JPS603319B2 - amino sugar derivative - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規なアミノ糖誘導体、その製造法、それを
活性化合物として含有する薬剤組成物、ならびにそのア
ミノ糖誘導体でグリコシドヒドラーゼを抑制することに
より人間および動物の炭水化物の代謝を抑制する方法、
たとえば糖尿病、肥満症および過脂肪血症の処置法に関
する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides a novel amino sugar derivative, a process for its preparation, a pharmaceutical composition containing it as an active compound, and a method for treating humans and animals by inhibiting glycoside hydrolases with the amino sugar derivative. How to suppress carbohydrate metabolism,
For example, it relates to methods of treating diabetes, obesity and hyperlipidemia.

更に詳しくは、本発明は下記式（式中、ｎ，＝２、山＝
１を示す） で表わされるアミノ糖誘導体に関する。More specifically, the present invention is based on the following formula (where n,=2, mountain=
1).

以下において、参考のためその関連化合物についても一
緒に説明する。放線菌目の多数の微生物はグリコシドヒ
ドラーゼの抑制因子を形成すること、そして培養条件に
＊依存して、主にアミラーゼに対してまたは主にサッカ
ラーゼに対して抑制作用をもつ抑制因子が得られること
は知られている（これに関して米国特許明細書３８７６
７６６、３８５５０６６および総７６５４６を参照）。
式 （式中ｎ，およびｎ２は０〜８の数であることができる
が、ｎ，十ｎ２の合計は常にｎ＝１〜８の値をもち、た
だしｎ，十ｗ＝１または２のとき、〜は常に０である）
の新規なアミノ糖誘導体が発見された。Below, related compounds will also be explained for reference. Many microorganisms of the order Actinomycetes form inhibitors of glycoside hydrolases, and depending on the culture conditions*, inhibitors can be obtained that have an inhibitory effect primarily on amylases or primarily on saccharases. It is known that (U.S. Pat. No. 3,876)
766, 3855066 and Total 76546).
Formula (in the formula, n and n2 can be numbers from 0 to 8, but the sum of n, and n2 always has a value of n = 1 to 8, provided that when n, and w = 1 or 2) , ~ is always 0)
A new amino sugar derivative has been discovered.

ｎ，十−の合計の値に依存して、これらのアミノ糖誘導
体は主にアミラーゼ抑制作用またはサツカラーゼ抑制作
用をもつ。Depending on the value of the sum of n, 10-, these amino sugar derivatives mainly have an amylase-inhibiting effect or a sutucalase-inhibiting effect.

したがって、アミラーゼを抑制するのに調節された方法
で使用できるアミノ糖謎導体は、ｎ，十ｎ２＝４〜８、
ことにｎ・十ｎ２＝４および５であるものである。サッ
カラーゼを抑制するのに調節された方法で使用できるア
ミ／糖誘導体は、ｎ，十ｎ２＝１〜３、好ましくはｎ，
十ｎ２＝２〜３、とくに好ましくはｎ，＝２であるもの
であＺる。さらに驚くべきことには、ｎ，十ｎ２＝２〜
３、ことにｎ，＝２であるアミノ糖誘導体は、生体内で
、でんぷんの分解の強い抑制を示すことがわかった。Therefore, the amino sugar mystery conductors that can be used in a controlled manner to inhibit amylase are:
In particular, n·tenn2=4 and 5. Amino/sugar derivatives that can be used in a controlled manner to inhibit saccharases include n,0 n2 = 1 to 3, preferably n,
n2 = 2 to 3, particularly preferably n, = 2. Even more surprisingly, n, ten n2 = 2~
3. In particular, amino sugar derivatives with n,=2 were found to exhibit strong inhibition of starch degradation in vivo.

本発明によるアミノ糖誘導体は、放線菌目、ことにアク
チノプラナセア科（Ａｃｔｊｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ）
の菌株をそれ自体知られた方法で培養し、次いで再びそ
れ自体知られた方法で個々の化合物を分離および単離す
ることによって製造される。The amino sugar derivatives according to the invention belong to the order Actinobacteria, in particular the family Actinoplanaceae.
are produced by cultivating a strain of the microorganism in a manner known per se and then separating and isolating the individual compounds again in a manner known per se.

ｎ，十山の合計の値が１〜４であるアミノ糖該導体は、
これより分子量が大きいアミノ糖誘導体を化学的にまた
は酵素的に加水分解することによって、さらに得ること
ができる。n, the amino sugar conductor having a total value of 1 to 4,
Further compounds can be obtained by chemically or enzymatically hydrolyzing amino sugar derivatives with higher molecular weights.

本発明によるアミノ糖議導体の製造に使用できる放線菌
目の菌株の述べることができる例は、アクチ ノプ ラ
ネ ス属の公知菌種ＳＥ５０（ＣＢＳ９６１．７０）
（ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．１２６６）、ＳＢ１８（ＣＢＳ９
５７．７０）（ＦＥＲＭ一ＰＮｏ．１２５７）およびＳ
Ｅ８２（Ｃ斑６１５．７１）（ＰＥＲＭ−ＰＮｏ．１２
６８）ならびにこれらの菌株の突然変異体または変種で
ある。A mentionable example of a strain of the order Actinobacteria that can be used for the production of the aminosugar derivative according to the invention is the known bacterial species SE50 (CBS961.70) of the genus Actinoplanes.
(FERM-PNo. 1266), SB18 (CBS9
57.70) (FERM-P No. 1257) and S
E82 (C spot 615.71) (PERM-PNo.12
68) as well as mutants or variants of these strains.

得られるアミノ糖誘導体の収率に関すると、菌株ＳＥ５
０／１３（ＣＢＳ６１４．７１）（ＦＥＲＭ−ＰＮｏ．
１９７６）およびＳＥ５０／１１０（Ｃ聡６７４．７８
）（ＦＥＲＭ‐ＰＮｏ．２６１０）はとくに適当である
ことがわかった。両者の菌株の記載は親の菌株ＳＥ５０
（ＣＢＳ９６１．７０）のそれに実質的に相当し、この
親の菌株からこれらの菌株は変異議発素を使用しないで
自然選択によって得られる。Regarding the yield of amino sugar derivatives obtained, strain SE5
0/13 (CBS614.71) (FERM-PNo.
1976) and SE50/110 (C Satoshi 674.78
) (FERM-PNo. 2610) was found to be particularly suitable. The description of both strains is the parent strain SE50.
(CBS961.70) from which these strains are obtained by natural selection without the use of mutant antigens.

固体または液体の、ことに液体の水性栄養培地は、それ
自体知られている炭素および窒素の出発物質、塩類およ
び消泡剤をふつうの濃度で含有し、微生物の培養に使用
される。Solid or liquid, in particular liquid, aqueous nutrient media containing carbon and nitrogen starting materials, salts and antifoaming agents known per se in the usual concentrations are used for the cultivation of microorganisms.

使用する炭素についての出発物質は、主に炭水化物、こ
とにでんぷん、マルトース、グルコースおよび物質の複
雑な混合物、たとえば商業的に入手できる麦芽エキスで
ある。The starting materials for the carbon used are mainly carbohydrates, in particular starch, maltose, glucose and complex mixtures of substances, such as commercially available malt extract.

使用できる窒素についての出発物質は、それ自体知られ
た複雑な混合物、たとえばカゼイン加水分解物ｔイース
ト抽出物、ベプトン、魚肉、トウモロコシ浸溝液、肉抽
出物およびこれらの出発物質の混合物であり、そして個
々のアミノ酸および／またはアンモニウム塩も窒素源と
して使用できる。Starting materials for nitrogen that can be used are complex mixtures known per se, such as casein hydrolysates, yeast extracts, beptone, fish meat, corn soaking liquid, meat extracts and mixtures of these starting materials; Individual amino acids and/or ammonium salts can also be used as nitrogen sources.

微生物は通気した振とう培地中で、またはふつうの容器
の渚地中で好気的に培養される。The microorganisms are cultured aerobically in an aerated shaking medium or on a beach in a regular container.

主生成物として形成した最終生成物の種類は、炭素につ
いて使用する出発物質の種類および濃度と発酵に使用す
る特定の菌株との組み合わせによって影響を受ける。The type of final product formed as the main product is influenced by the type and concentration of starting material used for carbon in combination with the particular strain used for fermentation.

したがって、たとえば、２重量％より多いでんぷんを含
有する栄養溶液中では、形成する化合物は、なかでも、
ｎ，十Ｑ＝４〜８のものである。Thus, for example, in nutrient solutions containing more than 2% starch by weight, the compounds that form, among others,
n, 10Q=4 to 8.

菌株ＳＥ５０／１３（Ｃ斑６１４．７１）はｎ，十ｎ２
＝４〜８であるアミノ槍誘導体の製造にとくに適する。
しかしながら、栄養溶液が十分なグルコース（約３．５
重量％）を含有するとき、０．１〜３重量％のでんぷん
はｎ・十−＝４〜８であるアミノ糖誘導体の主演合物を
得るのにすでに十分である。Strain SE50/13 (C spot 614.71) is n, ten n2
It is particularly suitable for the production of amino lance derivatives having a ratio of 4 to 8.
However, if the nutrient solution contains enough glucose (approximately 3.5
% by weight), 0.1-3% by weight of starch is already sufficient to obtain the main compound of amino sugar derivatives with n·ten = 4-8.

このようにして得られたこれらのアミノ糖誘導体のすべ
ては、化学または酵素的加水分解により低級の類似体を
製造するための出発化合物として使用できる。ｎ・十Ｗ
＝１〜４であるアミノ糖議導体は、培養をでんぷんを含
まない溶液中で実施するときに主要量で得られる。All of these amino sugar derivatives thus obtained can be used as starting compounds for the preparation of lower analogues by chemical or enzymatic hydrolysis. n・10W
The amino sugar converters with =1 to 4 are obtained in major amounts when the cultivation is carried out in starch-free solutions.

この場合、マルトースを栄養溶液に加えると、とくに有
利な効果が得られる。したがって、たとえば、マルトー
スを加え、菌株ＳＥ５０（ＣＢＳ９６１．７０）を使用
すると、主としてｎ，十ｎ２＝２〜８であるアミノ糖誘
導体の混合物が得られる。ｎ，＝１であるアミノ糖は、
とくに炭素についての出発物質としてグルコースのみを
使用することによって生成する。しかしながら、この場
合過剰量のグルコースが存在するとき、発酵期間を長く
すると、これより高分子量のアミノ糖誘導体も生成する
ことを、考慮しなければならない。グルコースを含有し
ない栄養溶液を使用し、マルトースを炭素の唯一の出発
物質として加えると、得られる主生成物はｎ，十−＝２
であるアミノ糖である。技術的に有利な態様において、
純粋なマルトースの代わりにこれより安価な製品、たと
えば自然の市販されている麦芽エキスであるマルトジン
（Ｍａｌｔｚｉｎ）を使用できる。菌株ＳＥ５０／１１
０（ＣＢＳ６７４．７３）は、主としてｎ，十ｎ２＝１
〜３であるアミノ糖議導体を含有するアミノ糖誘導体の
製造にとくに適することがわかった。In this case, the addition of maltose to the nutrient solution has a particularly advantageous effect. Thus, for example, when adding maltose and using the strain SE50 (CBS961.70), a mixture of amino sugar derivatives with predominantly n, ten n2 = 2-8 is obtained. The amino sugar with n,=1 is
In particular, it is produced by using only glucose as a starting material for carbon. However, it must be taken into account that in this case when an excess amount of glucose is present, a longer fermentation period will also produce higher molecular weight amino sugar derivatives. If we use a nutrient solution that does not contain glucose and add maltose as the only starting material for carbon, the main product obtained is n,10−=2
It is an amino sugar. In a technically advantageous aspect,
Instead of pure maltose, cheaper products can be used, such as Maltzin, a natural commercially available malt extract. Strain SE50/11
0 (CBS674.73) is mainly n, ten n2=1
It has been found that the present invention is particularly suitable for the production of amino sugar derivatives containing amino sugar derivatives of .about.3.

この菌株は、低分子量のアミノ糖誘導体を菌株ＳＥ５０
／１３（ＣＢＳ６１４．７１）を用いて得られる収率の
約２倍の収率で与える。This strain contains low molecular weight amino sugar derivatives as strain SE50.
/13 (CBS614.71) in a yield that is approximately twice that obtained using the method.

一般、微生物は１５〜４５００、好ましくは２４〜３〆
○の培養温度で培養する。Generally, microorganisms are cultured at a culture temperature of 15 to 4500, preferably 24 to 3.

したがって、菌株ＳＥ５０（ＣＢＳ９６１．７０）また
はＳＥ５０／１３（Ｃ斑６１４．７１）を使用するとき
、ｎ，十〜＝４〜８であるアミノ糖謎導体はより高い温
度、たとえば２がｏで得られ、これに対しより低い温度
、たとえば２４こ０において、たとえば菌株ＳＥ５０（
ＣＢ９６１．７０）およびＳＥ５０／１１０（Ｃ茂６７
４．７３）はｎ，十ｎ２＝１〜３であるアミノ糖誘導体
を主要量で生成する。培養期間は一般に１〜８日間、好
ましくは２〜６日間である。Therefore, when using strains SE50 (CBS961.70) or SE50/13 (C spot 614.71), aminosugar cryptic conductors with n, 10 ~ = 4 to 8 can be obtained at higher temperatures, e.g. whereas at lower temperatures, e.g. 24°C, e.g. strain SE50 (
CB961.70) and SE50/110 (C Shigeru 67
4.73) produces a major amount of amino sugar derivatives where n,n2=1-3. The culture period is generally 1 to 8 days, preferably 2 to 6 days.

培養期間を長くし、ことに過剰量の炭水化物を栄養塔地
に使用すると、ｎ，十〜がより大きい値であるアミノ糖
誘導体の生成に好都合となる。培地のｐＨ値は一般に５
．０〜８．５好まし〈は６．０〜７．０である。Longer cultivation periods and, in particular, the use of excess carbohydrates in the nutrient solution favor the production of amino sugar derivatives with larger values of n. The pH value of the medium is generally 5
．． 0 to 8.5 preferably 6.0 to 7.0.

発酵の終点は、一般に酵素抑制試験による抑制活性舎量
の測定ならびに薄層クロマトグラフィ−による発酵媒体
の組成を測定することによって、検出する。The end point of fermentation is generally detected by measuring the amount of inhibition activity by enzyme inhibition tests and by determining the composition of the fermentation medium by thin layer chromatography.

前述のように比較的高分子量のアミノ糖誘導体を化学的
に加水分解して低分子量の誘導体を製造する場合、使用
する方法は、一般に、比較的高分子量のァミノ糖誘導体
を１〜州の鉱酸水溶液で５０〜１００００、ことに９０
〜１００ｑ０において１０〜１８び分間処理することか
らなる。When a relatively high molecular weight amino sugar derivative is chemically hydrolyzed to produce a low molecular weight derivative as described above, the method used generally involves converting the relatively high molecular weight amino sugar derivative into one to five minerals. 50 to 10,000, especially 90 in acid aqueous solution
It consists of processing for 10 to 18 minutes at ~100q0.

酵素による加水分解も可能であり、この加水分解は、一
般に、酵素（ヒドラーゼ）、ことに抑制されえない３−
アミラ−ゼまたはＱ−アミラーゼまたは微生物源のアミ
ログルコシダーゼ、たとえばＢｓ血ｔｍｓから得られる
Ｑ−アミラーゼを用いる培養により、あるいは比較的高
分子量のァミノ糖誘導体を１〜１０％、好まし〈は２〜
５％の量で「好ましくは唯一の炭素源として含有する栄
養溶液中で生長できる微生物、たとえば偽ｐｅｒｇｉｌ
ｌ船ｎｉｇｅｒ（ＡＴＣＩＩ．３９４）を培養すること
によって、実施する。本発明による個々のアミノ糖誘導
体の分離および単離は、微生物学的培養肉汁から、ある
いは比較的高分子量のアミノ糖議導体の酵素および／ま
たは微生物学的分解を実施した加水分解生成物または培
養混合物から、出発する。Enzymatic hydrolysis is also possible, and this hydrolysis is generally carried out by enzymes (hydrolases), especially 3-
amylase or Q-amylase or amyloglucosidase of microbial origin, such as Q-amylase obtained from Bs blood TMS, or by incubation with 1 to 10%, preferably 2 to 10%, of relatively high molecular weight aminosugar derivatives.
Microorganisms capable of growing in the nutrient solution, preferably containing as the sole carbon source, in an amount of 5%, e.g.
This is carried out by culturing L. niger (ATCII.394). The separation and isolation of individual aminosugar derivatives according to the invention can be carried out either from microbiological culture broths or from hydrolysis products or cultures in which enzymatic and/or microbiological degradation of relatively high molecular weight aminosugar derivatives has been carried out. Starting from the mixture.

処理はｎ，十ｎ２の値に依存して異なる方法で行う。The processing is performed in different ways depending on the values of n and n2.

すなわち、ｎ，十仏＝１〜４である純粋なアミノ糖誘導
体の製造に用いる方法は、一般に、特定の培養肉汁また
は加水分解生成物を、必要に応じて菌糸体を前もって分
離したのち、活性木炭で中性の柵において処理し、この
ようにして活性炭に結合したアミノ糖誘導体を、活性木
炭のアルコールまたはアセトン、好ましくは５０〜８０
％強度のアセトンによる処理によって、脱着することか
らなる。脱着はｐＨ１．５〜４、好ましくはｐＨ２〜３
の酸性の−値においてとくに完全におこなわれる。分離
すべき培養肉汁または加水分解生成物が非常に暗い色で
あるとき、前述の活性木炭処理を行う前に、まずそれら
を酸性のｐＨにおいて活性木炭で処理するか、あるいは
ｐＨ２〜６、好ましくはｐＨ２〜３において吸収性樹脂
、たとえば商業的に入手できるＬｅｗａｐｏＩＣａ９２
２１（粒度０．３５肋、母ｙｅｒＡＧ）で処理し、この
ようにして脱色を行うことは、有利であるとわかった。
酸性の範囲において、活性炭は優先的に染料だけを結合
するが、アミノ糖叢導体を結合しない。次いで、前述の
活性炭から得られた脱着生成物からの個々のァミノ糖誘
導体の分離は、一般に、この脱着した生成物をそれ自体
知られている強酸性の陽イオン交換体、たとえば００ｗ
ｅｘ５０Ｗ（Ｍｅｓｓｒｓ．ＤｏｗＣｈｅｍｉｃａｌｓ
）（ｐＨＩ〜８、好ましくはｐＨ２〜４：低いイオン強
さにおいて、く１０のＳ．伽‐１、好ましくは＜２仇Ｓ
．肌山１の導電性に相当する）に通すことによって、実
施する。That is, the method used to produce pure amino sugar derivatives where n, ten Buddhas = 1 to 4 generally involves pre-separating the mycelium from a specific culture broth or hydrolysis product, if necessary, and then deactivating the mycelium. Treated with charcoal in a neutral fence, the amino sugar derivatives thus bound to the activated charcoal are treated with alcohol or acetone, preferably 50 to 80% of the activated charcoal.
It consists of desorption by treatment with % strength acetone. Desorption at pH 1.5-4, preferably pH 2-3
It takes place particularly perfectly at acidic values of -. When the culture juices or hydrolysis products to be separated are very dark in color, they are first treated with activated charcoal at an acidic pH or at pH 2-6, preferably before carrying out the activated charcoal treatment described above. Absorbent resins at pH 2-3, such as the commercially available LewapoICa92
21 (particle size 0.35 ribs, mother AG) and carrying out the decolorization in this way proved advantageous.
In the acidic range, activated charcoal preferentially binds only dyes, but not aminoglycoplex conductors. The separation of the individual aminosugar derivatives from the desorption product obtained from the aforementioned activated carbon is then generally carried out by converting this desorbed product to a strongly acidic cation exchanger known per se, for example 00w
ex50W (Messrs.Dow Chemicals
) (pH 8, preferably pH 2-4: at low ionic strength, 10 S. ka-1, preferably <2 仇S
．． (corresponding to the conductivity of the surface 1).

このようにして個々のアミノ糖誘導体は腸イオン交換体
に綜合する。アミノ糖誘導体は、とくに有利にアセトン
中の溶液（５０〜８０％のアセトン、ｐＨＩ〜５、好ま
しくはＰＨ２〜４）からこのような腸イオン交換体へ結
合する。次いで、これらの陽イオン交換体からの本発明
による選択的脱着は、一般に、溶離剤として、水性の酸
または塩基、好ましくはアンモニアまたは塩酸を０．０
１〜１当量／その濃度で使用することによって、実施す
る。In this way, the individual amino sugar derivatives are integrated into the intestinal ion exchanger. The amino sugar derivatives are particularly preferably bound to such intestinal ion exchangers from a solution in acetone (50-80% acetone, pHI ~5, preferably PH2-4). Selective desorption according to the invention from these cation exchangers is then generally performed using an aqueous acid or base, preferably ammonia or hydrochloric acid, as eluent at 0.0
This is done by using 1 to 1 equivalent/concentration.

次いで、脱着生成物を弱い酸性または塩基性の交換体で
中和したのち、または塩基または酸が揮発性であるとき
塩基または酸を真空除去したのち、凍結乾燥により溶液
を濃縮したのち、または有機溶媒、好ましくはアセトン
で沈殿したのち、特定のァミノ糖誘導体は個々の脱着生
成物から得Ｚられる。The desorption product is then neutralized with a weakly acidic or basic exchanger, or the base or acid is removed in vacuo if it is volatile, the solution is concentrated by lyophilization, or an organic After precipitation with a solvent, preferably acetone, specific amino sugar derivatives are obtained from the individual desorption products.

さらに、セルロースに基づく交換体、好ましくはリンー
セルロース（Ｍｅｓｓ岱．Ｓｅｗａ、Ｈｅｉｄｅｌ蛇ｒ
ｇ）のクロマトグラフィーにより、低分子量のアミノ誘
導体を不活性な糖類から分離できＺる。Additionally, cellulose-based exchangers, preferably phosphorus-cellulose (Mess, Sewa, Heidel)
The chromatography in g) allows the separation of low molecular weight amino derivatives from inert sugars.

低いイオン強度、好ましくは２〜１００ミリモル、こと
に５〜１０ミリモルの緩衝剤、好ましくはリン酸塩の緩
衝剤をｐＨ２．５〜８、好ましくはｐＨ５〜６において
ランニング剤（ｒ皿ｎｌ増ａ度ｎｔ）として使用する。
有効な分画に対する予備的条件２は、分画すべき配合物
中の塩含量はできるだけ低いということである。その中
の染料はそれほど問題とならない。個々のアミノ糖誘導
体を純粋な形で製造するため、この予備精製した配合物
を適当な分子ふる２い、たとえばＢｉｏ一ＱＩ Ｐ−２
（Ｍｅｓｓ岱．Ｂｉｏ一Ｒａｄ．Ｍｕｎｊｃｈ）による
クロマトグラフィーに付し、そして溶離液のラクション
を薄層クロマトグラフィーで検査する。A running agent (r dish nl increase a degree nt).
Precondition 2 for effective fractionation is that the salt content in the formulation to be fractionated is as low as possible. The dye in it is not much of a problem. In order to produce the individual amino sugar derivatives in pure form, this prepurified formulation is passed through a suitable molecular sieve, e.g. Bio-QI P-2.
(Mess Dai. Bio-Rad. Munjch) and the eluent fractions are examined by thin layer chromatography.

本発明による化合物を純粋な形で含有するフラクション
を合わせ、再度クロ３マトグラフィーに付し、最後に、
濃縮したのち、前述のように凍結乾燥するかまたは有機
溶媒で沈殿させる。アミノ糖誘導体のすべては、「成分
１」 「Ｃ，３日，９０７Ｎ」とグルコースが酸性の全加水分
解により生成することによって特徴づけられる。The fractions containing the compound according to the invention in pure form are combined and subjected to chromatography again and finally:
After concentration, it is lyophilized or precipitated with an organic solvent as described above. All of the amino sugar derivatives are characterized by "component 1""C, 3 days, 907N" and glucose being produced by acidic total hydrolysis.

下記の構造式は「成分１」について誘導されたものであ
る。本発明のアミノ糖議導体の初めのメンバーは、グル
コース単位をもつ。The structural formula below was derived for "Component 1". The first member of the amino sugar derivatives of this invention has glucose units.

この化合物は無色の非晶質物質であり、水、ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルスルホキシド、メタノールおよび
熱エタノールによく溶ける。酢酸エチル、メタノールと
水を１０：６：４の比で用いる薄層クロマトグラフィー
によると、この化合物は、Ｆ１５００シリカゲルフィル
ム〔Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｌｌ〕でＲｆ
＝０．４６（マルトース＝０．５およびグルコース＝０
．６５）そしてＦ２５４シリカゲルプレート〔Ｍｅｒｃ
ｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ〕でＲｆ＝０．４７（マルトー
ス＝０．５４およびグルコース＝０．６６）を示した。
硝酸銀／水酸化ナトリウムの頃霧剤を使用すると、かつ
色のしみが室温においてまたは多少温めたのち得られる
。The compound is a colorless, amorphous substance that is highly soluble in water, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, methanol, and hot ethanol. By thin layer chromatography using ethyl acetate, methanol and water in a ratio of 10:6:4, the compound was purified at Rf on F1500 silica gel film (Schleicher & Schull).
= 0.46 (maltose = 0.5 and glucose = 0
．． 65) and F254 silica gel plate [Merc
k, Darmstadt] showed Rf = 0.47 (maltose = 0.54 and glucose = 0.66).
When using a silver nitrate/sodium hydroxide spray, color stains are obtained at room temperature or after some warming.

この化合物をピリジン（１）、トリメチルクロロシラン
（０．５）およびＮーメチルートリメチルーシリルート
リフルオロアセトアミド（１）の混合物中でＤ−グルコ
ースまたはスクロースを標準として用いてシリル化し、
次いでクロモソーブ（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ）ＷＡＷ上
に３％のＳＥ３０シリコーンェラストマ‐〔Ｐａｃｋａ
ｒｄ〕を満たした１．８凧のガラスカラムのガスクロマ
トグラフィ一に付した。This compound is silylated in a mixture of pyridine (1), trimethylchlorosilane (0.5) and N-methyl-trimethyl-silyrutrifluoroacetamide (1) using D-glucose or sucrose as standard;
Then 3% SE30 silicone elastomer [Packa
rd] was subjected to gas chromatography using a 1.8-sized glass column.

注入温度と検出器の温度は３００つ○であった。The injection temperature and detector temperature were 300 points.

炉温度を２２０℃し、Ｑ−○ーグルコースおよび８−Ｄ
ーグルコースの標準物質が溶離されてしまうまで、一定
に保った。次いで、この温度をｌｙＣ／分の速度で８０
０午Ｃまで上昇させた。火炎ィオンイｑ隙出器を使用し
、窒素を４０私／分の速度でキャリャーガスとして供給
し、空気を８０Ｍ／分の速度で燃焼ガスとして供給し、
そして水素を２０の‘／分の速度で供Ｖ給した。The furnace temperature was set to 220°C, and Q-○glucose and 8-D
- held constant until the glucose standard had eluted. This temperature was then increased at a rate of 80 lyC/min.
The temperature was raised to 0 pm. Using a flame ion ionizer, nitrogen is supplied as a carrier gas at a rate of 40 m/min and air is supplied as a combustion gas at a rate of 80 m/min;
Hydrogen was then supplied at a rate of 20 V/min.

この化合物は１６〜１７分の保持時間を示した（Ｑ−Ｄ
−グルコース＝３分、８−Ｄ−グルコース＝４分そして
スクロース＝１２〜１３分）。メタノール性溶液を濃縮
して得られた化合物の非結晶試料を水に溶かし、比旋光
度は〔Ｑ〕。＝１３４．３ｏ であった。
＊＊ ｎ，＝１、ｎ２＝０の後記
式Ｄ化合物について、２２ｍＭＨｚにおけるＣＤ３０Ｄ
中のＮＭＲスペクトルを第１図に示す（横座標＝６跡）
。ＮＭＲスペクトルの顕著な特徴を、下表１に示す。This compound showed a retention time of 16-17 minutes (Q-D
- glucose = 3 minutes, 8-D-glucose = 4 minutes and sucrose = 12-13 minutes). An amorphous sample of the compound obtained by concentrating a methanolic solution is dissolved in water, and the specific optical rotation is [Q]. =134.3o.
** CD30D at 22mMHz for the following formula D compound with n, = 1, n2 = 0
The NMR spectrum inside is shown in Figure 1 (abscissa = 6 traces).
. The salient features of the NMR spectra are shown in Table 1 below.

表 １ ａ（ｐｐｍ） 多 重 項
相対強度１．３ ２重項：Ｊ〒６．５Ｈｚ
３日２．３
い ３重項 ″ＪＩおよびＪ２ ８−１０Ｈｚ
ＩＨ３．１５ ぷ
３重項 ″Ｊ，およひＪ２ ７一９Ｈｚ
ＩＨ３．３−３．９ 信号は個々に評
価できない １２
日４．１３ ＡＢ系；Ｊ＝１２Ｈｚ
２日４．４８ ） ２重
頃：Ｊ＝１２Ｈｚ）および） ）
ＩＨ５．１ ） ２重項 Ｊ三２．
５Ｈｚ）４．９ １重項
１１日重水素で置
換されえブロトン ５．０ ２重項：Ｊ三２−３Ｈｚ（解・ｉ象力に
劣る） ＩＨ５．８ ２事
項：Ｊ＝３−４Ｈｚ（解像力に劣る）
３日この化合物を無水酢酸とピリジンとの１：１
混合物中で反応させると、デカアセチル誘導体（分子量
：９０３）が得られる。Table 1 a (ppm) multiplet
Relative intensity 1.3 Doublet: J〒6.5Hz
3 days 2.3
Triplet ``JI and J2 8-10Hz
IH3.15 Triplet ″J, and J2 7-9Hz
IH3.3-3.9 Signals cannot be evaluated individually 12
Sun 4.13 AB system; J=12Hz
2 days 4.48) Around 2: J=12Hz) and))
IH5.1) Doublet J32.
5Hz) 4.9 singlet
11 days Broton can be replaced by deuterium 5.0 Doublet: J32-3Hz (inferior to solution/i-elephant power) IH5.8 2 items: J=3-4Hz (inferior to resolution)
For 3 days, this compound was mixed with acetic anhydride and pyridine 1:1.
When reacted in a mixture, a decaacetyl derivative (molecular weight: 903) is obtained.

この式０化合物のデカアセチル誘導体のＮＭＲスペクト
ルを第２図に示す。反応を氷酢酸／酢酸無水物の１：１
混合物中で触媒量の日２Ｓ０４の存在下に実施すると、
ウンデァセチル誘導体（分子量：９４５）の形成は、デ
カアセチル譲導体のほかに、質量分析により測定できる
。The NMR spectrum of this decaacetyl derivative of the compound of formula 0 is shown in FIG. The reaction was carried out in 1:1 glacial acetic acid/acetic anhydride.
When carried out in the presence of a catalytic amount of 2S04 in a mixture,
The formation of the undeacetyl derivative (molecular weight: 945), in addition to the decaacetyl derivative, can be determined by mass spectrometry.

デカアセチル議導体の質量スペクトルは、９０３に分子
ピーク（２．５％の相対強度）と８４３にベースピーク
を示す。The mass spectrum of the decaacetyl complex shows a molecular peak at 903 (relative intensity of 2.5%) and a base peak at 843.

上部の質量領域における重要な破片ピークは８４４（５
５％の相対強度）、７８４（３６％のｘ鴇相対強度）、
７８３（３４％の相対強度）、７５９（３４％の相対強
度）、５５６（３６％の相対強度）、４９６（３７％の
相対強度）および４３６（２９％の相対強度）である。
ハカモリ（Ｈａｋａｍｏｒｉ）の方法によるジメチルス
ルホキシド中のＣＨ３１／ＮａＨを用いるメチル化は、
主生成物としてデカメチル譲導体と少量のゥンデカメチ
ル誘導体も与える。The important debris peak in the upper mass region is 844(5
5% relative strength), 784 (36% x Toki relative strength),
783 (34% relative intensity), 759 (34% relative intensity), 556 (36% relative intensity), 496 (37% relative intensity) and 436 (29% relative intensity).
Methylation using CH31/NaH in dimethyl sulfoxide by the method of Hakamori
The main product is decamethyl transferant and also a small amount of undecamethyl derivative.

この質量スペクトルは６２３における分子ピーク（６．
１％の相対強度）と５３５におけるベースピークを示す
。This mass spectrum shows the molecular peak at 623 (6.
1% relative intensity) and the base peak at 535.

第２の分子ピークは６３７（０．２％の相対強度）に観
測される。スペクトルのデータと化学的性質は、この化
合物に次の構造式を与える。A second molecular peak is observed at 637 (relative intensity of 0.2%). Spectral data and chemical properties give this compound the following structural formula.

とくに、ＮＭＲスペクトルは、この化合物ｎＡ が立
体式の０−｛４・６−ビスーデオキシー４一〔ＩＳ−（
１．４．６／５）−４・５・６ートリヒドロキシー３−
ヒドロキシメチルシクロヘキシー２−エン−１ーイルー
アミノ〕−Ｑ−Ｄーグルコピラノシル｝−（１→４）−
Ｄ−グルコピラノースの構造をもつことを示す。In particular, the NMR spectrum shows that this compound nA has the steric formula 0-{4,6-bisudeoxy-4-[IS-(
1.4.6/5)-4,5,6-trihydroxy-3-
Hydroxymethylcyclohexy-2-en-1-ylamino]-Q-D-glucopyranosyl}-(1→4)-
Indicates that it has the structure of D-glucopyranose.

系例（ｎ，十比＝２）における次のメンバーは、一般組
成Ｃ２５比３０，８Ｎをもち、水に溶けやすい非晶質の
生成物である。The next member in the example series (n, ratio = 2) is an amorphous product with a general composition C25 ratio of 30.8N and is easily soluble in water.

薄層クロマトグラフィーによると、この化合物は前述の
系を用いてＦ１５００シリカゲルフィルムでＲｆ＝０．
３５そしてＦ２５４シリカゲルプレートでＲｆ＝０．３
３を示す。水中の比旋光度〔Ｑ〕ｄは１４７．２０であ
る。By thin layer chromatography, this compound was found to have an Rf = 0.05 on F1500 silica gel film using the previously described system.
35 and Rf = 0.3 on F254 silica gel plate.
3 is shown. The specific optical rotation [Q]d in water is 147.20.

ｎ，＝２、ｎ２＝０の後記式ｍ化合物について、２２ｍ
ＭＨｚにおけるＤ２０中のＮＭＲスペクトルを第３図に
示す。また、第４図は該化合物のＣＩ３−ＮＭＲスペク
トルである。＊ 前述のメチル化は１針固のメチル基を
含む化合物と、少量の１４個のメチル基を含む生成物を
与える。For the below formula m compound with n,=2, n2=0, 22m
The NMR spectrum in D20 at MHz is shown in FIG. Moreover, FIG. 4 is a CI3-NMR spectrum of the compound. * The above methylation gives a compound containing one methyl group and a product containing a small amount of 14 methyl groups.

メチル生成物の質量スペクトルは、８２７（１．５％の
相対強度）に分子ピークを示し、実験式Ｃ離日６ぶ０，
８に相当する。The mass spectrum of the methyl product shows a molecular peak at 827 (relative intensity of 1.5%), with the empirical formula C
It corresponds to 8.

０．１％の相対強さの第２分子ピークは８４１に存在す
る。A second molecular peak with a relative intensity of 0.1% is present at 841.

最も重要な破片のピークは、次のとおりである。The most important debris peaks are:

７３９（２７％の相対強度）、５９２（３．７％の相対
強度）、球５（３０％の相対強度）、３８８（９％の相
対強度）、３８６（１３％の相対強度）、２８４（１３
％の相対強度）、１８７（１２％の相対強度）、１７１
（４０％の相対強度）、１０１（３４％の相対強度）、
８８（２５％の相対強度）および７５ベースピーク。739 (27% relative intensity), 592 (3.7% relative intensity), Sphere 5 (30% relative intensity), 388 (9% relative intensity), 386 (13% relative intensity), 284 ( 13
% relative intensity), 187 (12% relative intensity), 171
(40% relative intensity), 101 (34% relative intensity),
88 (25% relative intensity) and 75 base peaks.

この化合物に対して化学的およびスペクトルの性質から
次の構造式が得られ、そして本発明によるアミノ糖誘導
体のこの系列のこの第２メンバーは、立体式の０一｛４
・６−ビス−デオキシ−４一〔ＩＳ−（１・４・６／５
）−４・５・６−トリヒドロキシー３−ヒドロキシメチ
ルシクロヘキー２ーエンー１−イルアミノ〕−Ｑ−Ｄー
グリコピラノシル｝−（１→４）−○一Ｑ−Ｄ−グルコ
ピラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコピラノースの構造
をもつ。Chemical and spectral properties give the following structural formula for this compound, and this second member of this series of amino sugar derivatives according to the invention has a stereochemistry of 01{4
・6-bis-deoxy-4-[IS-(1, 4, 6/5
)-4,5,6-trihydroxy-3-hydroxymethylcyclohexy-2-en-1-ylamino]-Q-D-glycopyranosyl}-(1→4)-○-Q-D-glucopyranosyl-( 1→4) It has the structure of -D-glucopyranose.

系列（ｎ，十山＝３）の次の最高級メンバーは２つの異
性体の形で得られ、２つの異性体の１つは主要量で形成
する。The next highest member of the series (n, ten = 3) is obtained in the form of two isomers, one of the two isomers forming in major amounts.

酸性の部分加水分解により、２つの異性体化合物は系列
（ｎ，十比＝１）の第１のメンバーとグルコースとに１
：２のモル比で分割される。Upon acidic partial hydrolysis, the two isomeric compounds form the first member of the series (n, ratio = 1) and glucose.
:2 molar ratio.

少量で存在する生成物は、立体式 の化合物○−｛４・６ービスーデオキシー４一〔１Ｓ−
（１・４・６／Ｓ）−４・５・６−トリヒドロキシ−３
−ヒドロキシメチルシクロヘキシ−２ーエンー１ーイル
アミノ〕一Ｑ一Ｄ−グルコピラノシル｝−（１−４）一
○一Ｑ一Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−○−Ｑ一
Ｄ−グルコピラノシルー（１→４）一Ｄーグルコピラノ
ースである。The product present in small amounts is a compound of the steric formula ○-{4,6-bis-deoxy-4-[1S-
(1,4,6/S)-4,5,6-trihydroxy-3
-Hydroxymethylcyclohex-2-en-1-ylamino]1Q1D-glucopyranosyl}-(1-4)1○1Q1D-glucopyranosyl-(1→4)-○-Q1D-glucopyranosyl( 1→4) -D-glucopyranose.

大量に存在する異性体生成物は、立体式 の化合物○−｛４・６−ビスーデオキシー４−〔ＩＳ−
（１・４・６／５＞−４・５・６−トリヒドロキシ−３
ーヒドロキシメチルー４−○一Ｑ−Ｄ−グルコピラノシ
ルー（１→４）ーシクロヘキシ−２ーエン−１−イルア
ミノ〕一Ｑーグルコピラノシル｝−１（１→４）一〇−
Ｑ−Ｄ−グルコピラノシルー（１→４）−Ｄ−グルコピ
ラノースである。The isomeric products present in large quantities are the compounds of the steric formula ○-{4,6-bisudeoxy-4-[IS-
(1.4.6/5>-4.5.6-trihydroxy-3
-Hydroxymethyl-4-○1Q-D-glucopyranosyl(1→4)-cyclohex-2-en-1-ylamino]1Q-glucopyranosyl}-1(1→4)10-
Q-D-glucopyranosyl(1→4)-D-glucopyranose.

ｎ−ブタノール、エタノールおよび水を５０：３０：２
０で用いるＦ１５００プレ−トのクロマトグラフィーに
より、これらの異性体はＲグルコース＝０．４１〜０．
４６（Ｒｆ）を示す。n-butanol, ethanol and water 50:30:2
By chromatography on F1500 plates used at
46 (Rf).

またシラン化シリカゲル上、酢酸エチル：メタノール：
水：２５％アンモニア水を１００：６０：４０：２で用
いる薄層クロマトグラフィーにより式Ｖ化合物はＲｆｏ
．５３を示し、式Ｗ化合物のＲｆは０．６４である。式
Ｖに示す構造をもつ異性体の存在は、水素化分解（パラ
ジウム／活性木炭）から得られる生成物を分析すること
によって決定できる。これらの分解生成物には、３ーヒ
ドロキシメチル−４・５・６−トリヒドロキシー４−○
一Ｑ−Ｄ−グルコピラノシル−１−へキサン、０一（４
−アミノー４・６ービスーデオキシ−Ｑ−Ｄーグルコピ
ラノシル）−（１→４）−○−Ｑ−Ｄ−グルコピラノシ
ルー（１→４）一ＤＨグルコピラノースおよびグルコー
スが含まれる。水素化はへキセン基の二重結合を還元し
、ァミノ結合を***させるので、式Ｗの化合物と異性体
関係にあるこの化合物は構造的に式ｍＡまたはｍＢの化
合物に関連することが明らかである。Also on silanized silica gel, ethyl acetate: methanol:
By thin layer chromatography using water: 25% aqueous ammonia in a ratio of 100:60:40:2, the compound of formula V was isolated from Rfo.
．． 53, and the Rf of the compound of formula W is 0.64. The presence of isomers having the structure shown in formula V can be determined by analyzing the products obtained from hydrogenolysis (palladium/activated charcoal). These decomposition products include 3-hydroxymethyl-4,5,6-trihydroxy-4-○
-Q-D-glucopyranosyl-1-hexane, 01 (4
-Amino-4,6-bisudeoxy-Q-D-glucopyranosyl)-(1→4)-○-Q-D-glucopyranosyl(1→4)-DH glucopyranose and glucose. Since hydrogenation reduces the double bond of the hexene group and splits the amino bond, it is clear that this compound, which is in an isomeric relationship with the compound of formula W, is structurally related to the compound of formula mA or mB. be.

しかしながら、この化合物はシクロヘキセン環の４位置
にグルコピラノシル基がさらに存在することによって特
徴づけられる。式Ｗに示される構造をもつ異性体の存在
は、バリダトールおよび０一（４−アミノー４・６−ビ
スーデオキシーＱ一Ｄーグルコピラノシル）一（１→４
）−０−Ｑ−Ｄ−グルコピラノシル（１＊→４）−○一
Ｑ一Ｄーグルコピラノシルー（１→４）−Ｄ−グルコピ
ラノースの形成によって確認される。However, this compound is characterized by the additional presence of a glucopyranosyl group in the 4-position of the cyclohexene ring. The presence of isomers with the structure shown in formula W indicates that validatol and 01(4-amino-4,6-bisudeoxy-Q1D-glucopyranosyl)1
)-0-Q-D-glucopyranosyl(1*→4)-○1Q1D-glucopyranosyl(1→4)-D-glucopyranose.

ほかの研究において、ｎ，十山＝３の異性体をメチル化
し、加水分解し、水素化ホウ素ナトリウムで還元し、ア
セチル化し、既知の方法によりガスクロマトグラフィ一
で分折した。In other studies, the n, 3 isomer was methylated, hydrolyzed, reduced with sodium borohydride, acetylated, and separated by gas chromatography using known methods.

式Ｗの化合物は１・４・５−トリー〇ーアセチルー２・
３・６ートリー○−メチル−Ｄーグルシトールのみを与
えるが、式Ｖの化合物は１・４・５−トリー０ーアセチ
ルー２・３・６−トリ−○−メチル−Ｄーグルシトール
と１・５ージー○ーアセチルー２・３・４・６ーテトラ
○ーメチル−○ーグルシトールを２：１のモル比で与え
る。式ＷおよびＶをもつ異性体化合物は、溶離剤として
０．０２印塩酸を用いる酸***換樹脂のクロマトグラフ
ィーによって分離できる。The compound of formula W is 1,4,5-tri-acetyl-2.
gives only 3,6-tri○-methyl-D-glucitol, whereas the compound of formula V gives 1,4,5-tri0-acetyl-2,3,6-tri-○-methyl-D-glucitol and 1,5-di○-acetyl. 2,3,4,6-tetra○-methyl-○-glucitol is provided in a molar ratio of 2:1. Isomeric compounds with formulas W and V can be separated by chromatography on acid exchange resins using 0.02 mm hydrochloric acid as eluent.

４〜８のグルコース単位を含み分子量が９６９〜１６１
７である系列の高級メンバーは、サッカラーゼを抑制す
る能力に劣る。Contains 4-8 glucose units and has a molecular weight of 969-161
The higher-ranking members of the series, number 7, are less capable of inhibiting saccharase.

これらの高級メンバーを酸加水分解すると，．特定の低
級成分はグルコースおよびマルトースとともに中間体と
して検出できる。When these high-grade members are acid-hydrolyzed,... Certain lower components can be detected as intermediates along with glucose and maltose.

ｎ−ブタノール、エタノールおよび水を５０：３０：２
０で用いるＦ１５００シリカゲルプレートの薄層クロマ
トグラフイーは、Ｒグルコース＝０．３０〜０．３４、
４グルコース単位）：０．２１〜０．２３ ５グルコー
ス単位）：０．１４〜０．１６、６グルコース単位）お
よび０．０９〜０．１１、７グルコース単位）を与える
。n-butanol, ethanol and water 50:30:2
Thin layer chromatography on F1500 silica gel plates used at
4 glucose units): 0.21-0.23 5 glucose units): 0.14-0.16, 6 glucose units) and 0.09-0.11, 7 glucose units).

この系列の低級メンバーの場合におけるように、全体酸
性加水分解は「成分１」とグルコースを明確なモル比、
すなわち１：４、１：５、１：６、１：７および１：８
（グルコースの百分率はそれぞれ７４．４％、７９．７
％、８３．３％、８６．５％および８９．１％である）
で与える。As in the case of the lower members of this series, the total acidic hydrolysis involves combining "component 1" and glucose in a defined molar ratio;
i.e. 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 and 1:8
(The percentage of glucose is 74.4% and 79.7, respectively.
%, 83.3%, 86.5% and 89.1%)
Give with.

溶媒としてｎ−ブタノール、エタノールおよび水を４５
：３５：２０の比で使用するＦ１５００シリカゲルＺプ
レートによる薄層クロマトグラフィーを行うと、次のＲ
ｆ値が３倍の展開の時に観測される。n-butanol, ethanol and water as solvents
Thin layer chromatography on F1500 silica gel Z plates using a ratio of :35:20 yields the following R
It is observed when the f value is expanded by 3 times.

前述の接触水素化も、これらの高級メンバー中のグルコ
ース単位の全部ではなくそれらのいくつかがシクロヘキ
セン基の４位置に結合していることを示す。これらの化
合物は、１→４結合をもつ線状のオリゴグルコシドを含
有するので、炭水化物を分解するある種の酵素の基質と
して使用できる。The catalytic hydrogenation described above also shows that some, but not all, of the glucose units in these higher members are attached to the 4-position of the cyclohexene group. Since these compounds contain linear oligoglucosides with 1→4 linkages, they can be used as substrates for certain enzymes that degrade carbohydrates.

酵素の範囲は、この化合物により実質的に抑制されない
ものに制限されることは明らかである。バクテリアおよ
び菌に似たＱーアミラーゼは、３以上のグルコース単位
を含み、低分子量の化合物および不活性な糠類破片、た
とえばマルトースおよびマルトトリオースを与える任意
のオリゴグルコシドの分解に使用できる。It is clear that the range of enzymes is limited to those which are not substantially inhibited by this compound. Bacterial and fungal-like Q-amylases can be used to degrade any oligoglucosides that contain three or more glucose units and give low molecular weight compounds and inert bran debris such as maltose and maltotriose.

この分解法は、ｎ．十ｎ２２３の化合物について使用で
き、Ｑ・１→４結合の確認にさらに使用される。４〜７
のグルコース単位をもつ本発明による化合物もａ−アミ
ラーゼにより部分的に分解されうる。This decomposition method is based on n. It can be used for compounds of 10n223 and is further used to confirm the Q·1→4 bond. 4-7
Compounds according to the invention with glucose units of 1000 can also be partially degraded by α-amylase.

８ーアミラ−ゼはＱ・１→４結合をもつグルコース連鎖
の非還元性末端からマルトース単位を分割するので、８
ーアミラーゼを用いて得られた分解生成物を注意して分
析すると、シクロヘキセン環の４位置に結合した各オリ
ゴグルコシド構成員について、ことにその連鎖の長さ、
およびピスーデオキシグルコースへ結合した連鎖、すな
わち化合物の還元末端中のグルコースの数について、価
値ある情報が得られる。Since 8-amylase splits the maltose unit from the non-reducing end of the glucose chain with a Q.1→4 bond, the 8-amylase
- Careful analysis of the degradation products obtained using amylase reveals that each oligoglucoside member attached to the 4-position of the cyclohexene ring, in particular its chain length;
Valuable information is obtained about the number of glucoses in the chain attached to and pisudeoxyglucose, ie in the reducing end of the compound.

しかしながら、４、５、６、７または８個のグルコース
単位を含む化合物は８ーアミラーゼによって完全に分解
されることはない。この化合物の抵抗する部分は、明ら
かに８ーアミラーゼの攻撃に対する不適切な構造的条件
に帰する。８−アミラーゼによる分解の結果は、次のよ
うに要約できる。However, compounds containing 4, 5, 6, 7 or 8 glucose units are not completely degraded by 8-amylase. The resistant portion of this compound is clearly attributable to unsuitable structural conditions for attack by 8-amylase. The results of 8-amylase degradation can be summarized as follows.

出発物質中の 分解生成物中 除去されたマグルコース
単 のグルコース ルトース単位位の数 単位の
数出発物質のいくらかは、必要に応じて回収する。In the starting material In the decomposition product Number of single glucose units of glucose removed in the decomposition product Number of units of glucose Some of the starting material is recovered if necessary.

８−アミロリシスの分解に関すると、８−アミラーゼは
マルトース単位のみを除去でき、かっこの単位オリゴサ
ッカラィドの非還元性末端からのみ除去できることが再
び強調される。Concerning the degradation of 8-amylolysis, it is again emphasized that 8-amylase can only remove maltose units, and only from the non-reducing end of the bracketed unit oligosaccharides.

限定に導ぴくいかなる理論も避けるべきである。これら
の高級の化合物の正確な構造は完全には明瞭とならなか
ったが、前述の発見から導びかれる結論は、４、５、６
、７および８個のグルコース単位をもつ化合物は式ｍＡ
をもち、２、３、４、５および６個のグルコース単位を
もつ連鎖を含み、お互いに対する。・１→４結合をもち
、オリゴサツカラィド鎖がシクロヘキセン環の４位置と
Ｑ立体配座Ｚで結合している、低級化合物の誘導体を含
むということである。ジメチルスルホキシド中のョウ化
メチル／水素化ナトリウムによる化合物のメチル化、全
体の加水分解、誘導体の形成および引き続くガスクロマ
トグラフィ一による分析は、２・３・６一トリメチルグ
ルコース譲導体を与えるので、グルコース単位は必然的
にもっぱら線状構造の１〜４に結合している。Any theory that leads to limitations should be avoided. Although the exact structures of these higher-grade compounds were not completely clear, the conclusion that can be drawn from the aforementioned findings is that 4, 5, 6
, 7 and 8 glucose units have the formula mA
and contains chains with 2, 3, 4, 5 and 6 glucose units relative to each other. - Contains derivatives of lower compounds with 1→4 bonds, in which the oligosaccharide chain is bonded to the 4-position of the cyclohexene ring in the Q configuration Z. Methylation of the compound with methyl iodide/sodium hydride in dimethyl sulfoxide, total hydrolysis, formation of derivatives and subsequent analysis by gas chromatography gives the 2.3.6-trimethylglucose derivative and thus glucose The units are necessarily attached exclusively to 1 to 4 of the linear structure.

メチル化化合物に依存して、異なる量で存在しまたはあ
る種の環境でまったく存在しない第２メチル化生成物は
、２・３・４０６ーテトラメチル誘導体である。The second methylation product, which is present in different amounts or in some circumstances not at all, depending on the methylation compound, is the 2,3,406-tetramethyl derivative.

この誘導体の存在およびトリメチル誘導体に対するその
モル比は、シクｏヘキセン環に結合する置換基に依存す
る。炭水加物に富んだ食物および飲物（たとえば、穀粒
でんぷん、ジャガイモでんぷん、果物、果物ジュース「
ビールおよびチョコレート）を摂取したのち、次の反応
式：でんぷんまたはグリコーゲンアミラーゼキマルトー
スマルターゼグルコースサ、ソカラーゼグルコース十フ
ルクトースに従い、グルコシドヒドロラーゼによる炭水
化物の急速な分解の結果として起こる過糖血症が動物お
よび人間に生ずることは知られている。The presence of this derivative and its molar ratio to the trimethyl derivative depends on the substituent attached to the cyclohexene ring. Foods and drinks rich in carbohydrates (e.g., grain starch, potato starch, fruits, fruit juices)
After ingesting (beer and chocolate), hyperglycemia, which occurs as a result of the rapid breakdown of carbohydrates by glucoside hydrolase, occurs in animals and It is known to occur in humans.

過糖血症は、とくに糖尿病において顕著であり、長期間
にわたって続く。脂肪症の被検者において、食餌性過糖
皿症はインシュリンのとくに著しい分泌にいよいよ影響
を及ぼし、その結果脂肪の蓄積の増大とＩＪポカトボリ
ズム（ｌｉｐＭａｔｏｂｏｌｊｓｍ）の低下を導びく。
健康な代謝をもつ人において、そして脂肪症の人におい
て、このタイプの過糖血症はインシュリンの分泌の結果
低糖血症となることがしばいまある。低糖血症と胃の中
のびじゆうの両方は胃液の生成を促進し、その結果胃炎
、胃かいようまたは十二指腸かいようの発生の原因とな
り、またはそれらを促進することは知られている。本発
明によるアミノ糖誘導体は食餌性の過糖血症、過インシ
ュリン血症および低糖皿症を実質的に防ぐことがわかっ
た。さらに、炭水化物、ことにスクロースは口腔内の微
生物により分割されること、そしてその結果カリエスの
形成が促進されることが知られている。Hyperglycemia is particularly noticeable in diabetes and continues for a long period of time. In subjects with steatosis, dietary hyperglycemia even affects a particularly pronounced secretion of insulin, leading to increased fat accumulation and decreased IJ lipmatobolism.
In people with healthy metabolism, and in people with adiposity, this type of hyperglycemia often results in hypoglycemia as a result of insulin secretion. It is known that both hypoglycemia and gastric fluid increase the production of gastric juices, thereby causing or promoting the development of gastritis, gastric ulcers or duodenal ulcers. It has been found that the amino sugar derivatives according to the invention substantially prevent dietary hyperglycemia, hyperinsulinemia and hypoglycemia. Furthermore, it is known that carbohydrates, especially sucrose, are broken down by microorganisms in the oral cavity and, as a result, promote the formation of caries.

本発明によるアミノ糖誘導体は、このタイプのカリエス
の形成を防止または軽減するのに使用できる。The amino sugar derivatives according to the invention can be used to prevent or reduce the formation of this type of caries.

試験管内アミラーゼ試験 アミラーゼ抑制単位（ＩＭＵ）を、アミラーゼ単位を５
０％程度抑制する抑制剤の量として定義する。In vitro amylase test amylase inhibitory unit (IMU)
Defined as the amount of inhibitor that suppresses the amount of oxidation by approximately 0%.

アミラーゼ単位（ＡＵ）は、下に示す試験条件下で、で
んぷん中のグルコシド結合の１ム当量を１分間に分割す
る酵素の量である。この分割された結合の山当量はジニ
トロサリシル酸を用いるカリー測定法により生成する砂
糖の還元仏当量として決定され、そしてマルトースを用
いて標準曲線をマルトース当量の仏当量として与える。
試験を実施するため、０〜１０山夕の抑制剤、または０
．０２モルのグリセロリン酸ナトリウム緩衝剤／ｐＨ６
．９の０．００１モルのＣａＣ１２の０．４の【中の０
〜２０ムその試験すべき溶液を０．１の【のアミラーゼ
溶液（２０〜２２ＡＵ／の【）に加え、この混合物を３
５ｑ○の水浴中で約１０〜２０分間平衡化する。次いで
、これを３５℃０に予備加熱した０．５ｍ‘の１％でん
ぷん溶液（Ｍｅｓｓｒｓ．Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａ
ｄｔからの可溶性でんぷんＮＯ．１２５２）とともに３
５℃で５分間培養し、次いで１の‘のジニトロサリシル
酸試薬（Ｐ．ＢｅｍＫｉｄ、ＣｏｌｏＷｃｋ−Ｋａｐｌ
ａｎ、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１、１４９夕によ
る）を加える。発色させるため、バッチを沸とう水浴中
で５分間加熱し、次いで冷却し「１０泌の蒸留水を加え
る。強ｍ仇の吸収光度を、アミラーゼを使用しないで同
じように調製したブランク値に対して、測定する。評価
のため、抑制剤の０添加後まだ有効であるアミラーゼ活
性をあらかじめ記録したアミラーゼ標準曲線から読み取
り、使用したアミラーゼの抑制率（％）をこの値から計
算する。抑制率を、商：４鰐掌十 十 乾燥物質に関して 十十 抑制しなかった同じ系列のバッチ中のＡＵ、の関
数としてプロットし、５０％の抑制点をこの曲線から読
みとり、ＡＩＵ／の９の抑制剤に変換する。An amylase unit (AU) is the amount of enzyme that divides 1 mu equivalent of glucosidic bonds in starch in 1 minute under the test conditions shown below. The mountain equivalent of this split bond is determined as the reduced equivalent of the sugar produced by the Currie assay using dinitrosalicylic acid, and a standard curve is given as the equivalent of maltose equivalent using maltose.
To conduct the test, 0 to 10 Sanyu inhibitors, or 0
．． 02M Sodium Glycerophosphate Buffer/pH 6
．． 9 of 0.001 mol of CaC12 of 0.4 of [0 of
Add ~20 MU of the solution to be tested to 0.1 AU of amylase solution (20-22 AU/) and add this mixture to 3
Equilibrate in a 5q○ water bath for about 10-20 minutes. This was then added to 0.5 m' of 1% starch solution (Messrs. Merck, Darmsta
Soluble starch NO. from dt. 1252) with 3
Incubate for 5 min at 5°C, then add 1' dinitrosalicylic acid reagent (P.BemKid, ColoWck-Kapl
an, Meth, Enzymol. , 1, 149). To develop the color, heat the batch in a boiling water bath for 5 minutes, then cool and add 10 parts of distilled water. For evaluation, the amylase activity that is still effective after zero addition of inhibitor is read from a previously recorded amylase standard curve, and the inhibition rate (%) of the amylase used is calculated from this value. , quotient: 4 crocodile palms 10 10 on dry matter plotted as a function of AU in batches of the same series that were not inhibited, and the point of 50% inhibition is read from this curve, for an inhibitor of 9 AIU/ Convert.

試験管内サッカラーゼ試験サッカラーゼ抑制剤単位（Ｓ
ＩＵ）を、サッカラーゼ単位を５０％程度に抑制する抑
制剤の量として定義する。In vitro saccharase test Saccharase inhibitor units (S
IU) is defined as the amount of inhibitor that inhibits saccharase units by approximately 50%.

サッカラーゼ単位（ＳＵ）は、下に示す試験条件下で、
１一モルのスクロースをグルコースとフルクトースとに
１分間に分割する酵素の量である。生成するグルコース
のムモルは、サツカラーゼによるスクロースの分割がさ
らに起こらない条件下で、グルコースオキシダーゼ反応
により、定量的に測定する。この試験を実施するため、
０〜２０仏夕の抑制剤、または試験すべき溶液０〜２０
仏そを、０．１＄Ｕの含量に調整したサッカフーゼの溶
液（Ｂ．Ｂｏｒｇｓｔｒｏ ｍおよびＡＤａｈｌｑｕｉ
ｓｔ、Ａｃｔａ Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．１２、（１９
５８）、１９９７に従う豚の小腸粘膜からの可溶化した
サッカラーゼ。ＰＨ６．０の０．１モルのマレィン酸ナ
トリウム緩衝剤で適切なＳＵ舎量に希釈した。）に加え
、この混合物をｐＨ６．０の０．１モルのマレィン酸ナ
トリウムで０．１のとにする。この混合物を３５℃で１
０分間平衡化し、ｐＨ６．０の０．１モルのマレイン酸
ナトリウム中の０．０５モルのスクロース溶液の０．１
の‘を加える。この混合物を３５ｑ０で２０分間培養し
、１泌のグルコースオキシダーゼ試薬（このグルコース
オキシダーゼ試薬は、次のようにしてつくる。２の９の
グルコースオキシダーゼ（Ｍｅｓｓ岱．Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒＮｏ．１５４２３）を１００の‘のｐＨ７．０の
０．５６５モルのトリス一日ＣＩ緩衝剤に溶かし、次い
で１の上の洗浄剤溶液（２夕のトリトン×１００十８夕
の９５％分析銘柄のエタノール）、１叫のジアニシジン
溶液（２０奴の日２０中の２６０の夕のｏ−ジアニシジ
ン、２ＨＣＩ）と０．５の‘の０．１％強度のパ−オキ
シダーゼ（Ｍｅｓｓね．Ｂｏｅｈｒｉｎ鱒ｒＮｏ．１５
３０２）の水溶液を加える）を加４えてサッカラーゼ反
応を停止し、この混合物を３５℃でさらに３０分間培養
する。Saccharase units (SU) under the test conditions shown below:
This is the amount of enzyme that will split 1 mole of sucrose into glucose and fructose in 1 minute. The amount of glucose produced is quantitatively measured by a glucose oxidase reaction under conditions in which no further splitting of sucrose by satucarase occurs. To conduct this test,
0-20 Inhibitor or solution to be tested 0-20
A solution of sacca fuse adjusted to a content of 0.1 $U (B. Borgstrom and ADahlqui
st, Acta Chem. Scand. 12, (19
Solubilized saccharase from pig small intestinal mucosa according to 58), 1997. Dilute to appropriate SU volume with 0.1M sodium maleate buffer, pH 6.0. ) and the mixture is brought to a pH of 0.1 with 0.1 molar sodium maleate, pH 6.0. This mixture was heated at 35°C for 1
0.1 of a 0.05 molar sucrose solution in 0.1 molar sodium maleate at pH 6.0, equilibrated for 0 min.
Add '. This mixture was incubated at 35q0 for 20 minutes, and a 1-glucose oxidase reagent (this glucose oxidase reagent is prepared as follows.
gerNo. 15423) in 100' of 0.565 M Tris CI buffer at pH 7.0 and then in a detergent solution of 1 (2 Triton x 100' 95% analytical grade ethanol). ), 1 dianisidine solution (260 o-dianisidine in 20 days of 20 days, 2HCI) and 0.5' of 0.1% strength peroxidase (Mess. Boehrin Trout No. 15
Add an aqueous solution of 302)) to stop the saccharase reaction, and incubate the mixture for an additional 30 minutes at 35°C.

次いで、１の‘の５０％日２Ｓ０４を加え、この混合物
を５４軌のにおいて対応するブランク値に対して測定す
る。評価のため、使用したサッカラーゼの抑制率（％）
をグルコ−ス標準曲線の５０％抑制点から、計算し、Ｓ
ＩＵ／汐またはＳｍ′のこ換算する。マルターゼ試験 マルターゼ抑制単位（ＭＩＵ）は、マルターゼを５０％
程度に抑制する抑制剤の量と定義する。50% of 1'2S04 is then added and the mixture is measured against the corresponding blank value at 54 orbits. Inhibition rate (%) of saccharase used for evaluation
is calculated from the 50% inhibition point of the glucose standard curve, and S
Convert to IU/shio or Sm' saw. Maltase Test Maltase Inhibition Unit (MIU) inhibits maltase by 50%
Defined as the amount of inhibitor that inhibits the

マルターゼ単位（ＭＵ）は、下に示す試験条件下で、Ｉ
Ａモルのマルトースを２仏モルのグルコースに１分間に
分割する酵素の量である。生成するグルコースの仏モル
は、マルターゼによるマルト−ズの分割がさらに起こら
ない条件下で、グルコースオキシダーゼ反応により定量
的に決定する。この試験を実施するため、０〜２０〃夕
の抑制剤、または試験すべき溶液０〜２０ムそを０．０
６０〜０．０７仙川の含量に調整した０．０５の【のマ
ルターゼ溶液（Ｂ．節ｒ袋ｔｒｏｍおよびＡ．Ｄａｈｌ
ｑｕｊｓｔ、ＡｃねＣｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．１２、（１
９５８）、１９９７ページに従う豚の小腸粘膜からの可
溶化マルタ−ゼ。０．１モルのＰＨ６．０のマレィン酸
ナトリウム緩衝剤で適切なＭＵ含量に希釈した。Maltase units (MU) are measured under the test conditions shown below.
It is the amount of enzyme that splits A mole of maltose into 2 French moles of glucose in one minute. The moles of glucose produced are quantitatively determined by a glucose oxidase reaction under conditions where no further splitting of maltose by maltase occurs. To conduct this test, apply 0 to 20 ml of inhibitor or 0 to 20 ml of the solution to be tested.
A maltase solution of 0.05 adjusted to a content of 60 to 0.07 Sengawa (B. Trom and A. Dahl)
AcneChem. Scand. 12, (1
Solubilized maltase from pig small intestinal mucosa according to 958), p. 1997. Diluted with 0.1M pH 6.0 sodium maleate buffer to appropriate MU content.

）に加え、この混合物を０．１叫のｐＨ６．０の０．１
モルのマレィン酸ナトリウムで０．１の‘とする。この
混合物を３５ｑｏで１０分間平衡化し、次いで３５００
に予熱したｐＨ６．０の０．１モルのマレイン酸ナトリ
ウム緩衝剤中の０．０５モルのマルトース溶液０．１地
を加える。この混合物を３５℃で２０分間培養し、１の
‘のグルコースオキシダーゼ試薬（このグルコースオキ
シダーゼ試薬の調製法は、サッカラーゼ試薬における場
合と同一である）の添加によりマルターゼ反応を停止し
、この混合物を３５ｑ０でさらに３０分間培養する。次
いで、１の‘の５０％日２Ｓ０４を加え、この混合物を
５４取れにおいて対応するプランク値に対して測定する
。評価のため、マルターゼの抑制率（％）をグルコース
標準曲線の５０％抑制点から計算し、ＭＩＵ′好または
ＭＩＵ′〆に換算する。) and add this mixture to 0.1 at pH 6.0.
mol of sodium maleate to 0.1'. This mixture was equilibrated for 10 minutes at 35 qo, then 3500 qo
A solution of 0.05 molar maltose in 0.1 molar sodium maleate buffer, pH 6.0, preheated to 0.1 molar solution is added. This mixture was incubated at 35°C for 20 minutes, the maltase reaction was stopped by the addition of 1' glucose oxidase reagent (the preparation method for this glucose oxidase reagent is the same as for the saccharase reagent), and the mixture was Incubate for an additional 30 minutes. 50% of 1'2S04 is then added and the mixture is measured against the corresponding Planck value at 54%. For evaluation, the inhibition rate (%) of maltase is calculated from the 50% inhibition point of the glucose standard curve and converted to MIU' or MIU'.

本発明による個々のアミノ糖誘導体についての試験管内
酵素抑制の結果を、下表１に要約する。The in vitro enzyme inhibition results for individual amino sugar derivatives according to the invention are summarized in Table 1 below.

表 １この表からわかるように、すし、豚のＱーアミラ
ーゼに対する試験管内抑制活性における特異性はこの系
列の分子量が増加するにつれて鋭く増加する。Table 1 As can be seen from this table, the specificity in in vitro inhibitory activity against sushi and pork Q-amylase increases sharply as the molecular weight of this series increases.

したがって、５〜７個のグルコース単位をも化合物は１
個または２個の単位をもつ化合物より１００情強い試験
管内の酵素の抑制を示す。サッカＺラーゼの抑制は２個
の単位をもつ誘導体で最も強く著しい。１個のグルコー
ス単位をもつ誘導体による酵素の抑制はわずか半分の強
さであり、これより高級のメンバーはサッカラーゼの抑
制に対してさらに減少した固有の活性を示す。Therefore, even if the compound contains 5 to 7 glucose units, 1
It shows greater inhibition of the enzyme in vitro than compounds with 100 or 2 units. The inhibition of Sacca Z-lase is most strongly pronounced with the two-unit derivative. Inhibition of the enzyme by derivatives with one glucose unit is only half as strong, and higher members exhibit even reduced intrinsic activity for inhibition of saccharase.

生体内において、サツカラーゼの抑制に関する活性は、
試験管内に見出される固有の抑制活性に対してほぼ並列
に進行する。In vivo, the activity related to inhibition of satucalase is
It proceeds almost in parallel to the intrinsic inhibitory activity found in vitro.

一方、驚くべきことには、生体内ででんぷんを加えた試
験において、１、２または３個のグルコース単位をもつ
化合物について、試験管内のアミラーゼ抑制に比べて１
０〜４び音の増加した活性が見出された。食餌性の過糖
血症および過インシュリン症を生成するため、各場合に
６匹の断食したねずみの群に、｛ａ｝２．５夕のスクロ
ース、｛ｂ｝２．５夕のマルトースまたは‘ｃ｝１夕の
沸騰したでんぶんを水溶液またはけん濁物として経口投
与した。６匹の他のねずみに同量の該炭水化物と、さら
に示した投与量のグルコシドヒドローズ抑制剤を与える
。On the other hand, surprisingly, in the in vitro starch test, compounds with 1, 2, or 3 glucose units showed 1
Increased activity of 0-4 tones was found. To produce dietary hyperglycemia and hyperinsulinism, groups of 6 fasted mice in each case were given {a} 2.5 kg of sucrose, {b} 2.5 kg of maltose or ' c} One night of boiled starch was orally administered as an aqueous solution or suspension. Six other mice receive the same amount of the carbohydrate and also the indicated dose of glucoside hydrose inhibitor.

さらに、６匹のほかのねずみに対応する量の塩溶液を与
える。Additionally, give the corresponding amount of salt solution to 6 other mice.

眼遼後方の静脈集綱からの血液中の血液グルコースと血
清インシュリンを短かし、間隔で測定した。Blood glucose and serum insulin in blood from the retrobulbar vein were measured at short intervals.

血液グルコースの測定は自動分析器（Ｈｏｆｆｍａｎ：
Ｊ．ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１２以 ５１（１９３７）に
よるＴｅｃｈｅｎｉｃｏｎ■またはグルコーオキシダー
ゼとｏ−ジアニシジン塩酸塩を用いて酵素的に）で実施
し、そして血清インシュリンの測定はＨａｌｅｓおよび
Ｒａｎｄｉｅ：ＢｉｏｃｈｅｍＪ．８８１３７（１９６
３）の方法により実施した。Blood glucose measurement is performed using an automatic analyzer (Hoffman:
J. biol. Chem. 12 et seq. 51 (1937) or enzymatically using glucooxidase and o-dianisidine hydrochloride) and the measurement of serum insulin was performed as described by Hales and Randie: Biochem J. 88137 (196
It was carried out by the method 3).

断食したねずみ中のサッカラーゼの生体内の抑制につい
ての結果を下表ｍに記載する。The results for in vivo inhibition of saccharase in fasted mice are listed in Table m below.

表 ｍ 米 ＝スクロースを有する対照と比較した統計的有
意差二＜０．０５米米

二＜０．０１給料 ‐−
−〈〇
，００ １上のデータからわかるように、サツカラーゼ
の抑制に対する生体内活性は試験管内の抑制活性に対し
て並列に進行する。Table m Rice = Statistically significant difference compared to control with sucrose 2<0.05 rice

2<0.01 salary --
−〇,00 1 As can be seen from the data above, the in vivo activity for inhibition of satucalase proceeds in parallel to the in vitro inhibitory activity.

したがって、サツカラ−ゼの抑制剤単位／の９が減少す
るにつれて、ＥＤ５ｏは増加する。結果を下表Ｗに要約
する。表 町 驚くべきことには、式ＯＢ、ｍＢおよびＶの化合物によ
るでんぷんの分解の生体内抑制は、アミラーゼの抑制に
対して試験管内で見出されるデータを基準にして期待さ
れたものよりも非常に大きいので「期待した試料に対応
しない。Therefore, as the inhibitor units/9 of satucalase decrease, the ED5o increases. The results are summarized in Table W below. Surprisingly, the in vivo inhibition of starch degradation by compounds of formulas OB, mB and V is much greater than that expected on the basis of the data found in vitro for the inhibition of amylase. Because it's so large, it says, "It doesn't correspond to the expected sample.

下表Ｖは、でんぷんの投与後断食ねずみについて測定し
た生体内データを与える。Ｐ 船 ○○○ 〉〉〉 ■！ ■！ ■・ 洲 題 栓 布 溝 Ｊ 総 三 りも１ 暖 や ゆ 母 え み さ 岬輩 上のデータからわかるように、試験管内および生体内の
両方におけるサッカラーゼ抑制の程度は分子量の明確な
関数であることが明らかであるが、アミラーゼ抑制は試
験内においてのみ分子量に依存し、これに対し生体内の
でんぷんの分解の抑制は分子量の低下とともに低下せず
、驚ろくべきことには一定にとどまる。Table V below gives in vivo data determined on fasted mice after administration of starch. P ship ○○○ 〉〉〉 ■! ■! As can be seen from the above data, the degree of saccharase inhibition both in vitro and in vivo is a clear function of molecular weight. Apparently, amylase inhibition is dependent on molecular weight only within the test, whereas inhibition of starch degradation in vivo does not decrease with decreasing molecular weight, but surprisingly remains constant.

したがって、アミラーゼに対する生体内抑制活性は分子
量とともに低下するが、でんぷんの消化の抑制に対する
ＥＤｓｏ値は本発明によるすべての化合物について本質
的に同一である。Therefore, although the in vivo inhibitory activity against amylase decreases with molecular weight, the EDso values for inhibition of starch digestion are essentially the same for all compounds according to the invention.

これを下表のに要約する。表 の したがって、驚ろくべきことには、式ＤＢ、ｍＢおよび
Ｖの化合物はスクロースとでんぷんの消化の抑制を同時
に達成でき、とくに正確な、予測できる特徴的な投与量
においてこれをなすことができる。This is summarized in the table below. Therefore, surprisingly, compounds of formulas DB, mB and V are able to simultaneously achieve inhibition of sucrose and starch digestion, especially at precise, predictable and characteristic doses. .

さらに、これらの化合物はグルコースの吸着に関して有
利な作用をもつ。Furthermore, these compounds have a beneficial effect on the adsorption of glucose.

これは式ｍＢ（ｎ，＝２）の化合物についての式皿にお
ける次のデータから理解できる。表 血 この系列の高級メンバーの混合物を精製し、そして純粋
な形で使用すると、予期されない、より高い活性と特異
性さえも示す。This can be seen from the following data in the formula plate for the compound of formula mB(n,=2). Table Blood When the mixture of higher members of this series is purified and used in pure form, it shows an unexpected, even higher activity and specificity.

このことは表川こ記載するＱーアミラーゼおよびサッカ
ラーゼに対する試験管内抑制データと、下表血に与えた
純粋な化合物に対するデータとを比較することによって
確認できる。表 皿 前記結果は、Ｑ−アミラーゼ抑制剤の役割における４個
のグルコース単位をもつ化合物の高い活性を示す。This can be confirmed by comparing the in vitro inhibition data for Q-amylase and saccharase described by Omotegawa et al. with the data for pure compounds given to superficial blood. Table 1 The above results demonstrate the high activity of compounds with 4 glucose units in the role of Q-amylase inhibitors.

５および６個の単位をもつ化合物も、従来知られた配合
物に見出されるよりもかなり高い特異的な抑制活性を示
す。Compounds with 5 and 6 units also exhibit significantly higher specific inhibitory activity than found in previously known formulations.

７および８個のグルコース単位をもつ化合物の場合にみ
ることができるように、分子量増加に伴う抑制活性の低
下が存在するが、これらの化合物はやはりかなりの抑制
活性を示す。Although there is a decrease in inhibitory activity with increasing molecular weight, as can be seen in the case of compounds with 7 and 8 glucose units, these compounds still exhibit significant inhibitory activity.

サッカラーゼの試験管内抑制は、分子量に依存してその
逆であるようにみえる。４個のグルコース単位をもつ化
合物の特異的活性は２個のグルコース単位をもつ化合物
のほぼ１０分の１であり、これに比べて８個のグルコー
ス単位をもつ化合物の抑制活性はほんのわずかである。In vitro inhibition of saccharase appears to be opposite depending on molecular weight. The specific activity of a compound with 4 glucose units is approximately one-tenth that of a compound with 2 glucose units, compared to only a small inhibitory activity of a compound with 8 glucose units. .

これらの化合物は希釈せずに、たとえば粉末として、ま
たはゼラチンのケースに入れてまたは製剤組成物の賦形
剤と組み合わせて、投与できる。製剤配合物は比較的大
量のまたは比較的少量の抑制剤、たとえば０．１％〜９
９．５％を製薬上許容できる非議性の不活性賦形剤と組
み合わせて含有でき、そして賦形剤は１種または２種以
上の固体、半固体または液体の希釈剤、充てん剤および
／または非毒性の不活性な製薬上許容される配合助剤を
含有できる。この種の製剤配合物は好ましくは投与単位
、すなわち特定量の抑制剤を含有し、所望の抑制作用を
生ずるものに相当する投与量の数分の１ないし数倍に相
当する物理的に明確な単位の形態である。投与単位は１
、２、３または４倍以上の個々の投与量あるいは１／２
、１／３または１／４の個々の投与量を含有できる。個
々の投与量は、好ましくは、予定の投与計画に従い、１
または２以上の投与単位の投与のさし、所望の抑制作用
を達成するのに十分な量の活性化合物を含有し、そして
毎日の投与の全部、２分の１または３分の１または４分
の１を通常１回、２回、３回または４回毎日投与する。
投与量および投与計画は各特定場合において注意してバ
ランスさせるが、正当な根拠に基づく専門家の判断を適
用しかつ患者の年令、体重および健康状態ならびに病気
の種類とそのひどさを考慮して、投与量は通常約３０〜
約３×１びＡＩＵ′ｋｇおよび約１〜約１×１ぴＳＩＵ
／ｋ９体重／日である。ある場合において、投与量を少
なくして適切な治療効果が得られるが、他の場合にはよ
り多い投与量を必要とするであろう。経口投与は固体お
よび液体の投与単位、たとえば粉末、錠剤、１糖剤、カ
プセル、粒状物、けん濁液、溶液などを用いて行う。These compounds can be administered undiluted, for example as a powder or in a gelatin casing or in combination with excipients in a pharmaceutical composition. The pharmaceutical formulation may contain a relatively large amount or a relatively small amount of inhibitor, e.g. 0.1% to 9
9.5% in combination with pharmaceutically acceptable, non-degradable, inert excipients, which may include one or more solid, semi-solid or liquid diluents, fillers and/or It may contain non-toxic, inert, pharmaceutically acceptable formulation aids. Pharmaceutical formulations of this type are preferably prepared in dosage units, i.e. physically defined, containing a specific amount of the inhibitor and corresponding to a fraction to several times the dose that produces the desired inhibitory effect. It is a form of unit. The dosage unit is 1
, 2, 3 or 4 times more individual doses or 1/2
, 1/3 or 1/4 individual doses. The individual doses are preferably 1.
or a dosage unit of two or more dosage units, containing an amount of active compound sufficient to achieve the desired suppressive effect, and containing the entire, one-half or one-third or one-fourth of the daily administration. Usually one, two, three or four doses are administered daily.
Doses and regimens should be carefully balanced in each particular case, applying well-founded professional judgment and taking into account the age, weight and health of the patient and the type and severity of the disease. , the dosage is usually about 30~
Approximately 3 × 1 AIU'kg and approximately 1 to approximately 1 × 1 pi SIU
/k9 body weight/day. In some cases, lower doses may be sufficient to achieve adequate therapeutic effect, while in other cases higher doses may be required. Oral administration is carried out using solid and liquid dosage units, such as powders, tablets, monocarbohydrates, capsules, granules, suspensions, solutions, and the like.

粉末は物質を適当な大きさに粉砕し、これを粉砕した製
薬上の賦形剤と混合する。Powders are prepared by grinding the material to a suitable size and mixing it with the ground pharmaceutical excipients.

食用炭水化物、たとえばでんぷん、ラクトース、スクロ
ースまたはグルコースを通常この目的に使用し、この場
合も使用できるが、非代謝性炭水化物、たとえばセルロ
ース誘導体を使用することが望ましい。甘味料、香味添
加物、保存剤、分散剤および染料もさらに使用できる。
カプセルは、前述の粉末混合物を使用し、すでに形成し
たゼラチンのケースに充てんすることによってつくるこ
とができる。Although edible carbohydrates such as starch, lactose, sucrose or glucose are usually used and can be used for this purpose, it is preferable to use non-metabolizable carbohydrates such as cellulose derivatives. Sweeteners, flavor additives, preservatives, dispersants and dyes may also be used.
Capsules can be made using the powder mixture described above and filling already formed gelatin cases.

充てん前に、滑剤、たとえばシリカゲル、タルク、ステ
アリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは
固体のポリエチレングリコールを粉末混合物に加えるこ
とができる。ほう解剤または可溶化剤、たとえば、かん
てん、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムをこの混合
物に加えて、カプセルを取り入れるときの抑制剤の許容
性を改良できる。錠剤は、たとえば粗大または微細な大
きさの粉末をつくり、糟剤とほう解剤を加えることによ
ってつくる。Lubricants such as silica gel, talc, magnesium stearate, calcium stearate or solid polyethylene glycol can be added to the powder mixture before filling. A disintegrator or solubilizer, such as agar, calcium carbonate or sodium carbonate, can be added to this mixture to improve the tolerability of the inhibitor when incorporating the capsule. Tablets are made, for example, by preparing a powder of coarse or fine size and adding a thickening agent and a loosening agent.

この混合物から錠剤を成形する。粉末混合物は、適当な
方法で微粉砕した物質を混合し、前述の希釈剤または他
の賦形剤を加えることによってつくる。必要に応じて加
えるほかの物質は、結合剤、たとえばカルボキシメチル
セルロース、アルギネート、ゼラチンまたはポリビニル
ピロリドン、溶解遅延剤、たとえば第４級塩、および／
または吸着剤、たとえばペントナィト、カオリンまたは
リン酸二カルシウムである。粉末混合物は結合剤、たと
えばシロップ、でんぷん糊またはアラビアゴム水溶液、
セルロース物質の溶液または重合体物質の溶液と一緒に
造粒できる。次いで、生成物を荒いふるいに通す。この
別法として、粉末混合物を錠剤形成機に通し、不均一な
形の生じた小片を粒子に粉砕できる。糟剤、たとえばス
テアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鍵油を生じ
た粒子に加えて、これらが錠剤形成ノズルへ粘着しない
ようにすることができる。次いで、このすべることがで
きるようにした混合物を、錠剤にプレスする。また、活
性化合物は自由流動性の不活性競形剤と一緒にし、造粒
工程または小片化工程をを省略して、直接錠剤にするこ
とができる。この生成物に透明または不透明の保護外殻
、たとえばシェラックの被膜、砂糖または重合体物質の
被膜およびワックスのみがいた外殻を形成できる。これ
らの被膜に染料を加えて、異なる投与単位を区別できる
。経口投与すべき配合物形態、たとえば溶液、シロップ
およびェリキシルを投与単位に調製し、特定量の配合物
が特定量の活性化合物を含有するようにすることができ
る。シロップは活性化合物を適当な香味剤を含有する水
溶液に溶かすことによって調製できる。ェリキシルは非
毒性のアルコール賦形剤を用いて得られる。けん濁液は
化合物を非議性の賦形剤中に分散させることによって調
製できる。可溶化剤および乳化剤、たとえばェトキシル
化ィソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレン
ソルビトールェステル、保存剤、および香味を改良する
添加剤、たとえばペパーミント油またはサッカリンなど
も加えることができる。投与法の説明はカプセル上に標
示できる。Form tablets from this mixture. Powder mixtures are made by mixing the finely divided materials in a suitable manner and adding the aforementioned diluents or other excipients. Other optional substances include binders such as carboxymethyl cellulose, alginates, gelatin or polyvinylpyrrolidone, dissolution retarders such as quaternary salts, and/or
or adsorbents such as pentonite, kaolin or dicalcium phosphate. The powder mixture may contain a binder, such as syrup, starch paste or aqueous gum arabic solution,
It can be granulated with a solution of cellulosic material or a solution of polymeric material. The product is then passed through a coarse sieve. As an alternative to this, the powder mixture can be run through a tablet machine to break up the resulting irregularly shaped pieces into particles. A thickening agent such as stearic acid, stearate, talc or key oil can be added to the resulting particles to prevent them from sticking to the tablet-forming nozzle. This slippery mixture is then pressed into tablets. Alternatively, the active compound can be combined with a free-flowing inert excipient and made into tablets directly, omitting the granulation or morselization step. The product can be formed with a transparent or opaque protective shell, such as shellac coatings, sugar or polymeric substance coatings, and waxy coatings. Dyes can be added to these coatings to distinguish between different dosage units. Formulations for oral administration, such as solutions, syrups and elixirs, can be prepared in dosage units so that a particular quantity of the formulation contains a particular quantity of the active compound. Syrups can be prepared by dissolving the active compound in an aqueous solution containing a suitable flavoring agent. Elixir is obtained using a non-toxic alcoholic vehicle. Suspensions can be prepared by dispersing the compound in a non-dispersing vehicle. Solubilizers and emulsifiers such as ethoxylated isostearyl alcohol and polyoxyethylene sorbitol ester, preservatives, and flavor improving additives such as peppermint oil or saccharin may also be added. Instructions for administration can be labeled on the capsule.

さらに、たとえば、活性化合物を重合体物質、ワックス
などで取り囲み、活性化合物を遅延させて解放すること
によって、投与物を保護できる。これらの化合物の毒性
は、非常に低い。Additionally, the dosage can be protected, for example, by surrounding the active compound with polymeric substances, waxes, etc., which provide delayed release of the active compound. The toxicity of these compounds is very low.

最後の精製を行なわなくても、８５０雌ＩＵ′夕の活性
をもつ実施例８からの粗生成物は副作用を示さず許容さ
れる。これはこの明細書に記載される本発明の化合物の
場合に適用される。これらの化合物は、はつかねずみに
３４００００ＳＩＵ／ｋ９の投与量で経口的に投与した
とき、副作用を示さないで許容された。静脈内注射にお
いて、１０００庇ＩＵ／ｋ９ははつかねずみに副作用を
示さないで許容された。本発明による製剤組成物は、他
の製薬上活性な化合物、ことに他の経口抗脂肪症剤、た
とえば血液の砂糖のレベルを低下させる８ーシトロピッ
クスルホニル尿素譲導体およびビグアニドをも含有でき
る。Even without final purification, the crude product from Example 8 with an activity of 850 female IU' is tolerated without side effects. This applies in the case of the compounds of the invention described in this specification. These compounds were tolerated without side effects when administered orally to rats at a dose of 340,000 SIU/k9. In intravenous injection, 1000 eIU/k9 was tolerated by mice without side effects. The pharmaceutical compositions according to the invention can also contain other pharmaceutically active compounds, in particular other oral antilipidemic agents, such as 8-citropic sulfonylurea derivatives and biguanides, which reduce blood sugar levels.

前述の製剤組成物のほかに、これらの活性物質を含む食
料も調製できる。In addition to the pharmaceutical compositions mentioned above, food products containing these active substances can also be prepared.

その例は、本発明の抑制剤の少なくとも１種の治療上有
効量を加えた、砂糖、パン、ジャガイモ製品、フルーツ
ジュース、ビール、チョコレートおよび他の砂糖菓子、
および保存製品、たとえばジャムである。 ′使用
する試薬および助剤のいくつかの説明：使用できるイオ
ン交換体、たとえば、市販製品のアンバーライトＩＲＡ
４１に１（陰イオン交換体）；アンバーライトＩＲＣ１
２０（日十型）（強い酸性の腸イオン交換体）；アンバ
ーライト２（ＨＣ０３‐型）（陰イオン交換体）：アン
バーライトＩＲＡ４１のＨ−（強い塩基性の陰イオン交
換体）：アンバーライトＩＲＣ５０Ｈ＋（弱酸性腸イオ
ン交換体）〔ローム・ァンド・ハース社の商標〕および
ドゥゥェックス（Ｄｏｗｅｘ）５０ＷＸ岬十（強２酸性
腸イオン交換体）〔ダウ・ケミカル社の商標〕。Examples are sugar, bread, potato products, fruit juices, beer, chocolate and other sugar confectionery, to which a therapeutically effective amount of at least one of the inhibitors of the invention has been added.
and preserved products, such as jam. 'Some description of the reagents and auxiliaries used: Ion exchangers that can be used, for example the commercial product Amberlite IRA
41 to 1 (anion exchanger); Amberlite IRC1
20 (Japanese type) (strongly acidic intestinal ion exchanger); Amberlite 2 (HC03-type) (anion exchanger): Amberlite IRA41 H- (strongly basic anion exchanger): Amberlite IRC50H+ (weakly acidic intestinal ion exchanger) (trademark of Rohm and Haas Company) and Dowex 50WX Misakiju (strongly acidic intestinal ion exchanger) (trademark of Dow Chemical Company).

使用できるセルロースに基づく陰イオン交換体は、たと
えば、シユライヘル・アンド・シユル（Ｓｃｈｌｅｉｃ
ｈｅｒａｎｄＳｃｈＵＩＩ社）からのＤＥＡＥセルロ
３ースである。Cellulose-based anion exchangers that can be used are, for example, those described by Schleich and Schleich.
DEAE cellulose from herand SchUII
It is 3rd.

使用できるポリアクリルアミドゲルは、たとえばビオー
ゲル（Ｂｉｏ−ＧＩ）一Ｐ−２〔ビオーラツド・ラボラ
トリーズ（Ｂｉｏ−ＲａｄＬａｐｒａのｒｉｅｓ）の商
標〕である。Polyacrylamide gels that can be used are, for example, Bio-GI 1P-2 (trademark of Bio-Rad Lapra ries).

３マルトジン（Ｍａｌｔ
ｚｉｎ）は、デイアマルト（Ｄｉａｍａｌ）ＡＧ（西ド
イツ）から入手できる天然の麦芽抽出物である。レワポ
−ル（Ｌｅ肌ｐ。3 Maltogin
zin) is a natural malt extract available from Diamal AG (West Germany). Rewaport (Le skin p.

ー■）は、バイヱル（Ｂａｙｅｒ）ＡＧ（西ドイツ）か
ら入手できる不特定４吸着樹脂である。クラーセル（Ｃ
Ｉｅｒｃｅｌ）はセカ（ＣＥＣＡ）社（フランス）から
入手できる炉過助剤である。-■) is an unspecified 4 adsorption resin available from Bayer AG (West Germany). Clacel (C
Iercel is a furnace aid available from CECA (France).

ＳＥ３０はへウレツト・パツカード（ＨｅｗｌｅｔｔＰ
ａｃｋａｒｄ）社から入手できるシリコーンェラストマ
−である。使用した下の微生物は、次の番号でアメリカ
ン・タイプ・力ルチヤー・コレクション（Ａｍｅｎｃａ
ｎＴｙｐｅＣｕｌｔｍｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に保管
されている。SE30 is a Hewlett P card.
It is a silicone elastomer available from Ackard. The microorganisms used below are from the American Type Power Collection (Amenca) with the following numbers:
nTypeCultmeCollection).

菌 株 ＡＴＣＣＮｏ． ＳＥ５０（Ｃ母９６１，７０） ３１
０４２ＳＥ１８（Ｃ斑９５７，７０）
３１０４１ＳＥ８２（Ｃ斑６１５，７１）
３１０４５ＳＥ５０／１３（Ｃ斑６１４．７１
） ３１０４３ＳＥ５０／１１０（Ｃ既
６７４，７３） ３１０４４実施例 １５
．０％のでんぷん、１．０％のイースト抽出物および０
．２％のＫ２ＨＰ０４の組成の栄養溶液の８そを含むガ
ラス発酵器を３日経過した振とうフラスコの函株ＳＥ５
０／１３（Ｃ斑６１４．７１）で接種し、この混合物を
強くかきまぜかつ通気しながら２が０で３日間培養し、
１０５０００ＭＵ／磯を含有する培養液を得る。Bacterial strain ATCC No. SE50 (C mother 961,70) 31
042SE18 (C spot 957,70)
31041SE82 (C spot 615, 71)
31045SE50/13 (C spot 614.71
) 31043SE50/110 (C already 674,73) 31044 Example 15
．． 0% starch, 1.0% yeast extract and 0
．． A 3-day-old shake flask box stock SE5 containing 8 volumes of a nutrient solution with a composition of 2% K2HP04.
0/13 (C spot 614.71), the mixture was incubated for 3 days at 20 with vigorous stirring and aeration,
A culture medium containing 105,000 MU/Iso is obtained.

２０ｑｏに冷却後、この発酵液の６そを半濃厚ＨＮ０３
でｐＨ２．５に調節し、３０夕のカーボラフィン（Ｃａ
ｒｂｏｒａｆｆｉｎ）活性木炭を加え、この混合物を１
０分間かきまぜる。After cooling to 20qo, 6 parts of this fermented liquid was made into semi-concentrated HN03.
The pH was adjusted to 2.5 with
Add activated charcoal (rboraffin) and reduce the mixture to 1
Stir for 0 minutes.

次いで、これを１０００仇ｐｍで１５分間遠心し、透明
な淡黄色の上澄み液をＮＨ３で中和したのち５００私に
濃縮する。この５００の‘の濃縮物を２００夕のアンバ
ーライトＩＲＡ４１に１−とともに４５分間かきまぜ、
炉過し、５分の４容積＝４００の【のメタノールを炉液
に加えて、高分子量のでんぷん分解生成物を（まだ存在
する活性木炭の残留物と一緒に）沈殿させる。この混合
物を５００比ｐｍで５分間遠心する。８５０の‘の上澄
み液を４その乾燥アルコールに滴々加え、その間かきま
ぜを強く行う。Then, it was centrifuged at 1000 pm for 15 minutes, and the clear pale yellow supernatant was neutralized with NH3 and concentrated to 500 pm. Stir this 500' concentrate with 200 ml of Amberlite IRA41 for 45 minutes;
Filter and add 4/5 volumes of methanol to the furnace liquor to precipitate the high molecular weight starch degradation products (along with any activated charcoal residue still present). Centrifuge this mixture at 500 rpm for 5 minutes. Add 850' of supernatant liquid dropwise to the dry alcohol, stirring vigorously.

白色の綿様沈殿を炉遇し、乾燥アルコールで２回、エー
テルで２回洗い、５０ｑｏで真空乾燥する。収量：１０
×１びＡＩＵ／夕を含有する白色粉末。この調製物を以
下のいくつかの実施例において使用する。薄層プレート
上の酵素の抑制 薄層クロマトグラフィーにより発酵からの最終生成物お
よび配合物の組成を評価するため、１ムの発酵液、また
は１ムタの配合物をすぐに使用できるシリカゲルのフィ
ルム（ＳｃｈｌｅｉｒａｎｄＳｃｈｏｌｌ社、Ｆ１５０
項塾）に施こし、ｎーブタノール／ェタノールノ水＝５
０／３０／２０中で２回展開する。The white cotton-like precipitate is heated, washed twice with dry alcohol and twice with ether, and dried under vacuum at 50 qo. Yield: 10
A white powder containing x1 and AIU/U. This preparation is used in some of the examples below. To assess the composition of the final products and formulations from the fermentation by enzyme-inhibited thin-layer chromatography on thin-layer plates, 1 µm of fermentation broth, or 1 µm of the formulation, was transferred to a ready-to-use film of silica gel ( Schleiland Scholl, F150
n-butanol/ethanol water = 5
Deployed twice on 0/30/20.

サッカラーゼ抑制の染色のため、展開しよく乾燥したプ
レートを酵素ゲルで頃露し（２０の‘／２０×２０伽の
プレート）、このゲルを放置して固化する。次いで、こ
のプレートを湿ったチャンバー内で５分間予備培養し、
次いで基質ゲルで飽和するまで頃霧する。この第２層の
ゲルが固化したのち、プレートを湿ったチヤンバーに入
れ、４ぴ０で培養する。抑制染色（淡いスポット、赤か
つ色のバックグラウンド）が６０〜９０分で発現する。
最適 Ｊの色が発現したときこの試験を停止し、その上
に位置するかんてん層をもつプレートを、ブロワーを用
いて温い空気で乾燥する。ゲルの調製 酵素ゲル：１．５夕のアガロース（しｌｎｄ瓜ｔｒｉｅ
′Ｂｉｏｌｏｇｉｑ肥Ｆｒａｎｃａｉｓ）をｐＨ６．
０の０．２モルのマレイン酸ナトリウム緩衝溶液ｌｏ０
似中にけん濁し、次いで沸とうして溶かす。For saccharase inhibition staining, the developed and well-dried plates are exposed to enzyme gel (20'/20 x 20' plates) and the gel is left to solidify. The plate was then pre-incubated in a humid chamber for 5 minutes,
Then sparge until saturated with matrix gel. After this second layer of gel has solidified, the plate is placed in a moist chamber and incubated at 40°C. Inhibitory staining (pale spots, red and colored background) develops in 60-90 minutes.
The test is stopped when the optimum J color is developed and the plate with the aliment layer located above it is dried with warm air using a blower. Preparation of gel Enzyme gel: 1.5 minutes of agarose
'Biologiq Fertilizer Francais) at pH 6.
0.2 molar sodium maleate buffer solution lo0
Suspend it in a medium, then boil it to dissolve it.

この透明なアガロース溶液を５０ｑ０に冷却し、２５０
一そのトリトン×−１０礎容液（２夕のトリトン×−１
００十８夕の分析銘柄の２エタノール）と０．５の‘の
ジアニシジン溶液（２０のｏのジアニシジン／１の‘の
アセトン）をかきまぜながら加える。ゲルを使用する直
前、１泌のＧＯＤ／ＰＯＤ試薬（１２．５の９のグルコ
ースオキシダーゼ、純度グレード１、Ｂｏｅｈｒｊｎｇ
ｅて社、２Ｎｏ．１５４２３および２．５雌のパーオキ
シダーゼ、純度グレート□、節ｅｈｒｊｎ鞍ｒ社、ＮＯ
．１５３０２、５泌のマレィン酸塩緩衝溶液に溶かした
もの）と豚の小腸からの４〜５単位のサツカラーゼを加
える。このゲルは噴霧時にノズル中で固化するので、暖
姦３時まで５０ｑｏに保持しなければならない。基質ゲ
ル：０．５夕のアガローズをｌ００の‘のＰＨ６．０の
マレィン酸ナトリウム緩衝溶液中にけん濁させ、沸とう
により溶解させる。次いで、この溶液を５０ｑｏに冷却
し、１００ｒそのトリトン（２夕のト３リトンＸ−１０
０十８夕の分析銘柄のエタノール）を加え、１夕のスク
ローズ（ＳｅｒｖａＮｏ．３５５７９）を加える。スク
ローズが溶けたのち、ゲルはすぐに使用できる。アミラ
ーゼ抑制染色のため、展開し、乾燥した薄層クロマトグ
ラフィープレートをアミラーゼゲル（２０柵／２０×２
０伽プレート）で噴霧し、ゲルを放置して固化させる。This clear agarose solution was cooled to 50q0 and
1 Triton x-10 foundation solution (2 Triton x-1
Add 0.5' dianisidine solution (2000 dianisidine/1 part acetone) with stirring. Immediately before using the gel, add 1 volume of GOD/POD reagent (12.5 to 9 glucose oxidase, purity grade 1, Boehrjng
eTesha, 2 No. 15423 and 2.5 Female Peroxidase, Purity Grade □, Section EHRJN SARA, NO.
．． 15302, dissolved in a maleate buffer solution) and 4-5 units of sutucalase from pig small intestine are added. Since this gel solidifies in the nozzle during spraying, it must be kept at 50 qo until 3 o'clock. Substrate gel: Suspend 0.5 liters of agarose in 100' of pH 6.0 sodium maleate buffer solution and dissolve by boiling. The solution was then cooled to 50 qo and heated with 100 r of Triton (2 qo of Triton X-10
Add ethanol (analyzed brand ethanol) and add sucrose (Serva No. 35579). After the sucrose has dissolved, the gel is ready for use. For amylase inhibition staining, develop and dry thin layer chromatography plates with amylase gel (20 bars/20 x 2
Spray the gel on the gel plate and leave the gel to solidify.

室温で５分間予備培養したのち、ゲル層をもつプレート
を０．５％強度のでんぷん溶液（１夕のでんぷん、Ｍｅ
ｒｃｋＮＯ．１２５２、２００の‘の０．２モルのグリ
セロホスフヱート緩衝溶液／０．０１モルのＣａＣ１２
、ｐＨ６．９中に沸とうにより溶かしたもの）中に入れ
、そのまま溶液をかきまぜながら４０ｏｏに２分間保持
する。次いで、このプレートを蒸留水でよくすすいで、
分解しなかったでんぷんを染色できるようにし、希薄１
２溶液（４凧【の１２原料溶液／５００肌のＱＯ；１２
原料溶液：２．２夕の１２十１００の‘の日２０２に溶
けた４．４夕のＫＩ）中に浸糟する。染色は約１分後最
遜である。このプレートは青色のスポットが急速にあせ
るので、直ちに写真に撮る。アミラーゼゲルの調製 １夕のアガロースを１００ＭのＰＨ６．９の０．２モル
のグリセロリン酸ナトリウム／０．０１モルのＣａＣＩ
の緩衝溶液に、１００ｏｏで溶かし、５０午０に冷却後
、１００ｒそのトリトンＸ−１００（２夕のトリトンＸ
−１００十８夕の分析銘柄のエタノール）を加える。After a 5 min preincubation at room temperature, the plate with the gel layer was soaked in a 0.5% strength starch solution (1 night starch, Me
rckNO. 1252, 200' 0.2M glycerophosphate buffer solution/0.01M CaC12
, pH 6.9 by boiling), and kept at 40oo for 2 minutes while stirring the solution. The plate was then thoroughly rinsed with distilled water and
Allows undecomposed starch to be dyed, diluted to 1
2 solutions (4 kite [12 raw material solutions/500 skin QO; 12
Raw material solution: immersed in 4.4 evening KI) dissolved on 2.2 evening 12-100' day 202. Staining reaches its peak after about 1 minute. This plate is photographed immediately as the blue spot fades quickly. Preparation of amylase gel One night agarose was mixed with 100M pH 6.9 0.2M sodium glycerophosphate/0.01M CaCI
Dissolve the Triton X-100 in the buffer solution of
- Add ethanol (analyzed brand of 100 18th grade).

頃霧直前に、１００山そのアミラーゼ結晶けん濁液（１
０の夕の豚の胃のアミラーゼ／泌の飽和硫酸アンモニウ
ム溶液、恥ｅｈｒｉｎ袋ｒ社、Ｎｏ．１５０１７）を加
える。実施例 ２ ４％のでんぷん、２．４％のグルコース、０．９％のカ
ゼイン加水分解物および０．９％のイースト抽出物から
なり、ＮａＯＨでＰＨ７．６とし、これに０．４％のＣ
ａＣＱを加え、１２１℃で３０分間滅菌した１２０叫の
栄養溶液を含む１その円すし、フラスコを、２％のでん
ぷん、１％のグルコース、０．５％のカゼイン加水分解
物および１％のイースト抽出物からなり、ＮａＯＨで軸
７．２とし、これに０．４％のＣａＣ０３を加え、１２
１℃で３■ご間滅菌した栄養溶液中で生長させた菌株Ｓ
Ｅ８２（Ｃ斑６１５．７１）の予備培養液３の上で接種
し、この混合物を円形の振とう振動機上で２が０におい
て５日間培養すると、１２２０００ＡＩＵ／叫を含有す
る培養溶液が得られる。Around that time, just before the mist, 100 mountains of amylase crystal suspension (1
Saturated ammonium sulfate solution of porcine gastric amylase/secretion, Ehrin Bag R Co., No. 0. 15017). Example 2 Consisting of 4% starch, 2.4% glucose, 0.9% casein hydrolyzate and 0.9% yeast extract, pH 7.6 with NaOH and 0.4% C
Add aCQ and sterilize the flask at 120°C for 30 minutes at 121°C and add 2% starch, 1% glucose, 0.5% casein hydrolyzate and 1% yeast. Extract, made up to 7.2 with NaOH, to which 0.4% CaC03 was added, 12
Strain S grown in sterilized nutrient solution for 3 seconds at 1°C.
Inoculating on a preculture of E82 (C spot 615.71) 3 and culturing this mixture for 5 days on a circular shaking shaker at 0 gives a culture solution containing 122,000 AIU/c. .

処理するため、１２００仇ｐｍの遠心により菌糸体を合
わせた培養溶液から分離し、培養溶液の炉液の３００叫
のｐＨを半濃厚ＨＮ０３で２．５とし、この混合物を分
析級の活性木炭２．５夕とともに１０分間かきまぜる。
１２００仇ｐｍで木炭を分離したのち、３００の‘のメ
タノールを、ＩＯＮのＫＯＨでｐＨ６に中和してあるこ
の溶液に加え、混合物を短時間放置し、１２００仇ｐｍ
で沈殿を除去する。For processing, the mycelium was separated from the combined culture solution by centrifugation at 1200 pm, the pH of the fermentation solution of the culture solution was brought to 2.5 with semi-concentrated HN03, and the mixture was heated with analytical grade activated charcoal 2. .5 Stir for 10 minutes.
After separating the charcoal at 1200 mpm, 300 methanol was added to this solution, which had been neutralized to pH 6 with ION KOH, and the mixture was allowed to stand for a short time, and the charcoal was heated to 1200 mpm.
Remove the precipitate.

上澄み液を３そのエタノールに滴々加え、この混合物を
短時間放置したのち、沈殿を１２００比ｐｍで単離し、
沈殿を無水エタノールで２回、エーテルで１回洗い、真
空乾燥すると、７．４５×１ぴＭＵ／夕を含有しかつｎ
，十ｎ３＝４以上のグルコース単位の化合物を９５％よ
り多く含有する生成物２．２３夕の生成物が得られる。
実施例 ３３．５％のグルコース、２％のでんぷん、０
．５％のカゼイン加水分解物、１．３％のイースト抽出
物、０．３％のＣａＣ０３および０．３％のＫ２ＨＰ０
４の組成をも Ｊち、滅菌前風７．靴こ調節し、１２１
００で３０分間滅菌した１２０の‘の栄養溶液を含有す
る１そのコニカルフラスコを、３％の大豆粉末、３％の
グリセリンおよび０．２％のＣａＣ０３からなる栄養溶
液中の菌株ＳＥ５０／１１０の予備培養液６肌【で接種
し、この混合 ′物を円形の振動振とう機上で２４００
において３〜４日間培養すると、１５３０００山Ｕ／の
【と１２２００ＳＩＵ′夕を含有する培養液が得られる
。The supernatant was added dropwise to the ethanol and the mixture was allowed to stand for a short time before the precipitate was isolated at 1200 pm.
The precipitate was washed twice with absolute ethanol and once with ether and dried in vacuo to contain 7.45 x 1 MU/unit and n
, 2.23 products containing more than 95% of compounds with glucose units of 4 or more are obtained.
Example 33.5% glucose, 2% starch, 0
．． 5% casein hydrolyzate, 1.3% yeast extract, 0.3% CaC03 and 0.3% K2HP0
With the composition of 4, before sterilization 7. Adjust your shoes, 121
1 conical flask containing a nutrient solution of 120' sterilized for 30 min at 0.000000000 The culture solution was inoculated with 6 skins, and the mixture was shaken on a circular vibrating shaker for 2400 min.
When cultured for 3 to 4 days, a culture solution containing 153,000 U/U and 12,200 SIU'/U is obtained.

１その培養溶液をＨＮ０３でｐＨ２．５に調節し、５夕
の活性木炭とともに１び分間かきまぜ、次いでこの ２
混合物を５００仇ｐｍで３０分間遠心した。1 The culture solution was adjusted to pH 2.5 with HN03, stirred for 1 minute with activated charcoal, and then this 2
The mixture was centrifuged at 500 pm for 30 minutes.

次いで、上澄み液を２５夕のアンバーライトＩＲＡ４１
０（ＯＨ−型）の添加により中和した。中性の上澄み液
を回転蒸発器により１００叫に濃縮し、１００Ｍのメタ
ノ−ルを加え、この混合物を炉遇した。炉液を２その２
乾燥アルコール中にかきまぜながら入れ、分離した沈殿
を炉遇し、アセトンとエーテルで３回洗ったのち、真空
乾燥した。収量：５×ｌびＡＩＵ／夕を含有し、主にｎ
，十−＝少なくとも４グルコース単位である化合物を含
有 ３する１４夕の白色粉末。実施例 ４ ０．５％のでんぷんを使用する以外は実施例３による方
法を反復すると、４日間の発酵後４００００ＡＩＵと１
８４ＳＩＵ／の‘を含有する培養液が得られる。Next, the supernatant liquid was mixed with Amberlight IRA41 after 25 minutes.
Neutralization was carried out by addition of 0 (OH-form). The neutral supernatant liquid was concentrated to 100% by rotary evaporator, 100M methanol was added, and the mixture was heated in the oven. Furnace liquid 2 part 2
The mixture was poured into dry alcohol with stirring, and the separated precipitate was heated, washed three times with acetone and ether, and then dried under vacuum. Yield: Contains 5×l AIU/unit, mainly n
, 10-=14 white powder containing a compound containing at least 4 glucose units. Example 4 Repeating the method according to Example 3 but using 0.5% starch yields 40,000 AIU and 1 after 4 days of fermentation.
A culture medium containing 84 SIU/' is obtained.

この培養液は、少なくとも１つのグルコース単位をもつ
本発明による化合物の混合物を含有する。実施例 ５ ３％グルコース、０．６％のカゼイン加水分解物、１．
６％のイースト抽出物、０．３％ＣａＣＱおよび０．３
％のＫ２ＨＰ０４の組成をもち、滅菌前にＫＯＨでＰＨ
７．８とした１２０の‘の栄養溶液を含む１そのコニカ
ルフラスコを、実施例３による菌株ＳＥ５０／１１０（
Ｃ既６７４７３）の予備培養液で接種し、この混合物を
円形振動振とう機上で２４午０において４日間培養する
と、１０８０鷹ＩＵ／そを含有し、主として１個のグル
コ−ス単位をもつ本発明による化合物を含有する培養液
が得られる。This culture medium contains a mixture of compounds according to the invention with at least one glucose unit. Example 5 3% glucose, 0.6% casein hydrolyzate, 1.
6% yeast extract, 0.3% CaCQ and 0.3
% K2HP04, pHed with KOH before sterilization
One conical flask containing a nutrient solution of 7.8 and 120' was injected with the strain SE50/110 according to Example 3.
When inoculated with a preculture of C. 67473) and incubating this mixture for 4 days at 24:00 on a circular vibratory shaker, it contained 1080 IU/unit and had mainly one glucose unit. A culture medium containing the compound according to the invention is obtained.

１３００比ｐｍで菌糸体を除去した培養液の炉液５そを
半濃厚ＨＮ０３で対２．５に調節し、５５夕の活性木炭
（、、Ｍｅｒｃｒ）と２００夕のクラーセル（ＣＩａｌ
ｃｅｌ）とともに１８分間かきまぜた。The mycelium-free culture broth at 1300 pm was adjusted to 2.5 ml with semi-concentrated HN03 and treated with activated charcoal (Mercr) at 55 pm and Clacel (CIal) at 200 pm.
cel) for 18 minutes.

固体を炉遇したのち、炉液をアンモニアで柵７に中和し
、炉液を１．５のこ濃縮し、５倍量のエタノールを加え
て沈殿を生成させた。生じた綿状沈殿を１２００仇ｐｍ
において連続流ローターにより分離し、黄味上澄み液を
１５０の‘に濃縮し、低速度で遠心して少量の未溶解物
質を分離した。この溶液の５０の‘をアンバーライトＩ
Ｒ−１２０（日十型）のカラム（３０×３０仇舷：３０
の‘の日２０／時）に導入した。不活性サッカラィドと
吸着されなかった抑制作用をもつある量の成分を含有す
る溶鱗が全部で３００の‘集められたのち、約４００の
‘の比０を含むガラスビーカーに前記の交換体を移し、
濃アンモニアを加え、その間かきまぜ、ｐＨｉｌ．５と
した。さらに３び分間かきまぜたのち、交換体を分離し
たのち、溶液をその容積の１／２０１こ濃縮したのちア
ンバーライトＩＲＡ−４１０（ＨＣ０３‐型）を含むカ
ラム（２０×１５仇舷）に通して炉適し、約５００の‘
の漆離液を３０の‘／時の速度で集め、この溶離液を濃
縮し、凍結乾燥すると、１．３夕の粗生成物が得られた
。さらに精製するため、粗配合物をＢｉｏ−ＧＩ Ｐ−
２、１００〜２００メッシュ（Ｂｉｏ−Ｒｅｄ社）で分
画した。After the solid was heated in a furnace, the furnace liquid was neutralized with ammonia to a pallet 7, the furnace liquid was concentrated by 1.5 times, and 5 times the amount of ethanol was added to form a precipitate. The resulting flocculent precipitate was heated to 1200 pm.
The yellow supernatant was concentrated to 150' and centrifuged at low speed to separate small amounts of undissolved material. Add 50' of this solution to Amberlite I
Column of R-120 (Nichiju type) (30 x 30 ship: 30
It was introduced on the day of '20/hour). After a total of 300 scales containing inert saccharides and an amount of unadsorbed inhibitory components have been collected, the exchanger is transferred to a glass beaker containing a ratio of about 400. ,
Add concentrated ammonia, stirring while pHil. I gave it a 5. After stirring for an additional 3 minutes and separating the exchanger, the solution was concentrated to 1/201 of its volume and passed through a column (20 x 15 m) containing Amberlite IRA-410 (HC03-type). Furnace suitable, about 500'
The lacquer eluate was collected at a rate of 30'/hr, the eluate was concentrated and lyophilized to give 1.3 min of crude product. For further purification, the crude formulation was purified by Bio-GIP-
2, fractionated using 100-200 mesh (Bio-Red).

直径５０柵、長さ４５比凧の、流速４０の‘／時の日２
０で運転されるカラムをこの目的に使用し、１０の‘の
ラクションを集めた。アントロン試験により炭水化物に
ついて、そしてサッカラーゼ抑制試験により抑制作用を
もつ成分について、フラクションのすべてを試験した。
サッカラーゼ抑制剤を含有するフラクションを、実施例
１による薄層クロマトグラフィーにより検査して、それ
らの個々の成分の含量を測定した。１グルコース単位を
もつ化合物を含有するフラクションを合わせ、濃縮し、
凍結した。Day 2 of a kite with a diameter of 50 mm, a length of 45 mm, and a flow rate of 40'/hour.
A column operated at 0 was used for this purpose and 10' fractions were collected. All fractions were tested for carbohydrates by the anthrone test and for components with inhibitory effects by the saccharase inhibition test.
The fractions containing saccharase inhibitors were examined by thin layer chromatography according to Example 1 to determine the content of their individual components. fractions containing compounds with 1 glucose unit are combined and concentrated;
Frozen.

０．３×１ぴＡＩＵ／夕と３０００庇ＩＵ／夕を有する
物質３５の９が得られた。Nine out of 35 materials were obtained having 0.3 x 1 AIU/unit and 3000 eaves IU/unit.

実施例 ６ ５％のでんぷん、１％のイースト抽出物およびクション
を集める。Example 6 Collect 5% starch, 1% yeast extract and extract.

全炭水化物含量（Ｅ脚における消失としてアントロン試
験の形態の）、サッカラーゼ抑制剤およびアミラーゼ抑
制剤をすべてのフラクションについて定量する。さらに
フラクションを薄層クロマトグラフィー（実施例１に従
う酵素抑制染色）により試験する。４〜６グルコース単
位をもつ化合物を含有するフラクションを集め、真空濃
縮して１０地とし、濃縮物を２００の‘の乾燥アルコー
ルに加えて生成物を沈殿させる。Total carbohydrate content (in the form of anthrone test as lost in the E leg), saccharase inhibitors and amylase inhibitors are determined for all fractions. The fractions are further tested by thin layer chromatography (enzyme inhibition staining according to Example 1). Fractions containing compounds with 4 to 6 glucose units are collected, concentrated in vacuo to 10%, and the concentrate is added to 200' dry alcohol to precipitate the product.

沈殿を遠心分離し、アセトンとエーテルで洗い、真空乾
燥すると、４．０夕の粗抑制剤、０．２夕の４〜６グル
コース単位をもちかつ１７．５×１ぴＡＩＵ／夕および
８５０庇ＩＵ′夕を含有する化合物が得られる。３単位
をもつ化合物を含有するフラクションを同様に処理し、
２００ｍ‘のアセトンを用いて沈殿を行うと、４．６夕
の粗抑制剤、０．１夕のｎ，十山＝８であり、１．４×
１ぴＡＩＵ／夕と２１０００ＳＩＵ／夕を含有する化合
物が得られる。The precipitate was centrifuged, washed with acetone and ether, and dried in vacuo to give a crude inhibitor of 4.0 units, 4 to 6 glucose units of 0.2 units, and 17.5 × 1 AIU/unit and 850 units. A compound containing IU' is obtained. The fraction containing the compound with 3 units was treated similarly,
When precipitation is carried out using 200 m' of acetone, the crude inhibitor is 4.6 m, n is 0.1 m, and Juyama = 8, and 1.4 x
A compound containing 1 pi AIU/unit and 21000 SIU/unit is obtained.

ｎ，十ｎ２＝２である化合物を含有するフラクションか
ら、０．９夕のｎ，十山＝２単位であり、０．３×１び
Ａｍ／夕および粥００雌ＩＵ′夕を含む化合物が単離さ
れる。実施例 ９おのおのが７．５％のＭａｌｔｚｉｎ
、０．３％のカゼイン加水分解物、０．７％のイースト
抽出物、０．３％のＣａＣ０３および０．３％のＫ２Ｈ
Ｐ０４の栄養溶液８そを含む３つの４・型発酵器を、菌
株ＳＥ５０／１１０（ＣＢＳ６７４．７３）の予備培養
液（実施例３に従って・ 得られたもの）５％で接種し
、２４ｑｏで５日間培養すると、７＄ＩＵ／の‘を含有
し、主としてｎ，十山＝２の化合物を含有する培養液が
得られる。From the fraction containing a compound with n, ten = 2, a compound with n, ten = 2 units of 0.9 units and containing 0.3 × 1 and Am / unit and porridge 00 female IU' unit is obtained. isolated. Example 9 Maltzin at 7.5% each
, 0.3% casein hydrolyzate, 0.7% yeast extract, 0.3% CaC03 and 0.3% K2H
Three type 4 fermenters containing a nutrient solution of P04 were inoculated with 5% of a preculture of strain SE50/110 (CBS674.73) (obtained according to Example 3) and When cultured for one day, a culture solution containing 7$IU/' and mainly containing n, 10=2 compounds is obtained.

遠心（３００仇ｐｍ、３０分間）して菌糸体を除去した
のち、６７０００Ｓｍ′〆を含有する濃かつ色の培養液
２０．５そが得られる。ｐＨをＨＮ０３で３．５に調節
したのち、６夕のＬｅｗａｐｏｌ（Ｃａ９２２１、粒度
０．３５肌、Ｂａｙｅｒ社）＝１．２３ｋ９の比ｗａｐ
ｏｌを加えて脱色を行う。２０分間炉過したのち、この
混合物をＳｅｉｂＫ３フィルターで炉遇する。After removing the mycelium by centrifugation (300 pm, 30 minutes), a dark and colored culture solution containing 67,000 Sm' was obtained. After adjusting the pH to 3.5 with HN03, the ratio wap of Lewapol (Ca9221, particle size 0.35, Bayer) = 1.23k9 for 6 days.
Decolorize by adding ol. After filtration for 20 minutes, the mixture is filtered through a Seib K3 filter.

脱色した培養溶液ＮＨ３で中和する（１８．５そ、６７
０００ＳＩＵ′そ）。次いで、２０夕の活性木炭＝３７
０夕をかきまぜながら加えて活性化合物を吸着し、この
混合物を３び分間かきまぜる。次いで、これをフィルタ
ー助剤ＣＩａｒｃｅｌの層でカバーしたＳｅｉＣＫ３フ
ィルターで炉過する。炉液（１７．５そ、３６００ＳＩ
Ｕ／そ）を廃棄する。木炭残蟹物を２その蒸留水日２０
で３回洗う。木炭から活性化合物を脱着するため、木炭
を各場合８０％強度のアセトン１そとともに３回連続し
て１５６間かきまぜ、ｐＨを濃ＨＣＩで２．５とする。
脱着生成物を合わせる（２．４〆、３７１０００ＳＩＵ
′〆）。２０夕のＤｏ肥ｘＨ＋／〆（Ｓｅｒｖａ社から
のＤｏｗｅｘ５０Ｗ×４、日十）＝４６夕のＤｏｗｅｘ
をこの脱着生成物に加え、混合物を２■｝間かきまぜる
。Neutralize with decolorized culture solution NH3 (18.5, 67
000SIU'So). Next, activated charcoal for 20 evenings = 37
Add 0.0 ml with stirring to adsorb the active compound and stir the mixture for 3 minutes. This is then filtered through a SeiCK3 filter covered with a layer of filter aid CIarcel. Furnace liquid (17.5, 3600SI
Discard U/So). Charcoal residue for 2 days and distilled water for 20 days
Wash 3 times with In order to desorb the active compounds from the charcoal, the charcoal is stirred three times in succession for 156 minutes each time with 80% strength acetone and the pH is brought to 2.5 with concentrated HCI.
Combine the desorption products (2.4〆, 371000 SIU
′〆). 20 evening DowexH+/Final (Dowex 50W x 4 from Serva, 10 days) = 46 evening Dowex
is added to the desorption product and the mixture is stirred for 2 hours.

次いで、樹脂を炉適し（Ｄｏｗｅｘフラクション１）、
少量の７５％強度のアセトンですすぐ。炉液と洗液（３
夕＝２１５０００ＳＩＵ／そ）を、鮒７となるまで、６
０夕／そのアンバーライトＩＲＡ４２０（ＯＨ‐型）（
Ｓｅｗａ社）とともにかきまぜる。次いで、この混合物
を炉過し、７２夕のＤｏ雌ｘＨ★を炉液（２．８〆、２
１９０００ＳＩＵ′そ）に加え、この混合物を２０分間
かきまぜる。この時間中、アンバーライトＩＲＡ４１の
Ｈ‐を充てんした多孔性ナイロンバッグを混合物中につ
るすことによって、ｐＨを３．０に保つ。次いで、Ｄｏ
ｗｅｘを炉過し（Ｄｏｗｅｘフラクション０）、炉液（
２．６夕、２７０００ＳＩＵ′そ）を廃棄する。Ｄｏｗ
ｅｘフラクション１およびロのおのおのを独立に柵３．
５の７５％アセトンで３回洗い、次いでおのおのを０．
６％ＮＨ３の１００の【で３回（Ｄｏｗｅｘフラクショ
ン１）または１５０の上で３回（比ｗｅｘフラクション
ロ）で脱着する。The resin was then subjected to a furnace (Dowex fraction 1),
Rinse with a small amount of 75% strength acetone. Furnace liquid and washing liquid (3
Evening = 215,000 SIU/so) until carp becomes 7, 6
0 evening/Sono Amberlight IRA420 (OH-type) (
Stir with Sewa Co., Ltd.). Next, this mixture was filtered, and the 72-year-old Do female
Add 19,000 SIU's) and stir the mixture for 20 minutes. During this time, the pH is maintained at 3.0 by suspending a porous nylon bag filled with Amberlite IRA41 H- into the mixture. Then, Do
Wex was filtered through the furnace (Dowex fraction 0), and the furnace liquid (
On the evening of 2.6, 27,000 SIU's were disposed of. Dow
3. Fence each of ex fractions 1 and 2 independently.
Wash three times with 0.5% 75% acetone, then wash each time with 0.5% 75% acetone.
Desorb 3 times at 100°C (Dowex fraction 1) or 3 times at 150°C (Dowex fraction 2) in 6% NH3.

アンモニアの量がＤｏｗｅｘ樹脂を中和するのに不十分
である第１の脱着に対して、ｐＨメーターを使用し濃Ｎ
Ｈ３の添加によりｐＨ９に調節する。For the first desorption, where the amount of ammonia is insufficient to neutralize the Dowex resin, use a pH meter to
Adjust pH to 9 by adding H3.

Ｄｏｗｅｘフラクション１からの３脱着生成物とＤｏｗ
ｅｘフラクションロからの３脱着生成物を独立に合わせ
、回転蒸発器でほとんど濃縮乾固し、残留物を５０の上
の日２０にとり、柵〆ーターを用いてＨＣＩで−３〜４
とし、５０の‘のメタノールを加える。これらの溶液を
かきまぜながら１．５その無水アセトンに滴々加え、析
出した沈殿を炉遇し、アセトンで３回、エーテルで１回
洗う。生成物を真空乾燥する。収量：フラクション１
６．５夕 ２５００庇ＩＵ／タフラクションロ １２．
８夕 ３６００庇ＩＵ／タフラクション１およびローま
、抑制作用をもつ構成成分として、主にｎ，十＆＝２の
本発明による化合物と少量のｎ．十山＝３の化合物を含
有する。3 desorption products from Dowex fraction 1 and Dow
The 3 desorption products from the ex fractions were combined independently, concentrated to near dryness on a rotary evaporator, the residue was taken at 20 days above 50 °C and purified with HCI from -3 to 4 °C using a fence filter.
and add 50 methanol. These solutions were added dropwise to the anhydrous acetone while stirring, and the precipitate was stirred and washed three times with acetone and once with ether. Dry the product under vacuum. Yield: fraction 1
6.5 evening 2500 eaves IU/tough fraction 12.
8 evening 3600 eaves IU/tough fraction 1 and Roma, as constituents with inhibitory action, mainly n, 10&=2 compounds according to the invention and small amounts of n. Contains ten mountains = 3 compounds.

下表は、連続工程における配合物のサッカラーゼ抑制活
性を与える。０．２％のＫ２ＨＰ０４の組成物をもつ１
２０の‘の栄養溶液をおのおの含む１そのコニカルフラ
スコを、実施例３に従う予備培養液２の‘のおのおので
接種し、２８００で３時間培養すると、アミラーゼを次
の収量で含有する培養液が得られる。The table below gives the saccharase inhibitory activity of the formulations in sequential steps. 1 with a composition of 0.2% K2HP04
A conical flask containing 20' of nutrient solution each was inoculated with 2' of preculture according to Example 3 and incubated for 3 hours at 2800 °C to obtain a culture containing amylase in the following yields: It will be done.

菌 株 ＡＩＵ／の‘ ＳＥ５０（Ｃ茂８６１．７０） ３７
０００ＳＥ５０／１３（Ｃ既６１４，７１）
１０９０００ＳＥ５０／１１０（Ｃ斑６７４，７
３） ５３５００そして、それらは主と
して４以上のグルコース単位の化合物を含有する。Bacterial strain AIU/NO' SE50 (C Shigeru 861.70) 37
000SE50/13 (C already 614,71)
109000SE50/110 (C spot 674,7
3) 53500 and they mainly contain compounds of 4 or more glucose units.

実施例 ７ １．３％のマルトース、３．５％のグルコース、０．５
％のカゼイン加水分解物、１．３％のイースト抽出物、
０．３％のＣａＣ０３および０．３％のＫ２ＨＰ０４の
組成 ′をもつ１２０肌の栄養溶液をおのおの舎む１そ
のコニカルフラスコを、実施例３に従う予備培養液２の
（で接種し、異なる菌種で２４００において円形振動振
とう機上で４日間培養すると、次の収量が得られる。Example 7 1.3% maltose, 3.5% glucose, 0.5
% casein hydrolyzate, 1.3% yeast extract,
Conical flasks each containing 120 skin nutrient solutions with the composition 0.3% CaC03 and 0.3% K2HP04 were inoculated with 2 precultures (according to Example 3) and inoculated with different bacterial species. Cultivation for 4 days on a circular vibratory shaker at 2400 mA gives the following yields:

２菌
株 ＳＩＵー秋 ＡＩＵイのＳＨ５０（ＯＢＳ９６１．
７０）２５ ５８０ＳＨ５ｏ／１３
，４．８ １．４６０（ＯＢＳ６１４．７１）ＳＨ
／１１０ ５７．９ ７５５（ＯＢＳ
６７４．７３）そして、これらは主として４以上のグル
コース単位をもつ化合物の混合物を含有する。2 bacteria
Stock SIU-Autumn AIU's SH50 (OBS961.
70) 25 580SH5o/13
,4.8 1.460(OBS614.71)SH
/110 57.9 755 (OBS
674.73) and these mainly contain mixtures of compounds with 4 or more glucose units.

実施例 ８ ３．５％のグルコース、２．５％のマルトジン（Ｍａｌ
ｔｚｉｎ）、０．５％のカゼイン加水分解物、１．３％
のイースト抽出物、０．３％のＣａＣ０３、０．３％の
Ｋ２ＨＰ０４と０．１％の消泡剤の組成をもつ栄養溶液
１００夕を含有する発酵器を、実施例３に従う予備培養
液の５そで接種し、この混合物をかきまぜかつ通気しな
がら２４ｏｏで５日間培養すると、７３０００ＳＩＵ／
そを含有し、そして主としてｎ，十山＝２の本発明に従
う化合物を含有する培養液が得られる。Example 8 3.5% glucose, 2.5% maltozine (Mal
tzin), 0.5% casein hydrolyzate, 1.3%
A fermenter containing 100 ml of a nutrient solution with the composition of yeast extract, 0.3% CaC03, 0.3% K2HP04 and 0.1% antifoam was heated with a preculture solution according to Example 3. When the mixture was incubated at 24oo for 5 days with stirring and aeration, 73000 SIU/
A culture medium is obtained which contains the compound according to the invention and mainly contains n, 10 = 2.

菌糸体を含む発酵液の９０〆を、ｐＨメーターを用いて
濃ＨＮ０３でｐＨ２．５とし、９０Ｍ（＝１％）の活性
木炭（Ｍｅｒｃｋ）を加え、その間かきまぜ、生成した
染料を吸収させる。The fermentation solution containing mycelium was adjusted to pH 2.5 with concentrated HN03 using a pH meter, and 90M (=1%) activated charcoal (Merck) was added and stirred while stirring to absorb the produced dye.

この混合物をＩＵ８分間かきまぜ、菌糸体と木炭を３０
０仇ｐｍの遠心により分離し、最後に、３ｋ９のＣＩａ
ｒｃｅｌを加えた上燈液を圧力炉過器により炉遇する。
６０００＄ＩＵ／そのＳｍ含量の黄かつ色の透明炉液６
１〆が得られる。Stir this mixture for 8 minutes and add 30 IU of mycelium and charcoal.
Separate by centrifugation at 0 pm, and finally, 3k9 CIa
The top lighting solution to which rcel has been added is heated in a pressure furnace.
Yellow and colored transparent furnace liquid 6 with 6000$IU/its Sm content
1〆 is obtained.

この炉液を濃ＮはでｐＨ７とし、活性化合物を吸着する
ため、１３００夕（２％）の活性木炭（Ｍｅｒｃｋ）と
ともに３０分間かきまぜる。この混合物を圧力炉過器で
炉過し、活性木炭の沈降物を１０その蒸留水で３回洗う
。次いで、木炭をプレスしてよく乾燥し、各場合ＰＨ２
．５の５０％アセトンの３×４そ中で１５分間かきまぜ
、木炭から活性化合物を脱着する。木炭を炉適して分離
したのち、アセトン中の脱着生成物を合わせる。合わせ
た脱着生成物を回転蒸発器内で２５０叫に濃縮し、等容
積（２５０の【）のメタノールを加え、この混合物をフ
ルーテッド（ｆ１ｕにｄ〉フィルターで炉過する。炉液
（４８０泌）を５そのアセトンに、はげしくかきまぜな
がら、滴々加える。分離した沈殿を炉過し、アセトンと
エーテルで３回洗う。次いで、３５ｑ○で真空乾燥する
。収量：８５００ＳＩＵ′夕を含有する２３０多〇２５
夕の上記粗生物を１その日２０に溶かし、この溶液を３
００夕のＤｏｗｅｘ■５０Ｗｘ岬（２００〜４００メッ
シュ）とともに３０分間かきまぜる。The furnace liquor was brought to pH 7 with concentrated N and stirred for 30 minutes with 1300 g (2%) activated charcoal (Merck) to adsorb the active compounds. The mixture is filtered in a pressure furnace and the activated charcoal precipitate is washed three times with 100ml of distilled water. The charcoal is then pressed and dried well, in each case at a pH of 2
．． Desorb the active compounds from the charcoal by stirring in a 3×4 solution of 50% acetone for 15 minutes. After the charcoal is separated in a furnace, the desorption products are combined in acetone. The combined desorption products are concentrated in a rotary evaporator to 250 mL, an equal volume (250 mL) of methanol is added, and the mixture is filtered through a fluted (f1 to d) filter. 5 is added dropwise to the acetone while stirring vigorously. The separated precipitate is filtered and washed three times with acetone and ether. Then, it is vacuum dried at 35 q○. Yield: 230 ml containing 8500 SIU'. 25
Dissolve the above crude product in the evening in 1 part 20 part and add this solution to 3 parts.
Stir for 30 minutes with 00 evening Dowex■50Wx Cape (200-400 mesh).

樹脂を炉去し、２その０．００１ＮのＨＣＩで３回すす
ぐ。次いで、洗ったＤｏｗｅｘを５００のとの日２０中
にけん濁させ、このけん濁液のｐＨを２５％のＮＨ３の
添加によりｐＨメーターを用いて９．０とする。次いで
、生成物を各場．合５００叫の０．６％Ｎはで２回脱着
し、脱着生成物を合わせ、回転蒸発器で１００叫に濃縮
する。この濃縮物を脱色し、２ 夕のＤＥＡＥセルロー
ス（ＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒａｎｄＳｃｈｕＵ、Ｎｏ．２
０３５、０．６メガ当量／夕）とともに５分間かきまぜ
、次いでこの混合物を遠心する。等容積（１００肌）の
エタノールを淡黄色の上燈液へ加え、次いでこの混合物
を２そのアセトンに滴々加え、その間はげしくかきまぜ
る。沈殿を炉過し、ァセトンとエーテルで洗い、３５ｑ
０で真空乾燥する。さらに精製するため、４．０夕の抑
制剤を０．５タづつＢｉｏｇｅＩＰ−２でゲル炉過する
。The resin was evaporated and rinsed three times with 0.001 N HCI. The washed Dowex is then suspended in 20 days with 500 mg and the pH of the suspension is brought to 9.0 using a pH meter by addition of 25% NH3. The product is then added in each case. A total of 500 yen of 0.6% N is desorbed twice, and the desorption products are combined and concentrated to 100 yen on a rotary evaporator. The concentrate was decolorized and treated with DEAE cellulose (SchleicherandSchuU, No. 2).
035, 0.6 meq/d) for 5 minutes and then centrifuge the mixture. An equal volume (100 volumes) of ethanol is added to the pale yellow overlight solution, and this mixture is then added dropwise to the acetone while stirring vigorously. Filter the precipitate, wash with acetone and ether, and add 35q.
Vacuum dry at 0. For further purification, 0.5 t of the 4.0 ml of inhibitor is gel-filtered through Bioge IP-2.

この目的に対し、各場合０．５夕の配合物を１０の‘の
日２０に溶かし、直径６肌、長さ９５肌のＢｉｏｇｅＩ
Ｐ−２カラム（２００〜４００メッシュ、Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ社）に導入する。流速８０の‘／時の水中で、展開
を行う。１２肌のフラ収量 容債１）ＳＩＵ／１ 全ＳＩ．Ｕ ＳＩＵ収
率紫１）培養溶液 ２０．５
６７．ｏｏｏ ｌ．３７３．５００ １００
２）Ｌｅｗａｐｏｌで脱色後 １０．５
６７．ｏｏｏ ｌ．３０６．５００ ９５
３）活性木炭で吸着後 １８．５
３．６ｏｏ ６６．６０１０ （４．８廃棄）４
）第１脱着生成物 ０・７ ７４２‐０００
５１９‐４００ ３７８き５）第２
０１９ ３２９‐０００ ２９６‐１００
）８８３５００２‐１・６ヲ６４‐４６）第３ 〃
０．８ ８５．０００
６８．０００） ５．０）７）混合脱
着生成物（４−６） ２．４ ３７１．００
０ ８９０．４００ ６４．８８）第１回のＤ
ｏｗｅｘによる吸着後 ３．０ ２１５．０００
６４５．０００９）ＩＲＡ ＯＨ−で中和後
２．８ ２１０．０００ ６１３．２
００１０）第２回のＤｏｗｅｘによる吸着後 ２．
５ ２７．０００ ６７．５００ （４．９
廃棄）１１）ＤＯｗｅｘフラクション１からＮＨ３
０．２９ ６８２．０。For this purpose, in each case 0.5 days of the formulation was dissolved in 10' days of 20 minutes, and BiogeI of 6 skins in diameter and 95 skins in length was dissolved.
P-2 column (200-400 mesh, Bio-R
ad company). The development is carried out in water at a flow rate of 80'/h. 12 Skin Fla Yield Capacity Bond 1) SIU/1 Total SI. U SIU yield purple 1) Culture solution 20.5
67. ooo l. 373.500 100
2) After decolorization with Lewapol 10.5
67. ooo l. 306.500 95
3) After adsorption with activated charcoal 18.5
3.6oo 66.6010 (4.8 discarded) 4
) First desorption product 0.7 742-000
519-400 378ki5) 2nd
019 329-000 296-100
) 8835002-1.6 64-46) 3rd
0.8 85.000
68.000) 5.0)7) Mixed desorption product (4-6) 2.4 371.00
0 890.400 64.88) 1st D
After adsorption with owex 3.0 215.000
645.0009) After neutralization with IRA OH-
2.8 210.000 613.2
0010) After the second Dowex adsorption 2.
5 27.000 67.500 (4.9
Disposal) 11) DOwex fraction 1 to NH3
0.29 682.0.

〇 １９７．７８○ １４．４）で脱着し
た合わせた生成物
）１２）Ｄｏｗｅｘフラクション０からＮＨ
３
）６０．９で脱着した合わせた生成物 ０
．４５１．４１９．０００ ６３８．５５０
４６．５）１３）沈殿フラクション１
６．５夕 ２５．０００イタ １６２．５００
１１．８）沈殿フラクションＤ １２
．３夕 ３６．ｏｏｏ汐 ４４２．８ｏｏ ３．
２．２ろ４４・０実施例 １０実施例１に記載したタイ
プの２００夕の配合物を９４０泌の蒸留水と６０の‘の
濃Ｈ夕０４に溶かし、この溶液を還流下に４時間温める
（内部温度：難〜１００００；油俗温度：１０４午０）
。〇 197.78○ Combined products desorbed in 14.4)
)12) Dowex fraction 0 to NH
3
)60.9 combined products desorbed at 0
．． 451.419.000 638.550
46.5) 13) Precipitate fraction 1
6.5 evening 25.000 ita 162.500
11.8) Precipitation fraction D 12
．． 3 evenings 36. ooo Shio 442.8oo 3.
2.2 44.0 EXAMPLE 10 A 200 ml formulation of the type described in Example 1 is dissolved in 940 ml of distilled water and 60 ml of concentrated H 4 ml and the solution is warmed under reflux for 4 hours. (Internal temperature: Difficult to 10,000; Oil temperature: 104:00)
.

１０夕の活性木炭（Ｍａｒｃｋ、２１８母型）を冷却し
た黒かつ色の溶液に加え、この混合物を１時間かきまぜ
る。10 minutes of activated charcoal (Marck, 218 matrix) is added to the cooled black and colored solution and the mixture is stirred for 1 hour.

次いで、活性木炭を炉過し、水洗し、炉液を約２５０の
【の１帆のＫＯＨでＰＨ７〜８とする。溶液を５０夕の
活性木炭とともによくかきまぜる。木炭を炉遇し、２そ
の水で洗い、炉液を廃棄する。脱着のため「木炭を２そ
の３０％強度のアルコールとともに一夜熟成する。最後
に、木炭を炉過し、アルコール溶液を回転蒸発器で濃縮
する。残留物：６．２タこの粗生成物（６．２夕）を５
００叫の水に溶かし、溶液を３０夕のアンバーライトＩ
Ｒ１２０（日田型）とともに１時間注意してかきまぜる
。交換体を炉遇し、蒸留水で炉液が中性になりグルコー
スがなくなるまで洗う。次いで、交換体を１０００の【
のり○中で１５の‘の２５％程度のＮＨ３とともに一夜
かきまぜ、分離し、廃棄する。炉液を回転蒸発器中で濃
縮する。残留物：３．７夕。さらに精製するため、セル
ロースのクロマトグラフィーを行う。The activated charcoal is then filtered, washed with water, and the furnace liquor is brought to pH 7-8 with about 250 liters of KOH. Stir the solution well with 50 ml of activated charcoal. Heat the charcoal in a furnace, wash it with water, and discard the furnace liquid. For desorption, the charcoal is aged overnight with alcohol of 30% strength.Finally, the charcoal is filtered and the alcohol solution is concentrated in a rotary evaporator.Residue: 6.2 g of this crude product (6 .2 evening) 5
Dissolve the solution in 0.00 ml of water and add 30 yen of Amberlight I.
Stir carefully for 1 hour with R120 (Hita type). Heat the exchanger in a furnace and wash with distilled water until the furnace solution becomes neutral and glucose is gone. Next, the exchanger is 1000 [
Stir overnight with about 25% NH3 of 15' in glue, separate, and discard. The furnace liquor is concentrated in a rotary evaporator. Residue: 3.7 evenings. For further purification, cellulose chromatography is performed.

交換体から脱着された４．５夕の物質を、長さ１の、幅
２．５肌のセルロースを詰めたカラムに導入する。まず
、５：１エタノール／日２０を流れ剤として使用し、次
に３：１エタノール／日２０を使用して、ｎ，＝１の本
発明による化合物を溶鱗する。各４の‘のフラクション
を、２０トロピツクノ分のドリップ速度で取る。個々の
フラクションを薄層クロマトグラフィーにより検査する
。濃縮後、フラクション４７〜８５はグルコース単位が
１である本発明による淡かつ色の化合物１．６夕を与え
る。定量的に、色を生成する不純物はその役割を演じな
い。ｎ，十山＝１の化合物は、強酸性のイオン交換体を
用いて精製工程をバッチ法ではなくカラムにより行うと
、無色の樹脂として得られる。実施例 １１ 実施例１に記載するタイプの調製物２００夕を９４０の
Ｚの蒸留水と６０泌の濃Ｈ２Ｓ０４に溶かし、この溶液
を還流下に１５分間温める（内部温度：聡〜１００℃：
油格温度：１４０００）。The 4.5 days of material desorbed from the exchanger is introduced into a cellulose-packed column 1 in length and 2.5 in width. First, the compound according to the invention of n,=1 is scaled using 5:1 ethanol/day 20 as flow agent and then 3:1 ethanol/day 20. Take each 4' fraction at a drip rate of 20 tropics. Individual fractions are examined by thin layer chromatography. After concentration, fractions 47 to 85 give the pale and colored compound 1.6 according to the invention with 1 glucose unit. Quantitatively, impurities that produce color do not play that role. A compound where n, ten mountains = 1 is obtained as a colorless resin when the purification process is performed by a column rather than a batch method using a strongly acidic ion exchanger. Example 11 200 mg of a preparation of the type described in Example 1 is dissolved in 940 ml of distilled water and 60 ml of concentrated H2S04 and the solution is warmed under reflux for 15 minutes (internal temperature: ~100 °C:
Oil rating temperature: 14000).

１０夕の活性木炭（Ｎはｒｃｋ、２１８母型）を冷却し
た黒かつ色の溶液に加え、混合物を１時間かきまぜる。10 minutes of activated charcoal (N is rck, 218 matrix) is added to the cooled black and colored solution and the mixture is stirred for 1 hour.

次いで、活性炭を炉過し、水洗し、炉液を約２５０の‘
の１０ＶのＫＯＨでｐＨ７〜８とする。この溶液を５０
夕の活性木炭とともに１時間かきまぜる。活性炭を炉過
し、２その水で洗い、炉液を廃棄する。脱着のため、木
炭を２その３０％強度のアルコ‐‐ルととも一夜熟成す
る。最後に木炭を炉過し、アルコール溶液を回転蒸発器
中で濃縮する。残留物を１５の【の日２０にとり、５０
夕のアンバーライトＩＲ１２０（Ｈ＋型）を満たしたカ
ラムに導入する。Next, the activated carbon is filtered, washed with water, and the furnace liquid is heated to approximately 250°C.
Adjust the pH to 7-8 with 10V KOH. Add this solution to 50
Stir for an hour with activated charcoal in the evening. Filter the activated carbon, wash it with water, and discard the furnace liquid. For desorption, the charcoal is aged overnight with 30% strength alcohol. Finally, the charcoal is filtered and the alcohol solution is concentrated in a rotary evaporator. Take the residue on day 20 of 15 and add 50
Introduce it into a column filled with Yuno Amberlite IR120 (H+ type).

この溶液を３滴／分の速度で吸収させ、樹脂を水（１２
滴／分）ですすぎ、非塩基性構成成分のすべてを除去す
る。次いで、塩基性生成物をカラムから０．５％強度の
ＮＨ３で溶離し（１２商／分）、水溶液を回転蒸発器で
蒸発乾固する。残留物：４．１夕。This solution was absorbed at a rate of 3 drops/min, and the resin was dissolved in water (12
drops/min) to remove all non-basic constituents. The basic product is then eluted from the column with 0.5% strength NH3 (12 quotients/min) and the aqueous solution is evaporated to dryness in a rotary evaporator. Residue: 4.1 night.

この残留物の２夕を少量の水に溶かし、この溶液をＳｅ
ｐｈａｄｅｘＧ−１５を満たしたカラム（高さ：２００
肌；ぐ：３０肌）に導入する。Two portions of this residue were dissolved in a small amount of water, and this solution was mixed with Se.
Column filled with phadexG-15 (height: 200
Skin: 30 skin).

生成物を水で綾擁する。２の‘のフラクションを２の【
／時の速度でとる。個々のフラクションを薄層クロマト
グラフィーにより検査する。フラクション８５〜９４は
ｎ・十ｎ２＝２であり、５０００のＩＵ／夕の特異活性
をもつ化合物２８０の９を与える。実施例 １２ 軸６．９であり、ＣａＣ１２に関して１ミリモルである
、２ミリモルのグリセロリン酸ナトリウム緩衝液６０叫
中の実施例１記載の配合物を、Ａｓｐｅｒｇｌｌｕｓ種
（ＳＥＲＶＡＮｏ．１３４１８）から得られたＱーアミ
ラーゼ１夕とともに、連続的にかきまぜながら、３７０
で１２畑時間培養し、この混合物を最後に１００００に
５分間加熱し、不溶性物質を４００仇ｐｍで遠心分離し
、３５０＄ＩＵ／夕および２×１ぴ山Ｕ′夕を含有する
１．９夕の生成物が溶液を凍結乾燥したのち得られる。Cover the product with water. 2' fraction of 2' [
Take it at the speed of / hour. Individual fractions are examined by thin layer chromatography. Fractions 85-94 have n·ten n2 = 2 and give compound 280 of 9 with a specific activity of 5000 IU/night. Example 12 The formulation described in Example 1 in a 2 mmol sodium glycerophosphate buffer with an axis of 6.9 and 1 mmol with respect to CaC12 was applied to Q obtained from Aspergllus species (SERVA No. 13418). - 370 ml of amylase, stirring continuously.
The mixture was finally heated to 10,000 °C for 5 min, the insoluble material was centrifuged at 400 pm, and the insoluble material was incubated at 1.9 ml containing 350 $ IU/W and 2 x 1 pm. The second product is obtained after lyophilizing the solution.

この生成物を実施例１におけるように薄層クロマトグラ
フィーおよびサッカラーゼ抑制染色により検査すると、
生成物は抑制作用をもつ化合物として主としてｎ・十ｎ
２＝１、２および３の本発明の化合物を含有することが
わかる。実施例 １３ ＰＨ４．８の２０ミリモルの酢酸塩緩衝液３０の‘中の
実施例１記載のタイプの配合物２夕を、さつまし、もか
ら得られた３−アミラーゼ（ＢＯＥＨＲｍＧＥＲ１５４
７１）ｉ．２５の９とともに連続的にかきまぜながら３
５ｑ０で１２餌時間培養し、この混合物を最後に１００
℃で５分間加熱し、不落性物質を４００仇ｐｍで遠心分
離し、１８０＄ＩＵ／夕と３．８×１ぴＡＩＵ／夕を含
有する生成物１．５夕が凍結乾燥後得られる。When this product was examined by thin layer chromatography and saccharase inhibition staining as in Example 1,
The product is mainly a compound with an inhibitory effect.
2=1, 2 and 3 of the compounds of the invention. Example 13 A formulation of the type described in Example 1 in 30' of a 20 mmol acetate buffer at pH 4.8 was sweetened with 3-amylase (BOEHRmGER154) obtained from
71) i. 3 while stirring continuously with 9 of 25
The mixture was incubated for 12 feeding hours at 5q0 and finally
℃ for 5 minutes and centrifugation of the persistent material at 400 pm, 1.5 pm of product containing 180 IU/unit and 3.8 x 1 AIU/unit is obtained after freeze-drying. .

この生成物を実施例１記載のように薄層クロマトグラフ
ィーおよびサッカラーゼ抑制染色により検査すると、こ
の生成物はｎ，十ｎ２＝２および３の本発明の化合物を
含有することがわかる。実施例 １４０．１％のＫ２Ｈ
Ｐ０４、０．２％の（ＮＨ４）２Ｓ０４、０．０５％の
ＭｇＳ０４、０．０５％のＫＣ１、０．０１％のＦｅＳ
０４および２％の実施例１記載の配合物の組成の栄養溶
液２５叫を含む２００の上のコニカルフラスコを菌株偽
ｐ．ｎｉｇｅｒＡＴＣＣＩ１３９４のほうしけん濁液で
接種し、こ．の混合物を円形振動振とう機上で２が０に
おいて培養し、山Ｕ力価は６日後２１００００Ａｍ／の
‘から５３０００ＡＩＵ／私に、１０日後２１３００Ａ
ＩＵ／の‘に低下する。When this product is examined by thin layer chromatography and saccharase inhibition staining as described in Example 1, it is found to contain n,n2=2 and 3 of the compounds of the invention. Example 140.1% K2H
P04, 0.2% (NH4)2S04, 0.05% MgS04, 0.05% KC1, 0.01% FeS
A conical flask containing 200 ml of a nutrient solution of the composition of the formulation described in Example 1 at 2% and 2% of the strain pseudop. Inoculated with a suspension of niger ATCCI1394. The mixture was incubated on a circular vibratory shaker at 2:0 and the YamaU titer ranged from 210,000 Am/' to 53,000 AIU/I after 6 days and 21,300 A/I after 10 days.
It drops to 'IU/'.

同時に、Ｓｍ／泌含量は７．０から７２ＳＩＵ／の‘に
増加する。前記ほうしけん濁液で１０日間培養した溶液
２０の‘を３００比ｐｍで３０分間遠心して、菌糸体を
分離する。At the same time, the Sm/secretion content increases from 7.0 to 72 SIU/'. Solution 20', which was cultured for 10 days in the above-mentioned hoshiken suspension, was centrifuged at 300 pm for 30 minutes to separate mycelia.

１５机の上澄み液（７２００頂ＩＵ／夕）を２夕のアン
バーライト瓜Ｃ５０日十および１夕のアンバーライトＩ
ＲＡ４１００Ｈ−とともに３０分間かきまぜることによ
って、塩類を除去する（伝導度２のＳ・物‐１より小）
。この混合物を炉遇し、炉液を０．００１ＮのＨＣＩ中
のＤｏｗｅ力日十で平衡化したカラム（ＣＩ肌×１０伽
）中に５の‘／時の速度で流す。次いで、Ｄｏｗｅｘを
２００の【の０．００１ＮのＨＣＩですすぐ。脱着のた
め、０．６％のＮＨ３溶液をカラムに送入し（１０肌【
／時）、５の‘のフラクションを集める。サツカラーゼ
抑制活性を含有するフラクションを合わせ、回転蒸発器
で２の‘に濃縮し、２の‘のメタノールを加える。この
溶液のｐＨを３〜４に調節し、この溶液を１００の‘の
アセトンに滴下して沈殿を生成させる。沈殿を炉過し、
真空乾燥する。収量：２８０００Ｓｍ／夕を含有し、ｎ
，十−＝２および３の化合物からなるもの２ｍ９。ｎ，
十山＝２の純粋化合物を、Ｂｉｏ−ＧＩ Ｐ−２を含む
力ラムに通ずるゲル炉週により、実施例８記載のように
、この生成物から単機する。ｎ，十ｎ２＝２、６０００
雌ＩＵ／夕の化合物７雌が得られる。実施例 １５ 実施例５に記載するタイプの配合物バッチからｍ３００
仇ｐｍの菌糸体の遠心分離から得られ、１３０００Ｓｍ
／夕の活性をもつ培養炉液２〆を、２．５部のアンバー
ライトＩＲＣ−５０（日十型）および１部のアンバーラ
ィトＩＲＡ−４１Ｃ（ＯＨ‐型）の混合物５００夕とと
もに１時間かきまぜて塩舎量を減少させる（炉液の伝導
度：約１０仇Ｓ・仇‐１）。Add 15 supernatant liquid (7200 IU/evening) to 2 evenings of Amberlight Cucumber C50 days and 1 evening of Amberlight I
Remove salts by stirring with RA4100H- for 30 minutes (conductivity 2 smaller than S-1)
. The mixture is heated and the furnace fluid is flowed at a rate of 5'/hr into a column (10 x 100 CI) equilibrated with Dowe Co., Ltd. in 0.001 N HCI. The Dowex is then rinsed with 200 ml of 0.001 N HCI. For desorption, a 0.6% NH3 solution was pumped into the column (10 skin [
/hour), collect 5' fractions. The fractions containing satucalase inhibitory activity are combined, concentrated in a rotary evaporator to 2' and added 2' of methanol. The pH of this solution is adjusted to 3-4, and the solution is added dropwise to 100' acetone to form a precipitate. Filter the precipitate,
Vacuum dry. Yield: Contains 28000 Sm/t, n
, 10-=2m9 consisting of the compounds 2 and 3. n,
A pure compound of 20% is isolated from this product as described in Example 8 by means of a gel furnace connected to a ram containing Bio-GI P-2. n, ten n2 = 2, 6000
Compound 7 females of IU/female are obtained. Example 15 m300 from a formulation batch of the type described in Example 5
Obtained from centrifugation of mycelia of 13,000 Sm
Stir 2.5 parts of the culture solution with the activity of 1 hour with 500 parts of the mixture of 2.5 parts of Amberlite IRC-50 (Japanese type) and 1 part of Amberlite IRA-41C (OH-type) for 1 hour. (conductivity of furnace liquid: approx. 10 S・1).

イオン交換体を分離し、溶液を濃縮して１００の上より
多少少ない量にし、２０００仇ｐｍで１５分間遠心して
、未溶解の構成成分を除去する。上澄みを１００の‘と
し、ここで伝導度は３．５のＳ・抑‐１であり、さらに
精製するため、Ｐ−セルロース（ＳＥＲＶＡＮｏ，４５
１３０：既知の方法により製造し、５ミリモルのリン酸
アンモニウム緩衝溶液；−５．５中で平衡化する）を含
有するカラム（５５×４０仇舷）に導入する。該リン酸
塩緩衝をランニング剤として使用する。流速は９０凧【
／時であり、１８の‘の溶積のフラクションが集められ
る。この漆縫物のフラクションを炭水化物含量（アント
ロン試験により）とサッカラーゼ抑制成分含量（サッカ
ラーゼ抑制試験により）について測定したのち、アント
ロン試験において炭水化物を実質的に含まず、同時に、
サッカラーゼ抑制試験で特に有効であるとわかった、フ
ラクションを合わせ、１５０の‘に濃縮し、アンバーラ
イトＩＲＡ−４１０（ＨＣＱ‐型）を含有するカラム（
５０×３０仇舷）に通して炉過する。The ion exchanger is separated and the solution is concentrated to slightly less than 100 ml and centrifuged at 2000 pm for 15 minutes to remove undissolved components. The supernatant was taken as 100', where the conductivity was 3.5 S-1, and for further purification P-cellulose (SERVA No. 45
130: prepared by known methods and introduced into a column (55 x 40 sq.ft) containing 5 mmol ammonium phosphate buffer solution (equilibrated in -5.5). The phosphate buffer is used as a running agent. The current speed is 90 kites [
/h, and a fraction of 18' molten fluid is collected. A fraction of this lacquered material was determined for carbohydrate content (by anthrone test) and saccharase-inhibitory component content (by saccharase inhibition test) and was found to be substantially free of carbohydrates in the anthrone test and at the same time
The fractions, which were found to be particularly effective in the saccharase inhibition test, were combined and concentrated to 150' on a column containing Amberlite IRA-410 (HCQ-type) (
Pass it through a furnace (50 x 30 m).

脱イオン化をよりよくコントロールするため、溶離液を
フラクション（２０分間に１０泌／フラクション）づつ
集め、試験して炭水化物の存在（アントロン試験による
：全体を通じて実際にマイナスである）およびリン酸塩
の存在（アスコルビン酸ノモリブン酸塩試薬：全体を通
じてマイナスである）ならびにサツカラーゼ抑制（酵素
抑制試験）について測定する。抑制作用をもつフラクシ
ョン（３〜３０）をもつフラクシヨンを合わせ、濃縮し
、凍結乾燥し、再溶解し、凍結乾燥して、２８０の９の
粗抑制剤が得られる。さらに精製するため、粗抑制剤を
実施例６記載のようにＢｉｏ−蛇ＩＰ−２で分画する。
凍結乾燥後、０．３×１ぴＡＩＵ／夕と３５００＄ＩＵ
′夕を含有する生成物３０の９を、ｎ，十−＝１の純粋
な化合物を含有するフラクションから単離する。実施例
１６ ５一７のグルコース単位をもつアミノ砂糖譲導体を得る
ために使用した出発物質は、たとえば、実施例１記載の
ような配合物である。To better control deionization, the eluate is collected in fractions (10 secretions/fraction in 20 minutes) and tested for the presence of carbohydrates (according to the anthrone test: actually negative throughout) and the presence of phosphates. (ascorbic acid nomolybinate reagent: negative throughout) as well as satucarase inhibition (enzyme inhibition test). The fractions with inhibitory action (3-30) are combined, concentrated, lyophilized, redissolved and lyophilized to yield 280 9 crude inhibitors. For further purification, the crude inhibitor is fractionated on Bio-Snake IP-2 as described in Example 6.
After freeze-drying, 0.3 x 1 AIU/3500$IU
9 out of 30 products containing 10-1 are isolated from the fraction containing n,1=1 pure compound. Example 16 The starting materials used to obtain amino sugar derivatives with 5 to 7 glucose units are, for example, formulations as described in Example 1.

この目的のため、実施例１による配合物３０夕を２５０
の‘の日２０に溶かす。For this purpose, 30 mg of the formulation according to Example 1 was added to 250 mg.
Melt on day 20 of '.

この溶液の伝導度は１０のＳ・仇‐１であり、Ｐ印ま５
．５である。塩を除去するため、６０夕のアンバーライ
トＩＲＣ５皿十（水溶液からほんのこの跡量のアミノ砂
糖のみを結合する弱酸性賜イオン交換体）と２０夕のア
ンバーライト４１のＨ−を溶液に加え、この混合物を２
０分間かきまぜる。炉液のｐＨ（伝導度０．５仇Ｓ・弧
‐１、ＰＨ３．５）をＩＮＨＣＩでｐＨ３．０とする（
伝導度０．６肌Ｓ・地‐１）。この溶液を４２の【／時
の速度でＤｏＭｘ５０Ｗ（Ｈ＋）（０２．＆ネ、高さ４
０肌、０．００１ＮＨＣＩ中で平衡化）を充てんしたカ
ラムに通し、次いでＤｏｗｅｘを２その０．００１ＮＨ
ＣＩですすぐ。カラムを洗ったのち、生成物を１．２％
の水性アンモニアで溶離し、１０の‘のフラクションを
集める。抑制作用をもつフラクションを合わせ、アンモ
ニアを真空除去し、次いで溶液を３０の‘に真空濃縮す
る。溶液を６００の‘の乾燥ァルコ−ルへ滴々加えて生
成物を沈殿させ、沈殿を炉過し、アルコールとエーテル
で洗ったのち真空乾燥する。収量：２６．５×１ぴＡｍ
′夕を含有する４．４夕。さらに精製するため、各場合
０．５夕を実施例８におけるように予備ＢｉｏｇｅｒＰ
−２カラムに導入し、展開する。The conductivity of this solution is 10 S-1, with P mark or 5
．． It is 5. To remove the salts, 60 min. of Amberlite IRC 5 Dish (a weakly acidic ion exchanger that binds only trace amounts of amino sugars from an aqueous solution) and 20 min. of Amberlite 41 H- were added to the solution; Add this mixture to 2
Stir for 0 minutes. The pH of the furnace liquid (conductivity 0.5 S・Arc-1, PH 3.5) is adjusted to pH 3.0 using INHCI (
Conductivity 0.6 Skin S/Ground-1). DoMx50W (H+) (02.&ne, height 4
0 skin, equilibrated in 0.001 NHCI) and then Dowex 2 in 0.001 NHCI).
Rinse with CI. After washing the column, the product was reduced to 1.2%.
Elute with aqueous ammonia and collect 10' fractions. The inhibitory fractions are combined, the ammonia is removed in vacuo, and the solution is concentrated in vacuo to 30'. The product is precipitated by adding the solution dropwise to 600' dry alcohol, filtering the precipitate, washing with alcohol and ether, and drying in vacuo. Yield: 26.5 x 1 pi Am
4.4 evening containing 'Yu'. For further purification, in each case 0.5 min was added to the preliminary BiogerP as in Example 8.
-2 column and develop.

薄層クロマトグラフィー（アミラーゼ抑制染色）によれ
ばｎ，十−＝５〜７の化合物を含有するフラクションを
合わせ、真空濃縮し、生成物を前述のように乾燥アルコ
ールで沈殿させる。粗生成物０．５夕からの収量：３０
×１ぴＡＩＵ／夕と２５０鷹ＩＵ／夕を含有し、ｎ，十
ｎ２：５〜７のアミノ砂糖譲導体０．２夕。実施例 １
７ この実施例は、本発明の化合物を酸性条件下で腸イオン
交換樹脂からいかにして港離できるかを説明する。The fractions containing compounds n,10-=5 to 7 according to thin layer chromatography (amylase inhibition staining) are combined, concentrated in vacuo, and the product is precipitated with dry alcohol as described above. Yield from crude product 0.5: 30
x 1 AIU/W and 250 IU/W of n, 10 N2:5 to 7 amino sugar derivatives 0.2W. Example 1
7 This example illustrates how compounds of the invention can be removed from intestinal ion exchange resins under acidic conditions.

直径１．５肌のカラムに０．００１ＮＨＣＩ中の３０夕
（湿った量）のＤｏｗｅｘ■５０Ｗ×４．１（Ｈ＋）２
００〜４００メッシュを充てんする。Dowex 50W x 4.1 (H+) 30 minutes (wet amount) in 0.001NHCI in a 1.5 skin diameter column
Fill with 00-400 mesh.

次いで、実施例９に従って得られた（表、Ｎｏ．７）５
００の‘の混合脱着生成物（４０００００ＳＩＵ／夕、
ｐＨ２．５、６０％アセトン）を約１時間でカラムに送
入し、次いでＤｂｗｅｘを５００の‘の０．００１Ｎの
ＨＣＩですすぐ。これらの条件下で、活性物質の溶磯は
ほんのこん跡量である。引き続いて、生成物を０．０１
２即日ＣＩで脱着し、力ラム溶雛液の伝導性または屈折
率を記録する。さらに、溶隣液のＳｍ含量を試験する。
活性フラクション７４〜１００を合わせ、アンバーライ
トＩＲＡ４１のＨ−を加えて中和し、次いで５の‘に濃
縮し、５の‘のメタノールと反応させ、生成物をこの混
合物の２００の‘のアセトンへの滴下により沈殿させる
。アセトンとエーテルで洗ってのち、生成物を真空乾燥
する。収率：６５００＄ＩＵ／夕を含有するｎ，十山＝
２の化合物１夕。ｎ・十ｎ２＝３および４グルコース単
位の化合物は、活性一次フラクションから得ることがで
きる。このようにして、アルカリ性脱着と比較して、こ
の酸脱着法は、この系列の個々のアミノ砂糖誘導体を分
画することができる。Then, obtained according to Example 9 (Table, No. 7) 5
00' mixed desorption product (400,000 SIU/night,
pH 2.5, 60% acetone) to the column for approximately 1 hour, then rinse the Dbwex with 500' of 0.001N HCI. Under these conditions, only trace amounts of active substance are dissolved. Subsequently, the product was added to 0.01
2. Desorb with CI on the same day and record the conductivity or refractive index of the ram solution. Additionally, the Sm content of the lysate is tested.
Active fractions 74-100 were combined, neutralized by addition of Amberlite IRA41 H-, then concentrated to 5', reacted with 5' of methanol, and the product was added to 200' of this mixture in acetone. Precipitate by dropping. After washing with acetone and ether, the product is dried under vacuum. Yield: 6500$ IU/N, 10 mountains =
Compound of 2 for 1 night. Compounds of n·ten n2 = 3 and 4 glucose units can be obtained from the active primary fraction. Thus, compared to alkaline desorption, this acid desorption method is able to fractionate the individual amino sugar derivatives of this series.

前述のようにしてつくられた４〜８グルコース単位を含
む物質をこの方法に付し、中和した溶酸液を単に凍結乾
燥すると、下記の個々の高級フラクションが得られる。Subjecting the material containing 4 to 8 glucose units prepared as described above to this method and simply freeze-drying the neutralized acid solution gives the following individual higher fractions.

ｎｌ＋山ニ４ニ６７０００Ａｍ／の９ｎ，十山：５＝５
７０００ＡＩＵ／雌 ｎ，十山；６：４２００ＱＡＩＵ／の９ ｎ，十山ニ７ニ２４０００Ａｍ／雌 ｎｌ＋〜＝８＝５０００Ａｍ／の９ 実施例 １８ 前述の８−アミラーゼ分解法を次のようにして実施する
。9n of nl + mountain 4 Ni 67000 Am/, 10 mountains: 5 = 5
7000 AIU/female n, 10 mountains; 6:4200 QAIU/9 n, 10 mountains 2 24000 Am/female nl+~=8=9 of 5000 Am/Example 18 The above-mentioned 8-amylase decomposition method was carried out as follows. do.

１００夕の化合物を１．９の‘の２０ミリモルの酢酸ナ
ト２１′ゥム緩衝液（ｐＨ４．７５）に溶かし、０．１
の‘のさつまし・もから得られた８ーアミラーゼ（Ｂ。100% of the compound was dissolved in 1.9' of 20 mmol sodium acetate buffer (pH 4.75) and 0.1
8-amylase (B.

ＥＨＲｍＧＥＲ ＮＯ．１５４７１；５の９′の‘；５
００Ｕ／の９）０．１の‘を加える。混合物を３７０に
４細時間保持し、１００ｑｏに５分間加熱し、次いで４
５０仇ｐｍで遠３心して、沈殿したアルブミンと他の不
純物を除去する。次いで、全混合物をＢｉｏ−戊ＩＰ−
２を含有するカラム（直径２２側：長さ１００伽；６５
℃でサーモスタットによりコントロール）に導入し、流
速２５の上／時の水で溶鱗する。溶鱗液を伝導度計と３
流過セルをもつ高度に感受性の屈折計に通す。２．５の
‘のフラクションが得られる。EHRmGER NO. 15471;59';5
00U/9) Add 0.1'. The mixture was held at 370 for 4 minutes, heated to 100 qo for 5 minutes, then heated to 4
Centrifuge at 50 pm to remove precipitated albumin and other impurities. Then, the whole mixture was
Column containing 2 (diameter 22 side: length 100; 65
℃ (controlled by a thermostat) and scaled with water at a flow rate of 25 hours/hour. Measure the molten scale liquid with a conductivity meter.
Pass through a highly sensitive refractometer with a flow cell. A fraction of 2.5' is obtained.

フラクションは試験してアミラーゼ抑制活性またはサッ
カラーゼ抑制活性を決定でき、あるいはアントロン試験
により炭水化物含量を決定できる。緩衝液と酵素ょ配合
物からの電解質をブランク容積で溶離し、分解生成物を
分子量の減少に従って溶離する。分子量の多少異なる化
合物の完全な分離を、前述の条件下でクロマトグラフィ
ーを反復することにより実施する。単離すべき生成物を
含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥する。実施例
１９ ３グルコース単位をもつ異性体化合物を分離するため、
水に溶けた異性体温合物１０夕をＤｂｗｅｘ■５０Ｗｘ
４（Ｈ＋）を充てんしたカラム中で溶離液が中性になる
まで水洗し、次いで０．２州塩酸で溶磯する。Fractions can be tested to determine amylase inhibitory activity or saccharase inhibitory activity, or carbohydrate content can be determined by anthrone testing. Electrolytes from the buffer and enzyme formulation are eluted in the blank volume, and degradation products are eluted as their molecular weight decreases. A complete separation of compounds with more or less different molecular weights is achieved by repeated chromatography under the conditions described above. The fractions containing the product to be isolated are combined and lyophilized. Example 19 To separate isomeric compounds with 3 glucose units,
Dbwex ■50Wx of isomeric compound 10Wx dissolved in water
The column was washed with water in a column filled with 4(H+) until the eluent became neutral, and then eluted with 0.2% hydrochloric acid.

３の‘のフラクションを集め、薄層クロマトグラフィー
で検査する。The 3' fractions are collected and examined by thin layer chromatography.

この薄層クロマトグラフィーはシラン化シリカゲルプレ
ート（Ｍ旧ＲＣＫドイツ）で１００：６０：４０：２酢
酸エチル十メタノール十水十２５％のアンモニアを用い
３倍の展開において実施する。式Ｗの化合物は、式Ｖの
化合物よりも大きい距離で出発物質から走行する。式Ｖ
の異性体６夕を含有するフラクション２１５〜２７２お
よび式Ｗの異性体６００の９を含有するフラクション２
柵〜２９７を合わせ、アンバーライトＩＲＡ−４１０（
ＯＨ‐）で中和し、濃縮する。この方法で単離された式
Ｎの異性体の試験管内試験のサツカラーゼ抑制活性は、
１９００＄ＩＵ／夕であり、Ｑーアミラーゼ抑制活性は
１．６×１ぴＡＩＵ／夕であり、そして式Ｖの異性体で
はサッカラーゼ抑制活性が２１００庇ＩＵ／夕であり、
Ｑ−アミラ−ゼ抑制活性は１．４×１びＡＩＵ′夕であ
る。The thin layer chromatography is carried out on silanized silica gel plates (M former RCK Germany) using 100:60:40:2 ethyl acetate, methanol, water, and 25% ammonia at 3x development. Compounds of formula W travel a greater distance from the starting material than compounds of formula V. Formula V
Fractions 215-272 containing isomer 6 of formula W and fraction 2 containing 9 of isomer 600 of formula W
Combine fence ~297, Amberlight IRA-410 (
Neutralize with OH-) and concentrate. The in vitro sutucarase inhibitory activity of the isomer of formula N isolated by this method was
1900 IU/night, the Q-amylase inhibitory activity is 1.6 x 1 AIU/night, and the isomer of formula V has a saccharase inhibitory activity of 2100 IU/night,
The Q-amylase inhibitory activity is 1.4 x 1 and AIU'.

謂剤例錠剤の乾式謂剤例 下記 式（Ｖ）化合物 １００．０ｋｇ
澱粉 １０８．５ｋ９微
結晶性セルロース ５０．０ｋ９コロ
イダルシリ力 ０．５Ｘ９ステ
アリン酸マグネシウム ０．５ｋ９のブレン
ダーによる粉末混合物（１００万錠分）をローラー圧搾
もしくはスラッジングにより粒状化し、はじめ３．１５
肋の筋で次いで０．８側の節でふるい、この節処理した
粒状物（２５９．５ｋｇ）に１０．０ｋ９の微結晶性セ
ルロース、０．５ｋ９のステアリン酸マグネシウムを混
合し、２７０の９の重さで径９肋の錠剤に打錠した。Example of pharmaceutical preparation Example of dry pharmaceutical preparation of tablets Compound of formula (V) below 100.0 kg
Starch 108.5k9 Microcrystalline cellulose 50.0k9 Colloidal strength 0.5X9 Magnesium stearate A powder mixture (1 million tablets) in a 0.5k9 blender was granulated by roller compression or sludging, starting at 3.15
Sieve through the rib strips and then through the nodes on the 0.8 side, and mix 10.0k9 microcrystalline cellulose and 0.5k9 magnesium stearate to this knotted granule (259.5kg), The mixture was compressed into tablets with a diameter of 9 ribs.

錠剤の湿式調剤例 下記 式（Ｖ）化合物 ５０．０ｋｇ澱
粉 ５４．５ｋ９微結
晶性セルロース ３０．０ｋ９のプ
ラネタリー混合機による粉末混合物（１００方錠分）に
３０．０ｋ９の水を加え、１０分間混合する。Example of wet preparation of tablets Compound of formula (V) below 50.0 kg Starch 54.5k9 Microcrystalline cellulose Add 30.0k9 water to a powder mixture (100 tablets) prepared using a 30.0k9 planetary mixer and mix for 10 minutes. Mix.

必要に応じ、さらに１０〜２０ｋ９の水を加え、更に５
分間混合する。湿った魂をおろし（４．比舷）、流動床
式乾燥機で乾燥する。冷却した粒状物（１．０肋）を節
し、、その粒状物（１３４．５ｋ９）を１８分間、プレ
ンダー中で０．５ｋ９のステアリン酸マグネシウムと混
合する。１３５雌の重さで径７肌の錠剤に打錠した。本
発明化合物は、最も類似した公知化合物に比して、サツ
カラーゼ抑制活性が顕著に優れている。Add an additional 10-20k9 of water as needed, and
Mix for a minute. Grate the damp soul (4. comparison) and dry it in a fluidized bed dryer. The cooled granules (1.0 ribs) are knotted and the granules (134.5k9) are mixed with 0.5k9 magnesium stearate in a blender for 18 minutes. It was compressed into tablets with a weight of 135 mm and a diameter of 7 mm. The compound of the present invention has significantly superior sutucarase inhibitory activity compared to the most similar known compound.

前記式Ｗで示した化合物は、式（１）において、ｎ２＝
０で且つｎ，：３の化合物である。これに対して、前記
式Ｖで示した本発明化合物は、ｎ２＝１で且つｎ，＝２
の化合物である。従って、式Ｖ本発明化合物と上記式Ｗ
化合物とは、共に３ケのグルコース残基を有する類似化
合物であって、式Ｖ本発明化合物では式Ｗ化合物におけ
る右側の３ケのグルコース残基中の１ケが、分子中左端
にシフトしているほかは良く類似した化合物である。と
ころが、これら化合物のサッカラーゼ抑制活性は下記の
とおりであって、式Ｖ本発明化合物では約１０％も該活
性が増大していることがわかる。化合物 サッカラ
ーゼ抑制活性（ＳＩＵ′夕）式Ｖ（本発明）
２１０００ 式Ｎ（比 較） １９０００The compound represented by the formula W is, in formula (1), n2=
0 and n,:3. On the other hand, the compound of the present invention represented by the above formula V has n2=1 and n,=2
It is a compound of Therefore, the compound of formula V of the present invention and the above formula W
Compounds are similar compounds that both have three glucose residues, and in the compound of formula V of the present invention, one of the three glucose residues on the right side of the compound of formula W is shifted to the left end of the molecule. Other than that, they are very similar compounds. However, the saccharase inhibitory activity of these compounds is as shown below, and it can be seen that the compound of formula V of the present invention increases this activity by about 10%. Compound Saccharase inhibitory activity (SIU') Formula V (present invention)
21000 Formula N (comparison) 19000

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図、式０化合物（参考例）の２２０ＭＨｚにおける
ＣＤ３０Ｄ中のＮＭＲスペクトルを示す（横軸＝６脚）
。 第２図は、本発明の化合物のデカァセチル誘導体のＮＭ
Ｒスペクトルである。第３図は、式ｍ化合物（参考例）
の２２山の比におけるＤ２０中のＮＭＲスペクトルであ
る。第４図は、式ｍ化合物（参考例）の２２０ＭＨｚに
おけるＤ２０中の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。多
／ｉ幻多ュ辺Figure 1 shows the NMR spectrum in CD30D at 220 MHz of the formula 0 compound (reference example) (horizontal axis = 6 legs)
. Figure 2 shows the NM of the decaacetyl derivative of the compound of the present invention.
This is the R spectrum. Figure 3 shows a compound of formula m (reference example)
It is an NMR spectrum in D20 at the ratio of 22 peaks. FIG. 4 is a 13C-NMR spectrum in D20 at 220 MHz of the compound of formula m (reference example). Ta/i Gentayube

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １ 式（I） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ｎ＿１＝２、ｎ＿２＝１を示す） で表わされる化合物。 ２ 立体構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ のＯ−｛４・６−ビスデスオキシ−４−〔１Ｓ−（１・
４・６／５）−４・５・６−トリヒドロキシ−３−ヒド
ロキシメチル−４−Ｏ−α−Ｄ−グリコピラノシル−（
１→４）シクロ−ヘキシ−２−エン−イルアミノ〕−α
−Ｄ−グリコピラノシル｝−（１→４）−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシル−（１→４）−グルピラノースである
特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３ 式（I） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ｎ＿１＝２、ｎ＿２＝１を示す）のアミノ糖誘
導体を活性成分として含有することを特徴とする糖尿病
処置剤。 ４ 該活性成分を、固体もしくは液化ガスの希釈剤と混
合して、または表面活性剤の存在以外は分子量が２００
より小さい溶媒を除いた液状希釈剤と混合して、含有す
る特許請求の範囲第３項記載の処置剤。 ５ 該活性成分を滅菌しまたは等張溶液の形で活性成分
として含有する特許請求の範囲第４項記載の処置剤。 ６ 該活性成分の０．５〜９５重量％を含有する特許請
求の範囲第４項または第５項記載の処置剤。 ７ 投与単位形態の剤形である特許請求の範囲第４項記
載の処置剤。 ８ 錠剤、ピル、糖衣剤、カプセル、アンプルまたは坐
薬の形態の特許請求の範囲第４項記載の処置剤。[Claims] 1. A compound represented by formula (I) ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ (in the formula, n_1=2, n_2=1). 2 O-{4,6-bisdesoxy-4-[1S-(1・
4.6/5)-4.5.6-trihydroxy-3-hydroxymethyl-4-O-α-D-glycopyranosyl-(
1→4) Cyclo-hex-2-en-ylamino]-α
-D-glycopyranosyl}-(1→4)-O-α-D-
The compound according to claim 1, which is glucopyranosyl-(1→4)-glupyranose. 3. A diabetes treatment agent characterized by containing an amino sugar derivative of formula (I) ▲Mathematical formula, chemical formula, table, etc.▼ (in the formula, n_1=2, n_2=1) as an active ingredient. 4. The active ingredient is mixed with a solid or liquefied gas diluent, or has a molecular weight of 200, except for the presence of a surfactant.
4. A therapeutic agent according to claim 3, which contains a liquid diluent excluding a smaller solvent. 5. The therapeutic agent according to claim 4, which contains the active ingredient as an active ingredient in the form of a sterile or isotonic solution. 6. The treatment agent according to claim 4 or 5, which contains 0.5 to 95% by weight of the active ingredient. 7. The therapeutic agent according to claim 4, which is in the form of a dosage unit. 8. The therapeutic agent according to claim 4 in the form of a tablet, pill, dragee, capsule, ampoule or suppository.