JPS60169427A - Method of separation of protein - Google Patents
Method of separation of proteinInfo
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- JPS60169427A JPS60169427A JP59026718A JP2671884A JPS60169427A JP S60169427 A JPS60169427 A JP S60169427A JP 59026718 A JP59026718 A JP 59026718A JP 2671884 A JP2671884 A JP 2671884A JP S60169427 A JPS60169427 A JP S60169427A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、タンパク質の分離方法に関するものであシ、
詳しくは吸着容量が大きく且つ吸着後の分離操作が容易
な吸着剤を用いることを特徴とするタンパク質の分離方
法に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a method for separating proteins, and
Specifically, the present invention relates to a protein separation method characterized by using an adsorbent having a large adsorption capacity and easy separation operation after adsorption.
タンパク質は、数千ないし百方以上の分子量をもつ巨大
分子で、生体内に最も多量に存在し、生物が示す様々な
活性に関与し、その生命維持に非常に重要な役割を果た
しておシ、その種類も多い。近年、これらの有用なタン
パク質を生体から抽出・精製し、利用しようとする動き
が活発になシ、種々の方法が提案されているが、いずれ
の方法も一長一短があり、未だ満足いく結果は得られて
いない。Proteins are large molecules with molecular weights ranging from several thousand to more than 100 degrees, and exist in the largest amount in living organisms. There are many types. In recent years, there has been an active movement to extract and purify these useful proteins from living organisms and utilize them, and various methods have been proposed, but each method has advantages and disadvantages, and satisfactory results have not yet been obtained. It has not been done.
本発明は、上記実情に鑑み、工業的に有利なタンパク質
の分離方法について種々検討を重ねた結果、特定構造の
イオン交換樹脂を用いると、タンパク質の吸着容量が大
きく、シかも吸着後の分離操作が容易であることを見出
し、本発明を完成するに到った。In view of the above-mentioned circumstances, the present invention has been made based on various studies on industrially advantageous protein separation methods.The present invention has been made based on the results of various studies on industrially advantageous protein separation methods. They have found that this is easy and have completed the present invention.
すなわち、本発明の要旨は、タンノくり質混合物溶液中
の各成分タンパク質を吸着剤を用いて分離するに際し、
吸着剤として、多価アルコールのポリアクリル酸エステ
ル及びポリメタクリル酸エステルから選ばれた架橋剤部
分と、一般式（Ｉ）
ｈ
（式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基を示し、馬及びＲ
１は水素原子又は、置換基を有していてもよいアルキル
基を示す）で示されるアミン基含有エステル部分と一般
式（旧
（式中、ＲＸは水素原子又はメチル基を示す）で示され
るグリセリンエステル部分とから実質的になる構造を有
する架橋共重合体である親水性の弱塩基性陰イオン交換
樹脂を用いることを特徴とするタンパク質の分離方法に
存する。That is, the gist of the present invention is that when separating each component protein in a tanno-crystalline mixture solution using an adsorbent,
As an adsorbent, a crosslinking agent moiety selected from polyacrylic esters and polymethacrylic esters of polyhydric alcohols, and a compound of the general formula (I) h (wherein, R1 represents a hydrogen atom or a methyl group, and
1 represents a hydrogen atom or an alkyl group which may have a substituent) and an amine group-containing ester moiety represented by the general formula (formula (formula, RX represents a hydrogen atom or a methyl group)) The present invention relates to a protein separation method characterized by using a hydrophilic weakly basic anion exchange resin which is a crosslinked copolymer having a structure consisting essentially of a glycerin ester moiety.
以下、本発明を更に詳細に説明する。The present invention will be explained in more detail below.
本発明で用いられるイオン交換樹脂は、樹脂に架橋構造
を与える多価アルコールのポリアクリル酸エステル又は
、ポリメタクリル酸エステル、陰イオン交換能を与える
一般式ＣＩ）で示されるアミノ基含有エステル及び親水
性を与える一般式（ＩＩ）で示されるグリセリンエステ
ルという機能を異にする３つの構成単位から実質的に成
立っている。The ion exchange resin used in the present invention is a polyacrylic ester or polymethacrylic ester of a polyhydric alcohol that provides a crosslinked structure to the resin, an amino group-containing ester represented by the general formula CI) that provides an anion exchange ability, and a hydrophilic ester. It is substantially composed of three structural units having different functions: glycerin ester represented by the general formula (II) that imparts properties.
多価アルコールのポリアクリル酸エステル又はポリメタ
クリル酸エステルとしては、エチレングリコールジアク
リレート、ジエチレングリコ−＃ ジアクリレート、フ
ロピレン、クリコールジアクリレート、トリメチロール
プロパン） ＩＪアクリレート、ペンタエリスリトール
テトラアクリレート、／、３−ブチレングリコールジア
クリレート及びこれらに対応するメタクリレートが単独
でまたは混合して用いられる。好ましくはエチレングリ
コールのジアクリレートまたはジメタクリレートが用い
られる。Examples of polyacrylic esters or polymethacrylic esters of polyhydric alcohols include ethylene glycol diacrylate, diethylene glycol diacrylate, fluoropylene, glycol diacrylate, trimethylolpropane) IJ acrylate, pentaerythritol tetraacrylate, /, 3- Butylene glycol diacrylate and their corresponding methacrylates are used alone or in mixtures. Preferably, diacrylate or dimethacrylate of ethylene glycol is used.
アミノ基含有エステルのアミノ基としては、アミン基、
メチルアミン基、ジメチルアミン基、エチルアミノ基、
ジエチルアミノ基、プロピルアミン基、ジプロピルアミ
ノ基、β−ヒドロキシエチルアミノ基、ビス（β−ヒド
ロキシエチル）アミン基、β−（β−エチルアミノエチ
ル）アミノエチルアミノ基等下記一般式（ＩＩＩ）で示
されるものが用いられる。The amino group of the amino group-containing ester includes an amine group,
Methylamine group, dimethylamine group, ethylamino group,
Diethylamino group, propylamine group, dipropylamino group, β-hydroxyethylamino group, bis(β-hydroxyethyl)amine group, β-(β-ethylaminoethyl)aminoethylamino group, etc. with the following general formula (III) The one shown will be used.
（式中、Ｒ２及びＲ３は水素原子又は置換基を有してい
てもよいアルキル基を示す。）
上記置換基としては、ヒドロキシル基、アミン基、置換
アミン基等が挙げられる。(In the formula, R2 and R3 represent a hydrogen atom or an alkyl group which may have a substituent.) Examples of the substituent include a hydroxyl group, an amine group, and a substituted amine group.
本発明で用いる親水性の弱塩基性陰イオン交換樹脂は、
架橋剤である多価アルコールのポリアクリル酸又はポリ
メタクリル酸エステルとアクリル酸又はメタクリル酸の
グリシジルエステルとを、水性媒体中で公知の方法、例
えば特開昭！ｇ−２’１．？！’Ｉ号によυパール重合
させて架橋共重合体とし、次いでこの架橋重合体に前記
一般式（ＩＩＩ）で示されるアミンを反応させてグリシ
ジルエステルの一部を３−アミノーコーヒドロキシグロ
ビルエステルに変化させたのち、残シのグリシジルエス
テルのエポキシ環を水と反応させて開環させることによ
り、製造することができる。The hydrophilic weakly basic anion exchange resin used in the present invention is
A polyacrylic acid or polymethacrylic ester of a polyhydric alcohol as a crosslinking agent and a glycidyl ester of acrylic acid or methacrylic acid are mixed in an aqueous medium by a known method, for example, JP-A-Sho! g-2'1. ? ! A cross-linked copolymer is obtained by υ pearl polymerization using No. It can be produced by converting it into an ester and then reacting the remaining epoxy ring of the glycidyl ester with water to open the ring.
本発明によれば実質的に上述の３つの構成単位からなる
弱塩基性陰イオン交換樹脂を用いることによシタンパク
質を有利に分離することができるが、該イオン交換樹脂
としては架橋度が３０〜６０重量％、イオン交換容量が
０．３〜３．０ｍθｑ／９、グリセリンエステル部分が
（グリセリンエステル＋アミノ基含有エステル）の合計
モル数に対して、３０−？＆％を占めるものが好ましい
。According to the present invention, proteins can be advantageously separated by using a weakly basic anion exchange resin consisting essentially of the above-mentioned three structural units, but the ion exchange resin has a degree of crosslinking of 30 ~60% by weight, ion exchange capacity of 0.3 to 3.0 mθq/9, and glycerin ester moiety of 30-? % is preferable.
本発明においては、いかなるタンパク質も分離対象とな
シ得るが、等電点の差が大きいもの相分離は容易である
。通常、分離対象となるタンパク質の等電点の差が約１
．０以上あれば分離は好適に行なわれる。In the present invention, any protein can be separated, but proteins with a large difference in isoelectric point can be easily phase-separated. Usually, the difference in isoelectric point of the proteins to be separated is about 1
．． If the value is 0 or more, separation is preferably performed.
本発明で対象となる系としては、アルブミン、γ−グロ
ブリンで代表される血清タンパク質の分画、インシュリ
ン等のベゾテドホルモンの分離・精製、トリプシン、パ
パイン、カタラーゼ、アンドラーゼ、キモトリプシン等
の酵素タンパク質の分離・精製等が挙げられるが、特に
血清中に多量に存在するアルブミンとγ−グロブリンと
の分離に好適である。Systems targeted by the present invention include fractionation of serum proteins such as albumin and γ-globulin, separation and purification of bezoted hormones such as insulin, and separation and purification of enzyme proteins such as trypsin, papain, catalase, andrase, and chymotrypsin. Examples include purification, and it is particularly suitable for separating albumin and γ-globulin, which are present in large amounts in serum.
次にタンパク質の分離操作について具体的に説明するが
、いわゆるイオン交換クロマトグラフィーの手法をその
まま適用できる。タンパク質含有溶液と、吸着剤として
の弱塩基性陰イオン交換樹脂との接触は、回分法あるい
はカラムを用いる流通法により行なわれる。通常、吸着
剤を適当なｐＨ，濃度の緩衝溶液で平衡化した後、タン
パク質を含有する同一の緩衝溶液と接触させるととＫよ
シ行なわれる。この際、緩衝溶液の濃度は０．０ ／
−０，／ Ｍが適当でありトリス緩衝液、リン酸緩衝液
、酢酸緩衝液等が用いられる。Next, the protein separation operation will be explained in detail, and the method of so-called ion exchange chromatography can be applied as is. Contact between the protein-containing solution and the weakly basic anion exchange resin as an adsorbent is carried out by a batch method or a flow method using a column. Usually, the adsorbent is equilibrated with a buffer solution of appropriate pH and concentration and then brought into contact with the same buffer solution containing the protein. At this time, the concentration of the buffer solution is 0.0/
-0,/M is suitable, and Tris buffer, phosphate buffer, acetate buffer, etc. are used.
壕だ、−鹸にタンパク質は、その等電点を境としてそれ
よシ高いｐＨ領域では陰イオンとして又それよυ低いｐ
Ｈ領域では陽イオンとして挙動する。従って、等電点よ
り高いｐＩ（領域では本吸着剤に吸着するがそれより低
いｐＨ領域では吸着しない。それｔｋ、緩衝溶液のｐＨ
を分離対象となるタンパク質の等電点を考慮して適当に
調整することにより、本吸着剤に吸着するものとしない
ものに分離することができる。- In fact, proteins act as anions in higher pH ranges beyond their isoelectric point, and also act as anions at lower pH.
In the H region, it behaves as a cation. Therefore, the present adsorbent adsorbs in the pI region higher than the isoelectric point, but does not adsorb in the lower pH region.
By appropriately adjusting the isoelectric point of the protein to be separated, it is possible to separate the protein into those that are adsorbed by this adsorbent and those that are not.
上述の操作で吸着剤に吸着されたタンパク質を溶離する
には、まず吸着剤を上述の吸着操作時に用いたものと同
一の緩衝溶液で洗浄し、その後適当な溶離剤と接触させ
て吸着されたタンパク質を溶離する。溶離剤としては、
通常、吸着操作時に用いた緩衝溶液に塩を加えたものが
用いられるが、段階的あるいは連続的に塩濃度、ｐＨを
変化させる操作を行うと更に有効でおる。To elute the adsorbed proteins in the above procedure, the adsorbent is first washed with the same buffer solution used in the above adsorption procedure, and then brought into contact with an appropriate eluent to elute the adsorbed proteins. Elute the protein. As an eluent,
Usually, a buffer solution with salt added to the buffer solution used in the adsorption operation is used, but it is more effective to perform an operation in which the salt concentration and pH are changed stepwise or continuously.
塩としては、硫酸、塩酸、リン酸等鉱酸のナトリウム塩
、カリウム塩等のアルカリ金属塩、又唸アンモニウム塩
、具体的には硫酸アンモニウム、塩化カリウム、塩化ナ
トリウム等を用いることができる。これらの塩濃度は、
０．０！Ｍ以上／Ｍ以下、好ましくは０．１〜０．３Ｍ
で用いられる。言うまでもなく、溶離操作後の吸着剤は
、吸着操作時に平衡化に用いた初期緩衝溶液と接触させ
ることによシ、繰返し使用が可能である。As the salt, alkali metal salts such as sodium salts and potassium salts of mineral acids such as sulfuric acid, hydrochloric acid, and phosphoric acid, and ammonium salts, specifically ammonium sulfate, potassium chloride, sodium chloride, etc. can be used. These salt concentrations are
0.0! M or more/M or less, preferably 0.1 to 0.3M
used in Needless to say, the adsorbent after the elution operation can be used repeatedly by contacting it with the initial buffer solution used for equilibration during the adsorption operation.
尚、カラムを用い流通法で分離する場合は、イオン交換
樹脂は、その充填層高が０．５〜３ｍ。In addition, when separating by a flow method using a column, the packed bed height of the ion exchange resin is 0.5 to 3 m.
好ましくは１−２ｍとなる様にカラムに充填し、タンパ
ク質含有溶液の処理流速及び溶離液の流速は、ｓｖ （
空筒速度１／１−ＲｅｅＩＤ−Ｈｒ ）として０．０
／ −／ ０好ましくは、ｏ、ｉ−ｓが適当である０
以上、本発明の詳細な説明したが、本発明に用いる弱塩
基性陰イオン交換樹脂は、その内部にグリセリンエステ
ル構造を含んでいるので親水性に富んでおり、又、架橋
剤を含めて全体が脂肪族成分で構成されていて芳香族成
分を含まないので、通常、スチレン／ジビニルベンゼン
系のイオン交換樹脂にみられる、タンパク質に対する疎
水結合に起因する物理的吸着がなく、従って、′該樹脂
をタンパク質混合溶液と接触させることによりタンパク
質を吸着させ、次いでタンパク質が変性しない様な適当
な溶離剤、例えば塩類を加えた緩衝液等で溶離すること
により、各成分タンパク質を容易に分離することができ
る。更に本発明に用いる樹脂は、イオン強度の変化によ
る体積変化がほとんどなく、かつ硬くて、カラム法で流
通した時の圧力損失が少ない等の特徴を有しており、工
業的に有利にタンパク質を分離することができる。The column is preferably packed to a depth of 1-2 m, and the processing flow rate of the protein-containing solution and the flow rate of the eluent are sv (
Cylinder speed 1/1-ReeID-Hr) is 0.0
/ - / 0 Preferably, o and i-s are suitable 0 The present invention has been described in detail above, but the weakly basic anion exchange resin used in the present invention contains a glycerin ester structure inside it. It is highly hydrophilic because it is made of ion-exchange resins, and since it is entirely composed of aliphatic components, including the crosslinking agent, and contains no aromatic components, it is highly hydrophilic. Therefore, the resin is adsorbed by contacting the resin with a protein mixture solution, and then an appropriate eluent that does not denature the protein, such as a buffer containing salts, is used. Each component protein can be easily separated by elution with, etc. Furthermore, the resin used in the present invention has characteristics such as almost no change in volume due to changes in ionic strength, is hard, and has low pressure loss when flowing through a column method, and is industrially advantageous. Can be separated.
以下に実施例によυ本発明を更に具体的に説明するが、
本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限
定されるものではない。The present invention will be explained in more detail with reference to Examples below.
The present invention is not limited to the following examples unless it exceeds the gist thereof.
尚、以下の実施例で用いた弱塩基性陰イオン交換樹脂は
、下記によシ製造した。The weakly basic anion exchange resin used in the following examples was manufactured as follows.
又、実施例及び比較例における各成分の分析は、高速液
体クロマトグラフィーを用いて、下記の条件により行っ
た。Further, each component in the Examples and Comparative Examples was analyzed using high performance liquid chromatography under the following conditions.
カラム：東洋曹達工業株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００
ＢＷ＋三菱化成工業株式会社製ＭＯニゲル０ＱＢ１０溶
離液’、ｐＨ４，コ、０．３４１Ｍ酢酸緩衝溶液十〇、
＃Ｍ塩化ナトリウム
流 量：／、Ｏｍｔ／ｍ
温 度：室 温
検 出： ＵＶ ２ｇＯｎｍ
以上の条件下で保持時間ｊ ／、５分、３９．！；分の
成分を夫々γ−グロブリン、アルブミンと同定した。Column: TSK gel G3000 manufactured by Toyo Soda Kogyo Co., Ltd.
BW + MO Nigel 0QB10 eluent manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation, pH 4, 0.341M acetate buffer solution 10,
#M Sodium chloride flow rate: /, Omt/m Temperature: Room temperature detection: UV 2gOnm Holding time: /, 5 minutes, 39. ! ; components were identified as γ-globulin and albumin, respectively.
尚、アルブミン単独系の場合は１．２ｔＯｎｍのＵＶ吸
光度を測定することによシ、濃度を決定した。In the case of albumin alone, the concentration was determined by measuring UV absorbance at 1.2 tOnm.
樹脂の製法
グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートとをトルエンの共存下水性媒体中で常法によ
υパール重合して、架橋度３０％の白色不透明の共重合
体粒子を製造した。Preparation of resin Glycidyl methacrylate and ethylene glycol dimethacrylate were subjected to pearl polymerization in a sewage medium containing toluene in a conventional manner to produce white opaque copolymer particles with a degree of crosslinking of 30%.
この共重合体を乾燥したものＳＯｇをメタノールコ！ｒ
Ｏｍｌ中に入れ、攪拌しながらこれにジエチルアミン７
．２ｇを加え、引続き４０℃で６時間反応させた。反応
物は濾過した後、水で洗浄した。The dried SOg copolymer is mixed with methanol! r
Add diethylamine 7 to this while stirring.
．． 2 g was added and the reaction was continued at 40° C. for 6 hours. The reaction product was filtered and then washed with water.
次に、これを／θ裂硫酸水溶液、２！；ｏ−申入れ、攪
拌しながら９０℃でＳ時間保持した。冷却後、反応物を
濾過し、水、コ規定水酸化ナトリウム水溶液、水の順で
よく洗浄した。Next, add this to /θ-sulfuric acid aqueous solution, 2! ; o - The temperature was maintained at 90° C. for S hours while stirring. After cooling, the reaction product was filtered and washed well in the following order: water, normal sodium hydroxide aqueous solution, and water.
このようにして得られた弱塩基性陰イオン交換樹脂は、
イオン交換容量λ、ｇ ｍθｑ／ｙ 、、水分ｓｇ％、
平均粒径ｉｏｏμであった。The weakly basic anion exchange resin obtained in this way is
Ion exchange capacity λ, g mθq/y, moisture sg%,
The average particle size was iooμ.
実施例１
０９．２重量％の濃度になるように、ウシ血清アルブミ
ン（シグマ社製試薬）を０．７Ｍトリス・塩酸緩衝溶液
（ｐＨ７，ｋＯ）に溶解させた。Example 1 Bovine serum albumin (a reagent manufactured by Sigma) was dissolved in a 0.7M Tris/HCl buffer solution (pH 7, kO) to a concentration of 09.2% by weight.
前述の方法によシ得られた弱塩基性陰イオン交換樹脂３
．Ｏｒａｌｌを、前記緩衝溶液で充分平衡化したのち遠
心分離し、付着溶液を除去後、前記ウシ血清アルブミン
溶液／ ００ ＋ｍ！中に添加し、１０℃で６時間振と
う攪拌した。アルブミンの吸着量は、／７．’１ｌｌ−
アルブミン／を一湿潤樹脂であった。Weakly basic anion exchange resin 3 obtained by the above method
．． Orall was sufficiently equilibrated with the buffer solution, centrifuged, and the adhering solution removed, followed by the bovine serum albumin solution/00 +m! The mixture was shaken and stirred at 10°C for 6 hours. The adsorption amount of albumin is /7. '1ll-
Albumin/was the wet resin.
次いで該吸着樹脂を全量戸別し、０．／ Ｍ ） ！Ｊ
ス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，Ａ；０ ） 、２ ！；ゴ
でよく洗浄した。次に、本樹脂を遠心分離し、付着溶液
を除いた後、０．３Ｍ塩化ナトリウムを含む０．７Ｍト
リス・塩酸緩衝溶液（ｐＨ７，！ｒＯ） １００ゴ中に
添加し、１０℃で乙時間振とう攪拌した。溶液の、２
ｇ ＯｎｍにおけるＵＶ吸光度の測定よりめたアルブミ
ンの溶離量は／’？、１Ｉｌｌ−アルブミン／を一湿潤
樹脂であシ、溶離率は１００％であった。Next, the entire amount of the adsorbent resin is distributed door to door, and 0. /M)! J
Hydrochloric acid buffer solution (pH 7, A; 0), 2! ; Washed well with scrubber. Next, the resin was centrifuged to remove the adhering solution, and then added to 100 g of 0.7 M Tris/HCl buffer solution (pH 7,!rO) containing 0.3 M sodium chloride, and heated at 10°C for an hour. Shake and stir. of solution, 2
g What is the amount of albumin eluted from measurement of UV absorbance at Onm? , 1 Ill-albumin/1 wet resin, the elution rate was 100%.
比較例／
吸着剤として、３級アミンを官能基として有するスチレ
ン系弱塩基性陰イオン交換樹脂、ダイヤイオンＷＡ３０
＜ダイヤイオンは三菱化成工業部の登録商標）、／、二
級ポリアミンを官能基として有するスチレン系弱塩基性
陰イオン交換樹脂、ダイヤイオンＷＡ、２／、及び３級
アミンを官能基として有するアクリルアミド系弱塩基性
陰イオン交換樹脂、ダイヤイオンＷＡ１０を用いた以外
は、実施例／と同様の操作を行った。アルブミンの吸着
量は、それぞれ？Ｊ ｔ 、 ／、６θ。Comparative example/Diaion WA30, a styrene-based weakly basic anion exchange resin having a tertiary amine as a functional group, was used as an adsorbent.
<Diaion is a registered trademark of Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.) /, styrenic weakly basic anion exchange resin having a secondary polyamine as a functional group, Diaion WA, 2/, and acrylamide having a tertiary amine as a functional group The same operation as in Example 1 was performed except that a weakly basic anion exchange resin, Diaion WA10, was used. What is the adsorption amount of albumin? J t , /, 6θ.
ｔｔ、ｚｂｇ−アルブミン／を一湿潤樹脂であり、本発
明の樹脂に比べ、いずれも半分以下であった。tt, zbg-albumin/ was one wet resin, and both were less than half that of the resin of the present invention.
次いで、各イオン交換樹脂について実施例／と全く同様
の操作を行って、アルブミンの溶離率をめたところ、そ
れぞれ？／％、４９％。Next, for each ion exchange resin, the same operation as in Example was performed to determine the elution rate of albumin. /%, 49%.
ｇ５％であシ、いずれも本発明の樹脂に比べ、劣ってい
た。Both resins were inferior to the resin of the present invention.
実施例コ
前述の方法により得られた弱塩基性陰イオン交換樹脂３
θ、Ｏｔｄを、ｐＨ１，２，コ！ｒ ｍＭ ）リス・塩
酸緩衝溶液で充分平衡化したのち内径１０ｙａｎＸを含
む上記緩衝溶液を３ｇｍｌ／ｈｒの流速で、≠５−１カ
ラム上部よシ供給した。Example: Weakly basic anion exchange resin 3 obtained by the above method
θ, Otd, pH 1, 2, Ko! r mM) After sufficient equilibration with a Lis-HCl buffer solution, the above buffer solution containing an inner diameter of 10yanX was supplied from the top of the ≠5-1 column at a flow rate of 3 gml/hr.
更に、上記緩衝溶液グＯｍｅ、次いでｐＨグ、左。Furthermore, add the above buffer solution, then add pH.
２！ｒｍＭトリス・塩酸緩衝溶液ｑｓ−を連続的に同流
速で流した。第７図に流出液のアルブミン濃度、γ−グ
ロブリン濃度の経時変化を示した。2! rmM Tris/HCl buffer solution qs- was continuously flowed at the same flow rate. Figure 7 shows the changes over time in the albumin concentration and γ-globulin concentration of the effluent.
この図よシ？Ｏ−迄のフラクションを集めれば、γ−グ
ロブリンを、ｑｏ−から１ｇ０ｍ１迄のフラクションを
集めれば、アルブミンを純度高く得られることがわかる
。Is this a picture? It can be seen that by collecting the fractions from O- to γ-globulin, and by collecting the fractions from qo- to 1g0ml, albumin can be obtained with high purity.
第１図は、実施例コで得られた、γ−グロブリン及びア
ルブミンのクロマトグラフであり、横軸は通液量を、縦
軸は成分の濃縮程度（原液中の濃度に対する流出液中の
濃度の比）を表わす。
出 願 人 三菱化成工業株式会社
代 理 人 弁理士長谷用 −
（ほか７名）
（’Ｉ’ｌ’：（Ｊ４娑齢ｌレキ痰Ｔ軍９第１頁の続きFIG. 1 is a chromatograph of γ-globulin and albumin obtained in Example 2. The horizontal axis represents the amount of liquid passed, and the vertical axis represents the degree of concentration of the components (concentration in the effluent relative to the concentration in the stock solution). ratio). Applicant: Mitsubishi Chemical Industries, Ltd. Representative: Patent Attorney Hase - (and 7 others)
Claims (1)
を吸着剤を用いて分離するに際し、吸着剤として、多価
アルコールのポリアクリル酸エステル及びポリメタクリ
ル酸エステルから選ばれた架橋剤部分と、一般式（１） （式中、Ｒ３は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ２及び
Ｒ８は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル
基を示す）で示されるアミン基含有エステル部分と一般
式（ｎ） り坦 （式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基を示す）で示され
るグリセリンエステル部分とから実質的になる構造を有
する架橋共重合体である親水性の弱塩基性陰イオン交換
樹脂を用いることを特徴とするタンパク質の分離方法。(1) When separating each component of tannin in a protein mixture solution using an adsorbent, a crosslinking agent portion selected from polyacrylic esters and polymethacrylic esters of polyhydric alcohols and a general An amine group-containing ester moiety represented by formula (1) (wherein R3 represents a hydrogen atom or a methyl group, and R2 and R8 represent a hydrogen atom or an alkyl group which may have a substituent) and the general formula (n) A hydrophilic weakly basic anion exchange resin that is a crosslinked copolymer having a structure consisting essentially of a glycerin ester moiety represented by Ritan (in the formula, R1 represents a hydrogen atom or a methyl group) A protein separation method characterized by using.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP59026718A JPS60169427A (en) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | Method of separation of protein |
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| JP59026718A JPS60169427A (en) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | Method of separation of protein |
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| JPS60169427A true JPS60169427A (en) | 1985-09-02 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59026718A Pending JPS60169427A (en) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | Method of separation of protein |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60169427A (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5151122A (en) * | 1989-11-14 | 1992-09-29 | Kabushiki Kaisha Sangi | Process for producing an antibacterial ceramic material |
| WO2018181738A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | 日立化成株式会社 | Separation material |
| US10646851B2 (en) | 2015-01-19 | 2020-05-12 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Separation material |
| EP3653293A1 (en) | 2015-01-19 | 2020-05-20 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Separation material |
| US10898877B2 (en) | 2015-01-19 | 2021-01-26 | Showa Denko Materials Co., Ltd. | Separation material |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5824354A (en) * | 1981-08-04 | 1983-02-14 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Hydrophilic and weakly basic anion exchange resin |
-
1984
- 1984-02-15 JP JP59026718A patent/JPS60169427A/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS5824354A (en) * | 1981-08-04 | 1983-02-14 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Hydrophilic and weakly basic anion exchange resin |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US10646851B2 (en) | 2015-01-19 | 2020-05-12 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Separation material |
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| EP3653292A1 (en) | 2015-01-19 | 2020-05-20 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Separation material |
| US10875008B2 (en) | 2015-01-19 | 2020-12-29 | Showa Denko Materials Co., Ltd. | Separation material |
| US10898877B2 (en) | 2015-01-19 | 2021-01-26 | Showa Denko Materials Co., Ltd. | Separation material |
| WO2018181738A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | 日立化成株式会社 | Separation material |
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