JPS61151128A - コレステロ−ル低下活性ｒｎａ画分 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なコレステロール低下活性ＲＮＡ画分及び
有効成分として二のＲＮＡ画分を含有するコレステロー
ル低下乃至抗動脈硬化剤に関する。今日、所謂典型的成
人病の１種である動脈硬化性ｆＥｒＰ、乃王高詣而庁等
め面ｈ拵・予１（ｔｉ韮（１グ汁クロ７ノプレート関連
製剤を始めとして幾つかが提案されているが、薬理効果
及び副作用等の点でこれらはかならずしも充分満足し得
るものとは云い難くより効果的な薬剤への希求が一段と
高まっている。

本発明者らは新規コレステロール低下剤につき鋭意研究
の結果、ストレプトコッカス属に属する各種微生物から
の特定抽出ＲＮＡ画分が血中コレステロール値を極めて
効果的に低下せしめ得るものであり且つその起源が所謂
腸内細菌であるストレプトコッカス属の抽出画分は経口
では実質的無毒性であることを知見し、本発明に到達し
たものである。

以下、本発明に於いて使用され得る微生物、ＲＮＡ画分
の製法、理化学的性質及び薬理作用等につき詳細に分脱
する。

微生物 １、種類 ストレプトコッカス属に属する各種微生物が使用され得
、就中、ストレプトフッカス・７エシウム、ストレプト
コッカス・フエカーリス、ストレプトコッカス・ボービ
ス、ストレプトフッカス・エビラム、ストレプトコッカ
ス・デユランス、ストレプトフッカス・サリヴアリウス
、ストレプトコッカス・ミテイス、ストレプトコッカス
・イクイヌス等を好適なものとして例示し得る。

更に、本発明に於いて特に有用な基本的菌株例を微工研
受託番号（ブタペスト条約寄託）により表示すれば下記
の通りである。

第１表 菌株名　　　　　　受託番号 ストレプトコッカス・７エシツム　　　ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−２９６（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｆａｅｃ
＋ｕｍ）ストレプトコッカス・７エカリス　　　ＦＥＲ
Ｍ　　ＢＰ−２９７（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　
ｆａｅｃａｌｉｓ）ストレフトコツカス・エビラム　　
　　　ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２９８（扛旦曳回些叩ｍｌり ストレプトコッカス・サリヴ７リウス　ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−２９９（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　５ａｌｉ
ｖａｒｉｕｓ）ストレプトコッカス・デユランス　　　
ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３００（江唄小逗匹翌西■匣） ストレプトコッカス・ミティス　　　　ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−３０１（鉄門用ぷ匹照山旦） ストレプトコッカス・イクイヌス　　　ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−３０２（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｅｑｕｉ
ｎｕｓ）２、菌学的性質 菌学的性質の点では、本発明で使用の微生物は同−分類
菌につき公知各文献の示すものと同一の諸性質を有する
。

すなわち、本発明微生物の菌学的性質及び培養条件等に
関しては下記諸文献が参照される。

１）バーシイ・マニュアル・オブ・デタミネイテイ７・
／Ｘクテリオロシイ！第８版（Ｂｅｒｇｅｙ′Ｍａｎｕ
ａｌ　ｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ、　８ｔｈ　ｅｄ、、）　４９０−５０９
　（１９７４）２）インターナショナル・ジャーナル・
オブ・システミ・ツク・バクテリオロジイｖ　（Ｉｎｔ
、　Ｊ、　５ｙｓＬ、　Ｂａｃｔ、）　１６１１４　（
１９６６）３）マイクロバイオロジイ・アンド・イミュ
／ロジイ。

（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、［ｍｍｕｎｏｌ、）　２５（３
）＋　２５７−２６９　（１９８１）４）ジャーナル・
オブ・クリニカル・パソロノイ、（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｐａｔｈｏｌ、）　３３５３　５７　（１９８０）５）
ジャーナル・オブ・ゼネラル・マイクロバイオロジイ。

（Ｊ、　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、＞　
１２８７１３−７２０　（１９８２）６）アプライド・
マイクロバイオロジイ、（＾ｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ、）ここで、前出各種菌株につきその主な菌学
的性状を要約して表示すれば次の通りである。

以下余白 ＬＩＬ （ＮＤ：検討せず） ３、培養方法 これらの微生物の培養は上記の通り常法によるものであ
るが、例えばロゴサ（Ｒｏｇｏｓａ　）液体培地（註：
工７チミオ・シー・アンド・ハウセン・ピー・ニー、（
１９６２）、アン・アンチゲニック・アナリシス・オブ
・ラクトバチルス・アシドフィルス、ジャーナル・オプ
・イン７エクシヤス・デイズイーズ＋（Ｅｆｔｈｙｍｉ
ｏｕ。

Ｃ，、ａｎｃｊ　　Ｈａｕｓｅｒ＋＋　Ｐ、Ａ、　（１
９６２）　Ａｎ　　ａｎｔｉｇｅｎｉｃａｎａｌｙｓｉ
ｓ　ｏｆ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ａｃｉｄｏ
ｐｈｉｌｕｓ、　Ｊ、　　Ｉｎｆｅｃｔ＋Ｄｉｓ、）　
　１１０：　２５８−２６７）にて静置培養し、得られ
た培養液を遠心分離してその菌体が採集される。

（註） ユニｉ状本壕境Ｏ徘東 蒸留水１１中に トリプチケース　　　　　　　　１０ｇ酵母エキス　　
　　　　　　　　　５ｇトリプトース　　　　　　　　
　　　　　３ｇＫ、ＨＰｏ、　　　　　　　　　　　　
　　　３ｇＫＨ２ＰＯ４３ｇ クエン酸三アンモニウム　　　　　２ｇツイーン８０　
　　　　　　　　１ｇ グルコース　　　　　　　　　　２０ｇシスティン塩酸
塩　　　　　　０．２ｇ木塩類溶液　　　　　　　　　
　　　５＋Ｊ（ｏＬＪ’７−　　１　９　１　ρ　　１
　ζ／、）ｌｌｆｌｆｔｎａｄ苗）＊塩類溶液蒸留水１
０（）社に Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ＝Ｏ］　１１．５ ｇＦｅ５０’　７８２０　　　　　　０．６８ｇＭｎ５
Ｏ，・２８２０　　　　　２．４ｇＲＮＡ画分の製法 本発明ＲＮＡ画分の典型的製法の１例に；きその概要を
各工程ごとに示せば次の通りである。

１、菌体採集工程 前記各微生物等の菌株を前述のロゴサ液体培地に接種し
、３７℃にて５〜１５時間静置培養して所定生菌数濃度
の培養液をつくり、得られた培養液を１２ｔ０００ｒｐ
ｍの連続遠心分離に付し菌体を集め、生理食塩水で２〜
３回洗浄して採集菌体とする。

２、熱水抽出処理工程 前記、採集菌体を精製水に懸濁して得られる菌液を１０
０℃４０分間、１１５℃　１０分間、１１５℃　３０分
間（２回）加熱（オートクレーブ）し、菌体の破壊と熱
水抽出とを併せ行なう。

各オートクレーブ処理物は９，０００ｒｐｍ　　１０分
間遠心分離し、上清を濃縮し抽出物とする。

３、核酸画分分画工程 （ａ）　　前記抽出物を精製水に溶解し、約１０倍量の
エタノールを加え、遠心分離（＋　２　、　（ｌ旧）　
ｒｌｕｎ：　５分間又は９　、５１）　（、＋　ｒｌｕ
ｓ：１０分間）し、エタノール可溶物とエタノール不溶
物とに分離する。

（ｂ）　　前記エタノール不溶物をＤｏｗｅｘ”　５０
Ｗ（Ｈ＋型）（米国ダウ・ケミカル社製）処理しく溶媒
：精製水）未吸着物は塩化セチルピリジニウム溶液（ｃ
ｐｃ溶液）を加え３７℃　３時間インキュベートする。

その後、遠心分離（１２ｗ０００ｒｐｍ　：　５分間又
は９，５００ｒｐａ＋　：　１０分間）し、ＣＰＣ沈澱
物を２ＭＮａＣｌに溶解し、約５〜６倍量のエタノール
を加え遠心分離（１２，０００ｒｐｍ：５分間）しエタ
／−ル沈澱物を再（／Ｄｏｕ＋ｅｘ　　　　　’５０Ｗ
（米国ダウ・ケミカル社製）処理し、ＣＰＣを除去した
分画を得る。

４、精製処理工程 前記画分をＤＮＡ分解酵素処理後、７エ／−ル処理によ
り酵素を除去し、透析後、Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　
−７５カラム（７アルマシ７社製）で精製し目的活性Ｒ
ＮＡ画分が得られる。

尚、増殖菌体等からのＲＮＡ画分の製造は、より一般的
にはその理化学的性質（後記）を参照して沈澱−再溶解
抽出、溶剤抽出、透析、カラムクロマトグラフィ、電気
泳動、ゲルろ過、或いはこれらの手段の組合わせなど当
該分野で汎用の多くの分別精製方法により達成され得、
従って本発明は特定の採取精製方法に何等限定されるも
のではない。

すなわち、当該薬理活性はＲＮＡ画分に認められるので
あるがら、本発明はストレプトコッカス属微生物よりＲ
ＮＡ画分を採取することより成るコレステロール低下剤
の製法にも係わるものである。

ＲＮＡ画分の理　学的性 本発明ＲＮＡ画分の理化学的性質乃至生理学的性質を要
約してＲせば次の通りである。

１、存在状態、溶解特性及び温度特性 ＲＮＡ画分を凍結乾燥して得られる粉末標品は、微褐色
〜黄褐色の粉末である。

本品は、水及びＩＮ水酸化す）　＋７ウム溶液に可溶で
あり、アルフール、エーテル、ベンゼン等の有機溶媒に
は不溶である。

また、熱を加えていくと、２００℃前後において褐変し
、２２０℃に達すると濃褐色に変化する。

２、分子量 ０．２Ｍピリジン−酢酸緩衝液（ｐＨ５，０）を溶媒と
したＳ　ｅｐｈａｃｌｅｘ　　Ｇ　−７５カラム（２，
５Ｘ４７ｃｍ　　７ｙルマシア社製）を用いたゲルろ過
法により、単一ピークを与える。その結果を第１図に示
す。図中、縦軸はフェノール硫酸法での４８０ｎｍにお
ける吸光度、横軸は７ラクシタンナンバーである。

ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動くポリアクリル
アミド濃度１０〜２０％において０．４Ｍ）リス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン、０．２Ｍ酢酸ナトリウム
、０．０２Ｍエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、０
．２％ドデシル硫酸ナトリウム（ｐＨ７，５）を１０倍
希釈した泳動用緩衝液で約４００μ８の試料を３０ｍＡ
で６時間通電し、メチレンブルーにて染色）において、
１０％ポリアクリルアミドゲルではＲＮＡ標品（Ｅ、ｃ
ｏｌｉ）と比較すると標品物より長い泳動距離を示し、
１２％ポリアクリルアミドゲルではブロムフェノールブ
ルーと同等か、やや長い泳動距離、２０％ポリアクリル
アミドゲルではブロムフェノールブルーとキシレンシア
ツールの間にバンドが認められた。

以上の結果より分子量はｉｉ、ｏｏｏ±９，０００と決
定された。

３、赤外線吸収スペクトル 日本分光工業社製ＪＡＳＣＯＡ−３０２型赤外分光光度
計によるＫＢｒタブレット赤外線吸収スペクトルは第２
図に示す通りであり、図中、横軸は波数（ａｍ−’）を
縦軸は透過率（％）を示す。

４、核酸の塩基組成 、　Ｒ 核酸の酸分解物を高速液体クロマトグラフィー（Ｐａｔ
＋５ｉｌ−１０ｓｃｘ　　カラム（〃スクロ工業社製）
、溶媒：０．０５ＭＩＪン酸−カリウム緩衝液（＋１１
−１３　、０５　＞、流出速度：　１＋ｎ１／＋ｎｉｎ
＋検出：　ＵＶ　　２６０ｎｍ）にて分析した６その結
果、６ＮＩ（ＣＩ。

１００°Ｃ３時間分解で、Ｕ（ウラシル）二Ｇ（グアニ
ン）二〇（シトシン）：Ａ（アデニン）比がｉ　　：　
　１　　：２　　：　　１であることが判明した。

５、生理学的性質 哺乳動物に対し経口投与によりその血中コレステロール
値低下作用を有する６ 反影酊Ｉと１１作里 １、薬理効果 後記実施例に示す通り本発明ＲＮＡ画分より成る抗動脈
硬化剤は、血中コレステロール値を極めて効果的に低下
せしめるものであり、したがって、この指標と密接な関
連を有する動脈硬化症を始めとし、高脂血症、脳動脈硬
化性疾患、高リボ蛋白血症、黄色腫症、胆石症、肝・胆
道疾患、腎疾患（ネフローゼ症候群）、高血圧症、糖尿
病、心臓病、内分泌疾患、甲状腺機能低下症、肥満症等
の疾患に対しその治療乃至予防薬として有用なものと云
い得る。

本発明剤は又、経口投与、腹腔内投与、静注等の手段で
適用され得、その用量は通常約１μｇ〜約０　、５　ｇ
／ｋｇ体重（１回）、より好ましくは経口投与で約０．
１ｍｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重（１回）程度であり、そ
の剤型としては生理食塩水等への溶解液剤、注射液剤、
凍結乾燥等による粉末剤、或いは廃剤、腸溶剤、舌下錠
、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等々、通常の剤型な適当な
キャリヤ、増量剤、希釈剤等と共に適宜選択使用し得る
。

２、急性毒性 後記実施例に示す通り、本発明ＲＮＡ画分のＬＤ、。値
は１　、３７０＋ｓｇ／ｋｇ体重・マウス＜＊腔内投与
）以上であり、経口投与の場合は実質的に無毒性である
。

実施例Ｉ （ＲＮＡ画分の製造及び精製） ストレプトフッカス・エビラム（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　　粒違児）ＡＤ２００３（ＦＥＲＭ　　ＢＰ
−２９８）菌株をロゴサ液体培地６４１．３７℃にて１
２時間、静置培養して得られる湿菌体２０７ｇに２１の
精製水を加えよく攪拌し、オートクレーブにて１００°
Ｃ（開放）４０分間、１１５°ＣＩＯ分間、１１５℃、
３０分間（２回）熱水抽出を行なった。各オートクレー
ブ処理物は遠心分離（９，０００ｒｐｎｌＯ分間）によ
り上清と沈澱とに分離し、上清を濃縮し抽出物Ｉ（収率
：３６．７％）を得た。

得られた抽出物Ｉを３０−の精製水に溶解し、攪拌しな
がら３００ｍｊ！のエタノールを加え遠心分離（９，５
００ｒｐｍ　　１０分間）により、上清（エタノール可
溶物）と沈澱（エタノール不溶物）に分離し、沈澱物は
同様の操作をもう一度くり返した。

エタノール不溶物を７００輸Ｉの精製水に溶解し、イオ
ン交換相脂Ｄｏｗｅｘ　５０Ｗ（Ｈ＋型）（米国ダウ・
ケミカル社製）１，０００ｍ１に加え、よく攪拌後、傾
斜法にて溶媒を除去し、続いて１．０００輸Ｉの精製水
にて６回未吸着物の溶出を行なった。

未吸着物の溶出液は濃縮後、１，２００＋＋１の精製水
に溶解し、１０％塩化セチルピリジウム（ｃｐｃ）溶液
（牛丼化学薬品ＫＫ製）１８０輸Ｉを加え３７℃　３時
間インキュベートした。その後遠心分離（９，５００ｒ
ｐｍ　　’ｉｏ分間）にて得られたＣＰＣ沈澱物を２Ｍ
ＮａＣ１９０ｏｆに溶解し、５４０ｍ／のエタノールを
攪拌しながら加え、遠心分離（１２，０００ｒｐｍ　　
５分間）にて沈澱物を得た。

この操作を４回くり返し、得られた沈澱物を１，０００
ｍ１のＤ　ｏｕ＋ｅｘ５０Ｗ（Ｈ＋型）（米国ダウ・ケ
ミカル社製）を用いて前述と同様の操作を行ない、ＣＰ
Ｃを除去した画分■（収率　８．７％）を得た。

得られた両分［３００ｍｇにベントナイト処理を行なっ
たＤＮＡ分解酵素（シグマ社製　Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎ
ｕｃｌｅａｓｅ　　Ｉ　）の溶液（０，１Ｍトリス酢酸
緩衝液（ｐＨ８、Ｏ）＋２０ｍＭ硫酸マグネシウム＋２
５ｍＭ塩化カルシウム１ｍｌにＤＮＡ分解酵素１ｍｇ含
有）を３０ｍ１加え３７°Ｃにて２４時間インキュベー
トした。酵素処理後３０ｍ１の水飽和７エ／−ルを加え
、よく攪拌し、遠心分子１（１２，０００ｒ四５分間）
した後、水相を注意深く分離した。残ったフェノール相
には、さらに３０社の７二／−ル飽和水を加え同様の操
作を行なった。この操作は３回くり返し得られた水相は
透析後、濃縮し酵素分解物とした。酵素分解物はＳ　ｅ
ｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−７５カラム（ファルマシア社製
）（溶媒：０．２Ｍピリジン−酢酸緩衝液　ｐＨ５，０
）にてゲルろ過を行ない精製し、目的のＲＮＡ画分を得
た。（収率２．５％） ここで以上の各工程ごとの収率等を要約して示せば下記
第３表の通りである。

尚、１３表中、ＲＮＡはオルシノール法（標品Ｙｅａｓ
ｔ　ＲＮＡ）ｙＤＮＡはジフェニルアミン法（標品Ｃａ
１ｆ　　ｔｈｙａ＋ｕｓ　　Ｄ　Ｎ　Ａ　Ｌ糖は抽出物
Ｉは７エ７−ル硫酸法（標品Ｇ　１ｕｃｏｓｅ）＊　そ
の他は７ンスロン法（標品Ｇ　１ｕｃｏｓｅ）＊タンパ
クはロウソー法（Ｌｏｗｒｙ法）（標品Ｂｏｖｉｎｅ　
ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ）で測定した。抽出物ｌの
核酸量はオルシノール値をもって表わした６又、収率は
凍結乾燥菌体を１００％としたときの各凍結乾燥物の重
量％である。

他方、前記第１表に掲示の他の菌株を使用した場合も収
率に多少はあるが、本例と全く同じ様にＲＮＡ画分が精
製画分として得られることが確認された。

尚シここで得たＲＮＡ画分の理化学的性質等は前記の通
りである。

実施例■ （ＲＮＡ画分の薬理効果） １、コレステロール低下活性（１） ＲＮＡ画分凍結乾燥精製標品各２５Ｈ／ｋｇ体重相当量
を精製水１ｍｌに溶解して試料を調製し、これを通常ラ
ット（雄１８退会、平均体重２４０ｇｖ各ｇＦ５匹）、
通常及び無菌マウス（雄１０退会、平均体重２０．Ｉｇ
：各群５匹）に経口的に連日投与後、１２及び８週間飼
育し、次いでこれらの工大動脈より動脈血を採集、遠心
分離して血清標品を得、コレスキット（商品名；関東化
学社製、ツルコラスキー法（Ｚｕｒｋｏｗｓｋｉ法））
により血清標品コレステロール値を測定した。結果を第
４表に要約して示す。

尚、表中、対照群は試料無投与群であり、数値は無投与
群を対照としたときの低下率（％）である。

又、標準ダイエツトすなわち標準飼料の組成（重量％）
は下記第５表の通りでありこれを自由摂取とした。（以
下、同様）動物種（投与期間）　　　　　　　　低下率
（％）通常ラット（１２週間）　　　　　　　２０．３
±０．６通常マウス（８週間）　　　　　　　３０．７
±１．１無菌マウス（８週Ｍ＞　　　　　　　２０．０
±０．８第５表 ミルクカゼイン　　　　　　　２０ 大豆油　　　　　　　　　　　１０ 小麦でんぷん　　　　　　　　６１ （ａ ミネラル　　　　　　　　　　　４ （ｂ ビタミン混合物　　　　　　　　２ ろ紙粉末（セルロース）　　　　　３ フイリツプスハ一ト氏塩　（岩井化学薬品製）リン酸二
カリウム　　　　　　３２２（ｇ／　１０００ｇ）炭酸
カルシウム　　　　　　３００ 食塩　　　　　　　　　　　１６７ 硫酸マグネシウム　　　　　１０２ リン酸二カルシウム　　　　　７５ クエン酸鉄　　　　　　　　　　２７．５硫酸銅　　　
　　　　　　　　　０．３塩化亜鉛　　　　　　　　　
　　０．２５硫酸マン〃ン　　　　　　　　　　５．１
ヨウ化カリウム　　　　　　　　０．８塩化コバルト　
　　　　　　　　０．０５＊：フィリップス・ビー・エ
イチ　アンド　ハート・イー−・ビー、ザ・エフェクト
・オブ・オーガニック・グイエタリー・コスティテエエ
ンツ、７ボン・コロニｙ９・フルオツン・トキシコシス
・イン・ザ・ラット、ジャーナル・オブ・バイオロジー
・ケミストリイ（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ、　　Ｐ、Ｈ，ａｎ
ｄ　　Ｈａｒｔ、　　Ｅ、　Ｂ、＋　Ｔｈｅｅｆｆｅｃ
ｔ　　ｏｆ　　ｏｒｇａｎｉｃ　　ｄｉｅｔａｒｙ　　
ｃｏｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　　ｕｐｏｎｃｈｒｏｎｉｃ　
　ｆｌｕｏｒｉｎｅ　　　ｔｏｘｉｃｏｓｉｓ　　　ｉ
＋＋　　　ｔｈｅ　　ｒａＬ　　　、Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ）、、　　１０９．６５７．　（
１９３５）（ｂ パンビタン末　（武田薬品工業ＫＫ製）２０　（ｇ／　
１００ｇ） 塩化コリン　　　　　　　　　　　１０パントテン酸カ
ルシウム　　　　　　０．１５ピリドキシン塩酸塩　　
　　　　　　０．００６イノシトール　　　　　　　　
　　　１．０小麦でんぷん　　　　　　　　　　６８．
８２、コレステロール低下活性（Ｉｆ） 前記試料１．０ｍ１を通常ラット（雄１８退会、平均体
重２３８ｇ；各群５匹）、通常及び無菌マウス（雄１０
退会、平均体重２２ｇ；各群５匹）に１２週間、経口的
に連日投与し、前記と同様にして血清中コレステロール
値を測定した。結果を第６表に示す。

尚、表中、“コレステロール負荷”又は“果糖負荷”は
、前記試料に更に１％コレステロールを添加したもの或
いは小麦でんぷんを果糖にて全量置換した飼料を使用し
た場合を示すものであり、数値は無投与群を対照とした
ときの低下率（％）である。

菓−１−表 無菌、つ疋”　　　　　　　　３３．１オｉ、。

（本 通常マウス　　　　　　　　　３７．２±０．５−　　
（木 通常７７ト　　　　　　　　　４８．１±１．０通常う
・）（＊＊　　　　　　　　３９，７±１．１本）コレ
ステロール負荷ダイエツト 木本）果糖負荷ダイエツト ３、コレステロール低下活性（Ｉ［［）ＲＮＡ画分精製
楳品標品、３ｍｇ／ｋｇ体重相当量を精製水０．５ｍｌ
に溶解した試料を、コレステａ−ル負荷ダイエツトによ
り作製した高脂血ラット（雄８退会、平均体重２２２ｇ
、各群５匹）に連日経口的に２週間投与し、前記と同様
にしてその血清中コレステロール値を測定した。

結果を第７表に示す０表中、対照群は試料無投与群であ
り、数値は無投与群を対照としたときの低下率（％）で
ある。

第７表 投与群　　　　　　４１．２ 対照群　　　　　　　Ｏ ４、用量−反応関係 ＲＮＡ画分精製標品各０．１＋ｇ−２０ｍｇを精製水１
ｍＮに溶解して、試料を調製し、これを通常ラット（雄
６退会、平均体重２１０８；各群５匹）に４週間、経口
的に連日投与し、前記と同様にして血清中コレステロー
ル値を測定した。（対照：無投与群） 結果を第８表に示す。

・　対照　　　　　　　　Ｏ Ｏ，１７，４±０．６ １　　　　　　　１２．５±１．０ １０４３．３±０．９ ２０　　　　　　　４８．２±０．８ ５、急性毒性 ＩＣＲ系マウス（雄６退会、平均体重３１．６±０．６
ｇ、各群１０匹）を使用し、ＲＮＡ画分精製楳品標品ｇ
、１０泊ｇ及び１００ｍｇの３段階の投与量でその生理
食塩水０．５　ｍ（ｌ溶解液を腹腔内投与し、１４日問
マウスの生死を観察した。

ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、経口投与の場合は実質的に
無毒性であった。尚、対照は生理食塩水である。

６、製剤例 ■　ＲＮＡ画分精製標品２５ｍｇを精製でんぷん末２７
５ｍｇと均一に混合、打錠して経口投与用錠剤とした。

この錠剤は体重５０ｋｇの成人における死面体用量約３
Ｘ１０”個／ｋｇ体重に相当する。

■　ＲＮＡ画分は炭酸カルシウム、ラクトース等の賦形
剤、でんぷん、アルギン酸塩等の顆粒形成剤、ステアリ
ン酸、タルク等の滑沢剤等々と混合、打錠して経口投与
用錠剤態を取り得るものであるが、その１日当りの投与
量は通常、０．１ｍｇ〜５０＋ａｇ／ｋｇ・体重程度で
ある。

■　水晶９００ｍｇをシロップで呈味した精製水３０ｍ
ｆに分散、溶解してシミツブ液剤を調製した。

【図面の簡単な説明】

第１乃至２図は本発明実験例説明図である。 特許出願人　　　株式会社アドバンス開発研究所フラク
ション・ナンｌで− 手続補正書（方式）　　　　６・ 昭和６０年５月１５日 特許庁長官　志　賀　　学　　殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第２７０９８２号 ２、発明の名称 コレステロール低下活性ＲＮＡｗｉ分 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 （発送日　昭和６０年４月３０日） ５、補正の対象 明細書全文 補正の内容 願書に最初に添付した明細書の発明の詳細な説明の欄に
於ける外国語の学術文献等を日本名を含むより正確に記
載した。 （但し、内容に変更なし） 尚、補正明細書全文は別紙のとおりである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）（ａ）ゲルろ過法による分子量：１１，０００±
   ９，０００（ｂ）核酸の塩基組成比： ウラシル：グアニン：シトシン：アデニン＝１：１：２
   ：１（ｃ）赤外線吸収スペクトル：添付第２図に示す通
   りである（ｄ）哺乳動物に対しその血中コレステロール
   低下作用を有することを特徴とするコレステロール低下
   活性ＲＮＡ画分。
2. （２）ストレプトコッカス属に属する微生物より得られ
   ることを更に特徴とする特許請求の範囲第（１）項に記
   載の前記ＲＮＡ画分。
3. （３）有効成分として前記ＲＮＡ画分を含有することを
   特徴とするコレステロール低下活性剤乃至抗動脈硬化剤
   。