JPS59192099A - 微生物菌数の測定法 - Google Patents
微生物菌数の測定法Info
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- JPS59192099A JPS59192099A JP58064308A JP6430883A JPS59192099A JP S59192099 A JPS59192099 A JP S59192099A JP 58064308 A JP58064308 A JP 58064308A JP 6430883 A JP6430883 A JP 6430883A JP S59192099 A JPS59192099 A JP S59192099A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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- C12Q2334/20—Coumarin derivatives
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- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/20—Coumarin derivatives
- C12Q2337/22—7-Amino-4-methylcoumarin, i.e. AMC, MCA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は食品、医薬品、化粧品、水等の中に存在する微
生物の菌数の測定法に関する。
生物の菌数の測定法に関する。
食品、医薬品、化粧品等の製造、品質管理のためには、
これら検体中に含まれる少量の微生物の菌数を短時間に
測定しなければならない。 しかも、これら検体中に混
入している微生物を予め知ることかできないので、中広
い種類の微生物を短時間に検出しなければならない。短
時間に微生物の菌数を測定する方法として、非蛍光性の
４−メチル−ウンベリフェロン誘導体（以下、４ＭＵ−
誘導体と略す。）を検体中に含まれる微生物の酵、索で
水解させ、生成する蛍光性の４−メチル−ウンベリフェ
ロン（以下、４ＭＵと略す。）を蛍光光度Ｊ４で測定す
る方法が知られている（特開昭５７−１４４９９５）。
これら検体中に含まれる少量の微生物の菌数を短時間に
測定しなければならない。 しかも、これら検体中に混
入している微生物を予め知ることかできないので、中広
い種類の微生物を短時間に検出しなければならない。短
時間に微生物の菌数を測定する方法として、非蛍光性の
４−メチル−ウンベリフェロン誘導体（以下、４ＭＵ−
誘導体と略す。）を検体中に含まれる微生物の酵、索で
水解させ、生成する蛍光性の４−メチル−ウンベリフェ
ロン（以下、４ＭＵと略す。）を蛍光光度Ｊ４で測定す
る方法が知られている（特開昭５７−１４４９９５）。
この方法は、微生物の少量の菌数を短時間に測定できる
点で優れた方法である。しかし、この方法は食品等の検
体中に含まれるすべての微生物を検出できない点で問題
があった。
点で優れた方法である。しかし、この方法は食品等の検
体中に含まれるすべての微生物を検出できない点で問題
があった。
本発明者らは、このような従来の微生物の菌数測定法に
対し４ＭＵ−誘導体にかえて７−アミノ−４−メチル−
クマリン誘導体（以下、ＡＭＣ−誘導体と略ず。）を用
いれば食品等に含まれる少量のｒｌ広い種類の菌数を短
時間に極めて高い感度で測定できることを見い出した。
対し４ＭＵ−誘導体にかえて７−アミノ−４−メチル−
クマリン誘導体（以下、ＡＭＣ−誘導体と略ず。）を用
いれば食品等に含まれる少量のｒｌ広い種類の菌数を短
時間に極めて高い感度で測定できることを見い出した。
本発明は大きく分けて二つの方法（Ａ法およびＢ法）か
ら成立っている。
ら成立っている。
Ａ法は下記のプロセスより成立っている。即ち、Ａ法は
、一定の検体をとり検体を含む異った希釈度の溶液又は
けん濁液となずプロセス（■）、プロセス（１）の後に
該溶液又はけん濁液を２５℃ないし５０℃に保つプロセ
ス（２１、プロセス０）の後であってプロセス（２）の
前又は後にＡ Ｍ Ｃ−誘導体を該溶液又はけん濁液に
添加するプロセス（３）およびプロセス（２）およびプ
ロセス（３）の後に該溶液又はけん濁液中に生成された
７−アミノ−４−メチル−クマリンを測定するプロセス
（４）より成る微生物菌数の測定法である。
、一定の検体をとり検体を含む異った希釈度の溶液又は
けん濁液となずプロセス（■）、プロセス（１）の後に
該溶液又はけん濁液を２５℃ないし５０℃に保つプロセ
ス（２１、プロセス０）の後であってプロセス（２）の
前又は後にＡ Ｍ Ｃ−誘導体を該溶液又はけん濁液に
添加するプロセス（３）およびプロセス（２）およびプ
ロセス（３）の後に該溶液又はけん濁液中に生成された
７−アミノ−４−メチル−クマリンを測定するプロセス
（４）より成る微生物菌数の測定法である。
Ｂ法は、一定量の検体にＡ Ｍ Ｃ−誘導体を添加し、
２５℃ないし４０ ”Ｃに保ち、生成された７−アミノ
−４〜メチル−クマリンを測定することより成る微生物
菌数の測定法である。
２５℃ないし４０ ”Ｃに保ち、生成された７−アミノ
−４〜メチル−クマリンを測定することより成る微生物
菌数の測定法である。
食品なとの検体に含まれる微生物を測定する時にＡ法と
Ｂ法のどちらを選択するかは適宜選択すればよいが、一
般にＡ法は食品などの検体中に含よれる極めて少量の微
生物（例えば、検体１ｇ或は１■１当り１０ 個以下の
菌数）を測定する時に用いられる。これに対しＢ法は、
例えば食品などの検体１ｇ或は１！１１当り１ｏ＋ 個
以上含まれる場合に選択される。 ただし、検体１ｇ或
は１１当り１０ 個以上の菌数が含まれる場合でも菌数
を高精度に１ｌＩＩＩ定する時はＡ法で測定する方が望
ましい。
Ｂ法のどちらを選択するかは適宜選択すればよいが、一
般にＡ法は食品などの検体中に含よれる極めて少量の微
生物（例えば、検体１ｇ或は１■１当り１０ 個以下の
菌数）を測定する時に用いられる。これに対しＢ法は、
例えば食品などの検体１ｇ或は１！１１当り１ｏ＋ 個
以上含まれる場合に選択される。 ただし、検体１ｇ或
は１１当り１０ 個以上の菌数が含まれる場合でも菌数
を高精度に１ｌＩＩＩ定する時はＡ法で測定する方が望
ましい。
微生物の菌数を測定する検体は、飲食品、医薬品、化粧
品、飲料水など固体状、液状のもののいずれでもよい。
品、飲料水など固体状、液状のもののいずれでもよい。
飲食品としては、固形調味料や乾燥食品のような固形物
、野菜サラダなどの生野菜や動物性の肉が含まれている
もの、一部水分を含むペースト吠調味料などのもの、さ
しみなどの生鮮魚貝類、ハムや畜肉などの畜産製品など
が含まれる。固形物を含んでいる検体の場合には、１ノ
一二ングプレンダー、ミキサーなどにより検体中の微生
物が死滅しない程度に固形物を微細粒子にホモゲナイズ
すれば液状のものと同一に扱うことができる。
、野菜サラダなどの生野菜や動物性の肉が含まれている
もの、一部水分を含むペースト吠調味料などのもの、さ
しみなどの生鮮魚貝類、ハムや畜肉などの畜産製品など
が含まれる。固形物を含んでいる検体の場合には、１ノ
一二ングプレンダー、ミキサーなどにより検体中の微生
物が死滅しない程度に固形物を微細粒子にホモゲナイズ
すれば液状のものと同一に扱うことができる。
次に、本発明のＡ法のプロセスについて説明するー。
プロセス（１）では検体を異った希釈度の溶液又はけん
濁液きなす操作を行う。この場合、希釈液としては微生
物の生育に必要な栄養素を含んでいる液が用いられる。
濁液きなす操作を行う。この場合、希釈液としては微生
物の生育に必要な栄養素を含んでいる液が用いられる。
希釈度は一定の希釈度希釈を繰返せばどのような希釈度
でもよく、同一希釈度のものを１本或は複数本用いる。
でもよく、同一希釈度のものを１本或は複数本用いる。
通常希釈は１／１０希釈を数回行い、同一希釈度のもの
を３本から５本用意する。
を３本から５本用意する。
プロセスレ）はプロセス（１）の後に行う。該溶液又は
けん濁液を一定時間２５℃がら５ｏ″Ｃに保温する。こ
のプロセスで該溶液又はけん濁液中に１個以上の微生物
が含まれる時には一定時１１１２５℃から５０°Ｃに保
温することにより微生物が生育する。
けん濁液を一定時間２５℃がら５ｏ″Ｃに保温する。こ
のプロセスで該溶液又はけん濁液中に１個以上の微生物
が含まれる時には一定時１１１２５℃から５０°Ｃに保
温することにより微生物が生育する。
検体中の微生物中特に大腸菌群を測定する目的のために
は、プロセス（１）におい才使用する希釈液にデンキン
コール酸のような大腸菌群を選択的に生育させる物質を
通常使用されている濃度添加すればよい。 真菌類のみ
を測定する目的のためには、プロセス（１）において使
用する希釈液に細菌の生育を阻害し、真菌の生育を阻害
しないクロラムフェニコールやペニシリンなどの抗生物
質を通常使用されているａＩｆ添加すればよい。耐熱性
菌を測定する目的のためにはプロセス（蓋）に先立って
行う検体のポモゲナイズ後検体を耐熱菌を死滅させず中
温菌を死滅させる通常の条件て熱処理を行えばよい。嫌
気性菌のみを測定する目的のためには該溶液又はけん濁
液を嫌気的状態でプロセス（２）を行えばよい。好気性
菌の測定のためには振盪しながら保温を行えばよい。保
温温度は測定しようとする微生物が最もよ（生育する温
度か望ましく、中温菌に属する微生物の菌数測定には２
５℃から４０℃、高温菌の菌数測定には４０℃から５０
°Ｃを用いる。
は、プロセス（１）におい才使用する希釈液にデンキン
コール酸のような大腸菌群を選択的に生育させる物質を
通常使用されている濃度添加すればよい。 真菌類のみ
を測定する目的のためには、プロセス（１）において使
用する希釈液に細菌の生育を阻害し、真菌の生育を阻害
しないクロラムフェニコールやペニシリンなどの抗生物
質を通常使用されているａＩｆ添加すればよい。耐熱性
菌を測定する目的のためにはプロセス（蓋）に先立って
行う検体のポモゲナイズ後検体を耐熱菌を死滅させず中
温菌を死滅させる通常の条件て熱処理を行えばよい。嫌
気性菌のみを測定する目的のためには該溶液又はけん濁
液を嫌気的状態でプロセス（２）を行えばよい。好気性
菌の測定のためには振盪しながら保温を行えばよい。保
温温度は測定しようとする微生物が最もよ（生育する温
度か望ましく、中温菌に属する微生物の菌数測定には２
５℃から４０℃、高温菌の菌数測定には４０℃から５０
°Ｃを用いる。
検体中の微生物中細菌類を測定する場合には、３０分な
いし８時間保温する。生育か遅く肉眼で生育が確認され
るまでに通常５日間以上かかるようなカビおよび酵母の
ような真菌類の場合でも最長４８時間保温すればよい。
いし８時間保温する。生育か遅く肉眼で生育が確認され
るまでに通常５日間以上かかるようなカビおよび酵母の
ような真菌類の場合でも最長４８時間保温すればよい。
上述のように検体中の特定の微生物のみを測定する目的
のためには、その特定の微生物のみを生育させる条件で
プロセス（２）を行えばよい。
のためには、その特定の微生物のみを生育させる条件で
プロセス（２）を行えばよい。
プロセス（３）では、プロセス（１）の後直ちに、或は
プロセス（２）の終了後に該溶液或はけん濁液にＡＭＣ
−誘導体を１種或は２種以上添加する。
プロセス（２）の終了後に該溶液或はけん濁液にＡＭＣ
−誘導体を１種或は２種以上添加する。
ＡＭＣ−誘導体は、一般式［１］で示されるもので【マ
としては分子中の水素の−又は二辺上か置換され又は置
換されていないアルキル基、アリル基、アラルキル基お
よび複索環基てあり、該溶液又はけん濁液中に含まれる
微生物の加水分解酵素により水解されることを防げない
ものであればよい。
としては分子中の水素の−又は二辺上か置換され又は置
換されていないアルキル基、アリル基、アラルキル基お
よび複索環基てあり、該溶液又はけん濁液中に含まれる
微生物の加水分解酵素により水解されることを防げない
ものであればよい。
ＩＩ
更にＡＭＣ−誘導体に加えて４ＭＵ−誘導体を１種或は
２種以上添加することもてきる。４ＭＵ−誘導体は一般
式［２］で示されるものでＸとしては糖類、アルコール
類、無ｖＡ酸類などであり、該溶液或はけん濁液中に含
まれる微生物の加水分解酵素により水解されることを防
げないものてあればよい。
２種以上添加することもてきる。４ＭＵ−誘導体は一般
式［２］で示されるものでＸとしては糖類、アルコール
類、無ｖＡ酸類などであり、該溶液或はけん濁液中に含
まれる微生物の加水分解酵素により水解されることを防
げないものてあればよい。
添加量は該誘導体か該溶液或はけん濁液に溶解する最大
量まで可能であり本発明においては通常１〇−牛Ｍ添加
する。
量まで可能であり本発明においては通常１〇−牛Ｍ添加
する。
プロセス（１）の後にプロセス（３）を行い、その後プ
ロセス（２）を行う場合には、直ちにプロセス（４）を
行う。これに対し、プロセス（Ｉ）、プロセス（２）の
後にプロセス（３）を行う場合には、プロセス（３）後
、更に通常３０分から１時間２５°Ｃないし４０°Ｃで
保温を行う。
ロセス（２）を行う場合には、直ちにプロセス（４）を
行う。これに対し、プロセス（Ｉ）、プロセス（２）の
後にプロセス（３）を行う場合には、プロセス（３）後
、更に通常３０分から１時間２５°Ｃないし４０°Ｃで
保温を行う。
この場合プロセス（２）の後、プロセス（３）に先立っ
て該溶液或はけん濁液を遠心分離し、沈澱部を用いてプ
ロセス（３）を行うこともできる。このような遠心分離
プロセスを加えれば該溶ｌ夜或はけん濁液に含まれる微
生物が沈澱部に集まり微生物濃度が高くなる。更に、遠
心分離のプロセスの後に微生物菌体の破壊法として知ら
れているトルエンなどの何機溶媒の添加、超音波処理或
はフレンチプレスなとの物理的破壊、リゾチームなとの
酵素的破壊なとを行うことも出来る。
て該溶液或はけん濁液を遠心分離し、沈澱部を用いてプ
ロセス（３）を行うこともできる。このような遠心分離
プロセスを加えれば該溶ｌ夜或はけん濁液に含まれる微
生物が沈澱部に集まり微生物濃度が高くなる。更に、遠
心分離のプロセスの後に微生物菌体の破壊法として知ら
れているトルエンなどの何機溶媒の添加、超音波処理或
はフレンチプレスなとの物理的破壊、リゾチームなとの
酵素的破壊なとを行うことも出来る。
プロセス（４）は、プロセス（１）からに３）を行った
後に行うもので該溶液或はけん濁液中に生成されたＡＭ
Ｃ或は４ＭＵを蛍光光度計で検出するプロセスである。
後に行うもので該溶液或はけん濁液中に生成されたＡＭ
Ｃ或は４ＭＵを蛍光光度計で検出するプロセスである。
このプロセスでは該溶液或はけん濁液中にＡＭＣ或は４
ＭＵが生成されたか否かを定性的に検出するのみでよい
。
ＭＵが生成されたか否かを定性的に検出するのみでよい
。
検体中に含まれる微生物の菌数はプロセス（４）によっ
て蛍光が検出された最大希釈度の該溶液又はけん濁液の
希釈度から求めることが出来る。−例について菌数の測
定の仕方を説明する。 検体を１／１０に連続的数段階
希釈した各５本の溶液又はけん濁液について方法（Ａ）
に従って蛍光を測定し、各希釈段階の溶液又はけん濁液
５本中何本蛍光が検出されたかを求める。これに基つい
て最確数表（昭和４６年１２月２８日環境庁告示第５９
号）番こより検体中の微生物の菌数を測定する。
て蛍光が検出された最大希釈度の該溶液又はけん濁液の
希釈度から求めることが出来る。−例について菌数の測
定の仕方を説明する。 検体を１／１０に連続的数段階
希釈した各５本の溶液又はけん濁液について方法（Ａ）
に従って蛍光を測定し、各希釈段階の溶液又はけん濁液
５本中何本蛍光が検出されたかを求める。これに基つい
て最確数表（昭和４６年１２月２８日環境庁告示第５９
号）番こより検体中の微生物の菌数を測定する。
この最確法による菌数測定は寒天平板抹塗法に比べて小
数の菌数を正確に測定する方法とされている。
数の菌数を正確に測定する方法とされている。
次に本発明における（Ｉ３）法について説明する。（ｎ
）法は（Ａ）法のプロセス（２）を省略し、プロセス（
４）の蛍光強度を定量することから成る。
）法は（Ａ）法のプロセス（２）を省略し、プロセス（
４）の蛍光強度を定量することから成る。
この方法は、検体に含まれる微生物の菌数か蛍光強度と
（（１閃することに基づいて検体中の微生物の菌数を測
定するものである。Ｂ法においてはＡ法のプロセス（１
）に相当するプロセスの希釈液は微生物の生育に必要な
栄養素を含まなくてよい。
（（１閃することに基づいて検体中の微生物の菌数を測
定するものである。Ｂ法においてはＡ法のプロセス（１
）に相当するプロセスの希釈液は微生物の生育に必要な
栄養素を含まなくてよい。
この検体の希釈のプロセス後に微生物菌体の破壊法とし
て知られているトルエンなどの有機溶媒の添加、超音波
処理或はフレンチプレスなどの物理的破壊、リゾチーム
などの酵素的破壊などを行ってもよい。次に、Ａ法のプ
ロセス（３３）に相当するＹロセスを行う。この時の保
温条件は２５°Ｃないし４０℃で、３０分ないし２間抜
程度である。この保温のプロセスの後に該溶液或はけん
濁液中に生成されるＡＭＣ或は４ＭＵの蛍光量を定量す
る。
て知られているトルエンなどの有機溶媒の添加、超音波
処理或はフレンチプレスなどの物理的破壊、リゾチーム
などの酵素的破壊などを行ってもよい。次に、Ａ法のプ
ロセス（３３）に相当するＹロセスを行う。この時の保
温条件は２５°Ｃないし４０℃で、３０分ないし２間抜
程度である。この保温のプロセスの後に該溶液或はけん
濁液中に生成されるＡＭＣ或は４ＭＵの蛍光量を定量す
る。
予め求められている微生物菌数と蛍光量の相関に基つい
て該溶液或はけん濁液の蛍光量がら検体中の微生物の菌
数を求める。（１３）法は検体１ｇ或は１１中に微生物
か１０４個以下含まれる場合には適用できない。また、
（Ｂ）法は（Ａ）法に比へて菌数測定の精度は悪いか、
Ａ法のブ【−！セス（２）を省略しているために極めて
短時間に検体中の微生物の菌数をｉ１１定できるという
利点をもっている。
て該溶液或はけん濁液の蛍光量がら検体中の微生物の菌
数を求める。（１３）法は検体１ｇ或は１１中に微生物
か１０４個以下含まれる場合には適用できない。また、
（Ｂ）法は（Ａ）法に比へて菌数測定の精度は悪いか、
Ａ法のブ【−！セス（２）を省略しているために極めて
短時間に検体中の微生物の菌数をｉ１１定できるという
利点をもっている。
上述のように本発明の方法は検体中に含まれる少量の中
広い微生物を短時間に正確に菌数測定するものである。
広い微生物を短時間に正確に菌数測定するものである。
以下実施例にて説明する。
実施例１
表１に示した菌株をペプトン ０．５％、酵母０．１％
を含をするｐＨ６，５の液体培地で４８時間＆盪培養し
、同組成の液体培地９１を含む試験管に各々の培養菌体
を試験管当り１０”〜１０３個接種するように希釈して
接種した。その後、細菌の場合は３５°Ｃて２４時間、
真菌の場合は３０℃、７２時間培養を行った。 培養終
了後、該培養液を０．９％食塩水で１００倍に希釈した
。予め塊化マグネシウムを１０′Ｍ含むｐＨ７，５の１
／２０Ｍのバビトールバソハーに各々１０＋ＭのＬ−ア
ルギニル−７−アミノ−４−メヂルークマリン（以下、
Ａ Ｍ Ｃ−Ａｒｇｌ略ず。）、 Ｌ−ロイシル−７〜
アミノ−４−メヂルークマリン（以下、ＡＭＣ−Ｌｅｕ
と略す。）、 ４ＭＵ−グルコースおよび４ＭＵ−リン
酸（以下、４ＭＵ−Ｐと略す。）か含まれている各々の
溶液２１に該希釈液を１１加えて、４０°Ｃて１時間保
温した。保温終了後にｐＨ１１，０の１／ＩＯＭのグリ
シンバッハ−を添加した後に蛍光光度計（島津製作所製
、 ＲＩ？−５２０型、（３０μｍマイクロフローセル
使用））を用い、励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４５０
ｎｍの条件下で蛍光強度を測定した。この結果を表１に
示した。
を含をするｐＨ６，５の液体培地で４８時間＆盪培養し
、同組成の液体培地９１を含む試験管に各々の培養菌体
を試験管当り１０”〜１０３個接種するように希釈して
接種した。その後、細菌の場合は３５°Ｃて２４時間、
真菌の場合は３０℃、７２時間培養を行った。 培養終
了後、該培養液を０．９％食塩水で１００倍に希釈した
。予め塊化マグネシウムを１０′Ｍ含むｐＨ７，５の１
／２０Ｍのバビトールバソハーに各々１０＋ＭのＬ−ア
ルギニル−７−アミノ−４−メヂルークマリン（以下、
Ａ Ｍ Ｃ−Ａｒｇｌ略ず。）、 Ｌ−ロイシル−７〜
アミノ−４−メヂルークマリン（以下、ＡＭＣ−Ｌｅｕ
と略す。）、 ４ＭＵ−グルコースおよび４ＭＵ−リン
酸（以下、４ＭＵ−Ｐと略す。）か含まれている各々の
溶液２１に該希釈液を１１加えて、４０°Ｃて１時間保
温した。保温終了後にｐＨ１１，０の１／ＩＯＭのグリ
シンバッハ−を添加した後に蛍光光度計（島津製作所製
、 ＲＩ？−５２０型、（３０μｍマイクロフローセル
使用））を用い、励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４５０
ｎｍの条件下で蛍光強度を測定した。この結果を表１に
示した。
表 １
表中の表示は以下の基阜に従って表示した。
−：蛍光強度 １０以下
十二蛍光強度 １０〜１００
＋Ｆ−：蛍光強度 １００〜１０００
冊゛蛍光強度 １０００以上
表１に示したようにＡＭＣ−誘導体を用いた時に４ＭＵ
−誘導体を用いた時に比べてより多くの種類の微生物か
、蛍光を生成し、かつ生成量も高いことかわかる。
−誘導体を用いた時に比べてより多くの種類の微生物か
、蛍光を生成し、かつ生成量も高いことかわかる。
実施例２
多摩川の河水３点、生活廃水３点、食品製造］二程で排
出される廃水３点および都市下水３点を各１０１採取し
た。これらの検水を３，５００ｒｐｍで１０分間遠心分
離（国産遠心成製 １（−１０７型）を行い沈澱部にＡ
ＭＣ−Ｌｅｕを１０−４Ｍおよび塩化マグネシウムを１
０−３Ｍ含むｐｌ（７，０１１１５０Ｍのバルビトール
バソハ−２、５ｍｌヲ加え、微量超音波細胞破砕機（和
研薬製 ンニケーター Ｗ−１０型）、で５０Ｗ、３分
間処理した。
出される廃水３点および都市下水３点を各１０１採取し
た。これらの検水を３，５００ｒｐｍで１０分間遠心分
離（国産遠心成製 １（−１０７型）を行い沈澱部にＡ
ＭＣ−Ｌｅｕを１０−４Ｍおよび塩化マグネシウムを１
０−３Ｍ含むｐｌ（７，０１１１５０Ｍのバルビトール
バソハ−２、５ｍｌヲ加え、微量超音波細胞破砕機（和
研薬製 ンニケーター Ｗ−１０型）、で５０Ｗ、３分
間処理した。
処理後これらの反応液を３７°Ｃで６０分間保持した。
その後各反応液に１／ＩＯＭ、Ｉ）Ｈｌｔ、０のグリシ
ンバッファーを１１添加し、３，０００ｒｐＨｌで５分
間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例ｆ１と同
様の方法で測定した。
ンバッファーを１１添加し、３，０００ｒｐＨｌで５分
間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例ｆ１と同
様の方法で測定した。
一方、各検水中に含まれる一般菌数を標準寒天培地を用
い、３５°Ｃで２日間培養を行い生菌数を測定した。こ
れらの蛍光強度と生菌数の関係を図１に示した。
い、３５°Ｃで２日間培養を行い生菌数を測定した。こ
れらの蛍光強度と生菌数の関係を図１に示した。
図１に示したように、秤量した検水中に生菌か１０千
側辺」二存在した場合には蛍光強度と生菌数の１１１１
に相関か認められた。検水中に１０’ 側辺上の生菌
が存在すれば図に示した関係を用いて培養することなく
簡便に短時間に生菌数を求めることか出来る。
側辺」二存在した場合には蛍光強度と生菌数の１１１１
に相関か認められた。検水中に１０’ 側辺上の生菌
が存在すれば図に示した関係を用いて培養することなく
簡便に短時間に生菌数を求めることか出来る。
実施例３
多摩川の河水を採取した。予め表２に記した組成の１−
１１１）培地を９ｍｌずつ分注し、１２０°Ｃて１−５
分間オートクレーブを行った普通サイズ試験管５本にこ
の検水の１ｍｌ、０．１１．０．０１ｍ１および０．０
０１ｍ１量を接種し、３７°Ｃて８時間振盪培答を行っ
た。
１１１）培地を９ｍｌずつ分注し、１２０°Ｃて１−５
分間オートクレーブを行った普通サイズ試験管５本にこ
の検水の１ｍｌ、０．１１．０．０１ｍ１および０．０
０１ｍ１量を接種し、３７°Ｃて８時間振盪培答を行っ
た。
表２ＤＩＲ培地組成
ハートインフュージョン（栄＆Ｊｆ） ２５
ｇプリキシコール酸ナトリウム ０．５ｇ
シクロヘキシミド １００ａ
＋ｇ水
１０００ｍｌ１００Ｏ７，０ 培養終了後、この培養液を３．５０Ｏｒｐｍで１０分間
遠心分離（国産遠心板製Ｈｉ０７型）し、沈澱部にＡ
Ｍ Ｃ−Ａｒｇを１０−４Ｍおよび塩化３ マグネシウムを１０ Ｍ含むｐｉ−１７，０，１１５
０Ｍのハルビトールバッハ−２，５Ｉｌｌを加え、微量
超音波細胞破砕機（和研薬製 ソニケークー Ｗ−１０
型）で５０Ｗ、３分間処理した。処理後、これらの反応
液を３７°Ｃて６０分間保［７した。その後、各反応液
に１／ｌ０Ｍ１ ｐＩｌｌ １．０のグリシンバッフ１
−を１１添加し、３．００Ｏｒｐｍで５分間遠心分離を
行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定
し、ＡＭＣ−＾ｒｇを分解し、ＡＭＣを生成する活性を
存する反応液の本数を求めた。
ｇプリキシコール酸ナトリウム ０．５ｇ
シクロヘキシミド １００ａ
＋ｇ水
１０００ｍｌ１００Ｏ７，０ 培養終了後、この培養液を３．５０Ｏｒｐｍで１０分間
遠心分離（国産遠心板製Ｈｉ０７型）し、沈澱部にＡ
Ｍ Ｃ−Ａｒｇを１０−４Ｍおよび塩化３ マグネシウムを１０ Ｍ含むｐｉ−１７，０，１１５
０Ｍのハルビトールバッハ−２，５Ｉｌｌを加え、微量
超音波細胞破砕機（和研薬製 ソニケークー Ｗ−１０
型）で５０Ｗ、３分間処理した。処理後、これらの反応
液を３７°Ｃて６０分間保［７した。その後、各反応液
に１／ｌ０Ｍ１ ｐＩｌｌ １．０のグリシンバッフ１
−を１１添加し、３．００Ｏｒｐｍで５分間遠心分離を
行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定
し、ＡＭＣ−＾ｒｇを分解し、ＡＭＣを生成する活性を
存する反応液の本数を求めた。
同じ検体について大腸菌群の測定に通常用いられている
ｌ１ＧＬＢ法により３５°Ｃで４８時間培養し−、この
時のガス発生試験管の本数を求めた。これらの結果を第
３表に示した。
ｌ１ＧＬＢ法により３５°Ｃで４８時間培養し−、この
時のガス発生試験管の本数を求めた。これらの結果を第
３表に示した。
第３表 本性とｌ３ＧＬＢ法の比較
第３表の結果に基づいて検水中の生菌数を最確法で求め
ると両法とも７９個／１であった。
ると両法とも７９個／１であった。
ＢＧＬＢ法は、大腸菌群数を測定する方法であり、本実
施例の方法で測定した微生物数とＢＧＬＢ法で測定した
微生物数の結果が一致したことから本性によって迅速に
大腸菌群を測定出来ることが判明した。
施例の方法で測定した微生物数とＢＧＬＢ法で測定した
微生物数の結果が一致したことから本性によって迅速に
大腸菌群を測定出来ることが判明した。
実施例４
ハート・インフュージョンブロスおよび麦芽エキス−酵
母エキスブロス（麦芽ニーｔ−ス０，３％、酵母エキス
０．３％、マルトース２％、グルコース０．１％、ｆ）
Ｈ６，０）を普通試験管に各々５１分注し１２０°Ｃ１
１０分間殺菌した。ハート・インフュージョンブロスに
ニジエリシャ・コリＡＴＣＣ２５９２２、シュードモナ
ス・エルギ７−ザ ＡＴＣＣ２７８５３、スタフィロコ
ッカス・アウレウ ＡＴＣＣ２５９２３、バチルス−ズ
ｊｆｋ７． ＡＴＣＣ１３１５’ａ−夫々１０’〜１
０２個／ｍｌになるよう接種し３５℃で１２時［１１１
振盪培養を行った。同様に麦芽エキス−酵母エキスｊａ
スにキャ／ディダ・アルビカンス ＡＴＣＣ１０２３１
、サツカロミセス中セルビシェＣ１３Ｓ １１７１、ア
スペルギルス・ニガー ＡＴＣＣ６２７５およびペニシ
リウム・シトリナムＡＴＣＣ９８４９を１０〜１０３個
／１になるよう接種し、３０°Ｃて３６時間振盪培養を
行った。
母エキスブロス（麦芽ニーｔ−ス０，３％、酵母エキス
０．３％、マルトース２％、グルコース０．１％、ｆ）
Ｈ６，０）を普通試験管に各々５１分注し１２０°Ｃ１
１０分間殺菌した。ハート・インフュージョンブロスに
ニジエリシャ・コリＡＴＣＣ２５９２２、シュードモナ
ス・エルギ７−ザ ＡＴＣＣ２７８５３、スタフィロコ
ッカス・アウレウ ＡＴＣＣ２５９２３、バチルス−ズ
ｊｆｋ７． ＡＴＣＣ１３１５’ａ−夫々１０’〜１
０２個／ｍｌになるよう接種し３５℃で１２時［１１１
振盪培養を行った。同様に麦芽エキス−酵母エキスｊａ
スにキャ／ディダ・アルビカンス ＡＴＣＣ１０２３１
、サツカロミセス中セルビシェＣ１３Ｓ １１７１、ア
スペルギルス・ニガー ＡＴＣＣ６２７５およびペニシ
リウム・シトリナムＡＴＣＣ９８４９を１０〜１０３個
／１になるよう接種し、３０°Ｃて３６時間振盪培養を
行った。
培養終了後、これらの培養液をｐＨ７，０，１１５０Ｍ
のバルビトールバッハーで１０００倍に希釈した。表４
にしたＡ液、Ｂ液およびＣ液２１に上記希釈液をそれぞ
れ１１ずつ加え、３７°Ｃで１時間保持した。
のバルビトールバッハーで１０００倍に希釈した。表４
にしたＡ液、Ｂ液およびＣ液２１に上記希釈液をそれぞ
れ１１ずつ加え、３７°Ｃで１時間保持した。
※ｔ−ブチルオキ７カーボニル−フエニルアラニルーセ
リリルーアルギニルー４−メヂルークマリル−７−アミ
ド その後、各反応液に１／ＩＯＭ、ｆ）Ｈｌ １．０のグ
リシンバッファーを１１添加し、３，０００ｒｐｍで５
分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同
様の方法で測定した。各使用菌株の３種類の基質液に対
する蛍光強度の測定結果を表５に示した。
リリルーアルギニルー４−メヂルークマリル−７−アミ
ド その後、各反応液に１／ＩＯＭ、ｆ）Ｈｌ １．０のグ
リシンバッファーを１１添加し、３，０００ｒｐｍで５
分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同
様の方法で測定した。各使用菌株の３種類の基質液に対
する蛍光強度の測定結果を表５に示した。
表５ 各基質に対する蛍光強度
使用した菌株はすべての菌株においてＡ液或はＢ液単独
の場合に比べてＡ液とＢ液を混合した場合に蛍光強度が
高まっていた。
の場合に比べてＡ液とＢ液を混合した場合に蛍光強度が
高まっていた。
以」二の事実は、Ａ液或はＢ液を単独で用いた時に一生
成蛍光量が低いために菌数測定の検出感度が低（なるよ
うな菌株の場合には、Ａ液とＢ液を混合したＣ液を使用
することにより生成蛍光量が増加し、菌数測定の検出感
度が高まることを示している。
成蛍光量が低いために菌数測定の検出感度が低（なるよ
うな菌株の場合には、Ａ液とＢ液を混合したＣ液を使用
することにより生成蛍光量が増加し、菌数測定の検出感
度が高まることを示している。
実施例５
市販のボテトザラダ、野菜サラダお、よびマカロニサラ
ダを無菌的に各１０ｇ秤量した。これらの検体にカルボ
キシメチルセルロース０．２％およびポリソルベート８
０を０．０５％含仔するｐＨ６，０，０，１Ｍのリン酸
バッハ−９０１を加えワーリ／グブレンダ−（日本精機
製）を用いて２０．０００ｒｆ）ｍで１分間ホモジナイ
ズを行った。予め表６に記した組成のＹＥ培地を９１ず
つ分注し、１２０℃で１５分間オートクレーブを行った
普通サイズ試験管５本に上記ホモジナイズ処理した検体
の１１．０，１１．０．０１ｍ１および０．００１ｍ１
量を接種し、３５°Ｃて１２時間振盪表６ ＹＥ培地
組成 酵母エキス （Ｄｉｆｃｏ製） ０．３
％ペプトｙ （Ｄ＋ｆｃｏ製）０．５ ％リ
ン酸１カリウム ０．０５％グル
コース １．０ ％ｐＨ
７，０ 培養終了後、この培養液を３，５００？ｐｍて１０分間
遠心分離し、沈澱部にＡＭＣ−Ｌｅｕおよびピログルタ
ミーくシー４−メチルークマリルーフーアミド（以下、
ＡＭＣ−Ｐｙｒと記す。）を各々１０ Ｍ含むｆ）Ｈ
７，０、１１５０Ｍのバルビトールバッハ−２，５１を
加え、３７°Ｃて６０分間保持した。その後、各反応液
に１／ｌ０Ｍ１ｐ１１１１．ｏのグリシンバッファーを
１１添加し、３，０００ｒＰｍで５分間遠心分離を行い
、ｌ ｌｉｊ液の蛍光強度を実施例１と同様の方法て測
定し、Ａ Ｍ Ｃ−ＬｅｕおよびＡ Ｍ Ｃ−Ｐｙｒ（
７）中ノーツ以上の基質を分解する活性を有す反応液の
本数を求めた。
ダを無菌的に各１０ｇ秤量した。これらの検体にカルボ
キシメチルセルロース０．２％およびポリソルベート８
０を０．０５％含仔するｐＨ６，０，０，１Ｍのリン酸
バッハ−９０１を加えワーリ／グブレンダ−（日本精機
製）を用いて２０．０００ｒｆ）ｍで１分間ホモジナイ
ズを行った。予め表６に記した組成のＹＥ培地を９１ず
つ分注し、１２０℃で１５分間オートクレーブを行った
普通サイズ試験管５本に上記ホモジナイズ処理した検体
の１１．０，１１．０．０１ｍ１および０．００１ｍ１
量を接種し、３５°Ｃて１２時間振盪表６ ＹＥ培地
組成 酵母エキス （Ｄｉｆｃｏ製） ０．３
％ペプトｙ （Ｄ＋ｆｃｏ製）０．５ ％リ
ン酸１カリウム ０．０５％グル
コース １．０ ％ｐＨ
７，０ 培養終了後、この培養液を３，５００？ｐｍて１０分間
遠心分離し、沈澱部にＡＭＣ−Ｌｅｕおよびピログルタ
ミーくシー４−メチルークマリルーフーアミド（以下、
ＡＭＣ−Ｐｙｒと記す。）を各々１０ Ｍ含むｆ）Ｈ
７，０、１１５０Ｍのバルビトールバッハ−２，５１を
加え、３７°Ｃて６０分間保持した。その後、各反応液
に１／ｌ０Ｍ１ｐ１１１１．ｏのグリシンバッファーを
１１添加し、３，０００ｒＰｍで５分間遠心分離を行い
、ｌ ｌｉｊ液の蛍光強度を実施例１と同様の方法て測
定し、Ａ Ｍ Ｃ−ＬｅｕおよびＡ Ｍ Ｃ−Ｐｙｒ（
７）中ノーツ以上の基質を分解する活性を有す反応液の
本数を求めた。
これらの結果を第７表に示した。
表７ 検体中の生菌数（個／１０ｇ）
本 法 標準液体培地性野菜サラダ
７．９Ｘ１０：Ｌ７．０Ｘ１０表７に示したように生菌
数の測定結果はよく一致していた。
７．９Ｘ１０：Ｌ７．０Ｘ１０表７に示したように生菌
数の測定結果はよく一致していた。
実施例４
清酒製造工程中の仕込みの初期の培養液１０１を５点採
取した。これらの検体を３．５０Ｏｒｐｍで１０分間遠
心分離（国産遠心板製 １−１−１０７型）を行い、沈
澱部にＡＭＣ−Ｌｅｕを１０−４Ｍおよび塩化マグネシ
ウムを１０− Ｍ含む ｐ Ｈ７，０、１１５０Ｍ の
バルビトールバノハ−２，５１を加え、微量超音波細胞
破砕ａ（和研薬製 ソニケーターｗ−ｉｏ型）でｊＯＷ
、３分間処理した。処理後これらの反応液を３７℃で６
０分間保持した。 その後各反応液に１／ＩＯＭ。
取した。これらの検体を３．５０Ｏｒｐｍで１０分間遠
心分離（国産遠心板製 １−１−１０７型）を行い、沈
澱部にＡＭＣ−Ｌｅｕを１０−４Ｍおよび塩化マグネシ
ウムを１０− Ｍ含む ｐ Ｈ７，０、１１５０Ｍ の
バルビトールバノハ−２，５１を加え、微量超音波細胞
破砕ａ（和研薬製 ソニケーターｗ−ｉｏ型）でｊＯＷ
、３分間処理した。処理後これらの反応液を３７℃で６
０分間保持した。 その後各反応液に１／ＩＯＭ。
ｐＨ１１，，０のグリシンバッファーを１１添加し、３
．ＯＯ’Ｏｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上ｌｎ液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定した。
．ＯＯ’Ｏｒｐｍで５分間遠心分離を行い、上ｌｎ液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定した。
一方、各検体中に含まれる酵母をポテトデキストローズ
寒天培地を用い、２５°Ｃで５日間培養を行い生菌数を
測定した。これらの蛍光強度と生菌数の関係を図２に示
した。
寒天培地を用い、２５°Ｃで５日間培養を行い生菌数を
測定した。これらの蛍光強度と生菌数の関係を図２に示
した。
図２に示したように蛍光強度と生酵母数の間には相関が
認められた。
認められた。
実施例５
市販のモヂ取り粉、野菜サラダおよび冷凍ギョウザを無
菌的に各１０ｇ秤量した。これらの検体にカルボキシメ
チルセルロース０．２％、ポリソルベート８０を０．０
５％含存するｐＨ６，０、０．１ｔ１７）ＩＪン酸バッ
ハ−９０１１１を加えワーリングブレンダー （日本精
機製）を用いて２０．００Ｏｒｐｍで１分間ホモジナイ
ズを行った。予め表８に記した組成のＹＭＣ培地を９１
ずつ分圧し、１２０°Ｃて１５分間オートクレーブを行
った普通サイズ試験台３本に上記ホモジナイズ処理した
検体の１１．０．１１．０．０１ ｍｌおよび０．００
２ｍ１量を接種し、３０°Ｃで３６時間振盪培養を行っ
た。
菌的に各１０ｇ秤量した。これらの検体にカルボキシメ
チルセルロース０．２％、ポリソルベート８０を０．０
５％含存するｐＨ６，０、０．１ｔ１７）ＩＪン酸バッ
ハ−９０１１１を加えワーリングブレンダー （日本精
機製）を用いて２０．００Ｏｒｐｍで１分間ホモジナイ
ズを行った。予め表８に記した組成のＹＭＣ培地を９１
ずつ分圧し、１２０°Ｃて１５分間オートクレーブを行
った普通サイズ試験台３本に上記ホモジナイズ処理した
検体の１１．０．１１．０．０１ ｍｌおよび０．００
２ｍ１量を接種し、３０°Ｃで３６時間振盪培養を行っ
た。
表８ ＭＭＣ培地組成
酵母エキス （Ｄｉｆｃｏ製） ０．２
％ペプトン （Ｄ ｉ ｒ ｃｏ製）０．５
％マルツ：ｒ−キス（Ｄｉｒｃｏ製） ０
．３ ％マルトース ２
．０ ％グルコース
０．１ ％ツイーン ８０ ０
．０’０５％クロリンフェニコール ０
．０２ ％１）Ｈ６，０ 培養終了後、この培養液を３ 、 ’５．０ Ｏｒｐｍ
で１０分間遠心分離し、沈澱部に４ＭＵ−Ｇｕｌ、 ４
ＭＵ−Ｐ １Ｌｅｕ −Ｍ ＣＡおよび＾ｒｇ−ＭＣＡ
を各々１０Ｍ含み塩化マグネシウムを１０ Ｍ含むｐＩ
Ｉ５．０．１１５０Ｍのバルビトールバッハ−２，５１
を加え、微量超音波細胞破砕機（和研薬製 ソニケータ
ー Ｗ−１０型）で５０Ｗ、３分間処理した。処理後、
これらの反応液を３７°Ｃで６０分間保持した。その後
、各反応液に１／ｌ０Ｍ１１）Ｈｌｌ、０のグリシンバ
ッファーを１１添加し、３．０００ｒｆ）ｍて５分間遠
心分離を行い、十清液の蛍光強度を実施例１と同様の方
法で測定し、４ＭＵ−Ｐ、４ＭＵ−Ｇｕｌ、Ｉ、ｅｕ−
ＡＭＣおよび八ｒｇ−ＡＭＣの中の一つ以上の基質を分
解する活性を何する反応液の本数を求めた。この結果に
基ついて最確法により検体中の真菌数を求めた。
％ペプトン （Ｄ ｉ ｒ ｃｏ製）０．５
％マルツ：ｒ−キス（Ｄｉｒｃｏ製） ０
．３ ％マルトース ２
．０ ％グルコース
０．１ ％ツイーン ８０ ０
．０’０５％クロリンフェニコール ０
．０２ ％１）Ｈ６，０ 培養終了後、この培養液を３ 、 ’５．０ Ｏｒｐｍ
で１０分間遠心分離し、沈澱部に４ＭＵ−Ｇｕｌ、 ４
ＭＵ−Ｐ １Ｌｅｕ −Ｍ ＣＡおよび＾ｒｇ−ＭＣＡ
を各々１０Ｍ含み塩化マグネシウムを１０ Ｍ含むｐＩ
Ｉ５．０．１１５０Ｍのバルビトールバッハ−２，５１
を加え、微量超音波細胞破砕機（和研薬製 ソニケータ
ー Ｗ−１０型）で５０Ｗ、３分間処理した。処理後、
これらの反応液を３７°Ｃで６０分間保持した。その後
、各反応液に１／ｌ０Ｍ１１）Ｈｌｌ、０のグリシンバ
ッファーを１１添加し、３．０００ｒｆ）ｍて５分間遠
心分離を行い、十清液の蛍光強度を実施例１と同様の方
法で測定し、４ＭＵ−Ｐ、４ＭＵ−Ｇｕｌ、Ｉ、ｅｕ−
ＡＭＣおよび八ｒｇ−ＡＭＣの中の一つ以上の基質を分
解する活性を何する反応液の本数を求めた。この結果に
基ついて最確法により検体中の真菌数を求めた。
同じ検体についてクロラムフェニコール０．０１％を含
有するポテトデキストローズ寒天培地を用いた寒天平板
法により２５°Ｃで７０間培養して」゛ε菌数を求めた
。
有するポテトデキストローズ寒天培地を用いた寒天平板
法により２５°Ｃで７０間培養して」゛ε菌数を求めた
。
これらの結果を第９表に示しそ。不法で測定した真菌数
と寒天平板法で測定した真菌数は第９表に示したように
三つの試料でよく一致していることかわかる。
と寒天平板法で測定した真菌数は第９表に示したように
三つの試料でよく一致していることかわかる。
第９表
蛍光が生成された 寒天平板法での試料名 検
体 量 反応液の本数 コロニー数（３プレートの
平均） モチ取り粉 ０．１ｇ ３０．０１
ｇ ３ ００．０
０１ｇ ２ ＋０．
０００１ｇ ＯＯ 最確法で求めた コロニー数で求め真
菌数 ９３０コ／ｇ た真菌数
９００コ／ｇ野菜サラダ Ｏ，Ｉｇ
３０．０１ Ｈ３４ ０，００１ｇ １ ０．
７０．０００１ｇ ０
０最確法で求めた コロニー数で求
め真菌数 ４３０コ／ｇ た真菌数
４００コ／ｇ玲凍ギタウザ ０．１ ｇ
２ ０．７０．０１
ｇ ＯＯ ｏ、００１ｇ ０ ０
０．０００１ｇ ０
０最確法で求めた コロニー数で求メ真
菌数 ９．１コ／ｇ た真菌数
７フ／ｇ
体 量 反応液の本数 コロニー数（３プレートの
平均） モチ取り粉 ０．１ｇ ３０．０１
ｇ ３ ００．０
０１ｇ ２ ＋０．
０００１ｇ ＯＯ 最確法で求めた コロニー数で求め真
菌数 ９３０コ／ｇ た真菌数
９００コ／ｇ野菜サラダ Ｏ，Ｉｇ
３０．０１ Ｈ３４ ０，００１ｇ １ ０．
７０．０００１ｇ ０
０最確法で求めた コロニー数で求
め真菌数 ４３０コ／ｇ た真菌数
４００コ／ｇ玲凍ギタウザ ０．１ ｇ
２ ０．７０．０１
ｇ ＯＯ ｏ、００１ｇ ０ ０
０．０００１ｇ ０
０最確法で求めた コロニー数で求メ真
菌数 ９．１コ／ｇ た真菌数
７フ／ｇ
し１１は蛍光強度と検水１０１中の菌数の関係を示して
いる。 ・印は多摩用の河水、○印は食品製造工程排水〜、目印
は都市下水、Δ印は生活廃水１０１中に含まれる菌数と
蛍光強度の関係を示している。 図２は蛍光強度と検水１０ｍ１中の菌数の関係を示して
いる。 特許出願人 味の素株式会社 図１ 菌数例／検水１０＋Ｊ 図 ２ 酵母数 個／挾水（ＩＯｍ（、）
いる。 ・印は多摩用の河水、○印は食品製造工程排水〜、目印
は都市下水、Δ印は生活廃水１０１中に含まれる菌数と
蛍光強度の関係を示している。 図２は蛍光強度と検水１０ｍ１中の菌数の関係を示して
いる。 特許出願人 味の素株式会社 図１ 菌数例／検水１０＋Ｊ 図 ２ 酵母数 個／挾水（ＩＯｍ（、）
Claims (2)
- （１） 一定の検体をとり検体を含む異った希釈度の溶
液又はけん濁液となずプロセス（Ｉ）、プロセス（１）
の後に該溶液又はけん濁液を２５°Ｃないし５０℃に保
つプロセス（２）、プロセス（１）の後てあってプロセ
ス（２）の前又は後に一般式［１］で示される７−アミ
ノ−４−メチル−クマリン誘導体を該溶液又はけん濁液
に添加するプロセス（３）およびプＩ：Ｉセス（２）お
よびプロセス（３）の後に該溶液又はけん濁液中に生成
された７−アミノ−４−メチル−クマリンを測定するプ
ロセス（４）より成る微生物菌数の測定法。 （一般式［１］中Ｒは有機残基てあって一般式［１］中
のアミド結合か検体中に含まれる微生物の加水分解酵素
により分解されることを防げないものである。） - （２） 一定量の検体に、一般式［１］て示される７
−アミノ−４−メチル−クマリン誘導体を添加した後、
２５°Ｃないし４０°Ｃに保ち、生成された７−アミノ
−４−メヂルークマリンを測定することより成る微生物
菌数の測定法。 Ｈ （一般式［１］中Ｒはを槻残基であって一般式［１］中
のアミド結合か検体中に含まれる微生物の加水分解酵素
により分解されることを防げないものである。）
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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