JPS601124A - ユビデカレノン含有リポソ−ム被覆体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はユビデカレノン含有リポソームおよび当該リポ
ソームの膜表面を被覆する多糖質層肪酸無機酸混合エス
テルよりなるユビデカレノン含有リポソーム被！体に関
する。

ユビデカレノン、別名コエンザイムＱＩＯは心機能ψ改
善に有効な医薬品として近年臨床上広く利用されるに至
ったものである。

しかしながら、この物質を静脈内投与あるいは経口投与
した場合における血液中から目標臓器への移行速度につ
いてはまだ改善されるべき余地が残されている。すなわ
ち２例えば当該物質を従来技術に基づいて製剤化して投
与した場合、血液中からの消失速度はかなり小さく、目
標臓器への移行速度および移行量も小さい。

そもそも当該物質は、４８〜５２℃の融点を有する常温
で固体状の脂溶性物質であるから、静脈内投与に便なら
しめるために界面活性剤１例えば）ＩＩ）（ポリオキシ
エチレン硬化ヒマシ油）を使用するごとき従来技術によ
って当該物質を可溶化しなければならない。しかしなが
ら、かくのごとく可溶化して投与した場合には、後記実
験例において示されるごとくユビデカレノンの血液中か
らの消失速度は小さい。

かかる事情にかんがみ、先に本発明者は血液中から所定
の目標臓器への移行を上昇せしめる上で有効なユビデカ
レノン含有組成物およびその被覆体について種々検討し
その結果ユビデカレノンをリポソーム中に含有せしめる
こと並びに多糖質層肪酸エステルによって被覆すること
によって所期の解決手段が提供されることを知り、当該
知見に基づ〈発明を特願昭５６−１０５６８９および特
願昭５７−８２９９３に係るものとして特許出願した。

すなわち、投与後における血液中からの消失速度および
所定時間内における臓器移行量をめる、と、ユビデカレ
ノン含有リポソームあるいはその被覆体を投与した場合
には、従来技術に係る可溶化液の投与の場合Ｉこ比較し
て、血液中からの消失速度がいちぢるしく大きく、また
肺、腎を除く諸臓器において高い移行量を示すのである
。

医学、薬学の分野において、いわゆる臓器指向型製剤へ
の関心が徐々に高まるに伴ない、この目的を達成するた
めの−っの手段としてリポソームを利用する技術が重要
視されるに至っていることは周知のとおりである。すな
わち、リポソームは臓器毎ことそれぞれ固有のリポソー
ムとして存在しているという点に着目し、所定の薬物を
所定のリポソームに含有せしめて投与することにより、
薬物を目標教器に選択的かつ集中的に運搬せしめようと
意図する技術が開発されつつあるのである。

かかる発明として例えば特開昭５２−１４３２１８　。

特開昭５２−１５１７１８．特開昭５３−１３３６１６
．特公昭５５−８４８８における発明を挙げることがで
きる。

いずれもリポソームを担体として、これに特定の生体成
分あるいは医共成分を保持させる技術に関する発明であ
り、いずれこれらの技術は医学薬学における他の生体成
分、医薬成分にまで応用されるものと予想される。

特願昭５６−１０５６８９に係る発明はリポソームをｎ
＋ζ器指向の目的で使用するものであり、そのこと自体
はすでに公知であるが、リポソーム技術を特にユビデカ
レノンに応用し、新規なユビデカレノン含有リポソーム
を収得し、それによってユビデカレノンにおける前記の
基本的問題を解決し、ユビデカレノンの利用価値をい元
ぢるしく高めることに成功した。

また９本発明者はリポソーム自体の理化学性状により臓
器指向が異なることに着目し、引続き。

ユビデカレノンを特に肺、腎に対して選択的に臓器指向
させるための方法について検討をおこなった。その結果
、ユビデカレノン含有リポソームを多糖質層肪酸エステ
ルによって被覆せしめ、ユビデカレノン含有リポソーム
被覆体とすることによって所期の目的が達成されること
を知り、特願昭５７−８２９９３に係る発明として完成
した。

その後本発明者はさらにユビデカレノン含有リポソーム
を多糖質脂肪酸無機酸混合エステルによって被覆せしめ
て得られるユビデカレノン含有す。

ボソーム被覆体もまたユビデカレノンの血液中からの消
失速度を増大し、ａ器移行を上昇せしめるものであるこ
とを知り２本発明に至った。すなわち９本発明の目的は
ユビデカレノンの血液中からの消失速度を増大するため
の技術手段の提供である。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明に係るリポソームにおいてユビデカレノンは、リ
ポソームを構成する膜の中に含まれる。

リポソーム膜を構成する基本物質は主としてリン脂質お
よびステロールであり、ユビデカレノンはこれらと共存
して、膜の中に均一に分散している。

本発明において使用されるリン脂質としては９例えばホ
スファチデルコリン、ホスファチデルエタノールアミン
、ホスファチデルセリン、スフィンゴミエリン、グセチ
ルリン酸。ステアリルアミン。

ホスファチデルグリセロール、ボスファチヂン酸。

ホスファチデルイノシトール、およびこれらの混合物を
あげることができるが、特にこれらに限定されない。ス
テロールとしてはコレステロールがもっとも好ましい。

ユビデカレノン、リン脂質、ステロールの組成比につい
ては、ユビデカレノン１モル比に対してリン脂質１０モ
ル比以上、ステロールは１モル比以上あれば十分であり
９例えばユビデカレノン１モル比に対して、リン脂質と
して卵黄ホスファチデルコリンを使用する場合には１０
〜３０モル比またステロールとしてコレステロールを使
用する場合には１〜１０モル比が好ましい使用範囲であ
る。

ユビデカレノン１モル比に対するリン脂質とコレステロ
ールの好ましいモル組成比の例を示せば以下１〜７のご
とくである。

ＰＣ：ホスファチデルコリン ＤＣＰニジセチルリン酸 ＰＳ　：ホスファチデルセリン ＳＡ　：ステアリルアミン 本発明に係るリポソームは、電子顕微鏡的には０．１〜
５．０μ程度の粒経をもつ球体である。凍結乾燥物は凝
集して外観上はブロック状を呈しているが。

水または塩類溶液に投入するとよく分散し、均質な溶液
を与える。

次に本発明に係るリポソームは、リポソームの製造に関
する従来技術を準用して製造することができる。

例えば、リポソームの膜構成成分とユビデカレノンをナ
スフラスコにとり、クロロホルムを加えて一旦溶解し９
次に溶媒溜去し、生成膜をガラスピーズおよび適当な緩
衝液等を加えて剥離し、超音波処理後セファデックスあ
るいはセファローズカラムに通して、リポソーム分割を
集め溶媒除去すればよい。溶媒除去には例えば凍結乾燥
処理を適用することができる。

凍結乾燥処理は２．ＯＴｏｒｒ以下で３時間以上お仁な
えば、所定の目的が達成され、リポソームを粉末状にと
り出すことができるが９本発明は仁の条件に限定される
ものではない。望ましい条件としては、後記実施例に示
されるごとく９例えば０．３Ｔｏｒｒで５時間凍結乾燥
処理する方法が選ばれる。

次に本発明に係る多糖性脂肪酸無機酸混合エステルにお
いて多糖質とは分子量が４万以上のポリサッカライドを
言い、具体的にはデキストラン。

アミロペクチン、プルラン、が好ましく、その他にデキ
ストラン硫酸、キト酸、プルラン硫酸等がある。本発明
において多糖質は分子量の異なる二種類以上のものの組
合わせあるいはアミロペクチンとデキストランの組合わ
せのどと（複数の多糖質を合わせて使用してもよい。

また本発明に係る多糖性脂肪酸無機酸混合エステルにお
ける脂肪酸はラウリン酸、ミリスチン酸。

パルミチン酸、ステアリン酸であり、特に好ましいのは
パルミチン酸である。本発明に係る多糖質脂肪酸エステ
ルをもってリポソームを被覆した場合に、脂肪酸のアル
キル鎖はリポソームの脂質層に楔形に配向することが推
定される。従って上記脂肪酸が特に好ましいとされるの
は、そのアルキル鎖の長さがリポソーム脂質層への楔形
配向にとって適当なものであるためであると考えられる
。

また多糖性脂肪酸無機酸混合エステルにおける無機酸は
リン酸、硫酸である。

次に多糖性脂肪酸無機酸混合エステルの製造は。

概略以下のごとくおこなうことができる。まず。

多糖質を無水ジメチルホルムアミドに６０〜７０℃で加
温溶解する。無水ピリジンと無水ジメチルホルムアミド
に脂肪酸塩化物をあらかじめ溶解したものを加え、６０
〜７０℃で数時間、続いて室温で２４時間撹拌する。反
応終了後９反応混合物にエタノールを加えると白色沈殿
が析出するので、これをｉ５取し、エタノールで洗浄し
、さらにエーテルに分散して再びｆ取する。減圧乾燥し
、多糖質脂肪酸エステルを得る。次に得られた多糖質脂
肪酸エステルを無水ホルムアミドあるいはピリジンに６
０〜７０℃で加温溶解しポリリン酸あるいはクロル硫酸
を加え、室温で２４時間あるいは６０〜７０℃で４時間
撹拌する。反応終了後９反応混合物にメタノール合エス
テルを得る。

ここに得られるエステルは、ＩＲスペクトル（ＫＢｒ法
）、Ｈ’−ＮＭＲスペクトル（溶媒ｄ’−ＤＭＳＯ，内
部標準ＴＭ８）によって特定することができるが。

さらに脂肪酸置換度および無機酸置換度をめることがで
きる。

脂肪酸置換度とは糖単位１００個に対する脂肪酸の導入
個数を言い、これは以下のようにＨ’　−ＮＭＲによっ
て測定される。例えばバルミトイル基が導入されている
場合、その導入量は）（’−ＮＭＲスペクトルにおいて
０．９ｐｐｍおよび１．２８ｐｐｍに現われるバルミト
イル基のプロトンのピーク面積と３．５〜５．２　ｐｐ
ｍに現われる拡巾のプロトンのピーク面積との比によっ
て与えられる。すなわち糖単位１００個中にＸ個のバル
ミトイル基が置換されている場合には、糖のプロトン数
は９Ｘ　＋　１０　（１００−ｘ）であり。

またバルミトイル基のプロトン数は３１Ｘである。

従って）ｌ’−ＮＭＲスペクトルの積分曲線からめられ
る糖のプロトン数をｙ、またバルミトイル基のプロトン
数を２とすると。

である。か（のごとくしてめられる置換度を本発明にお
いて使用されるエステルについて測定してみると、置換
度は低い方が好ましい結果を与えることが判明し９例え
ば０．５〜５程度で十分である。

無機酸置換度とは糖単位１００個に対する脂肪酸の尋人
個数を言い、脂肪酸置換度における記述に準じてめるこ
とができる。

また２本発明に係るエステルをリポソームに被覆させる
には、リポソームが形成している水溶液にエステル含有
水溶液を加えて撹拌すればよい。

被覆に当たっては単一のエステルを被覆すればよいが、
２拙以上の本発明に係るエステルを組合わせ、いわゆる
複合エステルとして被覆してもよい。

本発明ユビデカレノン含有リポソーム被覆体の効果を以
下に記載する実験例をもって説明する。

実験例１ 試料 実施例１乃至実施例３記載においてＣＯＱ、ｏの代わり
に１４ＣＣ０ＱＩ。を使用した点を除いて実施例１乃至
実施例３と同様の方法によって下記ａ　−ｄの検体試料
を用意した。

ａ、”ＣＣ０Ｑｔｏ　含有’Ｊ　ホ７　Ａｂ、′４Ｃ−
Ｃ０Ｑｔｏ含有リポソ一ム被覆体、ただし被覆エステル
はＯ−バルミトイルアミロペクチンホスフェート（分子
量１１２，０００．脂肪酸置換度４．９リン酸置換度１
．６） Ｃ，”Ｃ−Ｃ０ＱＩｏ含有リポソ一ム被覆体、ただし被
覆エステルは０−バルミトイルアミロペクチンサルフェ
ート （分子量１１２，０００．脂肪酸置換度４．９．硫酸置
換度２．１） ｄ、”　Ｃ−Ｃ０Ｑｔｏ含有リポソ一ム被覆体、ただし
被覆エステルは０−パルミトイルブルランホ・　スフニ
ート （分子量２３０，０００．脂肪酸置換度１．０．リン酸
置換度４．２） なお、　”Ｃ−ＣｏＱ、ｏは下記式によって示される放
射ラベル化ユビデカレノンである。

また、この比放射能は７゜９５μＣｉ／ｎＬｇであり、
放射化学的には２種類の展開溶媒（クロロホルム／ベン
ゼン＝　１／１．　酢酸／ベンゼン＝１／９）を用いた
薄層クロマトグラフィーで単一であった。

方法 動物実験 雄性モルモット（体重３００〜３５０　ｇ）の左大腿部
静脈に検体試料０゜６ｍｙ１４Ｃ−ＣＯＱｌ。７ｋｇを
注入し縫合した。その後は２モルモットを飼育ケージに
放置し。

所定時間経過ごとに、耳静脈から採血した。採取した血
液中の”ＣＣ０Ｑｔｏ濃度を以下に記載する方法で測定
した。

血液中放射能の測定 耳静脈より２０μｔまたは５０μＬの血液を採取し０．
７５ｍ１の５ｏｌｕｅｎｅ　３５０／イソプロピルアル
コール（１／１）で可溶化し、数滴の過酸化水素水を加
え脱色後。

ｉｎｓｔａｇｅｌ／　０．５Ｎ　Ｉ（Ｏｆ（９／　１　
）　５＋ｒＬＬを加え、液体シンチレーション・カウン
ターを用い放射能を測定した。

結果 検体試料を投与した場合の１４ＣＱｏＱｔ。の血液中放
射濃度の経時推移を示すグラフを図１に示す。

図１の説明 ○印線、Ｏ印線９ロ印線、Δ印線はそれぞれ試料ａ、試
料す。試料Ｃ０試料ｄ。を投与した場合の推移（３例の
平均値）を示す。

図１に示されるように、リポソーム中に含有されること
によってユビデカレノンが血中から速やかに消失して臓
器移行する事実は特願昭５６−１０５６８９に係る発明
においてすでに知られた現象であるが。

この現象は、リポソームの膜表面を多糖酋脂肪酸無機酸
混合エステルによって被覆した場合においても失なわれ
ることはな（、むしろ当該エステルの被覆によって血中
消失速度がかえって促進されることが認められる。

以下に記載する実施例をもって本発明を具体的に説明す
る。

実施例１ 卵黄ホスファチヂノとコリン５４ｍｐ　（６，７５Ｘ　
１０′ｍｏｌ）。

コレステロール８．７８ｍｇ　（２，２５Ｘ１０−’ｍ
ｏｌ）およびユビデカレノンすなわちＣｏＱｌ、　４．
６ｍｇ　（５，３２ＸＩＱ−’ｍｏｌ）を４ｍｌのクロ
ロポルムに溶解し、ロータリー・エバポレーターを用い
減圧下でクロロホルムを除去した。

得られた薄膜を減圧デシケータ−で−夜乾燥し。

クロロホルムを完全に除去した。底に残った薄膜に２゜
０ｒａｌずつ２回計４゜Ｏｍｌの緩衝液Ａおよびグラス
ビーズ１個を加えて、膜が完全にはがれるまでポルテッ
クスφミキサーで振った。

次に、この溶液を枝付き試験管に移し、アルゴン気流下
０℃でプローブ型ソニケーターを用い。

３０秒ごと断続的に超音波処理を行うと、黄白色の溶液
が得られた。この溶液中にＣ０Ｑｔｏ含有リポソームが
含まれる。

次に、この黄白色の溶液２．２ｍｌにＯ−バルミトイル
アミロペクチンホスフェート（分子ｆｆ１ｉｘ２．ｏｏ
ｏ、脂肪’ｆ＋＆　ｆｉ’ｉ換度４．９．　！Ｉン酸置
換度１．６）を緩衝液Ａに分散した溶液（１０，３ｍｇ
１０．６ｎＬＬ）を混合し、室温で３０分間撹拌し９本
発明被覆体を得た。

実施例２ 実施例１記載において、０−バルミトイルアミロペクチ
ンホスフェート（分子量１１２，０００．脂肪酸置換度
４．９．　リン酸置換度１．６）の代わりに０−パルミ
トイルアミロペクチンサルフェー）　（分子１１１２，
０００゜脂肪酸置換度４．９．硫酸置換度２．１）を使
用した点を除いて実施例１と同様におこない、ユビデカ
レノン含有リポソーム・被覆体を得た。

実施例３　′ 実施例１記載Ｃζおいて、０−バルミトイルアミロペク
チンホスフェート（分子量１１２，０００．脂肪酸置換
度４．９．１７ン酸置換度１．６）の代わりに０−パル
ミψ トイルプルランホス７エート（分子量２３０，０００．
脂肪酸置換度１．０．９ン酸置換度４．２）を使用した
点を除いて実施例１と同様におこない、ユビデカレノン
含有リポソーム被覆体を得た。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例１．結果の項に記載の図１に相当する図面
であり、ユビデカレノンの血液中消失速度を示す。 特許出願人 工−ザイ株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）ユビデカレノン含有リポソームおよび当該リボソ
   ーｌ、の膜表面を被覆する多糖質層肪酸無機酸混合エス
   テルよりなるユビデカレノン含有リポソーム被覆体 （２）　リポソームの膜がリン脂質およびステロールよ
   り＜７’ｉ成される膜である特許請求の範面第１項記１
   ｆｊ’＋のユビデカレノン含有リポソーム被覆体（３１
   リン脂質がホスファチデルコリン、ホスファチブリレエ
   タノールアミン、ホスファチデルセリン、スフィンゴミ
   エリン、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファ
   チデルグリセロール、ホスファチヂン酸、ホスファチデ
   ルイノシト−ル。 およびこれらの混合物である特許請求の範囲第２項記載
   のユビデカレノン含有リポソーム被覆体（４１ｘｆクロ
   ールコレステロールである特ｆｆ　請求の範囲第２項↑
   たは第３項記載のユビデカレノン含有リポソーム被覆体 （５）ユビデカレノン１モル比に対してリン脂質が１０
   モル比以上、ステロールが１モル比以上である特許請求
   の範囲第２項乃至第４項記載のユビデカレノン含有リポ
   ソーム被覆体 （６）多糖質層肪酸無機酸混合エステルが、アミロペク
   チン、プルラン、デキストランのいづれかの多糖質とパ
   ルミチン酸およびリン酸または硫酸とのエステルである
   特許請求の範囲第１項乃至第５項記載のユビデカレノン
   含有リポソーム被覆体