化性呈色試薬を用いる自体公知の生体成分の定量
法に準じて夫々測定対象となる物質に応じて適宜選択す
ればよい。又、本発明による過酸化水素の定量に於て用
いられるベルキオシダーゼとしては、その起源、由来に
特に限定はなく、植物、動物、微生物起源のペルオキシ
ダーゼ又はペルオキシダーゼ様物質が、一種若しくは要
すれば二種以上組合せて用いられる。又、その使用量は
目的に応じて適宜定められ、特に限定されない。

本発明の方法による生体成分の定量は、通常、ｐＨ４，
０−１０，０、より好ましくはｎ−６，０〜８．０で実
施される。用いられる緩衝剤としては、リン酸塩、クエ
ン酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、トリス緩衝液、グツド（Ｇ
ｏｏｄｓ　）緩衝液などが挙げられるが、特にこれらに
限定されない。

本発明のイミダゾール誘導体は、過酸化水素等酸化性物
質の定量に有効に用い得るが、又、これと過酸化水素と
を組み合せることによりペルオキシダーゼ様物質の定量
を行うことも可能である。

ペルオキシダーゼ様物質としては、ペルオキシダーゼそ
のものの他、ヘモグロビンその他のヘム化合物が挙げら
れる。

即ち、本発明のイミダゾール誘導体は、例えば、ペルオ
キシダーゼを標識化合物に用いた酵素免疫測定法にも応
用可能であシ、又、血清中のヘモグロビンを過酸化水素
若しくは過硼素酸す）　ＩＪウムのような酸化性物質を
用いて測定する場合などにも有効に使用し得る。

以下に実施例を挙げるが、本発明はこれら実施例により
何ら制約を受けるものではない。

〔実施例〕

実施例１．　２−（４−ジエチルアミノフェニル）−４
，５−ビス（４−ジエチルアミン−２−メチル−フェニ
ル）イミダゾール（本発明化合物（３））の合成 （＋）　　１．２−ビス（４−ジエチルアミノ−２−メ
チル−フェニル）エタン−１，２−シオンノ合成加え水
冷下、Ｎ、Ｎ−ジエチル−ｍ−）ルイジン２２ｆを滴下
した。さらに攪拌下、氷冷しながらオキザリルクロリド
１．５ｆを滴下し、６０分間攪拌反応させた。反応後、
水５０−及びクロロホルム１００−を加え、分液して得
たクロロホルム層を減圧、濃縮して結晶を析出せしめた
。析出した結晶を戸数し酢酸エチルから再結晶して黄色
の目的物６．Ｏｆを得た。

（ｉｉ）　　２−　（４−ジエチルアミノフェニル）−
４゜５−ビス（４−ジエチルアミノ−２−メチル−フェ
ニル）イミダゾールの合成 （１）で得た１、２−ビス（４−ジエチルアミノ−２−
メチル−フェニル）エタン−１，２−ジオン１．５ｔと
４−ジエチルアミノベンズアルデヒド１．Ｏｆ酢酸アン
モニウム５ｔを酢酸３〇−中で２時間加熱還流して反応
させた。冷却後水６０−を加え水冷下アンモニア水で中
和したところ結晶が析出した。析出した結晶を戸数し、
水洗、乾燥後酢酸エチルから再結晶し白色の目的化合物
０．５２を得た。

ＮＭＲ（ＴＭＳ、ＣＤＣ１ｍ　　）δＰ　ｐｍ　：１．
１０（１８Ｈｌｔ　、　　　Ｃ−ＣＨｓ）　、　　１．
９０（ＩＨ，ａ。

３．１　〜３．４　　（１２Ｈ，ｂｒｏａｄ、　　　　
　ＣＬ　　　ＣＨｓ）。

２６３０．１７０５，１６４５，１６０５゜１５２０、
元素分析値Ｃ，，）Ｌｗ　ｌ’Ｊｓとして計算値（％）
　：　０７８．１？、　Ｈ８，８１，Ｎ１３．０２実測
値（％）　：　Ｃ７８，２８，Ｈ８，８４，Ｎ１２．９
７酸化呈色時のλｍａｘ　＝　８６０　ｎｍ　（ｇ　＝
　９５，０００）実施例２．２−（４−ジエチルアミノ
−３−メトキシフェニル）　−４，５−ビス（４−ジエ
チルアミノ−２−メチル−フェニル）イミダゾール（本
発明化合物（４））の合成 実施例・１）の（ｉ）で得た１、２−ビス（４−ジエチ
ルアミノ−２−メチル−フェニル）エタン−１，２−ジ
オン１．５ｆと４−ジエチルアミノ−３−メトキシベン
ズアルデヒド１．０ｆ１酢酸アンモニウム５ｆを酢酸３
０−中で２時間加熱還流して反応させた。冷却後水６０
ｄを加え詠冷下アンモニア水で中和したところ結晶が析
出した。析出した結晶を戸数し水洗乾燥後へキサンで処
理して白色の目的化合物０．６ｆを得た。

ＩＲｕＫＢｒ（ｃｍ−’）：　３４２０，２９６０，１
６４０゜ａｘ １６１０．１５２０ 元素分析値　Ｃｓ・Ｈ，、Ｎ、　０として、計算値（％
）　：　Ｃ７６，１５，１（８，７０，Ｎｌ　２．３３
　　・実測値（％）：　Ｃ７６，１０，Ｈ８，７４，Ｎ
１２．２８酸化呈色時のλｍａｘ　＝　８５０　ｎｍデ
ヒドに代えて４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用
い、実施例１と同様に反応を行い２−（４−ジメチルア
ミノフェニル）　−４，５−ビス（４−ジエチルアミノ
−２−メチル−フェニル）イミダゾール（本発明化合物
（２ン）を得た。

ＫＢｒ　　　＋ｌ ＩＲν　　（副）：　３４００，２８８０，１６０５゜
ａｘ １５２０．１５１０ 元素分析値　Ｃｓｓ　Ｈａｓ　ｔ’Ｊ爆として計算値（
チ’）　：　Ｃ７７，７６，Ｈ８，５０，Ｎｌ　３．７
４実測値（俤）：Ｃ７７，９０，Ｈ８，５７，Ｎ１３．
６９酸化呈色時のλｍａｘ　＝　８５５　ｎｍ実施例４
゜ 実施例１に於けるＮ、Ｎ−ジエチル−ｍ−）ルイジンに
代えてＮ、Ｎ−ジエチルアニ１）ンを用い、及び４−ジ
エチルアミノベンズアルデヒドに代えて４−ジエチルア
ミノベンズアルデヒドを用い、実施例１と同様に反応を
行い２−（４ジメチルアミノフエニル）　−４，５−ビ
ス（４−ジエチルアミノフェニル）イミダゾール（本発
明化合物（１））を得た。

元素分析値　Ｃ，、＆　Ｎ、とじて 計算値（％）：　Ｃ７７，３０，Ｈ８，１６，Ｎｌ　４
．５４実測値（％）：Ｃ７７，１５，Ｈ８，２０，Ｎｌ
４．４６酸化呈色時のλｍａｘ　＝＝　８２０　ｎｍ実
施例５゜ 過酸化水素の定量 ＋１）　　試薬　５０　ｍｍｏｔ／　Ｌリン酸緩衝液（
ｐｌ（７，０）にペルオキシダーゼ２０００Ｕ／ｌ、本
発明化合物（３）　１００μｍｏｔ／　ｌの濃度になる
ように調製した。

（２）　　試料　市販過酸化水素水を蒸留水で希釈し２
、０　、　１．５　、　１．０　、　０．５　ｍ　ｍｏ
ｔ／　Ｌになるように調製した。

（３）　　測定操作　各試料液及び蒸留水苔々２ｏａｔ
に試薬３．０−を加え、３７℃で５分間加温し、８５０
ｎｍの吸光度を盲検を対照に測定した。

各過酸化水素濃度に対してプロ、トシた吸光度を結ぶ検
量線は、第１図に示されるように、原点を通る直線とな
り、検量線は良好な定量性を示している。

実施例６゜ 尿酸の定量 （１）試薬　５０　ｍｍｏｔ／　ｔ　ＭＥ　Ｓ　（２−
（Ｎ　−モルホリノ）エタンスルホン酸）Ｉｌｉｌｉ（
ｐＨ６，５）ニウリ１ｙ−（／１００　Ｕ／　Ｌ　、　
ペルオキシダーゼ２，０００　Ｕ／ｌ、本発明化合物（
４）　１００　ｐｍｏＬ／ｌの濃度になるように調製し
た。

（２）　　試料　尿酸を蒸留水で１０．　７．５．　５
，２．５゜ｍｇ／ｄｔになるように溶解し調製した。

（３）　　測定操作　各試料液及び蒸留水苔５０　ｐｔ
’ｌｃ試薬３．０−を加え１．３７℃で５分間加温し８
５０ｎｍの吸光度を盲検を対照に測定した。

各尿酸濃度に対してプロットした吸光度を結ぶ検量線は
、第２図に示されるように、原点を通る直線となり、検
量線は良好な定量性を示している。

〔発明の効果〕　　。

以上述べた如く、本発明の新規イミダゾール誘導体は、
いずれもその呈色時の極大吸収波長が、８００ｎ＋ｍ以
上と長波長側にある為、血清、尿等生体試料中の微量成
分の定量に於ける発色成分としてこれを用いた場合には
、試料中に共存する有色の妨害物質の影響を全く受けず
に測定を行うことができるという点に顕著な効果を奏す
るものであり、斯業に貢献するところ大なるものである
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例５に於て得られた検量線を表ｍｏ　Ｌ わし、横軸の各過酸化水素濃度（／ｌ）について得られ
た吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだもので
ある。 第２図は、実施例６に於て得られた検量線を表わし、横
軸の各尿酸濃度（ｍｇ　／ｄＬ　）について得られた吸
光度を縦軸に沿ってプロットした点を結んだものである
。 特許出願人　　和光純薬工業株式会社−埴酸化水木儂度
（ｍｍｏＪＬ７１　） 協２図 尿酸濃度（ｗ′ｔ／ｄｌ） 手続補正書 昭和１０年　２月　２ａ ）１４和６０午１尼３１日≠弧の４寿か甥頃２　発明の
名称 １　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 連絡先　特許課（東京）　置　０３−２７０−８５７１
５、　補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）　　明細書１）頁２行目に記載の［８００ｎｍＪ
を「８００ｎｍ以上」と補正する。 （２）明細書１２頁１３行目に記載の「酢酸アンモン」
を「酢酸アンモニウム」と補正する。 （３）明細書１９頁１３行目から同頁１５行目にかけて
記載の「２−（４ジメチルアミノフエニル）−４，５−
ビス（４−ジエチルアミン、フェニル）イミダゾール」
ｔ−ｒ２−（４−ジメチルアミノフェニル）−４，５−
ビス（４−ジエチルアミノフェニル）イミダゾール」と
補正する。 以上

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々独立して、少
   くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
   していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
   表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体。
2. （２）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々独立して、少
   くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
   していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
   表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体を発色成分と
   して用いることを特徴とする酸化性物質の定量法。
3. （３）酸化性物質が過酸化水素である、特許請求の範囲
   第２項記載の定量法。
4. （４）ペルオキシダーゼの存在下、発色成分を酸化発色
   させてその呈色を比色定量する特許請求の範囲第３項記
   載の定量法。
5. （５）過酸化水素が、酵素反応により生成する過酸化水
   素である特許請求の範囲第３項又は第４項記載の定量法
   。
6. （６）過酸化水素が、生体試料中の微量成分の定量に於
   て酵素反応により生成する過酸化水素である特許請求の
   範囲第５項記載の定量法。
7. （７）生体試料中の微量成分の定量が、基質、又は酵素
   反応により生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
   過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
   又は酵素活性の定量である特許請求の範囲第６項記載の
   定量法。
8. （８）下記一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＲ＾３は夫々独立して、少
   くともそのオルト位又はパラ位のどちらかが置換基を有
   していてもよいアミノ基で置換された置換フェニル基を
   表わす。〕で示されるイミダゾール誘導体を発色成分と
   して用いることを特徴とするペルオキシダーゼ様物質の
   定量法。
9. （９）ペルオキシダーゼ様物質がペルオキシダーゼであ
   る特許請求の範囲第８項記載の定量法。
10. （１０）ペルオキシダーゼ様物質がヘモグロビン又はそ
    の他のヘム化合物である特許請求の範囲第８項記載の定
    量法。