JPS6028934A - 細胞分化誘導物質 - Google Patents
細胞分化誘導物質Info
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- JPS6028934A JPS6028934A JP58136071A JP13607183A JPS6028934A JP S6028934 A JPS6028934 A JP S6028934A JP 58136071 A JP58136071 A JP 58136071A JP 13607183 A JP13607183 A JP 13607183A JP S6028934 A JPS6028934 A JP S6028934A
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- Japan
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- cell
- inducing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明はＰｏｋｅｗｅｅｄをはしめ種々のマ・ｆ ｌ−
ジエンで刺激したヒト単核性白血球の培養培地より得ら
れるヒト単核性白血病細胞ＭＬ−１をはじめとして伯の
１髄性白血病細胞、単球性白血病Ｉ１１胞に対して分化
誘導作用を有する細胞分化誘導物質に関するものである
。
ジエンで刺激したヒト単核性白血球の培養培地より得ら
れるヒト単核性白血病細胞ＭＬ−１をはじめとして伯の
１髄性白血病細胞、単球性白血病Ｉ１１胞に対して分化
誘導作用を有する細胞分化誘導物質に関するものである
。
癌の治療において従来の抗癌剤による化学療法は、正常
の細胞、組織に対する細胞毒性という副作用の問題があ
り、それが大きな障害となっている。そこで最近、新し
い癌治療の一つの方法として分化誘導による脱癌の研究
が注目されるようになってきた。
の細胞、組織に対する細胞毒性という副作用の問題があ
り、それが大きな障害となっている。そこで最近、新し
い癌治療の一つの方法として分化誘導による脱癌の研究
が注目されるようになってきた。
白血病細胞をはじめ種々の悪性腫瘍細胞およびそれらの
樹立培養株細胞が分化能を保持しており、１ｎｖｉｔｒ
ｏ実験系で分化誘導が可能であることが示されたためで
、適当な分化誘導物質で形態的にも機能的にも正常の成
熟細胞に類似した特徴を表し、細胞の増殖性や造腫瘍性
が低下あるいは喪失することが明らかにされている。
樹立培養株細胞が分化能を保持しており、１ｎｖｉｔｒ
ｏ実験系で分化誘導が可能であることが示されたためで
、適当な分化誘導物質で形態的にも機能的にも正常の成
熟細胞に類似した特徴を表し、細胞の増殖性や造腫瘍性
が低下あるいは喪失することが明らかにされている。
分化を誘導する既知物質としてＴＩ’＾（Ｔｅ ｔｒａ
ｄｅｃａ−ｎｏｙｌ−１３＋−ｐｈｏｒｂｏｌ ａｃｅ
ｔａｔｅ） 、 ＩＩＭｓＯ（ｄｉｍｅＬｌ＋ｙｌ ｓ
ｕ−１ｆｏｘｉｄｅ ）などが知られている（＋’ｒｏ
ｃ、 Ｎａ目、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ７ｆ
Σ、 ２７７９−２７８３． １９７０、 Ｉ’ｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ、 八Ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ７５
．２４５８−２４６７、１９７８） 、一方、分化を誘
導する生体内物質としｒ ｖｉｔａｍｉｎ Ａ （１’
ｒｏｃ。
ｄｅｃａ−ｎｏｙｌ−１３＋−ｐｈｏｒｂｏｌ ａｃｅ
ｔａｔｅ） 、 ＩＩＭｓＯ（ｄｉｍｅＬｌ＋ｙｌ ｓ
ｕ−１ｆｏｘｉｄｅ ）などが知られている（＋’ｒｏ
ｃ、 Ｎａ目、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ７ｆ
Σ、 ２７７９−２７８３． １９７０、 Ｉ’ｒｏｃ
、 Ｎａｔｌ、 八Ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ ７５
．２４５８−２４６７、１９７８） 、一方、分化を誘
導する生体内物質としｒ ｖｉｔａｍｉｎ Ａ （１’
ｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃ’ｉ、ＵＳＡ ７７ ２９３
Ｇ−２９４０，１９８０） ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ （Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、Ｓｃｉ、、ユＩＪＬ ４
９９０−４９９４゜１９８１）がある。また、前骨髄性
白血病細胞（ＩＩＬ−６０）の分化を誘導するタンパク
性の分化誘導因子の報告もある（Ｊ、Ｎａｔｌ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、、６７、−１２２５−１２３０、
１９８１）。
Ｇ−２９４０，１９８０） ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ （Ｐ
ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、Ｓｃｉ、、ユＩＪＬ ４
９９０−４９９４゜１９８１）がある。また、前骨髄性
白血病細胞（ＩＩＬ−６０）の分化を誘導するタンパク
性の分化誘導因子の報告もある（Ｊ、Ｎａｔｌ、 Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｉｎ５ｔ、、６７、−１２２５−１２３０、
１９８１）。
本発明者は、」二記先行知見を認識し、よりすぐれた細
胞分化誘導物質を得るべく研究を重ねて来た。
胞分化誘導物質を得るべく研究を重ねて来た。
その結果、マイ１−ジエンで刺激したヒト単核性白血球
の培養培地中に優れた細胞分化誘導活性を有する二種の
物質が存在することを見い出し、これらを細胞分化誘導
物質Ａおよび細胞分化誘導物質Ｂと命名することによっ
て本発明を完成するに至った。
の培養培地中に優れた細胞分化誘導活性を有する二種の
物質が存在することを見い出し、これらを細胞分化誘導
物質Ａおよび細胞分化誘導物質Ｂと命名することによっ
て本発明を完成するに至った。
本発明は、マイトジェンで刺激したヒｌ」χ核性自血球
の培養培地より回収しうる蛋白質であり、セファデック
スによるゲル濾過分析により測定した分子量が４５，０
００〜６０，０００または１００，０００ 、等電点が
ｐＨ５〜７であり、トリプシン感受性を示し、熱に不安
定（７０℃、３０分間加熱で不活性化される）、少な（
ともヒト骨髄性白血病細胞肚−Ｉに対して細胞分化誘導
作用を有する細胞分化誘導物質に関するものである。
の培養培地より回収しうる蛋白質であり、セファデック
スによるゲル濾過分析により測定した分子量が４５，０
００〜６０，０００または１００，０００ 、等電点が
ｐＨ５〜７であり、トリプシン感受性を示し、熱に不安
定（７０℃、３０分間加熱で不活性化される）、少な（
ともヒト骨髄性白血病細胞肚−Ｉに対して細胞分化誘導
作用を有する細胞分化誘導物質に関するものである。
（原料の調整）
原料細胞はマイトジェンで刺激したヒト中核性白血球で
あり、マイトジェンとしては、たとえばホークライード
マイト−ジエン（Ｐｏｋｅｗｅｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ
）、ＰＩＩＡ 、Ｃｏｎ−Ａ 、ＬＰ３などが例示され
る。このボークライ−］−マイト−ジエンはアメリカヤ
マゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ
）から１ｑられるレクチン（Ｌｅｃｔｉｎ）である。か
がるマイトジェンによってヒト中核性白血球を刺激する
。刺激は、通常２Ｘ１０６細胞／ｍ１〜１ｘｌｏ７細胞
／ｍ＋に対して１〜１０．ｕｇ ／ｍｌのマイトジェン
を添加して行う。
あり、マイトジェンとしては、たとえばホークライード
マイト−ジエン（Ｐｏｋｅｗｅｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ
）、ＰＩＩＡ 、Ｃｏｎ−Ａ 、ＬＰ３などが例示され
る。このボークライ−］−マイト−ジエンはアメリカヤ
マゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ
）から１ｑられるレクチン（Ｌｅｃｔｉｎ）である。か
がるマイトジェンによってヒト中核性白血球を刺激する
。刺激は、通常２Ｘ１０６細胞／ｍ１〜１ｘｌｏ７細胞
／ｍ＋に対して１〜１０．ｕｇ ／ｍｌのマイトジェン
を添加して行う。
（培養条件）
培地としては、たとえばＩ？Ｐ旧１６４０等が用いられ
、当該培地中には０〜１０％の牛胎児血清を添加しても
よいが、精製後医薬として用いることを意図する場合に
は、血清無添加培地で培養することが好ましい。
、当該培地中には０〜１０％の牛胎児血清を添加しても
よいが、精製後医薬として用いることを意図する場合に
は、血清無添加培地で培養することが好ましい。
培養時間は、通常２〜４日間程度であり。培養後培地を
回収する。この培地中に、本発明の細胞分化誘導物質が
産生されている。
回収する。この培地中に、本発明の細胞分化誘導物質が
産生されている。
（細胞分化誘導物質の回収）
培地からの細胞分化誘導物質の回収は、たとえば当該培
地を遠心分ＩＦ＋Ｉｆ、減圧ｆＡ縮、塩析う）両、ゲル
濾過、ｆ％縮等を適宜組め合わ−Ｕることによっζおこ
なわれる。
地を遠心分ＩＦ＋Ｉｆ、減圧ｆＡ縮、塩析う）両、ゲル
濾過、ｆ％縮等を適宜組め合わ−Ｕることによっζおこ
なわれる。
より具体的には、たとえば次の如き方法によって回収さ
れる。即ち、まず、培地を遠心３３ｐＨｌｔ （たとえ
ば、１５００回転、５分の条件）し、１−１ｎを回収す
る。
れる。即ち、まず、培地を遠心３３ｐＨｌｔ （たとえ
ば、１５００回転、５分の条件）し、１−１ｎを回収す
る。
この回収液をコロジオ′ン バックに入れ、ｌＯ耐１リ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２程度） 、＋１．１）ＩＮ＋＋
ＣＩに対して減圧透析しながら濃縮する。試料のｐに応
じてへ用１ｃｏｎ Ｄｉａｆｌｏｕ ＳｙｓＬｅｍをも
ぢい−で濃縮し′Ｃも、１い。
ン酸緩衝液（ｐＨ７，２程度） 、＋１．１）ＩＮ＋＋
ＣＩに対して減圧透析しながら濃縮する。試料のｐに応
じてへ用１ｃｏｎ Ｄｉａｆｌｏｕ ＳｙｓＬｅｍをも
ぢい−で濃縮し′Ｃも、１い。
また、大量の試料の場合には塩析分画に付ずことが好ま
しい。当該塩析分画は、たとえばまず培地抽出液に２０
〜３０％飽和になるように硫酸アンモニウムを添加後、
上清を回収し、これに８０〜９０％飽和になるように硫
酸アンモニウムを添加して得られる沈澱を回収すること
によって行われる。より詳細には、たとえば、培地抽出
液に２０〜３０％飽和になるように硫酸アンモニウムを
溶解さ・Ｕて攪拌後静置し、遠心分離することにより沈
澱と上清とを分ｓｔシて上清を回収し、この回収液をｐ
Ｈ６〜８に再調整した後、再度硫酸アンモニウムを８０
〜９０％飽和になるように熔解だせた後静置し、遠心分
離することにより沈澱を得ることによって行われる。
しい。当該塩析分画は、たとえばまず培地抽出液に２０
〜３０％飽和になるように硫酸アンモニウムを添加後、
上清を回収し、これに８０〜９０％飽和になるように硫
酸アンモニウムを添加して得られる沈澱を回収すること
によって行われる。より詳細には、たとえば、培地抽出
液に２０〜３０％飽和になるように硫酸アンモニウムを
溶解さ・Ｕて攪拌後静置し、遠心分離することにより沈
澱と上清とを分ｓｔシて上清を回収し、この回収液をｐ
Ｈ６〜８に再調整した後、再度硫酸アンモニウムを８０
〜９０％飽和になるように熔解だせた後静置し、遠心分
離することにより沈澱を得ることによって行われる。
当該沈禮は、一般に２〜ｌｏｍＭリン酸緩衝液（１１６
〜８）等の緩衝液に溶解する。次に、ゲル濾過によって
分子篩を行い細胞分化誘導物質を回収する。
〜８）等の緩衝液に溶解する。次に、ゲル濾過によって
分子篩を行い細胞分化誘導物質を回収する。
ゲル濾過にもちいられる担体としては、たとえば分子量
１００００〜５０００００の化合物の分子篩に適したゲ
ル濾過担体、たとえばセファデックス、アガロース、バ
イオゲル、セファクリル等があげられる。
１００００〜５０００００の化合物の分子篩に適したゲ
ル濾過担体、たとえばセファデックス、アガロース、バ
イオゲル、セファクリル等があげられる。
これら担体は使用に際してあらかしめｐ ＩＩ Ｇ〜８
程度の低イオン強度緩衝液で平衡化したものを用いるこ
とが好ましい。
程度の低イオン強度緩衝液で平衡化したものを用いるこ
とが好ましい。
細胞分化誘導物質Ａと細胞分化誘導物質Ｂとの分８旧よ
、たとえば分子量と細胞分化誘導活性をマーカーとして
追跡することによっておこなわれる。
、たとえば分子量と細胞分化誘導活性をマーカーとして
追跡することによっておこなわれる。
なお、上記の回収方法は本発明細胞分化誘導物質回収の
一例を示したにすぎず、勿論他の方法によって回収して
もよい。
一例を示したにすぎず、勿論他の方法によって回収して
もよい。
かくして得られた細胞分化誘導活性番７１ヒ１．刊髄性
白血病をはじめ他の刊髄性、単球性白血病細胞に対して
細胞分化誘導作用を示すものであり、化学用、薬理学用
の試薬として用いてもよく、また医薬品として用いる場
合には医薬品製造の通例技ｔ・Ｌｊにしたがって、要す
れば加熱処理、除菌濾、過、凍結乾燥、分注、製剤化を
行えばよい。かくし２て新規な細胞分化誘導物質を含有
する医薬が提供される。
白血病をはじめ他の刊髄性、単球性白血病細胞に対して
細胞分化誘導作用を示すものであり、化学用、薬理学用
の試薬として用いてもよく、また医薬品として用いる場
合には医薬品製造の通例技ｔ・Ｌｊにしたがって、要す
れば加熱処理、除菌濾、過、凍結乾燥、分注、製剤化を
行えばよい。かくし２て新規な細胞分化誘導物質を含有
する医薬が提供される。
（本発明細胞分化誘導物質の特性）
本発明細胞分化誘導物質の特性は、次の通りである。
■分子屋：
セフプデンクス Ｇ−７５、Ｇ−２００、七フアクリル
Ｓ−３００などによるゲル濾過にて下記条件下に分子
量を測定したところ細胞分化誘導物質への分子量は４５
，０００〜６０，０００、細胞分化誘導物質Ｂの分子量
は１００，０００であった。
Ｓ−３００などによるゲル濾過にて下記条件下に分子
量を測定したところ細胞分化誘導物質への分子量は４５
，０００〜６０，０００、細胞分化誘導物質Ｂの分子量
は１００，０００であった。
条件：カラムサイズ・・２４ Ｘ ９００ 繭＋ｉ溶媒
・・リンｍ緩種ｊ液 展開流速・・１．５ｍｌ／ｈ ｒ。
・・リンｍ緩種ｊ液 展開流速・・１．５ｍｌ／ｈ ｒ。
なお、分子量は分子量既知の標準蛋白との比較によって
決定した。
決定した。
■等電点：
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、ＡｃＬａ、、１９４
． ３３５ （１９６９） 、 八Ｃｔａ、 Ｃｈｅｍ
、 ５ｃａｎｄ、、 ２０．８２０〜８３４ （１９６
６）によってＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｆｌａｔ−ｂｅ
ｄ ｅｌｅｃｔｒｏｆｏｃｕｓｉｎ８（ＫＬ［ｌ ）に
よって等重点をめたところ細胞分化誘導物質Δおよび細
胞分化誘導物質Ｂ共に５〜７であった。
． ３３５ （１９６９） 、 八Ｃｔａ、 Ｃｈｅｍ
、 ５ｃａｎｄ、、 ２０．８２０〜８３４ （１９６
６）によってＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｆｌａｔ−ｂｅ
ｄ ｅｌｅｃｔｒｏｆｏｃｕｓｉｎ８（ＫＬ［ｌ ）に
よって等重点をめたところ細胞分化誘導物質Δおよび細
胞分化誘導物質Ｂ共に５〜７であった。
■酵素感受性：
酵素として、蛋白分解酵素、トリプシンを選びこれらを
１０μｇ／ｍｌの濃度で３７℃、３時間細胞分化誘導物
質Ａまたは細胞分化誘導物質■３と接触さ−Ｖその感受
性を調べた。
１０μｇ／ｍｌの濃度で３７℃、３時間細胞分化誘導物
質Ａまたは細胞分化誘導物質■３と接触さ−Ｖその感受
性を調べた。
その結果両者ともｌ・リプシンにり１して感受性を示し
た。
た。
感受性の有無は、後記分化誘導活性をしらべるこうによ
って行った。
って行った。
■温度安定性：
細胞分化誘導物ｉＡ及び細胞分化誘導物質Ｂをそれぞれ
ｐＨ７，２の条件下で、種々の温度で３０分間インキュ
ベー１・し、各温度におＬ）る分化誘導活性を開べた。
ｐＨ７，２の条件下で、種々の温度で３０分間インキュ
ベー１・し、各温度におＬ）る分化誘導活性を開べた。
その結果は第１ａ図および第１ｂ図に示す通りであり、
両細胞分化誘導物質とも７０℃、３０分の加熱処理でそ
の活性がほとんど消失した。
両細胞分化誘導物質とも７０℃、３０分の加熱処理でそ
の活性がほとんど消失した。
■ｐＨｐＨ性；
細胞分化誘導物質Ａおよび細胞分化誘導物質Ｂを種々の
ｐ Ｈ条件下で０〜２０℃、２４時間保存し、各処理に
おＬｊる分化誘導活性を比較しノ、：。その結果は第２
ａ図および第２ｂ図に示す通りであり、両細鉋分化誘導
物質ともｐＩ（２において失活した。
ｐ Ｈ条件下で０〜２０℃、２４時間保存し、各処理に
おＬｊる分化誘導活性を比較しノ、：。その結果は第２
ａ図および第２ｂ図に示す通りであり、両細鉋分化誘導
物質ともｐＩ（２において失活した。
■分化誘導活性：
細胞株として、ヒトの骨髄性白血病細胞株Ｍｌ、−１（
細胞数３ Ｘ１０＠ｃｅｌｌｓ／ｍ＋）を用い、培地と
して非働化した１０％牛脂児血清を含むＲＰＭ１１６４
０培地を用いることによって３日間培養した。この培養
系に、細胞分化誘導物質Ａまたは細胞分化誘導物質Ｂを
１μｇ／ｍ＋添加し、３日間培養後に、形態変化、生死
細胞数、Ｆｃリセプター活性、Ｎ １３ ′Ｆ還元能、
貧食能を測定し、その結果を後記第１表−１および第１
表−２に示した。
細胞数３ Ｘ１０＠ｃｅｌｌｓ／ｍ＋）を用い、培地と
して非働化した１０％牛脂児血清を含むＲＰＭ１１６４
０培地を用いることによって３日間培養した。この培養
系に、細胞分化誘導物質Ａまたは細胞分化誘導物質Ｂを
１μｇ／ｍ＋添加し、３日間培養後に、形態変化、生死
細胞数、Ｆｃリセプター活性、Ｎ １３ ′Ｆ還元能、
貧食能を測定し、その結果を後記第１表−１および第１
表−２に示した。
さらに、α−ナフチルアセテートエステラーゼ活性や細
胞表面に対する種々のモノクローナル抗体による解析か
ら単球／マクロファージ系へ分化しＣいることが示唆さ
れた。
胞表面に対する種々のモノクローナル抗体による解析か
ら単球／マクロファージ系へ分化しＣいることが示唆さ
れた。
かくして本発明細胞分化誘導物質が細胞分化活性を有す
ることが確認された。
ることが確認された。
実施例１
ヒト末梢血単核白血球を目ｃｏ１１−１１ｙｐａｑｕｅ
Ｔ：３３８１ｔＬ、血清無添加のＲＰＭ１１６４０培地
にＰｏｋｗｅｅｄマイト−ジエン２μｇ／ｍｌとともに
３日間培養し、培養液を遠心分離し、その上清を凍結し
て保存する。プールした培養上清をＡｍ１ｃｏｎ Ｄｉ
ａｆｌｏｗ Ｓｙｒ、ｔｅｍで濃縮し、ＩＩＥへＥ−セ
ファデノクヌ、へ−５０にかける。ポリエチレングリコ
ール０．００５％を含む０．０１１１リン酸紐南液（ρ
１１７．２）の塩濃度をあげて溶出し活性分画を得る。
Ｔ：３３８１ｔＬ、血清無添加のＲＰＭ１１６４０培地
にＰｏｋｗｅｅｄマイト−ジエン２μｇ／ｍｌとともに
３日間培養し、培養液を遠心分離し、その上清を凍結し
て保存する。プールした培養上清をＡｍ１ｃｏｎ Ｄｉ
ａｆｌｏｗ Ｓｙｒ、ｔｅｍで濃縮し、ＩＩＥへＥ−セ
ファデノクヌ、へ−５０にかける。ポリエチレングリコ
ール０．００５％を含む０．０１１１リン酸紐南液（ρ
１１７．２）の塩濃度をあげて溶出し活性分画を得る。
コロジオンバッグで水に対して遇析濃縮してからＰｒｅ
ｐａｒａｔｉｏｎ ｆｌａｔ−ｂｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏ
ｆｏｃｕｓｉｎｇ （ＬＫｒｌ）にかりて、更に活性部
分を分離する。コロジオンバッグで濃縮後リン酸緩南液
で平衡化した旧ｔｒＲｇｅｌ ＡＣ八へ４カラムにかけ
て２つの活性画分、即ら細胞分化誘導物質Ａおよび細胞
分化誘導物質Ｂを採取する。分化誘導活性は、主にＮ［
ｌＴ還元能、Ｐｃ受容体活性を１ｈ標に測定した。かく
して得られた両細胞多）化誘導物質はそれぞれ前記特性
を有していた。
ｐａｒａｔｉｏｎ ｆｌａｔ−ｂｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏ
ｆｏｃｕｓｉｎｇ （ＬＫｒｌ）にかりて、更に活性部
分を分離する。コロジオンバッグで濃縮後リン酸緩南液
で平衡化した旧ｔｒＲｇｅｌ ＡＣ八へ４カラムにかけ
て２つの活性画分、即ら細胞分化誘導物質Ａおよび細胞
分化誘導物質Ｂを採取する。分化誘導活性は、主にＮ［
ｌＴ還元能、Ｐｃ受容体活性を１ｈ標に測定した。かく
して得られた両細胞多）化誘導物質はそれぞれ前記特性
を有していた。
これらを医薬品製造の１π套丁段、例えば加熱処理、除
菌濾過、凍結乾燥、分注等の任意の処理を施して製剤化
すると従来にない新規な医薬が得られる。
菌濾過、凍結乾燥、分注等の任意の処理を施して製剤化
すると従来にない新規な医薬が得られる。
（以下余白）
第１表−１細胞分化誘導物質Ａの分化誘導活性性）＊細
胞分化誘導物質Ａ無添加 第１表−２細胞分化誘導物質Ｂの分化誘導活性性）＊細
胞分化誘導物質Ｂ無添加
胞分化誘導物質Ａ無添加 第１表−２細胞分化誘導物質Ｂの分化誘導活性性）＊細
胞分化誘導物質Ｂ無添加
第１ａ図は細胞分化誘導物質への温度安定性を、第１ｂ
図は細胞分化誘導物質Ｂの温度安定性を、第２ａ図は細
胞分化誘導物質Ａのｐ１１安定性を、第２ｂ図は細胞分
化誘導物質Ｂのｐ＋＋安定性を示すグラフである。 ・・・・細胞分化誘導物質Ａ ム・・・細胞分化誘導物質Ｂ Ｏ・・・コントロール △・・・コントロール 第１ξ図 ５孟 潰（０Ｃ） 第１ｂ図 温 度（０Ｃ） 第λ図 ２ ３４ ５ ６７ ８ ９１０１１ ｌ−１ 鵬す図 ２ ３４ ５６ ７ ８ ９１０１１ Ｈ 手 続 Ｔｉ１ｉ −Ｉ ＥＴ’Ｔ （自発）昭和５８
年ＩＤ月５［１ 特許庁長官 殿 ■、小事件表示 昭和５８年特許願第１３ Ｇ ＋１７１号２、発明の名
称 細胞分化誘導物質 ３．７市正をするｆず 事件との関係 特Ｗ「出願人 氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字 ４、ｆｔ理人 ■５４１ 住 所 大阪市東区平！Ｉ！ｒ町４丁目５３番地３ニュ
ーライフ平野町４０６号 電話（０６） ２２７−１１５（ｉ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明−１の憫 ８．７Ｉｌｉ正の内容 （１）明細書第４頁、第８行の「調整」を「調製」に訂
正する。 （２） 同書第１０頁、下から第４行のｒＰｏｋｗｅｅ
ｄ Ｊをｒ Ｐｏｋｅｗｅｅｄ Ｊに訂正する。
図は細胞分化誘導物質Ｂの温度安定性を、第２ａ図は細
胞分化誘導物質Ａのｐ１１安定性を、第２ｂ図は細胞分
化誘導物質Ｂのｐ＋＋安定性を示すグラフである。 ・・・・細胞分化誘導物質Ａ ム・・・細胞分化誘導物質Ｂ Ｏ・・・コントロール △・・・コントロール 第１ξ図 ５孟 潰（０Ｃ） 第１ｂ図 温 度（０Ｃ） 第λ図 ２ ３４ ５ ６７ ８ ９１０１１ ｌ−１ 鵬す図 ２ ３４ ５６ ７ ８ ９１０１１ Ｈ 手 続 Ｔｉ１ｉ −Ｉ ＥＴ’Ｔ （自発）昭和５８
年ＩＤ月５［１ 特許庁長官 殿 ■、小事件表示 昭和５８年特許願第１３ Ｇ ＋１７１号２、発明の名
称 細胞分化誘導物質 ３．７市正をするｆず 事件との関係 特Ｗ「出願人 氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字 ４、ｆｔ理人 ■５４１ 住 所 大阪市東区平！Ｉ！ｒ町４丁目５３番地３ニュ
ーライフ平野町４０６号 電話（０６） ２２７−１１５（ｉ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明−１の憫 ８．７Ｉｌｉ正の内容 （１）明細書第４頁、第８行の「調整」を「調製」に訂
正する。 （２） 同書第１０頁、下から第４行のｒＰｏｋｗｅｅ
ｄ Ｊをｒ Ｐｏｋｅｗｅｅｄ Ｊに訂正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■マイトジェンで刺激したヒト単核性白血球の培養培地
より回収しうる蛋白質であり、セファデックスによるゲ
ル濾過分析により測定した分子量が４５，０００〜６０
．００＋１または１００，０００ 、等重点がｐ１１５
〜７であり、トリプシン感受性を示し、熱に不安定（７
０℃、３０分間加熱で不活性化される）、少なくともヒ
ト刊髄性白血病＃ＩＩＩ胞ＭＬ−１に対し°ζｆｉｌ胞
分化誘導作用を有する細胞分化誘導物質。 ■分子量が４５．０００〜６０，０００である特ｔｉ’
ｌ請求の範囲第０項記載の細胞分化誘導物質。 ■分子量が１００，０００である特許請求の範囲第０項
記載の細胞分化誘導物質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136071A JPS6028934A (ja) | 1983-07-25 | 1983-07-25 | 細胞分化誘導物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58136071A JPS6028934A (ja) | 1983-07-25 | 1983-07-25 | 細胞分化誘導物質 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6028934A true JPS6028934A (ja) | 1985-02-14 |
Family
ID=15166539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58136071A Pending JPS6028934A (ja) | 1983-07-25 | 1983-07-25 | 細胞分化誘導物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6028934A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60105621A (ja) * | 1983-11-14 | 1985-06-11 | Agency Of Ind Science & Technol | 細胞の分化誘導作用を有する生理活性物質およびその製法 |
| EP0210461A2 (en) * | 1985-07-03 | 1987-02-04 | Ajinomoto Co., Inc. | Physiologically active polypeptide BUF-3 |
| JPS63129994A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | ヒト由来生理活性物質の製造法 |
| JPS63129993A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | ヒト由来生理活性物質の製造方法 |
| JPS63130600A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | 生理活性物質 |
-
1983
- 1983-07-25 JP JP58136071A patent/JPS6028934A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60105621A (ja) * | 1983-11-14 | 1985-06-11 | Agency Of Ind Science & Technol | 細胞の分化誘導作用を有する生理活性物質およびその製法 |
| JPS6245205B2 (ja) * | 1983-11-14 | 1987-09-25 | Kogyo Gijutsuin | |
| EP0210461A2 (en) * | 1985-07-03 | 1987-02-04 | Ajinomoto Co., Inc. | Physiologically active polypeptide BUF-3 |
| JPS63129994A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | ヒト由来生理活性物質の製造法 |
| JPS63129993A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | ヒト由来生理活性物質の製造方法 |
| JPS63130600A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-02 | Agency Of Ind Science & Technol | 生理活性物質 |
| JPH0348797B2 (ja) * | 1986-11-21 | 1991-07-25 | Kogyo Gijutsuin | |
| JPH0348798B2 (ja) * | 1986-11-21 | 1991-07-25 | Kogyo Gijutsuin | |
| JPH0474360B2 (ja) * | 1986-11-21 | 1992-11-26 |
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