JPS61151157A - タンパク質を加水分解する方法 - Google Patents
タンパク質を加水分解する方法Info
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- JPS61151157A JPS61151157A JP59279312A JP27931284A JPS61151157A JP S61151157 A JPS61151157 A JP S61151157A JP 59279312 A JP59279312 A JP 59279312A JP 27931284 A JP27931284 A JP 27931284A JP S61151157 A JPS61151157 A JP S61151157A
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- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
- A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
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- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、アミノ酸分析の前処理であるタンパク質の加
水分解の方法に関する、特に、気相・固相反応により固
体表面上に吸着したタンパク質を混合蒸気により加水分
解する新しい方法を提供しようとするものである。
水分解の方法に関する、特に、気相・固相反応により固
体表面上に吸着したタンパク質を混合蒸気により加水分
解する新しい方法を提供しようとするものである。
従来、アミノ酸分析の前処理である加水分解は、蒸留し
た共沸点塩酸を用い、空気を除去した封管中、１００″
Ｃ〜１１０℃で少なくとも２４〜１４４時間の長時間加
熱が必要であった。ところが、最近、次田らによって開
発された塩酸（ＨＣｌ）、トリフルオロ酢酸（ＣＦ３Ｃ
ＯＯＨ，以下ＴＦＡと記す）と水（Ｈ２Ｏ）の混合溶液
を用いる加水分解法は゛、２５〜５０分間で迅速に加水
分解を行うことができる。（文献（１１〜（４））次田
らの開発した方法の骨子は次の２点から成り立っている
。
た共沸点塩酸を用い、空気を除去した封管中、１００″
Ｃ〜１１０℃で少なくとも２４〜１４４時間の長時間加
熱が必要であった。ところが、最近、次田らによって開
発された塩酸（ＨＣｌ）、トリフルオロ酢酸（ＣＦ３Ｃ
ＯＯＨ，以下ＴＦＡと記す）と水（Ｈ２Ｏ）の混合溶液
を用いる加水分解法は゛、２５〜５０分間で迅速に加水
分解を行うことができる。（文献（１１〜（４））次田
らの開発した方法の骨子は次の２点から成り立っている
。
（ｉ）加水分解の反応速度を上げるため、反応温度を高
くする。（温度が１０℃上がると反応速度は約２倍とな
る。６０℃上げると２”＝６４倍、すなわち時間がおお
よそ“分”のオーダーになる。）（ｉｉ）有機溶媒、と
くに酸性の強い有機酸を加えると、疎水性のペプチド部
分が加水分解を受けやすくなる。
くする。（温度が１０℃上がると反応速度は約２倍とな
る。６０℃上げると２”＝６４倍、すなわち時間がおお
よそ“分”のオーダーになる。）（ｉｉ）有機溶媒、と
くに酸性の強い有機酸を加えると、疎水性のペプチド部
分が加水分解を受けやすくなる。
はじめに、温度を上げることによって加水分解の速度を
上げることを示す。第５図に、酸加水分解をうけにくい
とされているジペプチドＶａｌ−Ｇｌｕの加水分解率と
温度の関係を示す。加水分解時間は、２５分間、比較の
ために、６ＭＨＣｌを用いた場合も合わせ示した。図よ
り明らかなように、温度が上がると反応速度は上がって
いる。
上げることを示す。第５図に、酸加水分解をうけにくい
とされているジペプチドＶａｌ−Ｇｌｕの加水分解率と
温度の関係を示す。加水分解時間は、２５分間、比較の
ために、６ＭＨＣｌを用いた場合も合わせ示した。図よ
り明らかなように、温度が上がると反応速度は上がって
いる。
また、ＴＦＡと塩酸の混合物（ＣＦ ａ Ｃｏ ２ Ｈ
：ＨＣＩ （１： ２））を用いた場合の方が、６Ｍ
ＨＣｌの場合よりも著しく反応速度が大きい。
：ＨＣＩ （１： ２））を用いた場合の方が、６Ｍ
ＨＣｌの場合よりも著しく反応速度が大きい。
次に、どのような有機酸の添加が効果があるかを示す。
第１表に、比較的効果の大きい揮発性有機酸の結果をま
とめた。この表からＴＦＡの添加が最も有効であること
が分る。
とめた。この表からＴＦＡの添加が最も有効であること
が分る。
（第１表）Ｖａｌ−Ｇｌｕからのアミノ酸の回収率以上
より、加水分解の温度を上げ、ＴＦＡを添加することが
、加水分解を迅速に行う上で非常に効果があることが理
解できる。
より、加水分解の温度を上げ、ＴＦＡを添加することが
、加水分解を迅速に行う上で非常に効果があることが理
解できる。
さらに、既知のタンパク質であるミオグロビンを用い、
加水分解を行った例を示す。第６図に、ミオグロビンを
ＴＦＡ／塩酸（１： ２）で、１０分、２５分間分解し
てアラニンの回収率からタンパク質の分解率を示した。
加水分解を行った例を示す。第６図に、ミオグロビンを
ＴＦＡ／塩酸（１： ２）で、１０分、２５分間分解し
てアラニンの回収率からタンパク質の分解率を示した。
１６６℃付近２５分間で１００％の回収率が得られてい
ることが分る。
ることが分る。
□参考文献□
（１１次１）晧、蛋白質 核酸 酵素 ２７（１２）（
１９８２）１４８６゜ （２） Ａ ｋ ｉ ｒ ａ Ｔ ｓ ｕ ｇ ｉ
ｔ ａ ａ ｎ ｄ Ｊ ｅａｎ Ｊａｃｑｕ
ｅｓ ５ｃｈｅｆｆｌｅｒ；Ｐｒｏｃ、Ｊａｐａｎ
Ａｃａｄ、、５Ｂ、Ｓｅｔ、Ｂ （１９８２）。
１９８２）１４８６゜ （２） Ａ ｋ ｉ ｒ ａ Ｔ ｓ ｕ ｇ ｉ
ｔ ａ ａ ｎ ｄ Ｊ ｅａｎ Ｊａｃｑｕ
ｅｓ ５ｃｈｅｆｆｌｅｒ；Ｐｒｏｃ、Ｊａｐａｎ
Ａｃａｄ、、５Ｂ、Ｓｅｔ、Ｂ （１９８２）。
（３１Ａ ｋ ｉ ｒ ａ ａ ｎ ｄ Ｊ ｅ
ａ ｎ Ｊ ａ ｃ ｑ ｕｅｓ ５ｃｈｅｆｆｌ
ｅｒ；Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉ。
ａ ｎ Ｊ ａ ｃ ｑ ｕｅｓ ５ｃｈｅｆｆｌ
ｅｒ；Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉ。
ｃｈｅｍ、１２４ （１９８２）５８５゜（４）Ａｋｉ
ｒａ Ｔｓｕｇｉｔａ、Ｆｒａｎｃｉｓ Ｖｉｌ
ｂｏｒｓ、Ｃａｒｌ Ｊｏｎｅ ａｎｄ
Ｒｕｄｏｒｆ ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｏｅ
ｋ；Ｚ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ３６
５ （１９８４）３４３゜ 〔発明が解決しようとする問題点〕 従来の蒸留した共沸点塩酸を用いるタンパク質加水分解
法は、１１０℃で２４〜１４４時間の長時間加熱が必要
であるという欠点があった。
ｒａ Ｔｓｕｇｉｔａ、Ｆｒａｎｃｉｓ Ｖｉｌ
ｂｏｒｓ、Ｃａｒｌ Ｊｏｎｅ ａｎｄ
Ｒｕｄｏｒｆ ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｏｅ
ｋ；Ｚ、 Ｐｈｙｓｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ３６
５ （１９８４）３４３゜ 〔発明が解決しようとする問題点〕 従来の蒸留した共沸点塩酸を用いるタンパク質加水分解
法は、１１０℃で２４〜１４４時間の長時間加熱が必要
であるという欠点があった。
また、次田らが開発した塩酸、ＴＦＡと水の混合溶液を
用いる加水分解法は、２０〜５０分内で迅速に加水分解
を行うことが出来るが、溶液法であるため溶媒よりの汚
染がありアミノ酸分析値に誤差が出やすい欠点があり、
加水分解後の煩雑な蒸発操作による酸の除去が必要なた
め、自動化が困難であると同時に、アミノ酸分析前まで
の時間が長くなりアミノ酸分析装置と同期化が困難であ
った。
用いる加水分解法は、２０〜５０分内で迅速に加水分解
を行うことが出来るが、溶液法であるため溶媒よりの汚
染がありアミノ酸分析値に誤差が出やすい欠点があり、
加水分解後の煩雑な蒸発操作による酸の除去が必要なた
め、自動化が困難であると同時に、アミノ酸分析前まで
の時間が長くなりアミノ酸分析装置と同期化が困難であ
った。
ｃ問題点を解決するための手段〕
本発明は、上記欠点を除去するためになされたものであ
°す、次田らの混酸溶液法をさらに発展させ、固体表面
に吸着したタンパク質を、酸混合蒸気との固相・気相反
応により加水分解することで、次田らが開発した溶液法
、分解時間の迅速さを生かしながら分解したアミノ酸の
汚染を防ぎ、煩雑な操作をなくして、タンパク質分解の
自動化及びアミノ酸分析の同期化を可能にするものであ
る。
°す、次田らの混酸溶液法をさらに発展させ、固体表面
に吸着したタンパク質を、酸混合蒸気との固相・気相反
応により加水分解することで、次田らが開発した溶液法
、分解時間の迅速さを生かしながら分解したアミノ酸の
汚染を防ぎ、煩雑な操作をなくして、タンパク質分解の
自動化及びアミノ酸分析の同期化を可能にするものであ
る。
以下にこの発明の詳細な説明する。
実施例 １
本実施例においては、気相・固相反応によって加水分解
を行う基本的方法を示す。
を行う基本的方法を示す。
簡単のために、Ｖａｌ−Ｇｌｕのジペプチド１を第１図
に示すように小さい試験管２に２．５ｎｍｏｌｅ取り、
充分真空乾燥させる。次にこの試験管２を大きい試験管
３に入れる。この試験管３の底には、あらかじめＨＣＩ
：ＴＦＡ （３： ２）の酸混合物４が５００μｌ入
れられている。次にこの試験管３を氷で冷却しながら、
アンプル形状（５）に真空封止する。封止した試験管を
温度１６６℃のオイルバスに入れ、３０分間加熱する。
に示すように小さい試験管２に２．５ｎｍｏｌｅ取り、
充分真空乾燥させる。次にこの試験管２を大きい試験管
３に入れる。この試験管３の底には、あらかじめＨＣＩ
：ＴＦＡ （３： ２）の酸混合物４が５００μｌ入
れられている。次にこの試験管３を氷で冷却しながら、
アンプル形状（５）に真空封止する。封止した試験管を
温度１６６℃のオイルバスに入れ、３０分間加熱する。
この加熱の際、酸混合物４は気化し、ジペプチド１と気
相・固相反応により加水分解反応を行う。
相・固相反応により加水分解反応を行う。
３０分間の加熱後、試験管２を取り出し、真空デシケー
タ−で充分酸を除去する。乾燥した試験管２に０．ＯＩ
ＭＨＣＩを８０μβ入れ、加水分解生成物を溶解し、ア
ミノ酸分析装置（Ｄｕｒｒｕｍ社製）にて分析したとこ
ろ、ジペプチドの構成アミノ酸の回収率は、１００％で
あった。また混在しやすいとされているＧＩｙやＳｅｔ
による汚染は１０ｐｍｏｌｅ以下（分析装置の感度以下
）に押さえることができた。（従来法では１００〜３０
０ｐｍｏｌｅ） 本実施例より明らかなように、気相・固相反応により加
水分解反応が行われることは明らかである。
タ−で充分酸を除去する。乾燥した試験管２に０．ＯＩ
ＭＨＣＩを８０μβ入れ、加水分解生成物を溶解し、ア
ミノ酸分析装置（Ｄｕｒｒｕｍ社製）にて分析したとこ
ろ、ジペプチドの構成アミノ酸の回収率は、１００％で
あった。また混在しやすいとされているＧＩｙやＳｅｔ
による汚染は１０ｐｍｏｌｅ以下（分析装置の感度以下
）に押さえることができた。（従来法では１００〜３０
０ｐｍｏｌｅ） 本実施例より明らかなように、気相・固相反応により加
水分解反応が行われることは明らかである。
実施例 ２ ′
本実施例においては、塩酸（ＨＣｌ）とＴＦＡの酸混合
物蒸気の温度を上げることによって加水分解反応の速度
が著しく加速されることを示す。
物蒸気の温度を上げることによって加水分解反応の速度
が著しく加速されることを示す。
実施例１と同様の実験をＶａｌ−Ｇｌｕジペプチドにつ
いて、種々の温度（１１０℃〜２１０℃）にて加水分解
率を求めたところ、第２図の曲線Ｃの結果を得た、。比
較のため、第２図には、従来の塩酸法、また次田らによ
って開発された液相法の結果もあわせ示した。
いて、種々の温度（１１０℃〜２１０℃）にて加水分解
率を求めたところ、第２図の曲線Ｃの結果を得た、。比
較のため、第２図には、従来の塩酸法、また次田らによ
って開発された液相法の結果もあわせ示した。
図中、
ａ：従来の塩酸法、６ＭＨＣｌ ２５分間ｂ：
次田らの液相法、ＴＦＡ：塩酸＝ （１： ２）２５分
間 Ｃ二本発明、ＴＦＡ：塩酸＝（２：３）２５分間の各条
件の結果を示す。
次田らの液相法、ＴＦＡ：塩酸＝ （１： ２）２５分
間 Ｃ二本発明、ＴＦＡ：塩酸＝（２：３）２５分間の各条
件の結果を示す。
本実施例より明らかなように、酸混合物蒸気の温度をあ
げると反応が著しく加速されていることが分る。さらに
本発明による方法がもっとも迅速に加水分解反応を行っ
ていることも明らかである。
げると反応が著しく加速されていることが分る。さらに
本発明による方法がもっとも迅速に加水分解反応を行っ
ていることも明らかである。
実施例 ３
本実施例においては、本発明による方法にアミノ酸回収
率が充分目的にあったものであることを示す。
率が充分目的にあったものであることを示す。
実施例１と同様の方法で種々のアミノ酸について加水分
解条件時での、回収率を求めたところ第２表の結果を得
た。比較のために、次田らによって詳細に検討された酸
混合物溶液を用いた場合についても合わせまとめた。第
２表中の数値は、気相（ＴＦＡ：Ｉ（Ｃ１＝２ ： ３
）中１６６°Ｃ１液相（ＴＦＡ：ＨＣ１＝１ ： ２）
中１７０℃で、加熱後の回収率を示す。アミノ酸の回収
率はグルタミン酸の値を１００％として表されている。
解条件時での、回収率を求めたところ第２表の結果を得
た。比較のために、次田らによって詳細に検討された酸
混合物溶液を用いた場合についても合わせまとめた。第
２表中の数値は、気相（ＴＦＡ：Ｉ（Ｃ１＝２ ： ３
）中１６６°Ｃ１液相（ＴＦＡ：ＨＣ１＝１ ： ２）
中１７０℃で、加熱後の回収率を示す。アミノ酸の回収
率はグルタミン酸の値を１００％として表されている。
第２表の結果より明らかなように、本発明による酸混合
物蒸気による加水分解法は、液相法と同様に、その目的
に合ったものであることは明らかである。
物蒸気による加水分解法は、液相法と同様に、その目的
に合ったものであることは明らかである。
（第２表） アミノ酸の回収率
気相 液相
１５ ｍｉｎ ３０ ｎ＋ｉｎ ２５ ｍｉｎ
５０ ｍｉｎ＾ｓｐ ９４ ９７ ９
９ １０３Ｔｈｒ ８９ ８２ ９２
８４Ｓｅｒ ７５ ６１ ８５
７８Ｇｌｕ １００ １００ １００
１００Ｐｒｏ ８４ ８５ ９６
９８Ｇｌｙ ９３ ９１ １０４ １
０８＾１ａ １１３ １１０ １１５ １
０１Ｖａｌ １０２ １０２ ９８
９８Ｍｅｔ ７０ ６５ ８７ ７
６１１ｅ ９７ ９９ ９３ ９５
Ｌｅａ ９６ １００ ９２ ９４Ｔ
ｙｒ ９２ ９４ ８９ ８１Ｐｈ
ｅ ９９ １０１ ９０ ８７Ｈｉｓ
１０６ １０１ ９６ ９９Ｌｙｓ
１０１ １０１ ９５ ９８Ａｒｇ
１０８ １０６１００ １００実施例 ４ 本実施例においては、本発明による酸混合蒸気を用いる
加水分解法を種々のタンパク質に応用した例を示す。実
験は、実施例１と同様の方法を用いた。用いたタンパク
質は下記のものである。
５０ ｍｉｎ＾ｓｐ ９４ ９７ ９
９ １０３Ｔｈｒ ８９ ８２ ９２
８４Ｓｅｒ ７５ ６１ ８５
７８Ｇｌｕ １００ １００ １００
１００Ｐｒｏ ８４ ８５ ９６
９８Ｇｌｙ ９３ ９１ １０４ １
０８＾１ａ １１３ １１０ １１５ １
０１Ｖａｌ １０２ １０２ ９８
９８Ｍｅｔ ７０ ６５ ８７ ７
６１１ｅ ９７ ９９ ９３ ９５
Ｌｅａ ９６ １００ ９２ ９４Ｔ
ｙｒ ９２ ９４ ８９ ８１Ｐｈ
ｅ ９９ １０１ ９０ ８７Ｈｉｓ
１０６ １０１ ９６ ９９Ｌｙｓ
１０１ １０１ ９５ ９８Ａｒｇ
１０８ １０６１００ １００実施例 ４ 本実施例においては、本発明による酸混合蒸気を用いる
加水分解法を種々のタンパク質に応用した例を示す。実
験は、実施例１と同様の方法を用いた。用いたタンパク
質は下記のものである。
・グルカゴン
・チトクロームＣ
・チモトリプシノーゲンＡ
・ミオグロビン
約５μｇの各タンパク質試料を溶解した水溶液を、実施
例１と同じ小試験管の取り、充分真空乾燥後、実施例１
と同様の方法を用いて加水分解を行った。酸混合蒸気を
用いる加水分解法は、１６１℃の温度で２２．５分間（
表中２２．５Ｖと記す）と４５分間（表中４５Ｖと記す
）行った。試験管の底部に用いた酸混合物は、ＴＦＡと
塩酸の比が（２： ３）のものを用いた。加水分解後の
試料は、８０μｌの０．ＯＩＭＨＣＩに溶解後、通常の
アミノ酸分析装置にてアミノ酸組成を分析した。結果を
第３表にまとめた。比較のために、吹田らが開発した酸
混合物を用いる方法と共沸点塩酸（５，７Ｍ）を用いる
方法による結果も合わせ第３表にまとめた。酸混合物を
用いる方法は、ＴＦＡと塩酸の混合比が（１： ２）の
ものを用い、温度１６６℃で、加水分解時間は２５分間
（表中１２５Ｌと記す）と５０分間（表中５ＯＬと記す
）であり、５．７Ｍの共沸点塩酸を用いる方法は、温度
１０６℃で時間は２４時間（表中２４Ｃと記す）と７２
時間（表中７２Ｃと記す）の各条件の結果である。また
表中、Ｔの項はタンパク質−次構造から得られた理論値
であり、ＴｈｒとＳｅｔの（）内は、０時間外挿値であ
る。
例１と同じ小試験管の取り、充分真空乾燥後、実施例１
と同様の方法を用いて加水分解を行った。酸混合蒸気を
用いる加水分解法は、１６１℃の温度で２２．５分間（
表中２２．５Ｖと記す）と４５分間（表中４５Ｖと記す
）行った。試験管の底部に用いた酸混合物は、ＴＦＡと
塩酸の比が（２： ３）のものを用いた。加水分解後の
試料は、８０μｌの０．ＯＩＭＨＣＩに溶解後、通常の
アミノ酸分析装置にてアミノ酸組成を分析した。結果を
第３表にまとめた。比較のために、吹田らが開発した酸
混合物を用いる方法と共沸点塩酸（５，７Ｍ）を用いる
方法による結果も合わせ第３表にまとめた。酸混合物を
用いる方法は、ＴＦＡと塩酸の混合比が（１： ２）の
ものを用い、温度１６６℃で、加水分解時間は２５分間
（表中１２５Ｌと記す）と５０分間（表中５ＯＬと記す
）であり、５．７Ｍの共沸点塩酸を用いる方法は、温度
１０６℃で時間は２４時間（表中２４Ｃと記す）と７２
時間（表中７２Ｃと記す）の各条件の結果である。また
表中、Ｔの項はタンパク質−次構造から得られた理論値
であり、ＴｈｒとＳｅｔの（）内は、０時間外挿値であ
る。
第３表より明らかなように、アミノ酸組成は実験値と理
論値はよく一致しており、本発明による酸混合蒸気によ
るタンパク質を加水分解する方法が、非常に有効である
ことを示している。
論値はよく一致しており、本発明による酸混合蒸気によ
るタンパク質を加水分解する方法が、非常に有効である
ことを示している。
（第３表−１）
（第３表−２）
（第３表−３）
実施例 ５
本実施例においては、自動アミノ酸分析装置と同期連結
可能な、気相・固相反応を利用した加水分解装置の一例
を示す。第４図に示すように加水分解装置の全体は４つ
のステージに分かれており、試料ホルダー６は各ステー
ジをカスケードにより移動し、各操作はパルプの開閉に
よりＮ２ガス、酸混合蒸気やＯ，ＯＩＭＨＣＩが導入さ
れる。
可能な、気相・固相反応を利用した加水分解装置の一例
を示す。第４図に示すように加水分解装置の全体は４つ
のステージに分かれており、試料ホルダー６は各ステー
ジをカスケードにより移動し、各操作はパルプの開閉に
よりＮ２ガス、酸混合蒸気やＯ，ＯＩＭＨＣＩが導入さ
れる。
試料サンプルは、第３図に示すような試料ホルダー６中
のガラスピーズ７にタンパク質を単分子膜に近い状態と
してあらかじめ溶液から吸着させ乾燥しである。この試
料ホルダー６の容量は１００μ！である。この試料ホル
ダー６は自動的に、気相・固相加水分解装置に挿填され
、順次第４図のｔｌ）から（４）の各ステージを進む。
のガラスピーズ７にタンパク質を単分子膜に近い状態と
してあらかじめ溶液から吸着させ乾燥しである。この試
料ホルダー６の容量は１００μ！である。この試料ホル
ダー６は自動的に、気相・固相加水分解装置に挿填され
、順次第４図のｔｌ）から（４）の各ステージを進む。
第１ステージ（１）に挿填された試料ホルダー６は、Ｎ
２ガスを通気されたのち、第２ステージ（２）に移りヒ
ーター８によって１６０℃に加熱される。次に、ヒータ
ー１０によって加熱された容器９より蒸発したＴＦＡ、
塩酸、水の混合気体は、Ｎ２ガスによって輸送され、ヒ
ーター１１によって加熱されたノ々イブにより誘導され
試料ホルダー６に導入される。
２ガスを通気されたのち、第２ステージ（２）に移りヒ
ーター８によって１６０℃に加熱される。次に、ヒータ
ー１０によって加熱された容器９より蒸発したＴＦＡ、
塩酸、水の混合気体は、Ｎ２ガスによって輸送され、ヒ
ーター１１によって加熱されたノ々イブにより誘導され
試料ホルダー６に導入される。
この加熱された混合気体は、試料中のガラスピーズ７に
吸着したタンパク質を気相、固相反応により加水分解す
る。余剰の混合蒸気は、冷却器１２によって液化され、
容器１３に補集される。２５〜５０分間の加水分解を終
了した試料ホルダー６は、第３ステージ（３）に移りＮ
２ガスを通気シながら冷却される。第４ステージ（４）
に移った試料ボルダ−６は、試料ホルダー中の空隙（１
００μりより少し容量の小さいＯ，ＯＩＭＨＣＩ（９８
μａ）を注入され、次段のアミノ酸分析装置へと送り込
まれる。
吸着したタンパク質を気相、固相反応により加水分解す
る。余剰の混合蒸気は、冷却器１２によって液化され、
容器１３に補集される。２５〜５０分間の加水分解を終
了した試料ホルダー６は、第３ステージ（３）に移りＮ
２ガスを通気シながら冷却される。第４ステージ（４）
に移った試料ボルダ−６は、試料ホルダー中の空隙（１
００μりより少し容量の小さいＯ，ＯＩＭＨＣＩ（９８
μａ）を注入され、次段のアミノ酸分析装置へと送り込
まれる。
本実施例は、基本的には実施例１と同様のことを示して
いるが、本発明の気相・固相反応による加水分解は自動
化が容易であり、さらに次段のアミノ酸分析装置へと同
期が可能であることを示していることがもっとも重要で
ある。
いるが、本発明の気相・固相反応による加水分解は自動
化が容易であり、さらに次段のアミノ酸分析装置へと同
期が可能であることを示していることがもっとも重要で
ある。
以上５つの実施例により本発明を簡単に説明したが、さ
らに本発明の効果をまとめれば、次のようになる。
らに本発明の効果をまとめれば、次のようになる。
（１１汚染が殆どない。（気相法であるため、溶液法に
比べ溶媒よりの汚染が本質的に殆どない）（２）迅速性
がある。（加水分解時間自体が短い。
比べ溶媒よりの汚染が本質的に殆どない）（２）迅速性
がある。（加水分解時間自体が短い。
気相法であるため、各操作時間が短い。たとえば煩雑な
蒸発操作によ゛る酸の除去がない。そのため、アミノ酸
分析装置と同期可能である。）（３） 自動化が容易
である。（人為的誤差をさけることができ、一定条件下
で再現性の高い実験を行うことができる。また、一連の
操作中同一容器を用いるため、移し替えによる容器より
の汚染が少ない。） 以上のように、本発明による混合蒸気によりタンパク質
を加水分解する方法は、従来にない優れた点がありその
工業的価値は大である。
蒸発操作によ゛る酸の除去がない。そのため、アミノ酸
分析装置と同期可能である。）（３） 自動化が容易
である。（人為的誤差をさけることができ、一定条件下
で再現性の高い実験を行うことができる。また、一連の
操作中同一容器を用いるため、移し替えによる容器より
の汚染が少ない。） 以上のように、本発明による混合蒸気によりタンパク質
を加水分解する方法は、従来にない優れた点がありその
工業的価値は大である。
第１図； 実施例１の気相法のための実験容器の断面図
。 第２図； 本発明（Ｃ）、液相法（ｂ）と従来法（ａ）
によるＶａｌ−Ｇｌｕの加水分 解（温度と加水分解率）曲線図。 第３図； 実施例５のアミノ酸分析装置と同期可能な加
水分解装置用試料ホルダーの断 面図。 第４図； 実施例５の気相・固相加水分解装置の各ステ
ージ概略図。 第５図； 液相法と従来法によるＶａｌ−Ｇｌｕの加水
分解（温度と加水分解率）曲線 図。 第６図； ＴＦＡ：ＨＣＩ （１： ２）に・よる
ミオグロビンの加水分解曲線図。 １−−−−−−−− Ｖ ａ ｌ −Ｇ ｌ ｕのジペ
プチド２−・−・−試験管 ３・−・−一−−−試験管 ４−・−−−−一酸混合物 ５・・−・−−−−一真空封止 ６・−・−−−−・試料ホルダー ７−・−・−・・−ガラスピーズ ８−−−−一・−ヒーター ９−−−−−−−・・容器 １０・−・・・・・−ヒーター １１・・・・・−−−−ヒーター １２・−・−・−冷却器 １３−−−−−−・−容器 以上
。 第２図； 本発明（Ｃ）、液相法（ｂ）と従来法（ａ）
によるＶａｌ−Ｇｌｕの加水分 解（温度と加水分解率）曲線図。 第３図； 実施例５のアミノ酸分析装置と同期可能な加
水分解装置用試料ホルダーの断 面図。 第４図； 実施例５の気相・固相加水分解装置の各ステ
ージ概略図。 第５図； 液相法と従来法によるＶａｌ−Ｇｌｕの加水
分解（温度と加水分解率）曲線 図。 第６図； ＴＦＡ：ＨＣＩ （１： ２）に・よる
ミオグロビンの加水分解曲線図。 １−−−−−−−− Ｖ ａ ｌ −Ｇ ｌ ｕのジペ
プチド２−・−・−試験管 ３・−・−一−−−試験管 ４−・−−−−一酸混合物 ５・・−・−−−−一真空封止 ６・−・−−−−・試料ホルダー ７−・−・−・・−ガラスピーズ ８−−−−一・−ヒーター ９−−−−−−−・・容器 １０・−・・・・・−ヒーター １１・・・・・−−−−ヒーター １２・−・−・−冷却器 １３−−−−−−・−容器 以上
Claims (7)
- （１）固体表面上に、吸着したタンパク質を酸混合蒸気
との固相・気相反応により、加水分解することを特徴と
するタンパク質を加水分解する方法。 - （２）酸混合蒸気は、濃塩酸（ＨＣｌ）、トリフルオロ
酢酸（ＣＦ＿３ＣＯＯＨ）と水（Ｈ＿２Ｏ）の混合気体
であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載
の方法。 - （３）酸混合蒸気にフェノールおよび揮発性還元剤を加
えることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項もしく
は第（２）項記載の方法。 - （４）酸混合蒸気は、少なくとも１００℃〜１８０℃の
間にあることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項も
しくは第（２）項記載の方法。 - （５）酸混合蒸気の組成は、少なくとも濃度５．７Ｍ〜
１０ＭＨＣｌ、濃度５〜５０％トリフルオロ酢酸である
ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項もしくは第
（２）項記載の方法。 - （６）固体表面は、ガラス（または、耐熱性樹脂）のビ
ーズまたは多孔性に加工したものであることを特徴とす
る特許請求の範囲第（１）項記載の方法。 - （７）固相・気相反応による加水分解時間は、５分から
１２０分の間にあることを特徴とする特許請求の範囲第
（１）項記載の方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59279312A JPS61151157A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | タンパク質を加水分解する方法 |
| US06/813,043 US5049657A (en) | 1984-12-25 | 1985-12-24 | Process for hydrolysis of peptide or protein |
| DE8585309475T DE3568298D1 (en) | 1984-12-25 | 1985-12-24 | Process for hydrolysis of peptide or protein |
| EP85309475A EP0187529B1 (en) | 1984-12-25 | 1985-12-24 | Process for hydrolysis of peptide or protein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59279312A JPS61151157A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | タンパク質を加水分解する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61151157A true JPS61151157A (ja) | 1986-07-09 |
| JPH0316945B2 JPH0316945B2 (ja) | 1991-03-06 |
Family
ID=17609407
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59279312A Granted JPS61151157A (ja) | 1984-12-25 | 1984-12-25 | タンパク質を加水分解する方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5049657A (ja) |
| EP (1) | EP0187529B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61151157A (ja) |
| DE (1) | DE3568298D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0377853A (ja) * | 1989-08-18 | 1991-04-03 | Seiko Instr Inc | タンパク質あるいはペプチドを加水分解する装置 |
| JPH0377855A (ja) * | 1989-08-18 | 1991-04-03 | Seiko Instr Inc | タンパク質あるいはペプチドを加水分解する装置 |
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| US4745178A (en) * | 1987-04-22 | 1988-05-17 | Eli Lilly And Company | Process for selective peptide bond cleavage using sulfoxides and CF3 CO |
| EP0388224A3 (en) * | 1989-03-17 | 1991-05-22 | Seiko Instruments Inc. | Method and apparatus for effecting chemical treatment |
| KR100475833B1 (ko) * | 1998-01-24 | 2005-12-26 | 학교법인 호서학원 | 고수율의 펩타이드 제조방법 |
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| US1280862A (en) * | 1916-12-30 | 1918-10-08 | Sadakichi Satow | Celluloid-like substance and process of making the same. |
| US2049576A (en) * | 1933-06-09 | 1936-08-04 | S M A Corp | Method of preparing meat sauce |
| US2434715A (en) * | 1945-02-09 | 1948-01-20 | Harold S Olcott | Glutamic acid-free protein hydrolysate and the production thereof |
| NL102770C (ja) * | 1957-04-06 | |||
| US3391001A (en) * | 1965-02-26 | 1968-07-02 | Griffith Laboratories | Production of flavorful protein hydrolysate |
| DE1289400B (de) * | 1965-07-19 | 1969-02-13 | Maizena Werke Gmbh Deutsche | Verfahren zur Entfernung unerwuenschter Geschmackstoffe aus Eiweisshydrolysaten |
| JPS4910754B1 (ja) * | 1967-08-25 | 1974-03-12 | ||
| SE405671B (sv) * | 1977-02-15 | 1978-12-27 | Ellco Protein | Forfarande for avlegsnande av jernforeningar fran ett vattenbaserat blodhydrolysat genom filtrering |
| DE2735297C3 (de) * | 1977-08-05 | 1981-02-12 | Ellenberger, Willi, 2000 Hamburg | Verfahren zur Hydrolyse von Casein |
| DE2840592C2 (de) * | 1978-09-18 | 1983-12-29 | Ellenberger, Willi, 2000 Hamburg | Verfahren zur Hydrolyse von Milcheiweiß |
| US4546004A (en) * | 1981-02-02 | 1985-10-08 | The Texas A&M University System | Method of producing low-gossypol cottonseed protein material |
| US4436727A (en) * | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
-
1984
- 1984-12-25 JP JP59279312A patent/JPS61151157A/ja active Granted
-
1985
- 1985-12-24 US US06/813,043 patent/US5049657A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-12-24 EP EP85309475A patent/EP0187529B1/en not_active Expired
- 1985-12-24 DE DE8585309475T patent/DE3568298D1/de not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0377853A (ja) * | 1989-08-18 | 1991-04-03 | Seiko Instr Inc | タンパク質あるいはペプチドを加水分解する装置 |
| JPH0377855A (ja) * | 1989-08-18 | 1991-04-03 | Seiko Instr Inc | タンパク質あるいはペプチドを加水分解する装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5049657A (en) | 1991-09-17 |
| EP0187529A2 (en) | 1986-07-16 |
| EP0187529B1 (en) | 1989-02-22 |
| EP0187529A3 (en) | 1986-11-20 |
| JPH0316945B2 (ja) | 1991-03-06 |
| DE3568298D1 (en) | 1989-03-30 |
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