JPH0472517B2 - - Google Patents
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Description
本発明は食品、医薬品、化粧品、水等の中に存
在する微生物の菌数の測定法に関する。 食品、医薬品、化粧品等の製造、品質管理のた
めには、これら検体中に含まれる少量の微生物の
菌数を短時間に測定しなければならない。しか
も、これら検体中に混入している微生物を予め知
ることができないので、巾広い種類の微生物を短
時間に検出しなければならない。短時間に微生物
の菌数を測定する方法として、非蛍光性の４−メ
チル−ウンベリフエロン誘導体（以下、4MU−
誘導体と略す。）を検体中に含まれる微生物の酵
素で水解させ、生成する蛍光性の４−メチル−ウ
ンベリフエロン（以下、4MUと略す。）を蛍光光
度計で測定する方法が知られている（特開昭57−
144995）。この方法は、微生物の少量の菌数を短
時間に測定できる点で優れた方法である。しか
し、この方法は食品等の検体中に含まれるすべて
の微生物を検出できない点で問題があつた。 本発明者らは、このような従来の微生物の菌数
測定法に対し4MU−誘導体にかえて７−アミノ
−４−メチル−クマリン誘導体（以下、AMC−
誘導体と略す。）を用いれば食品等に含まれる少
量の巾広い種類の菌数を短時間に極めて高い感度
で測定できることを見い出した。本発明は大きく
分けて二つの方法（Ａ法およびＢ法）から成立つ
ている。 Ａ法は下記のプロセスより成立つている。即
ち、Ａ法は、一定の検体をとり検体を含む異つた
希釈度の溶液又はけん濁液をなすプロセス(1)、プ
ロセス(1)の後に該溶液又はけん濁液を25℃ないし
50℃に保つことにより該検体中に含まれる微生物
を生育させるプロセス(2)、プロセス(1)の後であつ
てプロセス(2)の前又は後にAMC−誘導体を該溶
液又はけん濁液に添加するプロセス(3)およびプロ
セス(2)およびプロセス(3)の後に該溶液又はけん濁
液中に生成された７−アミノ−４−メチル−クマ
リンを測定するプロセス(4)より成る微生物菌数の
測定法である。 Ｂ法は、一定量の検体にAMC−誘導体を添加
し、25℃ないし40℃に保ち、生成された７−アミ
ノ−４−メチル−クマリンを測定することより成
る微生物菌数の測定法である。 食品などの検体に含まれる微生物を測定する時
にＡ法とＢ法のどちらを選択するかは適宜選択す
ればよいが、一般にＡ法は食品などの検体中に含
まれる極めて少量の微生物（例えば、検体１ｇ或
は１ml当り104個以下の菌数）を測定する時に用
いられる。これに対しＢ法は、例えば食品などの
検体１ｇ或は１ml当り104個以上含まれる場合に
選択される。ただし、検体１ｇ或は１ml当り104
個以上の菌数が含まれる場合でも菌数を高精度に
測定する時はＡ法で測定する方が望ましい。 微生物の菌数を測定する検体は、飲食品、医薬
品、化粧品、飲料水など固体状、液状のもののい
ずれでもよい。飲食品としては、固形調味料や乾
燥食品のような固形物、野菜サラダなどの生野菜
や動物性の肉が含まれているもの、一部水分を含
むペースト状調味料などのもの、さしみなどの生
鮮魚貝類、ハムや畜肉などの畜産製品などが含ま
れる。固形物を含んでいる検体の場合には、ワー
ニングブレンダー、ミキサーなどにより検体中の
微生物が死滅しない程度に固形物を微細粒子にホ
モゲナイズすれば液状のものと同一に扱うことが
できる。 次に、本発明のＡ法のプロセスについて説明す
る。 プロセス(1)では検体を異つた希釈度の溶液又は
けん濁液をなす操作を行う。この場合、希釈液と
しては微生物の生育に必要な栄養素を含んでいる
液が用いられる。希釈度は一定の希釈度希釈を繰
返せばどのような希釈度でもよく、同一希釈度の
ものを１本或は複数本用いる。通常希釈は1/10希
釈を数回行い、同一希釈度のものを３本から５本
用意する。 プロセス(2)はプロセス(1)の後に行う。該溶液又
はけん濁液を一定時間25℃から50℃に保温する。
このプロセスで該溶液又はけん濁液中に１個以上
の微生物が含まれる時には一定時間25℃から50℃
に保温することにより微生物が生育する。 検体中の微生物中特に大腸菌群を測定する目的
のためには、プロセス(1)において使用する希釈液
にデソキシコール酸のような大腸菌群を選択的に
生育させる物質を通常使用されている濃度添加す
ればよい。真菌数のみを測定する目的のために
は、プロセス(1)において使用する希釈液に細菌の
生育を阻害し、真菌の生育を阻害しないクロラム
フエニコールやペニシリンなどの抗生物質を通常
使用されている濃度添加すればよい。耐熱性菌を
測定する目的のためにはプロセスＹに先立つて行
う検体のホモゲナイズ後検体を耐熱菌を死滅させ
ず中温菌を死滅させる通常の条件で熱処理を行え
ばよい。嫌気性菌のみを測定する目的のためには
該溶液又はけん濁液を嫌気的状態でプロセス(2)を
行えばよい。好気性菌の測定のためには振盪しな
がら保温を行えばよい。保温温度は測定しようと
する微生物が最もよく生育する温度が望ましく、
中温菌に属する微生物の菌数測定には25℃から40
℃、高温菌の菌数測定には40℃から50℃を用い
る。 検体中の微生物中細菌類を測定する場合には、
30分ないし８時間保温する。生育が遅く肉眼で生
育が確認されるまでに通常５日間以上かかるよう
なカビおよび酵母のような真菌類の場合でも最長
48時間保温すればよい。 上述のように検体中の特定の微生物のみを測定
する目的のためには、その特定の微生物のみを生
育させる条件でプロセス(2)を行えばよい。 プロセス(3)では、プロセス(1)の後直ちに、或は
プロセス(2)の終了後に該溶液或はけん濁液に
AMC−誘導体を１種或は２種以上添加する。 本発明で使用するAMC−誘導体は下記一般式
［１］で示されるもので、式中ＲはＬ−アルギニ
ル基、Ｌ−ロイシル基、ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−フエニルアラニル−セリル−アルギニル基
またはピログルタミル基を示す。 更にAMC−誘導体に加えて4MU−誘導体を１
種或は２種以上添加することもできる。4MU−
誘導体は一般式［２］で示されるものでＸとして
は糖類、アルコール類、無機酸類などであり、該
溶液或はけん濁液中に含まれる微生物の加水分解
酵素により水解されることを防げないものであれ
ばよい。 添加量は該誘導体が該溶液或はけん濁液に溶解
する最大量まで可能であり本発明においては通常
10-4M添加する。 プロセス(1)の後にプロセス(3)を行い、その後プ
ロセス(2)を行う場合には、直ちにプロセス(4)を行
う。これに対し、プロセス(1)、プロセス(2)の後に
プロセス(3)を行う場合には、プロセス(3)後、更に
通常30分から１時間25℃ないし40℃で保温を行
う。 この場合プロセス(2)の後、プロセス(3)に先立つ
て該溶液或はけん濁液を遠心分離し、沈澱部を用
いてプロセス(3)を行うこともできる。このような
遠心分離プロセスを加えれば該溶液或はけん濁液
に含まれる微生物が沈澱部に集まり微生物濃度が
高くなる。更に、遠心分離のプロセスの後に微生
物菌体の破壊法として知られているトルエンなど
の有機溶媒の添加、超音波処理或はフレンチブレ
スなどの物理的破壊、リゾチームなどの酵素的破
壊などを行うことも出来る。 プロセス(4)は、プロセス(1)から(3)を行つた後に
行うもので該溶液或はけん濁液中に生成された
AMC或は4MUを蛍光光度計で検出するプロセス
である。このプロセスでは該溶液或はけん濁液中
にAMC或は4MUが生成されたか否かを定性的に
検出するのみでよい。 検体中に含まれる微生物の菌数はプロセス(4)に
よつて蛍光が検出された最大希釈度の該溶液又は
けん濁液の希釈度から求めることが出来る。一例
について菌数の測定の仕方を説明する。検体を1/
１０に連続的数段階希釈した各５本の溶液又はけん
濁液について方法(A)に従つて蛍光を測定し、各希
釈段階の溶液又はけん濁液５本中何本蛍光が検出
されたかを求める。これに基づいて最確数表（昭
和46年12月28日環境庁告示第59号）により検体中
の微生物の菌数を測定する。 この最確法による菌数測定は寒天平板抹塗法に
比べて小数の菌数を正確に測定する方法とされて
いる。 次に本発明における(B)法について説明する。(B)
法は(A)法のプロセス(2)を省略し、プロセス(4)の蛍
光強度を定量することから成る。この方法は、検
体に含まれる微生物の菌数が蛍光強度と相関する
ことに基づいて検体中の微生物の菌数を測定する
ものである。Ｂ法においてＡ法のプロセス(1)に相
当するプロセスの希釈液は微生物の生育に必要な
栄養素を含まなくてよい。 この検体の希釈のプロセス後に微生物菌体の破
壊法として知られているトルエンなどの有機溶媒
の添加、超音波処理或はフレンチプレスなどの物
理的破壊、リゾチームなどの酵素的破壊などを行
つてもよい。次に、Ａ法のプロセス(3)に相当する
プロセスを行う。この時の保温条件は25℃ないし
40℃で、30分ないし２時間程度である。この保温
のプロセスの後に該溶液或はけん濁液中に生成さ
れるAMC或は4MUの蛍光量を定量する。 予め求められている微生物菌数と蛍光量の相関
に基づいて該溶液或はけん濁液の蛍光量から検体
中の微生物の菌数を求める。(B)法は検体１ｇ或は
１ml中に微生物104個以下含まれる場合には適用
できない。また、(B)法は(A)法に比べて菌数測定の
精度は悪いが、Ａ法のプロセス(2)を省略している
ために極めて短時間に検体中の微生物の菌数を測
定できるという利点をもつている。 上述のように本発明の方法は検体中に含まれる
少量の巾広い微生物を短時間に正確に菌数測定す
るものである。 以下実施例にて説明する。 実施例 １ 表１に示した菌株をペプトン0.5％、酵母0.1％
を含有するPH6.5の液体培地で48時間振盪培養し、
同組成の液体培地９mlを含む試験管に各々の培養
菌体を試験管当り102〜103個接種するように希釈
して接種した。その後、細菌の場合は35℃で24時
間、真菌の場合は30℃、72時間培養を行つた。培
養終了後、該培養液を0.9％食塩水で100倍に希釈
した。予め塩化マグネシウムを10-3M含むPH7.5
の1/20Ｍのバビトールバツハーに各々10-4MのＬ
−アルギニル−７−アミノ−４−メチル−クマリ
ン（以下、AMC−Argと略す。）、Ｌ−ロイシル
−７−アミノ−４−メチル−クマリン（以下、
AMC−Leuと略す。）、4MU−グルコースおよび
4MU−リン酸（以下、4MU−Ｐと略す。）が含
まれている各々の溶液２mlに該希釈液を１ml加え
て、40℃で１時間保温した。保温終了後にPH11.0
の1/10Ｍのグリシンバツハーを添加した後に蛍光
光度計（島津製作所製、RF−520型、（30μlマイ
クロフローセル使用））を用い、励起波長360nm、
蛍光波長450nmの条件下で蛍光強度を測定した。
この結果を表１に示した。
在する微生物の菌数の測定法に関する。 食品、医薬品、化粧品等の製造、品質管理のた
めには、これら検体中に含まれる少量の微生物の
菌数を短時間に測定しなければならない。しか
も、これら検体中に混入している微生物を予め知
ることができないので、巾広い種類の微生物を短
時間に検出しなければならない。短時間に微生物
の菌数を測定する方法として、非蛍光性の４−メ
チル−ウンベリフエロン誘導体（以下、4MU−
誘導体と略す。）を検体中に含まれる微生物の酵
素で水解させ、生成する蛍光性の４−メチル−ウ
ンベリフエロン（以下、4MUと略す。）を蛍光光
度計で測定する方法が知られている（特開昭57−
144995）。この方法は、微生物の少量の菌数を短
時間に測定できる点で優れた方法である。しか
し、この方法は食品等の検体中に含まれるすべて
の微生物を検出できない点で問題があつた。 本発明者らは、このような従来の微生物の菌数
測定法に対し4MU−誘導体にかえて７−アミノ
−４−メチル−クマリン誘導体（以下、AMC−
誘導体と略す。）を用いれば食品等に含まれる少
量の巾広い種類の菌数を短時間に極めて高い感度
で測定できることを見い出した。本発明は大きく
分けて二つの方法（Ａ法およびＢ法）から成立つ
ている。 Ａ法は下記のプロセスより成立つている。即
ち、Ａ法は、一定の検体をとり検体を含む異つた
希釈度の溶液又はけん濁液をなすプロセス(1)、プ
ロセス(1)の後に該溶液又はけん濁液を25℃ないし
50℃に保つことにより該検体中に含まれる微生物
を生育させるプロセス(2)、プロセス(1)の後であつ
てプロセス(2)の前又は後にAMC−誘導体を該溶
液又はけん濁液に添加するプロセス(3)およびプロ
セス(2)およびプロセス(3)の後に該溶液又はけん濁
液中に生成された７−アミノ−４−メチル−クマ
リンを測定するプロセス(4)より成る微生物菌数の
測定法である。 Ｂ法は、一定量の検体にAMC−誘導体を添加
し、25℃ないし40℃に保ち、生成された７−アミ
ノ−４−メチル−クマリンを測定することより成
る微生物菌数の測定法である。 食品などの検体に含まれる微生物を測定する時
にＡ法とＢ法のどちらを選択するかは適宜選択す
ればよいが、一般にＡ法は食品などの検体中に含
まれる極めて少量の微生物（例えば、検体１ｇ或
は１ml当り104個以下の菌数）を測定する時に用
いられる。これに対しＢ法は、例えば食品などの
検体１ｇ或は１ml当り104個以上含まれる場合に
選択される。ただし、検体１ｇ或は１ml当り104
個以上の菌数が含まれる場合でも菌数を高精度に
測定する時はＡ法で測定する方が望ましい。 微生物の菌数を測定する検体は、飲食品、医薬
品、化粧品、飲料水など固体状、液状のもののい
ずれでもよい。飲食品としては、固形調味料や乾
燥食品のような固形物、野菜サラダなどの生野菜
や動物性の肉が含まれているもの、一部水分を含
むペースト状調味料などのもの、さしみなどの生
鮮魚貝類、ハムや畜肉などの畜産製品などが含ま
れる。固形物を含んでいる検体の場合には、ワー
ニングブレンダー、ミキサーなどにより検体中の
微生物が死滅しない程度に固形物を微細粒子にホ
モゲナイズすれば液状のものと同一に扱うことが
できる。 次に、本発明のＡ法のプロセスについて説明す
る。 プロセス(1)では検体を異つた希釈度の溶液又は
けん濁液をなす操作を行う。この場合、希釈液と
しては微生物の生育に必要な栄養素を含んでいる
液が用いられる。希釈度は一定の希釈度希釈を繰
返せばどのような希釈度でもよく、同一希釈度の
ものを１本或は複数本用いる。通常希釈は1/10希
釈を数回行い、同一希釈度のものを３本から５本
用意する。 プロセス(2)はプロセス(1)の後に行う。該溶液又
はけん濁液を一定時間25℃から50℃に保温する。
このプロセスで該溶液又はけん濁液中に１個以上
の微生物が含まれる時には一定時間25℃から50℃
に保温することにより微生物が生育する。 検体中の微生物中特に大腸菌群を測定する目的
のためには、プロセス(1)において使用する希釈液
にデソキシコール酸のような大腸菌群を選択的に
生育させる物質を通常使用されている濃度添加す
ればよい。真菌数のみを測定する目的のために
は、プロセス(1)において使用する希釈液に細菌の
生育を阻害し、真菌の生育を阻害しないクロラム
フエニコールやペニシリンなどの抗生物質を通常
使用されている濃度添加すればよい。耐熱性菌を
測定する目的のためにはプロセスＹに先立つて行
う検体のホモゲナイズ後検体を耐熱菌を死滅させ
ず中温菌を死滅させる通常の条件で熱処理を行え
ばよい。嫌気性菌のみを測定する目的のためには
該溶液又はけん濁液を嫌気的状態でプロセス(2)を
行えばよい。好気性菌の測定のためには振盪しな
がら保温を行えばよい。保温温度は測定しようと
する微生物が最もよく生育する温度が望ましく、
中温菌に属する微生物の菌数測定には25℃から40
℃、高温菌の菌数測定には40℃から50℃を用い
る。 検体中の微生物中細菌類を測定する場合には、
30分ないし８時間保温する。生育が遅く肉眼で生
育が確認されるまでに通常５日間以上かかるよう
なカビおよび酵母のような真菌類の場合でも最長
48時間保温すればよい。 上述のように検体中の特定の微生物のみを測定
する目的のためには、その特定の微生物のみを生
育させる条件でプロセス(2)を行えばよい。 プロセス(3)では、プロセス(1)の後直ちに、或は
プロセス(2)の終了後に該溶液或はけん濁液に
AMC−誘導体を１種或は２種以上添加する。 本発明で使用するAMC−誘導体は下記一般式
［１］で示されるもので、式中ＲはＬ−アルギニ
ル基、Ｌ−ロイシル基、ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−フエニルアラニル−セリル−アルギニル基
またはピログルタミル基を示す。 更にAMC−誘導体に加えて4MU−誘導体を１
種或は２種以上添加することもできる。4MU−
誘導体は一般式［２］で示されるものでＸとして
は糖類、アルコール類、無機酸類などであり、該
溶液或はけん濁液中に含まれる微生物の加水分解
酵素により水解されることを防げないものであれ
ばよい。 添加量は該誘導体が該溶液或はけん濁液に溶解
する最大量まで可能であり本発明においては通常
10-4M添加する。 プロセス(1)の後にプロセス(3)を行い、その後プ
ロセス(2)を行う場合には、直ちにプロセス(4)を行
う。これに対し、プロセス(1)、プロセス(2)の後に
プロセス(3)を行う場合には、プロセス(3)後、更に
通常30分から１時間25℃ないし40℃で保温を行
う。 この場合プロセス(2)の後、プロセス(3)に先立つ
て該溶液或はけん濁液を遠心分離し、沈澱部を用
いてプロセス(3)を行うこともできる。このような
遠心分離プロセスを加えれば該溶液或はけん濁液
に含まれる微生物が沈澱部に集まり微生物濃度が
高くなる。更に、遠心分離のプロセスの後に微生
物菌体の破壊法として知られているトルエンなど
の有機溶媒の添加、超音波処理或はフレンチブレ
スなどの物理的破壊、リゾチームなどの酵素的破
壊などを行うことも出来る。 プロセス(4)は、プロセス(1)から(3)を行つた後に
行うもので該溶液或はけん濁液中に生成された
AMC或は4MUを蛍光光度計で検出するプロセス
である。このプロセスでは該溶液或はけん濁液中
にAMC或は4MUが生成されたか否かを定性的に
検出するのみでよい。 検体中に含まれる微生物の菌数はプロセス(4)に
よつて蛍光が検出された最大希釈度の該溶液又は
けん濁液の希釈度から求めることが出来る。一例
について菌数の測定の仕方を説明する。検体を1/
１０に連続的数段階希釈した各５本の溶液又はけん
濁液について方法(A)に従つて蛍光を測定し、各希
釈段階の溶液又はけん濁液５本中何本蛍光が検出
されたかを求める。これに基づいて最確数表（昭
和46年12月28日環境庁告示第59号）により検体中
の微生物の菌数を測定する。 この最確法による菌数測定は寒天平板抹塗法に
比べて小数の菌数を正確に測定する方法とされて
いる。 次に本発明における(B)法について説明する。(B)
法は(A)法のプロセス(2)を省略し、プロセス(4)の蛍
光強度を定量することから成る。この方法は、検
体に含まれる微生物の菌数が蛍光強度と相関する
ことに基づいて検体中の微生物の菌数を測定する
ものである。Ｂ法においてＡ法のプロセス(1)に相
当するプロセスの希釈液は微生物の生育に必要な
栄養素を含まなくてよい。 この検体の希釈のプロセス後に微生物菌体の破
壊法として知られているトルエンなどの有機溶媒
の添加、超音波処理或はフレンチプレスなどの物
理的破壊、リゾチームなどの酵素的破壊などを行
つてもよい。次に、Ａ法のプロセス(3)に相当する
プロセスを行う。この時の保温条件は25℃ないし
40℃で、30分ないし２時間程度である。この保温
のプロセスの後に該溶液或はけん濁液中に生成さ
れるAMC或は4MUの蛍光量を定量する。 予め求められている微生物菌数と蛍光量の相関
に基づいて該溶液或はけん濁液の蛍光量から検体
中の微生物の菌数を求める。(B)法は検体１ｇ或は
１ml中に微生物104個以下含まれる場合には適用
できない。また、(B)法は(A)法に比べて菌数測定の
精度は悪いが、Ａ法のプロセス(2)を省略している
ために極めて短時間に検体中の微生物の菌数を測
定できるという利点をもつている。 上述のように本発明の方法は検体中に含まれる
少量の巾広い微生物を短時間に正確に菌数測定す
るものである。 以下実施例にて説明する。 実施例 １ 表１に示した菌株をペプトン0.5％、酵母0.1％
を含有するPH6.5の液体培地で48時間振盪培養し、
同組成の液体培地９mlを含む試験管に各々の培養
菌体を試験管当り102〜103個接種するように希釈
して接種した。その後、細菌の場合は35℃で24時
間、真菌の場合は30℃、72時間培養を行つた。培
養終了後、該培養液を0.9％食塩水で100倍に希釈
した。予め塩化マグネシウムを10-3M含むPH7.5
の1/20Ｍのバビトールバツハーに各々10-4MのＬ
−アルギニル−７−アミノ−４−メチル−クマリ
ン（以下、AMC−Argと略す。）、Ｌ−ロイシル
−７−アミノ−４−メチル−クマリン（以下、
AMC−Leuと略す。）、4MU−グルコースおよび
4MU−リン酸（以下、4MU−Ｐと略す。）が含
まれている各々の溶液２mlに該希釈液を１ml加え
て、40℃で１時間保温した。保温終了後にPH11.0
の1/10Ｍのグリシンバツハーを添加した後に蛍光
光度計（島津製作所製、RF−520型、（30μlマイ
クロフローセル使用））を用い、励起波長360nm、
蛍光波長450nmの条件下で蛍光強度を測定した。
この結果を表１に示した。
【表】
【表】
表中の表示は以下の基準に従つて表示した。
−：蛍光強度 10以下
＋：蛍光強度 10〜100
＋＋：蛍光強度 100〜1000
＋＋＋：蛍光強度 1000以上
表１に示したようにAMC−誘導体を用いた時
に4MU−誘導体を用いた時に比べてより多くの
種類の微生物が、蛍光を生成し、かつ生成量も高
いことがわかる。 実施例 ２ 多摩川の河水３点、生活廃水３点、食品製造工
程で排出される廃水３点および都市下水３点を各
10ml採取した。これらの検水を3500rpmで10分間
遠心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）を行い沈
澱部にAMC−Leuを10-4Mおよび塩化マグネシ
ウムを10-3M含むPH7.0、1/50Ｍのバルビトール
バツハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機
（和研薬製 ソニケーター Ｗ−10型）で50W、
３分間処理した。処理後これらの反応液を37℃で
60分間保持した。その後各反応液に1/10Ｍ、PH
11.0のグリシンバツフアーを１ml添加し、
3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光
強度を実施例１と同様の方法で測定した。 一方、各検体中に含まれる一般菌数を標準寒天
培地を用い、35℃で２日間培養を行い生菌数を測
定した。これらの蛍光強度と生菌数の関係を図１
に示した。 図１に示したように、秤量した検水中に生菌が
104個以上存在した場合には蛍光強度と生菌数の
間に相関が認められた。検水中に104個以上の生
菌が存在すれば図に示した関係を用いて培養する
ことなく簡便に短時間に生菌数を求めることが出
来る。 実施例 ３ 多摩川の河水を採取した。予め表２に記した組
成のHID培地を９mlずつ分注し、120℃で15分間
オートクレーブを行つた普通サイズ試験管５本に
この検水の１ml、0.1ml、0.01mlおよび0.001ml量
を接種し、37℃で８時間振盪培養を行つた。 表 ２ DIH培地組成 ハートインフユージヨン（栄研） 25ｇ デオキシコール酸ナトリウム 0.5ｇ シクロヘキシミド 100mg 水 1000ml PH 7.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）し、沈澱部
にAMC−Argを10-4Mおよび塩化マグネシウム
を10-3M含むPH7.0、1/50Ｍのバルビトールバツ
ハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機（和研
薬製 ソニケーター Ｗ−10型）で50W、３分間
処理した。処理後、これらの反応液を37℃で60分
間保持した。その後、各反応液に1/10Ｍ、PH11.0
のグリシンバツフアーを１ml添加し、3000rpmで
５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施
例１と同様の方法で測定し、AMC−Argを分解
し、AMCを生成する活性を有する反応液の本数
を求めた。 同じ検体について大腸菌群の測定に通常用いら
れているBGLB法により35℃で48時間培養し、こ
の時のガス発生試験管の本数を求めた。これらの
結果を第３表に示した。
に4MU−誘導体を用いた時に比べてより多くの
種類の微生物が、蛍光を生成し、かつ生成量も高
いことがわかる。 実施例 ２ 多摩川の河水３点、生活廃水３点、食品製造工
程で排出される廃水３点および都市下水３点を各
10ml採取した。これらの検水を3500rpmで10分間
遠心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）を行い沈
澱部にAMC−Leuを10-4Mおよび塩化マグネシ
ウムを10-3M含むPH7.0、1/50Ｍのバルビトール
バツハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機
（和研薬製 ソニケーター Ｗ−10型）で50W、
３分間処理した。処理後これらの反応液を37℃で
60分間保持した。その後各反応液に1/10Ｍ、PH
11.0のグリシンバツフアーを１ml添加し、
3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光
強度を実施例１と同様の方法で測定した。 一方、各検体中に含まれる一般菌数を標準寒天
培地を用い、35℃で２日間培養を行い生菌数を測
定した。これらの蛍光強度と生菌数の関係を図１
に示した。 図１に示したように、秤量した検水中に生菌が
104個以上存在した場合には蛍光強度と生菌数の
間に相関が認められた。検水中に104個以上の生
菌が存在すれば図に示した関係を用いて培養する
ことなく簡便に短時間に生菌数を求めることが出
来る。 実施例 ３ 多摩川の河水を採取した。予め表２に記した組
成のHID培地を９mlずつ分注し、120℃で15分間
オートクレーブを行つた普通サイズ試験管５本に
この検水の１ml、0.1ml、0.01mlおよび0.001ml量
を接種し、37℃で８時間振盪培養を行つた。 表 ２ DIH培地組成 ハートインフユージヨン（栄研） 25ｇ デオキシコール酸ナトリウム 0.5ｇ シクロヘキシミド 100mg 水 1000ml PH 7.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）し、沈澱部
にAMC−Argを10-4Mおよび塩化マグネシウム
を10-3M含むPH7.0、1/50Ｍのバルビトールバツ
ハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機（和研
薬製 ソニケーター Ｗ−10型）で50W、３分間
処理した。処理後、これらの反応液を37℃で60分
間保持した。その後、各反応液に1/10Ｍ、PH11.0
のグリシンバツフアーを１ml添加し、3000rpmで
５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施
例１と同様の方法で測定し、AMC−Argを分解
し、AMCを生成する活性を有する反応液の本数
を求めた。 同じ検体について大腸菌群の測定に通常用いら
れているBGLB法により35℃で48時間培養し、こ
の時のガス発生試験管の本数を求めた。これらの
結果を第３表に示した。
【表】
第３表の結果に基づいて検水中の生菌数を最確
法で求めると両法とも79個／mlであつた。 BGLB法は、大腸菌群数を測定する方法であ
り、本実施例の方法で測定した微生物数とBGLB
法で測定した微生物数の結果が一致したことから
本法によつて迅速に大腸菌群を測定出来ることが
判明した。 実施例 ４ ハート・インフユージヨンプロスおよび麦芽エ
キス−酵母エキスブロス（麦芽エキス0.3％、酵
母エキス0.3％、マルトース２％、グルコース0.1
％、PH6.0）を普通試験管に各々５ml分注し120
℃、10分間殺菌した。ハート・インフユージヨン
プロスにエシエリシヤ・コリATCC25922、シユ
ードモナス・エルギノーザ ATCC 27853、スタ
フイロコツカス・アウレウスATCC25923、バチ
ルス・ズブチルス ATCC1315を夫々101〜102
個／mlになるよう接種し35℃で12時間振盪培養を
行つた。同様に麦芽エキス−酵母エキスブロスに
キヤンデイダ・アルビカンス ATCC10231、サ
ツカロミセス・セルビシエCBS1171、アスペル
ギルス・ニガー ATCC6275およびペニシリウ
ム・シトリナム ATCC9849を102〜103個／mlに
なるよう接種し、30℃で36時間振盪培養を行つ
た。 培養終了後、これらの培養液をPH7.0、1/50Ｍ
のバルビトールバツハーで1000倍に希釈した。表
４にしたＡ液、Ｂ液およびＣ液２mlに上記希釈液
をそれぞれ１mlずつ加え、37℃で１時間保持し
た。
法で求めると両法とも79個／mlであつた。 BGLB法は、大腸菌群数を測定する方法であ
り、本実施例の方法で測定した微生物数とBGLB
法で測定した微生物数の結果が一致したことから
本法によつて迅速に大腸菌群を測定出来ることが
判明した。 実施例 ４ ハート・インフユージヨンプロスおよび麦芽エ
キス−酵母エキスブロス（麦芽エキス0.3％、酵
母エキス0.3％、マルトース２％、グルコース0.1
％、PH6.0）を普通試験管に各々５ml分注し120
℃、10分間殺菌した。ハート・インフユージヨン
プロスにエシエリシヤ・コリATCC25922、シユ
ードモナス・エルギノーザ ATCC 27853、スタ
フイロコツカス・アウレウスATCC25923、バチ
ルス・ズブチルス ATCC1315を夫々101〜102
個／mlになるよう接種し35℃で12時間振盪培養を
行つた。同様に麦芽エキス−酵母エキスブロスに
キヤンデイダ・アルビカンス ATCC10231、サ
ツカロミセス・セルビシエCBS1171、アスペル
ギルス・ニガー ATCC6275およびペニシリウ
ム・シトリナム ATCC9849を102〜103個／mlに
なるよう接種し、30℃で36時間振盪培養を行つ
た。 培養終了後、これらの培養液をPH7.0、1/50Ｍ
のバルビトールバツハーで1000倍に希釈した。表
４にしたＡ液、Ｂ液およびＣ液２mlに上記希釈液
をそれぞれ１mlずつ加え、37℃で１時間保持し
た。
【表】
ニルアラニル−セリル−アルギニル
ー7−アミノ−4−メチル−クマリン
その後、各反応液に1/10Ｍ、PH11.0のグリシン
バツフアーを１ml添加し、3000rpmで５分間遠心
分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同様
の方法で測定した。各使用菌株の３種類の基質液
に対する蛍光強度の測定結果を表５に示した。
ー7−アミノ−4−メチル−クマリン
その後、各反応液に1/10Ｍ、PH11.0のグリシン
バツフアーを１ml添加し、3000rpmで５分間遠心
分離を行い、上清液の蛍光強度を実施例１と同様
の方法で測定した。各使用菌株の３種類の基質液
に対する蛍光強度の測定結果を表５に示した。
【表】
表中の数字は蛍光強度を表わす。
使用した菌株はすべての菌株においてＡ液或は
Ｂ液単独の場合に比べてＡ液とＢ液を混合した場
合に蛍光強度が高まつていた。 以上の事実は、Ａ液或はＢ液を単独で用いた時
に生成蛍光量が低いために菌数測定の検出感度が
低くなるような菌株の場合には、Ａ液とＢ液を混
合したＣ液を使用することにより生成蛍光量が増
加し、菌数測定の検出感度が高まることを示して
いる。 実施例 ５ 市販のポテトサラダ、野菜サラダおよびマカロ
ニサラダを無菌的に各10ｇ秤量した。これらの検
体にカルボキシメチルセルロース0.2％およびポ
リソルベート80を0.05％含有するPH6.0，0.1Mの
リン酸バツハー90mlを加えワーリングブレンダー
（日本精機製）を用いて20000rpmで１分間ホモジ
ナイズを行つた。予め表６に記した組成のYE培
地を９mlずつ分注し、120℃で15分間オートクレ
ーブを行つた普通サイズ試験管５本に上記ホモジ
ナイズ処理した検体の１ml，0.1ml，0.01mlおよ
び0.001ml量を接種し、35℃で12時間振盪培養を
行つた。 表 ６ YE培地組成 酵母エキス（Difco製） 0.3％ ペプトン（Difco製） 0.5％ リン酸１カリウム 0.05％ グルコース 1.0％ PH 7.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離し、沈澱部にAMC−Leuおよびピログル
タミル−７−アミノ−４−メチル−クマリン（以
下、AMC−Pyrと記す。）を各々10-4M含むPH
7.0、1/50Ｍのバルビトールバツハー2.5mlを加
え、37℃で60分間保持した。その後、各反応液に
１／１０Ｍ、PH11.0のグリシンバツフアーを１ml添加
し、3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定し、
AMC−LeuおよびAMC−Pyrの中の１つ以上の
基質を分解する活性を有する反応液の本数を求め
た。 これらの結果を第７表に示した。
Ｂ液単独の場合に比べてＡ液とＢ液を混合した場
合に蛍光強度が高まつていた。 以上の事実は、Ａ液或はＢ液を単独で用いた時
に生成蛍光量が低いために菌数測定の検出感度が
低くなるような菌株の場合には、Ａ液とＢ液を混
合したＣ液を使用することにより生成蛍光量が増
加し、菌数測定の検出感度が高まることを示して
いる。 実施例 ５ 市販のポテトサラダ、野菜サラダおよびマカロ
ニサラダを無菌的に各10ｇ秤量した。これらの検
体にカルボキシメチルセルロース0.2％およびポ
リソルベート80を0.05％含有するPH6.0，0.1Mの
リン酸バツハー90mlを加えワーリングブレンダー
（日本精機製）を用いて20000rpmで１分間ホモジ
ナイズを行つた。予め表６に記した組成のYE培
地を９mlずつ分注し、120℃で15分間オートクレ
ーブを行つた普通サイズ試験管５本に上記ホモジ
ナイズ処理した検体の１ml，0.1ml，0.01mlおよ
び0.001ml量を接種し、35℃で12時間振盪培養を
行つた。 表 ６ YE培地組成 酵母エキス（Difco製） 0.3％ ペプトン（Difco製） 0.5％ リン酸１カリウム 0.05％ グルコース 1.0％ PH 7.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離し、沈澱部にAMC−Leuおよびピログル
タミル−７−アミノ−４−メチル−クマリン（以
下、AMC−Pyrと記す。）を各々10-4M含むPH
7.0、1/50Ｍのバルビトールバツハー2.5mlを加
え、37℃で60分間保持した。その後、各反応液に
１／１０Ｍ、PH11.0のグリシンバツフアーを１ml添加
し、3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定し、
AMC−LeuおよびAMC−Pyrの中の１つ以上の
基質を分解する活性を有する反応液の本数を求め
た。 これらの結果を第７表に示した。
【表】
表７に示したように生菌数の測定結果はよく一
致していた。 実施例 ６ 清酒製造工程中の仕込みの初期の培養液10mlを
５点採取した。これらの検体を3500rpmで10分間
遠心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）を行い、
沈澱部にAMC−Leuを10-4Mおよび塩化マグネ
シウムを10-3含む PH7.0、1/50Ｍのバルビトー
ルバツハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機
（和研薬製 ソニケーターＷ−10型）で50W、３
分間処理した。処理後これらの反応液を37℃で60
分間保持した。その後各反応液に1/10Ｍ、PH11.0
のグリシンバツフアーを１ml添加し、3000rpmで
５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施
例１と同様の方法で測定した。 一方、各検体中に含まれる酵母をポテトデキス
トローズ寒天培地を用い、25℃で５日間培養を行
い生菌数を測定した。これらの蛍光強度と生菌数
の関係を図２に示した。 図２に示したように蛍光強度と生酵母数の間に
は相関が認められた。 実施例 ７ 市販のモチ取り粉、野菜サラダおよび冷凍ギヨ
ウザを無菌的に各10ｇ秤量した。これらの検体に
カルボキシメチルセルロース0.2％、ポリソルベ
ート80を0.05％含有するPH6.0、0.1Mのリン酸バ
ツハー90mlを加えワーリングブレンダー（日本精
機製）を用いて20000rpmで１分間ホモジナイズ
を行つた。予め表８に記した組成のYMC培地を
９mlずつ分注し、120℃で15分間オートクレーブ
を行つた普通サイズ試験管３本に上記ホモジナイ
ズ処理した検体の１ml、0.1ml、0.01mlおよび
0.002ml量を接種し、30℃で36時間振盪培養を行
つた。 表 ８ YMC培地組成 酵母エキス（Difco製） 0.2％ ペプトン（Difco製） 0.5％ マルツエキス（Difco製） 0.3％ マルトース 2.0％ グルコース 0.1％ ツイーン 80 0.005％ クロラムフエニコール 0.02％ PH 6.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離し、沈澱部に4MU−Glu、4MU−Ｐ、
AMC−LeuおよびAMC−Argを各々10-4M含み
塩化マグネシウムを10-3M含むPH5.0、1/50Ｍの
バルビトールバツハー2.5mlを加え、微量超音波
細胞破砕機（和研薬製ソニケーター Ｗ−10型）
で50W、３分間処理した。処理後、これらの反応
液を37℃で60分間保持した。その後、各反応液に
１／１０Ｍ、PH11.0のグリシンバツフアーを１ml添加
し、3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定し、
4MU−Ｐ、4MU−Glu、AMC−Leu、AMC−
Argの中の１つ以上の基質を分解する活性を有す
る反応液の本数を求めた。この結果に基づいて最
確法により検体中の真菌数を求めた。 同じ検体についてクロラムフエニコール0.01％
を含有するポテトデキストローズ寒天培地を用い
た寒天平板法により25℃で７日間培養して真菌数
を求めた。 これらの結果を第９表に示しそ。本法で測定し
た真菌数と寒天平板法で測定した真菌数は第９表
に示したように三つの試料でよく一致しているこ
とがわかる。
致していた。 実施例 ６ 清酒製造工程中の仕込みの初期の培養液10mlを
５点採取した。これらの検体を3500rpmで10分間
遠心分離（国産遠心機製 Ｈ−107型）を行い、
沈澱部にAMC−Leuを10-4Mおよび塩化マグネ
シウムを10-3含む PH7.0、1/50Ｍのバルビトー
ルバツハー2.5mlを加え、微量超音波細胞破砕機
（和研薬製 ソニケーターＷ−10型）で50W、３
分間処理した。処理後これらの反応液を37℃で60
分間保持した。その後各反応液に1/10Ｍ、PH11.0
のグリシンバツフアーを１ml添加し、3000rpmで
５分間遠心分離を行い、上清液の蛍光強度を実施
例１と同様の方法で測定した。 一方、各検体中に含まれる酵母をポテトデキス
トローズ寒天培地を用い、25℃で５日間培養を行
い生菌数を測定した。これらの蛍光強度と生菌数
の関係を図２に示した。 図２に示したように蛍光強度と生酵母数の間に
は相関が認められた。 実施例 ７ 市販のモチ取り粉、野菜サラダおよび冷凍ギヨ
ウザを無菌的に各10ｇ秤量した。これらの検体に
カルボキシメチルセルロース0.2％、ポリソルベ
ート80を0.05％含有するPH6.0、0.1Mのリン酸バ
ツハー90mlを加えワーリングブレンダー（日本精
機製）を用いて20000rpmで１分間ホモジナイズ
を行つた。予め表８に記した組成のYMC培地を
９mlずつ分注し、120℃で15分間オートクレーブ
を行つた普通サイズ試験管３本に上記ホモジナイ
ズ処理した検体の１ml、0.1ml、0.01mlおよび
0.002ml量を接種し、30℃で36時間振盪培養を行
つた。 表 ８ YMC培地組成 酵母エキス（Difco製） 0.2％ ペプトン（Difco製） 0.5％ マルツエキス（Difco製） 0.3％ マルトース 2.0％ グルコース 0.1％ ツイーン 80 0.005％ クロラムフエニコール 0.02％ PH 6.0 培養終了後、この培養液を3500rpmで10分間遠
心分離し、沈澱部に4MU−Glu、4MU−Ｐ、
AMC−LeuおよびAMC−Argを各々10-4M含み
塩化マグネシウムを10-3M含むPH5.0、1/50Ｍの
バルビトールバツハー2.5mlを加え、微量超音波
細胞破砕機（和研薬製ソニケーター Ｗ−10型）
で50W、３分間処理した。処理後、これらの反応
液を37℃で60分間保持した。その後、各反応液に
１／１０Ｍ、PH11.0のグリシンバツフアーを１ml添加
し、3000rpmで５分間遠心分離を行い、上清液の
蛍光強度を実施例１と同様の方法で測定し、
4MU−Ｐ、4MU−Glu、AMC−Leu、AMC−
Argの中の１つ以上の基質を分解する活性を有す
る反応液の本数を求めた。この結果に基づいて最
確法により検体中の真菌数を求めた。 同じ検体についてクロラムフエニコール0.01％
を含有するポテトデキストローズ寒天培地を用い
た寒天平板法により25℃で７日間培養して真菌数
を求めた。 これらの結果を第９表に示しそ。本法で測定し
た真菌数と寒天平板法で測定した真菌数は第９表
に示したように三つの試料でよく一致しているこ
とがわかる。
【表】
めた真菌数
求めた真菌数
求めた真菌数
図１は蛍光強度と検水10ml中の菌数の関係を示
している。●印は多摩川の河水、〇印は食品製造
工程排水、□印は都市下水、△印は生活廃水10ml
中に含まれる菌数と蛍光強度の関係を示してい
る。図２は蛍光強度と検水10ml中の菌数の関係を
示している。
している。●印は多摩川の河水、〇印は食品製造
工程排水、□印は都市下水、△印は生活廃水10ml
中に含まれる菌数と蛍光強度の関係を示してい
る。図２は蛍光強度と検水10ml中の菌数の関係を
示している。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一定の検体をとり検体を含む異なつた希釈度
の溶液又はけん濁液となすプロセス(1)、プロセス
(1)の後に該溶液又はけん濁液を25℃ないし50℃に
保つことにより該検体中に含まれる微生物を生育
させるプロセス(2)、プロセス(1)の後であつてプロ
セス(2)の前又は後に一般式［１］で示される７−
アミノ−４−メチル−クマリン誘導体を該溶液又
はけん濁液に添加するプロセス(3)、およびプロセ
ス(2)およびプロセス(3)に該溶液又はけん濁液中に
生成された７−アミノ−４−メチル−クマリンを
測定するプロセス(4)より成る微生物菌数の測定
法。 （一般式［１］中ＲはＬ−アルギニル基、Ｌ−
ロイシル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル−フエ
ニルアラニル−セリル−アルギニル基またはピロ
グルタミル基を示す。） ２ 一定量の検体に、一般式［１］で示される７
−アミノ−４−メチルクマリン誘導体を添加した
後、25℃ないし40℃に保ち、生成された７−アミ
ノ−４−メチル−クマリンを測定することより成
る微生物菌数の測定法。 （一般式［１］中ＲはＬ−アルニギル基、Ｌ−
ロイシル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル−フエ
ニルアラニル−セリル−アルギニル基またはピロ
グルタミル基を示す。）
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58064308A JPS59192099A (ja) | 1983-04-12 | 1983-04-12 | 微生物菌数の測定法 |
| DE8484302431T DE3468125D1 (en) | 1983-04-12 | 1984-04-10 | Method of measuring the number of cells of microorganisms |
| EP84302431A EP0122148B1 (en) | 1983-04-12 | 1984-04-10 | Method of measuring the number of cells of microorganisms |
| US06/599,632 US4675289A (en) | 1983-04-12 | 1984-04-12 | Method of measuring the number of eumycete cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58064308A JPS59192099A (ja) | 1983-04-12 | 1983-04-12 | 微生物菌数の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59192099A JPS59192099A (ja) | 1984-10-31 |
| JPH0472517B2 true JPH0472517B2 (ja) | 1992-11-18 |
Family
ID=13254477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58064308A Granted JPS59192099A (ja) | 1983-04-12 | 1983-04-12 | 微生物菌数の測定法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4675289A (ja) |
| EP (1) | EP0122148B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59192099A (ja) |
| DE (1) | DE3468125D1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8416044D0 (en) * | 1984-06-22 | 1984-07-25 | Unilever Plc | Carrying out microchemical and microbiological tests |
| DE3429823A1 (de) * | 1984-08-14 | 1986-02-27 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Mittel und verfahren zum nachweis antimikrobiell wirksamer substanzen |
| US5089395A (en) * | 1985-02-27 | 1992-02-18 | University Of Cincinnati | Viable microorganism detection by induced fluorescence |
| EP0215066A1 (en) * | 1985-02-27 | 1987-03-25 | University Of Cincinnati | Viable microorganism detection by induced fluorescence |
| US4803157A (en) * | 1986-01-31 | 1989-02-07 | Eastman Kodak Company | Hydrolyzable fluorescent substrates for phosphatases and analytical use thereof |
| US4812409A (en) * | 1986-01-31 | 1989-03-14 | Eastman Kodak Company | Hydrolyzable fluorescent substrates and analytical determinations using same |
| US4925789A (en) * | 1986-06-30 | 1990-05-15 | Edberg Stephen C | Method and medium for use in detecting target microbes in situ in a specimen sample of a possibly contaminated material |
| US5429933A (en) | 1986-06-30 | 1995-07-04 | Edberg; Stephen C. | Detection of first generation environmental sourced microbes in an environmentally-derived sample |
| US4952495A (en) * | 1987-06-08 | 1990-08-28 | Eastman Kodak Company | Hydrolyzable compounds which release electron transfer agents and analytical use of same |
| GB8727796D0 (en) * | 1987-11-27 | 1987-12-31 | Radiometer Corporate Developme | Urine assay process and kit |
| FR2628531B1 (fr) * | 1988-03-08 | 1992-10-02 | Chemunex Sa | Procede de recherche, de detection specifique et de numeration de micro-organismes, installation pour la mise en oeuvre dudit procede |
| JPH0411899A (ja) * | 1990-04-27 | 1992-01-16 | Shimadzu Corp | 生物体の計数法 |
| US5700655A (en) * | 1995-11-14 | 1997-12-23 | Idexx Laboratories, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| US5985594A (en) | 1995-11-14 | 1999-11-16 | Idexx Laboratories, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| US7122338B2 (en) * | 1995-11-14 | 2006-10-17 | Biocontrol Systems, Inc. | Method for quantification of biological material in a sample |
| GB9609024D0 (en) | 1996-05-01 | 1996-07-03 | Idg Uk Ltd | Compounds |
| US5854011A (en) * | 1996-12-19 | 1998-12-29 | Idexx Laboratories Incorporated | Method and components for the detection of yeasts and/or molds in a sample |
| US6548021B1 (en) | 1997-10-10 | 2003-04-15 | President And Fellows Of Harvard College | Surface-bound, double-stranded DNA protein arrays |
| DE102004002607A1 (de) * | 2004-01-15 | 2005-08-04 | Beiersdorf Ag | Visualisierung von Sonnenschutzmitteln auf der Haut |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5468290A (en) * | 1977-11-10 | 1979-06-01 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Method of measuring toxin in bacterium by original fluorescent substance |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3451893A (en) * | 1966-09-27 | 1969-06-24 | Litton Systems Inc | Method of rapidly detecting microorganisms |
| US4146604A (en) * | 1973-05-31 | 1979-03-27 | Block Engineering, Inc. | Differential counting of leukocytes and other cells |
| JPS53105477A (en) * | 1977-02-26 | 1978-09-13 | Ajinomoto Co Inc | 7-glycylprolylamono-4-methylcoumarine |
| US4215047A (en) * | 1977-06-06 | 1980-07-29 | Ajinomoto Company Incorporated | 7-(Arginylamino)-4-methylcoumarins |
| DE3117241A1 (de) * | 1981-04-30 | 1982-11-18 | Ajinomoto Co., Inc., Tokyo | Schnellverfahren zum nachweis oder zur bestimmung von mikroorganismen |
| JPS6064797A (ja) * | 1983-09-20 | 1985-04-13 | Seiko Instr & Electronics Ltd | プレス装置 |
-
1983
- 1983-04-12 JP JP58064308A patent/JPS59192099A/ja active Granted
-
1984
- 1984-04-10 EP EP84302431A patent/EP0122148B1/en not_active Expired
- 1984-04-10 DE DE8484302431T patent/DE3468125D1/de not_active Expired
- 1984-04-12 US US06/599,632 patent/US4675289A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5468290A (en) * | 1977-11-10 | 1979-06-01 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Method of measuring toxin in bacterium by original fluorescent substance |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0122148A1 (en) | 1984-10-17 |
| US4675289A (en) | 1987-06-23 |
| JPS59192099A (ja) | 1984-10-31 |
| DE3468125D1 (en) | 1988-01-28 |
| EP0122148B1 (en) | 1987-12-16 |
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