JPS60186296A - デンプンの糖化方法 - Google Patents
デンプンの糖化方法Info
- Publication number
- JPS60186296A JPS60186296A JP4337084A JP4337084A JPS60186296A JP S60186296 A JPS60186296 A JP S60186296A JP 4337084 A JP4337084 A JP 4337084A JP 4337084 A JP4337084 A JP 4337084A JP S60186296 A JPS60186296 A JP S60186296A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- maltose
- starch
- pullulanase
- aerobacter
- klebsiella
- Prior art date
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- Granted
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明はデンプンから高純度マルトースの製造法に閏4
−るものである。 植!J1gまたは鍬生物の生〃Lするβ−アミラーゼを
デンプンに作用させると、デンプン中のアミロースとア
ミロペクチンの7F還元性未7jriからマルトースh
(生成する。しかし、アミロペクチンのα−16−グル
コシド、151合はβ−アミラーゼによって分h’1さ
イ1ないため、α−16−グルコシド結合付近で分解が
1)。す、後にデキストリン(β−リミットデキストリ
ン)を代ずことになる。β−アミラーゼと兵に、アミロ
ペクチン(またはβ−リミットデキストリン)のび−1
6−ゲルコント拮・片を分解する酵素を存在させてデン
プンを糖化させるときマルトースの収量が増収できるこ
とはよ< 7JJられている(たとえば、Z、 FLG
unjaら、Bioc)+em、J、 81 。 392 (1961)なと)。 α−1,6−グルコシド結合を分解する酵素は、その絵
心、基質特異性などにより、イソアミラーセ、フルラナ
ーゼ、アミロ−1,6−グルコシダーゼなどと呼ばれて
いるが、総称してα−1,6−グルコシダーゼといわれ
る。 本発明者は、先に、バシルス属細菌が、デンプンからマ
ルトースを高収量で生産するのに必要なβ−アミラーゼ
とα−1,6−グルコシダーゼからなる複合酵素を同時
に生産することを認めた(特公昭53−5749など、
及びAgric、Biol、Chem、 4 Q。 1515 (1476)など)。この酵素によれは、各
種デンプンから最高88%の数置でマルトースを生産す
ることができる(日本農芸11Z学公誌、鎧。 77(1979))。 しかし、デンプンを糖化したマルトース含1からマルト
ースを結晶として収量よ(回収するためCどは、マ゛ル
トース含釘液のマルトース純度を、少なくとも909r
)以上に高めることが要求される。 そこで、本発明者は、前記複合酵素を用いrこデンプン
糖化において、マルトース含敏を高める方法について鋭
意研究を行ってきた結果、デンプンをバシルス属β−ア
ミラーゼとα−1,6グルコシダーゼで糖化するに際し
、エーロバクター属またはクレブシラ属のプルラナーゼ
を仔在させて糖化するとマルトースの収量が増加できる
ことを認めた。本発明はこの知見にもとすいてなされた
ものである。 すなわち、本発明は、バシルス属の生産するβ−アミラ
ーゼとび−1,6−グルコシダーゼでデンプンを糖化し
てマルトースを製造するに際し、エーロバクター属また
はクレブシラ属のプルラナーゼを存在させることを特徴
とする高純度マルトースの製造方法に関するものである
。 以下に本発明の内容を詳細に説明する。 エーロバクター属菌株(Aerobacter aer
ogenes)の生産するプルラナーゼは、最初、Be
nderらにより、ヘプルラリャ・プルランの生産する
多糖類プルランを分解する酵素として発見された( B
iochem、Biophys:Aeta、36. 3
09(’1959) ’tが、ソノ後、同シ属種の菌株
のプルラナーゼが多くの研究者により研究されている
−るものである。 植!J1gまたは鍬生物の生〃Lするβ−アミラーゼを
デンプンに作用させると、デンプン中のアミロースとア
ミロペクチンの7F還元性未7jriからマルトースh
(生成する。しかし、アミロペクチンのα−16−グル
コシド、151合はβ−アミラーゼによって分h’1さ
イ1ないため、α−16−グルコシド結合付近で分解が
1)。す、後にデキストリン(β−リミットデキストリ
ン)を代ずことになる。β−アミラーゼと兵に、アミロ
ペクチン(またはβ−リミットデキストリン)のび−1
6−ゲルコント拮・片を分解する酵素を存在させてデン
プンを糖化させるときマルトースの収量が増収できるこ
とはよ< 7JJられている(たとえば、Z、 FLG
unjaら、Bioc)+em、J、 81 。 392 (1961)なと)。 α−1,6−グルコシド結合を分解する酵素は、その絵
心、基質特異性などにより、イソアミラーセ、フルラナ
ーゼ、アミロ−1,6−グルコシダーゼなどと呼ばれて
いるが、総称してα−1,6−グルコシダーゼといわれ
る。 本発明者は、先に、バシルス属細菌が、デンプンからマ
ルトースを高収量で生産するのに必要なβ−アミラーゼ
とα−1,6−グルコシダーゼからなる複合酵素を同時
に生産することを認めた(特公昭53−5749など、
及びAgric、Biol、Chem、 4 Q。 1515 (1476)など)。この酵素によれは、各
種デンプンから最高88%の数置でマルトースを生産す
ることができる(日本農芸11Z学公誌、鎧。 77(1979))。 しかし、デンプンを糖化したマルトース含1からマルト
ースを結晶として収量よ(回収するためCどは、マ゛ル
トース含釘液のマルトース純度を、少なくとも909r
)以上に高めることが要求される。 そこで、本発明者は、前記複合酵素を用いrこデンプン
糖化において、マルトース含敏を高める方法について鋭
意研究を行ってきた結果、デンプンをバシルス属β−ア
ミラーゼとα−1,6グルコシダーゼで糖化するに際し
、エーロバクター属またはクレブシラ属のプルラナーゼ
を仔在させて糖化するとマルトースの収量が増加できる
ことを認めた。本発明はこの知見にもとすいてなされた
ものである。 すなわち、本発明は、バシルス属の生産するβ−アミラ
ーゼとび−1,6−グルコシダーゼでデンプンを糖化し
てマルトースを製造するに際し、エーロバクター属また
はクレブシラ属のプルラナーゼを存在させることを特徴
とする高純度マルトースの製造方法に関するものである
。 以下に本発明の内容を詳細に説明する。 エーロバクター属菌株(Aerobacter aer
ogenes)の生産するプルラナーゼは、最初、Be
nderらにより、ヘプルラリャ・プルランの生産する
多糖類プルランを分解する酵素として発見された( B
iochem、Biophys:Aeta、36. 3
09(’1959) ’tが、ソノ後、同シ属種の菌株
のプルラナーゼが多くの研究者により研究されている
【
たとえば、 Method in Enzymolog
y、3j。 555 (1966)、Agric、 Biol、 C
hezn、、 37 、2821(1973)など)。 また、クレブシラ属函株によるct−1,6−グルコシ
ダーゼの生産については、たとえば、特公昭51−50
72に記載されている。 エーロバクター・エーロゲネスは、現在、Bergey
の細菌同定書(Bergey’s Manual of
Detertni;aativeBacteriol
ogy、 The William & Wilkin
s Co、第81u2)においては、クレブシラ修ニュ
ーモニア(KXebsiellapneumoniae
)に統合されている。本発明において使用される、エ
ーロバクター属またはクレブシラ属のプルラナーゼとは
、この属種の菌株の生産するプルラナーゼをさし、これ
ら属種の菌株の酵素はすでに市販されている。 本発明は、このような市販のエーロバクター属し またはクレブシラ”萬のプルラナーゼを使用することが
できるか、本発明者により発明された、クレプシラ・ニ
ューモニアFERMP−7387の生産する新規なプル
ラナーゼを用いることができる。 本酵素は最適作用pHが約4.5〜約7.5最J白温度
が60〜63℃の極めて広いpi聾厄囲に作用する熱安
定のプルラナーゼであり、α−アミラーゼやトランスグ
ルコシダーゼなどマルトースの生産にとって妨害となる
酵素を殆んど含んでいないため、本発明をより効果的に
実施することができる。本酵素の酵素的性質の概要は以
下の通りである。 (1)作用ニブルランのα−1,6−グルコシド結合を
分解してマルトトリオースを生成する。 また、澱粉、アミロペクチン、グリコーゲンまたはこれ
らの派生物のα−1,6−グルコシド結合を分解する。 (2)作用pi(範囲及び最適作用pH:pH約2.5
〜約10の゛(へめで広いpH範囲で作用し、最適作用
温度はpH約4,5〜約745の広い→厄囲に認メラレ
タ(2%プルラン、0.05 MA’i[+j緩仕1i
1u (pH3〜5.5) 、 ト リ ス緩1昏昧r
i&(t)115.5〜7.5)およびトリシン緩術赦
(pt−i7〜85)のもとて50℃で30分間反応) (3)作用温度範囲及び最51凶作用温度:約75℃ま
で作用し、最適作出温度は約63℃に認められた(2%
プルラン、0.051Vif!I’+、酸緩衝液(pH
5,0)又は0.05Mトリス緩衝液(pf(7,0)
のもとて30分間反応)。 (4)熱安定性:酵素水溶/反を50℃、55℃と60
℃で加熱処理してのち、残存油1生を1jlil定した
。その結果、50℃では1時間の加熱後も失活は殆んど
認められなかった。55℃の加熱では20分の加熱で約
2096失活し、1時間の加熱で約60%失活した。 そして、60℃の加熱では30分間の加熱で約80%失
活した。 +51 pH安定性:pH約4〜約10の範囲で安定で
あつた(0.1M酢酸緩衝液、リン酸緩薊液またはトリ
ス緩衝液のもと、室温(25”C)で3時間放置後、残
存活性を副ボした。 (6) 阻害剤二本酵素はlX10 MのCu S04
. )4gCI2.−Zn301. F’eS(’、)
1により、それぞれ約93%、約89%、約86%、約
29%阻害された。同濃度のAgNO3によっては殆ん
と阻害されなかった。 (7)精製方法:本酵素は培養上澄液から硫安分画(4
0〜70%飽和’) 、DEAE−セファロースカラム
クロマトグラフィー(KCIO〜0.5Mでリニヤ−グ
ラジェント6出)とセファデックスG−200カラムク
ロマトグラフイーにより、クロマト的、電気泳動的に均
一まで精製することができる。 18)分子ル:セファデックス(、−200ゲル濾過法
により測定した分子量は約12万であった。 (9) 力価測定法:0.1Ml1ス緩衝i反に溶解さ
せた1%プルラン?ei (pH7,0) 0.5 m
lに適量の酵素を加え、水で全量1 atとし40’C
で反応させる。この条件で1時間に1 +ng還元力を
グルコースとして表わした百分率)10以下の液化デン
を10〜4o96m度で、pH5〜7、温度50〜60
℃でおこなわれる。 次に、実施例により本発明の詳細な説明する。 実施例 I Biol 、 Chem、、旦、1515 (1976
)、特公昭53−5749により調製した。同酵素は北
海道糖業(株)より入手することができる)それぞれS
00単位と30単位(単位の定義はlij記文献によっ
り)トクレブソラ・ニューモニア)4” E RM P
=738’lの生産rるプルラナーゼを05または】単
位を加え、pH5〜G、5、温度50℃で44時間糖化
した。糖化液の糖組成を高吻液体りロマトグラフィーに
より定数した結果は第1表に示す1曲りであった。 表から明らかなるように、バシルス属β−アミラーゼと
α−1,6−グルコンダーゼに加えて、クレブシラ・ニ
ューモニアのプルラナーゼを1弔位加えて糖化すると、
フ11(添加の場合に比べ、その他の成lA(オリゴ糖
)が低下し、マルトースの収岨か2.9%増1川した。 実施例 2 れた結果は第2表の通りであった。
たとえば、 Method in Enzymolog
y、3j。 555 (1966)、Agric、 Biol、 C
hezn、、 37 、2821(1973)など)。 また、クレブシラ属函株によるct−1,6−グルコシ
ダーゼの生産については、たとえば、特公昭51−50
72に記載されている。 エーロバクター・エーロゲネスは、現在、Bergey
の細菌同定書(Bergey’s Manual of
Detertni;aativeBacteriol
ogy、 The William & Wilkin
s Co、第81u2)においては、クレブシラ修ニュ
ーモニア(KXebsiellapneumoniae
)に統合されている。本発明において使用される、エ
ーロバクター属またはクレブシラ属のプルラナーゼとは
、この属種の菌株の生産するプルラナーゼをさし、これ
ら属種の菌株の酵素はすでに市販されている。 本発明は、このような市販のエーロバクター属し またはクレブシラ”萬のプルラナーゼを使用することが
できるか、本発明者により発明された、クレプシラ・ニ
ューモニアFERMP−7387の生産する新規なプル
ラナーゼを用いることができる。 本酵素は最適作用pHが約4.5〜約7.5最J白温度
が60〜63℃の極めて広いpi聾厄囲に作用する熱安
定のプルラナーゼであり、α−アミラーゼやトランスグ
ルコシダーゼなどマルトースの生産にとって妨害となる
酵素を殆んど含んでいないため、本発明をより効果的に
実施することができる。本酵素の酵素的性質の概要は以
下の通りである。 (1)作用ニブルランのα−1,6−グルコシド結合を
分解してマルトトリオースを生成する。 また、澱粉、アミロペクチン、グリコーゲンまたはこれ
らの派生物のα−1,6−グルコシド結合を分解する。 (2)作用pi(範囲及び最適作用pH:pH約2.5
〜約10の゛(へめで広いpH範囲で作用し、最適作用
温度はpH約4,5〜約745の広い→厄囲に認メラレ
タ(2%プルラン、0.05 MA’i[+j緩仕1i
1u (pH3〜5.5) 、 ト リ ス緩1昏昧r
i&(t)115.5〜7.5)およびトリシン緩術赦
(pt−i7〜85)のもとて50℃で30分間反応) (3)作用温度範囲及び最51凶作用温度:約75℃ま
で作用し、最適作出温度は約63℃に認められた(2%
プルラン、0.051Vif!I’+、酸緩衝液(pH
5,0)又は0.05Mトリス緩衝液(pf(7,0)
のもとて30分間反応)。 (4)熱安定性:酵素水溶/反を50℃、55℃と60
℃で加熱処理してのち、残存油1生を1jlil定した
。その結果、50℃では1時間の加熱後も失活は殆んど
認められなかった。55℃の加熱では20分の加熱で約
2096失活し、1時間の加熱で約60%失活した。 そして、60℃の加熱では30分間の加熱で約80%失
活した。 +51 pH安定性:pH約4〜約10の範囲で安定で
あつた(0.1M酢酸緩衝液、リン酸緩薊液またはトリ
ス緩衝液のもと、室温(25”C)で3時間放置後、残
存活性を副ボした。 (6) 阻害剤二本酵素はlX10 MのCu S04
. )4gCI2.−Zn301. F’eS(’、)
1により、それぞれ約93%、約89%、約86%、約
29%阻害された。同濃度のAgNO3によっては殆ん
と阻害されなかった。 (7)精製方法:本酵素は培養上澄液から硫安分画(4
0〜70%飽和’) 、DEAE−セファロースカラム
クロマトグラフィー(KCIO〜0.5Mでリニヤ−グ
ラジェント6出)とセファデックスG−200カラムク
ロマトグラフイーにより、クロマト的、電気泳動的に均
一まで精製することができる。 18)分子ル:セファデックス(、−200ゲル濾過法
により測定した分子量は約12万であった。 (9) 力価測定法:0.1Ml1ス緩衝i反に溶解さ
せた1%プルラン?ei (pH7,0) 0.5 m
lに適量の酵素を加え、水で全量1 atとし40’C
で反応させる。この条件で1時間に1 +ng還元力を
グルコースとして表わした百分率)10以下の液化デン
を10〜4o96m度で、pH5〜7、温度50〜60
℃でおこなわれる。 次に、実施例により本発明の詳細な説明する。 実施例 I Biol 、 Chem、、旦、1515 (1976
)、特公昭53−5749により調製した。同酵素は北
海道糖業(株)より入手することができる)それぞれS
00単位と30単位(単位の定義はlij記文献によっ
り)トクレブソラ・ニューモニア)4” E RM P
=738’lの生産rるプルラナーゼを05または】単
位を加え、pH5〜G、5、温度50℃で44時間糖化
した。糖化液の糖組成を高吻液体りロマトグラフィーに
より定数した結果は第1表に示す1曲りであった。 表から明らかなるように、バシルス属β−アミラーゼと
α−1,6−グルコンダーゼに加えて、クレブシラ・ニ
ューモニアのプルラナーゼを1弔位加えて糖化すると、
フ11(添加の場合に比べ、その他の成lA(オリゴ糖
)が低下し、マルトースの収岨か2.9%増1川した。 実施例 2 れた結果は第2表の通りであった。
Claims (1)
- バンルス属の生産するβ−アミラービとび−1,6−グ
ルコシダーゼでデンプンを糖1; してマルトースを製
造するに際し、エーロバクター1□(シまたはグルコシ
ド1、其のプルラナーゼヲ存仕さけることを特徴とする
高純度マルトースの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4337084A JPS60186296A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4337084A JPS60186296A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS60186296A true JPS60186296A (ja) | 1985-09-21 |
JPH0435158B2 JPH0435158B2 (ja) | 1992-06-10 |
Family
ID=12661952
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP4337084A Granted JPS60186296A (ja) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | デンプンの糖化方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS60186296A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6374489A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-04 | Japanese Res & Dev Assoc Bio Reactor Syst Food Ind | マルトオリゴ糖の製造方法 |
CN109371078A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-02-22 | 山东福田药业有限公司 | 一种高纯度麦芽糖制备工艺 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS535749A (en) * | 1976-07-05 | 1978-01-19 | Hitachi Ltd | Arc extinguisher of lightning protector |
-
1984
- 1984-03-07 JP JP4337084A patent/JPS60186296A/ja active Granted
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS535749A (en) * | 1976-07-05 | 1978-01-19 | Hitachi Ltd | Arc extinguisher of lightning protector |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6374489A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-04 | Japanese Res & Dev Assoc Bio Reactor Syst Food Ind | マルトオリゴ糖の製造方法 |
JPH0566114B2 (ja) * | 1986-09-19 | 1993-09-21 | Japan Maize Prod | |
CN109371078A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-02-22 | 山东福田药业有限公司 | 一种高纯度麦芽糖制备工艺 |
CN109371078B (zh) * | 2018-10-18 | 2022-03-11 | 山东福田药业有限公司 | 一种高纯度麦芽糖制备工艺 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0435158B2 (ja) | 1992-06-10 |
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