JPS60115525A - 特に細胞性増殖障害の治療に適したヘパリン誘導体含有組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヘパリンの誘導体を含りし特ｔこ、細胞性増
殖障害の治療に適した新規な組成物を目的どづる。

ヘパリンがアミノ糖とウロン酸の交Ｈ（Ｆｉ！り返し）
単位で形成されたＡリボ糖および多糖の鎖で構成されて
いることは公知である。

７ミノ糖単位はＤ−グルコサミン型の構造を右し、ウロ
ン酸１１ｉ位はＤ−グルクロン酸またはＬ−イズロン酸
型の構造を有している。

ヘパリンを抗凝血桑（ａｎＬｉｃｏａｇｕｌａｎＬ）と
して使用することも広く知られており、その活性はＵＳ
Ｐ国際単位（ユニット）で表わ１晋慣がある。この活性
は、血液凝固レベルに関与する多数の血中因子に作用づ
ると思われる程度で全体の抗凝血活性を促進することに
対応している。更にヘパリンは血栓防止（ａ＋ｔｔｉｔ
旧゛ｏｍｌ）ｏｔ　１ｑｕｃ　）活性を有することをｖ
１徴としており、この活性ににつＣ活性化Ｘ因子に対づ
る特定の活性（すなわち抗＝Ｘａ活性）が現出りる。こ
の活性はＩｌｇ当りのＹｉｎ　−Ｗ　ｅｓｓｌｃｒ　（
Ｙ　Ｗ　）ユニットで表わされる。一般に、ＹＷＪＪ価
のＵＳＩ）力価に（・１する比はほぼ１であり、これら
分画のｌ１ｌｉは約１３０〜１６０である。

また、ヘパリンの分画または化学的もしくは酊ん的解重
合によって低分子量両分を得ることが川面（゛あること
も公知である。

このように、ヘパリンよりム＾い血栓防止活性を特徴的
に有りるヘパリンの部分類ずなわらＶＪｉ　Ｊｌで木質
的に形成されている両分を単離り−ることがｉｉＪ能Ｃ
あり、この鎖はアンチ１−ロンビン■１なわちＡ丁■に
対する親和性、ヘパリンの抗−×８活性と少なくとも同
程度収率の抗−Ｘａ活性、およびかなり低下し１゛なわ
ら実際上Ｏにまで低Ｔ’　Ｌ　／ｊ　Ｕ　Ｓ　Ｐ活性を
右している、。

前記の方法によって、△Ｔ■に対する親和１１をもたな
いかまた番よ弱い画分、しｌこがって血栓防井活性を実
際上布していない両分も得られ、この両分のＵ対応する
。

まＩこ、天然ヘパリン中に含まれるいくつかの構造要素
と同型の構造を右し、更に場合によっては天然ヘパリン
鎖中に存在り”る置換基を右するオリゴ糖も合成によっ
て得られた。

以下、木用１１ｆｆｉ中では、上述の種々の型のヘパリ
ン断片または鎖を区別Ｕずに［低分子量ヘパリン（低Ｍ
Ｗヘパリンと略称りる）」または「オリゴ糖」と表わ１
゜この表現にはこれらの塩も含めるものとりる。

本発明者らは、異常細胞性増殖、特に異／、ｊｔ細胞の
増殖をｉｎ　ｖｉｖｏで■害し得および／まＩ、：Ｇ、
１退行（ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）させ得る手段を追及し
た結果、ヘパリン誘導体と共に−〕ルチ」イド型の抗炎
症剤＠＠４ｊづる組成物をす１究づるに至った。

本発明の基礎となった発見は、ヘパリン誘導体を少量の
コルブー」イド型抗炎症剤と組み合わｌることによって
、上記の適応症に対しくイーＪ効ひありしかも治療に使
用し１！する組成物を（ＩＩることが川面ぐあるという
ことである。

したかっ−Ｃ１本発明の目的は、所定ｈ１のコルｆ−＝
１イド型抗炎症剤と共にヘパリン誘導体を含イラし、治
療に使用し１ｇる新規な組成物を提供り−ることである
。

また本発明は、種々の細胞性増殖障害の治療に極めてイ
ｊ効であり、神々の投与形態にある新規な桑剤組成物を
提供］ることをも目的とする。

本発明の組成物の特徴は、治療上イｊ効ｍのヘパリン誘
導棒受なくとも１種と共に、抗炎症作用をイｊりるコル
ヂコイド型の薬剤少なくとも１秤を生理学的にＪｆ容し
１！Ｉる少量で３右することＣある。

「生理学的に一１容し得る少量１とは、上記の抗炎症剤
に関して、患者への投与量が約５ｍす／ｋＵｒ７日を越
えないようなｍを意味するものとり−る。

本発明の１実施態様によると、ヘパリン誘導体は、グル
」サミン単位がその２ｍで天然類のグル」サミン１１位
中にみられる一Ｎ　ｌ−Ｉ　Ｓ　Ｏ３基の代わりにＮ　
Ｌｌ　２　Ｊ３よび／まＩこｔよ−Ｎ１−１−アシル基
、より特定的には−Ｎ１−１−アレデル基にＪ、って置
換されているようなヘパリンから成るのが右利である。

このようなｌ−Ｎ　−１１１２硫酸」ヘパリンは、全体
としくの抗ｊ疑面活性およびＹ　ｉｌｌ　−ＷＱｓｓｌ
ｅｌ’ｉ占竹をも／Ｃない。すなわら、凝血レベルに影
響を与えない組成物が１［１られるという利点がある。

本発明の他の実施態様によると、ヘパリン誘導体は、そ
の大部分の鎖また【よ断へが１０．０００タル１〜ン以
上のＭＷを右りるにうな低ＭＷヘパリンから形成される
。これは、（鎖単位１個の平均分子量が３１６ダル１〜
ンとし−Ｃ）約３０個の鎖単位に相当する。

本発明によると、この鎖または断片のＭＷはより特定的
には約８．０００以−トであり、これは最大約２６個の
鎖単位に相当づる。

好ましい組成物は本質的に４・〜２　Ｇ　ｉｌｌ、ｌの
鎖中イｉ′ｌまたは約６〜２６個の鎖＋ｐ位−Ｃ形成さ
れるヘパリン鎖を含イｉづ　る。

他の組成物ぐは鎖は少なくとも８個の′！１１０１（◇
Ｃ・形成される。

本発明の別の組成物の場合この鎖単位の数は６個また（
３Ｌ５個、史には’ｌ　＋１ｌｌｌであるのが有利ｒあ
る。

イｊ利なことに、ヘパリン誘導体を少量のコル−１］イ
ト型の抗炎症作用を右する物質と組み含わけると、特に
鎖１ｉ位５）個または４個を含有り−るヘパリンの場合
、Ｑ？ｉに細胞の４１４常増殖および／まｌこは場合に
よっては脈管形成（ａｌ１ｇｉＯｇδ１１（！ＳＯ）に
対し−ＵＮＩ害効果が得られる。

好ましい組成物はＡ丁■に対する親和力をもたない鎖で
本質的に形成された低ＭＷヘパリンを含イｊηる。

この鎖中にはへ丁■に結合し１１１る配列がないため。

このヘパリンは抗−Ｘａ活性を示さないかまたは実際上
水さない。その全体としての抗凝面活性も実際上０であ
る。しｌ〔がって、このヘパリンは血液凝固現象に１３
ｔｌ〜しない。このことは、患者が凝固１［（下（ｌ＋
ｙｐｏｃｏａｇｕｌａＬｉｏｎ）の問題を起している際
の治療にＪ３いて１シｊに重要４１意味を有する。

本発明の他の組成物Ｃは、Ａ　Ｔ　Ｉｌｌに苅り−る親
和性をも１．：ない鎖の割合が低ＭＷヘパリンの少なく
とも９５％Ｃある。

この場合低ＭＷヘパリンの抗−ＸａＪＪ（ｉｌｌｉはヘ
パリンの力価Ｊ、リム低く、そのＵＳＰｈｌｌｌｌｌｂ
）１常に低い。

特に、１００本満、更にｔま約５０未；邑の抗−×８力
愉おＪ、び実際上〇というＪ１常に１［（いりＳＰ力山
が観察される。

Δ丁■にλ４′ｉｌｌる親和性が低いかまたはもたない
ヘパリン鎖の割合は、本発明の別の組成物の低ＭＷへバ
リン中ではむしろ低く、＋１１　Ｍ　Ｗヘパリンのｆｌ
　５’３１ｏ　Ｊ、たは約７５％にもなる。

この場合の組成物のヘパリンｔよ約２００−・２５０ｕ
／ｍｇの程度に高まった抗−×ａ活性をイ」シ、ＹＷ／
ＵＳ１〕比は少なくとし約３〜１０′ｃある。

別の組成物中に含有される低ＭＷヘパリン中のΔＴ　ｌ
ｉｔに対Ｊる親和物をしたない鎖の割合と逆ｔこ親和性
を右りる鎖の割合はははＮｑ　Ｌ／い。

この後者の割合ｔよ本発明の別の組成物中で（ｊ、１脣
勢になる。

この割合は低ＭＷヘパリンの７１）％のＡ−ターになり
１７１史には１００％にも達し得る。

対応りる低ＭＷヘパリンは少なくとも３００ｕ　／　ｌ
ｌＩＣ１。

特に　３００へ一５００ｕ／ｎ＋ｇであり、　２．０＋
１０−・３．０ＯＯＵ／ｍりにｂ達し１ジノる高い抗−
Ｘａ活性をイｉＬ、まｌこＵ　Ｓ　ｌ）力価は」常に低
く実際上０である。

本発明の組成物の１つのＩ！Ｙでは、ヘパリン鋼は、そ
の構造および場合によっては一部または全部の買挽基が
その性′質およびその位置に関して天然ヘパリン鎖のも
のに対応するような鎖単位の連鎖から成ることを特徴と
づる。

このような鎖は、特に本願出願人名義のフランス国特許
出願第８１０８４１２号（１９８１年４月２８日）、第
８２１８０００３号（１９８２年１０月２７日）　６３
　ヨヒ第８４　ｏｙ５ｇ９号（１９８４年５月１６日）
に記載の合成法に従って右利に得られる。

他の１群では低ＭＷヘパリンの４ｉ４造単位少なくとも
１個が、より特定的にｔよ鎖の開始端または終止端で、
天然の鎖の対応Ｊる鎖単位とは異なるように化学的に修
飾されている。このような修飾はより特定的にはこれら
の！Ｊ！ｊｎ工程中に生じたものである。

ずなわら、ヘパリンを！ｌｌｉｇＡ酸によって解重合す
ると、それぞれＤ−グルコ４ノミンＮ−＠酸とし一イズ
ロン酸構造をイｊする２つの鎖単位の間で結合が切れ、
グル」ナミンＮ−＠酸単位が修正されて２，５−アンヒ
ドロマンノ構造単位が得られる。

このような構造に相当する鎖末端を有するＡリボ糖は、
特に本出願人の主特許第７８３１３５７号（１９７８年
１１月６日）に対する第２追加証明出願第８００６２８
２号（１９８０年３月２０日）に記載されている。この
追加証明出願には、後期段階において２．５−アンヒド
ロマンノース横道を２，５−アンヒドロンンニ１〜−ル
または２゜５−７ンヒドロマンノンＭ構造に変換するこ
とも記載されている。これらの４Ｆ４造は特に安定であ
るため特に唄要な生成物に対応り°る。これらのＹＷ力
価はほぼ　２００ｕ／　ｍｕ　テありＹＷ／ＵＳＰ比は
約１０であることに注意されたい。

この型のＡリボ糖は、本願出願人名義のフランス国特泊
出願第８１０７２８３号（１９８１年４月１０日）に記
載のヘパリンの自動制御解重合方法によっても得られる
。

より低分子量で鎖単位を最大８個含有り−るオリゴ糖が
、同様に本願出願人名義のヨー［１ツバ特Ｗ［出願第８
０　４０１４２５．６号（１９８０年１０月６日）に記
載されている。

その鎖が末端に２．５−アンヒドロマンノース構造の残
基を有するようなヘパリンの抗−Ｘ　活性よりも高い活
性を示す低分子量ヘパリンに関り゛る先行特許出願のう
ち、ＫＡＢＩ　ＡＢ名義のヨーロッパ特二′１出願第８
０　８５０００２．９号（１９８１年１月７日）および
第８１８５０１１５４．６号（１９８１年９月ｉｏ日）
な６［にＲＩＫＥ　Ｒ’Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉ
　ｎｃ、名義のヨーロッパ特許出願第８１　３０１８２
５．６号（１９８１年４月２４日）を参照されたい。

本発明の組成物中に使用する別の低ＭＷヘパリンでは、
鏡開始端中位はたとえばヘパリナーピを用いる酊累的切
ＩＪｉによって不飽和にされていてもよい。

この不飽和単位はしたがって鎖の非還元末端にあり、不
飽和イズロン酸単位に相当する。

その代り、末端すなわち還元末端単位構造は修飾されて
おらず、天然ヘパリン鎖中に一般にみられる構造に相当
する。還元末端の三糖連鎖は［Ｌ−イズロン酸１−０−
硫Ｍ］−［Ｄ−グルコ暑ナミンＮ　−ｔｉｉ！ｌ酸６−
Ｏ−硫酸］型の構造をイ］する。

この型のオリゴ糖は、前記ヨーロッパ特許出願第８０　
４０１４２６．６号に記載のある種のＡリボ糖および特
に本願出願人名義のフランス特許出願第８１０８６０４
号（１９８１年４月２９日）に定義されている六糖を含
む。

これらのオリゴ糖の抗−Ｘ、活性は高く間当り少なくと
も２，０００へ、３，０００　ＹＷユニツｌ−の１直に
達する。

ごれらのＵＳＰ力価は低く実際上Ｏである。

同様に鏡開始端に不飽和鎖ψ位庖イラする約２．ＱＯＯ
〜１０，０００ダルｌ−ンのオリゴ糖はＰ　ｈａｒｉｉ
ｎｓｄｕｓｔｒｉｅ名義のヨーロッパ特許出願第８１　
４００７２８．２号（１９８１年５月８日）に記載され
ている。

史に、それぞれｌ−１６ｐａｒ　Ｃｂｉｍｉｅｓ、ａお
よび１−１６１＋ａｒ　ｌ　ｎｄｕｓｔｒｉｃｓ　しＩ
ｃ、名義のフランス特許出願第７１１２３１！１号（１
９７８年　８月　９日）およびｆ）８１０１５０１１号
（１９８１年２月２７日）に低分子量ヘパリンが記載さ
れ−（いる。

本発明の別の実施変形例では、オリゴ糖は天然の低分子
Ｒヘパリン鎖に相当する鎖で形成されていてしよい。

本願出願人名義のフランス特−′ｌ出願第７８３１３５
７号（１９７８年１１月０１］）および十記特治に対り
る第１追加シ１明出願第７９１１１８７３号（［１７９
年７月２０目）には、この型のヘパリンが記載されてい
る。これらσ）へノτリンの分子量は１０，０００以下
であり、ＹＷ力価のｔＪｓＰ力１＋！ｌｉに対りる比が
少なくとも３であり、ＹＷ力価はヘパリンの力価に近い
かまたはやや低くてもＪ、い。

本発明の種々の実施態様の組成物において、＝＋ルヂコ
イド型の抗炎症剤は、］ルルチジン。ドロコルチゾン、
ヒトＬ１」ルブゾンリなわら」ルブゾールσ）１１α異
竹休、プレドニソン、プレｌ’二・ノロン、メ１ルプレ
ドニソロン、トリフｌムシノＩＪン、ノ＜ラメタゾン、
ベタメタシン、ｊ′キ４ノメタゾンよｌ、：【まアノ−
ログ（類似体）から選択され−Ｃいるの／Ｊ’ｉイｊ４
１　’Ｃ”ある。

本発明の好ましい組成物は、十晶己σ）如き」ルチ」イ
ド、より特定的にはコルプシンを４Ｑ　ＩＪＬｆｌ　／
ｊ＼５１１１す／にり／１］を越えないような串で含有
し、こｔしと」入に、グルコ１ノミン単位の２位が−Ｎ
ト１２また（ま−Ｎ　＋−１−アシル基、より特定的に
（よ−Ｎ　Ｎ　−’／’セチル填で−５められでいるｒ
　１１１２１１’Ｊヘパリンを含有りる。

別の好ましい組成物は、上記の如き」ルチ」イｌ：いル
ブゾンがイ：Ｊ利である）と、低ＭＷヘノ（１ノン、よ
り特定的に（よ鎖１１位４〜２６１１１！ｌを含み末端
ｉ　１Ａ　２　、５−アンヒドロマンノ構造の残基で停
止しｌＸる１１てＪＩＪ成されたヘパリン、また（ま鎖
単位６〜２６個を含み／）１つアルコール分画のような
分画によって＋ｔられる如さ天然ヘパリン鎖に相当Ｊる
鎖で形成されたヘパリンとを共に含有り゛る。

他の有利な組成物では、コルチコイド、有利にはコルノ
ーシンが、鎖単位８個以上を含有りる鎖で形成された低
ＭＷヘパリンと組み合わされている。

これらの鎖で、末端中位はより特定的には２．５−７’
ンヒドロマンノ４１４造を有し、非還元末端が天然鎖の
６のに対して修飾されていない。

特定的に番よその脈管形成に対づるｒ’ｌＮＪ特Ｈのた
めに特に好ましい別の組成物【よ、鎖単位を５ｆｌｌ！
Ｉより多く含有りることのない低ＭＷヘパリンと組み合
わＵ（」ルチ」イドを含む。この型のヘパリンｔま合成
によって得られる五糖、特に上述のフランスｒ１訂出願
第８２　１８０００３号に記載の如さｌ）　Ｅ　Ｆ　Ｇ
　ｌ−ｉ型の構造を右りる１１糖から成るのが有利であ
る。

特に好ましいＤ　Ｅ　Ｆ　Ｇ　ｌ−１型の五糖は上記１
４訂出願の化合物ＮＯ，５０に相当覆る。この化合物は
、単位Ｆが３位に硫Ｂ　Ｍをイｊ　Ｌ／　−Ｕ　ａ３す
、３，００００／　ｌｎすｉｊ　ｉりる抗−Ｘ　活性ｄ
３　ｊ：　（ｊ実際」二０（Ｊ）　Ｕ　Ｓ　Ｐ力ｆｕｌ
１１を（−、１，（いる。

この型の別の’ｈ糖では中１イＬ目よ３　’６１　ＬＣ
Ｖｔｌ１ｌ　Ｍ　！；象を含Ｉυでいないが−０１−１
１をイラしている。こσ）ような化合物は、上記フラン
ス１：ｓ　”ｉ＋’（出馳第８４０７５３９号に記載さ
れており、抗凝血活性をもっていない。し１こ））一つ
て、この化合物は、本発明で意図Ｊる治療用途に用いる
とき、血′Ｉ＆凝固に関わる現象レベルに影７号を及は
すことがないという利点をｈりる。

このコルチ」イドとヘパリン誘導体を組合わせ′（含有
り″る組成物の薬理研究によると、これらは異常細胞性
増殖の際に効力を発揮した。異常ｉＩ！！殖のｖＡ害Ｊ
３よび／または退唱ｊ効宋ｔ、１一般的なｈ法で確認ｅ
さる。

特に、本発明の組成物はｌｌ！Ｐ瘍、１シ１に黒色肚ま
たｔよリンパ肉腫のタイプの腫瘍の増殖を阻害Ｊること
ｈ＼でさ、かつ有利なことにこれらの腫瘍を退行さける
ことができる。

このような阻害効果は、血管新生（ｖａｓｃｕｌａｒｉ
−３ａＬｉＯ１１）および旧としてはそこでの腫瘍の増
殖４妨げることにより脈管形成のレベルでも同様に発揮
される。

ジ１常に重要な局面によれば、フルチコイド型抗炎症剤
を生体に許容し得る少量で用いることによつ−（前記の
如き効果がｉ＋＋　ｖｉｖｏで発揮される。このため、
本発明の組成物は、コルチーコイドの集中的使用に関連
して起こる重大な副ｆ１用を引き起こり−ことなく治療
に使用し得る。

したがって本発明においては、上記の如きヘパリン誘導
体の少なくとも１種の右効介を、生理学的にＬ１２容し
得る少■のコルヂ」イドと組み合わせ、更に薬剤上泊客
し得るベヒクルと共に含有する新規な薬剤組成物も目的
とりる。

特に本発明は、イコ効品の活性成分を薬剤賦形剤（補佐
薬）と組み合わＵて’Ｕ　４ｊシ光熱竹物質を含（ｊし
ない薬剤組成物に係る。

また本発明は、経１」投Ｉゴに適し／ｊ桑剤ベヒクルを
含む組成物にも係る。本発明で経Ｌ１投りに適し／ｊ投
与形態は、右利には、耐胃性力ルル（すδＩｕｌｃｓｕ
ａｓｔｒｏｒ６ｓｔｓｔａｎｔｅｓ）　、圧縮錠剤、火
剤ｅあり得、またはリポソームもしくは飲用溶液の形態
ＣあつＣもよい。これらの製剤は、１回服用Ｗにつき組
成物５０１１１（Ｊ”−５１７をａ有り”るのがイｊ利
であり、カプレル２錠剤および火剤の場合２００〜２５
０１１１ｇ、飲用液剤の場合０．５〜５ｇが好ましい。

したがって、本質的に投与形態は投Ｌｉ吊に依存づる。

少量投与にはカプセル剤９錠剤および火剤が利用され、
より多聞の投りには飲用液剤の使用が実際的であろう。

他の薬剤組成物は直腸投与に適した賦形祠と共に本発明
の組成物を３有りる。

本発明の別の投与形態は、エーロゾルまたは軟膏である
。

本発明はまた、静脈内でも筋肉内または皮下でも投与で
き、無菌まＩＣは殺菌しうる注射可能な薬剤組成物に係
る。

このような溶液は、これを皮十注射する場合には、水元
１月の組成物を５０−２５０１１１（１／　ｄ含有する
のが右利であり、１００〜１５０醜ｇ／ｌＩ！含有する
と女Ｉましい。また、静脈内注射またＧ、を潅流によっ
て投すするには、ｌことえば組成物を２５〜２！１０１
（１／　ａｄ！、特に５０へ−１５０１１（１／ｄ含有
し得る。

このような医薬製剤は、りぐ使用し１里する使い捨て注
射器の形態ｌ−あると右利ぐある。

にり特定的には、本発明の組成物は、組織の退化また番
よ退化型症状たとえば脱毛症に対処するのに適している
。。

本発明を例示Ｍるｌこめにヒ１〜に対しＣ（Ｘｔ！川川
用用川ｍの例を挙げると、例えは、皮１・投１ノの場合
、異常細胞性増殖の進行程度に応じてｊ）０へ一１５０
ｍｇを１１」に１〜３回投すし、静脈内投りの場合、２
４１１．’＋間につき１５０ａ＋ｇを一定峙聞ごとに不
連続に、ｊ：Ｉこは潅流によって連続的に投りりる。ま
たは１５０ＲＩ（１（１週３回）を筋肉内もしくは皮下
投与りる。勿論このような投与ｍは、各患者に対し、前
以って実施しｌ、：５）析Ｊｊ　、１び結果、症状の性
質ならびに一般的叶庫状態おＪ：び凝血状態に応じ−Ｃ
ｖＡ製することができる。

既に上述したように、全範囲のヘパリン誘導体。

特に低ＭＷヘパリンは入手可能であり、また天然ヘパリ
ンもしくは合成オリゴ糖から得られる両分もしくはＶＪ
ｉハもΦ東である。

ヘパリン鎖のｔｑ賀に鑑みれば抗凝面活性がほば０であ
るということはｆｆ１ｉ２であろう。しｔｓがって、こ
れら各種画分の内から、凝血状態、時には治療１ぺき患
者の凝固低下状態と最も良く相入れ（両立し）得るもの
を選択することが可能である。凝固低下の重大な危険に
１６面し得る患者を治療Ｊる場合、前記の如ぎヘパリン
画分からＬＪＳＰ活性が最大限に低下し、たとえばＯに
なっている両分を選択すると有用であろう。

更に、本発明は、上記に定義した組成物を活性成分とし
て含有する生物試薬に係り、この生物試薬は、他の物質
の考えられ得る抗腫管形成特性のω１究、特に後述の実
施例に記載の技術を使用したテストにおいて、参照また
は標準として使用することができる。

尚、本発明の補足的特徴は、本発明の薬剤組成物の活性
成分を構成するヘパリンＮｉ９体を用いて行なった生物
学的試験に関する以下の記載から明らかどなるであろう
。

以下の実施例１および２ではコルチゾンとヘパリン誘導
体旦、亘、旦まｊこは豆とを組み合せて含有づ−る６種
の組成物の抗腫瘍活性の研究結果について記載する。こ
れらの誘導体の特１ｇは次の表１に挙げた。

Ｋ庭拠１７１スに　した　１６１１ＪＬ−１１！ガ１■
新鮮な黒色腫細胞の標準濃度懸濁液を使用Ｊ−る。

培養後該細胞懸濁液を洗浄し、次いで遠心分離にか（）
る。沈降した細胞を培地４ｄ当り１ｍＱの割合でＭ１９
９培地中に入れる。

この懸濁液０．２Ｉｄをマウスの背中に皮］；接秤づ′
る。

このテス［−を複数のマウス０５７Ｆ３Ｌ／Ｇに対して
行う。該肺瘍はこの種にｄ３いては同道仏子型であり、
他の種では増殖しない。

前記マウスを１０匹ずつのグループに分１）る。１つの
グループを対照グループ（フン１〜ロール）として使用
し、残りの１つ又は複数のグループを供試物質で処理Ｊ
る。

ＪＯ日ｌ１全てのマウスに黒色胛ＩＩＩ胞の標準Ｓ度懸
濁液０２成を注射する。

６〜７日後、ｌ！ｉ瘍は触診で感知できる稈人きくなる
。

第１グルーゾに供試物質を１口［＝＋　２回腹腔内汗用
りる。１回分のＺＩＩＩＪ４には１５０〜４００ｐ９の
ヘパリン誘導体と５０ｎの二１ルブゾンとを（１，５□
〜０．７７の等価基化物溶液（ｓｏｌｕｔ６　ｃｂｌｏ
ｒｕｒ６１ｓｏｔｏｎｉｑｕｅ）に溶解したしのが含ま
れる。

第２グループには前記と同Ｗの等価基化物溶液を１ジ１
１りる。

Ｊの処理を５ｄ間続（）た後７ウスを殺Ｊ０腫瘍を採取
し重量を測定しく前記２つのグルー４の肝痴重早を比較
覆る。

結末を、等価基化物溶液しか投りシなかつノζ−ｌント
　ｕ−ルンウスに対り−る処理７ウスでの（ＩＩ・Ｆ瘍
）増ｔ―“１阻害率（％）とし０表わづ−６これらの結
果から、本発明の組成物のイ」リノ成分か腫瘍の阻害と
退行とに好ましいすＪ宋をしＩＣらづことがＳ’ｌシ１
される。

白血病ドフーから１１１にリンパ肉腫細胞を使用りる。

マウスＣ５７１３Ｌ／ＧＧ使用し、Ｊ　ＯＩ」ＩＪに２
０ｘ　＋０６のリンパ肉１１１・細胞を腹腔両投りりる
。

この処理をＪ　Ｏ１１口に開始し、１５０・〜５００μ
３の誘導体旦ど６０μｓのヒドロ７Ｊ　）しＦシンとを
０．５−０．７７の溶量に溶解しＩＣものを各７ウスに
毎日２回腹腔内注！Ｊ’Ｊ　ｌ、ながら１ケ月続【プる
。

１ヶ月後これらマウスを殺し、解８りして胸線、　ＩＩ
Ｉ臓、牌臓及びリンパ節にＪハフる肉腫の個数を数える
。

鯖−宋　６匹の動物からなるグループを２組使用し、−
１ノを一１ン１〜ロールグループどしＩｃ０処理グルー
プに＋；ｌ　Ｏ，５ｄ（Ｊ）等価基１化物溶液に供試物
質５００μｓを溶解したものを１Ｌ日２回ｉＪ川し、コ
ン１〜ｌ−１−）レグループには同１０の′Ｓ張１ｎ化
物溶液のみを没Ｌｊする。処理グループのうち２匹か実
験中に出血で元口しｌこ。解剖の結末これら２１Ｌのう
１５１匹（よ山師を全くイラしてい４ｆかっＩＣ６ 結末を次表にまとめＩ、：。これは１−ｊさ残ったマウ
スから１１１だしのである。星印【よ肉腫の数を表ねり
。この表には肉Ｉの数を数えた器官の名称も表示した。

結　宋　」ント１」−ル　始即）防狗 胸　線 肝　臓 牌　臓 リンパ節 この表から明らかなように、コントロール動物に比べて
処理動物グループでは肉腫の数と害を受けた動物の数と
が全体的に減少している。

次の実施例３では、新面管形成（ｎ６ｏａｎｇ　ｔｏｇ
６ｎｅｓｅ　）の阻害に対する本発明組成物の作用を立
証する。

史上■ユ　（幻胛Ｕの゛　’ＢＪＭＵ　−に関Ｊるテス
ト ベトリ皿で６日間灰培養しｌζ若鶏胎児の漿尿股に対し
て、抗血管形成ｆｌ用に関するｉｎ　ＶｉｔｒＯテスト
を行った。　ＩＯｄのメチルセルロースに５０〜のヒド
ロコルチゾンを混合し、次いで、６Ｎ〜１００埒の用■
で供試物質を加えて錠剤を形成する。これら錠剤を乾燥
させた後、前記柴尿股上に配賀して１１着さμる。

各用量分の活性物質毎に４つの卵を使用する。

４８時間インキュベートシた後、無面管領域の存否を調
べる。

本発明の組成物３種類に関して得られた結果を次表２に
示す。尚、これら組成物では低分子間ヘパリンα、β、
γが夫々下記の特性をもつ。づなわち、αは抗−Ｘ、活
性が３，０ＯＯＬＩ／［１のＤＥＦＧＨ構造の五糖、β
は前記の如きＤＥＦＧＨ構造をもつが、鎖単位Ｆが３位
に一〇Ｈ基を含むも糖、γｔ、１前記鎖単位のうちＦが
３位に一〇５０３−を含むＤＥＦＧ構造の四糖である。

表−２ 組成物中の低ＭＷヘパリン　抗血管形成作用α　活　性 β　活　性 γ　活　性 ７７１Ｍ１人　ドロピノ 代理人　弁理１川　口　義　雄

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　特に異常細胞゛性増殖に対する阻害および／ま
   たは３ｋＮｊ特性を右Ｊる組成物であって、治療上有効
   な吊のヘパリン誘導棒受なくとも１種と共に、抗炎症信
   用をイｉりる］ルヂ］イド型の化合物受なくどし１種を
   生理学的に。１容しく７る少量ぐ’Ｅｌイｊ’Ｊること
   を特徴どする組成物。 （２）　ヘパリン誘導体が、グルＪリミン中位の大部分
   が２位に天然ヘパリン鎖中にみられる一Ｎ　ＨＳ　ｏ３
   −ＥＡＯ）代ね’ＱニーＮ１−１２　マタ４．１Ｎｌ−
   １−７シ／Ｎ？ｉニＮＨ−アレデル基を４１するような
   ヘパリンからなることを特徴とＪるＷｌ　ａ’を請求の
   範囲第１項に記載の組成物。 （３）　ヘパリン誘導体が、大部分が約１０，０００以
   下、特に約８．０００以トの分子都をイｊりるＪ、う／
   Ｊ：鎖まｌご（ま断ハで形成され−Ｃいることを１゛」
   徴どりるｉ：Ｉ　；ｉ　請求の範囲第１順に記載の組成
   物。 （４）　ヘパリンの鎮または断１′１の大部分が鎖中位
   を４〜２６個または６〜２６個、ま／、：は少なくとし
   １１１１１！！Ｉ、場合ににつでは５ししくは４個含イ
   ｊ！ｌることを１ｚｊ徴ど】る特許請求の範囲第３項に
   記載の組成物。 （５）　Δ「■に対Ｊる親和性をイ」する鎖を含イ］し
   ないかまＩこｔよ実際上含イ１しないことを１）徴とり
   る１４Ω′１請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記
   載の組成物。 （Ｇ）　Ａ’ｌ−１１１に対りる親和性をもたない鎖の
   割合が低ＭＷヘパリンの少なくとも９５％であることを
   特徴とする特ム′１品求の範囲第１項へ・第４項のいず
   れかに記載の組成物。 （７）　抗−Ｘ８活竹をもたないか；したは実際上ｂ／
   こないことを特徴とする特ム′］晶求の範囲第５１ｆ１
   または第６項にムｄ載の組成物。 （８）　Ａ’ｒｌｌｌに対づる親和性が弱いがまたはも
   たない鎖の割合が低ＭＷヘパリンの８５％または１５％
   であ亭 ることを特ｍづる特許請求の範囲第１項〜第４項のいず
   れかに記載の組成物。 （９）　八「■１に対する親和性を右する鎖を少なくと
   ５約５０％、または少なくとも約１５％、または実際上
   １００％含有゛りることを特徴とする特＝７１品求の範
   囲第１項〜第４項のい４°れかに記載の組成物。 （１０）ヘパリン鎖の抗−Ｘａカ１１１１ｉが１００未
   満よＩｃは約５０未満であり、かつＵｓＰｈ価が非常に
   低く実際上０であることを特徴とする特シ１請求の範囲
   第５項または第６項に記載の組成物。 （１１）低ＭＷヘパリン鎖のＹＷｈ価が約２５０ｕ／　
   ｍｌｌＦｉ度でありかつＹＷ／ＵＳＰ比が少なくとも約
   １０であるか、またはＹＷカ価がヘパリンのＹｗｈ価に
   近くかつＹＷ／ＵＳＰ比が少なくとも約３であることを
   特徴とりる狛Ｃ′１品求の範囲第８１Ｊ１に記載の組成
   物。 （１２）低〜ＩＷヘパリン鎖の抗−×、１活竹が３００
   ｕ　／　ｍｇより大きく、特に３００〜５００Ｕ／Ｉｎ
   りであり、ｔ＋：ｒには２、０００ｕ／　ｍｕ更に３．
   ０ＯＯＬＩ／　ｍ！１にも達りることを特徴とする特許
   請求の範囲第９項に記載の組成物。 （１３）ヘパリン鎮が、その４Ｍ造Ｊ３よび揚台によっ
   てはその一部または全部の置換基がヘパリン鎖のものに
   相当するような鎖単位の連鎖で形成されてい全ことを特
   徴とする特ｎ請求の範囲第１項〜第１２項のいずれかに
   記載の組成物。 （１４）低ＭＷヘパリンの少なくとも１個の構造単位が
   特に鎖の開始端Ｊ３よび／または終止端で化学的にｌ！
   篩されており、特に低ＭＷヘパリン鎖が鎖終止端に好ま
   しくは２，５−アンヒドロンンノース、２．５−アンヒ
   トＯマンニ１−−ルおよび２，５−アンヒトＵマンノン
   酸残基から選択された２、５−アンヒトＬ１マンノ構造
   の残基を有するか、または低ＭＷヘパリン鎖が鏡開始端
   に不飽和イズロン酸甲位を有することを特徴とする特ム
   ′１請求の範囲第１項へ一１２ｍのいずれかに記載の組
   成物。 （１５）低ＭＷヘパリンが天然ヘパリン鎖に相当してＪ
   ３す、その抗−×８力価がヘパリンの力価に近くかつ抗
   −×８力価の０８１１３価に対する比が少なくとも３で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第１３項に記載の
   組成物。 （１６）　低ＭＷヘパリンが合成によって得られたもの
   で−あり、かつ、３位に−０８０３−晶または−ＯＨ基
   を右りるｍ造Ｄ　Ｅ　Ｆ　Ｇ　Ｉ−１の連鎖に対応り゛
   る５個の鎖単位を含有するか、または鎖単位Ｆが３位に
   一〇５０３−暴を有する構造Ｄ　Ｅ　Ｆ　Ｇの連鎖に対
   応する４個の鎖単位を含有することを特徴とする特；′
   １請求の範囲第１３項に記載の組成物。 （１７）フルヂコイド型の化合物が、］ルヂゾン、ヒド
   ロコルチゾン、ヒトＯコルチゾンすなわちフルチゾール
   の１１α異性体、プレドーソン、プレドニソロン、メチ
   ルプレドニソロン、トリノシムシノＬ１ン、パラメタシ
   ン、ベタメタシン、デーｔ」ノメタゾンまＩｃはアブ」
   」グから選択されていることをｆｊｔｆｌ！とりるＮ：
   ｊｉｉ’１請求の範囲第１項へ・第１６項のいり゛れか
   に記載の組成物。 （１８）　特許請求の範囲第１項〜第１７項のいずれか
   に記載のヘパリン誘導体およびフルチ」イド型化合物を
   薬剤ベヒクルと共に含有することを特徴とりる薬剤組成
   物。 （１９）　活性成分が＊ｖｒ請求の範囲第１１ｎ〜第１
   ７項のいずれかに記載の組成物であることを特徴とする
   抗ｌ１ｉＴ＋瘍活性の比較測定の実施にＪ３い゛〔参照
   または標Ｑｊとして使用可能な生物試薬。