JPS60178360A - 総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法 - Google Patents
総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法Info
- Publication number
- JPS60178360A JPS60178360A JP3475884A JP3475884A JPS60178360A JP S60178360 A JPS60178360 A JP S60178360A JP 3475884 A JP3475884 A JP 3475884A JP 3475884 A JP3475884 A JP 3475884A JP S60178360 A JPS60178360 A JP S60178360A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bilirubin
- direct
- total
- indirect
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/728—Bilirubin; including biliverdin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血清中の総ビＩＪ ７レビンおよび直接ビ＋
） ７レビンの分別定量法に関する。
） ７レビンの分別定量法に関する。
血清中の総ビリルビン量および直接ビリルビン量を測定
することは、肝藏糸の疾患の診断に欠くことのできない
臨床検査項目の１つである。従来、その４刊定には、エ
ウ′エリンーマロイ（Ｅｖｅ土１ｙｎ−Ｍａ１工Ｏｙ）
法やジエンドラシツク−クレグホーン（Ｊｅｌ’１ｄｒ
ａＳＳ１ｋ Ｃｌｅｇｈｏｒｎ）法が一般に用いられて
いる。しかし、これらの方法では、総ビリルビンの測定
に当っては間接ビリルビンをメタノールやカフェインを
用いて直接ピリルピノに変換させる必要があり、更に直
接ビＩＪ ）レビンの、測定においてはジアゾ試薬を用
いた反応の後、反応停Ｗ液の添加、あるいはアルカリ試
薬の添加を要するなど、操作が煩雑である。しかも、そ
の測定に使用されるジアゾ試薬は極めて不安定なために
、ｆ、ｊ’ｌ定の都度、あらためて調製しなければなら
ないという不便さもある。最近、この不安定なジアゾ試
薬に改良を加えた安定化ジアゾニウム地を使用するビリ
ルビンの測定法が開発されているが、その測定原理は、
従来法と同様に、ジアゾカップリングにより生じる赤色
のアゾビリルビンの量からビリルビンをめるものである
ので、ヘモグＩｆｆビン等の色素類の影響を強くうける
という欠点がある。
することは、肝藏糸の疾患の診断に欠くことのできない
臨床検査項目の１つである。従来、その４刊定には、エ
ウ′エリンーマロイ（Ｅｖｅ土１ｙｎ−Ｍａ１工Ｏｙ）
法やジエンドラシツク−クレグホーン（Ｊｅｌ’１ｄｒ
ａＳＳ１ｋ Ｃｌｅｇｈｏｒｎ）法が一般に用いられて
いる。しかし、これらの方法では、総ビリルビンの測定
に当っては間接ビリルビンをメタノールやカフェインを
用いて直接ピリルピノに変換させる必要があり、更に直
接ビＩＪ ）レビンの、測定においてはジアゾ試薬を用
いた反応の後、反応停Ｗ液の添加、あるいはアルカリ試
薬の添加を要するなど、操作が煩雑である。しかも、そ
の測定に使用されるジアゾ試薬は極めて不安定なために
、ｆ、ｊ’ｌ定の都度、あらためて調製しなければなら
ないという不便さもある。最近、この不安定なジアゾ試
薬に改良を加えた安定化ジアゾニウム地を使用するビリ
ルビンの測定法が開発されているが、その測定原理は、
従来法と同様に、ジアゾカップリングにより生じる赤色
のアゾビリルビンの量からビリルビンをめるものである
ので、ヘモグＩｆｆビン等の色素類の影響を強くうける
という欠点がある。
本発明は上記に鑑みてなされたものであり、測定操作が
簡単で、精度・正確さにまづり、特異性にすぐれた酵素
法によるビＩＪ ／レビンの分別定量法を提供する。
簡単で、精度・正確さにまづり、特異性にすぐれた酵素
法によるビＩＪ ／レビンの分別定量法を提供する。
本発明のピリルピノ分別定量法は、ビリルビンをビリル
ビンオキシダーゼの存在下にビリ／＜ ／Ｌ／ ”；’
ンに変化させ、その変化の際に生じるビリルビンの特性
吸収帯である４ ４０ ｎｍの吸光度減少を測定するこ
とによりビリルビン量をめるものである。
ビンオキシダーゼの存在下にビリ／＜ ／Ｌ／ ”；’
ンに変化させ、その変化の際に生じるビリルビンの特性
吸収帯である４ ４０ ｎｍの吸光度減少を測定するこ
とによりビリルビン量をめるものである。
本発明によれば、間接ビリルビンを直接ビリルビンに変
化させるためのコール酸す１−リウムなどの反応試薬の
添加のイ］無により、総ビＩＪ ）レビン（直接ビリル
ビン＋間接ビリルビン）の定量、および直接ビリルビン
のみの定量を行うことができる。すなわち、検体血清に
コール酸すトリウムなどの反応試薬を添加して間接ビリ
ルビンを直接ビリルビンに変化させたのち、ビリルビン
オキシダーゼにてビリルビンからビリベルジンに変換さ
せれば、その変換反応に伴うビリルビンの特性吸収帯で
の吸光度減少から総ビリルビン価（間接ビリルビン値十
直接ビリルビン値）がめられ、−方上記反応試薬を使用
せずに、ビリルビンオキダーゼにてビリルビンからビリ
ベルジンへの変換反応を行なわしめれば、その吸光度減
少から１６接ビリルビンのみを定量することができる。
化させるためのコール酸す１−リウムなどの反応試薬の
添加のイ］無により、総ビＩＪ ）レビン（直接ビリル
ビン＋間接ビリルビン）の定量、および直接ビリルビン
のみの定量を行うことができる。すなわち、検体血清に
コール酸すトリウムなどの反応試薬を添加して間接ビリ
ルビンを直接ビリルビンに変化させたのち、ビリルビン
オキシダーゼにてビリルビンからビリベルジンに変換さ
せれば、その変換反応に伴うビリルビンの特性吸収帯で
の吸光度減少から総ビリルビン価（間接ビリルビン値十
直接ビリルビン値）がめられ、−方上記反応試薬を使用
せずに、ビリルビンオキダーゼにてビリルビンからビリ
ベルジンへの変換反応を行なわしめれば、その吸光度減
少から１６接ビリルビンのみを定量することができる。
間接ビリルビンを直接ビリルビンに変えるための反応試
薬としては、上記コール酸すトリウムのほか、ラウリル
硫酸す１−リウム、ｆ） −トルエンヌフイリンあるい
はサリチル酸等が好ましく使用される。
薬としては、上記コール酸すトリウムのほか、ラウリル
硫酸す１−リウム、ｆ） −トルエンヌフイリンあるい
はサリチル酸等が好ましく使用される。
また、ビリルビンをビリベルジンに変換するための酵素
であるビリルビンオキシダーゼとしては、ミロセシウム
（Ｍ、ｙｒｏ ｂト＋ｔ３ｃｉ、ｔ＋ｒｎ）属の菌出来
のものを使用すればよい。
であるビリルビンオキシダーゼとしては、ミロセシウム
（Ｍ、ｙｒｏ ｂト＋ｔ３ｃｉ、ｔ＋ｒｎ）属の菌出来
のものを使用すればよい。
本発明によるビリルビンの定量は、ビリルビンからビリ
ベルジンへの反応を終点捷ですすめてビリルビンの金星
を消去する反応終点測定法により行うこともでき、ある
いはビリルビンからビリベルジンへの変換反応過程にお
ける４ ４ Ｑ ｎｍの吸光度の減少率（単位時間当り
の吸光度減少量）が、存在するビリルビン量に比例する
ようにピリルピノオキシダーゼ活性等の反応条件を調整
する反応速度ｌＩ＋ｕ定法によりイｆうこともできる。
ベルジンへの反応を終点捷ですすめてビリルビンの金星
を消去する反応終点測定法により行うこともでき、ある
いはビリルビンからビリベルジンへの変換反応過程にお
ける４ ４ Ｑ ｎｍの吸光度の減少率（単位時間当り
の吸光度減少量）が、存在するビリルビン量に比例する
ようにピリルピノオキシダーゼ活性等の反応条件を調整
する反応速度ｌＩ＋ｕ定法によりイｆうこともできる。
・本発明のビリルビンの分別定量は、ビリルビンオキ
シダーゼを１５０〜３０ Ｑ ｕｒ＋ｉｔ！、：＋、／
ｌ含むｐＨ７〜８の緩衝液（以Ｆ、「酵素液い）」）
、ビリルビンオキシダーゼを１５０〜３００ ｔノ、ｎ
ｉ １；Ｓ、／ｅおよび間接ビリルビンを直接ビリルビ
ンに変換するためのコール酸す） ＩＪウムなどの反応
試薬を０００５〜０．０５Ｍ含むｐＬｌ ７〜８の緩衝
液（以下、「酵素液（ｊカ」）、およびｐＨ７〜８の緩
衝液であるブランク液を一組とする分別定量試薬を用い
て行うことができる。上記の各緩げｊ液は例えばリン酸
緩ＩＩＩｔＪ腋、グツド緩衝液、トリス緩肖液などであ
る。
シダーゼを１５０〜３０ Ｑ ｕｒ＋ｉｔ！、：＋、／
ｌ含むｐＨ７〜８の緩衝液（以Ｆ、「酵素液い）」）
、ビリルビンオキシダーゼを１５０〜３００ ｔノ、ｎ
ｉ １；Ｓ、／ｅおよび間接ビリルビンを直接ビリルビ
ンに変換するためのコール酸す） ＩＪウムなどの反応
試薬を０００５〜０．０５Ｍ含むｐＬｌ ７〜８の緩衝
液（以下、「酵素液（ｊカ」）、およびｐＨ７〜８の緩
衝液であるブランク液を一組とする分別定量試薬を用い
て行うことができる。上記の各緩げｊ液は例えばリン酸
緩ＩＩＩｔＪ腋、グツド緩衝液、トリス緩肖液などであ
る。
次に、本発明方法による総ビリルビンおよび直接ビリル
ビンの分別定量につき実施例を挙げて具体的に説明する
。
ビンの分別定量につき実施例を挙げて具体的に説明する
。
実施例Ｉ（終点測定法、用手法）
〔１〕試薬
酵素液（Ａ）：
ビリルビンオキシダーゼ ・ ２０ ＋１ｎｉｔｓＯ０
ＩＭ燐酸緩衝ｉ （Ｐ１１７．Ｏ） −１００ｍｌ酵素
液で）： ビリルビンオキシダーゼ ・・２００＋汀＋Ｎ；ｒ：コ
ール酸す１〜リウム ・・３ｏｏＩｒＬｇＯ０ＩＭ燐酸
緩衝液（ｐ■ｌ’７．ｏ ） −１００ｍｌブランク液
： ０．１Ｍ燐酸緩衝液（１）ｆ（７，０）〔２〕測測定順 ３本の試験管をそれぞれ総ビリルビン〃１す定量、直接
ビリルビンｆｆ１ｌｌ定用および検体ブランク４１１１
定用とし、各々の試験管に検体面漬を１００ ｍｅずつ
分注する。総ビＩＪ ）レビノ測定用試験管には酵素液
θカを、直接ビリルビン測定用試験管には酵素液（Ａ）
を、ま／ζ検体ブランク４（（１定用試験管にはブラン
ク液を、それぞれＢｍｅずつ加え、３７°Ｃで２０分間
加温したのち、精製水を対照として４ｊＯｎｍの吸光度
を測定する。これとは別に、ビリルビンｉ農度既知の標
準面／？ｔについて上記と同様の測定を行う。Ｊｒ＋＋
清中の総ビリルビン甲および直接ビリルビン（場は各々
次式により埠、出される。
ＩＭ燐酸緩衝ｉ （Ｐ１１７．Ｏ） −１００ｍｌ酵素
液で）： ビリルビンオキシダーゼ ・・２００＋汀＋Ｎ；ｒ：コ
ール酸す１〜リウム ・・３ｏｏＩｒＬｇＯ０ＩＭ燐酸
緩衝液（ｐ■ｌ’７．ｏ ） −１００ｍｌブランク液
： ０．１Ｍ燐酸緩衝液（１）ｆ（７，０）〔２〕測測定順 ３本の試験管をそれぞれ総ビリルビン〃１す定量、直接
ビリルビンｆｆ１ｌｌ定用および検体ブランク４１１１
定用とし、各々の試験管に検体面漬を１００ ｍｅずつ
分注する。総ビＩＪ ）レビノ測定用試験管には酵素液
θカを、直接ビリルビン測定用試験管には酵素液（Ａ）
を、ま／ζ検体ブランク４（（１定用試験管にはブラン
ク液を、それぞれＢｍｅずつ加え、３７°Ｃで２０分間
加温したのち、精製水を対照として４ｊＯｎｍの吸光度
を測定する。これとは別に、ビリルビンｉ農度既知の標
準面／？ｔについて上記と同様の測定を行う。Ｊｒ＋＋
清中の総ビリルビン甲および直接ビリルビン（場は各々
次式により埠、出される。
（０，シ、
膓：総ビリルビンＭａｌ定用試験管の吸光度Ｉ４： ２
：直接ビリルビン測定用試験管の吸光度ＥＨ：検体検
体フランク測定用試験管光度Ｅ５１：標準の総ビリルビ
ン４１１１定用試験管の吸光度Ｆ＋３２＝標準の直接ビ
リルビンｊｌｌ定用試験管の吸光度ＩＤ５Ｂ：標準のブ
ランク測定用試験管の吸光度Ｃ：標準の総ビリルビン（
ｉＵ （ｍｑ、／ｄｅ ）ｃ’：標準の直接ビリルビン
値（ｍｑ／ｄｅ ）上記により測定された総ビリルビン
値および直接ビリルビン値を、従来のスルファニル酸を
用いるジアゾ化法によるそれと比較してイ゛１１関をめ
た。
：直接ビリルビン測定用試験管の吸光度ＥＨ：検体検
体フランク測定用試験管光度Ｅ５１：標準の総ビリルビ
ン４１１１定用試験管の吸光度Ｆ＋３２＝標準の直接ビ
リルビンｊｌｌ定用試験管の吸光度ＩＤ５Ｂ：標準のブ
ランク測定用試験管の吸光度Ｃ：標準の総ビリルビン（
ｉＵ （ｍｑ、／ｄｅ ）ｃ’：標準の直接ビリルビン
値（ｍｑ／ｄｅ ）上記により測定された総ビリルビン
値および直接ビリルビン値を、従来のスルファニル酸を
用いるジアゾ化法によるそれと比較してイ゛１１関をめ
た。
総ビリルビンについて得られた結果を第１図（ｎ＝４０
、γ＝０．９９５５、ｙ＝１．００９５Ｘ−０，０８９
１］ 、直接ビＩＪ ／レビンについての結果を第２図
Ｃｎ＝４０． ｒ＝０．９９６７、Ｙ ＝ ０．９５４
３Ｘ十０．０２９３’ｌにそれぞれ示す。
、γ＝０．９９５５、ｙ＝１．００９５Ｘ−０，０８９
１］ 、直接ビＩＪ ／レビンについての結果を第２図
Ｃｎ＝４０． ｒ＝０．９９６７、Ｙ ＝ ０．９５４
３Ｘ十０．０２９３’ｌにそれぞれ示す。
実施例２（反応速度ｎ（１１定法、Ｆ＋ ！ｌ１ｌ１分
析機ニヨるＨａｔｅ Ａｓ５ａ、ｙ法 ） 〔１′３試薬 酵素液（Ａ）：実施例１と同じ 酵素液（Ｂ）：実施例１と同じ ブランク腋：実施例１と同じ （２）７１１す定手順 日立７０５型自動分析装置を使用。血清中の総ビリルビ
ンおよび直接ビリルビンの測定の各入力パラメータを次
に示す。
析機ニヨるＨａｔｅ Ａｓ５ａ、ｙ法 ） 〔１′３試薬 酵素液（Ａ）：実施例１と同じ 酵素液（Ｂ）：実施例１と同じ ブランク腋：実施例１と同じ （２）７１１す定手順 日立７０５型自動分析装置を使用。血清中の総ビリルビ
ンおよび直接ビリルビンの測定の各入力パラメータを次
に示す。
総ビリルビン琵測定入力パラメータ
’［’ｌ！；ＳＴ ＣＯＤ匡： １３ＩＬＡＳＳＡＹ
ＣＯＤＦシ ： ＲＡＴＩ弓−１９−２３Ｓ八Ｍｌ）Ｔ
Ｊｌ、’シＶ Ｏ］ｉ、、ＵＭ ｌ（う：１０Ｂ□ Ｖ
ＯＬＵＭｒＩ； ： ３５０ １ザ、 ：１００−１ １７３ ・ ＷＡＹし：１ヨトシＮＧ″ｌ’［Ｉｌニア００ＷＡＶＩ
暑Ｌｌ！：Ｎ（ｅｉ’Ｈ２： ４５０１髪１；Ａ（３ｉ
；Ｎ’Ｉ’ １−（ｆＪＡＮ 丁＜ Ａ＋３ｓｏＪＲＢ
八ＮＣＩ’； ： ＯＲ居ＡＯ＋！；ＮＴ ＲＬΔＮＫ
０ＯＮＣ，Ｉ弓Ｎ’ｌ°１イＡ’Ｔ”■ＯＮ ： Ｏ
５’、［’ＡＮＤＡＲＪ）ＣＯＮＣＩ引４’ｌ’１７Ａ
Ｔ］ＯＮ：ＸＸ−ＸＸ−１、Ｅ’ＡＣＴＯＨ： Ｓ’、１．’ＡＮＤＡ、ＨＤ Ａ、ｌ＠５ＯＲＩ’３Δ
ＮＣＩＩ： ＡＬｌ、０ＷＡＮＣ＋’：：３０％ＮＱ、
ＲＭＡＩＪ １７ＡＮＣ−；Ｉ！ｉ Ｌ ：ＮＯｆぜＭ
ＡＬ ＨＡＮＧＩ七Ｆ［： Ａｌ３ＳＯＨＢＡＮＣＩＩ ＬＩＭＩ’ｌ’ （ＲＡＴ
Ｉ＞シ） ： ５００ＣＯＮ Ｔ ［（０１，■Ｄ、
Ｎｏ、 ：＋＆ Ｊ９ビリルビン搦・Ｍｉｌｌ宇入カッ
くラメ−１１１ｉｉｓｉ’ Ｃ０ＤＩぢ：Ｉ）−１汀Ｌ
ＡＳＳＡＹ ＣＯＩ］！； ： ｌ＋Ａ’ｌＩ’ｌ’ｉ
−１９−９−２３ＳＡ’ＬＩＤ ＶＯＬＩＪＭＩ！：
： １０Ｒ，ＶＯＬＬＪＭＥ：８５０ Ｒ２： １００−２ １り、 ・ ＷＡＶＩＩ； ＬＩすＮ（３’Ｊ、’Ｈ１： ７００Ｗ
ＡＶＩｉ： ＬＩＤＮ（３’１．’ｌ１２ ： ４５０
１イＩＣ八ＣＩ！、： Ｎ Ｔ Ｂ １ヨΔＮＫ ＡＬ
（ＳＯＩマＢＡＮＣ１ｊシ：ＯＪ−で１弓Δ（）［（シ
Ｎ’Ｊ、’ ＢＩＪＡＮＫ Ｃ０ＮＣＩＩシＮＴＪ？Ａ
’Ｊ’ＩＯＮ ： ＱＳ’ｌ’ＡＮＪ）ＡＲＩ） Ｃ０
ＮＣｉＧＮ’ｌ’ＲＡ’Ｊ、’、１．ＯＮ ： ＸＸ−
’ＸＸ−１ｆ°ΔＣ’１’Ｏ上ン ： Ｓ’１．’ＡＩすＪ）Ａ、ｌ髪Ｄ ＡｆＪ３ＳＯ）７１
３ＡＮＣＥ ｌ、ＬＯＷＡＮＣＥ ： ３０９６ＮＯ）
法１ＡＬ ■マｈＮＧｓｙ Ｌ ：Ｎ０１ｇ＜ＭＡ’Ｌ
ＲＡＮＧｉ弓 ■］ ：ＡＢＳＯＩ（ＢＡＮＣＩ号
ＬＩＭ工Ｔ （ｌくＡ’、Ｌ’ｌ！：） ： ５００Ｃ
ＯＮ’ｌ’ＲＯＬ より、ＮＯ： 総ビリルビン量のｆｌｉｌｌ定では、ブランク液を第１
試薬（ＩＩ、）とし、酵素液（Ｂ）を第２試薬（Ｒ２）
としてそれぞれ添加し、第２試薬添加後の吸光度変化率
が総ビリルビン量に比例することを利用する。
ＣＯＤＦシ ： ＲＡＴＩ弓−１９−２３Ｓ八Ｍｌ）Ｔ
Ｊｌ、’シＶ Ｏ］ｉ、、ＵＭ ｌ（う：１０Ｂ□ Ｖ
ＯＬＵＭｒＩ； ： ３５０ １ザ、 ：１００−１ １７３ ・ ＷＡＹし：１ヨトシＮＧ″ｌ’［Ｉｌニア００ＷＡＶＩ
暑Ｌｌ！：Ｎ（ｅｉ’Ｈ２： ４５０１髪１；Ａ（３ｉ
；Ｎ’Ｉ’ １−（ｆＪＡＮ 丁＜ Ａ＋３ｓｏＪＲＢ
八ＮＣＩ’； ： ＯＲ居ＡＯ＋！；ＮＴ ＲＬΔＮＫ
０ＯＮＣ，Ｉ弓Ｎ’ｌ°１イＡ’Ｔ”■ＯＮ ： Ｏ
５’、［’ＡＮＤＡＲＪ）ＣＯＮＣＩ引４’ｌ’１７Ａ
Ｔ］ＯＮ：ＸＸ−ＸＸ−１、Ｅ’ＡＣＴＯＨ： Ｓ’、１．’ＡＮＤＡ、ＨＤ Ａ、ｌ＠５ＯＲＩ’３Δ
ＮＣＩＩ： ＡＬｌ、０ＷＡＮＣ＋’：：３０％ＮＱ、
ＲＭＡＩＪ １７ＡＮＣ−；Ｉ！ｉ Ｌ ：ＮＯｆぜＭ
ＡＬ ＨＡＮＧＩ七Ｆ［： Ａｌ３ＳＯＨＢＡＮＣＩＩ ＬＩＭＩ’ｌ’ （ＲＡＴ
Ｉ＞シ） ： ５００ＣＯＮ Ｔ ［（０１，■Ｄ、
Ｎｏ、 ：＋＆ Ｊ９ビリルビン搦・Ｍｉｌｌ宇入カッ
くラメ−１１１ｉｉｓｉ’ Ｃ０ＤＩぢ：Ｉ）−１汀Ｌ
ＡＳＳＡＹ ＣＯＩ］！； ： ｌ＋Ａ’ｌＩ’ｌ’ｉ
−１９−９−２３ＳＡ’ＬＩＤ ＶＯＬＩＪＭＩ！：
： １０Ｒ，ＶＯＬＬＪＭＥ：８５０ Ｒ２： １００−２ １り、 ・ ＷＡＶＩＩ； ＬＩすＮ（３’Ｊ、’Ｈ１： ７００Ｗ
ＡＶＩｉ： ＬＩＤＮ（３’１．’ｌ１２ ： ４５０
１イＩＣ八ＣＩ！、： Ｎ Ｔ Ｂ １ヨΔＮＫ ＡＬ
（ＳＯＩマＢＡＮＣ１ｊシ：ＯＪ−で１弓Δ（）［（シ
Ｎ’Ｊ、’ ＢＩＪＡＮＫ Ｃ０ＮＣＩＩシＮＴＪ？Ａ
’Ｊ’ＩＯＮ ： ＱＳ’ｌ’ＡＮＪ）ＡＲＩ） Ｃ０
ＮＣｉＧＮ’ｌ’ＲＡ’Ｊ、’、１．ＯＮ ： ＸＸ−
’ＸＸ−１ｆ°ΔＣ’１’Ｏ上ン ： Ｓ’１．’ＡＩすＪ）Ａ、ｌ髪Ｄ ＡｆＪ３ＳＯ）７１
３ＡＮＣＥ ｌ、ＬＯＷＡＮＣＥ ： ３０９６ＮＯ）
法１ＡＬ ■マｈＮＧｓｙ Ｌ ：Ｎ０１ｇ＜ＭＡ’Ｌ
ＲＡＮＧｉ弓 ■］ ：ＡＢＳＯＩ（ＢＡＮＣＩ号
ＬＩＭ工Ｔ （ｌくＡ’、Ｌ’ｌ！：） ： ５００Ｃ
ＯＮ’ｌ’ＲＯＬ より、ＮＯ： 総ビリルビン量のｆｌｉｌｌ定では、ブランク液を第１
試薬（ＩＩ、）とし、酵素液（Ｂ）を第２試薬（Ｒ２）
としてそれぞれ添加し、第２試薬添加後の吸光度変化率
が総ビリルビン量に比例することを利用する。
直接ビリルビンの定量は、第２試薬として酵素液（Δ）
を使用するほかは、総ビｌＪ’７レビンの測定と同じ彎
領でイアう。
を使用するほかは、総ビｌＪ’７レビンの測定と同じ彎
領でイアう。
十記泄犀により得られた総ビリルビ２価およζ直接ビリ
ルビン狛を、従来のジアゾニウム塩をイ用する方法（（
ｊｌ、 Ｌ、Ｍｉｌｌ定装置は同じ）とより得（れた１
直と比ｌ咬して旧１関をめた。総ビリルビンｆ１査に゛
ついての結果を第３図に、直接ビｌ） ）レビン１ｉｆ
ｔについての結果を第・１図にそれぞれ示す。ＩＩ１シ
、第３図（総ビリルビンｌｉｉ’＋、’ ）において
ｎ ＝−５９、γ＝０．９８９６、Ｙ＝１．０１３Ｘ、
−０，０９２、第４図（直接ピリルビア値）においてケ
よ、ｎ ＝ ５ Ｑ、γ−０，９９’３５、Ｙ＝０．９
７２２Ｘ＋０．０１９５、である。
ルビン狛を、従来のジアゾニウム塩をイ用する方法（（
ｊｌ、 Ｌ、Ｍｉｌｌ定装置は同じ）とより得（れた１
直と比ｌ咬して旧１関をめた。総ビリルビンｆ１査に゛
ついての結果を第３図に、直接ビｌ） ）レビン１ｉｆ
ｔについての結果を第・１図にそれぞれ示す。ＩＩ１シ
、第３図（総ビリルビンｌｉｉ’＋、’ ）において
ｎ ＝−５９、γ＝０．９８９６、Ｙ＝１．０１３Ｘ、
−０，０９２、第４図（直接ピリルビア値）においてケ
よ、ｎ ＝ ５ Ｑ、γ−０，９９’３５、Ｙ＝０．９
７２２Ｘ＋０．０１９５、である。
実施例３（反応速度測定法、自動分析機によるＤＯｕ、
ｂｌＯＫｊ−↑１ ｅ ｔ、 ’、’、Ｌ ＣＡ Ｓ
Ｓｉ３．、ｙ 法 ）〔１〕試薬 酵素面（Ａ）：実施例Ｉと同じ 酵素液（Ｂ） ：実施例１と同じ ［２］ｉ’ＩＩり定手順 日立７０５型自動分析装置を使用し、ＩＩ）Ｏｕ、ｂｌ
−ｅＫｉ、ｎｅｔｉＣｈＳＳａｙ法により血清中の総ビ
リルビン量および直接ビリルビン量を同時測定した。そ
の測定の入力パラメータは次のとおりである。
ｂｌＯＫｊ−↑１ ｅ ｔ、 ’、’、Ｌ ＣＡ Ｓ
Ｓｉ３．、ｙ 法 ）〔１〕試薬 酵素面（Ａ）：実施例Ｉと同じ 酵素液（Ｂ） ：実施例１と同じ ［２］ｉ’ＩＩり定手順 日立７０５型自動分析装置を使用し、ＩＩ）Ｏｕ、ｂｌ
−ｅＫｉ、ｎｅｔｉＣｈＳＳａｙ法により血清中の総ビ
リルビン量および直接ビリルビン量を同時測定した。そ
の測定の入力パラメータは次のとおりである。
Ｔ１纂：Ｓ’ｒ Ｃ０ＤＩＣ： Ｄ−ＢｉＬＡＳＳＡＹ
Ｃ０ＤＩ鱈： ＲＡ’Ｉ’１０−３−１０−３−７Ｓ
Ａ ＶＯＴ、ＵＭＩ１シ：１０１々、 ＶＯＬ、ＩＪＭ
ｌ！；： ３５０［Ｒ２ Ｒ３ ＷＡＶＥ弓丁ヨ１七ＮＧＴＨ１ニア００ＷＡＶＩもＬ１
バＮ（３’ｌ’ｌｌ ２ ： ４５０ＲＥＡＧＥＮ’Ｌ
’ ｌ−３ＬＡＮＫ ＡＢｓＯ丁’？１３ΔＮ ０丁（
： ： ＯＦマ１ＯＡＯ１ｊ：Ｎ’ｌ’Ｊ３ＬＡＮｌぐ
Ｃ０ＮＣ１！：ＮＴＩマΔ’Ｌ’ＪＯＮ：０６ＴＡＮＩ
）ＡＲＤ Ｃ０ＮＣＥシＮ’ｌ’ＲＡ１’ＪＯＮ ：
ＸＸ−ＸＸ−１Ｄ゛ΔＣＴＯＲ： ５ＴＡＮＤＡＲＤ ＡＢＳＯＲＢＡＮＣＥ ＡＬＩ−，
０ＷＡＮＣＩジ： ：３０ ％ＮＯＪマＭＡＬ ＲＡＮ
ＧＥ Ｌ ： （ＸＪＯＲＭΔＬ ［仏Ｎ（月弓 ト１ ：Ａｌ−ｌ５
ＯＪｉＢＡＮＣＩ； ＬＩＭＩＴ（ＲＡＴＥ）： ５０
０（シ０１刈’ｌ’ｌ：＋ ０１． 土１）、ＮＯ，：
’Ｉ’ｌｌ；Ｓ’ｌ’ ＣＯｌつＩＴｈ ： Ｈ王１゜
ｌ＼ＳＳ／ＭＹ （’、’０．１）ｌ：： ： Ｔ仏ｉ
’ ］―ニー １９−２３ＳＡＭ、１．’ｌｉ、Ｅ Ｖ
ＯＴ、ＵＭＩ）； ： ］ ＯＨ，■ＯＩ、ＵＭＩ：：
シ：３５゜ ■マ、 ： １００−］ ３ ＷＡＶＩＩ； ＬＩＩ；Ｎ（シ゛Ｉ”ｔｌ Ｉ ： ７
００ＷＡＶ’ｌｊ： Ｌｌｌ：Ｎ（３’、ｌ”ＩＩ２：
４５０ｔ？ｌ’ＧＡ（＋Ｉ’：Ｎｉ’ １３１ＪＡＮＫ
Ａｌｌ５ＯＩで１３ＡＮｃ＋１； ： ０Ｒ１１！；
ＡＵｆ（；Ｎ’［’ ＋４ＬＡＮＫ Ｃ：０ＮＣＩぜ：
ＮＴｌｒＡ’ｌ”ＩＯＮ ： ０３ＴＡＮＤＡＪｔｌ）
Ｃ；○Ｎ（月ｉ：Ｎ’ｌ’ＨＡ’ｌ’工ＯＮ ： Ｘ
Ｘ−ＸＸ−１１ｉ’ Ａ Ｃ’ｌ’ ＯＩｔ ： Ｓ’ｌ”ＡＮｌ）ＡＲＤ Ａ、ｌ’３ＳＯ，Ｈ口ＡＮＣ
ＩＣＡ！−出０ＷＡＮ（ｌ（； ： ３０９６ＮＯＩ−
マＭＡ’ｌゴ １仏Ｎ（月！ｉＬ：ＮＯ１ＲＭＡ’、Ｌ
１．１ＡＮｃ月ｉ： Ｉ（−ＡＩ３ＳＯ１？ＢＡＮＣ
１ｉ； １．」Ｍ−ＩＴ（ＩｉＡＴＥ） ： ５００Ｃ
ＯＮＴＲＯＬ ＩＪ）、ＮＯｌ： ※画面７はｌ ５−９ （０−、Ｌ’ｌ ｌ’ Ｉ’、
−、ｌ）Ｌ １．、 ）に設定する。
Ｃ０ＤＩ鱈： ＲＡ’Ｉ’１０−３−１０−３−７Ｓ
Ａ ＶＯＴ、ＵＭＩ１シ：１０１々、 ＶＯＬ、ＩＪＭ
ｌ！；： ３５０［Ｒ２ Ｒ３ ＷＡＶＥ弓丁ヨ１七ＮＧＴＨ１ニア００ＷＡＶＩもＬ１
バＮ（３’ｌ’ｌｌ ２ ： ４５０ＲＥＡＧＥＮ’Ｌ
’ ｌ−３ＬＡＮＫ ＡＢｓＯ丁’？１３ΔＮ ０丁（
： ： ＯＦマ１ＯＡＯ１ｊ：Ｎ’ｌ’Ｊ３ＬＡＮｌぐ
Ｃ０ＮＣ１！：ＮＴＩマΔ’Ｌ’ＪＯＮ：０６ＴＡＮＩ
）ＡＲＤ Ｃ０ＮＣＥシＮ’ｌ’ＲＡ１’ＪＯＮ ：
ＸＸ−ＸＸ−１Ｄ゛ΔＣＴＯＲ： ５ＴＡＮＤＡＲＤ ＡＢＳＯＲＢＡＮＣＥ ＡＬＩ−，
０ＷＡＮＣＩジ： ：３０ ％ＮＯＪマＭＡＬ ＲＡＮ
ＧＥ Ｌ ： （ＸＪＯＲＭΔＬ ［仏Ｎ（月弓 ト１ ：Ａｌ−ｌ５
ＯＪｉＢＡＮＣＩ； ＬＩＭＩＴ（ＲＡＴＥ）： ５０
０（シ０１刈’ｌ’ｌ：＋ ０１． 土１）、ＮＯ，：
’Ｉ’ｌｌ；Ｓ’ｌ’ ＣＯｌつＩＴｈ ： Ｈ王１゜
ｌ＼ＳＳ／ＭＹ （’、’０．１）ｌ：： ： Ｔ仏ｉ
’ ］―ニー １９−２３ＳＡＭ、１．’ｌｉ、Ｅ Ｖ
ＯＴ、ＵＭＩ）； ： ］ ＯＨ，■ＯＩ、ＵＭＩ：：
シ：３５゜ ■マ、 ： １００−］ ３ ＷＡＶＩＩ； ＬＩＩ；Ｎ（シ゛Ｉ”ｔｌ Ｉ ： ７
００ＷＡＶ’ｌｊ： Ｌｌｌ：Ｎ（３’、ｌ”ＩＩ２：
４５０ｔ？ｌ’ＧＡ（＋Ｉ’：Ｎｉ’ １３１ＪＡＮＫ
Ａｌｌ５ＯＩで１３ＡＮｃ＋１； ： ０Ｒ１１！；
ＡＵｆ（；Ｎ’［’ ＋４ＬＡＮＫ Ｃ：０ＮＣＩぜ：
ＮＴｌｒＡ’ｌ”ＩＯＮ ： ０３ＴＡＮＤＡＪｔｌ）
Ｃ；○Ｎ（月ｉ：Ｎ’ｌ’ＨＡ’ｌ’工ＯＮ ： Ｘ
Ｘ−ＸＸ−１１ｉ’ Ａ Ｃ’ｌ’ ＯＩｔ ： Ｓ’ｌ”ＡＮｌ）ＡＲＤ Ａ、ｌ’３ＳＯ，Ｈ口ＡＮＣ
ＩＣＡ！−出０ＷＡＮ（ｌ（； ： ３０９６ＮＯＩ−
マＭＡ’ｌゴ １仏Ｎ（月！ｉＬ：ＮＯ１ＲＭＡ’、Ｌ
１．１ＡＮｃ月ｉ： Ｉ（−ＡＩ３ＳＯ１？ＢＡＮＣ
１ｉ； １．」Ｍ−ＩＴ（ＩｉＡＴＥ） ： ５００Ｃ
ＯＮＴＲＯＬ ＩＪ）、ＮＯｌ： ※画面７はｌ ５−９ （０−、Ｌ’ｌ ｌ’ Ｉ’、
−、ｌ）Ｌ １．、 ）に設定する。
第１試薬（Ｒ，）として酵素液（Ａｌを用い、まず直接
ビリルビン１直を吸光度の減少率からめ、その後第２．
試薬（Ｊ−７２）として酵素液（１３）を使用して吸光
度の減少率から総ビリルビンｆＩＩ′ｆをめる。
ビリルビン１直を吸光度の減少率からめ、その後第２．
試薬（Ｊ−７２）として酵素液（１３）を使用して吸光
度の減少率から総ビリルビンｆＩＩ′ｆをめる。
下記４１す定により得られた総ビリルビンイ的および直
接ビリルビン硝を、従来のシアゾニウ１．塩による測定
法（但し、１１ｉ１１定装置ｆ’４は同じ）で７４）ら
れたイ曲と比１咬し、相関をめた。その結果を第５図（
総ビリルビンｆ直）および第６図（直１水ビリルビンｌ
ｌＩ′Ｉ）に示す。第５図において、ｒｌ ＝ ５ Ｑ
、γ−＝０．９８９６、Ｙ＝１．００１Ｘ−０，０３２
２、第６図においてｔ」−１１’ｌ ＝ ５ Ｑ、ｒ＝
０．９６１１．Ｙ＝０．９３２５Ｘ０．００９１である
。
接ビリルビン硝を、従来のシアゾニウ１．塩による測定
法（但し、１１ｉ１１定装置ｆ’４は同じ）で７４）ら
れたイ曲と比１咬し、相関をめた。その結果を第５図（
総ビリルビンｆ直）および第６図（直１水ビリルビンｌ
ｌＩ′Ｉ）に示す。第５図において、ｒｌ ＝ ５ Ｑ
、γ−＝０．９８９６、Ｙ＝１．００１Ｘ−０，０３２
２、第６図においてｔ」−１１’ｌ ＝ ５ Ｑ、ｒ＝
０．９６１１．Ｙ＝０．９３２５Ｘ０．００９１である
。
上記実施例１〜３の訓定例に示されるように、本発明に
より得られる総ビリルビン値および直接ビリルビン１直
は、従来法によるｉｌｌ定値と良いイ１１関を示す。
より得られる総ビリルビン値および直接ビリルビン１直
は、従来法によるｉｌｌ定値と良いイ１１関を示す。
本発明は測定糸に酵素を使用するので、反応を特異的に
、かつ緩和な条件−トに行わせることができる。寸だ、
操作が部用１で、総ビリルビンおよび直接ビリルビンを
正補′に足端することができる。
、かつ緩和な条件−トに行わせることができる。寸だ、
操作が部用１で、総ビリルビンおよび直接ビリルビンを
正補′に足端することができる。
しかも、近年普及の著しい自動分析装置ｆｆによる測定
にも容易に通用でき、多量の検体の効率的な処坤をｉｉ
Ｊ能にする等、臨床検査面で大きな利点を有する。
にも容易に通用でき、多量の検体の効率的な処坤をｉｉ
Ｊ能にする等、臨床検査面で大きな利点を有する。
第１図〜第６図は本発明法と従来広とによるビリルビン
測定値のＡ］１閃関係を示すクラツである。 代１１１１人 フｌ″埋十 宮 崎゛￥Ｉ〒へ部第１図 第２図 （ｍ９／ｄｌ）
測定値のＡ］１閃関係を示すクラツである。 代１１１１人 フｌ″埋十 宮 崎゛￥Ｉ〒へ部第１図 第２図 （ｍ９／ｄｌ）
Claims (2)
- （１）検体血清中の直接ビリルビンを、ビリルビンオキ
シダーゼの存在下にビリベルジンに変′化させてその変
化に伴うビＩＪ ）レビンの特性吸収帯の吸光度減少に
もとづいて直接ビＩＪ ／レビン爪をめる−か、検体血
清中の間接ビリルビンを、直接ビリルビンに変換したの
ち、ビリルビンオキシダーゼの存在下にビリベルジンに
変換させてその変化に伴うビＩＪ ）レビンの特性吸収
帯の吸光度減少から総ビリルビン甲をめることを特徴と
する総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定、Ｍ′
法。 - （２）総ビリルビンの定量に当り、コール酸すトリウム
、ラウリル硫酸すトリウム、ｐ −１・ｚｌｚエンヌル
ホン酸、第四級アンモニウム塩、ダイフィリンまたはサ
リチル酸の存在下に、間接ビリルビンを直接ビリルビン
に変換することを特徴とする上記第（１）項に記載の分
別定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3475884A JPS60178360A (ja) | 1984-02-24 | 1984-02-24 | 総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3475884A JPS60178360A (ja) | 1984-02-24 | 1984-02-24 | 総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60178360A true JPS60178360A (ja) | 1985-09-12 |
Family
ID=12423212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3475884A Pending JPS60178360A (ja) | 1984-02-24 | 1984-02-24 | 総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60178360A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112710853A (zh) * | 2021-01-08 | 2021-04-27 | 中拓生物有限公司 | 一种抗干扰、稳定的血清直接胆红素（酶法）测定试剂盒及其制备方法和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5917999A (ja) * | 1982-07-23 | 1984-01-30 | Amano Pharmaceut Co Ltd | ビリルビンの定量法及びその定量用試薬組成物 |
-
1984
- 1984-02-24 JP JP3475884A patent/JPS60178360A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5917999A (ja) * | 1982-07-23 | 1984-01-30 | Amano Pharmaceut Co Ltd | ビリルビンの定量法及びその定量用試薬組成物 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112710853A (zh) * | 2021-01-08 | 2021-04-27 | 中拓生物有限公司 | 一种抗干扰、稳定的血清直接胆红素（酶法）测定试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN112710853B (zh) * | 2021-01-08 | 2021-11-02 | 中拓生物有限公司 | 一种抗干扰、稳定的血清直接胆红素（酶法）测定试剂盒及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH08101191A (ja) | 溶血による干渉を回避する検体の分析方法 | |
| Leodolter et al. | Comparison of two enzyme immunoassays for the assessment of Helicobacter pylori status in stool specimens after eradication therapy | |
| Amazon et al. | Separation of bilirubin from hemoglobin by recording derivative spectrophotometry | |
| JP2005287378A (ja) | 低密度リポ蛋白中コレステロールのマルチ定量法 | |
| JPS60178360A (ja) | 総ビリルビンおよび直接ビリルビンの分別定量法 | |
| Seccombe et al. | Automated method for L-carnitine determination. | |
| Vasikaran et al. | Intra-individual variation in fasting urinary calcium-and hydroxyproline-creatinine ratios measured in metabolic bone clinic patients as both outpatients and inpatients | |
| JPS584918B2 (ja) | グルタメ−ト−オキザロアセテ−ト−トランスアミナ−ゼ及びグルタメ−ト−ピルベ−ト−トランスアミナ−ゼの測定法 | |
| Leese et al. | Automated fluorometric analysis of micromolar quantities of ATP, glucose, and lactic acid | |
| Atkins et al. | Plasma concentrations of histamine measured by radioenzymatic assay: effects of histaminase incubations | |
| Tfelt-Hansen et al. | Lactate and Pyruvate Determination in 50 μ1 Whole Blood | |
| Van den Berg et al. | Automating the quantification of heme in feces. | |
| Van de Calseyde et al. | Gas chromatography in the estimation of urinary metanephrines and VMA | |
| Schoelmerich et al. | A bioluminescent assay for 12-α-hydroxy bile acids using immobilized enzymes | |
| Gonzalez et al. | Direct solid-phase time-resolved fluoroimmunoassay of 17 alpha-hydroxyprogesterone in serum and dried blood spots on filter paper | |
| Steensland | An automated method for the determination of total bile acids in serum | |
| Paulev et al. | Interlaboratory comparison of lead and cadmium in blood, urine, and aqueous solutions | |
| Liang et al. | Direct calibration for determining aluminum in bone and soft tissues by graphite furnace atomic absorption spectrometry | |
| Sanghvi et al. | Urinary 17-Hydroxycorticosteroid Determination with p-Hydrazinobenzenesulfonic Acid–Phosphoric Acid | |
| JPS62195297A (ja) | カルシウムイオン定量用試薬 | |
| US4619903A (en) | Process for carrying out serological investigations according to the principle of the complement fixation test, and test packages for use in this process | |
| JP2595267B2 (ja) | 測光的評価を用いる物質の測定法 | |
| Tobiasson et al. | Evaluation of a commercial enzymatic method for the determination of total serum bile acids | |
| Taimela et al. | Clinical and laboratory studies of time-resolved fluorescence immunoassays of thyrotropin and free triiodothyronine | |
| JP3188005B2 (ja) | 酵素阻害物質の測定法 |