JPS6036964A - 生化学的検出法および使用キツト - Google Patents
生化学的検出法および使用キツトInfo
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- JPS6036964A JPS6036964A JP59136432A JP13643284A JPS6036964A JP S6036964 A JPS6036964 A JP S6036964A JP 59136432 A JP59136432 A JP 59136432A JP 13643284 A JP13643284 A JP 13643284A JP S6036964 A JPS6036964 A JP S6036964A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発剪はリガンドを表面に結合さぜ、抗リガンドが前記
リガンドに結合する生化学的検出法に関する。
リガンドに結合する生化学的検出法に関する。
ここに使用される用語「リガンド」および「抗リガンド
」は、互いの特異的空間および電荷配置を認識し、特異
的に互いに結合Ｊることが出来る一対の相補性物質を意
味している。リガンドの例としては、例えば抗原、ハプ
テン、Ｊノよび細胞、非細胞関連非抗体レセプターのパ
ートナ−が挙げられる。「抗リガンド」とし−Ｃは、例
えば、抗体、および非細胞、細胞関連非抗体レセプター
が挙げられる。ここで使用した［非抗体ルセプターには
天然非抗体レセプターおよび合成もしくは半合成非抗体
レセプターがあり、また、適当なパートナ−と結合し得
るそのアナローブがある。同様に、それら各々のパー１
−ナーは天然源から４ｑられてもよく、あるいは合成的
もしくは半合成的でもよく、適当なレセプターと結合し
得るならば天然パー１〜ナーのアナローブであってもよ
い。
」は、互いの特異的空間および電荷配置を認識し、特異
的に互いに結合Ｊることが出来る一対の相補性物質を意
味している。リガンドの例としては、例えば抗原、ハプ
テン、Ｊノよび細胞、非細胞関連非抗体レセプターのパ
ートナ−が挙げられる。「抗リガンド」とし−Ｃは、例
えば、抗体、および非細胞、細胞関連非抗体レセプター
が挙げられる。ここで使用した［非抗体ルセプターには
天然非抗体レセプターおよび合成もしくは半合成非抗体
レセプターがあり、また、適当なパートナ−と結合し得
るそのアナローブがある。同様に、それら各々のパー１
−ナーは天然源から４ｑられてもよく、あるいは合成的
もしくは半合成的でもよく、適当なレセプターと結合し
得るならば天然パー１〜ナーのアナローブであってもよ
い。
リガンド／抗リガンドの例が多数、米田特ｗ１明１ｆＵ
Ｊ占Ｎ０．４．４４．６２３１ ニ記載されており、そ
の全てを参考とされたい。
Ｊ占Ｎ０．４．４４．６２３１ ニ記載されており、そ
の全てを参考とされたい。
多くの生化学的検出法は、リガンドと抗リガンド間の相
互作用を利用し、ある種のシグナル発生手段によって検
出できるような位置に抗リガンドを配ｊαＪ゛るように
している。リガンドは化学的（共有結合）あるいは物理
化学的（疎水性相Ｈ作用、吸着、リガンド−抗リガンド
相互作用、笠）手段により表面に結合させ、抗リガンド
は通常水溶液中に加えられている。溶液中に存在する抗
リガンドはリガンドと結合Ｊる。次いで溶液を表面から
分離づると、（リガンドとの結合を経て）表面と結合し
た抗リガンドが残ることになる。その後抗リガンド足間
を行なう。
互作用を利用し、ある種のシグナル発生手段によって検
出できるような位置に抗リガンドを配ｊαＪ゛るように
している。リガンドは化学的（共有結合）あるいは物理
化学的（疎水性相Ｈ作用、吸着、リガンド−抗リガンド
相互作用、笠）手段により表面に結合させ、抗リガンド
は通常水溶液中に加えられている。溶液中に存在する抗
リガンドはリガンドと結合Ｊる。次いで溶液を表面から
分離づると、（リガンドとの結合を経て）表面と結合し
た抗リガンドが残ることになる。その後抗リガンド足間
を行なう。
一般に、定量番よ表面と結合した抗リガンドについて行
うが、表面から解離している場合もある。
うが、表面から解離している場合もある。
この様な抗リガンドの配置は種々の蛋白の定量法に広く
利用されている。シグナル発生手段は、所謂［酵素結合
免疫検定１法、放射免疫学的方法、免疫生物発光法また
は免疫螢光法の形を取ってもよい。この様な方法が幾つ
か、例えば、米国特許Ｎｏ、４／Ｉ４６２３１に示され
ており、その開示を参考とされたい。
利用されている。シグナル発生手段は、所謂［酵素結合
免疫検定１法、放射免疫学的方法、免疫生物発光法また
は免疫螢光法の形を取ってもよい。この様な方法が幾つ
か、例えば、米国特許Ｎｏ、４／Ｉ４６２３１に示され
ており、その開示を参考とされたい。
抗リガンドと表面との結合はある種の界面活性剤の使用
により彩管されることが知られており、特に１−ウィー
ン２０（商標）（ソルビタンモノラウラート洗浄剤）が
既知の検出法において使用されている。
により彩管されることが知られており、特に１−ウィー
ン２０（商標）（ソルビタンモノラウラート洗浄剤）が
既知の検出法において使用されている。
どのような検出法にあっても、所謂Ｉノイズ」が、その
システム中に存在する種々の成分間の非特異的結合によ
り生じることがある。例えば、表面に結合したリガンド
以外のシステム中に存在Ｊる種々の蛋白どの抗リガンド
の結合、該方法が行われている容器の壁との抗リガンド
の結合、おＪ−び容器の表面、即ち意図した結合部位以
外に非１を異的に結合したリガンドと抗リガンドとの結
合が挙げられる。このような生化学的検出システム内で
の非特異的結合は、検出手段として増幅システム、例え
ば前記酵素結合システムを利用する場合特に著しい。
システム中に存在する種々の成分間の非特異的結合によ
り生じることがある。例えば、表面に結合したリガンド
以外のシステム中に存在Ｊる種々の蛋白どの抗リガンド
の結合、該方法が行われている容器の壁との抗リガンド
の結合、おＪ−び容器の表面、即ち意図した結合部位以
外に非１を異的に結合したリガンドと抗リガンドとの結
合が挙げられる。このような生化学的検出システム内で
の非特異的結合は、検出手段として増幅システム、例え
ば前記酵素結合システムを利用する場合特に著しい。
我々は、ある種の剤が前記生化学的検出法にｄ５ける非
特異的結合を実質的に減じるのに効果的であること、Ｊ
３にびその種の剤は抗リガンドを含有する溶液中、結合
したリガンドを有する表面を次いでそれで処理するおら
ゆる溶液中、あるいはりガントをそこに結合させる表面
を調製するのに使用される溶液中で使用出来ることを見
い出した。
特異的結合を実質的に減じるのに効果的であること、Ｊ
３にびその種の剤は抗リガンドを含有する溶液中、結合
したリガンドを有する表面を次いでそれで処理するおら
ゆる溶液中、あるいはりガントをそこに結合させる表面
を調製するのに使用される溶液中で使用出来ることを見
い出した。
従って、本発明の第１の態様によれば、（ｉ）１個の芳
香族残基を含有し、１（目ス十の１−Ｉ Ｌ Ｂ数を有
づる界面活性剤、（１１）双イオン性界面活性剤、また
は（ｉｉｉ ）多価アニオンの塩を１００ｍＭ以上のｍ
度で含有する溶液 である、リガンドまた（よ抗リガンドと他の物質どの非
特異的結合を制限する剤で表面を処理することを特徴と
Ｊ゛る、リガンドを表面に結合さ「、抗リガンドを含有
する水溶液をそれと接触させて抗リガンドをリガンドに
結合さｕ１水溶液を結合した抗リガンドから分離し、抗
リガンドをこれと関連の検出法にＪ：り検出することか
ら成る生化学的検出法が提供される。
香族残基を含有し、１（目ス十の１−Ｉ Ｌ Ｂ数を有
づる界面活性剤、（１１）双イオン性界面活性剤、また
は（ｉｉｉ ）多価アニオンの塩を１００ｍＭ以上のｍ
度で含有する溶液 である、リガンドまた（よ抗リガンドと他の物質どの非
特異的結合を制限する剤で表面を処理することを特徴と
Ｊ゛る、リガンドを表面に結合さ「、抗リガンドを含有
する水溶液をそれと接触させて抗リガンドをリガンドに
結合さｕ１水溶液を結合した抗リガンドから分離し、抗
リガンドをこれと関連の検出法にＪ：り検出することか
ら成る生化学的検出法が提供される。
−芳香族残塁を含イｊづ−る界面活↑′［剤は、炭素原
子数１０以上、Ｊ：り好ましくは２０以上を含有する親
水性置換基を含有していることが好ましい。この親水性
置換基は、ニーデル結合のＪ：うな親水基および／また
は水酸基を含んでいる。この親水性置換基は、少なくと
も２０のオー１−ジエチレン残基を有ＪるＡキシエチレ
ン縮合物ぐあることが好ましい。
子数１０以上、Ｊ：り好ましくは２０以上を含有する親
水性置換基を含有していることが好ましい。この親水性
置換基は、ニーデル結合のＪ：うな親水基および／また
は水酸基を含んでいる。この親水性置換基は、少なくと
も２０のオー１−ジエチレン残基を有ＪるＡキシエチレ
ン縮合物ぐあることが好ましい。
タイプ（ｉ）の好ましい界面活性剤は式Δｒ−（ＯＣＨ
ＣＨ２） ｎ−ＯＡ ［式中、ＡｒＧよ全部で１〜１４
個の炭素原子を含有するアルキル基１つ以上で適宜回換
されたフェニル基であり、ｎは２０〜１００．Ａは水素
原子またはメチルまたは１チル基である］で示される界
面活性剤である。最も好ましくは、Ａｒは炭素原子数４
〜１２ｆｌＡｌのアルキル基で置換されたフェニル基で
あり、特に炭素原子数８個のアルキル基で置換されたフ
ェニル基である。八は水素であることが好ましい。０は
２０〜８０の値、例えば４０．５０．６０または７０、
であることが好ましい。
ＣＨ２） ｎ−ＯＡ ［式中、ＡｒＧよ全部で１〜１４
個の炭素原子を含有するアルキル基１つ以上で適宜回換
されたフェニル基であり、ｎは２０〜１００．Ａは水素
原子またはメチルまたは１チル基である］で示される界
面活性剤である。最も好ましくは、Ａｒは炭素原子数４
〜１２ｆｌＡｌのアルキル基で置換されたフェニル基で
あり、特に炭素原子数８個のアルキル基で置換されたフ
ェニル基である。八は水素であることが好ましい。０は
２０〜８０の値、例えば４０．５０．６０または７０、
であることが好ましい。
特に好ましいこのタイプの界面活性剤は、パラーオクヂ
ルーフェニルー（ＯＣＨ２Ｃｌ−１２）ｎ［式中、ｎは
前記の通りコとして表わされる。一連のこの種の好適な
界面活性剤は１へりｌ−ンＸ−４０５、Ｘ−７０５、等
の名称のもとにシグマケミカル社“から販売されている
界面活性剤であり、名称ｒ４０５Ｊおよびｒ７０５Ｊは
エトキン鎖の平均の長さがそれぞれ４０および７０であ
ることを示している。
ルーフェニルー（ＯＣＨ２Ｃｌ−１２）ｎ［式中、ｎは
前記の通りコとして表わされる。一連のこの種の好適な
界面活性剤は１へりｌ−ンＸ−４０５、Ｘ−７０５、等
の名称のもとにシグマケミカル社“から販売されている
界面活性剤であり、名称ｒ４０５Ｊおよびｒ７０５Ｊは
エトキン鎖の平均の長さがそれぞれ４０および７０であ
ることを示している。
トリトンＸ−４０５おＪ：びＸ−７０５１７）ＨＬＢ比
はそれぞれ１７．９および１８．７である［Ｇｒｉｆｆ
ｉｎ、Ｗ、 Ｃ，（１９４９） １．Ｉ Ｓｏｃ、 Ｃ
ｏｓｍｃＬ。
はそれぞれ１７．９および１８．７である［Ｇｒｉｆｆ
ｉｎ、Ｗ、 Ｃ，（１９４９） １．Ｉ Ｓｏｃ、 Ｃ
ｏｓｍｃＬ。
Ｃｈｅｍｌ、１．３１１−３１Ｇ、により明らかにされ
ている］。芳香族含有界面活性剤は１６以上の、好まし
くは１７以上のＨＬＢ比を右することが特に好ましい。
ている］。芳香族含有界面活性剤は１６以上の、好まし
くは１７以上のＨＬＢ比を右することが特に好ましい。
しかし、前述の構造を有するがｌ−Ｉ Ｌ Ｂ数の小さ
い他の洗浄剤で十分な場合もある。
い他の洗浄剤で十分な場合もある。
芳香族洗浄剤は、洗浄剤に）の＋ｆｆ１度が０．０１％
〜１０％、より好ましくは０．０５％〜１％重石である
水溶液中、好ましくは水性緩衝液中で使用されるのが望
ましい。
〜１０％、より好ましくは０．０５％〜１％重石である
水溶液中、好ましくは水性緩衝液中で使用されるのが望
ましい。
非特異結合を減じるタイプ（ｉｉ）の剤は双イオン性界
面活性剤であり、好ましくは１つのアミノ残基と１つの
酸残基（例えば、カルボン酸、リン酸あるいはスルホン
酸残基でもよい）を有する界面活性剤である。好ましく
は、この双イオン性界面活性剤は１つの三級アミノ基と
１つのスルホン酸基を有する。
面活性剤であり、好ましくは１つのアミノ残基と１つの
酸残基（例えば、カルボン酸、リン酸あるいはスルホン
酸残基でもよい）を有する界面活性剤である。好ましく
は、この双イオン性界面活性剤は１つの三級アミノ基と
１つのスルホン酸基を有する。
好適な双イオン性界面活性剤は式ＲＩＲ２Ｎ Ｒ３Ｒ４
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ水素またはＣ□〜Ｃ
アルキル基であり、Ｒ）よＳＯ３置挽置換基１るＣ□〜
Ｃ６アルギル基であり、Ｒ’Ｉｔ Ｃ８”−０２２アル
キル塞である］で示されるものである。
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ水素またはＣ□〜Ｃ
アルキル基であり、Ｒ）よＳＯ３置挽置換基１るＣ□〜
Ｃ６アルギル基であり、Ｒ’Ｉｔ Ｃ８”−０２２アル
キル塞である］で示されるものである。
好ましくはＲおよびＲ２はそれぞれメチルよま
たはエチルであり、さらに好ましくはメチルである。Ｒ
はＳｏ Ｈ置換基を有するＣ −Ｃ６，３３２ 好ましくは０３〜Ｃ４、より好ましくはＣ３アルキル基
である。
はＳｏ Ｈ置換基を有するＣ −Ｃ６，３３２ 好ましくは０３〜Ｃ４、より好ましくはＣ３アルキル基
である。
Ｒ４はＣ１ｏ〜Ｃ１８、好ましくは０１２〜Ｃ１６、さ
らに好ましくはＣ１４アルキル基である。
らに好ましくはＣ１４アルキル基である。
特に好Ｊニジい実施態様にＪ３いて、Ｒ（１３よび１で
２はそれぞれメチルであり、Ｒ３はＣｌ−１２ＣＩ−＋
２０Ｈ２ＳＯ３Ｈであり、Ｒ４は１）−テトラドデシル
である。この種の好適な洗浄剤の例としては５Ｓ−１４
の名称のもとにカルビオケム社から販売されている゛洗
浄剤がある。
２はそれぞれメチルであり、Ｒ３はＣｌ−１２ＣＩ−＋
２０Ｈ２ＳＯ３Ｈであり、Ｒ４は１）−テトラドデシル
である。この種の好適な洗浄剤の例としては５Ｓ−１４
の名称のもとにカルビオケム社から販売されている゛洗
浄剤がある。
双イオン性界面活性剤は水溶液、好ましくは水性緩衝液
の形で、０．０１％−１０％、好ましくは０．０５％〜
１％重量の濃１衰で使用されるのが望ましい。剤（ｉｉ
ｉ ）は多価アニオンの塩を１００ｍＭ以上の濃度で含
有する溶液である。実施する生化学的検出法を妨げなけ
ればどんな塩でもよく、硫酸アンモニウムが特に有用で
あることが判明している。
の形で、０．０１％−１０％、好ましくは０．０５％〜
１％重量の濃１衰で使用されるのが望ましい。剤（ｉｉ
ｉ ）は多価アニオンの塩を１００ｍＭ以上の濃度で含
有する溶液である。実施する生化学的検出法を妨げなけ
ればどんな塩でもよく、硫酸アンモニウムが特に有用で
あることが判明している。
塩は１００ｍＭ以上、好ましくは２００〜８００１１１
Ｍ 、さらに好ましくは３００〜６００ｍ１ｙｌ 、
ｑｑに４００１１１Ｍ 、の濃度で使用される。
Ｍ 、さらに好ましくは３００〜６００ｍ１ｙｌ 、
ｑｑに４００１１１Ｍ 、の濃度で使用される。
高濃度の塩は、前記剤（＋＞または（ｉｉ）の一方また
は両方と一緒に使用すると特に価値がある。
は両方と一緒に使用すると特に価値がある。
双イオン性界面活性剤は、リガンドが結合している表面
が硝酸セルロースまたはニトロセルロースのＪ：うなセ
ルロース表面である場合、特に価値があることが認めら
れている。更に、双イオン性界面活性剤の使用は、本発
明の方法を核酸の検出に適用すると、特に大いにかつ驚
くほど有利となる。
が硝酸セルロースまたはニトロセルロースのＪ：うなセ
ルロース表面である場合、特に価値があることが認めら
れている。更に、双イオン性界面活性剤の使用は、本発
明の方法を核酸の検出に適用すると、特に大いにかつ驚
くほど有利となる。
一つの芳香族残基おにび２０以上のＡキシエチレン残塁
を含有Ｊる界面活性剤を使用した場合の有益な効果は、
リガンドを結合させた表面がポリスチレン、塩化ポリビ
ニル、ポリアミド、等の合成ポリマー（天然生成物由来
のセルロース性物質と反対に）である場合、特に表面が
ポリスチレンである場合に著しい。
を含有Ｊる界面活性剤を使用した場合の有益な効果は、
リガンドを結合させた表面がポリスチレン、塩化ポリビ
ニル、ポリアミド、等の合成ポリマー（天然生成物由来
のセルロース性物質と反対に）である場合、特に表面が
ポリスチレンである場合に著しい。
双イオン性および芳香族含有界面活性剤の両者を使用す
れば成績は更に改善されることが認められている。
れば成績は更に改善されることが認められている。
本発明の方法は、抗リガンドがホスファターゼあるいは
ホスフアターゼの結合体である時、特に有用である。こ
の種の方法においては、検出方法は従来の方法にお１プ
るパラー二トロフ１ニルホスファ−１−のような芳香族
リン酸塩の１１２リン酸化を利用してもよい。しかし、
好ましくはヨーロッパ特許明細書Ｎｏ、８２３００７１
４．８２３０４１１７および米国特許明細書Ｎｏ、４１
１４６３２１に記載の方法を利用づる方がよい。
ホスフアターゼの結合体である時、特に有用である。こ
の種の方法においては、検出方法は従来の方法にお１プ
るパラー二トロフ１ニルホスファ−１−のような芳香族
リン酸塩の１１２リン酸化を利用してもよい。しかし、
好ましくはヨーロッパ特許明細書Ｎｏ、８２３００７１
４．８２３０４１１７および米国特許明細書Ｎｏ、４１
１４６３２１に記載の方法を利用づる方がよい。
抗リガンドの検出は、直接もしくは間接的に、例えば抗
リガンドの二次リガンド／抗リガンド相万作用に対する
効果を測定づることにより行い得る。分別法もまた使用
してもよい。
リガンドの二次リガンド／抗リガンド相万作用に対する
効果を測定づることにより行い得る。分別法もまた使用
してもよい。
好ましい１つの態様にＪ：れば、本発明は、リガンドを
表面に結合させ、ホスファターゼの結合体である抗リガ
ンドを含有する水溶液をそれと接触さＵ゛ることにＪ：
り抗リガンドをリガンドに結合させ、水溶液を結合した
リガンドから分離し、ニコヂンアミドジニクレオチドの
リン酸塩を）１ｊ１リン酸化し、ニコチンアミドジニク
レＡヂドとその還元型が相互変換され、前記タイプ（ｉ
）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ ）の非特異的結合を制
限する剤を利用リ−る環状化学反応の操作により検出可
能な変化もＪ、た生じる、前記環状化学反応を聞夕（？
リ−るニコヂンアミドジニクレオチドを生成させること
により、抗リガンドを検出することから成る生化学的検
出法を提供している。前記２つの］−ロツバ特ｎ明細書
の開示を参考とされたい、。
表面に結合させ、ホスファターゼの結合体である抗リガ
ンドを含有する水溶液をそれと接触さＵ゛ることにＪ：
り抗リガンドをリガンドに結合させ、水溶液を結合した
リガンドから分離し、ニコヂンアミドジニクレオチドの
リン酸塩を）１ｊ１リン酸化し、ニコチンアミドジニク
レＡヂドとその還元型が相互変換され、前記タイプ（ｉ
）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ ）の非特異的結合を制
限する剤を利用リ−る環状化学反応の操作により検出可
能な変化もＪ、た生じる、前記環状化学反応を聞夕（？
リ−るニコヂンアミドジニクレオチドを生成させること
により、抗リガンドを検出することから成る生化学的検
出法を提供している。前記２つの］−ロツバ特ｎ明細書
の開示を参考とされたい、。
本発明は、ヒ１〜または他の咄乳動物からのある物質の
検出に適応させる場合、リンドウィッヂ法を使用すると
右利なことが多い。例えば、ヒトまたは他の動物から抗
原（例えば、酸素、蛋白、ホルモン、細菌抗原、ウィル
ス抗原１等〉を検出したい場合、生物学的液体（例えば
、血液、血清。
検出に適応させる場合、リンドウィッヂ法を使用すると
右利なことが多い。例えば、ヒトまたは他の動物から抗
原（例えば、酸素、蛋白、ホルモン、細菌抗原、ウィル
ス抗原１等〉を検出したい場合、生物学的液体（例えば
、血液、血清。
尿９等）を入手し、この液体を表面と結合している抗体
と接触させることにより、液体中に存イエすると思われ
る抗原を固定することが可能である。
と接触させることにより、液体中に存イエすると思われ
る抗原を固定することが可能である。
表面およびその結合抗体を液体と培養した後、液体を表
面から分離し、表面を洗浄する。抗原と結合し１＝抗体
は、先に述べた表面に結合しているリガンドを含んでい
る。使用した抗体は、多クローン抗体Ｃ・も単クローン
性抗体でもかまわない。
面から分離し、表面を洗浄する。抗原と結合し１＝抗体
は、先に述べた表面に結合しているリガンドを含んでい
る。使用した抗体は、多クローン抗体Ｃ・も単クローン
性抗体でもかまわない。
本発明の更に好ましい態様において、抗原を含有覆る液
体をリガンドが結合している表面と既に接触している溶
液に加える。即ち、抗リガンドは標識抗体（例えばホス
ファターゼて標識された抵抗原）と結合した抗原、ある
いは新しいりガントが形成され、続いてそれが抗リカセ
ント標識抗体と反応づ−ることかできる抗原だ【ノで成
っている。
体をリガンドが結合している表面と既に接触している溶
液に加える。即ち、抗リガンドは標識抗体（例えばホス
ファターゼて標識された抵抗原）と結合した抗原、ある
いは新しいりガントが形成され、続いてそれが抗リカセ
ント標識抗体と反応づ−ることかできる抗原だ【ノで成
っている。
本発明の方法は、リガンドが結合している表面を右づ−
る検査液を含有する容器（９ｒましく１．未マルチウエ
ルテストプレー１へ）おＪ：び試薬溶液を含有する少な
くとも１つ以上の容器から成る予め調整された検査キッ
トを利用してｉｊってｂにい。非特異結合を制限する剤
（まキット中の溶液内に組み合わせてもよく、あるいは
最初の容器を供給する前にその表面を処理するのに使用
しておいてもよい。
る検査液を含有する容器（９ｒましく１．未マルチウエ
ルテストプレー１へ）おＪ：び試薬溶液を含有する少な
くとも１つ以上の容器から成る予め調整された検査キッ
トを利用してｉｊってｂにい。非特異結合を制限する剤
（まキット中の溶液内に組み合わせてもよく、あるいは
最初の容器を供給する前にその表面を処理するのに使用
しておいてもよい。
従って、本発明の更なる態様において、試薬溶液または
洗浄液が （ｉ）１個の芳香族残塁を含有し、１６以上のＦ（ＬＢ
数を有づ−る界面活性剤、 （ｉｔ）双イオン性界面活性剤、または（ｉｉｉ ）多
価アニオンの塩を１００ｍＭ以上の濃度で含有する溶液 ぐある、抗リガンド等の物質の非特異結合を制限づる剤
を含有づ−ること、あるいは、表面がその調整中にその
種の剤で処理されることを１シ■徴とする、使用中に検
査液で覆われる表面をその中に有し、その表面に結合し
に対応する抗リガンドと結合するようにされた第１のリ
ガンドを右Ｊる検査液を含有する第１の容器、 前記第１リガンドと結合した抗リガンドと結合するれよ
うにされた試薬溶液を含有Ｊる第２の容器、 ｄ５よび、所望であれば前記第１容器を洗浄でるだめの
洗浄液を含有リーる容器 から成る生物学的検査キラ１−が提供される。
洗浄液が （ｉ）１個の芳香族残塁を含有し、１６以上のＦ（ＬＢ
数を有づ−る界面活性剤、 （ｉｔ）双イオン性界面活性剤、または（ｉｉｉ ）多
価アニオンの塩を１００ｍＭ以上の濃度で含有する溶液 ぐある、抗リガンド等の物質の非特異結合を制限づる剤
を含有づ−ること、あるいは、表面がその調整中にその
種の剤で処理されることを１シ■徴とする、使用中に検
査液で覆われる表面をその中に有し、その表面に結合し
に対応する抗リガンドと結合するようにされた第１のリ
ガンドを右Ｊる検査液を含有する第１の容器、 前記第１リガンドと結合した抗リガンドと結合するれよ
うにされた試薬溶液を含有Ｊる第２の容器、 ｄ５よび、所望であれば前記第１容器を洗浄でるだめの
洗浄液を含有リーる容器 から成る生物学的検査キラ１−が提供される。
本発明は以下の、一般に免疫検定法と関連する全ての実
施例に説明されてａ５す、先ず、免役検定手段を行なう
方法の一般的適用についてｊホへる。
施例に説明されてａ５す、先ず、免役検定手段を行なう
方法の一般的適用についてｊホへる。
以下は下記実施例で使用されるｌｊ法の幾つかの変法の
基礎を形成する検定法の一例である。
基礎を形成する検定法の一例である。
ヒ１−絨毛性コナト１〜ロビン（＋−Ｉ ＣＧ ＞に対
づる単クローン性抗体はセロノダイアクグノステイクス
（＝１−ド１２／１７おにび１１．／６）から入手した
。ポリスチレンマイクロアレート（ヌンクイムノプレー
ト）を２００ｍＭ炭酸す１〜リウム（ｌ１ｔｉ ９ 。
づる単クローン性抗体はセロノダイアクグノステイクス
（＝１−ド１２／１７おにび１１．／６）から入手した
。ポリスチレンマイクロアレート（ヌンクイムノプレー
ト）を２００ｍＭ炭酸す１〜リウム（ｌ１ｔｉ ９ 。
Ｏ）中５ ｒｎａ／ ｌ溶液をプレートの各ウェルにビ
ペツ１〜で分注し、−晩室温に放置し、プレートを空に
し、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５％
ラクトースの０．２５ｍ１を加え３回洗浄することによ
り、抗体ｊ１．／１６で被覆した（１）Ｈ７，５）。プ
レートは使用前バー乾した。
ペツ１〜で分注し、−晩室温に放置し、プレートを空に
し、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５％
ラクトースの０．２５ｍ１を加え３回洗浄することによ
り、抗体ｊ１．／１６で被覆した（１）Ｈ７，５）。プ
レートは使用前バー乾した。
を八本および標・０の１整法
アルカリホスファターゼと二次単クローン性抗体（セロ
ノ１２／１７）の結合体は、該抗体をチＡ化し、続いて
それをアルカリホスファターゼのマレイミド誘導体と反
応させることにより作成した。未反応アルカリホスファ
ターゼおよび抗体は高圧ゲル滅過（ＴＳＫカラム５Ｗ４
０００）により除去した。
ノ１２／１７）の結合体は、該抗体をチＡ化し、続いて
それをアルカリホスファターゼのマレイミド誘導体と反
応させることにより作成した。未反応アルカリホスファ
ターゼおよび抗体は高圧ゲル滅過（ＴＳＫカラム５Ｗ４
０００）により除去した。
結合体は、１０ｍＭ１−リス、（１）Ｉ−１７，５＞
１ｍＭＭｇＣｌ 、０．１％アジドナトリウムおよび１
％ＢＳＡを含有づる試験緩衝液に約ｉｎｇ／ｍｌの濃度
になるよう希釈した。Ｏおよび１ｍ１Ｕ／ｍ！含有の標
準！−Ｉ ＣＧ溶液を同じ緩衝液を用い調整した。塩お
よび洗浄剤のＨＣＧ免疫検定に対する効果は関係成分を
結合体溶液に加えることにより測定した。測定は全て２
回行い、得られた測定値の平均をすべての計算に使用し
た。
１ｍＭＭｇＣｌ 、０．１％アジドナトリウムおよび１
％ＢＳＡを含有づる試験緩衝液に約ｉｎｇ／ｍｌの濃度
になるよう希釈した。Ｏおよび１ｍ１Ｕ／ｍ！含有の標
準！−Ｉ ＣＧ溶液を同じ緩衝液を用い調整した。塩お
よび洗浄剤のＨＣＧ免疫検定に対する効果は関係成分を
結合体溶液に加えることにより測定した。測定は全て２
回行い、得られた測定値の平均をすべての計算に使用し
た。
ｉυ」−
結合体０．０７５ｍ１をマイク［ｌブＬ／ −１−（７
）被覆。
）被覆。
ウェルにピベシトで分注し、次にＯまたは１ｍＩＵ Ｈ
ＣＧ標準液０．０２５ｍ１を加えた。結合体を含まない
試験緩衝液０．０７５１１１１．続いてＨＣＧ標準液０
．０２５ｍ１をウェルにピペツ１〜で分注し試薬ブラン
クの測定を行った。
ＣＧ標準液０．０２５ｍ１を加えた。結合体を含まない
試験緩衝液０．０７５１１１１．続いてＨＣＧ標準液０
．０２５ｍ１をウェルにピペツ１〜で分注し試薬ブラン
クの測定を行った。
プレートは空温で１時間培養し、つ↓ルは中身を空け、
試験緩衝液０．２５ｍ１で４回洗浄した。
試験緩衝液０．２５ｍ１で４回洗浄した。
残存するアリカリホスファターゼは以下の様にしで測定
した。５０ｍＭジエタンノールアミン（Ｉｌｌ−１９，
５＞中０．１ｍＭニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ドリン酸（ＮＡＤＰ）の０．１ｍ１を加え、２０分後さ
らに、アル：１−ルデヒドロゲナーゼ０．２ｎ＋ｇ／ｍ
ｌ、シアフＡラーゼ０．１５Ｉｌ１ｇ、／ｍｌ、ｐ−ヨ
ードニトロデ１〜ラゾリウムバイＡレット０．５５ｍ
Ｍ、 エタノール４％（Ｖ ／Ｖ ）、リン酸水素ナト
リウム緩Ｗｆｉ液２５ｍＭ（＋）Ｈ７゜２）を含有する
溶液０．２０ｍ１を加えた。更に１０分後０．２１ＶＮ
ｊ！Ｉ酸０．０５０Ｉｎ’Ｈｒ加／Ｌ ？；） （！：
発りは停止した。各ウェルの４９２ｍ Ｍ （Ａ４９
２ｎｍ）での吸光度はマルヂスキ１ｒンＭＣスベクトロ
フＡ］・メリーのウェルブレー１〜リーダーを介して読
み取った。
した。５０ｍＭジエタンノールアミン（Ｉｌｌ−１９，
５＞中０．１ｍＭニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ドリン酸（ＮＡＤＰ）の０．１ｍ１を加え、２０分後さ
らに、アル：１−ルデヒドロゲナーゼ０．２ｎ＋ｇ／ｍ
ｌ、シアフＡラーゼ０．１５Ｉｌ１ｇ、／ｍｌ、ｐ−ヨ
ードニトロデ１〜ラゾリウムバイＡレット０．５５ｍ
Ｍ、 エタノール４％（Ｖ ／Ｖ ）、リン酸水素ナト
リウム緩Ｗｆｉ液２５ｍＭ（＋）Ｈ７゜２）を含有する
溶液０．２０ｍ１を加えた。更に１０分後０．２１ＶＮ
ｊ！Ｉ酸０．０５０Ｉｎ’Ｈｒ加／Ｌ ？；） （！：
発りは停止した。各ウェルの４９２ｍ Ｍ （Ａ４９
２ｎｍ）での吸光度はマルヂスキ１ｒンＭＣスベクトロ
フＡ］・メリーのウェルブレー１〜リーダーを介して読
み取った。
本検定法におけるシグナルは、０おＪ：び１＋ｎ１ｔＪ
ＨＣＧ標準液ど結合体溶液を最初から含有するウェル
によって得られる吸光度の差である。
ＨＣＧ標準液ど結合体溶液を最初から含有するウェル
によって得られる吸光度の差である。
本検定法にＪ５りるノイズ番よｏｍｔｕと試薬ブランク
間の吸光度の差である。
間の吸光度の差である。
１糺乱１
高濃度の硫酸アンモニウムの添加の影響を次の様にして
調べた。イムノアッセイは前記方法に従って行った。３
種の緩衝液を使用した。第１番目は何ら添加しなかった
もの、２番目は緩衝液中に４００１１１Ｍ （Ｎ ｌ−
ｌ ４）２Ｓ Ｏ４を加えたもの、３番目は４００ｍＭ
Ｎ ａ Ｃｌを加えたものである。
調べた。イムノアッセイは前記方法に従って行った。３
種の緩衝液を使用した。第１番目は何ら添加しなかった
もの、２番目は緩衝液中に４００１１１Ｍ （Ｎ ｌ−
ｌ ４）２Ｓ Ｏ４を加えたもの、３番目は４００ｍＭ
Ｎ ａ Ｃｌを加えたものである。
ノイズおよびシグナル／ノイズ比は各側も測定し、結果
は表１に示した。
は表１に示した。
Ｋ−」
４００１１１Ｍ硫酸アンモニ硫酸アンモニウム魚添加お
Ｊ：び同ｍの塩化ナトリュウム添加の場合と比べて著し
いシグナル／ノイズ比の増大を来たすことがわかる。
Ｊ：び同ｍの塩化ナトリュウム添加の場合と比べて著し
いシグナル／ノイズ比の増大を来たすことがわかる。
丸釦」ム
本実施例は、トリトンＸ−４０５およびＸ−７０５がア
ルカリホスファターゼ結合体の被覆ポリスチレンテスト
プレートとの非特異的結合を減する効果を示すものであ
る。ウシＩｇＧは前記ポリスチレンプレートを被、覆づ
゛るのに使用したが、５０１１１Ｍ炭ｆｉ［緩衝液（＋
１）１９． Ｏ） ＦＩＪ２４１ ／ｍｌ濃度で４５分
間使用した。プレー１へは１０ｍＭリン酸緩衝液、１５
０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．１％洗浄剤（トウイン
２０）を含有り゛る洗浄液で４回洗浄した。
ルカリホスファターゼ結合体の被覆ポリスチレンテスト
プレートとの非特異的結合を減する効果を示すものであ
る。ウシＩｇＧは前記ポリスチレンプレートを被、覆づ
゛るのに使用したが、５０１１１Ｍ炭ｆｉ［緩衝液（＋
１）１９． Ｏ） ＦＩＪ２４１ ／ｍｌ濃度で４５分
間使用した。プレー１へは１０ｍＭリン酸緩衝液、１５
０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．１％洗浄剤（トウイン
２０）を含有り゛る洗浄液で４回洗浄した。
結合体はウザギ抗ヒト前立腺酸小スファターゼ（マイル
レス）およびアルカリボスフ７ターゼから０．１％（Ｖ
／Ｖ ）グルタルアルデヒドを含有するリン酸緩衝食塩
液（Ｐ１３Ｓ）（ｐｌ−１７，２）中で２０℃で４時間
項ｆａ＋Ｊることにより調整した。
レス）およびアルカリボスフ７ターゼから０．１％（Ｖ
／Ｖ ）グルタルアルデヒドを含有するリン酸緩衝食塩
液（Ｐ１３Ｓ）（ｐｌ−１７，２）中で２０℃で４時間
項ｆａ＋Ｊることにより調整した。
結合体はその後０．１％ＢＳＡおよび０．１ｍＭＭｇＣ
１２を含有づ−るＰ Ｂ Ｓ中に希釈した。この溶液の
一部をＰＢＳ、 １ｍ Ｍｌｖｌｏ Ｃ１２および表２
に示す試験添加物を含有Ｊる緩衝液に、各試験添加物あ
たり４秤類の濃度で加えた。即ち、５種の添加物および
添加物を含まない対照それぞれについて４種の試験液を
用意した。各試験溶液の０゜０５０ｍ１を被覆プレート
のウェルにピペットで取り、２０℃で１．５時間培養し
た。ウェルはその後空にし、０．１％ｖ／ｖ洗浄剤（１
〜ウイン２０＞を含有するＰＢＳ Ｏ，２５ｍｌで４回
洗浄した。結合した結合体を実施例１と同様に比色法に
Ｊ、り測定した。この場合検定の成分間に特異的相互作
用は認められないので、試薬ブランク以上の吸光度の増
加は結合体の非特異的結合の尺度（即ち、ノイズ）であ
った。
１２を含有づ−るＰ Ｂ Ｓ中に希釈した。この溶液の
一部をＰＢＳ、 １ｍ Ｍｌｖｌｏ Ｃ１２および表２
に示す試験添加物を含有Ｊる緩衝液に、各試験添加物あ
たり４秤類の濃度で加えた。即ち、５種の添加物および
添加物を含まない対照それぞれについて４種の試験液を
用意した。各試験溶液の０゜０５０ｍ１を被覆プレート
のウェルにピペットで取り、２０℃で１．５時間培養し
た。ウェルはその後空にし、０．１％ｖ／ｖ洗浄剤（１
〜ウイン２０＞を含有するＰＢＳ Ｏ，２５ｍｌで４回
洗浄した。結合した結合体を実施例１と同様に比色法に
Ｊ、り測定した。この場合検定の成分間に特異的相互作
用は認められないので、試薬ブランク以上の吸光度の増
加は結合体の非特異的結合の尺度（即ち、ノイズ）であ
った。
結果は表２に示す。
人−」し
延−１−績ｊ」（１二〇−Δ ４９５ ノイズ対 照
５ ０．２４０ ０．１３４ １６ ０．５２４ ０．４０８ ６２．５ １．２７５ １．１５９ ５００ １．３６６ １．２５０ １％１、す（、ン ５ ０．１５５ ０．０３９５００
１．３１９ ０．２０３ １％トリトン ５ ．０．１１．６ ０．０００３０％
ブタノール ５０・３４５０・２２９１６ ０．４７０
０．３５４ ６２．５ １．３２６ １．２１０ ５００ １．３６５ １．２４９ ポリビニル ５ ’ ０．２３１ ０．１１５第４欄の
数値から、反応混合物中に１へり１−ンＸ−４０５が存
在すれば結合体と試験プレー１へとの非特異的結合は有
意に減少することが明らかである。種々の他の添加物、
特に低分子（イ）１′・リド・ンＸ−ｉ ｏ’ｏ 、は
非特異的結合にほとんど作用を及ばΔない。
５ ０．２４０ ０．１３４ １６ ０．５２４ ０．４０８ ６２．５ １．２７５ １．１５９ ５００ １．３６６ １．２５０ １％１、す（、ン ５ ０．１５５ ０．０３９５００
１．３１９ ０．２０３ １％トリトン ５ ．０．１１．６ ０．０００３０％
ブタノール ５０・３４５０・２２９１６ ０．４７０
０．３５４ ６２．５ １．３２６ １．２１０ ５００ １．３６５ １．２４９ ポリビニル ５ ’ ０．２３１ ０．１１５第４欄の
数値から、反応混合物中に１へり１−ンＸ−４０５が存
在すれば結合体と試験プレー１へとの非特異的結合は有
意に減少することが明らかである。種々の他の添加物、
特に低分子（イ）１′・リド・ンＸ−ｉ ｏ’ｏ 、は
非特異的結合にほとんど作用を及ばΔない。
実施例２はトリ１〜ンＸ−７０５洗浄剤および１〜ウイ
ン２０洗浄剤を添加物として使用し繰り返し行った。ト
リトンＸ−７０５は１〜す１−ンＸ−４０５で示される
のと同様以上に非特異結合を減少さＵた。１ヘウイン２
０を用いて得られた結果は１ヘリ１〜ン×−１００で得
られたものと同様であった。
ン２０洗浄剤を添加物として使用し繰り返し行った。ト
リトンＸ−７０５は１〜す１−ンＸ−４０５で示される
のと同様以上に非特異結合を減少さＵた。１ヘウイン２
０を用いて得られた結果は１ヘリ１〜ン×−１００で得
られたものと同様であった。
即ち、非特異的結合をほとんどあるいは全く減じなかっ
た。
た。
実ｊＡｑ例３
本実施例はマイクロプレー１−の調整にお【ノる１へリ
ドンＸ−４０５の使用を示づ゛もの（゛あり、また実施
例２において得られたのと同様の非１ｈ異的結合の減少
を示づものである。
ドンＸ−４０５の使用を示づ゛もの（゛あり、また実施
例２において得られたのと同様の非１ｈ異的結合の減少
を示づものである。
プレートを実施例２のプレートと同様にして調整した。
プレートを使用する２０分前、トリトンＸ−４０５の５
％ｖ／ｖ水溶液０．１ｍｌをウェルに加えた。プレー１
−は２０℃で２０分間放置し、過剰分は吸引した。実施
例２と同様に結合体（添加物を含まない）をつ１ルに加
え、２０℃で３０分間培養した。その後ブレーＩ−を実
施例２と同様にリン酸７食塩液緩衝液で４回洗浄し、比
色測定を実施例２と同様に行った。対照実験は１〜リド
ンＸ−４０５で前培養することなく行った。結果は表３
に示す。
％ｖ／ｖ水溶液０．１ｍｌをウェルに加えた。プレー１
−は２０℃で２０分間放置し、過剰分は吸引した。実施
例２と同様に結合体（添加物を含まない）をつ１ルに加
え、２０℃で３０分間培養した。その後ブレーＩ−を実
施例２と同様にリン酸７食塩液緩衝液で４回洗浄し、比
色測定を実施例２と同様に行った。対照実験は１〜リド
ンＸ−４０５で前培養することなく行った。結果は表３
に示す。
瓦１
対照 ５ ０．２７６ ０．１０６
（つ１ルにトリトンＸ−４０５２００，７３８０，６［
３２を加えない） Ｘ−４０５で前培養 ５ ０．１６７ ０．０００２０
０．２３９ ０．００９ 試薬ブランク °０．．．１７０ ボリスヂレン表面をトリトンＸ−４０５と前培養すると
、反応溶液中に１〜す１〜ンＸ−４０５を加えた場合と
同様にノイズ減少を改善することが明らかである。
３２を加えない） Ｘ−４０５で前培養 ５ ０．１６７ ０．０００２０
０．２３９ ０．００９ 試薬ブランク °０．．．１７０ ボリスヂレン表面をトリトンＸ−４０５と前培養すると
、反応溶液中に１〜す１〜ンＸ−４０５を加えた場合と
同様にノイズ減少を改善することが明らかである。
火乃１ｕＪ ４゜
実施例２ど同様に結合体と柚々瀧度のトリトンＸ−４０
５を含有する試験溶液を実施例２と同様に調整した。試
験溶液は１時間放置し、その後結合体８０ｎｇをそれぞ
れ含有する４０μＩを、新しい非被覆ヌンクボリスチレ
ンデストプレー１〜のウェルに加えた。プレートを１時
間培養し、ＰＢＳで３回洗浄し、プレートに結合した結
合体のｍを実施例１と同様にして測定した。蛋白はあら
かじめプレートに結合させていなかったので、これはト
リＩ・ンｘ −４，０５が、プレー１〜に結合した蛋白
よりむしろポリスチレンとの結合体の非特異的結合に影
響する程度の尺度である。種々の濃度で得られた吸光度
およびノイズ値は表４に示′ｒＪ。
５を含有する試験溶液を実施例２と同様に調整した。試
験溶液は１時間放置し、その後結合体８０ｎｇをそれぞ
れ含有する４０μＩを、新しい非被覆ヌンクボリスチレ
ンデストプレー１〜のウェルに加えた。プレートを１時
間培養し、ＰＢＳで３回洗浄し、プレートに結合した結
合体のｍを実施例１と同様にして測定した。蛋白はあら
かじめプレートに結合させていなかったので、これはト
リＩ・ンｘ −４，０５が、プレー１〜に結合した蛋白
よりむしろポリスチレンとの結合体の非特異的結合に影
響する程度の尺度である。種々の濃度で得られた吸光度
およびノイズ値は表４に示′ｒＪ。
去−４
墓ｊ Ｋ浬謳エヱヱ上 Ａ４９５！１ｍ ムグ対照 ０
０．５９８ ０．５２８ ＋トリトンＸ−４０５０，１０，２９２０，２２２０、
，５０，１９５０，１２５ ０，１００，１２２０，０５２ ０，５００，０９６０，０２６ １，００，０４００，０００ ２，００，０８１０，０１１ 試薬ブランク ０．０７０ 種々の濃度で生じたノイズから、１ヘリトンＸ−４０５
を加えると非特異的結合または［ノイズ」が有意に減じ
ることは明らかである。
０．５９８ ０．５２８ ＋トリトンＸ−４０５０，１０，２９２０，２２２０、
，５０，１９５０，１２５ ０，１００，１２２０，０５２ ０，５００，０９６０，０２６ １，００，０４００，０００ ２，００，０８１０，０１１ 試薬ブランク ０．０７０ 種々の濃度で生じたノイズから、１ヘリトンＸ−４０５
を加えると非特異的結合または［ノイズ」が有意に減じ
ることは明らかである。
１」１足
実施例１と同様の検出法にＪ３＆）るノイズを減する種
々洗浄剤の有効性を検討した。ポリスチレンテストプレ
ートを実施例１と同様に調整し、免疫検定を前記の一般
的方法に従って行った。
々洗浄剤の有効性を検討した。ポリスチレンテストプレ
ートを実施例１と同様に調整し、免疫検定を前記の一般
的方法に従って行った。
種々洗浄剤の非特異結合減少に対する効果を、種々洗浄
剤の０．１％Ｖ／Ｖを結合体溶液に加えることにより検
討した。使用した洗浄剤は以下の通りであった。
剤の０．１％Ｖ／Ｖを結合体溶液に加えることにより検
討した。使用した洗浄剤は以下の通りであった。
Ａ、（トリトンＸ−７０５、ポリオキシ１チレンｐ−ｔ
−オクチルフェノール洗浄剤、シグマケミカル社製−１
−ｌＬ’Ｂ数１８．７）Ｂ、ト！Ｊ Ｉ−ンＸ １００
（Ａニ同Ｌ；−ＨＬＢ数１３．５） Ｃ，ｌ−！、Ｉトン×４０５（Ａに同じ一ト１１［３数
１７．９） Ｄ、 ｌ−リドンＮ１０１（Ａに同じ−１−ｌＬ’Ｂ数
１３．４） Ｆ、カルビオケム５Ｂ−１４（双イオン性洗浄剤、３−
（ブトラブシルジメチルアン七ニウム）−１−プロパン
ースルボナ−１〜）Ｆ、カブス（双イオン性洗浄剤１．
ｌ−１’（３−コラミドプロピル）ジメヂルー）′ンモ
ニア」＝１−ブロバシースルホナ−１へ） Ｇ、 トウイン２０（ソリピタンモノラウラート〉−Ｈ
Ｌ Ｂ数１６．７ １」、ルブロールＬＸ（、脂肪酸のエブーレン綜合物）
結合体溶液はまた４００１１１Ｍ硫酸アンモニウムを含
有していた。
−オクチルフェノール洗浄剤、シグマケミカル社製−１
−ｌＬ’Ｂ数１８．７）Ｂ、ト！Ｊ Ｉ−ンＸ １００
（Ａニ同Ｌ；−ＨＬＢ数１３．５） Ｃ，ｌ−！、Ｉトン×４０５（Ａに同じ一ト１１［３数
１７．９） Ｄ、 ｌ−リドンＮ１０１（Ａに同じ−１−ｌＬ’Ｂ数
１３．４） Ｆ、カルビオケム５Ｂ−１４（双イオン性洗浄剤、３−
（ブトラブシルジメチルアン七ニウム）−１−プロパン
ースルボナ−１〜）Ｆ、カブス（双イオン性洗浄剤１．
ｌ−１’（３−コラミドプロピル）ジメヂルー）′ンモ
ニア」＝１−ブロバシースルホナ−１へ） Ｇ、 トウイン２０（ソリピタンモノラウラート〉−Ｈ
Ｌ Ｂ数１６．７ １」、ルブロールＬＸ（、脂肪酸のエブーレン綜合物）
結合体溶液はまた４００１１１Ｍ硫酸アンモニウムを含
有していた。
ノイズＪ５よびシグナル／ノイズ比は前記と同様にして
測定した。結果は表５に示す。
測定した。結果は表５に示す。
０、０５２ ２．５
ルブロールＬＸ Ｏ，０９３１，２
釆」Ｕ１遥−
コレラ毒素に対する抗体の検出を改善する５Ｂ１４の効
果を以下の様にして検問した。
果を以下の様にして検問した。
リンプロ社製のポリスチレンマイクロプレー１−を、炭
酸緩衝液中で毒素溶液と種ノＺ組み合わしｒ：１晩培養
りることにより、コレラ毒素で被覆した。
酸緩衝液中で毒素溶液と種ノＺ組み合わしｒ：１晩培養
りることにより、コレラ毒素で被覆した。
プレー１−は空にし、ウェルは５％（Ｗ／Ｖ）ラフ１〜
− ス、０．５％いｖ／ｖ）ＢＳＡ、０．１％１〜す１
〜ン×７０５を含有する溶液（ｐｌ−１７，５）０゜２
５ｍ１で３回洗浄した。抗毒素抗体標準液は、市販のウ
ザギ抗毒素抗体０．０１ｍ１を、トリス／ＨＣｌ （１
）ｆ−１７，’５）５Ｏｎ＋ Ｍ、３％いｖ／ｖ）ＢＳ
Ａ、０．１％１〜リドンＸ７０５を含有する標準緩衝液
１０ｍ１に加えることにＪζり調整した。抗１１ｊ素抗
体標準液または標準緩衝液のみの０．０８０１１１１を
プレー１〜に加え、３７℃で３０分間ｊ８養した。
− ス、０．５％いｖ／ｖ）ＢＳＡ、０．１％１〜す１
〜ン×７０５を含有する溶液（ｐｌ−１７，５）０゜２
５ｍ１で３回洗浄した。抗毒素抗体標準液は、市販のウ
ザギ抗毒素抗体０．０１ｍ１を、トリス／ＨＣｌ （１
）ｆ−１７，’５）５Ｏｎ＋ Ｍ、３％いｖ／ｖ）ＢＳ
Ａ、０．１％１〜リドンＸ７０５を含有する標準緩衝液
１０ｍ１に加えることにＪζり調整した。抗１１ｊ素抗
体標準液または標準緩衝液のみの０．０８０１１１１を
プレー１〜に加え、３７℃で３０分間ｊ８養した。
その後プレー１〜は空にし、標準ｍ別液で３回洗浄した
。結合体く市販の抗つザギアルカリホスファターゼの標
準緩衝液または標準緩衝液＋０．１％Ｓ Ｂ １ ／Ｉ
「１］１／ １０００ ＠新液）Ｏ１０８０１をウェル
にピペットで分注し、３７℃で１１１．’１間ｊ８養し
た。結合体を含まないヌ］照でも行った。プレートは空
にし、前記のように洗浄し、結合した結合体を実施例１
と同様に測定した。族６八に得られた吸光度（２回の平
均）を示り゛。
。結合体く市販の抗つザギアルカリホスファターゼの標
準緩衝液または標準緩衝液＋０．１％Ｓ Ｂ １ ／Ｉ
「１］１／ １０００ ＠新液）Ｏ１０８０１をウェル
にピペットで分注し、３７℃で１１１．’１間ｊ８養し
た。結合体を含まないヌ］照でも行った。プレートは空
にし、前記のように洗浄し、結合した結合体を実施例１
と同様に測定した。族６八に得られた吸光度（２回の平
均）を示り゛。
表６Ａ
毒素潤度 ５Ｂ１４無添加 ５Ｂ１４添加（ｍｇ／ｌ
） 抗毒素含有 抗毒素非含有 抗毒素含有 抗毒素非
含有（シグナル （ノイズ） （シフ゛）ル （ノイズ
）＋ノイズ） ４−ノイズ） ２．７７２ １．１２３ ２．４＋１０ ０．３１３１
、９５３ ０．８１’Ｊ １ｏ４５ Ｑ、 ２０５１
、２３２ ０．４５４ ０．５４（ｌ ０．１２９０、
４７８ ０．５３１ ０．１８０ ０．２５３表６Ｂに
、Ｓ［３１４添加の有無での種々の毒素被覆濃度で得ら
れたシグナル／ノイズ比を示１−０表６１３ 毒素潤度 シグナル／ノイズ （μｇ／ｍｌ） ５Ｂ−１４無添加 ５Ｂ−１４添加１
．４６ ６．６９ １、３８ ４．、０９ １７１ Ａ １Ｑ 実施例７ 乳汁中プロゲステロンの検出はウシの発情のマーカーと
して使用することができる。乳汁Ｅは非特異的にポリス
チレン表面に結合づるノフルカリホスフ７ターゼを大量
に含んでいる。本実施例はこのＪ：うな非特異的結合が
本発明の方法を使用りることにより低下することを示す
ものである。
） 抗毒素含有 抗毒素非含有 抗毒素含有 抗毒素非
含有（シグナル （ノイズ） （シフ゛）ル （ノイズ
）＋ノイズ） ４−ノイズ） ２．７７２ １．１２３ ２．４＋１０ ０．３１３１
、９５３ ０．８１’Ｊ １ｏ４５ Ｑ、 ２０５１
、２３２ ０．４５４ ０．５４（ｌ ０．１２９０、
４７８ ０．５３１ ０．１８０ ０．２５３表６Ｂに
、Ｓ［３１４添加の有無での種々の毒素被覆濃度で得ら
れたシグナル／ノイズ比を示１−０表６１３ 毒素潤度 シグナル／ノイズ （μｇ／ｍｌ） ５Ｂ−１４無添加 ５Ｂ−１４添加１
．４６ ６．６９ １、３８ ４．、０９ １７１ Ａ １Ｑ 実施例７ 乳汁中プロゲステロンの検出はウシの発情のマーカーと
して使用することができる。乳汁Ｅは非特異的にポリス
チレン表面に結合づるノフルカリホスフ７ターゼを大量
に含んでいる。本実施例はこのＪ：うな非特異的結合が
本発明の方法を使用りることにより低下することを示す
ものである。
結合体を１７α−とドＤキシブログスラロンおよびアル
カリホスアターゼから調整した。試料はその結合体と表
７に示す種々の添加物からｉｉｌ！ｊ整し人：、、３１
３ １２及Ｓ １３−Ｉ ＯＬ、Ｌ Ｓ １３−１ ’
ｌの１ノ゛シル８３ ｊ；びヘキザデシル同族体である
。
カリホスアターゼから調整した。試料はその結合体と表
７に示す種々の添加物からｉｉｌ！ｊ整し人：、、３１
３ １２及Ｓ １３−Ｉ ＯＬ、Ｌ Ｓ １３−１ ’
ｌの１ノ゛シル８３ ｊ；びヘキザデシル同族体である
。
正常フレシアン牛から得た乳汁０．０１ｍ１をきれいな
ヌンク社製ポリスチレンマイクロプレー１〜中の各試料
Ｑ、２ｍｌに加え、プレー１〜を２２℃で３゜５ＩＩ８
間培養した。次にウェルを１００ｍＭ １〜リス（ｐＨ
８，５）おＪ、び０．１％１〜す１〜ンＸ−７Ｑ５を含
有り−る緩衝液で４回洗浄した。残存Ｊるアルカリホス
ファターゼ活性は実施例１と同様にして測定した。
ヌンク社製ポリスチレンマイクロプレー１〜中の各試料
Ｑ、２ｍｌに加え、プレー１〜を２２℃で３゜５ＩＩ８
間培養した。次にウェルを１００ｍＭ １〜リス（ｐＨ
８，５）おＪ、び０．１％１〜す１〜ンＸ−７Ｑ５を含
有り−る緩衝液で４回洗浄した。残存Ｊるアルカリホス
ファターゼ活性は実施例１と同様にして測定した。
ノイズ読取りは８回の読取りを平均した。結果は表７に
示Ｊ０ 瓦ユ 紳矧脛戚 懸回 Ｌａ Ｏ，１％トリトンＸ−７０５ ＳＢ−１２および５Ｓ−１６、および、さらに著しく、
５Ｂ−１４は、混入するアルカリ小スノアターピがポリ
スチレン表面に結合Ｊ゛るのを明らかに妨げることがで
きる。即ち、それらは乳汁中プロゲスゾロンを測定する
ＥＬＩＳＡシステムにＪ３けるノイズを減じる。
示Ｊ０ 瓦ユ 紳矧脛戚 懸回 Ｌａ Ｏ，１％トリトンＸ−７０５ ＳＢ−１２および５Ｓ−１６、および、さらに著しく、
５Ｂ−１４は、混入するアルカリ小スノアターピがポリ
スチレン表面に結合Ｊ゛るのを明らかに妨げることがで
きる。即ち、それらは乳汁中プロゲスゾロンを測定する
ＥＬＩＳＡシステムにＪ３けるノイズを減じる。
友１１化
検査プレー１−および下記を含有りるビンから成る検査
キットを調整した： １、ＮＡＤＰ （０，００１ｍ Ｍ ：凍結乾燥）２、
基質希釈剤： １ｍ ＭＭｇＣｌ□おにび０゜１％アジ
ドナトリウムを含有−りるジェタノールアミン緩衝液（
５０ｍ Ｍ１．１）Ｈ９，５＞１０ｍ１゜ ３３、増幅剤：ｌＩｍＱアルコールデヒドＬ１グナーＬ
ａ３よび３ｎｇジアフＡラーピ、凍結乾燥４、増幅剤希
釈剤：０．５５１１１Ｍ＋）−ヨードニトロデ１−ラゾ
リウムバイオレツ１−Ｊ３よび４％エタノールを含有す
るリン酸す１〜リウム緩衝液（２５ｍ ＭＳ ｕ ｌ−
１７，２＞２０ｍ１゜５、停止溶液：０．２Ｍ硫酸 ６．１１１１縮洗浄緩衝剤：１．２Ｍ硫酸アンモニウム
、１２０＋＋＋Ｍｌ−リス（ｌｌ＋−１８，０）、０．
２％トリトンＸ−７０５，０，２％５Ｂ−１４おにび０
．１％アジドナトリウム７、結合体： ４００１１１
Ｍ硫酸ノＩン七ニウム、０゜１％トリトンＸ−７０５，
０，１％５Ｂ−１４，８％ＢＳＡ、１００ｍ ｔｖｌリ
ス（ｏ １−１７．５） 、１１１１ ＭＭ（Ｉ ＣＩ
□ 、０．１１１１ＭＺＩＩＣＩ 、１０％新生子牛血
清、０゜１％アジドナトリウムの９ｍｌ、Ｔ−Ｓ Ｈに
対する単クーロン性抗体（ヒロノ、Ｄ８８）を使用し実
施例１と同様にして調整した結合体の１／３０００希釈
液 被覆プレー１へは、抗体が王５１−１に対する単り−Ｏ
ン性抗体（セロノ、Ｄ４９．２＋ｎｇ／ｌ）であり、□
洗浄液がＢＳＡの代りに分解ピラチン（０，５％ｒＮ
υハへｒ ハ１）＾ｒ％ Ａ ハ１−Ｌ Ａ ７１ Ｎ
ｌ’ （／１自／Ｊ’ゼラチン）１．０．０５％トウイ
ン２０および０゜０１％チオメルザールの溶液〉を含有
していたこと以外、実施例１と同様にし１調整した。乾
燥前、プレートはシリカゲル乾燥剤を含有するボイルバ
ッグに密１すした、前記キラ１−を用い、４２個のヒｌ
〜血清試料の−ｒｓｔ−＋ｍ度は下記の様にし−Ｃ測定
しｌこ 。
キットを調整した： １、ＮＡＤＰ （０，００１ｍ Ｍ ：凍結乾燥）２、
基質希釈剤： １ｍ ＭＭｇＣｌ□おにび０゜１％アジ
ドナトリウムを含有−りるジェタノールアミン緩衝液（
５０ｍ Ｍ１．１）Ｈ９，５＞１０ｍ１゜ ３３、増幅剤：ｌＩｍＱアルコールデヒドＬ１グナーＬ
ａ３よび３ｎｇジアフＡラーピ、凍結乾燥４、増幅剤希
釈剤：０．５５１１１Ｍ＋）−ヨードニトロデ１−ラゾ
リウムバイオレツ１−Ｊ３よび４％エタノールを含有す
るリン酸す１〜リウム緩衝液（２５ｍ ＭＳ ｕ ｌ−
１７，２＞２０ｍ１゜５、停止溶液：０．２Ｍ硫酸 ６．１１１１縮洗浄緩衝剤：１．２Ｍ硫酸アンモニウム
、１２０＋＋＋Ｍｌ−リス（ｌｌ＋−１８，０）、０．
２％トリトンＸ−７０５，０，２％５Ｂ−１４おにび０
．１％アジドナトリウム７、結合体： ４００１１１
Ｍ硫酸ノＩン七ニウム、０゜１％トリトンＸ−７０５，
０，１％５Ｂ−１４，８％ＢＳＡ、１００ｍ ｔｖｌリ
ス（ｏ １−１７．５） 、１１１１ ＭＭ（Ｉ ＣＩ
□ 、０．１１１１ＭＺＩＩＣＩ 、１０％新生子牛血
清、０゜１％アジドナトリウムの９ｍｌ、Ｔ−Ｓ Ｈに
対する単クーロン性抗体（ヒロノ、Ｄ８８）を使用し実
施例１と同様にして調整した結合体の１／３０００希釈
液 被覆プレー１へは、抗体が王５１−１に対する単り−Ｏ
ン性抗体（セロノ、Ｄ４９．２＋ｎｇ／ｌ）であり、□
洗浄液がＢＳＡの代りに分解ピラチン（０，５％ｒＮ
υハへｒ ハ１）＾ｒ％ Ａ ハ１−Ｌ Ａ ７１ Ｎ
ｌ’ （／１自／Ｊ’ゼラチン）１．０．０５％トウイ
ン２０および０゜０１％チオメルザールの溶液〉を含有
していたこと以外、実施例１と同様にし１調整した。乾
燥前、プレートはシリカゲル乾燥剤を含有するボイルバ
ッグに密１すした、前記キラ１−を用い、４２個のヒｌ
〜血清試料の−ｒｓｔ−＋ｍ度は下記の様にし−Ｃ測定
しｌこ 。
結合体０ 、０７５１１１１を被覆プレートの各ウェル
にピペットで分注した。６種のＴＳＩ−（標準液０゜０
２５ｍ１Ｊ３よび４２の血清試料をウェルに２回加え、
プレートを２５℃で２時間培養した。洗浄緩衝液は蒸溜
水１３２ｉｎｌを濃縮洗浄緩衝液に加えて：ＪＩ整した
。プレー１〜は空にし、各つ］、ルは８−チトンネルマ
ルチピペットを用い前記緩衝液０．２５ｍ１で４回洗浄
した。Ｎ Ａ 、ＯＰは基質希釈剤に溶かし、その０．
１０ｍ１を各つ１ルに加えた。プレー１−は２５℃で２
０分間培養した。増幅剤は増幅剤希釈剤に溶かし、０．
２０ｍ１を各ウェルに加えた。プレー１−は２５℃−ぐ
１０分間７８養した。発色警よ停止溶液０．０５０ｍ１
を加えて１９止さじた。各ウェルの４．９２ ｎｍでの
吸光度をマルチスキャンＭＣ分光光度泪で測定した。検
定曲線は吸光度を標準液のＴ Ｓ Ｈ１１度に対してブ
ロンＩ〜して作成し、血清試料のＴ Ｓ Ｈ温度は検定
曲線と比較して測定し ＩＣ、。
にピペットで分注した。６種のＴＳＩ−（標準液０゜０
２５ｍ１Ｊ３よび４２の血清試料をウェルに２回加え、
プレートを２５℃で２時間培養した。洗浄緩衝液は蒸溜
水１３２ｉｎｌを濃縮洗浄緩衝液に加えて：ＪＩ整した
。プレー１〜は空にし、各つ］、ルは８−チトンネルマ
ルチピペットを用い前記緩衝液０．２５ｍ１で４回洗浄
した。Ｎ Ａ 、ＯＰは基質希釈剤に溶かし、その０．
１０ｍ１を各つ１ルに加えた。プレー１−は２５℃で２
０分間培養した。増幅剤は増幅剤希釈剤に溶かし、０．
２０ｍ１を各ウェルに加えた。プレー１−は２５℃−ぐ
１０分間７８養した。発色警よ停止溶液０．０５０ｍ１
を加えて１９止さじた。各ウェルの４．９２ ｎｍでの
吸光度をマルチスキャンＭＣ分光光度泪で測定した。検
定曲線は吸光度を標準液のＴ Ｓ Ｈ１１度に対してブ
ロンＩ〜して作成し、血清試料のＴ Ｓ Ｈ温度は検定
曲線と比較して測定し ＩＣ、。
うζ−ω耳−６叶−亙ｌ−
ビオチン化ＤＮＡをニックトランスレーションキラ１〜
（エンゾバイＡケム社）を用い、製造会社の指示書に従
って調整した。表８に示したビオチン化ＤＮＡの用をニ
トロセル［１−ス（シュライサーアンドシュール）のデ
ィスク（直径約５．５ｍｍ）に移し、８０’Ｃで２時間
培養した。アビジン−アルカリホスファクターげ結合イ
ホ（シグマケミカフ１社）を用い、フｒルター上のビオ
チン化ＤＮＡの量を以下の様にして測定した。
（エンゾバイＡケム社）を用い、製造会社の指示書に従
って調整した。表８に示したビオチン化ＤＮＡの用をニ
トロセル［１−ス（シュライサーアンドシュール）のデ
ィスク（直径約５．５ｍｍ）に移し、８０’Ｃで２時間
培養した。アビジン−アルカリホスファクターげ結合イ
ホ（シグマケミカフ１社）を用い、フｒルター上のビオ
チン化ＤＮＡの量を以下の様にして測定した。
１ｆｖｌＮａ Ｃ１，５０ｍ Ｍｌ＝ｌエリノールアミ
ン（ｐ １−１７．５） 、１＋ｎ ＭｔｖＮ＋ Ｃ１
２，０，１＋ｎ ＭＺｎＣｌ 、０．０５％アジトナ１
−リウムを含有し、０．２％５Ｂ−１６を含有または含
有しない試験緩衝液中３５℃で１時間前培養し、次に緩
衝液中１ｍＭ１蛋白濃度に調整された結合体に移し、更
に２０分間３５°Ｃで培養した。各ディスクは試験緩衝
液の１１で３５℃で４回洗浄した。ディスクは新しいマ
イクロプレー１・に移し、アルカリホスファ−げを実施
例１と同様にして測定した。
ン（ｐ １−１７．５） 、１＋ｎ ＭｔｖＮ＋ Ｃ１
２，０，１＋ｎ ＭＺｎＣｌ 、０．０５％アジトナ１
−リウムを含有し、０．２％５Ｂ−１６を含有または含
有しない試験緩衝液中３５℃で１時間前培養し、次に緩
衝液中１ｍＭ１蛋白濃度に調整された結合体に移し、更
に２０分間３５°Ｃで培養した。各ディスクは試験緩衝
液の１１で３５℃で４回洗浄した。ディスクは新しいマ
イクロプレー１・に移し、アルカリホスファ−げを実施
例１と同様にして測定した。
表８にディスクを除去し、試薬ブランクを減じて得られ
た吸光度を承り。
た吸光度を承り。
表 ８
１）！ＩＩ） Ｎ Ａ Ｓ Ｂ −１６添加 ５Ｂ−１
６未添加０ ０．０２６ ０．／１．３５ ０．１ ０．０５０ ０．４１７ １．０ ０．０５７ ０．／１６０ １０．０ ０．１５１ ０．５２３ Ｓ ［−３−１６はアルカリ小スノＩターＵ／アビジン
結合体と二］〜口セルロースとの非特異的結合を大いに
減することが明らかである。
６未添加０ ０．０２６ ０．／１．３５ ０．１ ０．０５０ ０．４１７ １．０ ０．０５７ ０．／１６０ １０．０ ０．１５１ ０．５２３ Ｓ ［−３−１６はアルカリ小スノＩターＵ／アビジン
結合体と二］〜口セルロースとの非特異的結合を大いに
減することが明らかである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） （ｉ）１個の芳香族残塁を含有し、）−Ｉ Ｌ Ｂ数が
１６以上の界面活性剤、 （ｉｉ） 双イオン性界面活性剤、または（ｉｉｉ ）
多価アニオンの塩を１００ｍＭ以上の濃度で含有する溶
液 である、リガンドまたは抗リガンドと他の物質との非特
異的結合を制限する剤の少なくとも１つで表面を処理す
ることを特徴とする、リガンドを表面に結合させ、抗リ
ガンドを含イｊずろ水溶液をそれと接触させて抗リガン
ドをリガンドに結合させ、水溶液を結合した抗リガンド
から分離し、抗リガンドをこれと関連のある検出法を用
いて検出することから成る生化学的検出法。 （２）前記剤が式Ａｒ−（ＯＣＨ２Ｃｌ−１２）ｎ−Ｏ
ＡＬ式中、Ａｒは全部で１〜１４個の炭素原子を含むア
ルキル基１個以上で適宜置換されたフェニル基、ｎは２
０〜１００．Ａは水素原子またはメチルまたはエヂル基
である］で示される化合物である特許請求の範囲第１項
記載の方法。 （３）基Ａ１・が４〜１２個の炭素原子を含有覆るアル
キル基で置換されたフェニル基である特許請求の範囲第
２項記載の方法。 （４）Δが水素である特許請求の範囲第２項または第３
項記載の方法。 （５）ｎが２０〜８０の値を有する特許請求の範囲第２
項、第３項または第４項記載の方法。 （６）表面を、１個のアミン残基および１個の酸残基を
有Ｊる双イオン性界面活性剤である、非特異結合を制限
するｌζめの剤で処理する特許請求の範囲第１項、第２
項、第３項、第１１項または第５項記載の方法。 （７）双イオン性界面活性剤が式ＲＩＲ２Ｎ Ｒ３Ｒ４
［式中、Ｒ１および１（２はぞれぞれＣ−Ｃアルキル基
、６ Ｒ旭Ｓ０３置換基を有するＣ□〜Ｃ６アル４−ル基、Ｒ
４はＣ８〜Ｃ２２アルキル基である］で示される化合物
である特許請求の範囲第６項記載の方法。 （８）Ｒ１およびＲ２１ｆｉそれぞれメチル基である特
許請求の範囲第７項記載の方法。 （９）Ｒ３が式ＣＨ２ＣＨ２Ｃ１−１３’ Ｓｏ３ト１
の基である特許請求の範囲第７項または第８項記載の方
法。 （１０）表面を、多価アニオンの塩を２００〜６００ｍ
Ｍの濃度で含有する溶液である、非特異的結合を制限す
る剤の少なくとも１つで処理する特許請求の範囲第１項
ないし第９項のいずれかの項記載の方法。 （１１〉多価アニオンが８０２−である特晶′１請求の
範囲第１０項記載の方法。 （１２）多価アニオンを約４００ ＋ｎ Ｍの濃度で使
用Ｊ゛る特許請求の範囲第１０項または第１１項記載の
方法。 （１３） （ｉｉｉ ）群から選択された少なくとも１
つの剤を（ｉ）群または（１１）群から選択された少な
くとも１つの剤と一緒に利用Ｊ−る特許請求の範囲第１
項ないし第１２項のいずれかの項に記載の方法。 （１４）前記（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）（ＩＹ
のそれぞれから少なくとも１つの剤を利用する特許請求
の範囲第１３項記載の方法。 （１５）前記剤の少なくとも１つで前記表面処理は、前
記剤の少なくとも１つを抗リガンド含有水溶液中に、お
よび／または前記水溶液で処理後前記表面を洗浄するの
に利用される溶液中に、および／または前記表面の調製
中に利用される溶液中に加えることにより行なう特許請
求の範囲第１項ないし第１４項のいずれかの項記載の方
法。 （１６）試薬溶液または洗浄溶液が （ｉ）１個の芳香族残りを含有し、１６以上の１−Ｉ
Ｌ Ｂ数を右づ−る界面活性剤、（ｉｔ）双イオン性界
面活性剤、または（ｉｉｉ ）多価アニオンの塩を１０
０ｍＭ以」−の濃度で含有する溶液 である、抗リガンド等の物質の非特異的結合を制限する
剤を含有すること、または前記表面がその調製中にその
種の剤で処理されることを特徴とり。 る、 使用時に検査液で被覆される表面をその中に有し、前記
表面に結合した対応する抗リガンドと結合するようにし
た第１のりガントを有する検査液を含有する第１の容器
、 前記第１リガンドと結合した抗リガンドと結合するよう
にした試薬溶液を含有する第２の容器、および、所望に
より、前記第１容器を洗浄づる洗浄液を含有する容器、 から成る生化学的検査キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB838317855A GB8317855D0 (en) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Biochemical detection method |
| GB8317855 | 1983-06-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6036964A true JPS6036964A (ja) | 1985-02-26 |
Family
ID=10545085
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59136432A Pending JPS6036964A (ja) | 1983-06-30 | 1984-06-30 | 生化学的検出法および使用キツト |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4668639A (ja) |
| EP (1) | EP0132948B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6036964A (ja) |
| AT (1) | ATE62751T1 (ja) |
| DE (1) | DE3484453D1 (ja) |
| GB (1) | GB8317855D0 (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6271861A (ja) * | 1985-09-12 | 1987-04-02 | ベ−リンガ−・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 免疫反応成分測定法及び該方法を実施するための試薬 |
| JPH01227962A (ja) * | 1988-02-12 | 1989-09-12 | Eastman Kodak Co | 低級アルコールスルフェート洗浄液，試験キットおよび免疫リガンドの測定方法 |
| JPH01248061A (ja) * | 1988-02-12 | 1989-10-03 | Eastman Kodak Co | 試験キットおよび免疫リガンドの測定方法 |
| JPH01305357A (ja) * | 1988-04-14 | 1989-12-08 | Eastman Kodak Co | 抗体の迅速検出のための組成物、診断キット及び方法 |
| JPH0212061A (ja) * | 1988-04-04 | 1990-01-17 | Hygeia Sci Inc | 改良されたゾル捕捉イムノアッセイキット及び方法 |
| WO1991005257A1 (fr) * | 1989-10-02 | 1991-04-18 | Teijin Limited | Kit servant a l'immunoanalyse de complexes d'activateur de plasminogene tissulaire humain/inhibiteur d'activateur de plasminogene humain et procede d'immunoanalyse |
| WO1991006857A1 (fr) * | 1989-11-02 | 1991-05-16 | Teijin Limited | Procede d'analyse immunologique de la thrombomoduline humaine, et reactif et kit utilises a cet effet |
| JPH05502904A (ja) * | 1989-01-19 | 1993-05-20 | エデュラン アクティー ゼルスカブ | 断熱発泡プラスチック材料の製造方法およびこの方法に用いる発泡剤 |
| JP2509001B2 (ja) * | 1989-11-02 | 1996-06-19 | 帝人株式会社 | ヒト・トロンボモジユリンの免疫学的測定方法、そのための試薬及びそのためのキツト |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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