JPS59193354A - 過酸化物活性物質検出用組成物及び試験具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 分所の４遭 本発明は、一般に試料中の過酸化物活性物質の分析測定
、特にこのような測定に有用であって、試料中に存在す
るかもしれないアスコルビン酸からの有害な作用に対し
て抵抗性の組成物、試験手段、試験具及び試験方法に関
する。

背東肢−１打 生物学的試料、例えば尿、糞便懸濁液及び胃腸内容物中
の過酸化物活性物質の存在を検出するため、現在、多数
の分析方法を利用することができる。例えば、潜血試験
によって測定される被分析物であるヘモグロビン及びそ
の誘導体は、パーオキシダーセ酵素と同様な挙動を示す
ので、過酸化物活性物質の代表であり、これら自体はプ
ソイドパーオキシダーセとも言われる。過酸化物活性物
質は過酸化物又はヒドロパーオキシドと変色のような検
出可能の応答を生じる指示薬、例えはベンジノン、ｏ　
−）リジン、３．３’、５．５’−テ１−ラメデルベン
ジジン、２．７−ジアミツフルオレン等との間のレドッ
クス反応を触媒する点で酵素に似ている。従って、試料
中の潜血の存在を測定するほとんどの方法圀、このプソ
イドバーオキシダーセ活性に依存する。

着色Ｆｔｉ示薬の過酸化物酸化の酵素様触媒作用に依１
．ニーＪ−る、過酸化物活性物質をＪす定する多数の分
析力θ：が開発された。第一、これらは湿式化学又は溶
解操作及びいわゆる［浸漬−読み取り　（ｄｉｐ−ａｎ
ｒｌ−ｒ（！ｙｕｌ）　Ｊ型試薬保持ストリップ具を含
む。前者の代表的例は、ヘンリイ　（Ｒ，Ｌ　１ｌｅｎ
ｒｙ　）ら著クリニカル・ゲミストリイ・プリンシプル
ス・アンＩ　テクニークス（Ｃ１ｉｎｉｃａｌ　Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ　）　、第二版１１２４〜１１２５　　（
メリーランド州バーガースタウン：１ｌａｒｐ（！ｒ　
ａｎｄ　Ｒｏｓｙ、　　１９７４　）に示されている。

この操作の例は氷酢酸（緩衝剤）、ジフェニルアミン（
指示薬）及び過酸化水素を使用するものである。このよ
うな湿式化学法は分析に有用であることが証明されてい
るが、これらの方法は多くの欠点を有し、そのうち２点
を例示すると、試薬が安定性に欠け、感度が不適当であ
るという欠点がある。

過酸化物活性物質を測定する別の方法で、現在多くの臨
床分析者によって好ましいと言われている方法は、いわ
ゆる「浸漬−読み取り］試薬ストリップ具を利用してい
る。このような「浸漬−読み取り」具の代表′的なもの
は、マイルス・ラボラトリーズ・インコーボレーテソド
（Ｍｉｌｅｓｌ、ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ＋　Ｉｎｃ、
）のエームス・ディヒイション（Ａｍｅｓ　Ｄｉｖｉｓ
ｉｏｎ　）から商標へマスティックス（ＨＥＭＡＳＴＩ
Ｘ）の下に市販されている。この試験具は、多孔性紙７
トリソクスに、有機ヒドロパーオキシドと指示薬との緩
衝混合物を含浸させたものをプラスチックストリップ又
はハンドルに固定して成る。このマトリックスをヘモグ
ロビン、ミオグロビン、赤血球又は他の過酸化物活性物
質、即ち、プソイドバーオキシダーセを含む液体中に浸
漬すると、７トリノクスに青色が現れ、その強度は試料
中の物質の濃度に比例する。７トリソクスｉ１（、：二
現れた色を標準カラーチャートと比較することによって
、分析者は試料中に存在する被分析物の７ｔを半定量的
に測定することができる。

第一に、このような試薬ストリップの、湿式化学ｌｊ瀉
：：対比した利点は、１）スＩ・リップ型は使用しやｊ
゛＜、試薬の製造も、イ］随する装置も必要としないし
、２〉ストリップ中で試薬は一層安定になり、粘度、感
度及び経済性が改善される。

過酸化物活性種に関する特定の分析を前記の方法のとち
ら一ζ行っても、両方に固有の問題が存在する。即ち、
試料中に一般に還元剤及び特にアスコルビン酸又はアス
コルビン酸イオンの存在によって妨害が起こる（以下、
アス″、１ルヘーＩ・妨害と君う）。例えば、尿分析の
場合、高投与量のビタミンＣ（アスコルビン酸）を含む
最近の食餌人気は、一定の尿成分、例えば潜血を分析す
る際に重大なデス。−１ルヘート妨害の問題を起ごず。

【１１＜も１９３８年に、アスコルビン酸塩のような１
７元剤の・有害な作用か認識された。コーン（Ｒ。

Ｋｏｈｎ）及びワトラス（Ｒ，Ｍ、　Ｗａｔｒｏｕｓ　
）著、ジャーナル・オフ・バイオロジカル・ケミストリ
イ（，１ｏ　ｕ　ｒ　ｎ　ａ　ｌ　Ｏｆ旧ｏ１ｏｇｉｃ
ａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　、Ｉ　２４　：１６３
〜・１６８　　（１９３８）。潜血（プソイドパーオキ
シダーセ）分析を実施する場合に、同時にアスコルベー
１−分析も実施して潜血測定の精度をｉｔ（’　１ｉｌ
ｉずへきであるという１９７９年の提案によって証明さ
れるように、診断分析のこの分野で同じ問題になお悩ま
されている。ニールセン（１，。

Ｎ１ｃｌＳｅｎ）　、ヨルケンセン（Ｐ、、１．　Ｊｏ
ｒｇｅｎｓｅｎ）及びハンセン（八、　Ｃ，ｔｌａｎｓ
ｅｎ）　著、Ｕｇｅｓｋｒｉｆｔ　ｆｏｒＬ　ａ　ｅ　
Ｈ（！　ｒ　、　　１４１　、７９１　〜７９３　　　
（１９７９）　　。

試験系、例えはグルコース感受性試薬を含む系にり・ｊ
するアスコルへ−１−妨害を１徐去する試みは多数、文
献に報告されている。クルコース感受性分析に関して、
アスコルベーＩ−か試薬に到達する前にアスコルベート
を濾去する方法から、その場でアスコルヘ−１・を分１
？１ｒする酵素を利用する方法まで種々のアプローチが
ある。

Ｄａｈｌｑｖｉｓｔのカナダ特言′１第８４４−５６．
４号明細居は、尿又は他の媒体中でグルコースを測定す
る測定具を開示しており、このものはｊｍ常のクルコー
ス応答（（１試薬て含浸した多孔性部分の他に、尿・試
料を受理する（＝Ｊ加加部部分含む。試料受理ｆ９３分
は、測５ｊｌ具Ｇこおし」るたた一つの截能か尿試料中
にイｒ在するアスコルへ−［を吸ｆｉすることであるイ
オン交換物♂（′１を含む。

ダニンカ−（Ｄａｎｎｉｎｇｅｒ　）らに伺与された米
国性９′！第４　、１６８．２０５号明１．■１書は、
試験試薬の処ソノにｌ！１ソ幸であるアスコルへ−トオ
キシダーゼを配合する、ことを示唆している。この場合
、試オ；、１中に存在するアス、：ｌルヘートば、アス
コルヘートオギシダ−＋１によって酵素酸化されて、所
望の分析に悪影響を及はさない化合物であるデし１−ロ
アスコル・＼−１を４トｔ７る。

デス−１ルヘーｌ−妨害を１ノ１除する別のアプローチ
は、冨士臓器記薬株式会社の特開昭５８−５５７５７号
公（・１るに記載されている。該公報には、種々のりガ
ント、例えばエチレンジアミン四ｆ！ｉｔ−酸及びジエ
チレントリーｒミン五酢酸の金属ギレートを使用して試
料を前処理し、次にコレステロール、グルコース又は他
の成分、例えば尿酸を分析することが開示されている。

クー（Ｋｕ）の米国特許第３，４１Ｌ８８７号明細書に
は、アスコルベ−１・ｒトラッピング系」を使用するこ
とによって、酵素酸化性物質、例えばグルコースオキシ
ダーゼに依存する試薬系を用いてアスコルへ−１・妨害
を排除することが記載されている。

ｒ　ｌ−ラッピング系」は、イオン化されたときに、レ
ドックス指示薬色素とアスコルへ−１〜との間で酸化一
連光電位を降下するイオン化可能の重金泥化合物に関す
る。適当な金属は、例えば′：１ハルト、鉄、水銀及び
ニッケルである。

マガース（Ｍａｇｅｒｓ）らに付与され、正式に譲渡さ
れている米国特許第４，２８８，５４１号明細書には、
グルコース／′グルコースオキシダーゼ分析系にアスコ
ルベーＩ・抵抗性を付与するため水銀イオン１１４体、
例えばサルコシン酸水銀を使用することを記載している
。

前記文献の他に、グルコース試験に伴うアスコルへ−１
の問題に関する性急は、下記の文献に記載されている： １　キフォｌ”　（Ｉｆ、　Ｇｉｆｆｏｒｄ）ら１．１
．　Ａｍｅｒ。

Ｍｅｄ、　　八５ｓｏｃ、　　、　　１　７　８　　、
　　ｌ　、１９〜１５０（１９６１）。

２、オーゴーマン（Ｐ、　Ｏ’Ｇｏｒｍａｎ　）ら、Ｂ
ｒ　ｉ　ｔ　。

Ｍｅｄ、、１．．６０３−（ｉ０６　　（１，９６０）
。

３、　　プラント　（Ｒ，Ｂｒａｎｄｔ、　）　　ら、
Ｃｌ１ｎ、　Ｃｈｃｍ。

八ｃ１．）、　５１　、　１０３　〜１０４　　　（１
９７４）　　。

４、フこンンｈ　（Ｒ，１１ｒａｎｔＨ）　Ｃａ、八ｍ
、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

ｌ’ａＬＩｌｏｌ、６８．５９２〜５９４　　（１，９
７７）。

前記のクーの’１を許のアプローチと同様に、他の文献
はコバルトを使用してアスコルベートを１７１体とし、
酸化している。例えば、ブラカグノロ（Ｇ。

Ｂｒ（１Ｂａｇｎｏｌｏ）　　ｉ＝　　八ｎｎ、　　Ｃ
ｈｉｍ、　　八ｐｐｌｉｃＬ１ｔａ　　　３　１　．３
５０〜３６８　（１９４１）番Ｊ、アス：Ｚルピン酸の
溶液を金属コバルトの存在て空気て酸化１゛るごとを（
小吉Ｕ７た。また、ジャーナル・オフ・ザ・ケミカル・
ソリ゛イエう一イ・オフ・ジャパン（Ｊｏ旧τ１．〕１
ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｂｃｍ１ｃａｔ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏ
ｆ　、Ｉａｐａｎ：）　、５３、８２０〜８２６　　（
１９４２）に宮崎トモキチにょッ１Ｚｃｏ　（Ｎ１１３
　）　６　Ｃ１３に関する同様の活性が報告された。

前記の文献はクルコース測定用の分析系を広範仁ご扱ゲ
Ｃいイ）が、パーオキシダーゼ及びプソイドバーオキシ
・ターセのような過酸化物活性物質、例；、　ハ潜１ｆ
ｎ　（−＼モクＬ１ヒン）の測定に関連するアス＝Ｚル
ヘー１−妨害の問題を解決す乙だめの示唆は全くなされ
ていない。前記のクーの特許に開示されているにもかか
わらず、前記文献は、Ｃｏ（Ｉｌｌ）のような金属・イ
オンが実際にプソイドパーオキシダーゼてｔ）あること
を示している。例えは、西１酸コハルｌ−（Ｉｌｆｔ）
　番；ｌ、クメンヒドロパーオキシドを触媒乙こより分
解するために土業的に使用される。

〔ザ・、メルク・インデックス（Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　
Ｉｎｄｅｘ　）、第９版３１１　　（１９７６）　。）
ロー（Ｋ、［、ｏｈｓ、）、Ｍｏｎａｔｓｂｅｒ、　　
■）ｅｕｔ、　　八１（ａｄ、　　Ｗｉｓｓ、　　Ｂｅ
ｒｌｉｎ　　、　　８　．６５７〜６５９　　（１９６
６）　　（Ｃｈｅｍ、　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　。

６７．１２０３８３ｚ　、１９６７参照）によって過酸
化物を触媒により分解する一連のＧｏ（Ｉｎ）錯体が報
告されている。従って、過酸化物活性物質を測定する）
１１１型的分析用調語物、即ちイｉ（幾ヒＩ・ロバ−オ
キシド及び指示薬を含む分析用調製物にこのような金属
層１体を使用すると、ヒト「２パーオキシドとの自害な
反応を起こして、１−偽腸性」の結果を生しるか、又υ
、１問題の過酸化物４１１性物？′ｊ、例え（３（沿１
１１１４＝Ｚ列して反応し］Ａ′いようｃ、二し７、従
ってこのような測定に使用−Ｃきなくなると、当業者が
考えるであろうご吉は明らかである。実際、潜血８１（
験に水銀署１体、例えば′す゛ルコシン酸水銀を使用す
る努力（、：ｌ　臥、Ｉ役　し７人：。

ｊＪ−Ｊ：ｌｕ　Ｍ　ｘｉｔｉ　？）ｆＡされているメ
ルクハルＩ−（Ｂ　ｕ　ｒ　ｋ　ｈ　ａ　ｒ　ｄ　Ｉ：
　）らの米Ｆｌ’（］　’ｔ！＋許第４，３１０，６２
６号明細１′！１は、前記問題に関Ｕ、て、過酸化物活
性物質の測定用組成物とのアスｍｌルヘーＩ−妨害を軽
減するためアンモニウムＣｏ　（Ｉｎ　）　ＩｎＦ体を
使用するごとを記載している。このｑ、冒′１は有機ヒ
ドロパーオキシド及び適当な指示薬、例えば３，３“、
５．５’　−テトラメチルヘンシジンをアンモニウムＣ
ｏ　（ｉＴｌ　）　１ｉｉｊ体、例えば特にＣ：ｏ　（
Ｎシ）　ｅ　Ｃ１０と一緒に含む組成物を開示している
。しかしなから、これらの錯体は潜血試験に産業的に有
利である程、充分なアスコルへ−１・抵抗性を与えなか
った。

過酸化物活性物質の分析測定におけるアスコルへ−１・
妨害に関する他のアプローチとして、例えば西ドイツ特
許第２９０７６２８号明細書がある。このドイツ特許は
、溶液中ての尿分析に関し、尿試料を１種以上の酸化剤
で前処理してアスコルへ一トを除去し、次に適当な分析
試薬と接触させる。

開示されている酸化剤は、沃素酸づ叫・リウム、過沃素
酸すＩ・リウム、次亜塩素酸カルシウム、三沃化カリウ
ム、次亜塩素酸すｌ・リウム、クロロアミン及びフロモ
ザクシンイミドである。

要するに、過酸化物活性物質の測定においてアスコルヒ
ン酸が起こす妨害問題を排除するための種々のアプロー
チは、種々のＣｏ（ＩＩＩ）アンモニウム錯体の使用、
酸化剤による試料の前処理及び試薬組成物へのアルカリ
金属沃素酸塩の直接添加のような技術を含んでいた。

西洋わさび又はポテトから得られるパーオキシダーゼの
ような天然パーオキシダーゼの作用のメカニスＪ＼を解
明するため、別のパーオキシダーゼ系としてプソイドパ
ーオキシダーゼ、例えばヘモグロヒンかしばしば研究さ
れる。アスコルビン酸はパーオキシダーゼに対する代表
的基質として長い間知られており、プソイドパーオキシ
ダーゼとして作用する金属キレートの存在でのアスコル
ヒン１Ｔｌｅ　ｎｅ化は公知の現象である。１９６７年
及び１　！＋　６８　＜［に、カーノ（Ｍ、　Ｋｈａｎ
　）及びマーチル（へ、　ｔｌａｒＬｃｌｌ）は、１．
８〜３．４５のｐＨｆｔｉ’ｉｌｉ囲にわたっ゛ζ数種
の鉄キレ−１・及び銅キレートの存在でのアズ：１ルヒ
ン酸の酸化の動的研究について報告した〔カーノ及びマ
ーチル著、Ｊ、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、８９　
、４１７６　　　（１９６７）　　　；Ｊ、　　八ｍ、
　　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、８１）、７１０４　　（１９
６７）　　；Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、９
０．３３８６　　（１９６８）。）これらの研究におい
て（：：２、多数の動的及び熱力学的パラメータが研究
された。その結果は、アスコルヒン酸を酸化する能力に
よる種々のキレートのｌｌｌｉ位であった。

これらの著者の研究した４種のアミノボリヵルボユ・酸
のうち、Ｆｅ＋ぷのＮ　−＜　２　１−１”　ｍｌ−ド
ア・、に」−！・）工ナレンシー〒′ζ゛二二！ｌＩｌ
＋；＃、　（ｎ　Ｅ　＋）−１゛八）キレートか　ｉｉ
Ｑも迅速な酸化剤″ご１１τ）こ、１゛が判明し７た１
ｏ−１・””−”ｉ”ルの研究及びクリンステ／　ｌ’
　（Ｇｒｉｎｓｔ、ｃａｄ　）乙こよも更乙こ早開（”
舗ｊ１究は、「モテル：・マーオキう・グー上糸を構成
ずもため、−のアス］ル・ヒン、Ｔ、１２　Ｍ　化活１
生を考え“て（ハる〔グリンステ、・Ｆｌ、１．帽ｎ、
　ＣｈｅｍＳａｃ、、８２．３４６４　　（１９６０）
３．グリンステ、トによる前記のような研究から、構造
−）′Ｊ祐ｙ＋バーオキシターセの活性部位るこ見られ
る鉄含有′・・ム（Ｄ　Ｊ％ｊ　３ｆｉと類似し７てい
る秩キレ−ｂ、を用いてバー第４二シダーセメカＪ、ス
ムを研究する試めがなされた。事実、その著−ｈばその
論文に反復して「モテルバーオキシクーセ系−１という
文占を使用ｊ−７（″いる。しかしながら、このキレ−
Ｉ・及び反応性Ｑこおいて類似の他の物質によって［−
モう−ル１バーーＡ：ｔ’シダーゼ活性か示されるので
、このような物質をぞｊ機ヒドロパーオキシド／甫示葉
系、例えはパーオキシダーゼ又は他の過酸化物活性物質
の測定用の分析試薬組成物及び測定ｌ７先に現在使用さ
れていζ、イ（１表的糸に絹・７り不ｚ〕うろことζ、
１、（イ「かに予期さね、／）Ｉ′いであろ・う。更に
、バーオキツタ・−ゼ活性に関１・ｌ　Ｌ−（’、”ｌ
、発明の譲り受ｕＪ人によって行われたイｉＪＩ究から
、ｉ［Ｔ不染、例えは３．３“、５，５穎ケト−２／す
“Ｉ・＼ンシシン（ＴＭｒ＋）又はｏ−１−リ℃・ン（
ｉ９．）酸化物活性物質の存イ臂ｉ−検出すイ）分析系
６二典型的に使用され、５指不染）を用いて、二のよう
ノ、（店１１目、１：　−ｊ’　Ｘ　、Ｚｌ　／［／　
Ｉｆ’　７　ｊｉとより約２ｏＯ倍’Ｔｊ＜　ｔ、ｙ、
’、　１１、を起、：　−Ｊ’　ｋ−とを子期しうろこ
とが判明Ｕ７だ。従２、て、このような過酸化物活性金
属キレ−１・−こあるｌ　Ｉニー；−ル１バーオキ、／
ター七がアスニ１ルしン酸を容易（、に酸化する場合、
（カー７、マーチル及びクリンスーｊ２＝　ｌ、により
なされた仮定）、、Ｉ’ＭＨの、ｌ、・うな指小薬との
パーオキシター−−１：反応が、２０　ｉ、］倍稈１［
Ｊ＜ないとしても（西洋わきびて行われた後Ｋ　（７）
　ｐ　究で示唆された）、少なくともアスτＩ月化ンＩ
Ｖｊと同じ速度て進行する。明らかに、極めて反応Ｉ１
１の被分析物をその被分析物の存在で変色するよ−）に
構成された真・の試薬出１製物中に配合すると、１−偽
μｊ（＋１１の結果が（すられる′ごあろ・うと予測さ
れ発−肋也ｌ− 前記の教示及び示唆にもかかわらず、ある種の過酸化物
活性金属キレ−１・及び特にポリカルボキシアルキルア
ミンの金属キレ−１・を本発明方法に使用する場合には
、過酸化物活性物質を測定する試薬系を含む組成物にお
いて予期された「偽陽性」結果を生じないばかりでなく
、実際にこのような系において被分析物を測定ずへき系
の信頼性、安定性及び感度の意味で意外に有利である。

更に、本発明により金属キレートを使用すると、特に試
料中に存在するアスコルビン酸イオンからの妨害によっ
て起こされる不正確さを克服した点て特に有利であるこ
とが４′す明した。

従って、本発明はこの発見に基づくもので、前記のよう
に、一般に、アスコルへ−１・妨害にり１して抵抗性で
ある過酸化物活性物質の分析測定法及び特に本発明によ
り有機ヒドロパーオキシド及びレドックス指示薬、例え
ば〇−トリジン又は３゜３　’、　　５．　５　’−テ
ｌ〜ラメチルヘンシジン並びに過酸化物７１’ｉ　＋１
１金属キレ−１−を含む組成物を利用−４る検出法に関
する。このような栓用において、過酸化物情１１Ｉ被分
析物は、酵素パーオキシダーゼに類似し７ているので、
指示薬と有機ヒＩ・ロバ−オキシドとの反応を触媒する
か、又はその反応に関与。

ずイ）。ごの反応は色又は他の検１）巨汀能の応答を生
じ、その強度は被分析物の濃度の指標である。アスコル
ビン酸イオンは、存在する場合、重大な妨害の間１司を
起こす。組成物中に過酸化物活性金属キＬ、−１−か存
在しても、過酸化物活性被分析物の分柘測定を妨害する
ことも予測されるであろう。

それにもかかわらず、試料中の過酸化物活性物質のイｒ
１′「を検出するため、試料中のアスコルビン酸の妨害
作用に対して抵抗性の新規組成物、試験手段（及び試験
具）を有効に調製できることが判明した。この組成物、
試験手段（及び試験具）は、［モう−ルパーオキシダー
セ」としても公知のポリカルボキシアルキルアミンｉＦ
　４体の金属キレートを含む。

従って、本発明の組成物は、有機ヒドロバーオキシド、
過酸化物活性物質及び過酸化物の存在で検出可能の応答
、例えば変色を生じうる指示薬並びに、更に一般式： 〔式中Ｒ１は水素又は２〜３個の炭素原子を有する直鎖
若し、くは分枝鎖のアル４−ルアルコール或いはアルキ
ルカルボン酸基を表し、ｌ’（ｐ　、Ｒ３、Ｒｘ及びＲ
ｙ＆；ｌ同−又は異なり、２〜３個の炭素原子を有する
直鎖若しくは分枝鎖のアルギルアルコール或いはアルギ
ルカルボン酸基を表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｘ又はＲ
ｙのうち少なくとも２個は前記のアルキルカルボン酸基
であり、Ｒｐ及びＲｑば同−又は異なり、１〜３個の炭
素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキレン基又は６〜９
個の炭素原子を有する２価の１．２−脂環式基を表し、
ｎはＯ〜１の数値を有する整数、ｎｉは０〜２の数値を
有する整数であり、ＭはＦｅ　　である〕を有する下り
カルホキジアルキルアミン誘導体である金属キレ−１・
を含む。

好まし２い化合物は、ｍが０であり、ｒｌが０又ａＣｔ
１てあり、Ｒｐ、がエチＩ／ン基である化合物である。

アルキルカルホン酸基か−Ｃｌｌ　２ＣＯＯｔｌである
ポリカルボキンアルキルアミン誘導体の金属キレートハ
フ１！ｉ乙こ４丁ましい。

ｔ（４シイ金屈キｔｚ−１はＮ−（２ヒトｐ４−シエー
ｊル）エチレンジアミン三酢酸の鉄キレ−１−（Ｉ・（
・−ＩＩＩ式ＤＴΔ）である。

７ト発明の（ｌ酉トしい実施態様において、ｉＪｌ成物
を支持体７トリノクス、吸水性紙に混入して試験手段を
形成し、この試験手段を不活性支持体に固定し２−（試
、１具を形成することがてきイ）。更に、試験７１段（
及び試験具）の＄１Ｊ造方法及び試験方法も本発明によ
って７７７、供される。

本発明により金１尼キレ−１・を包含させること。ごま
と）、アスニ１ルベート妨害に対する優れた抵抗性ばか
りでなく、良好な貯蔵性及び高温安定性及びｒ　（ｌｈ
陽性」結果の欠如を実験により確認できるように、意外
に有利な安定性を有する組成物、試験手段（及び試験具
）が提供される。

発朋勿血細−な部一 本発明の開発中の初期−の湿式化学実験は、Ｎ−（２−
ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸の鉄キレ−
１−（以下、Ｆｅ−ＨＥ　Ｄ　Ｔ　Ａと記ずが、これは
便宜のためだりに使用するもので、金泥イオンとポリカ
ルボキシアルキルアミン誘導体との間に共有結合の存在
を意味するものではない）、アスコルビン酸及びＩＮ　
％剤を使用し、このキレ−１への存在でのアスコルビン
酸酸化の迅速性を確認したもので、その結果はカー７及
びマーチルの前記報告から予期されるであろう。従って
、パーオキシダーゼ含有組成物において、このような組
成物によるアスコルビン酸酸化と比軸することによって
、Ｔ　Ｍ　Ｂかいかに早く酸化されるかが分かったので
、有機ヒドロパーオキツド、酸化可能の指示薬、例えば
Ｔ　Ｍ　Ｂ及び更に前記のような金属キレ−１を含むＫ
Ｊ１成物ＧＪ極めて不安定であり、急速に１偽陽性−１
結果を生じることが予想された。

しかし、更に実験したところ、このような金属キレ−１
・を含め、過酸化物活性物質の検出に適当であり、川に
乾燥固体状態の型に適合し、製造中及び！Ｉｉ″蔵中に
良好な試薬安定性を示し、既知のヘモグＩｊヒンー陰性
尿と接触したときに「偽陽性」のｓ、！ｉ果を仕じない
組成物を調製しうろことが判明した。こうして達成され
た本発明は、前記のように、金属キレ−１・、例えばＦ
ｅ−１１ＥＤＴＡば［モデルバーオキシダーセ」として
使用でき、従って過酸化物活性被分析物の濃度を測定す
るため組成物に使用するには不適当てあろうと示唆して
いる前記文献の示唆と矛盾する。

尿の、１、うな生物学的１１ν体中の潜血（ＯＢ）、即
！Ｅ、−、モクロビンを検出するための、本発明の新規
組成物から製造することができた試験手段（及び試験１
−１）は、尿中の異常に高いアスコルビン酸濃度に幻し
゛Ｃ祇抗性であることか判明した。前記のよ・）７．こ
、アスコルビン酸によるｌ！ｒ−１，、ｔｔ−は、特に
尿試料（ＴＩ約２５％がｌ　Ｑ　ｍｇ　／　ｄｌ−より
高いアス：Ｉ　ルピン酸ｄ？度を示すことを予測できる
ことを考慮すると、小人な間１■である。ある型のアス
コルヘーｂ　６．’ｊ　；４９Ｉｙ延刑を含まない常用
のＯＢ検出具は、通常、５１１Ｗ　ｌ　（］　Ｉ、程度
の低いアメ９ｚルヒン酸？５度によってｌ１ｌｔｌ−さ
れる（即ち・＼モグロヒンの存在に対してあまり鋭ｆ＋
ｊ々でなくされる）ごとか判明した。しかし、本発明に
より氷Ｊ造される試験具は、ごのようへ従来の試験具ζ
こ社して、アスコルヘーＩ−妨害抵抗１（Ｉの点て極め
て角刈てあり、アズ１ルヒン酸を比較的ｉ１．！；い濃
度で、ｉ＋＋ｉえは５旧ｎｇ／ｄｌ、程度て含む液体中
の過酸化１りＩ’Ａ！′ｉ性物質を検出することができ
る。・従って、本発明は、尿のような生物学的液体中の
過酸化物活性物質の検出用の組成物１、試験手段（及び
試験具）を提供する。本発明の組成物、試験手段（及び
試験具）によって、ヘモグＩＩヒンの他に、例えば、パ
ーオキシダーゼ、ミオグロビン、赤血球及び伯のプソイ
ドパーオキシダーゼを含めて他の過酸化物活性物質を検
出することができろ。

本発明は、ポリ力ルポギシアルギルアミンの誘導体であ
って、生物学的液体について行われる分析にタト４′る
アス：Ｉルヒン酌の有害な作用を減少又はＪ、ｌｔ　ｉ
；２−４−る「１的−（：　１　升テルハー３−キシタ
゛−セｊ　トａｌ＋ａｉ　ｉ＼れろ金属キレ−Ｉ・を使
用賜る。ごの観点で、金属キレ−１・はこのような液体
中に存在しろるテス゛１ルピン酸イオンの酸化を促進す
る作用をする。

本発明（〕）絹組成物試験手段（及び試験具）番よ、デ
ス２ル・へ、−１−妨害に対して実質的に感受性でなく
、（］、　０．３　ｍｇ　／　ｄＬ稈度或い６Ｊそれ以
下の痕跡のへ“１′ニゲ１１ヒニ・の存在るこ対し−ζ
肉眼て又は１幾器で検出し・）る応斡、例えも７１色の
応答を４ＬじるごとかＩ′１１明し　人＝。

本発明の組成物に使用する有機ヒｌ；　＋：＋パーオキ
シＩｌ；を多数の周知有）幾ヒドロパーオキシドから選
択することかできる。しかしなから、検出可能の応Ｃ１
１、例えば色の変化又は試験ａ：ｌ成物によって吸収名
り、　＜　４；１反射される光の量の変化を生じる指示
薬のメｊ−メ１ニて過酸化物活性物質と反応できなＨ，
１ればな（゛）ない。ヒドロパーオキシドのうち２侍に
適当なものはクメンヒト１′ｌパーオキシ１−１ｔ−フ
ヂルヒ１−’　ｒ−＋パーオキシド、ジイソプロピルベ
ンセンヒトし２パーオキシド、２，５−ジメチルへキザ
ン−２゜５−シにｌ・ロバ−オキシド、バラメンタンヒ
（・ワパーオキシ］及び使用する指示薬を酸化するのに
適当な他の周知のヒドロパーオキシド、又はこれらの化
合物の混合物である。前記化合物のうら、クノンヒ１０
パーオキシドが最も好ましい。

反応して、有機ヒドロパーオキシド及び過酸化物活性物
質の存在で検出可能の応答を生じることができる限り、
本発明の組成物に使用するため多くの指示薬か適当であ
る。指示薬は、例えば、いわゆる「ヘンシシンＦ型」化
合物；へンシジン；ｏ　−１−リジ：／；３，３’、５
．５’−テトラ（低級アルキル）ベンジジン、２．７−
ジアミツフルオレン；及びこれらの混合物又は他の種々
の指示薬の混合物である。本明細宿−に使用する用語「
低級アルキル」は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル
基及びイソプロピル基、及び種々のブチル異性体、ペン
チル異性体及びヘキシル異性体を含めて炭素原子数１〜
６個のアルキル基である。指示薬である３　＋　　３　
’　＋　　Ｊ　＋　　５“−テトラメチルヘンジジン（
Ｔ　Ｍ　＋３）か特に好ましい。

使用−３゛ろため選択され人ニジ）！］定の金属キレ−
１・の適格性は、了スコルヒン酸の酸化を促進するｆｉ
Ｌカによってはかりでなく、組成物の他の成分との相溶
１（（によっても決定される。従って、このような適当
なキレ−１−は、下記の一般式で表されるポリカルボキ
ンアルキルアミン誘導体の金属キレートを包含すること
か分かった： ｆｔｆ：　、−＋で、本発明に使用するためｊ首当であ
ることの分かった金属キレ−１・は、例えばＮ−（２−
ヒｌ；　＋：＋キノエチル）エチレンジアミン三酢酸鉄
キレｈ　（Ｆｅ−ＨＥＤＴＡ）　、エチレンシアミン四
酢酸Ｖキレ−ｔ−（Ｆｅ　−Ｅ　Ｄ　ＴΔ）、ツクに１
ヘキシレンシアミン四酢酸鉄キレ−１□　（Ｆｅ−ＣＤ
ＴＡ）１、ｎ　ｌ−リＩ２Ｅ酢酸鉄キレ−１・（Ｆｃ−
Ｎ　ＴΔ）、イミノニ酢酸鉄キレート（Ｆｅ−ＩＭＤＡ
）、エチレンシアミンニｌ（１“酸二プロピオン酸鉄キ
レート（Ｆｅ　−Ｆ巳Ｄ　Ｄ　Ｐ　、α型及びβ型）、
及びヒドロキシェチルイミノニ酢酸鉄キレ−）　（Ｆｅ
−ＨＩ　ＭＤＡ）並びにこれらの混合物である。鉄キレ
−１〜の形が一般６に好ましく、最も好ましいのは化合
物はＦｅ−Ｈｒ＞　Ｉ）　Ｔ　Ａ及びＦｅ　−Ｅ　Ｉ）
　Ｔ　Ａてあり、最も望ましいのばＦｅ−ＨＥＤＴＡで
ある。しかしなから、本明細７）：を読んだ当業者には
明らかなとおり、特に上に掲げたキレートの他に多数の
適当なキレートか本発明の範囲内に屍る。

従って、Ｆｅ　−ＨＦ、　Ｄ　Ｔ　Ａ及びＦｅ−ＥＤＴ
Ａ、特に、Ｆｅ−ＨＥ　Ｄ　ＴＡは本発明の組成物、試
験手段（及び試験具）において優れた結果を住じ、潜在
出血試験において最も満足にアスコルビン酸妨害抵抗性
を生じ（ヘモグロビンを検出し２うる）、使用前の良好
な試薬安定性を示し、］−偽陽性」の結果を生じないこ
とが実験により分かった。更に、記載した他の金属キレ
−１へ並びに多数の他のキレ−Ｉ−も満足に作用するで
あろう。しかし、このような他の化合物を使用する場合
に過酸化物活性物質を検出できる速度に著しい変動があ
ることを予想することができる。それというのは、アス
コルビン酸の酸化速度が変動するからである。従って、
本発明に使用するため適当な金属キレ−Ｉ・は、前記の
化合物類内のポリカルホキジアルキルアミン誘導体であ
るものから選択することかでき、このよ−）ＺＣ化合物
はずへて、アスコルしン酸塩をｌ前足に１１１化する、
二とかでき、本発明の範囲内に置くことかできるものと
理）リヱずへきである。しかしながら、ごの観点て多数
のものが緩徐Ｇこ作用し、従ってｐ７ｔ−的用途ではあ
まり実用的でなく、好まし７くない。

本発明に使用するのに適当な金属キレートは、アル１−
リッチ・ケミカルシン」−（八Ｉｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌＣｏ、　）　、シグマ・ケミカル・カンパニイ
　（ＳｉｇｍａＣｈ＋！ｎ＋１ｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ
）又は同様の供給者から市販され“こいるポリカルホキ
ジアルキルアミン誘導体を使用して常用の実験操作に上
ゲで製造することができろ。例えば、金属キレートであ
るＦｅ−１−（ｔＥ　Ｄ’ｉ−八は、市販のＨＦ、　Ｉ
）　Ｔ　Ａ及びＦｅＣｌ３　　・６１Ｌ＋　０の等モル
量を水溶液中で混合して鉄：キレートのに１　（モル：
モル するごとによって製造することができる。金属：キレー
トの他の溶解濃度比は、単に、混合する溶液のそれぞれ
の濃度を変動することＱこよって容易に調整することが
できる。アスコルビン酸妨害を克服する点で最も良好な
結果は、キレ−１・における金属イオン；ポリカルボキ
シアルキルアミン誘導体の濃度が約１：１　（モル：モ
ル）の関係にある場合にｉ）１られること力（判明した
。

本発明の種々の実７１！！！態様において所定の金属キ
レ−Ｉ・の好ましい濃度範囲は広範に変動する。例えは
、Ｆｅ　−　１−Ｔ　Ｐ．　Ｄ　’Ｔ’への場合に、有
機ヒドロパーオキシ１−及びテ）・う（低級アルキル）
ヘンシジン指示薬を含む組成物に使用する場合、好まし
い濃度範囲は約０．５ミリモル（　ｍ　Ｍ　）〜約５０
ｍＭである。この範囲は、尿試料巾約５０■／”　ｄ　
Ｌのアスコルへ−１・濃度まで抵抗するのに最適である
ことが測定された。更に、実験では、適当な鉄キレ＝１
−を比較的低濃度で使用すると、比較的迅速にヘモグロ
ビンを検出することかできるが、同じキレ−１−又は他
のキレ−１・を高い一度で使用してもあまり有効でない
。これらの明らかに変則的な結果については以下に詳述
するか、これらの結果は、本発明の組成物におりるキレ
−１・濃度と機能又は適格性との間に一般的相関関係は
ないことを証明する。

本発明の組成物において満足に作用する適当な金属キレ
−１・の大部分は、構造的にアルキルアミン基又はアミ
ン中心基及びカルボン酸基−−　Ｃｌｌ　２ＣＯＯＩＩ
を有する。しかしながら、このような特ｉ′１”しを有
しないか、前記の一般的化合物範囲に属する他のギレー
１〜は、一般に、アス刀ルヘーｌ−妨害を克服するのに
有効であり、満足な感度及び安定４７１を示Ｕ７、従っ
て申し分なく使用される。゛使用する際に、本発明の一
般的楯念に基づく組成物、試験手段（及び試験具）の特
定の実施態様の性飴は多数の異なるファクターに左右さ
れる。

多ｒ１１の７スコルヒン酸（ヒタミンＣ）を（■取する
習ＩＩ′１のある人からの代表的尿試料は、しばしばア
ス．：１ルヘ−１・を２　５　〜１　０　０　ｍｇ／ｄ
Ｌ又はそれ以に含む。？ｉＪｆ究のための参照アスコル
ヘート濃度を約５０■／ｄＬに選択した。本発明のアス
コルベート抵抗性組成物、試験手段（及び試験具）及び
試験方法の好ましい実施態様は、このような試料中の過
酸化物活性物質を約５０ｍｇ／ｄＬの参照濃度でばかり
でなく、他の種々のアスコルヘート濃度て検出すること
ができることか判明した。はとんどの場合、マスコルベ
ート濃度がキレ−１度よりはるかに高いと、応答時間の
遅延が起こる。下記のように１．［ラグタイム」、即ぢ
、観察可能の応答が起こるまでの時間は、５０　ｎ：Ｈ
，／（］ｌのアス″：Ｉル〜−トの存在で尿中のへ、モ
イＩロヒンを検出するイｊヒカ・について試験した、キ
レート濃度の変動する本発明の好ましい実施態様に関し
て、実験によ２９１７３分よ２０短■）間から約１／２
時間に及ぶどｉ−が１′１１明した。

好ましい実帷態様においては、本発明の組成物を使用（
−で　過酸化物活性物質の測定用の試験手段（及び試験
具）岑製造する。このような好ま（７い実施態様では、
ｌ’Ｊ！代物を適当な支持体マｌす２クスに混入させて
試験手段を形成することができる。支持体マトリックス
は多（の形を取ることかでき、例えば米国４、冒′１第
３．８４６，２４７月明細Ｐ）に開示されているもの（
フェルト、多孔性セラミックス１リツプ及び織られた又
はマント状に編まれたカラス繊維）でぬってよい。米国
特許第３．５５２．９２８号明細書に記載されている７
トリノクス（木材スティック、布、スポンジ材料及び粘
土５ｊＴ物質）も適当である。英国特許第１．３６９，
１３９号明１ｌＩＩ書に番、（、支持体７１−Ｉノック
又として合成樹脂７１ノース及びガラス繊維フェル１−
を使用することか示唆されている。また、英国１１！、
４′１第１．３４９．　６２３＋；３明細７）は、下Ｈ
ｊ紙マトリックスに対する被覆として細いフィラメンｌ
の光透過性情の使用を提案している。フランス’１７ｉ
”Ｑ’ｌ第２’、１７０．６２３号明細’ｆ５には、ポ
リアミ＋−繊維か開示さ′１１．ている。このよ・）な
開示かあるにもかろ・わら１゛、支持体７トリノクスと
し、て従来使用され、本発明に使用するのにＩ！？１．
乙、二好ましく、適当である材料は濾紙等のような吸水
性材木−１である。し、かＬながら、支持体７１−リ・
ノクスは前記のような種々の物理的形及び他の形であっ
てよく、このような形がず・＼て本発明に使用するのに
適当であり、使用するものである。

本発明の試験手段を製造する際には、組成物の成分を種
々の方法で支持体マトリックスに混入するご古かできる
。例えば、成分を水又は他の適当な溶剤、好ましくは有
機溶剤、例えばエタノール、アセトン若しくはシメヂル
ポルムアミド（ＤＭＦ）並びにこれらの溶剤の混合物及
び他の溶剤の混合物中に熔解又は懸濁することがてきる
。次に、この溶液又は＋ＬＬ、濁液を使用して吸水性濾
紙を含浸させることかでき、例えは、試薬を適当なマト
リックストに印刷するインクのようにして含浸すること
ができる。また、支持体マトリックスを組成物中に浸Ｒ
１するか、又は例えばドクターブレードを用いて組成物
で被覆することができる。

組成物の成分を支持体マトリックスに混入する現在好ま
しい方法は、吸水性濾ｉＪＥを成分の２種以上の溶液又
は懸濁液で含浸することである。含浸は、濾紙１１をこ
のような溶液又は懸濁液中に２回以」−浸ｆｉシ、各浸
漬後に浸漬した紙を乾燥器中で乾燥するごとによって達
成される。こうして形成した試験手段を両面接着テープ
片の片側に積層し、不削什１物をストリップに切断し、
各ストリップをプラス千ツク裏張り材ト１（例えはポリ
スチレン）の長いシーＩ・に固定し、これを次に短い寸
法に平行にりＪ断して一方の端部に含浸された紙を有し
、他端かハンドルとして役立つ長方形試験具を形成する
。こうして形成した試験具は、２回乾燥、含浸した試験
手段片を便利なハンドルを構成する長いプラスチック支
持体の平坦な片面に一方の端部で固定して成る。

４、発明の試験手段を作る好ましい方法は、例えばＩン
（１１１Ｅ　ｌ）　ｉ″八を有機ヒトｌ：Ｉパーオキシ
ドと一緒に、１１１示薬の添加前に、水性の第１回の浸
漬で１１！紙１１１に導入することである。即ち、まず
、濾紙を１種以」二の適当な溶剤及び／又は緩衝剤、例
えハトリエタノールアミンホレ−１−及びＩ−リス（ヒ
１；−ｔＩキシメチル）アミノメタン−マロネー１−　
（以Ｔ′：１−リスーマロネーＩ・と記ず）と−緒にＦ
ｅ−ＨＥＤ−ＦΔ及びヒドロバーオキシドの水溶液を含
浸させ、乾燥し、適当な溶剤、例えばエタノール中の指
示薬の第二＆漬溶液で再び含浸し、第２回の乾燥を行−
）。このような、紙中にまず金属キレートを含浸さ−１
、その後に他の活性試薬を含浸させる［２回必泗−ｊ法
は、（凭れたアスコルベ−１−）１　ｍ　＋’ｋ及び貯
蔵安定性を示す試験具を生じることが判明し　ノこ。

本発明の試験手段を調製する特に好ましい方法は、金属
キレ−１・及び指示薬以外の試薬を濾紙中に、前記のよ
うな試薬の第一溶液中に浸漬し、その後紙を乾燥するこ
とによって導入し、その後、乾燥シ２ノ、−紙を適当な
溶剤中の（旨不染及び増粘剤、例えばポリビニルビｌコ
リトンの溶液中に浸漬するごとによって指示薬を添加し
、次いで２回目の乾燥を行うことである。

前記の試験組成物試薬及び他の成分の他に、他の成分、
例えば種々の増粘剤、湿潤剤、緩衝剤、乳化剤及び周知
の助剤を本発明の組成物、試験手段（及び試験具）に１
お加することもできる。例え（５１６、増粘剤として、
ポリヒニルピロリドンの他に又しくその代わりに、種々
の＋）ｆ　）”ｌ、例えはゼラチン、アット１−ン、カ
ラゲニン、カゼイン、アルブミ：、メナルセルＩ：Ｉ−
ス等を使用することができる。湿ｌ閏ｊ円とし、て（、
ま、ドデシル硫酸ナトリウムを使用する（、りか好まシ
１．いか、長鎖有機硫酸塩及びスルホン酸１１１１、例
えばシオク千ルスルホコハク酸ナトリウノ、又ｔ；ロ：
デシルヘンセ：７・′スルホン酸すｌ・リウムる二使用
ず、る、てともてきる。緩衝剤系には、トリエタノール
アミンポレート及びトリス−マロネーＩ・の他（、ニ、
ｌ西石酸塩、燐酸塩、フタル酸１１．）、クエソ酸塩、
！１ｌｉ１′酸塩、コハク酸塩又は他の緩衝剤を使用す
ることができる。ｉ、ｒｔ成物を約６．０〜７．０のｐ
Ｈ値６ご緩衝するのか好ましい。乳化剤としては、ポリ
ヒニルアル′ｊ−ル、アラヒアコム、カルボギシビニル
ボリマー等を使用することかできる。指示薬椅１已’ｔ
’５３　Ｊ−るため有用な有機溶剤：Ｊはとんどの非反
応性イ１機揮発性溶剤、例えばエタノール、アセトン、
１）　Ｍ　Ｆ、クロロポルＪ４、エチレンジクロリド、
ヘンゼン、酢酸エチル等を包含する。勿論、他の適当な
溶剤を選択することば、当業者Ｇこ（，３ｉ−可能なこ
とである。

試験手段（又は試験具）を使用する際には、これを試験
ずべき液体又は試験ずべき物質の液体懸濁液中に浸漬し
７、直ぢに取り出すか、又は液体、固体或いは半固体の
試料を試験手段（又は試験具）に施すことができる。−
試料中に過酸化物活性物質が存在すると、試験組成物は
色の変化又は他の検出可能の応答を生しる。応答か色で
ある場合には、これを試料中に含まれる過酸化物活性物
質の定量的量を評価するだめの予め検定された色標準と
比較することかできる。完全な過酸化物活性物質、例え
ば完全な赤血球は、その他は未着色の′マトリ、・ラス
上に着色した斑点として現れる。溶血された過酸化物活
性物質ば均一にマトリ・、・クスを着色する、−とがで
きる。現れた色又は他の応答の量を測定するため、肉眼
による比較の他、種々の機器測定法を使用することがで
き、人間の目の主観的測定を省くことによって試験の精
度を高めることができる。

下記の実施例は、単に本発明の概念及び利点を説明す？
〕ため−のちのであり、本発明の範囲を限定するもので
はない。このような１％！定は特許請求の範囲のめによ
ってなされる。

実施例 へ、試験組成物 例［−−−Ｆｅ　−ＨＥ　ＤＴＡ 試料中のパーオキシダーゼ又α：（別の過酸化物活性物
質及び特にヘモグｔコヒンの存在を測定しうる本発明の
組成物を製造する実験を行−７，た。組成物は、−）′
スコルベー１−り方害ｉ！￥蚤凪剤としてＮ−（２−ヒ
Ｉし！キシエチル）エチレンシアミン三西１酸の１：１
　（モル二モル、ＭＵＭと記す）鉄キレート（Ｆｅ−１
−（［Ｌｒ）′丁゛Δ）を倫む・ものである。ＨＩ巳Ｄ
　ＴΔ０．２７８ｇを・蒸留水１’００ｍ１に／８解し
て、１０ｍ旧Ｉト：ＤＴＡ／８液を作り一１１０ｍ旧Ｔ
　Ｅ　ｌ）　ＴΔ溶液にＦ（ＩＣＩａ　　・６１ｂＯＯ
，２７０ｇを溶解すること６ごよってＦｅ−ＩＩ　Ｅ　
Ｄ　ＴΔキｌ／−１−を製造した。５ｍＭのｔｊ度のア
スコルビン酸を組成物に、ｌ客演の最終容量中で５０マ
イクロモル濃度を生じるのに充分す量で添加した。組成
物の成分及びアスコルビン酸を下記の表に示した順序及
び量で混合した。最終組成物溶液は、存在する他の成分
の濃度と同様に、固体試験手段に混入するため同様の組
成物に使用するより著しく低い濃度である１００マイク
ロモル（μＭ）濃度のＦｅ−ＨＥＤＴＡを含んてぃた。

０．２モル（Ｍ）クエン酸す）・リウム緩衝剤　　　　
　　　　　　　　　　　９．５　ｍ、１１０ｍＭ　　Ｆ
ｅ−１４Ｅｒ）ＴＡ　　　　　　　　　０．１ｍ１１０
ｇ／ｄＬドデシル硫酸ノー１−リウム　　Ｏ，１ｍｌＩ
Ｍクメンヒト【コパーオキシド　　　　０．１ｍ１１０
ｍＭ　　３．３’、５．５’−テトラメチルヘンジジン
　　　　　　　　　　　　　　　０．１ｍ１５ｍＭ　　
デス：２ルピン酸　　　　　　　　０．１ｍｌこ・うし
て製造７した本発明の組成物は、溶液中に１デシリ・ノ
トル当たり０．１．３９■の最終濃度を生じ５るように
含水血液を添加したとき、青色を形成するのが観察され
、これ！、：ｌ：、試料のアスコγレヘーｌ−濃度が５
０μＭであるにもががゎらす、組成物かイｊ在するヘモ
グロビンを検出することができることを示す。

例Ｉｆ　・・・Ｆｅ　−Ｅ　ＤＴＡ Ｆ＋コ−ＩＩ　ＩＣＤ　ＴＡてはなく、エチレンジアミ
ン四１１１′酸の鉄キレ−１−（Ｆｅ　−ＥＤ　ＴＡ）
の１０ｍＭ１’Ｓ液を使用すイ〕ごとを除いて、例Ｉの
実験を繰り返した。１７Ｄ１’Ａ０．２９２　ｇを蒸留
水１００ｍ１ニｉ’８解し２、例■に記載したようにＦ
ｅＣｌ３　　・６１ｈＯを添加゛４゛る、二とによって
何重と実質的に同様にしてＦｅ−Ｌ’：　Ｄ　ｉ’Δを
製造した。こうして製造した組成物は例Ｉと同様に、ヘ
モグロビン０．１３　’９　ｍｇ／ｄｉ、及ヒ）′ス丁
！ル・＼〜ト５０μＭの存在で青色を形成した。

（ＪＩＩＩ［・　　・　　・　Ｆｅ−ＣＩっ　ゴＡＦｅ
　　ｆ目Ｅ　Ｔ）　１”八ではなく、シクロヘキシレン
ジアミン四ｉ”！１１’９のｔ失ご）−レー）−（Ｆｅ
−ＣＤＴＡ）の１０ｍＭ溶液を使用することを除いて例
Ｉの実験を繰り返した。ｃＤＴＡｏ、３４６ｇを蒸留水
１０　（１ｍｌに溶解し、例■に記載しまたようにＦｅ
Ｃｌ３　　・６１１２０を添加すること鼓′よってＦｅ
　−ＣＤ　ＴΔ温溶液製造した。こうと７で４造した組
成物ば例Ｉと同様に、ヘモグロビン０．１　：３９　ｍ
ｇ／ｄＬ及びアスコルベート５０μＭの存在で青色を形
成した。

例ＩＶ　・・・Ｆｅ　−Ｉ　ＭＤＡ Ｆｅ−Ｈ’　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａではなく、イミノニ酢酸の
鉄キレート（Ｆｅ−ＩＭＤＡ）の１０ｍＭ溶液を使用す
ることを除いて、例ｒの実験を繰り返した。ＩＭＤＡｏ
、１３３ｇを蒸留水１００ｍ１に溶解し、例Ｉに記載し
たようにＦｅＣｈ　　・６１１２０を添加することによ
ってＦｅ　−Ｉ　Ｍ　ＤΔン容ｌ夜を製造した。こうし
て製造した組成物は、例Ｉと同様に、ヘモグロビン０、
１．３９■／ｌｊ＋、及びアスコルベート５０μＭの存
在で青色を形成した。

例Ｖ　−・・Ｆｅ−ＮＴＡ Ｆｅ−ＨＥＤＴＡではなく、ニトリロ三酢酸の鉄キレー
ト（Ｆｅ−ＮＴＡ）の１０ｍＭ溶液を使用することを除
いて、例■の実験を繰り返した。ＮＴＡＯ，Ｉ　９１　
ｇｔ−蒸留水１００ｍ１に溶解し、例■に記載したよう
にＦｅＣｌ３　　・６Ｈ２０を添加することによって１
７ｅ−Ｎ　ＴＡ　７ｇ液を製造しノこ。こうして製造し
た組成物は例■と同様にヘモグロビン０．１３９ｍｇ／
ｄＬ及びアスコルベ−１・５０μＭの存在で丹色を形成
した。

例Ｖｌ　・・・ｌ’ｅ　　Ｅ　Ｄ　ｒ：＋　Ｐ、ｘｆｔ
じ−ＩＩ　Ｅｒ’ｌ　ＴＡてはなく、α−エチレンジア
ミン−酢酸二プロピオン酸の鉄キレート（Ｆｅ−利巳Ｄ
■月）ッ）　（Ｄ　１０　ｍＭ／８１１ｋを使用するこ
とを除いて、例１の実験を繰り返した。ＥＤＤＰｉｌｙ
ｏ、３２０　ｇを苅留水１００ｍ１に／８解し２、例■
に記載したよン）にＰ（ＩＣ１３・（ｉ　ｔｌ＞　Ｏを
添加することによって［？ｅ−Ｅ　ＬＩ　Ｄ　ｒゝえ溶
液を製造した。こうして製造した組成物ば例■と同様に
ヘモグロビン０．１３９　＋ｎｇ／’ｄｌ−及びアスご
ｌルへ−１−５０ｐ　Ｍのイｉ在で青色を形成した。

例７−°１°−Ｅ　１）Ｉ）　Ｐ（３ １ン１！−）ＩＥＤＴＡてばなく、α−エチレンジアミ
ンーニ１ＩｌｌＩ酸二プロピオン酸の鉄キｌ／　−１・
（Ｆｅ−Ｅ　ＤＤ　ｌ）ρ）のｌｏｍＭ？容液を使客演
ることを除いて、例１′）実験を繰り返昧・Ｆ　Ｉ）　
Ｄ　Ｉｏ（３０・、３２０　ｇを莱留水１０　Ｑｍｉｆ
こ溶解Ｕ７、例■に記載しソ、・ようにＦｅＣｌ３　　
・６　＋１２０をｌへ加すること（、ｒよ−てＦｃ−量
３１）ＤＰｃｌ容〆夜をｌｉ’ｆ己た。３ごうＬ−こ’
ＳＤｉ告し六」ｌ代物は例Ｉと同様乙こへモクロヒン０
．１３９■、／ｄ［、及び゛ｒ゛スコルヘー　１〜５０
１ｔＭの存在て青色を形成した。

（・５１ハｍ！　’　　−’Ｐｃ−ＩＩ　　ＩＭＤへＦ
ｅ　−Ｉｆ　Ｅ　Ｉ）ＴＡではなく、ヒトにＪキシエチ
ルイミノーニー自Ｙ酸の鉄キレ　ｔ　　（Ｆｅ−Ｔ（Ｉ
ＭＤＡ）の１０ｍＭ／８？ｇを使用するご、とを除いて
、例■の実験を繰り返した。ＨＩ　Ｌｉ　Ｄ　、へ０．
１７７　ｇを芸留水１００川１（ごｌ容１蛭し７、イ列
Ｉに記１曳しまたようにＦｅＣＩ・・６　ＩＩ、、　０
を添加することＱこよってＦｅ　−ＩＩＩ　Ｍ　ＤΔ溶
液を製造し７た。、こうして製造し、た組成物は例Ｉと
同様Ｃ二＼モクＩ」ヒン０．１３９　＋ｎｇ／ｄｌＪ３
ひアメ：１ル＼−１５０ｐＭの存在て青色を形成した。

例ＩＸ−Ｘ　１．、パ１ 各側において０．２　Ｍ−クコ、／酸す！リウム緩衝剤
を９．５ｍｌで關なく、９．４ｍｌ使用し、各鉄キレ−
１を０．１ｍｌで（：１゛なく、０．２ｍｌ使用する以
夕４　？Ｊ１、実質１′白（、ゴ列　■　−一■Ｃ，′
、δ己１．（（ノこ　よ　ら　（１こ実験峻イ１　っ　
て、　イ、発明によ、ご）シ・１１成物を製ｊ告し、ゾ
、゛。こノｊ、）：ｔ？・′ｌ−１ｉ１　、代物中（（
；’　ＯＯＩｔ　ＭＯ）濃（ｆ、：　（７’＞　７１　
キレｈ　Ｇ　存イ”、’＝、”　”ｋ　〕ｊ　ｙ吉己−
なる。それぞれのＪ９−合６．−１２００μＮ・１の鉄
ごＩＩ・−Ｉ・を合も・組成物４前記のよ・−Ｉ　Ｑ、
：　Ｒｉｔ：　！！１カずヘコ・と、該Ａｌｌ成物代物
＼モク（ＪヒンＯ，１３９■／ｄ１．及びアスニ＋　、
１１−．−　ｌ・５０　Ｉｆ　Ｍの存在て青色、を形Ｉ
友−１−るのツ・・観′：され、このことは試オー１中
に−〆スＩ　１１・・＼−１か右イ」１−でも、へ七夕
ＬＪヒンを検出し７うるこ一片をｑ＜−４，１・゛）・
し、例＋−−〜七の１．０　（ｌ　ｐ　Ｍ鉄キレ−ＩＮ
１１成１１＋＋）を１ｉ１４１１：にｉ人験したとき（
こ得）をとされた色斤づ））−、τと［Ｌ・段して、色
形成に４１−　’Ｊｐ’：　ｔｓ、時間０）間に差が認
めらｆｉ、　；Ｉ、ニー　、　、’５＋１そシ１の場合
の色）杉成時間（「−）ゲタ−１′ノ、１（１菖わ扛・
ビ））イー下記の表Ｃ１゛示す。ごの時１↑旧５［前記
の、ｌ、゛）Ｃ５二、本発明の１ｉｔ−Ｉｔ成代物１二
使川−４−イ・１社属キＬ−（・、例えば）１；ｉ記載
６（キ体の１種の濃度とその組成物の了ス二、ｌ　、！
ｉべ一１妨害に抵抗し、過酸化物活性物１゛′！の検出
シー）る１ｊピカとの間Ｇ５−は一般的関係叉は４・Ｉ
ＩＩＶＩ関係はないこ４二を示す。

１１３　、試験具 例Ｘ　Ｖｉ＋ 不発１１１１により固体状態の試験具を製造才る実験を
行った。この試験具もよ、成分の濃度を固体状態の試験
口、にｅＭ　（’ｆ−するように変えた以外（」１、前
記の例）：こ記載した本発明の組成物をｌＲ人し、た紙
支持体ミ／トリソクスから成る。７トリソクス・−、（
υ絹成躾１０）／Ｊ′Ｉｉ人及び試験具の形成番、１−
２下記の操作を使用実施例 Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）王手Ｉ、・ンジアミンー
西１１ｊ焚１．３９ｇ”ｇ蒸留水１００川ｌに熔解し７
、次い−Ｌ−この溶液に１ンｅｃ］ｘ　　・６１ｈ　Ｏ
１，３５ｇを添加することによっζＮ−（２−ヒ）：’
　＋：＋　：＋ジエチル）玉子１／ンンーアミン三酢Ｍ
の１：１　（モル：モル）ｉｊ＋ｌｚ　　ｔ（Ｆｅ−Ｈ
Ｅ　１）ＴＡ）　に’Ｊ　５０ｍＭ？容ｌ（ｌを語造　
Ｃ２ゾこ　。

２種の溶液（組成物となる）を製造した。が：験手段を
製造するため、約１５．２４ｃｍ（６インチ）×１　！
１．　Ｉ　６ｃＩｎ　（４インチ）の寸法を有すルワノ
トマン（Ｗｈａｔｍａｎ　）３　ＭＭｉ、５ｉ、ｌｔ′
ＩＥＭを試薬溶液で含浸し７て、紙が第二回浸漬後に試
薬組成物を充分に含むようにしまた。使用り、た操作は
、紙を第−熔液中仁一浸漬して含浸し２、含浸した紙を
乾燥し、その後、更に、乾燥した紙を第二の溶液で浸漬
して含浸させ、最終的に乾燥することである。乾燥は、
強制通風乾燥型中で、第２回含浸後Ｉｔ　ｉ　Ｑ　５°
Ｃで約８分、第２回含浸後は５０°Ｃで約５分間実Ｊｌ
ｉｉした。

第一試薬溶液は、下記の成分を混合することによって製
造した。

蒸留水　　　　　　　　　　　　　　７４．０ｍｌＩＭ
）・リス＝マＩＪネー１〜緩ｔｊ’ｒ剤ｐｌ−１６，５
１０，０ｍ１ ５．５Ｍクメンヒドロパーオキシド　　　４．０…１１
０　ｇ　／ｄｉ−、ドテシル硫酸ナトリウム　　２．０
ｍ１５０ｍＭ　ｒｅ−ＨＥＭ）ＴＡ　　（前記のように
製造）１０．０ｍｌ 第二試薬溶液は、下記の成分を混合するごとによって製
造した。

二「タノー月ノ　　　　　　　　　　　　　７９．４ｍ
１６＝メトキシキノリン、遊離型　　　　０．６ｍ１２
０％（ｗ／ｖ）ポリビニルピロリ ドン（含水）（分７ｉ４０，０００）　　　　２０．０
　ｍ１３．３“、５．５’−テトラメヂル ・・、ンシジン　　　　　　　　　　　　　　０．６ｇ
）・蛎ｙ６１ｙ、含浸した紙を、３λ４・カンパニイ　
（Ｓ↑２Ｐｉｉｔ＋Ｉ、旧ｎｎ、　５５］４４在）から
市販さイ９．でいる両面接着転写子−プ片の片側？、こ
積層Ｌ７た。次乙に積層物を約ｉ　５．２４ｔ：ｍ　（
６インづ悄Ｘ　０．５１　ｃｍ　（０，２・インチ）の
寸法に切断した。これらの−っを、未使用の接簀面で」
法的８．８９ｃｍ（３，５インチ）×１５、２４．　ｃ
、ｍのボリスチ１／ンシートに結合し、牛し７た積斤ｉ
物を−Ｊ′法の短い方に対して平行に切断し、−・力の
端部に否浸Ｕ、た紙を自し７、他端がハンＩルとして投
合γ）８．８９ｃｍの長方形ボリスチレ：・・ストリッ
プから成る試験具を形成した。

例Ｘ　Ｖｌ＋　２）　ｌ＋ν作により製造したδＩ（験
具を、種々の濃度のヘモクロビン及び５０ｎ＋ｇ／ｄＬ
のアスーｌルへ、−１・を含むＬト′試料で試験したと
、ニア）、種々のへモグロヒン濃度に対１＋Ｌする、容
易に識別しうて・古色レー、ルヲ佳じ、試オ゛］か追Ｊ
ｐ度のアスコルヘ−１夕含んでいるにもかかわらず、試
験具は存在するヘモグロビンを検出しうろことが分かっ
た。

例Ｘ■ 第一試薬溶液に、Ｐｅ−ＨＥ　ＴＪ）　Ｔ　Ａの代わり
に、５０ｍＭ　　Ｆｅ−ＥＤＴＡ熔液を１０．０ｍｌ使
用する以外は、例Ｘ■の実験を繰り返した。

例Ｘ■により製造した試験具を種々の濃度のヘモグロビ
ン及び５０ｍｇ／ｄＬのアスコルへ−１〜を含む尿試料
で、前記のように試験したところ、種にのヘモグロビン
濃度に対応する、容易に識別し・さる青色レヘルを生じ
た。

例ＸＩＸ 第一試薬溶液に、Ｆｅ　−ＨＥＤ　Ｔ　Ａの代わりに、
５０ｍＭ　　Ｈｅ−ＣＤＴＡｊ８液をｌｏ、Ｏｍｌ使用
する以外ば、例Ｘ■の実験を繰り返した。

例ＸＩＸにより製造した試験具を種々の濃度のへモグロ
ヒン及び５０ｍｇ／ｄＬのアスコルベ−１〜を含む尿試
料で、前記のように試験したところ、種々のへモグロヒ
ン濃度に対応する、容易に識別しうる青色レヘルを生じ
た。

例ＸＸ 第一試薬ｌＨ液に、Ｆｅ　−］（Ｅ　Ｉ）　ｉ゛Δの代
わりＧこ、５　［１ｍＭ　　Ｐｃ　−Ｉ　ＭＤＡ？８液
を１０．Ｏｎ＋Ｉ使用する１；Ｊ外す、１、例Ｘ　■ｔ
の実験を繰り返した。

例×Ｘにより製造した試験具を種々の濃度のへモグＬ１
ビン及び５０ｍｇ／ｄＬのアスコル・＼−１〜ヲ含む尿
試料で、前記のように試験したところ、種々の・・・モ
グ１」ヒン濃度に対応する、容易に識別しうる青色ｌ／
−・ルを生じた。

例ＸＸＩ 第−試薬溶液に、Ｆｅ　−ＨＥ　Ｄ　ＴＡの代わりＣ１
′、５０ｍＭ　　Ｆｅ−ＮＴＡ？Ｓ液を１０．０ｍｌ使
用する以夕１は、例ＸＶＩＩの実験を繰り返した。

例ＸＸＩにより製造した試験具を種々の９７度のヘモグ
ｌ」ヒン及び５０ｍｇ／ｄＬのアスコルー、−トを含む
尿試料で、前記のように試験したところ、種々のへモグ
し１ヒン濃度に対応する、容易に識別しうる青色レヘル
を生した。

Ｃ１試験具のアスコルへ−１・妨害抵抗性及び安５にイ
ル 前記の例Ｘ■に記載したようにして製造した試験具の、
長期貯蔵に似せたストレスの後にアスコルベートの存在
で尿中のへモグロヒンを検出しうる能力を評価するため
、更に実験を行った。新しく製造した直後の試験具及び
高温条件で長時間貯蔵した後の試験具について、実験を
行った。特に、環境温度（２３°Ｃ）で製造直後、並び
に乾燥回申で５０°Ｃで１０日及び２８日の「熱ストレ
ス」後に、試験具を性能について試験し、比較した。

種々のヘモグロビン濃度を含む試験原溶液を調製した。

５０ｍｇ／ｄ１．、の濃度でアスコルへ一トを含む２つ
のヘモグロビン溶液も製造した。

全血を蒸留水で、水１００ｍ１当たりへモグロヒン１５
．４■の濃度に希釈することによってヘモグロビン１５
．４　ｍｇ　／　ｄＬを含むストック溶液を製造した。

全血のへモクロヒン含有量は従来技術により予め測定し
ておいた。プールし、予めスクリーニンクしたヘモグロ
ビン及びアスコルビン酸か陰性である尿試料を、盲検と
して併置した。次に、血液溶液をプールした尿中にピペ
ットで加えて、へモグ冒ヒンを０．０１５．０．０３１
．０．０６２及び０、　］　３９　ｍｇ　／　ｄＬ含む
原溶液を作るごとによって試験溶液を製造した。ヘモグ
ロビンを０．０３１及び０、０６２　＋ｎｇ／ｄＬ含む
原溶液を別の容器に分離し、アスＪ１ルヒン酸を添加し
て、試験筒１１１に溶液のアズ：１ルベート濃度を５０
■／ｄ１．にした。

例Ｘ■と同様にして製造した試験具及びＦｅ−ＨＥ’、
　Ｉ）　Ｔ　Ａを含まない以外は、その例に記載したよ
うにして製造した対照試験具を盲検及び各ヘモグロビン
溶液溶液で試験し７た。試験具を各溶液中に瞬間的に浸
漬し、取り出し、１分後、試験具におｉＪろ色形成を観
察した。形成した色を浸漬後１分に相対強度について、
別の試験具及び標準カラーチャー１・と肉眼で比較した
。色は、無色（盲検）から０．１３９■／（１Ｌヘモク
ロヒン／８液で暗帯緑青色に及ぶ。

この試験の結果は、下記の表に示すとおり、本発明Ｑこ
よろ試験具が、アスコルへ−１・を含む２つの一＼モグ
ロヒン試料で、新しく製造した後及び５　（１’ｃの高
温に１０日曝露した後に試験すると、アスコルへ一トを
含まない尿試料を試験するため使用した試験具の応答と
同様に、ヘモグロビンの存在に対する色応答を生じるこ
とを示す。Ｆｅ−１−ＩＥ　Ｄ　Ｔ　Ａを含まない対照
試験具の同様な試験を行った結果は、利器試験具の応答
が試料中のアスコルベートによ−ってほぼ完全に損なわ
れたことを示した。しかしなから、本発明のこの好まし
い実施態様により製造した試験具は、５０ｍｇ／ｄＬの
アスコルへ−１・か存在しても、０．０３１及び０．０
６２■／ｄ（７の濃度のヘモグロビンを容易に検出でき
ることを鉦明した。従って、Ｆｅ−ＨＥＤＴＡの存在は
アスコルへ一ト妨害を目的に低減した。

（以下余白） 前記の表に示した結果は、新しく製造した本発明の試験
具と５０℃で１０日又は２８日貯蔵した試験具との間で
は反応性にほとんど差はないことを証明する。この結果
は、同じ試験具申の鉄キレート及びヒドロパーオキシド
の反応は環境温度で貯蔵した場合より熱ス）　Ｉ／スス
下一層早い速度で試験具の反応性を低減させるであろう
という、予測された結果と矛盾する。このことば、本発
明の組成物及び試験具゛の良好な安定性及び有利な「貯
蔵可能時間」を証明するものである。データから分かる
ように、有機ヒドロパーオキシドとＰｃ−ＨＥＤＴＡ、
Ｆｅ−ＨＥＤＴＡと指示薬、又はごれらの物質と他のス
トリップ成分との間で、高温で長時間貯蔵した後でも、
明らか非相ｌ容性は全くないか、又はほとんどなかった
。更に、金属キレート（Ｆｅ−ＨＥＤＴＡ）を含む試験
具及びＦｅ−ＨＥＤＴＡを用いないで同様に製造した試
験具は、アスコルへ一層を含まない試験溶液中のへモグ
ロヒンの存在に対する感度において実質的に同様であり
、「偽陽性」の結果を示さず、試薬の優れた相溶性を示
した。しかし、Ｆｅ−ＨＥ　Ｉ）　Ｔ八を用いないで製
造した試験具は、試験溶液中のアスコルヘーＩ・の存在
によって実際に完全に妨害されたが、Ｆｅ−１１１−Ｄ
　Ｔ△を含む本発明のストリップは、アスコルヘーＩ・
によ、ってほとんど妨害されず、事実、０、０３　］及
ｉＪ’　０．０６２　ｍｇ／ｄＬ程度の−、モグロヒン
濃ＩＱ−に対し７て、１分後に肉眼で識別しうる色の出
現Ｃ，−よゲＣ３応答することがてきた。

本発明の利点を更に証明Ｊるため、例Ｘ■と同様にして
製造した、即ちＦｅ−１１Ｅ　Ｄ　ＴΔを含む試験具を
用いて、前記と同様の試験を実施した。しかし７、肉眼
技術を利用するので目なく、「ラピ。

（−・スキャンナー（Ｒａｐｉｄ　５ｃａｎｎｅｒ　）
　Ｊとして知られている装置を使用して色形成を追跡し
た。この装置は、￥験室用マイクロコンビュークを介在
さ−Ｑた走査反射分光光爪側である。この装“置は、可
視領域におりる反射スペクトルを迅速に測定するため使
用される。コンピュータはスペク（−ルテータの貯蔵を
可能にし、ｄＪ算を行う。ラビット・スキ中ンナーにお
りる試薬ストリップの性能の測定は、例えば、同じスト
リップを肉眼で観察するより下記の利点を有する： １、光源及び試料を取り巻く条件は一定に保持される。

肉眼観察では、光源は波長においてばかりでなく、観察
されるストリップの位置に関しても変動しうる。

２、検出器の特徴は一定に保持される。肉眼観察では、
検出器（即ち、観察者の目）は人により変動し、同じ人
で゛も日によって変動しうる。

３、ラピッド・スキャンナーは肉眼観察よりデータを一
闇楕密に定量することがてき、これにより結果を一層客
観的に比較することができる。

ラピッド・スキャンナー装置は、インチアナ州エルタハ
−１・のマイルス・ラボラドリース社の工−ムス・ディ
ヒイション促よって作られ、構造及び性能上の特徴に関
する完全な情報はそこから得られる。ゲンシャウ（Ｍ、
　Ａ、　Ｇｅｎ５ｔ＋ａｗ　）及びロジャース（Ｒ，Ｗ
、　ＲＯｇｅｒＳ）著、八ｎａ１．　Ｃｈｅｍ、　Ｖｏ
ｌ。

５３　：　１９４．９〜１９５２頁（１９８１）参照。

ラピ、７ド・スキャンナーからの三刺激値を使用して、
ｒＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ＴｎｔｅｒｎａＬｉｏｎａｌ
ｅ　ｄｅＩ、″１ミｃｌａｉｒａｇｅ　　（フランス国
パリ）に対する補遺２Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ、
　１５、測色計、　（Ｅ、−１，３，１）１９７１　ｊ
に含まれている審決により色差値（ΔＦ己）をｎｉ算し
た。従って、この装置からのデータを以下にΔＥ又は色
差単位として記録する。

Ｆ（！　−ＨＥ　ｒ、）　Ｔ八を含む本発明による試験
ストリップ具を前記の操作を使用して、０．０３１■／
ｄｌ及び０．０６２　ｍｇ　／　ｄＬのへモグロヒン濃
度の検出能力に−）いて試験した。若干の試験具をアス
コルヘー１、を５０■／ｄＬ含む尿試れＩて試験し、若
干のものをアスコルへ−１・を含まない同様の試料で試
験し、若干のものを環境温度で新しく製造した後試験し
、若干のものは、環境温度及び５０’Ｃて１１日及び２
８目貯蔵した後試験した。

ラビット・スキャンナーによって提供される色差ｆｌ’
ｊ　位（Δｌ乙）は種々のヘモグ「１ヒン濃度に対応す
る。ｌ’ｅ−Ｉｔ　ＩＥ　Ｄ　Ｔ　Ａを含む試験具を０
．０３１ｍｇ／ｄｉ、及び０．０６２　ｍｇ／ｄＬのヘ
モグロビンを含み、アス′−１ルヘ−１−か存在するか
又は存在しない尿試料で試験し、結果を下記の表に示す
。

新しく製造した試験具 尿試且 ヘモグロビン　アスコル　　ｉくＩ上二込ままツー０．
０３］　　　　　０　　　　　２１．８９０．０３１　
　　５０　　　　　１５．７５０、０６２　　　　０　
　　　　２９．７８０．０６２　　　５０　　　　　２
２．８４環境温度で２８Ｂ貯蔵した試験具 求試−粧 ヘモグロビン　アスコル　　３　ｅ１１’−二人＋　−
１／ビン酸　　　±ニーの奄ｌし工ＡＥ）−ユニ乙仕り
一一蝕しりυ−−−−−臥剰［、、、−−−−０、０３
１０１５，５０ ０，０３１５０１３，２９ ０、０６２０２６，３１ ０、０６２５０１８，２０ ５０°Ｃで１１日貯蔵した試験具 尿配信よ ヘモグロビン　アスコル　　プくＪｌ−−−久土−ヤー
ンビン酸　　　史ニー０２１１肢μ妃旦片−（−唯／−
ｄｊ、）−−−−伽ツオチーーーーー越邊針具−−−−
−−−−０、０３１０２０，８６ ０，０３１５０１２，３６ （１，Ｇ　６２　　　　０　　　　　３０．０４０、０
　Ｇ　２　　　５０　　　　　２７．２６５０℃で２８
日貯蔵した試験具 尿、試朱Ｌ ヘモグロビン　アスコル　　−プ旦ＬＬ上Ｚ−七−ヤー
ンーヒン酸　　　丈−−４１占−η長−（−Ａｊ迄−ン
−＝（−■−１０１Ｊ−−一一−ぶ一岨β−Ｉ、−Ｌ−
−−−−−−−拭勢湛一−−ｍ＝−−（１，（１３１０
１０，３１ ０，０３１５０７，７８ ０、（１６２０２０，８６ ０、０６２５０１６，３８ 前記の実験は、前記の肉眼実験でのデータを確証する機
器データを示す。このデータは、本発明の試験具の安定
性並びに長期貯蔵及び高温での貯蔵後でさえこのような
試験具におけるアスコルベ−ｌ−妨害の著しい排除を示
す。

前記の例Ｘ■に記載したようＧこ本発明により製造した
、即ちＦｅ−ＥＤＴＡを含む試験具について更に肉眼で
の試験を行った。試験具を製造した後に、試験具を種々
′の濃度のヘモグロビンう含む尿試料及びヘモグロビン
を含まない尿試料、並びに５０ｍｇ／ｄＬのアスコルベ
ートを含む２種のへモグロヒン濃度の試料で試験した。

ある試験具は、製造直後に、あるものは乾燥回申で５０
°Ｃで２８日貯蔵した後（こ試験した。この試験の結果
を下記の表に示すか、表中の数値は前記のへマスティ、
／イ、ｒス標準カラーチャートと対比して得られた肉眼
での色値に対応する。これらの試験具の試験はすべて前
記のよ・うにして実施した。

Ｆｅ−ＥＤＴＡを含む本発明の試験 ２−士Ａノー、、：Ｌグーｙμ研安淀性−−−−−一−
−−−＝−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
−郊−料−−−−−−−−−一−−−−−−−−−−ヘ
モグロビン　　　環境温度でＶｌｅ　　　５０°Ｃで２
８（■／ｄＬ）　　（アス　しく製造した　　日貯蔵し
たｐ−少く一ンー酸−久ユリ一　）−ＬＩＪ−人１具−
ヌートナー７−γ具−０、１０１０ （１，Ｏ１５１２’　　　　　　　１１０、０３１　　
　　　　２０　　　　　　１５（１，０６２３０２２ ０、ｌ　３９　　　　　　３　、’］　　　　　　　３
０（−１スコルビン酸 −５、−（）−＋堕、／／！′！リーーーーーーー０、
０３１　　　　　　　２０　　　　　　１４Ｅ１．０６
２　　　　　　３０　　　　　　２２これらの後者の試
験の結果は、本発明のこの実施態様により製造した試験
具の安定性、偽陽性結果の欠如及び著しいアスコルへ一
ト妨害抵抗性を確認する。

本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、特に開本し
た本発明の好まし２い実施態様から多数の変更及び変化
が可能であることは明らかである。

従って、本発明は特許請求の範囲によってのみ限定され
るものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）有機ヒドロパーオキシド並びに過酸化物活性物質
   及び過酸化物の存在で検出可能の応答を生じうる指示薬
   を含む、試料中の過酸化物活性物質の存在を検出する組
   成物において、更に、一般式〔式中 （ａ）　　Ｒ１ば水素又は２〜３個の炭素原子を有する
   直鎖若しくは分枝鎖のアルキルアルコール或いはアルキ
   ルカルボン酸基を表し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｘ及びＲｙは同
   −又は異なり、２〜３個の炭素原子を有する直鎖若しく
   は分枝鎖のアルキルアルコール或いはアルキルカルボン
   酸尽を表し、Ｒ３、Ｒ２、Ｒ３１，Ｒｘ又はＲｙのうぢ
   少なくとも２個は前記のアルキルカルボン酸基であり；
   （ｂ）　　Ｒｐ及びＲｑは同一・又は異なり、１〜３個
   の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキレン基又はＧ
   〜９１１＾１の炭素原子を有する２価の１．２−脂環ｊ
   ℃ノ１（を表し； （ｃ）　　ｎは０〜１の数値を有する整数、ｍば０〜２
   の数値を有する整数であり、ｍがＯより大きい場合には
   、反復されるＲｐ及び反復されるＲｑ基は同一・又は異
   なっていてもよく、 （ｄ）　　Ｍ　４’、ｌ：　Ｆ　（う　である〕を有す
   るポリカルボキシアルキルアミン誘導体の金属キレ−１
   −を含むことをｑ口徴とする過酸化物活性物質の存在の
   検出用組成物。 （２）（ａｉｍがＯであり、 （ｂ）　　Ｒｐがエチレン基である特許請求の範囲第１
   項記載の組成物。 （３）Ｒ＋　、Ｒ２、Ｒ３、ＩマＸ及びＲｙのうぢ少な
   くとも２個がアルキルカルホン酸基−Ｃ１ｂ　ＣＯＯＩ
   Ｉである特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （４）指示薬がベンジジン、０−トリジン、３゜３“１
   ５．５“−テトラ（低級アルキル）ベンジジン、２，７
   −ジアミツフルオレン又はこれらの混合物である特許請
   求の範囲第１項記載の組成物。 （５）金属キレ−Ｉ・がＮ−（２−ヒドロキシエチル）
   エチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、シ
   クロヘキシレンジアミン四酢酸、ニトリロ三酢酸、イミ
   ′ノニ酢酸、α＝エヂレンシアミンニｌ！！ｉ１．Ｉ’
   ｌニブロピオン酸、β−エヂレンシアミン二酸酢酸二プ
   ロピオン酸ヒ［・ロキシェチルアミノ二酢酸及びこれら
   の混合物の鉄キレートがら成る群から選択されたもので
   ある特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （６）金属キレートがＮ−（２−ヒドロキシエチル）エ
   チレンシアミン三酢酸の鉄キレートである特許請求の範
   囲第１項記載の組成物。 （７）金属キレートがエチレンジアミン四酢酸の鉄キレ
   ートである特許請求の範囲第１項記載の組成物。 （ｌｉ　）（ｒ＋２５’ｓヒｌ’ロバ−オキシドがクメ
   ンにドロパーオキシド、ｆ−ブチルヒドロパーオキシ）
   ζ、ジイソプロピルヘンセンヒトＩＵパーオギシド、２
   ゜５−シメチルヘキザンー２．５−ジヒドロパーオキシ
   Ｉ、パラメンタン上１−０パーオキシド及びこれらの混
   合物から成る群からｉ巽択されたものである特許請求の
   範囲第１項記載の組成物。 （！］　）　Ｔｉ’ｔｌｌヒドロパーオキシドかクメン
   ヒｌ＝ロバーオキシｌてあり、指示薬が３．３“、５．
   ５’−テトラメヂルヘンジジンである特許請求の範囲第
   １＋：１記載の組成物。 （１０）指示薬か３．３°、５．５“−テトラノチルー
   ・・ンシシンであり、金属キレートがＮ−（２−ヒトｌ
   ：］ギシエチル）エチレンシアミン三酢酸の鉄キＬ−−
   １・であり、有機ヒトｌ−１パーオキシドがクメンヒト
   Ｌ’ｌパーオキシドである特許請求の範囲第１１１記載
   の組成物。 （１１）有機ヒドロパーオキシド、過酸化物活性物質及
   び過酸化物の存在で検出可能の応答を生しうる指示薬並
   びに一般式 〔式中 （ａ）　　Ｒ，＋　は水素又は２〜３個の炭素原子を有
   する直鎖若しくは分枝鎖のアルキルアルコール或いはア
   ルキルカルボン酸基を表し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｘ及びＲｙ
   は同−又は異なり、２〜３（ｌｌｉｌの炭素原子を有す
   る直鎖若しくは″分枝鎖のアルキルアルコ−ル或いはア
   ルキルカルボン酸基を表し、Ｒ１、Ｒ７、Ｒ３、Ｒｘ又
   はＲｙのうち少なくとも２個は前記のアルキルカルボン
   酸基であり；（１）ｌ　　ｑｐ及びＲｑは同−又は異な
   り、１〜３個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキ
   レン基又は６〜９個の炭素原子を有する２価の１，２−
   脂環式基を表し； （ｃｌ　　ｎは０〜１の数値を有する整数、ｍばＯ〜２
   の数値を有する整数であり、ｍがＯより大きい場合には
   、反復されるＲｐ及び反復されるＲｑ基は同一・又は５
   １なっていてもよく、 （ｒｌｌ　　Ｍは］Ｃｅ＋３である〕を有するポリカル
   ボキシアルキルアミン誘導体の全屈ギレーＩ・を含む過
   酸化物活性物質の存在の検出用組成物を組み込んだ支持
   体マトリックスを含む、試料中の過酸化物活性物質の存
   在を検出する試験手段。 （１２、特許請求の範囲第２項〜第１０項のいずれかの
   組成物を組み込んだ支持体７１〜リノクスを含む、試料
   中の過酸化物活性物Ｍ’３の存在を検出する試験手段。 （１３）試料中に存在しうるアス：Ｉルヘ−１・の妨杏
   作用に対して抵抗性である、試料中の過酸化物活性物質
   の存在を検出する試験手段を装造するため、 ａ）有機ヒト１１パーオギシド、及び−・般式：〔式中 （ｉ）Ｒ＋　は水素又は２〜３個の炭素原子を有する直
   鎖若しくは分枝鎖のアルキルアルコール或いはアルキル
   カルボン酸基を表し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｘ及びＲｙば同−
   又は異なり、２〜３個の炭素原子を有する直鎖若しくは
   分枝鎖のアルキルアルコール或いはアルキルカルボン酸
   基を表し、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、ＲＸ又はＲＶのうち少な
   くとも２個は前記のアルキルカルボン酸基であり；（ｉ
   ｉ）Ｒｐ及びＲ”ｑば同−又は異なり、１〜３（円の炭
   素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキレン基又は６〜９
   個の炭素原子を有する２価の１．１−脂環式基を表し； （ｉｉｉ）ｎは０〜１の数値を有する整数、ｍはＯ〜２
   の数値を有する整数であり、ｍか０より大きい場合には
   、反復されるＲｐ及び反復されるＲｑ基ば同−又は異な
   っていてもよく、 （ｉｖ）ＭはＦとである〕を有するポリカルボキシアル
   キルアミン誘導体の金属キレ−１・を含む第一試薬溶液
   を製造し、 ｂ）支持体マトリックスを第一試薬溶液で湿潤さヒ゛る
   。−とによって支持体マトリクスに第一試薬溶液を組め
   込み、 ｃ）ｉ’ｓｌ！潤したマトリックスを乾燥して金属４Ｎ
   ノート及びヒドロパーオキシドを残留させ、ｄ）過酸化
   物及び過酸化物活性物質の存在で検出可能の応答を生し
   うる指示薬及び溶剤を含む第一１試薬熔７１νを製造し
   、 ｅ）７トリノクスを第二試薬溶液で湿潤させることによ
   って、乾燥支持体マＩ・リノクスに第二試薬１ｇ　ｌＩ
   ｋを組め込み、 「）■トリノクスを乾燥して金属キレ−１・、ヒトし１
   パーオキンド及び指示薬を含む混合残渣を残留さ−Ｕる
   ］工程から成る過酸化物活性物質の存在を検出する試験
   １段の型造方法。 （１４）（・＋）ｍがＯであり、 （ｂｌ　　Ｒｐがエチレン基である特許請求の範囲第１
   ３項記載の方法。 （］　５）Ｒ＋　、Ｒ２、Ｒ３、Ｒｘ及びＦ＜　Ｖのう
   ぢ少なくと４）２　（１７ｉ１がアルキルカルボン酸基
   −Ｃ１１２Ｃ（１０１１である特許請求の範囲第１３項
   記載の方法。 （１６）指示薬がベンジジン、ｏ−トリジン、３゜３’
   、５．５’−テトラ（低級アルキル）ベンジジン、２．
   ７−ジアミツフルオレン又はこれらの混合物である特許
   請求の範囲第１３項記載の方法。 （１７）金１ｍキレートがＮ−（２−ヒドロキシエチル
   ）エチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン四酢ａ、
   シクロヘキシレンジアミン四酢酸、ニトリロ三酢酸、イ
   ミノニ酢酸、α−エチレンシアミンニ酢酢酸ジプロピオ
   ン酸β−エチレンジアミンニ酢酢酸ジプロピオン酸ヒド
   ロキシエチルアミノニ酢酸及びこれらの混合物の鉄キレ
   −）−から成る群から選択されたものである特許請求の
   範囲第１３項記載の方法。 （１８）金属キレ−１−がＮ−（２−ヒドロキシエチル
   ）エチレンジアミン三酢酸の鉄キレートである特許請求
   の範囲第１３項記載の方法。 （１９）金属キレ−１−がエチレンジアミン四酢酸の鉄
   キレートである特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （２０）　有機ヒドロパーオキシドがクメンヒドロパー
   オキシド、ｔ−ブチルヒトし１７クーオキシ１１、シイ
   ツブに１ピルベンセンヒドロパーオキシド５−ジメチル
   ヘキサン−２，５−シヒドロノ＜ーメーキシド、パラメ
   ンタンヒトｌコノマーオキシＦ及びこれらの混合物から
   成る群から選択されたものである特許請求の範囲第１３
   項記載・兄の方法。 （２１）有機ヒドロパーオキシドがクメンヒドロパーオ
   キシドであり、指示薬が３＋３’＋５＝Ｊ“−テトラメ
   チルベンジジンである特許請求の範囲第１３項記載の方
   法。 （２２Ｎ旨示薬が３．３’，５．５＝−テトラメチルベ
   ンジジであり、金属キレ−ｔ−　カＮ　−　（　２−ヒ
   ｌｊ’　ｌ：＋キシエチル）エチレンシアミン三酢酸の
   ５失キレ−１・−ごあり−、有Ｉへ１ヒＦ口ノぐーオキ
   シ・トカくクメンヒトｌ′１パーオキシドであるノ）を
   許請求の範囲第１３１１’を記載の方法。 （２３）試料を特許請求の範囲第１１項記載の試験手段
   と接触させる工程及び検出可能の応答を観察する土稈を
   含む、低利中の過酸化物活性物質の存在を検出する方法
   。