JPS6069200A - 酵素洗剤添加物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）従来技術及び発明が解決しようとする問題点 酵素添加物の分野は、過去数十年間において急速に進歩
して来ている。例えば文献ｒＨｏｗＥｎｚｙｍ＠ｓ　Ｇ
ｏｔ　１ｎｔｏ　Ｄｅｔ＠ｒｇ＠ｎｔｓ　Ｊ、　１２巻
１Ｄ＠ｖｅｌｏｐｍ＠ｎｔｓ　ｉｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｌ
ｍｌ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（工業微生物協会出版
、アメリカンインスティテユートオツバイオロジカルサ
イエンス、ワシントン、Ｄ、０．１９７１年、Ｃ１ａｕ
ｓ　Ｄａｍｂｍａｎｎ＋Ｐｏｕｌ　Ｈｏ１ｍ＋　Ｖｌｌ
ｌｙ　Ｊｅｎｔｅｎ及びＭｏｇ＠ｎｍＨ１１ｍｅｒ　Ｎ
１ｅｌｓｅｎ　による）を参照され度い。

最も普通の酵素洗浄剤添加物はタンパク分解添加物であ
るが、又脂肪分解洗浄添加物が、例えば米国特許４，０
１１，１１６、第４カラム、６５行ないし第５欄、６８
行に並びに英国特許１，２９３，６１３．２頁、６行な
いし２９行に記載されている。

又、洗浄剤添加物としてハンスアンドレー（ＨａｎＩＩ
Ａｎｄｒｅｅ）等によシ記載された広範囲に吟味した文
献が、ジャーナルオブアグライドバイオケミストリイ、
２，２１８〜２２９（１９８０）、標題「Ｌｉｐａｓｅ
ｓ　ａｓ　Ｄ＠ｔｅｒｇｓｎｔ　Ｃｏｍｐｏｎ＠ｎｔａ
Ｊにおいて見い出される。

もしも洗浄方法が高温度で且つ高アルカリ性で行われる
場合、汚物を含有する脂肪はけん化によシ溶解するであ
ろう。しかし、エネルギー危機の為、低温洗浄方法（牛
６０℃付近及び以下）が一般に好まれ、更にこれら等の
低い温度では公知のリパーゼは、汚物を含有する脂肪の
一部のみしか溶解し得々い。

脂肪分解酵素洗浄剤添加物の有効性は、英国特許１，３
６１，３８６（特に４頁及び７頁）並びに米国特許３，
７２３，２５０（特に１５〜１９欄）に記載され九手順
を採用し、ＥＭＰＡ　スイス連邦原料試験及び試験及び
実験所（Ｅｉｄｇ＠ｎｉｓ＊ｌｓｃｈｓＭａｔｓｒｉａ
ｌｐｒ″ｕｆｕｎｇｓ　ｕｎｄ　Ｖ＠ｒｌｕｅｔｌｌｌ
ｌｎｌｔｌＬ１ｔ　）　Ｎセントがレン、スイス国見本
番号１０１（オリーブ油／綿）及び１０２（オリーブ油
／羊毛）を用いることによシ好都合に測定出来る。この
方法においては脂肪分解洗浄剤添加物として公知の酵素
は、それ等が不満足な低脂肪分解洗浄効率を示すという
点においてむしろ不満足であるように思われる。という
のはそれ等は洗浄液中経済的に合理的外リパーゼ活性に
おいてディファレンシャルレミッタンスヴアリ、　−（
ｄｉｆｆｅｒ＠ｎｔｉｍｌｒ＠ｍ１ｔｔａｎａｅ　ｖａ
ｌｕｅ）ΔＲが低い値を反映しているからである。

かくして、洗浄液中経済的に合理的なリパーゼ活性にお
いて相当に高いディ７アレンシヤルレミ、タンスヴァリ
ューΔＲに対応する、相当に良好外脂肪分解洗浄効率を
示す脂肪分解洗浄添加剤の必要性が存在する。

（２）問題点を解決する為の手段及び作用今や、本発明
の第一の面によれば、脂肪分解洗浄剤添加物が見い出さ
れこれは洗浄液中経済的に合理的なり・ヤーゼ活性にお
いて相当に高いディファレンシャルレタッタンスヴァリ
ューΔＲＫ対応する、相当に良好々脂肪分解洗浄効率を
示し、この脂肪分解洗浄剤添加物はすｚ４−ゼが７サリ
アムオキシス？ラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏ
ｒｕｍ）のリパ−ゼ生産菌株により生産τ゛さるという
事実に特徴づけられている。

種フサリアムオキシスポラム（Ｆ’ｕｓａｒｌｕｍｏｘ
ｙｓｐｏｒｕｍ）の定義は過去数十年において幾分変化
している。例えば本発明の目的に対し、種フサリアムオ
キシス？ラム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ　ｏｘｙａｐｏｒｕｍ
）の定義はｒＴｈｓ　Ｇｅｎｕｓ　Ｆ’ｕｓａｒｌｕｍ
Ｊ、（Ｃ，Ｂｏｔｈ。

ＣＭＩ　、　１９７１年）に記載されている定義である
。

フサリアムオキシスポラム（ＦｕｓａｒｉｕｍＯＸ７１
１ｐＯｒｕｍ）のある種の菌株に関し、リパ−ゼ活性が
記載されている。例えばＡｇｒｉｃ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ＠
ｍ。

４３（１０）（１９７９）、２１２６．第１表を参照さ
れ度い。ここにおいてフサリアムリニイ（Ｆｕｓａｒｉ
ｕｍ１ｉｎｔ）す／ＩＰ−ゼが示されている（フサリア
ムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙ＋ｓｐｏ
ｒｕｍ）の上記定義によれば、フサリアムリニ４　（Ｆ
’ｕｓａｒｉｕｍ　１ｉｎｉ）はフサリアムオキシスデ
ラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）に今や帰
属している）、更にＩｎｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｓ　１
１　巻（１９７３年）、３７〜３９頁、標題ｒｌ、１ｐ
ｌｄｓ　ａｎｄ　ＬｉｐａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ
　５ｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｖａｓｉ
ｎｆｅｃｔｕｍＪ　（フサリアムオキシスデラム（Ｆｕ
ａａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）の上記定義によれ
ば、フサリアムヴアシンヘクタム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ　
ｖａｓｉｎｆｓａｔｕｍ）は今やフサリアムオキシスポ
ラム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）に帰属
する）を参照され度い。

フサリアムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｍ）に帰属する菌株の中には、ＩＪ　ｉ４−ゼ
生産能が低いものがある。本発明の目的に対し、フサリ
アムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ　ｏｘｙｓｐｏ
ｒｕｍ）のりＡ’−ゼ生産菌株は、次の条件のもとで１
０ＬＵ／ｆｎｌ（ＬＵは本明細書中後に定義されるす・
母−ゼ単位（Ｌｌｐａｍｓ　Ｕｎｉｔｓ）である）以上
を生産する菌株として定義される： 振とりフラスコ用に意図された基質は次の生成（１リッ
トル当りのダラム量）で調製される二大豆ミル　・・・
・・・・・・・・・４５グルコース　・・・・・・・・
・・・・　７０に′Ｈ２ＰＯ４・・・・・・・・・・・
・　２Ｎａ２ＨＰＯ４””””””　３ 大豆油　・・・・・・・・・・・・　５゜滅菌を１２１
℃で４０分間行った。リパーゼ生産に対し試験されるべ
きフサリアムオキシス？ラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘ
ｙａｐｏｒｕｍ）の菌株で予め接種した寒天斜面からの
胞子を用いて、基質１００ｍ／を有ｆ；Ｅｒ５００ｒｒ
ｔｌのエーレンマイヤーフラスコニ接種した。フラスコ
ｆ２３　Ｏｒｐｍで且っ３０’Ｃで５日間振とうし、し
かる後リパ−ゼ活性を測定した。

例２９を参照され度い。

今や以下の篤くべき事実が見い出された。即ち本発明に
係る洗浄剤添加物は本明細書中後に説明する記載から明
らかなように劇的に改良された脂肪分解洗浄効果を示す
。

フサリアムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒ％ｕｍｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｍ）菌株ＤＳＭ２６７２　、　ＡＴＣＣ７８０
８。

ＣＢ５６２０．７２．ＣＢ５６４５．７８．ＣＢ５ＣＢ
５７９４．７０　Ｋ関し、以下の事実が見い出された。

即ち最適−活性の平均値は９〜１１付近であシ、更に最
適活性の平均温度は３５〜５０℃付近である（分析時間
：２０分）。０８Ｍ２６７２由来のり／４’−ゼから生
産される抗体を用いた交差免疫電気泳動法から以下の内
容が明らかにされる。即ち上述の五種の菌株から得られ
るリノ譬−ゼは同一であるか又は部分的に同一である。

上述の知見から以下の内容が結論づけられる。即ち本発
明に係る酵素洗浄剤添加物の活性成分は一群の緊密に関
連したす・譬−ゼである。

リパーゼ活性は、す）々−ゼ活性を測定する為のノ＆　
（ＮＯＶＯ）法に従って測定される。この方法は、酵素
によりトリブチリンの加水分解を基礎においている。遊
離した酪酸を水酸化ナトリウムを用いた滴定法により滴
定する。１ノ？リパ一ゼ単位（ＬＵ）は、一定直のもと
且つ以下の標準条件のもとで、−分当り水酸化ナトリウ
ム１μｍｏｌに相当する適定可能な酪酸を遊離する酵素
の量である。

標準条件 温　度　・・・・・・・・・　３０．０℃−・・・・・
・・・・７．０ 反応時間　・・・・・・・・・２０分 基　質　・・・・・・・・・　トリブチリン。

この方法の詳細は、ノ母ンフレットＡＦ’９５／４　（
日付１９８２−０８−１８）Ｋ”記載されており、これ
は請求によりノーインダストリイ社、（バグスヴアヤル
ド、デンマーク国）から入手可能である。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、フサリアムオキシス４ラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）のリパ−ゼ生産菌株は０８Ｍ２６
７２である。菌株７サリアム種（Ｆｕｍａｒｌｕｍｓｐ
、）　０８Ｍ２６７２は、Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓ
ｐｏｒｕｍＳｅｈｌｓｅｈｔ＋ｏｘ　Ｆ’ｒｉｓｓ＋＠
ｍｏｎｄ、　５ｎｙｄ＠ｒ　＆Ｈａ　ｎ　ｓ　ｓ　ｎと
して分類されて来ている。菌株ＤＳＭ２６７２フサリア
ムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ６ｘｙｓｐｏｒｕ
ｍ）の形態学上の性質は、フサリアム（Ｆ’ｕｓａｒｉ
ｕｍ）属、Ｃ，Ｂｏｏｔｈ、　ＣＭＩ　、　１９７１中
フサリアムオキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙ
ｓｐｏｒｕｍ）の種の説明の開示に正しく相当する。リ
パーゼの一活性曲線は作成されており、このすｐ４−ゼ
活性はＡＦ９５／４−ＱＢ　に従って測定され、基質の
正常なμ値７以外に基質のμ値を４．５、及び６、並び
に８．９、及び１０に調節することにより修正される。

トリブチリンはリパーゼなしで高いμ値において分解さ
れるので、−１曲線はその様な自動分解に対し修正され
る。この方法によりｐＨ１０付近の一最適活性が見い出
された。酵素の安定性は、１８時間後５ｏｔｓの残留活
性が５℃で４．５〜１１の一間隔において更に２５℃で
５〜１０の一間隔において見い出すことが出来る限りに
おいて、広範囲の一間隔に亘って優れている。又、リパ
−ゼ活性の最適温度は４０℃付近である。酵素は４０℃
までは３０分間安定であり、これは６０℃付近あるいは
それ以下において先に述べた低温度洗浄方法に関し特に
優れている。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、ノンダスチング粒質物として得られる。これ等の
粒質物は幾つかの異なった方法で得ることが出来る。英
国特許１，３６２，３６５を参照することが出来、これ
には押出機及びスフェロナイデー（ｓｐｈｅｒｏｎｉｚ
ｅｒ）（ＭＡＲＵＭＥＲＩＺＥＲＯとして市販）から成
る装置を用いることにより洗浄剤添加物として使用され
る酵素含有粒質物の製造を開示しており更に米国特許４
，１０６，９９１を参照することが出来これは回転造粒
機を用いて洗浄剤添加剤として使用される粒質物を含有
する酵素の製造を開示している。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、添加物は酵素安定剤を有する液体として提供され
る。安定剤はプロピレングリコール又は酵素溶液に対し
安定剤として公知の他の試剤であって良い。液状洗剤は
その適用の容易さの故に一般的になって来ている。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、リパーゼ活性は添加物１ｇｆｉり約２００００〜
約１０００００　ＬＵである。この方法において洗浄剤
添加物を洗浄剤１００ｇ当り０．２〜２ｇ量で洗浄剤に
添加した場合並びに洗浄剤を洗浄溶液１１当り１〜５Ｉ
Ｉの洗浄剤の量で該洗浄溶液に添加した場合通常のジノ
４−ゼ活性が洗浄溶液において得られる。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好オしい態様にお
いて、該添加物はリパーゼの外にタン／ＩＰり分解酵素
を含有する。驚くべきことに以下の事実が見い出された
。即ちタン、４り分解洗浄剤添加物は、添加物中、洗浄
剤中又は洗浄溶液中の何れの（タンノ量り）リノ母−ゼ
をも分解しない。従って、タン／４’り分解及び脂肪分
解洗浄剤添加物は共存することが出来、更に以下の事実
が見い出された。

即ちこの洗浄剤添加物は非常に高いΔＲ値をもたらし、
非常に高い洗浄効率を有する。パンラスリケニフォルミ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）
により微生物学的に生産される、ノがインダストリイ社
から市販されているタンパク分解活性ＡＬＣＡＬＡＳ−
は、優れた結果を伴って使用することが出来る。混合酵
素添加物は、予め製造したりＡ？−ゼ粒質物と予め製造
したグロテイナーゼと混合するか、又はゾロティナーゼ
コンセントレートヲ、リパーゼコンセントレートと混合
し次イテコの混合物を通常の造粒助剤と共に造粒装置に
導くこと釦より製造することが出来る。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、タンノ９り分解活性は添加物１ｇ当り約０．５〜
約３０アンンン単位である。洗浄剤添加物を洗浄剤１０
０ｇ当り０．２〜２ｇの量で該洗浄剤に添加した場合更
に洗浄剤を洗浄溶液１！当り洗浄剤１〜５ｇの量で洗浄
液に添加した場合、好都合なタンパク分解活性が洗浄溶
液中で生じる。

本発明の第二の面は、酵素洗浄剤添加物を有する洗浄剤
を含んで成り、その活性成分は微生物により生産された
りノ平−ゼであり、ここにおいて酵素洗浄剤添加物は本
発明に係る酵素洗浄剤添加物である。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、洗浄剤は本発明に係る酵素洗浄剤添加物を０．２
〜２．０チψの量で含有する。この様にして、酵素作用
と他の洗浄剤成分の活性との間の妥当なバランスが得ら
れる。

本発明の第三の面は、使用する洗浄剤が本発明に係る洗
浄剤であり且つ−が７〜１１であり且つ温度が６０℃以
下である様な洗浄方法を含んで成る。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の特に好ましい態様にお
いて、洗浄溶液は本発明に係る洗浄剤を、洗浄溶液１１
当り１〜５ｇの量で含有する。この様にして、好都合な
酵素活性が、例えば洗浄溶液１１１当り典型的には１０
００〜５０００　ＬＵで、洗浄溶液中に発生する。これ
等の状況のもとで、非常に高いΔＲ値が通常の洗浄時間
、例えば２０分付近に対し得られる。

（３）実施例 本発明を以下の例により非制限的に説明する。

例１ この例は振とりフラスコ中で本発明に係る酵素洗浄剤添
加物中の活性成分の製造について説明するＯ 基質は次の成分を１リットル当りのグラム量から成る。

大豆ミル　５０ グルコース　５０ ＫＨ２ＰＯ４２ Ｎａ２ＨＰＯ４３ 大豆油　１ 滅菌を１２１℃で４０分間行う。１００ｍ１の基質を有
スる５００ｍのエルレンマイヤーフラスコに、フサリア
ムオキシスポラムＤＳＭ２６７２で予め接種した寒天斜
面からの胞子１０’個で接種した。

フラスコを２３　Ｏｒｐｍで且つ２５°〜３０Ｏで２〜
５日間振とうした。収率は３０〜ｓ　ｏ　ＬｕＡｎｌで
あった。

例２ この例及び例３〜１５は、２リツトルの実験室用発酵器
において、本発明に係る酵素洗浄剤添加物中の活性成分
の製造を示す。

次の培地２６０１ｎｌｉ有する５００１ｄのエルレンマ
イヤーフラスコｅｖｉｌ製した。

グルコース　２４１／１１ コーンステイーシリカ−２４９７１ 大豆油　３．８　ｑ／１ 炭酸カルシウム　３．８　１７１ 炭酸カルシウム添加前のｍ＝５．５ 滅菌を１２１℃で４０分間行った。

例１で示したと同様の方法で寒天斜面からの胞子で接種
した後、フラスコを２３　Ｏｒｐｍで且つ３０℃で２日
間攪拌した。この種培養物１２０Ｆｌｌ／を以下の組成
を有し且つ１２１℃で１時間滅菌した培地１．３リツト
ルを有する２リツトルの発酵器に移した。

グルコース　５０　Ｖｌ 大豆ミル　５０９／ｌｌ ＫＨ２ＰＯ４２，０９／Ｉ Ｎａ　２　ＨＰＯ４・２Ｈ２０３，０’　ｙ々大豆油　
１０ｇ／ｌ プルロニック　０，３　ゴ 接種後引き続き、通気（７００ｍ４／分）を開始した。

又攪拌を開始し次いでその速度は最初の２４時間中は６
００　ｒｐｍであり、しかる後８００　ｒｐｍにその速
度を増加せしめた。温度を３０℃に保持した。１００時
間発酵を維持し、この間−値は６゜３から８．５に上昇
した。上澄み液を分析し、次いでリパーゼ活性を９０　
ＬＵ／ｆｄｌとして得た。

一連の実験を温度の点を除いては例２に示したと同様に
行った。次の表を参照され度い。

１舶の表から、最適温度は３４℃付近であることが理解
きれる。

−の影響を調べる為、二種の新しい実験を、３４℃で且
つ声の点を除いて例６と一様に行らた：二種の実験の何
れにおいても、発酵器内での最初の２４時間の発酵甲声
は調節しなかった；第一の実験（例８）において、発酵
器内での最初の２４時間の発酵後Ｈ，ＰＯ４により−を
６．５に保持し、更に第二の実験（例９）において、全
発酵期間中−は監視しなかつ九、結果を以下の表に示す
。

鳳下余白 例番号　８９ 上記の表から明らかな様にもしもμ値を説明した方法で
監視する場合す・母−ゼ収率は改善される。

攪拌の程度の影響を調べる為、攪拌の程度を除いては例
８に説明したと同様に三種の実験を行った：攪拌器の速
度は、最初の２４時間発酵後の全発酵期間中６０　Ｏｒ
ｐｍから種々のレベルに上昇した。次の表を参照され度
い。結果は次の表から明らかである。

上記の表から最適な攪拌速度は約８００　ｒｐｍである
ことが分かる。

発酵培地中の大豆油の濃度の影響を調べる為、大豆油の
濃度を除いてけ例１１に示したと同様で（例えば温度、
…及び攪拌の程度に対し最適な値で）行った０次の表を
参照され度い。

例１に の例はノクイロットプラント発酵器において、本発明に
係る酵素洗浄剤添加物における活性成分の製造を示す。

３００ノの容積を有する接種タンク中で、次の培地を調
節した。

コーンステイープリカー　７．２　ｋｇ大豆油　１．５
　ｋｌ＋ 炭酸カルシウム　１．５　ｋｌｌ ゾルロニツク　２５− 水を加え２９０Ａ！までとする。

培地を１２０℃で１時間滅菌した。グルコース７．２ユ
及びクエン酸７．２ｇを含有する２０リツトル溶液を、
１２１℃で０．５時間滅菌し次いでコーンステイーシリ
カ−混合物に添加した。３０℃で冷却後、酵母エキス、
燐酸塩、マグネシウム、グルコース及び寒天を含有し且
つ既に３０℃で７日間インキエペートしたフェルンパッ
ハフラスコからのＤＳＭ　２６７２の胞子を、培地に接
種した。通気（３００１ン分）を直ちに開始し、次いで
２０時間抜攪拌（２５０ｒｐｍ）を開始した。温度を３
０℃で保持し次いで２９時間増殖を行った。この種培養
物３０１を、以下の成分を含有する主発酵器に移した： 大豆ミル　１５　ｋｌ？ ＫＨ２ＰＯ４０，６ｋｌ？ Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０１，２に９ 大豆油　３ｋｉ９ プルロニック　２５− 水を加えて２７５リツトル容量とする。

培地を１２１℃で１時間殺菌した。２５１の水中グルコ
ース１５に９及びクエン酸１５．９を１２１℃で３０分
間別に滅菌し次いで大豆ミル混合物に添加した。

接種に引き続き、通気（３００Ａ！／分）を開始した。

攪拌も開始し、更にその速度を発酵の最初の１０時間に
亘って４００　ｒｐｍに増加した。温度を３４℃に保持
した。発酵を６０時間継続させ、この間−値は６．６４
から８に増加し更にしかる後タンクを冷却し次いで菌糸
を遠心分離で分離した。

上澄み液を分析し、次いでＩＪ　ノＪ？−ゼ活性を測定
し９０　ＬＵ／／ｌｎｔを得た。

例１７ この例はパイロットプラント発酵器内での本発明に係る
酵素洗浄剤添加物中の活性成分の製造を説明する。

７サリアムオキシスポ２ムＤＳＭ　２６７２の液内好気
性発酵によりＩＪ　ａ４−ゼを製造した。

次の組成を有する寒天基質を、フェルンバッハフラスコ
内で調製した： 酵母エキスディフコ　４ｇ Ｋ２ＨＰ０４１ｇ ＭｇＳＯ４，７Ｈ２００，５，９ グルコース　１５　ｆｉ 蒸留水ａｄ　１０００　ｍｌ 寒天Ｍｅｒｃｋ　１５９ 混合物を４０分間１２０℃でオートクレイプ処理した。

（基質はＹＰＧ−寒天と命名される） 菌株ＤＳＭ　２６７２を、ＹＰＧ−寒天斜面上で一週間
３０℃で培養した。該斜面からの胞子の殺菌した脱脂乳
中に懸濁させ、次いで懸濁液をバイアル中で凍結乾燥し
た。凍結乾燥した一個のバイアルの内容物を、フェルン
パッハフラスコに移した。次いでフラスコを一週間３０
℃でインキ−ベートした。

次の組成を有する基質を、５００１の種発酵器内で調製
した： ＣａＣＯ３１，５ｋｌ？ グルコース　７．２ｋｇ コーンステイーシリカ−７，２ｋｇ 消泡剤プルロニック０　３０　ｍ 水道水を添加し全量を約２４０リツトル程度にした。−
を、ＣａＣＯ５の添加前に５．５付近に調節した。基質
を、糧発酵器内で１時間１２１℃で蒸気滅菌した。接種
前の最終容器は、３００リットル程度であった。

フェルンパッハフラスコの胞子懸濁液を、種発酵器に移
した。

種発酵条件は次の通りであった： 発酵器のタイプ：　高さ／直径比が２程度である通常の
通気及び攪拌発酵゛ 器 攪　拌：　３００ｒｐｍ（２個のタービン型インペラー
） 通　気：　毎分３００ノーマルリツト ルの空気 温　度＝　３０℃ 圧　カー０．５気圧 時　間：　約１７時間 過剰の発泡を防止する為、攪拌及び通気速度を減少する
ことが可能である。しかしここで説明する種発酵器にお
いてはその様な操作は行わなかった。０．５〜１日後良
好な増殖が得られた場合、ここにおいては接種後約１７
時間後、２５リツ゛トルを種発酵器から主発酵器へ移し
た。

次の組成を有する基質を、５００１の主発酵器内で調製
した： 仮焼して殻をとった大豆ミル　３９に９グルコース　１
５ｋｇ 大豆油　３− Ｋ）Ｉ２ＰＯ４０，６ｋｇ Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２０１，２ｋｌ？消泡剤ゾルロニ
ツク■　３０　ｔｄ 蒸留水を添加し全量を約２５０リツトルとした。

大豆ミルを水に懸濁させた。−をＮａ２ＣＯ３で８に調
節し、次いで温度を５０℃に上昇させた。しかる後約４
８０アンソン単位のアルコラーゼ（Ａｌｅａｌａｓｅ■
Ｌ）　（４Ａｖ％＋Ｊ）を懸濁液に添加した。

混合物を、４時間５０℃で且つ−＝　ｓ、　ｏ　（Ｎａ
２ｃｏ３の添加）で且つ通気は行わず、０気圧で１５０
〜２００　ｒｐｍの攪拌下に保った。しかる後残りの基
質成分を添加し次いで−を燐酸で約６．５に調節した。

基質を主発酵器内で１時間１２１℃で蒸気滅菌した。３
４℃に冷却後、ＰＨを殺菌した炭酸ナトリウム溶液（全
量２０す、トル中３時の炭酸ナトリウム）を用いて約６
．０に調節した。接種前の最終容量は約２８０リツトル
であった。次いで種培養物２５リットルを添加し九〇 発酵条件は次の通りであった： 発酵器のタイプ：　高さ／直径の比が約２である通常の
通気及び攪拌発酵 器 攪　拌：　１５０ｒｐｍ（０〜６時間）及び４００ｒｐ
ｍ（６時間ないし終了 時）（２個のタービン型イ ンペラー） 通　気：　毎分２００〜２５０ノーマルリツトルの空気
（０〜２２時間）並び に毎分３００ノーマルリツトル の空気（２２時間から終了時ま で） 温　度＝　３４℃ 圧　カニ１．０気圧（０〜３４時間）及び０．５気圧（
３４時間から終了時 まで） 時　間：　約１１２時間。

過剰の発泡を防止子る為、攪拌、通気及び圧力を変化さ
せることは可能であった。ここで説明する発酵において
、先に示したデータから明らかな様にそれは行われた〇 燐酸溶液を添加して発酵ＰＨを約６．５に保持した。

ここで説明する発酵において、発酵約３０時間から終了
時まで投入が行われた。燐酸溶液は以下の如くして５０
０リツトルの調合タンク内で製造された：２０ｋｇの濃
燐酸（８０チ）に、水道水を全体の量が約１６０リツト
ルになるまで添加した。

溶液を、調合タンク内で１２１℃で１時間蒸気滅菌した
。投入開始前の最終容量は約２００！Ｊツトルであった
。発酵−を約６．５に保つ為に必要な燐酸溶液の量だけ
を主発酵器に添加した。

滅菌した消泡剤Ｐ２Ｏ００（ポリプロピレングリコール
）を、発酵中泡形成を防止する為主発酵器に添加した。

ここで説明する発酵において３．５リツトルのＰ２Ｏ０
０を用いた。

約１１２時間の発酵後、発酵工程を停止した。

主発酵器は培養プロス約３１５リツトルを含有しており
更に得られたリノぞ−ゼの収率は、プロス１グラム当シ
約２００ＬＵであった（基質としてトリブチリンを用い
る）ｙｌｓＬＵ−アッセイＮ０９５１５−ＧＢに従って
測定した）。

例１８ リノ母−ゼを例１７におｈて記載した如く製造したが、
発酵は相当により高い基質量及び容積を有する２５０（
ｌットルの主発酵器内で行った。

攪　拌：　２５０　ｒｐｒｎ（二個のタービン型インペ
ラー） 過剰の発泡を防ぐ為、通気及び圧力を次の如く変化させ
た： 通　気：　空気を毎分７５ＯＮｔ　（０〜１３・時間）
空気を毎分１２０ＯＮｔ（１３〜３７［１間）空気を毎
分１５０ＯＮｔ（３７時間から終了時まで） 、　圧　カニ０．７気圧（０〜２５時間）０．５気圧（
２５時間から終了時まで）この発酵においては消泡剤Ｐ
２Ｏ００は添加しなかった。

発酵の終了時には、発酵器は約１８００！ｊツトルの培
養ブロスを含有し更に得られたり・ぐ−ゼ収率はブロス
１グラム当り約１２５　ＬＵであらた。

例１９ ソノ４−ゼを例１７で記載した如く製造したが、発酵は
、相当に高貴及び容積の基質を含有する２５００　リｙ
　）ルの主発酵器内で行い更に大豆ミルのアルカラーゼ
処理は省略した。２００ＩＣ９の大豆ミルを用い更に接
種前の容量は１４００りットルであった。基質を、１２
３℃で１．５時間上発酵器内で蒸気滅菌した。

攪　拌：　’　２５０　ｒｐｍ（二個のタービン型イン
ペ２−） 過剰の発泡を□防止する為、通気及び圧力を次の様に変
化させた： 通　気：　空気を毎分７５ＯＮｔ（０〜３時間）空気を
毎分９００Ｍｔ（３〜１１時間）空気を毎分１１００Ｎ
ｔ（１１〜２４時間）空気を毎分１３０ＯＮｔ（２４〜
２淘間）空気を毎分１５０ＯＮＡ（２７時間から終了時
まで） 圧　力＝１．０気圧（０〜２７時間） ０．７５気圧（２７〜■　時間） ０．５気圧（４０時間から終了時まで）この発酵におい
て消泡剤Ｐ２Ｏ００は゛添加しなかった。発酵の終了時
において、発酵器は培養ブロス約１４００リツトルを含
有し更に得られたＩＪ　ノ４−ゼ収率はブロス１グラム
当り約１９８ＬＴＪであった。発酵時間は約１４０時間
であった。

以下余白 例２０ リパーゼを例１７で記載した如く製造したが、発酵は相
当により高い基質量及び容積を有する２５００リツトル
の主発酵器内で行い、更に大豆ミルのアルカラーゼ処理
は省略した。１７０ｋｇの大豆ミルを用い更に接種前の
容量は１４００！Ｊツトルであった。基質を、１２３℃
で１．５時間上発酵器内で蒸気滅菌した。

攪　拌：　２５０　ｒｐｍ（二個のタービン型インペラ
ー） 過剰の発泡を防止する為、通気及び圧力を次の如ぐ変化
させた： 通　気：　空気を毎分７５ＯＮｔ　（０−１１時間）空
気を毎分ＩＩ　５ＯＮＺ　（１１〜１９時間）空気を毎
分１３０ＯＮｔ（１９−２７時間）空気を毎分１５０Ｏ
Ｎｔ　（２７ｉＩ間から終了時まで） 圧　カニ１，０気圧（０〜２７時間〕 間抜５気圧（２ｗＦ間から終了時まで〕この発酵におい
て消泡剤Ｐ２Ｏ００を０．５！Ｊツトルを用いた。発酵
の終了時において発酵器は培養ブロス約１４００リツト
ルを含有しており更に得られたリフ４−ゼ収率はブロス
１グラム当シ約２２１ＬＵであった。発酵時間は約１４
４時間であった。

例２１ リバー４＃を例１７で記載した如く製造したが主発酵器
内の基質の大豆ミル濃度は５チに減少させ更に大豆ミル
アルカラーゼ処理は省略した。

過剰の発泡を防止する為、攪拌を次の如く変化させた： 攪　拌：　Ｏｒｐｍ（０〜２２時間） １００〜１５０ｒｐｍ（２２〜３３時間）３００ｒｐｍ
（３３時間から終 了時まで） この発酵において消泡剤Ｐ２Ｏ００は添加しなかった。

発酵の終了時において発酵器は培養！ロス約３１（１７
ツトルを含有し更に得られたりｉｊ−ゼ収率はゾロスｌ
ダラム当り約１４６ＬＵであった。

例２２ す・母−ゼを例１７で記載した如く製造したが、主発酵
器の基質の大豆ミル濃度は５チに減少させ、アルカラー
ゼ処理は省略し、大豆油は最初の発酵培地から除去し更
にその代り滅菌した大豆油を発酵４８．６０．７２及び
８４時間抜に主発酵器に１リツトルずつ合計４リツトル
を添加した。

過剰の発泡を防止する為、攪拌、通気及び圧力を次の如
く変化させた： 攪　拌：　２００〜３００ｒｐｍ（０〜２４時間）４０
０ｒｐｍ（２４時間から終 了時まで） 通　気：　空気を毎分１５ＯＮ／−（０〜１７時間）空
気を毎分２７５Ｎｔ（１７〜２５時間）空気を毎分３０
ＯＮｔ（２５時間から終了時まで） 圧　力＝０．９〜１．０気圧（０〜３３時間）０．５気
圧（３３時間から終了時 オで） この発酵において２リツトルの消泡剤Ｐ２Ｏ００を用い
た。

発酵の終了時には、発酵器は約２８５リツトルの培養プ
ロスを含有し更に得られたリノや−ゼ収率はプロス１グ
ラム当り約１１３ＬＵであった。

例２３ 例１９で得られる培養ブロスを、水酸化ナトリウムを用
いて−８，０に調節し更に１チの塩化カルシウム、１％
のＳＩＩｒｖａｍｉｎｅ　ＫＺＡ３４６（Ｓｅｒｖｏ）
、０．０３％の５ｕｐｓｒｆｌｏｅ　Ａ−１３０（アメ
リカンシアナミド）及び０．５％のＴｒｉｏｔｏｎ　Ｘ
−１００（ロームアンドハース）を用いてフロキュレー
トした。

フロキュレートした培養プロスを、円板遠心機（Ｗａｇ
ｔｆａｌｉａ　ＳＡＭＳ）を、用ｉいて遠心分離した。

遠心分離物を酢酸でＰＨ４，５に調節した。この声で沈
殿が生じた。沈殿物を遠心分離（ウニストンアリアＳＡ
ＭＳ　）により上澄み液から分離し次いでトリトンＸ−
１００で処理した。処理された沈殿物を水で希釈し再び
遠心分離した。

二回の遠心分離により得られる遠心分離物を混合物次い
で二回目の遠心分離工程から得られるスラッジを廃棄し
た。

遠心分離物を、膜ろ過しく　ＤＤＳ−モジュールＧＲ６
０Ｐ膜）、次いでしかる後限外ろ過し更に濃縮した。

限外ろ過した濃厚物をろ過助剤としてノーイフロースー
・・母−セル（Ｊｏｈｎｓ　Ｍａｎｖｌｌｌｅ）を有す
るポリプロピレンクロスでろ過した。次いでろ液を水酸
化ナトリウムを用いてＰＨ８，０に調節し史にサプラ（
Ｓｕｐｒａ）１００ろ紙（Ｓｅｌｔｚ）でろ過し最後に
サプラ（Ｓｕｐｒａ　）ＥＫＳ（Ｓｅ　１　ｔｚ　）で
細菌ろ過した。

細菌ろ液を同量のアセトンで沈殿させ次いで純粋アセト
ンで洗浄した。

沈殿物を真空室で乾燥させた。得られた乾燥濃縮物は活
性度約９００００　ｕｙ／９を有していた。

例２４ 他のリノクーゼと比較したフサリアムオキシスポラムリ
）Ｊ？−ゼの洗浄効果 試験材料：　ＥＭＰＡ　１０１　（オリーブ油／綿布）
洗　浄　液：　洗剤Ａ”）　、　５９Ａ１（１°ｄ）（
水洗浄機械：　ＴＥＲＧ−０−ＴＯＭＥＴＥＲ洗浄プロ
グラム：　４０℃で２０分間 材料見本番号：　９／９００ｍ／の洗浄液リ　）母　−
ゼ：　フサリアム　オキシス−ラム　リノや−ビＡｓｐ
、ナイが−、ＡＭＡＮＯＡＰ６ カンジダ　シリントラシア（Ｃａｎｄｌｄａａｙｌｌｎ
ｄｒａａｓａ）＋５１ｇｍｍムコアマイヘイ（Ｍｕｃｏ
ｒ　ｍ１ｅｈｅｉ　）ＳＰ　２２５リノ母−ゼ濃度：　
０．　７５０．　１５００．　２２５０゜３０００　Ｌ
ＵＡ フサリアムオキシスポラ°ムリパーゼ活性分に関し、培
養ブロスの遠心分離から得られる適当量の上澄み液とし
て導入し、その製法は例１で説明している。

洗浄効果はエルレホ（Ｅｌ　ｒｅ　ｐｈｏ　）ホトメー
タ、フィルターＲ４６を用い、９個の材料見本に関し測
定した二回の読み取りの平均値によｆｉＲ＝レミッショ
ン（Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）値として表される。り洗剤Ａ
は次の組成を有する： ａ状フルキルベンゼンスルホネ−）　（ＬＡＳ。

アニオン界面活性剤　１７チ ノニルフエノールエトキシレート、原戸１２（非イオン
界面活性剤）　３チ ドリプリ燐酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）　３０％ケイ酸ナ
トリウム　４％ 炭酸ナトリウム　３チ 硫酸ナトリウム　３７チ 水　６チ 表中結果はＲ及びΔＲ＝Ｒ−Ｒｏとして表され１ここに
おいてＲ８はリパーゼなしで洗浄した材料見本のレミ、
シ、ン値であり更にＲはリノクーゼを用いて洗浄した材
料見本のレミッシ、ン値である。

以下余白 一〇！　曽　ψ　啼　啼 １　Φ　Ｑ　呻　０　゛寸 ロ ー　〇！　曽　め　の　。

ｑ　Ｏｏｏ　ＣＱ　Ｆ＋４ か −〇！　、　ｃｒｔ　？−Ｉ　Ｒ６ ０＊　ｏ　ｃｉ　Ｏの 膿 例２５ 綿布以外の他の織物についてタン・ぐり分解作用を実証
する為、同様にポリエステル／綿布及びアクリルから試
験材料を調製した。

試験汚染：　オリーブ油　１０　チ 乳化剤　１□５　チ ア−セン（＠ａｒｔｈｅｎ）カラー　０．４チインデイ
アンインク　０．３　チ 水　８７．８　チ 溶液をラニイ（Ｒａｎｎ１ｓ　）ホモダナイザー中で乳
化した。綿布、ポリエステル／綿布及びアクリルの試験
片を均質化した溶液中で浸漬した。過剰の汚染を絞り取
り更に布の試験片をスピンドライヤー中で３０分間乾燥
した。

洗浄条件 試験物質ニオリーブ：Ｉ綿布上 ■ホリエステル／綿布上 ■アクリル上 洗浄溶液：洗剤Ｂ　＊＊）　、　３．２５．！ｉ’／Ａ
’、１０℃ｄＨ水洗剤ｃ＊＊＊）、ｉ　ｇ／′ｌ＋　ｔ
　ｏ°ｄＨ水洗浄機械：ラウンダーー〇−メーター（Ｌ
ａｕｎｄ＠ｒ−０−Ｍｅｔｅｒ） 洗浄プログラム：１５℃から４０℃に加温、加温時間３
７分、４０℃で１２分間洗浄 材料見本番号：３／３００−の洗浄液 リノや一ゼ　：フサリアムオキシスポラムリノぐ−ゼム
コアマイヘイ、５Ｐ２２５ Ｃ，シリントラシア＋５１ｇｍｍ パンクレアチンリノ！−セ、　５１ｇｍｍリパーゼ濃度
：多様 フサリアムオキシスポラムリノーゼが、次の方法におい
て得られた凍結乾燥粉末の適当量としてもたらされた。

１リツトルの実験室用フラスコ内での発酵を、例１で説
明したと殆んど同様にして行った。発酵ブロスを遠心分
離し、限外ろ過により濃縮し次いで凍結乾燥した。

＊＊）洗剤Ｂは次の組成を有する： 線状アルキルベンゼンスルホ＄−）（ＬＡＳ。

アニオン界面活性剤）　３４チ ノニルフエノールエトキシレート、　ＥＯ＝１２（非界
面活性剤）　３％ トリぼり燐酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）　６２チカルがキ
シメチルセルロース（ＣＭＣ）　Ｉｓ＊＊＊）　洗剤Ｃ
ハ１００　％のノニルフェノールエトキシレート、ＫＯ
＝１２である（非イオン界面活性剤）。

洗浄効果は、エルレホホトメーター、フィルターＲ４６
を用いて測定されたＲ＝レミッシ、ン値として表され、
３個の材料見本につき２回の読み取シの平均で表す。

表中、Ｒｏ及びΔＲは例２４で示されると同じ意味を有
する。

本発明に係る酵素洗浄剤添加物の活性成分以下余白 ムコアマイへイリノや一ゼ 洗剤Ｂ 試　験　リパーゼ濃度、　ＬＵ／ｅ 材　料　０　７５０　３０００　６０００　１００００
Ｒｏ　ΔＲΔＲΔＲΔＲ 綿　布　３５．３　４．１　４．８　７．５　８．８ア
クリル　５４．４　３．６　４．４　５．７　５．７Ｃ
，シリントラシア、パンクレアチンリノ臂−セＣ，シリ
ンドラシアリノ母−ゼ 洗　剤　リパーゼ濃度、　ＬＵ／ＩＩ ０　２５０　５００　７５０　３０００Ｒｏ　ΔＲΔＲ
ΔＲ７Ｒ Ｂ　３６．４　０．０　０．０　１．１　０．ＯＣ２６
，００，００，００，４０，５ 洗剤Ｃ リパーゼ濃度、Ｌヅ１ ０　７５０　３０００　６０００　１００００Ｒｏ　Δ
ＲΔＲΔＲΔＲ ２５，４１，９２，０４，３４，９ ３１，４１，８２，０１，８１，０ ３３，８４，４５，８６，５６，３ 試験材料：綿布 ハンクレアチンリノや一ゼ リパーゼ濃度、Ｌ財！ ０　７５０　３０００　６０００　１００００Ｒｏ　Δ
ＲΔＲΔＲΔＲ ３４，５２−７２，２３，０３，８ ２４，４３，４３，８３，５３，６ 例２に の例は、本発明に係る酵素洗剤添加物中のリパーゼ及び
タンパク分解酵素の適合性を実証する。

試験材料は例２５で説明した如く汚染した綿布であった
。

洗浄条件 試験材料：先に説明した如く汚染した綿布洗浄溶液：洗
剤Ｂ３．２５νｌ、１０°ｄＨ水洗剤Ｃ１，Ｏｇ／ｌ、
１０°ｄＨ水 洗浄機械：ラウンダー−Ｏ−メーター 洗浄プログラム：１５℃から４０℃に加温、加温時間３
７分、４０℃で１２分間洗浄 材料見本番号　：３／３００ｍの洗浄溶液酵素：フサリ
アムオキシスＩラムリパーゼアルカラーゼ２．０Ｔ ＩＪ、？−ゼｌｌｉ［：　Ｏ；　２５０：５００ニア５
０；３０００Ｌｖｌタンノやり分解濃度：Ｏ：０．０６
又は０．０１：０１０２；０．０４：０．０８　ＡＵ／
１ フリリアムオキシースポラムリノぐ−ゼを、培養ブロス
を遠心分離した上澄み液の適当量として導入したが、こ
の製法は例１で説明している。

タンパク分解活性を、アンソン単位／　ｌ　（Ａ１Ｊ／
ｌ）で測定し次いでノポエンザイムインフォメイション
ＩＢＡＯ５８・−ＧＢで記載される変性アンソン方法に
従って決定する（もとのアンソン方法はＪ。

Ｇｅｎ、Ｐｈｙｇｉｏｌ、　、２２．７９〜８９　（１
９３９）に記載される）。

洗浄効果は例２５で示したと同様に表される。

・表中の記号の意味は例２４で説明したと同じものであ
る。

起 １７　、ｐ４−ゼ濃ｆ　プロティナーゼ濃度　レミッシ
、ン値２５０　０　ΔＲ ５０００ΔＲ ７５００ΔＲ ３００００ΔＲ ２５００，０６ΔＲ ５０００，０６ＪＲ ７５００，０６ΔＲ ３００００，０６ΔＲ ００，０１ΔＲ ００，０２ΔＲ ００，０４ΔＲ ｏ　ｏ、ｏｓ　ΔＲ （４６） 洗剤Ｂ　洗剤Ｃ ３５，１２７，０ ３・５２．７ ３・８３．２ ５．０　３．５ ７．５　６．５ ２．８　３．５ ３・４５．１ ３・８５．６ ５・４６．４ １．５　１．９ １・２２．４ １・１１．４ １．８　１．５ 例２７ この例は、公知の脂肪分解洗剤添加物に比較し本発明に
係る脂肪分解洗剤添加物の優れた洗浄作用を実証する。

二セットの洗浄条件を用いた： １：　Ｏ〜３０００ＬＵ／ｌ　、　Ｅ野Ａｌ０Ｉ）ルグ
ー〇−トメーター：４０℃で２０分間洗剤ＡＬＬ＋Ｎａ
２５ｏ４：３．７５＋１．２５９／１．１０°ｄＨ，ｐ
Ｈ＝９．５　’２：　０〜３０００ＬＵ／ｌ、１０チオ
リーブ油／綿布５ｆ）ン／−−０−メーター：ヨー買ツ
バ式洗浄４０℃ペロールヴアスク（Ｂｓｒｏｌ　ｗａｊ
ｅ　）（非イオン界面活性剤）１．０９／ｌ；ノ？洗剤
３．２５　ｇ／ノ、１０°ｄＨ。

ｐＨ８，５／　９．５ ３．２５９のノが洗剤はＬＡＳ　１９　、５ＴＰＰ２９
　。

ＣＭＣ０，０５，９、及びペロールヴアスク０．１ｇか
ら成る。

次の表は、本発明に係る脂肪分解洗剤添加物に比較し別
の従来技術の脂肪分解洗浄添加物に対するΔＲ値として
の洗浄作用を示す。斜線を有する１以上の値は２回の測
定が行われたことを示す。

／Ｊ７Ｎ 従来技術の脂肪分解洗浄剤添加物に比較し、７サリアム
オキシスポラムに基づく脂肪分解洗剤添加物の優秀性は
、上記表から明らかである。

例２８ この例は異なったりパーゼ生産フサリアムオーキシスポ
ラム菌株由来のリパーゼに関する洗浄特性を説明する。

試験材料は次の方法で汚染されたアクリル系布帛である
。

試験溶液ニオリーブ油　３％ 乳化剤　１．５チ ア−センカラー　０．４チ インデイアンインク　０．３チ 水　８７．８％ 溶液をラニイ（Ｒａｎｎｉ・）ホモグナイザー中で乳化
した。アクリル布帛の小片を、均質化した溶液中に浸漬
した。過剰の汚染物を絞り出し次いで布帛の小片をスピ
ンドライヤー中で３０分間乾燥した。　ｇ１下余白 実験Ｉ プレソーキング：５０ｍの希釈発酵ブロス及び５−の溶
液Ａを含有する溶液中で、５個の見本材料（ｓｘｘ□ｙ
＋＋）を室温で２時間浸軟させた。溶液Ａ：１０°ｄＨ
水（脱イオン水に溶解した０Ｄ０６０３チのＭｇＣｌ２
・６Ｈ２０、０，０１６巨チのＣａＣＬ　２及び０．０
３５チのＮａＨＣＯｓ）に溶解したベロールヴアスク（
ノニルフェノールエトキシレート）。

洗浄：見本材料をソーキングした後１０分間濯ぎ次いで
１０°ｄＨの水１．３３９　ＴＯＰ／リットルを含有す
る洗剤溶液中１０分間３０℃でトルグーＯ−トメーター
中で洗浄した。

洗浄終了後、見本材料を１０分間水道水で濯ぎ次いで乾
燥した。

結果 Ｒｏ　ΔＲ Ｃ５９７５，７６，２６，７８，４８，４０９ 実験■ 上記実験■に類似した手順を、よ、Ｄ　リパーゼ生産能
力があるフサリアムオキシスＩラム菌株数種から得られ
た試験培養ブロスに対し用いた。

結果 Ｒｏ　ΔＲ Ｃ５９７０，９３，２３，７４，９ ＡＩ７１４　２．１　３．６　３．３　５゜ｌＡ１７５
５　３６Ｊ３３．５　２．８　３．１　５．４Ａ１７５
６　３．０　４．７　４．７　６．１例２９ この例は、ある種の７サリアムオキシスポラム菌株が本
明細書中先に説明された定義に従うリパーゼ生産物であ
るという事実を実証しており、一方他のフサリアムオキ
シスデ２ム菌株は本明細書中先に説明した定義によるリ
パーゼ生産物でないことを実証している。

リパーゼ生産に対する基質は次の成分（グラム／ｌ）か
ら成る： 大豆　４５ Ｇｌａｃｏｓｅ　７０ ＫＨ２ＰＯ４２ Ｎａ２ＨＰＯ４３ 大豆油　５ 滅菌を１２１℃で４０分間行つた。各々１０〇−の基質
を有する１１個のエーレンマイヤーフラスコ５００−を
、１１種のフサリアム種で予め接種した寒天斜面からの
１０７個の胞子を用いて接種した。フラスコを２３Ｏｒ
ｐｍで且つ３０℃で５日間振とうした。収率を以下に示
す：

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、活性成分が微生物によシ生産されたリパーゼである
   酵素洗剤添加物であって、該リパーゼが７サリアムオキ
   シスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）の
   リノク−ゼ生産菌株によシ生産される前記酵素洗剤添加
   物。 ２、前記フサリアムオキシス？ラム（Ｆｕｓａｒｌｕｍ
   ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）のリパーゼ生産菌株がＤＳＭ　２
   ６７２である、特許請求の範囲第１項記載の酵素洗剤添
   加物６ ３、前記添加物がノン−ダスティング（ｎｏｎ−ｄｕｓ
   ｔｌｎｇ）粒質物として提供される、特許請求の範囲第
   １項又は第２項記載の酵素洗剤添加物。 ４、前記添加剤が酵素安定剤を有する液体として提供さ
   れる、特許請求の範囲第１項又は第２項記載の酵素洗剤
   添加物。 ５、前記リノ母−ゼの活性が添加物ＩＩ当シ約２０．０
   ００〜約１００，０００ＬＵである、特許請求の範囲第
   ３項又は第４項記載の酵素洗剤添加物。 ６、前記添加物がリパーゼの外にタンパク分解酵素を特
   徴する特許請求の範囲第１項〜第５項の何れかに記載の
   酵素洗剤添加物。 ７、前記タンノ９り分解酵素活性が添加物１ｇ当り約０
   ．５〜約３．０アンソン単位（Ａｎｓｏｎ　Ｕｎｌｔ＋
   　）である、特許請求の範囲第６項記載の酵素洗剤添加
   物。 ８、活性成分が微生物によシ生産されるリパーゼである
   、酵素添加物を含んで成る洗剤であって、酵素洗浄剤添
   加物の活性成分としてのリパーゼが７サリアムオキシス
   ポラム（Ｆｕｓａｒ％ｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）のリパ
   −ゼ生産菌株により生産される前記洗剤。 ９、前記洗剤が前記酵素洗剤添加物を０．２〜２、０　
   ％　ｗ／ｗの量を特徴する特許請求の範囲第８項記載の
   洗剤。 １０、洗剤として、活性成分が微生物によシ生産される
   リパーゼである、酵素添加物を含んで成る洗剤であって
   、該酵素洗浄剤添加物の活性成分としてのリノＪ？−ゼ
   が７サリアムオキシスポラム（Ｆｕａａｒｌｕｍ　ｏｘ
   ｙｓｐｏｒｕｍ　）のリパーゼ生産菌株によシ生産され
   る該洗剤を使用し、−が７〜１１であり、更に温度が６
   ０℃以下である、洗浄方法。 １１、洗浄溶液が前記洗剤を、洗浄液１リツトル当シ１
   〜５ｇの量を含む、特許請求の範囲餉１０項記載の洗浄
   方法。