JPS5963194A - 発酵法によるl−ヒスチジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−ヒスチジンの製造法Info
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- JPS5963194A JPS5963194A JP17166182A JP17166182A JPS5963194A JP S5963194 A JPS5963194 A JP S5963194A JP 17166182 A JP17166182 A JP 17166182A JP 17166182 A JP17166182 A JP 17166182A JP S5963194 A JPS5963194 A JP S5963194A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法1こよるI、−ヒスチジンの製造法tこ
関する。
関する。
発酵法tこよるし一ヒスチジンの製造θくとしては、ブ
レビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属の2−チ
アゾールアラニン(ヒスチジンアナログ)耐性変顕株を
用いる方法(米国特許第3716453号)、2−チア
ゾールアラニン及びナルファ剤に耐性を有するし一ヒス
チジン生産菌を用いる方法(特公昭51−23594号
公報)、央tこ2−チアゾールアラニン耐性の他tこL
−アルギニン、L−メチオニン、L−フェニルアラニン
、L−プロリン等のし一アミノ酸又はキサンチン、グア
ニン等を要求する変顕株を使用する方法(特公昭51−
23593.51−24594号公報)等が知られてい
る。
レビバクテリウム属又はコリネバクテリウム属の2−チ
アゾールアラニン(ヒスチジンアナログ)耐性変顕株を
用いる方法(米国特許第3716453号)、2−チア
ゾールアラニン及びナルファ剤に耐性を有するし一ヒス
チジン生産菌を用いる方法(特公昭51−23594号
公報)、央tこ2−チアゾールアラニン耐性の他tこL
−アルギニン、L−メチオニン、L−フェニルアラニン
、L−プロリン等のし一アミノ酸又はキサンチン、グア
ニン等を要求する変顕株を使用する方法(特公昭51−
23593.51−24594号公報)等が知られてい
る。
本発明者等はまり高収率でL−ヒスチジンを生産する微
生物を育種することを目的として種々研究した結果、ブ
レビバクテリウム属のし一ヒスチジン生産菌1こサイア
ミンアンタゴニスト耐性を付怪した変異株がより高い収
率でL−ヒスチジンを生産することを見い出した。本発
明はこの発見tこ基づいて完成されたものである。
生物を育種することを目的として種々研究した結果、ブ
レビバクテリウム属のし一ヒスチジン生産菌1こサイア
ミンアンタゴニスト耐性を付怪した変異株がより高い収
率でL−ヒスチジンを生産することを見い出した。本発
明はこの発見tこ基づいて完成されたものである。
本発明tこ於て用いられる微生物は、ブレビバクテリウ
ム属tこ属し、サイアミンアンタゴニストに耐性を有し
、更にL−ヒスチジン生+!6#こ必要な性′眞、例え
ばヒスチジンアナログ耐性等を有する変異株であり、代
表的なものとして次のような変?4株が挙げられる。
ム属tこ属し、サイアミンアンタゴニストに耐性を有し
、更にL−ヒスチジン生+!6#こ必要な性′眞、例え
ばヒスチジンアナログ耐性等を有する変異株であり、代
表的なものとして次のような変?4株が挙げられる。
ブレビバクテリウム9フラバム AJ I 1845
FERM−P 647B(2TA※、トリアゾールカ
ルボキサミド耐性)(※ 2TA : 2−チアゾール
アラニノ)本発明でいうサイアミンアンタゴニストとは
、ブレビバクテリウム属微生物の生育を阻害し7、その
生育阻害がサイアミン(塩酸塩)の冷力1目こまって部
分的に又は完全に解除されるような化学を剤をいい、例
えば、ビリサイアミン、オキシキイアミン、トリアゾー
ルカルボキサミド等が挙げられる。
FERM−P 647B(2TA※、トリアゾールカ
ルボキサミド耐性)(※ 2TA : 2−チアゾール
アラニノ)本発明でいうサイアミンアンタゴニストとは
、ブレビバクテリウム属微生物の生育を阻害し7、その
生育阻害がサイアミン(塩酸塩)の冷力1目こまって部
分的に又は完全に解除されるような化学を剤をいい、例
えば、ビリサイアミン、オキシキイアミン、トリアゾー
ルカルボキサミド等が挙げられる。
これらサイアミンアンタゴニスト耐性のL−ヒスチジン
生産菌に、L−ヒスチジン生産性を高めるのtこ有効な
公知の性質、例えばL−メチオニ/、■、−トリプトフ
ァン、L−フェニルアラニン等の要求性、サルファ剤、
5−メチルトリプトファン削性等を付学したし一ヒスチ
ジン生産能の高い菌株を使用することが望ましく本発明
をより一層効果的に実施することができる。
生産菌に、L−ヒスチジン生産性を高めるのtこ有効な
公知の性質、例えばL−メチオニ/、■、−トリプトフ
ァン、L−フェニルアラニン等の要求性、サルファ剤、
5−メチルトリプトファン削性等を付学したし一ヒスチ
ジン生産能の高い菌株を使用することが望ましく本発明
をより一層効果的に実施することができる。
本発明で使用する剥異株は、ブレビバクテリウム属tこ
属しヒスチジンアナログ剛性のし一ヒスチジン生産菌を
親株とし、これtこj[1常の変異処理、例えば紫外線
照射あるいはN−メチル−N゛−ニトロ−N−二トロン
グアニジン(以下、NGと略す)、亜硝酸等で新人処理
し、次いで変異処理した菌体を親株が生育できない触の
サイアミンアンタゴニストを含有する寒天平板培地で培
養し、該・11仮培地上Pこ生育するコロニーをサイア
ミンアンタゴニスト耐性株として分離し、L−ヒスチジ
ン生産能の高いものを選択することtこよって採取され
る。
属しヒスチジンアナログ剛性のし一ヒスチジン生産菌を
親株とし、これtこj[1常の変異処理、例えば紫外線
照射あるいはN−メチル−N゛−ニトロ−N−二トロン
グアニジン(以下、NGと略す)、亜硝酸等で新人処理
し、次いで変異処理した菌体を親株が生育できない触の
サイアミンアンタゴニストを含有する寒天平板培地で培
養し、該・11仮培地上Pこ生育するコロニーをサイア
ミンアンタゴニスト耐性株として分離し、L−ヒスチジ
ン生産能の高いものを選択することtこよって採取され
る。
上記親株としてはヒスチジンアナログ剛性を有するし一
ヒスチジノ生産菌の他Vこ、L−ヒスチジン生産1こ有
用な公知の性質を有するし一ヒスチジン生m FtJ
、例えば、し−スレオニン、又はグアニン要求性(特公
昭51−24594号)、サルファ剤耐性、コバラミン
剛性(特開昭50−70591号公報)のし−ヒスチジ
ン生産菌等が使用され、具体的1こは次のようなものが
挙げられる。
ヒスチジノ生産菌の他Vこ、L−ヒスチジン生産1こ有
用な公知の性質を有するし一ヒスチジン生m FtJ
、例えば、し−スレオニン、又はグアニン要求性(特公
昭51−24594号)、サルファ剤耐性、コバラミン
剛性(特開昭50−70591号公報)のし−ヒスチジ
ン生産菌等が使用され、具体的1こは次のようなものが
挙げられる。
プレビバクテリウノ、・フラバム A、+322
5 ATCC21406(2’FA耐性) ブレビバクテリウム・フラバム A、Ta205
FERM−P2170(L−スレオニン要求性、2T
A耐性)ATCC21407(2TA耐性) 再Vこ本発明のし一ヒスチジン生産菌は次tこ示すよう
な、いわゆるコリネフォームのし一グルタミン酸生産蘭
を親株とし、これtこヒスチジンアナログ剛性及びサイ
アミンアンタゴニスト耐性を順次又は(モ意の順tこイ
」学することによって誘導することができる。
5 ATCC21406(2’FA耐性) ブレビバクテリウム・フラバム A、Ta205
FERM−P2170(L−スレオニン要求性、2T
A耐性)ATCC21407(2TA耐性) 再Vこ本発明のし一ヒスチジン生産菌は次tこ示すよう
な、いわゆるコリネフォームのし一グルタミン酸生産蘭
を親株とし、これtこヒスチジンアナログ剛性及びサイ
アミンアンタゴニスト耐性を順次又は(モ意の順tこイ
」学することによって誘導することができる。
ブレビバクテリウム・デイバリカタム A’r
CC14020ブレビバクテリウム・フラバム
ATCC+4067プレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタム ATCC13869ブレビバクテ
リウム・サラカロリティカム ATCC14066
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ATC
C13870コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032以下の実験例Vこて、本発明
の変異(′トの具体的誘導力法の1例と4jイアミンア
ンタゴニストに対する耐性度を示す。
CC14020ブレビバクテリウム・フラバム
ATCC+4067プレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタム ATCC13869ブレビバクテ
リウム・サラカロリティカム ATCC14066
コリネバクテリウム・アセトアシドフィルム ATC
C13870コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032以下の実験例Vこて、本発明
の変異(′トの具体的誘導力法の1例と4jイアミンア
ンタゴニストに対する耐性度を示す。
実施例
ブレビバクテリウム・フラバムAJ3225ATCC2
1406をイースト・ブイヨン寒天スラント培地で培養
し、生育した菌体を集めて0.02Mリン酸緩衝液(p
)17.o ) tこ背面し、これに200 pf/m
e (1) NGを加え室(lijにao分間(呆楯し
た。このようにNG変異処理した菌体を同緩衝液で洗滌
した後、トリアゾールカルボキサミドを1000μy/
ne含む最少寒天プレート上(第1表)1こ塗布、31
.5tl”で4日間培養した。
1406をイースト・ブイヨン寒天スラント培地で培養
し、生育した菌体を集めて0.02Mリン酸緩衝液(p
)17.o ) tこ背面し、これに200 pf/m
e (1) NGを加え室(lijにao分間(呆楯し
た。このようにNG変異処理した菌体を同緩衝液で洗滌
した後、トリアゾールカルボキサミドを1000μy/
ne含む最少寒天プレート上(第1表)1こ塗布、31
.5tl”で4日間培養した。
第1表培地組成
グルコース 20 20
y/を硫酸アンモニウム 52 尿 素 2 2
〃KH,PO411N K、HPO43 MgSO4・7H202’2 ppm廿 廿 F e 1M n イオン 2 、
2 pf/lビオチン
s o 5o z;サイアミノ
塩「液塩 100 −
NL−グルタミン酸 −344M
プレート上に生育したコロニーのうち大きなものを耐性
株として採取した。、このようtこして得られた耐性株
の中tこけ親株より17−ヒスチジノ生産性の高いもの
が多く見い出された。この内、最も生産能の高い菌株A
Ji1845を撰択した。
y/を硫酸アンモニウム 52 尿 素 2 2
〃KH,PO411N K、HPO43 MgSO4・7H202’2 ppm廿 廿 F e 1M n イオン 2 、
2 pf/lビオチン
s o 5o z;サイアミノ
塩「液塩 100 −
NL−グルタミン酸 −344M
プレート上に生育したコロニーのうち大きなものを耐性
株として採取した。、このようtこして得られた耐性株
の中tこけ親株より17−ヒスチジノ生産性の高いもの
が多く見い出された。この内、最も生産能の高い菌株A
Ji1845を撰択した。
次tこ、第1表に示す組成の生育測定用jj〜地に第2
表Vこ示す濃度の各薬剤を添加し、夫々試験管tこ3、
〇−宛分注し110t?で10分間加熱した。この培地
eこ、各試験菌を接種しく接種危107個/ml)、3
1Uで48時間振盪培養した。培養液を水で26倍に希
釈し、その562 nmに於る吸光度を測定して生育度
を求めた。その結果を第2表1こ示す。第2表ンこけ薬
剤無添加時の生育度を100とする相ヌ・j値を示した
。
表Vこ示す濃度の各薬剤を添加し、夫々試験管tこ3、
〇−宛分注し110t?で10分間加熱した。この培地
eこ、各試験菌を接種しく接種危107個/ml)、3
1Uで48時間振盪培養した。培養液を水で26倍に希
釈し、その562 nmに於る吸光度を測定して生育度
を求めた。その結果を第2表1こ示す。第2表ンこけ薬
剤無添加時の生育度を100とする相ヌ・j値を示した
。
第2表 薬剤耐性度
薬 剤 菌 株 (ΔTA)
これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素源、無機
イオン及び更に必要「こ応じ、その他の有機微暇栄養素
を含有する通常の培地である。
これらの微生物を培養する培地は炭素源、窒素源、無機
イオン及び更に必要「こ応じ、その他の有機微暇栄養素
を含有する通常の培地である。
炭素源としてはグルコース、シュークロース、澱粉加水
分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸等その能が使用
できる。
分解物などの炭水化物、酢酸等の有機酸等その能が使用
できる。
窒素曲としてはアンモニアガス、アンモニア水、アンモ
ニウム塩、尿素等が好適である。
ニウム塩、尿素等が好適である。
培養は好気的条件が望ましく、培徨の間培地のpHを4
/、Cいし8に、温度を25ないし37trtn調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。
/、Cいし8に、温度を25ないし37trtn調節し
つつ行えばより好ましい結果が得られる。
かくして、1ないし7日間も培養すれば培地中1こ著鼠
のし一ヒスチジンが生成蓄積される。
のし一ヒスチジンが生成蓄積される。
Jにイ(液よりL−ヒスチジンを採取する方法はイオン
交換樹脂1こよる方法等通常の方法で採取できろ。
交換樹脂1こよる方法等通常の方法で採取できろ。
以下、実施例にて説明する。
実施例
グルコースlo y /de、 硫酸アンモニウム4.
5f /de、 KH,PO40,2f/de、 Mg
SO4・7H9Uo、1y/rt1!、FeおよびMn
イオン各2ppm1 ビオチン100γ/11サイアミ
ン塩酸塩100γ/l、酢酸アンモニウム+ 、o y
/de、 大豆夕/バク塩酸加水分解液70 mg/
di (総窒素として)CaCO35f / dl!
を含みpH7,0tn調節した培地ヲ500 献容フラ
スコに20 me 充分注し、+10Cで10分間加熱
殺し、別f、p加熱殺菌した炭酸カル7ウム1.Ofを
間冷した。この培地tこ、あらかじめブイヨン寒天スラ
ント上に生育させた各試験菌を後行し、31Cにて72
時間振盪培養した。
5f /de、 KH,PO40,2f/de、 Mg
SO4・7H9Uo、1y/rt1!、FeおよびMn
イオン各2ppm1 ビオチン100γ/11サイアミ
ン塩酸塩100γ/l、酢酸アンモニウム+ 、o y
/de、 大豆夕/バク塩酸加水分解液70 mg/
di (総窒素として)CaCO35f / dl!
を含みpH7,0tn調節した培地ヲ500 献容フラ
スコに20 me 充分注し、+10Cで10分間加熱
殺し、別f、p加熱殺菌した炭酸カル7ウム1.Ofを
間冷した。この培地tこ、あらかじめブイヨン寒天スラ
ント上に生育させた各試験菌を後行し、31Cにて72
時間振盪培養した。
ヒスチジンの定量をKapeiter −Alder
反応(Biochem、 Z、’、 2 6
4 、 1 3 1 (1933) )
を用いる比色法tこよって行った。培養液中へのL
−ヒスチジンの蓄積(b−は第3表1こ示すとおりであ
る1、第3表 し−ヒスチジンの蓄積IV4−。
反応(Biochem、 Z、’、 2 6
4 、 1 3 1 (1933) )
を用いる比色法tこよって行った。培養液中へのL
−ヒスチジンの蓄積(b−は第3表1こ示すとおりであ
る1、第3表 し−ヒスチジンの蓄積IV4−。
3225 0.51 1
8 4 5 1.31
1846 1.51 1
8 4 7 1.31
1 8 4 8 1.4
フレヒバクテリウム・フラバムAJ11846を1様の
方法で培盲し、培養液を遠心分l!Ilシて不/6:性
物質を除去し、得られた上清1.Otを強酸性陽イオン
交換樹脂゛′ダイヤイオン 5K−IB”(NH,型)
1こ連灯してL−ヒスチジンを吸着させtこ。i#f
lliを水洗後2N−アンモニア水ンこてm出し、つい
で溶出液を濃縮しこれよりし一ヒスチジンのわ1結晶1
2.5 Fを得た。
8 4 5 1.31
1846 1.51 1
8 4 7 1.31
1 8 4 8 1.4
フレヒバクテリウム・フラバムAJ11846を1様の
方法で培盲し、培養液を遠心分l!Ilシて不/6:性
物質を除去し、得られた上清1.Otを強酸性陽イオン
交換樹脂゛′ダイヤイオン 5K−IB”(NH,型)
1こ連灯してL−ヒスチジンを吸着させtこ。i#f
lliを水洗後2N−アンモニア水ンこてm出し、つい
で溶出液を濃縮しこれよりし一ヒスチジンのわ1結晶1
2.5 Fを得た。
特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属に属しサイアミンアンタゴニスト
tこ耐性を有し、かつL−ヒスチジン生産能を有する特
生物を培養して培養液中tこL−ヒスチジンを生成・著
積せしめ、これを採取することを特徴とする発酵法tこ
よるL−ヒスチジンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17166182A JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるl−ヒスチジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17166182A JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるl−ヒスチジンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5963194A true JPS5963194A (ja) | 1984-04-10 |
JPH0218838B2 JPH0218838B2 (ja) | 1990-04-26 |
Family
ID=15927348
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP17166182A Granted JPS5963194A (ja) | 1982-09-30 | 1982-09-30 | 発酵法によるl−ヒスチジンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5963194A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2818555A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2496867C2 (ru) | 2011-04-25 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии |
-
1982
- 1982-09-30 JP JP17166182A patent/JPS5963194A/ja active Granted
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2818555A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
EP2818554A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
EP2818556A2 (en) | 2004-10-07 | 2014-12-31 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing a basic substance |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0218838B2 (ja) | 1990-04-26 |
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