JPS58896A - グアノシンの製造法 - Google Patents
グアノシンの製造法Info
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- JPS58896A JPS58896A JP56097309A JP9730981A JPS58896A JP S58896 A JPS58896 A JP S58896A JP 56097309 A JP56097309 A JP 56097309A JP 9730981 A JP9730981 A JP 9730981A JP S58896 A JPS58896 A JP S58896A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- adenine
- guanosine
- culture
- amount
- medium
- Prior art date
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- Granted
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物を用いるグアノシンの製造法に関する
。
。
グアノシンは、調味料として食品分野で重要な位曹を占
めている５′−グアニル酸の製造原料として有用である
。醗酵法Ｋｊってグアトノシンを製造する方法としては
、いくつかの方法が知られており、たとえば、バチｐｙ
ｘ−プミルス（Ｂａｅｉｌｌｕｌｐｕｍｉ ｌｕｓ ）
やバチＡ／ｘ−リケニホ＊ ｉ Ｘ（Ｂｍａｉｌｌｕｉ
＋１ ｉａｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ）を用いる方法（持
金＠ ４８−３３３９２）、バチ）ｖｘ−ズプチ１ ｘ
（Ｂａ５１１１ｍｍ ｓｗｂ＊１ｌｉｓ ）を用いる
方決（特公昭５５−１９５５）などがある。
めている５′−グアニル酸の製造原料として有用である
。醗酵法Ｋｊってグアトノシンを製造する方法としては
、いくつかの方法が知られており、たとえば、バチｐｙ
ｘ−プミルス（Ｂａｅｉｌｌｕｌｐｕｍｉ ｌｕｓ ）
やバチＡ／ｘ−リケニホ＊ ｉ Ｘ（Ｂｍａｉｌｌｕｉ
＋１ ｉａｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ）を用いる方法（持
金＠ ４８−３３３９２）、バチ）ｖｘ−ズプチ１ ｘ
（Ｂａ５１１１ｍｍ ｓｗｂ＊１ｌｉｓ ）を用いる
方決（特公昭５５−１９５５）などがある。
しかしながら、これらの公知の方法においては、培養液
中のグアノシンの蓄積量は、たかだか８ないし１０ｆ／
Ｉであ１て、ニー的な見地からは必ずしも有利な方法と
はいえない。
中のグアノシンの蓄積量は、たかだか８ないし１０ｆ／
Ｉであ１て、ニー的な見地からは必ずしも有利な方法と
はいえない。
本発明者らは、培養液中のグアノシン蓄積量を増大させ
る目的で鋭意研究したところ、アデニン要求性を有し、
グアノシンを生産する能力を有する微生物を培養して、
グアノシンを生成さゼるに際し、微生物の生育に必須で
あるアデニン含有物質を、微生物の生育状況＊を勘案し
つ一つ、培養の進行中に少量ずつ間歇的または連続的に
添加することによってグアノシンの生成量を、顕著Ｋｊ
ｌｌ大させることができることを見い出し、これに基づ
いてさらに研究した結果、本発明を完成した。
る目的で鋭意研究したところ、アデニン要求性を有し、
グアノシンを生産する能力を有する微生物を培養して、
グアノシンを生成さゼるに際し、微生物の生育に必須で
あるアデニン含有物質を、微生物の生育状況＊を勘案し
つ一つ、培養の進行中に少量ずつ間歇的または連続的に
添加することによってグアノシンの生成量を、顕著Ｋｊ
ｌｌ大させることができることを見い出し、これに基づ
いてさらに研究した結果、本発明を完成した。
本発柄は、アデニン要求性およびグアノシン生産能を有
する微生物を培地に培養しグアノシンを培養物中に生成
蓄積せしめ培養物からグアノシンを採取する方法におい
て、アデニン含有物質の所要量の約５０％以下を含有す
る培地で培養を開始し、＠地中のアデニン含有物質のほ
ぼ消費された時点からその所要量の残部を間歇的また社
連続的に添加して培養することを特做とするグアノシン
の製造法である。
する微生物を培地に培養しグアノシンを培養物中に生成
蓄積せしめ培養物からグアノシンを採取する方法におい
て、アデニン含有物質の所要量の約５０％以下を含有す
る培地で培養を開始し、＠地中のアデニン含有物質のほ
ぼ消費された時点からその所要量の残部を間歇的また社
連続的に添加して培養することを特做とするグアノシン
の製造法である。
本発明において用いられるアデニン含有物質としてハ、
アデニン、アデノシン、５′−アデニン含有物質＊ 、
３’−アデノジンモノリン酸、 ５’−アデノシンジ
リン酸、５′−アデノシントリリン酸。
アデニン、アデノシン、５′−アデニン含有物質＊ 、
３’−アデノジンモノリン酸、 ５’−アデノシンジ
リン酸、５′−アデノシントリリン酸。
リボ核酸、デオキＶリボ核酸はもとよ如、それらを含・
肴する敞生物一体やその抽出物、肉エキス。
肴する敞生物一体やその抽出物、肉エキス。
魚肉エキスなどの天然有機物や、アデニルコハク酸など
のアデニン誘導体などがあげられる。
のアデニン誘導体などがあげられる。
従来、アデニン曽求性徽生物の培養においては、アデニ
ン含有物質の所要量の全Ｊ１を初発培地に添加する方法
がとられているが、本発明においては、初ｂｍ地に添加
されるアデニン含有物質の量を所要量（ｉ）５０％以下
に制限し、培養が開始されて、初発培地に添加されたア
デニン含有物質がほぼ消費された時点からその所要量の
残ｖ４を間歇的ま九は連破的に添加する方法が用すられ
る。
ン含有物質の所要量の全Ｊ１を初発培地に添加する方法
がとられているが、本発明においては、初ｂｍ地に添加
されるアデニン含有物質の量を所要量（ｉ）５０％以下
に制限し、培養が開始されて、初発培地に添加されたア
デニン含有物質がほぼ消費された時点からその所要量の
残ｖ４を間歇的ま九は連破的に添加する方法が用すられ
る。
本発明でいう「アデニン含有物質の所要量」とは、培地
に添加されｂアデニン含有物質の量であって、グアノシ
ンの生ａ！蓄積が最大となるような量をいう、この量は
供試菌株の種類や培養条件によって異るものであるが、
通常はアデニンに換算して約０．００１ないし０−００
２ｍ＠ｊ）ａ／ｊ程度である。
に添加されｂアデニン含有物質の量であって、グアノシ
ンの生ａ！蓄積が最大となるような量をいう、この量は
供試菌株の種類や培養条件によって異るものであるが、
通常はアデニンに換算して約０．００１ないし０−００
２ｍ＠ｊ）ａ／ｊ程度である。
「アデニン含有物質のはぼ消費され九時点」とハ、培地
中のアデニン含有物質の量がアデニンとして約０，０１
ｍｎｏｌ・／ｌ以下に１つ九時点を意味する。
中のアデニン含有物質の量がアデニンとして約０，０１
ｍｎｏｌ・／ｌ以下に１つ九時点を意味する。
本発明のアデニン含有物質の添加方法の貞体例としては
、たとえば、■あらかじめ決給られたタイムスケジュー
ｐＫしたがって、アデニン含有物質の添加量を等分して
、または時間的に変化さゼながら間歇的オたは連続的に
添加する方法、■培養液中の微生物菌体の増殖量の変化
にしたがって、アデニン含有物質の添加量を変化さゼな
がら、間歇的またはｊＩＨ的に添加する方法、■＄１１
液中の屡存峻嵩濃度の変化や培養液の酸素消費量をはじ
め、培養液の発熱量など微生物の生育の杖況を各−のセ
ンナ−や検出機器類で検知して、あらかじめ決められた
量のアデニン含有物質をＫＷ的または１ｉ！綾的に添加
する方法などが挙げられ、いずれの方法屯可能である。
、たとえば、■あらかじめ決給られたタイムスケジュー
ｐＫしたがって、アデニン含有物質の添加量を等分して
、または時間的に変化さゼながら間歇的オたは連続的に
添加する方法、■培養液中の微生物菌体の増殖量の変化
にしたがって、アデニン含有物質の添加量を変化さゼな
がら、間歇的またはｊＩＨ的に添加する方法、■＄１１
液中の屡存峻嵩濃度の変化や培養液の酸素消費量をはじ
め、培養液の発熱量など微生物の生育の杖況を各−のセ
ンナ−や検出機器類で検知して、あらかじめ決められた
量のアデニン含有物質をＫＷ的または１ｉ！綾的に添加
する方法などが挙げられ、いずれの方法屯可能である。
なかでも、培養時開の経過と共に、アデニン含有物質の
添加量を指数的に増大さゼてい〈方法は、短時間で著量
のグアノシンを生成蓄積させることが可能であるなどの
点で、一層有利である。この場合、アデニン含有物質の
添加開始後の時１１ｔＫおける、単位時間当シのアデニ
ン含有物質添加量Ｃ以下、「供給速度」と呼ぶ。）Ｆ（
４１１１次式のように表わすことができる。
添加量を指数的に増大さゼてい〈方法は、短時間で著量
のグアノシンを生成蓄積させることが可能であるなどの
点で、一層有利である。この場合、アデニン含有物質の
添加開始後の時１１ｔＫおける、単位時間当シのアデニ
ン含有物質添加量Ｃ以下、「供給速度」と呼ぶ。）Ｆ（
４１１１次式のように表わすことができる。
Ｆ ｉｔｌ −Ｆ ｆｏｌ ６ＩＰ（に１） （［〜
０）ここでＦ ｌＯｉは添加開始時における供給速度、
Ｋは定数（以下、ｒ比供Ｍ遼度」と呼ぶ。）である。
０）ここでＦ ｌＯｉは添加開始時における供給速度、
Ｋは定数（以下、ｒ比供Ｍ遼度」と呼ぶ。）である。
この方法によれば、時間’ＥＮＤまでに添加されたアデ
ニン含有物質量Ａｄ、。？ＡＬＩＩｉ次式で示される。
ニン含有物質量Ａｄ、。？ＡＬＩＩｉ次式で示される。
Ｆ （０１
”ＴｕＴＡＬ−−ｌ−（”Ｐ（Ｋｔ、、９）−１）＋Ａ
ｄｘＮ（九だし、ＡｄＩＮは初発培地に添加されたアデ
ニン含有物質の量。） アデニン含有物質のｆｉ加開始時期、ｍ加するアデニン
含有物質量（ＡｄＴＯＴＡＬ−Ａｄ工Ｍ”ＡｄＡＤＤと
する。）、初発供飴遼ＪｆＦ （０３、比供給這度には
、使用する微生物のｓＩ！中培地、培養条件などによっ
て異なるが、アデニン含有物質の添加開始時期としては
、該曹の増殖量が最終到達増殖量００％ないし約７５％
、と〕わけ、約５％ないし５０％に達し九時点からが、
ｌａ としては、該薗の生育に必＃な量ムＤＤ （通常、アデニンとして、約０．００１ないし０．００
２１ｍ０１＠／ｌ ） ノ約２５％ないし１００％、と
郁ゎけ約５０％′＆いし９５％が、Ｆ （０）としては
、単位時間当り、Ａｄ の約０．１％ないし５０％
、とりゎムＤＤ け約１％ないし２０％が、Ｋとしては約０，０１ｈｒ−
１ないし５ ｈｒ ”、さらに好ましくは約◎、Ｑ５ｈ
ｒ ” ！いし０． ＊ ｈｒ−１、とりわけ約０．０
７５＆Ｖ七〇、１５ｈｒ−１が１ｉｉｌＬい。
ｄｘＮ（九だし、ＡｄＩＮは初発培地に添加されたアデ
ニン含有物質の量。） アデニン含有物質のｆｉ加開始時期、ｍ加するアデニン
含有物質量（ＡｄＴＯＴＡＬ−Ａｄ工Ｍ”ＡｄＡＤＤと
する。）、初発供飴遼ＪｆＦ （０３、比供給這度には
、使用する微生物のｓＩ！中培地、培養条件などによっ
て異なるが、アデニン含有物質の添加開始時期としては
、該曹の増殖量が最終到達増殖量００％ないし約７５％
、と〕わけ、約５％ないし５０％に達し九時点からが、
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２１ｍ０１＠／ｌ ） ノ約２５％ないし１００％、と
郁ゎけ約５０％′＆いし９５％が、Ｆ （０）としては
、単位時間当り、Ａｄ の約０．１％ないし５０％
、とりゎムＤＤ け約１％ないし２０％が、Ｋとしては約０，０１ｈｒ−
１ないし５ ｈｒ ”、さらに好ましくは約◎、Ｑ５ｈ
ｒ ” ！いし０． ＊ ｈｒ−１、とりわけ約０．０
７５＆Ｖ七〇、１５ｈｒ−１が１ｉｉｌＬい。
本発明で使用される微生物は、アデニン要求性を有しか
つグアノシン生産ａｔ有する微生物であれぽいずれでも
よい。該微生物の具体例としては、たとえばバチルス（
１３ａｅｉｌｌｕｌ）属菌、ブレビバクテリウム（Ｂｒ
ａｖｉｂａａｔａｒｉｕｍ ）属菌、コリネバクテリウ
ム（Ｃｏｒｙｎａｂａｅｔｅｒｉｓｕｎ ）属菌などが
挙げられる。
つグアノシン生産ａｔ有する微生物であれぽいずれでも
よい。該微生物の具体例としては、たとえばバチルス（
１３ａｅｉｌｌｕｌ）属菌、ブレビバクテリウム（Ｂｒ
ａｖｉｂａａｔａｒｉｕｍ ）属菌、コリネバクテリウ
ム（Ｃｏｒｙｎａｂａｅｔｅｒｉｓｕｎ ）属菌などが
挙げられる。
該ノ鳴チルス属菌としてｔ＝、たとえば、バチルス・−
ｙ ［ｓｙ ｘ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍ目Ｗ皇）
、バチルス・ズブチリｘ （Ｂｍｅｉｌｌｕｓ ５ｕｂ
ｔｉｌｉｓ）などの種が挙げられ、８体的には、バチル
ス・デミルスム１４Ｂ−５−１６（ＦＥＲＭ ＢＰ−
６、ＩＦｏ １２４８３）、バチルス・ズブチリス
ＡＴＣＣ１９２２１（ＩＦｏ １４１２３）などが挙げ
られる。上記ＦＥＲＭＢＰ番号は、プダベスト条約によ
る工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番号を、ＡＴ
ＣＣ香号はり・アメリカン・タイプ・、ｔ ｆｉ／ ｆ
ヤ−・コ１／りＶ −ｙ （Ｔｈ＠Ａ１１！１ａｒｉ
ｃａｉｘＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ （ａｌｌｓｅｔｉ
ｏｎ ） （米国）の寄託番号音、ＩＦＯ番号は財団法
人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ褒わす。なお、上記
ＩＰ０ １２４８３株は持分Ｗ８４８−’３３３９２号
公報に記載されている。を九上記ＡＴＣＣ１９２２１株
は、ジ・アメリカン・タイプ・２＋ルチヤー・コレクＶ
＃ン発行のカタログ・オプ・ストレインズｌ第１４版１
９８０４（ＴｈｅＡｍｓｒｉｏｍｍ Ｔｙｐｅ （ｕｌ
ｔｕｒ＠（：ｏｌｌ・ｃｔｔｏｍ Ｃａｔａｌｏｇｕ・
ｏｆ ３ｔｒａｉｎｓ Ｉ Ｆｏｕｒｔｅ＠ｎｔｈ Ｅ
ｄｉｔｉｏｍ １９１１０ ）に収載されている。
ｙ ［ｓｙ ｘ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍ目Ｗ皇）
、バチルス・ズブチリｘ （Ｂｍｅｉｌｌｕｓ ５ｕｂ
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ス・デミルスム１４Ｂ−５−１６（ＦＥＲＭ ＢＰ−
６、ＩＦｏ １２４８３）、バチルス・ズブチリス
ＡＴＣＣ１９２２１（ＩＦｏ １４１２３）などが挙げ
られる。上記ＦＥＲＭＢＰ番号は、プダベスト条約によ
る工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番号を、ＡＴ
ＣＣ香号はり・アメリカン・タイプ・、ｔ ｆｉ／ ｆ
ヤ−・コ１／りＶ −ｙ （Ｔｈ＠Ａ１１！１ａｒｉ
ｃａｉｘＴｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ （ａｌｌｓｅｔｉ
ｏｎ ） （米国）の寄託番号音、ＩＦＯ番号は財団法
人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ褒わす。なお、上記
ＩＰ０ １２４８３株は持分Ｗ８４８−’３３３９２号
公報に記載されている。を九上記ＡＴＣＣ１９２２１株
は、ジ・アメリカン・タイプ・２＋ルチヤー・コレクＶ
＃ン発行のカタログ・オプ・ストレインズｌ第１４版１
９８０４（ＴｈｅＡｍｓｒｉｏｍｍ Ｔｙｐｅ （ｕｌ
ｔｕｒ＠（：ｏｌｌ・ｃｔｔｏｍ Ｃａｔａｌｏｇｕ・
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ｄｉｔｉｏｍ １９１１０ ）に収載されている。
本発明に使用される微生物を培養する培地とじぶん、ぶ
どう糖、庶糖などの糖類−９ほか、グリセリン、メタノ
−Ａ／、エタノ−〜、ツルピトーｐなどの一価ないし多
価のアルコール類、酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸
、オレイン酸などの脂肪酸類、大豆油、オサ−１油、魚
油、鯨油、棉賽油。
どう糖、庶糖などの糖類−９ほか、グリセリン、メタノ
−Ａ／、エタノ−〜、ツルピトーｐなどの一価ないし多
価のアルコール類、酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸
、オレイン酸などの脂肪酸類、大豆油、オサ−１油、魚
油、鯨油、棉賽油。
パーム油、ラードなどの油脂類、ノナン、デカン。
ウンデカン、ヘキｆデカン、エイコサン、ペンタコサン
などの鳳−バフフィン類ｏほか、ケロをン。
などの鳳−バフフィン類ｏほか、ケロをン。
ｌｆｘオイμ、ペビーガスオ゛イルなどの羨化水ｍｍな
どがそれぞれ単独もしくは混合して用いられる。
どがそれぞれ単独もしくは混合して用いられる。
窒ＩＩｍとしては、ベプＦン、大豆粉、コーンステイー
プＩ＃倉−１ｌｌｉｌ母、肉エキスなどの有ｓｉｉ素麺
のほか、硫酸、硝酸、塩酸、＊酸などのアンモニウム樵
、アυモニアガス、アレモニア水中尿素すどの無ｗｉｔ
素源が、それぞれ単独で、もしくは混合して用いられる
。その他該面の生育に必要な各纏の無機塩類、たとえば
カルシウム、カリウム。
プＩ＃倉−１ｌｌｉｌ母、肉エキスなどの有ｓｉｉ素麺
のほか、硫酸、硝酸、塩酸、＊酸などのアンモニウム樵
、アυモニアガス、アレモニア水中尿素すどの無ｗｉｔ
素源が、それぞれ単独で、もしくは混合して用いられる
。その他該面の生育に必要な各纏の無機塩類、たとえば
カルシウム、カリウム。
ナトリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、鋼。
亜鉛などの硫酸塩、填酸樵、！＃酸塩、硝酸塩、燐酸壕
、＃＃福などを、また該菌の生育に必要なアミノ酸類、
ビタミン類などを適宜選択して、それらを単独または組
合せて添加して用いられる。さらに必要に応じて、シリ
−コーンオイル、ボリアｐキレングリコールエーテｆｉ
７ｆｘどの消泡剤や界面活性剤などを添加してもよい。
、＃＃福などを、また該菌の生育に必要なアミノ酸類、
ビタミン類などを適宜選択して、それらを単独または組
合せて添加して用いられる。さらに必要に応じて、シリ
−コーンオイル、ボリアｐキレングリコールエーテｆｉ
７ｆｘどの消泡剤や界面活性剤などを添加してもよい。
培養は、振盪あるいは通覧攪拌深部培養などの好電的条
件下に実施される。培地のｐ＝ＨＦｉ通常約５ないし８
の範囲から選定されるが、好ましくは−ＰＨ約５．５な
いし７．５の範囲で培養される。培養中に培地のｐＨの
変動が観測されれば、これを望ましい範囲に補正するた
め、たとえば、水酸化アルカリ（例、水酸化ナトリウム
）、炭酸力ｆｉ／Ｖウム、アυモニアなどの水溶液、ｍ
ｍ液あるいはアレモニアガスなどを適宜補添しつつ培養
してもよい、培養の温度は、使用される微生物の生育に
適した一度を選択すればよく、通常的２０℃ないし６０
°Ｃ１好ましくは約２５＠Ｃないし４５℃で培養するの
が有利である。培養の時間は、グアノシンの蓄積量が最
大に達するまで培養すればよく、通常的２４ないし１４
４時聞培養すれば、その目的を達成することができる。
件下に実施される。培地のｐ＝ＨＦｉ通常約５ないし８
の範囲から選定されるが、好ましくは−ＰＨ約５．５な
いし７．５の範囲で培養される。培養中に培地のｐＨの
変動が観測されれば、これを望ましい範囲に補正するた
め、たとえば、水酸化アルカリ（例、水酸化ナトリウム
）、炭酸力ｆｉ／Ｖウム、アυモニアなどの水溶液、ｍ
ｍ液あるいはアレモニアガスなどを適宜補添しつつ培養
してもよい、培養の温度は、使用される微生物の生育に
適した一度を選択すればよく、通常的２０℃ないし６０
°Ｃ１好ましくは約２５＠Ｃないし４５℃で培養するの
が有利である。培養の時間は、グアノシンの蓄積量が最
大に達するまで培養すればよく、通常的２４ないし１４
４時聞培養すれば、その目的を達成することができる。
本発明方法で発酵液中に生成されたグアノシンはすでに
公知にされている通常の手段、たとえばイオン交換樹脂
や活性炭によるクロマトグツフィー、沈＃！決あるいは
Ｓ線抽出法などの分＃Ｍ製手段を単独もしくは組合せて
適用することによって採取することができる。
公知にされている通常の手段、たとえばイオン交換樹脂
や活性炭によるクロマトグツフィー、沈＃！決あるいは
Ｓ線抽出法などの分＃Ｍ製手段を単独もしくは組合せて
適用することによって採取することができる。
本発明の方法によれば、従来のアデニン含有物質を一括
して培地に添加する方法に比べて、ｉｔ ｙ２倍にも達
する量のグアノシンを、培養液中に蓄積させることがで
きる。したがって、本発明方法を用いると、一定量の設
備を用する場合であっても、目的物グアノシンの生産量
が増大され、また、培養液中の目的物グアノシンの含有
量が多いので、目的物グアノシンの採取が容易であるな
どの点で、本発明は工業的生産上有利な方法である。
して培地に添加する方法に比べて、ｉｔ ｙ２倍にも達
する量のグアノシンを、培養液中に蓄積させることがで
きる。したがって、本発明方法を用いると、一定量の設
備を用する場合であっても、目的物グアノシンの生産量
が増大され、また、培養液中の目的物グアノシンの含有
量が多いので、目的物グアノシンの採取が容易であるな
どの点で、本発明は工業的生産上有利な方法である。
以下に＊ｍ例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。なお、以下の賽織例において、培地の添加物のバーｔ
ントーはとくにことわ）のないかぎり、重量７ｗ量バー
セン） （Ｗ／Ｖ、％）を表わす。
。なお、以下の賽織例において、培地の添加物のバーｔ
ントーはとくにことわ）のないかぎり、重量７ｗ量バー
セン） （Ｗ／Ｖ、％）を表わす。
９！總例 １
γゲニン１００１１／ｊを含む栄養寒天培地上に生育し
たバチルス・プミルス 轟１４Ｂ−５−１６（ＦＥＲＭ
ＢＦ−６，１Ｆ０１２４８３）をグルコース４％。
たバチルス・プミルス 轟１４Ｂ−５−１６（ＦＥＲＭ
ＢＦ−６，１Ｆ０１２４８３）をグルコース４％。
尿素０２％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム０．５％１硫
酸マグネシウム（７水填）０４％、塩化カリウム０．１
％、硫酸マンガン（約４水塩）０．００３％。
酸マグネシウム（７水填）０４％、塩化カリウム０．１
％、硫酸マンガン（約４水塩）０．００３％。
塩化力＃Ｖウム（２水樵）０．２％、コーンステイープ
リカー２％、リボ核酸０２５％、ヒスチジン０．０３％
、ビオチン２００μｅｌｌからなる滅−シード培地２０
ｍを含む２０〇−容三角フラスコ５零に接種し、１８時
閣、３７℃で振鏝培養した。
リカー２％、リボ核酸０２５％、ヒスチジン０．０３％
、ビオチン２００μｅｌｌからなる滅−シード培地２０
ｍを含む２０〇−容三角フラスコ５零に接種し、１８時
閣、３７℃で振鏝培養した。
このシード培養液１００ｄを、滅菌し九２２％ダグルタ
ミン酸ナトリウム１．０％、硫酸マグネ＆９ム（７水＃
Ｌ）０．４％、塩化カリウム０．２％、堆化力ｆｉ／Ｖ
ウム（２水塩）０４％、硫酸マンガン（約４水樵）０．
００６％、ヒスチジン０．０３％、ビオチン４００ｐｆ
／１．イ／Ｖ：１０．１ ％ 、 ：Ｉ−ンｘａｐ４−
プリカー５．０％およびリボ核酸０．０３％（アデニン
含有物質所要量の約１０％）からなる主発酵培地１１と
を入れ九ｓ １ｖｉｓ／ヤーフアーメンターに移植して
、温度３８℃、＠Ｊ転数ＬＯＯＯＲ，Ｐ、Ｍ、、通電量
０．６ｖ、 ｖ、 Ｍ、の条件で主発酵を開始した。こ
の培地の場合、増殖量の代表値として測定した５９Ｑｎ
ｍの波長における吸光度×稀釈倍数Ｃ以下、Ｕ、 ０．
Ｄ、と称す。）の値が、初発本 ２、最終３！となる
ことが予備実験でわがうていたので、該菌が増殖を開始
してｕＯ９Ｄ、が７．２ Ｋ ＆った培養８時間目より
、アデニン含有物質としてｙｇ核酸の１０％溶液を、初
発撫給速度Ｆ （０１−０，００３％／ｈｒで添加を開
始し、以後、添加リボ被酸総量が培地液量に対し、０．
３２％になるまで表ＩＫ示した比供給遭度にで、１時間
毎に添加し、７２時間まで培養した。なお、培養中は、
培養液の−ＰＨが６．７に保持されるように、２５％の
アンモニア水を自動的Ｋｍ！加した。このようＫして得
られた発酵終了液のグアノシン量を高速液体クロマトグ
ツフィーで測定し、褒１に示す結果を得た。
ミン酸ナトリウム１．０％、硫酸マグネ＆９ム（７水＃
Ｌ）０．４％、塩化カリウム０．２％、堆化力ｆｉ／Ｖ
ウム（２水塩）０４％、硫酸マンガン（約４水樵）０．
００６％、ヒスチジン０．０３％、ビオチン４００ｐｆ
／１．イ／Ｖ：１０．１ ％ 、 ：Ｉ−ンｘａｐ４−
プリカー５．０％およびリボ核酸０．０３％（アデニン
含有物質所要量の約１０％）からなる主発酵培地１１と
を入れ九ｓ １ｖｉｓ／ヤーフアーメンターに移植して
、温度３８℃、＠Ｊ転数ＬＯＯＯＲ，Ｐ、Ｍ、、通電量
０．６ｖ、 ｖ、 Ｍ、の条件で主発酵を開始した。こ
の培地の場合、増殖量の代表値として測定した５９Ｑｎ
ｍの波長における吸光度×稀釈倍数Ｃ以下、Ｕ、 ０．
Ｄ、と称す。）の値が、初発本 ２、最終３！となる
ことが予備実験でわがうていたので、該菌が増殖を開始
してｕＯ９Ｄ、が７．２ Ｋ ＆った培養８時間目より
、アデニン含有物質としてｙｇ核酸の１０％溶液を、初
発撫給速度Ｆ （０１−０，００３％／ｈｒで添加を開
始し、以後、添加リボ被酸総量が培地液量に対し、０．
３２％になるまで表ＩＫ示した比供給遭度にで、１時間
毎に添加し、７２時間まで培養した。なお、培養中は、
培養液の−ＰＨが６．７に保持されるように、２５％の
アンモニア水を自動的Ｋｍ！加した。このようＫして得
られた発酵終了液のグアノシン量を高速液体クロマトグ
ツフィーで測定し、褒１に示す結果を得た。
（以下余白）
ｆｌＩ！に４Ａ２
バチルス・プミルス１１４ｇ−５−１６の代ＤＫパナル
ス・ズブチリスＡＴＣＣ１９２２１（ＩＦＯ１４１２３
）を用いてｌｉ’織例１と同様の条件下に主発酵を開始
し、ＬＪ、 ０． Ｄ、が７．５ Ｋなった培養８時間
目から、ツボ核酸を添加量が約０２７またけ０．２８％
になるまで、褒２に示す供給速度で、１時間毎に添加し
た。培養７２時間のグアノシン量を測定して表２の結果
を得喪。
ス・ズブチリスＡＴＣＣ１９２２１（ＩＦＯ１４１２３
）を用いてｌｉ’織例１と同様の条件下に主発酵を開始
し、ＬＪ、 ０． Ｄ、が７．５ Ｋなった培養８時間
目から、ツボ核酸を添加量が約０２７またけ０．２８％
になるまで、褒２に示す供給速度で、１時間毎に添加し
た。培養７２時間のグアノシン量を測定して表２の結果
を得喪。
寮＃ｌＩ２−１ ０．０１％／ｈｒ ３４
１８，８ｉ）ｉ１Ｍ２−２ ０Ｄ２％／ｈｒ
２１ １ Ｂ、３寮１２−３ ０．０３％
／ｈｒ １６ ９．５寮一例 ３ 実施例１と同様に、バチルス・プミルス１ｌｌ４８−５
−１６（ＦＥＲＢＰ−６、ＩＰｏ １２４８３）を用い
て主＠鍵を開始するに当って、初発培地に添加するリボ
核酸量を＊３に示すように変更して開始し、それすれ表
３に示し九〇、 ０． Ｉ）、まで増殖した時点からリ
ボ核酸を、Ｆｉｏｌ−０，００３％／ｈｒ、に＝ｘＯ，
１ｈｒ ”の条件で添加を開始し、リボ被酸の添加総量
が、０．３％になるまで１時間毎に添加を行なって、７
２時間ばの生成グアノシン量を測定した処、表３に示す
結果が得られた。
１８，８ｉ）ｉ１Ｍ２−２ ０Ｄ２％／ｈｒ
２１ １ Ｂ、３寮１２−３ ０．０３％
／ｈｒ １６ ９．５寮一例 ３ 実施例１と同様に、バチルス・プミルス１ｌｌ４８−５
−１６（ＦＥＲＢＰ−６、ＩＰｏ １２４８３）を用い
て主＠鍵を開始するに当って、初発培地に添加するリボ
核酸量を＊３に示すように変更して開始し、それすれ表
３に示し九〇、 ０． Ｉ）、まで増殖した時点からリ
ボ核酸を、Ｆｉｏｌ−０，００３％／ｈｒ、に＝ｘＯ，
１ｈｒ ”の条件で添加を開始し、リボ被酸の添加総量
が、０．３％になるまで１時間毎に添加を行なって、７
２時間ばの生成グアノシン量を測定した処、表３に示す
結果が得られた。
表 ３
実施例３−１ ０ ０３０ ４
０ １２１３Ｉｊｉｉ廠例３−２ ０．
０１５ ０ｊ！８５ ６３ ６ １（
２９！織例３−３ ０４）３ ０，２７
７．５ ８ １４ａμ賽−例３−４
０１）６ ０２４ １０ １０
１６声実−例３−５ ０．１５ ０１５
２０ １４ １０Ｊｆｉ３ ０２７
．０ρＮ−、−Ｑ−、；８．−−− Ｓ！北賽總
例 ４ 主発酵培地の脚素源として、１１当り、グルコース１１
１６ｆ、オサゴ糖２９ｆを含む澱粉糖化液を用いて、実
施例１とＷ４１１ＩＮの条件下にバチルス・プミにスム
１ｌ４８−５−１６（ＦＥＲＢＰ−６、ＩＦ０１２４ｇ
３）を用いて主発酵を開始し、Ｕ、 Ｏ，Ｄ、が７．４
になワ九培養８時間目から、リボ核酸を１１４に示す初
発供給速度Ｆ （０１で添加をはじめ、以後添加リホ核
酸量が０．２７％になるまで、１時間毎にＫ −０１ｈ
ｒＯ比供給速度で添加していった。７２時間目のグアノ
シン量を測足した処、表４に示す結果が得られた。
０ １２１３Ｉｊｉｉ廠例３−２ ０．
０１５ ０ｊ！８５ ６３ ６ １（
２９！織例３−３ ０４）３ ０，２７
７．５ ８ １４ａμ賽−例３−４
０１）６ ０２４ １０ １０
１６声実−例３−５ ０．１５ ０１５
２０ １４ １０Ｊｆｉ３ ０２７
．０ρＮ−、−Ｑ−、；８．−−− Ｓ！北賽總
例 ４ 主発酵培地の脚素源として、１１当り、グルコース１１
１６ｆ、オサゴ糖２９ｆを含む澱粉糖化液を用いて、実
施例１とＷ４１１ＩＮの条件下にバチルス・プミにスム
１ｌ４８−５−１６（ＦＥＲＢＰ−６、ＩＦ０１２４ｇ
３）を用いて主発酵を開始し、Ｕ、 Ｏ，Ｄ、が７．４
になワ九培養８時間目から、リボ核酸を１１４に示す初
発供給速度Ｆ （０１で添加をはじめ、以後添加リホ核
酸量が０．２７％になるまで、１時間毎にＫ −０１ｈ
ｒＯ比供給速度で添加していった。７２時間目のグアノ
シン量を測足した処、表４に示す結果が得られた。
表 ４
実施例４−］ ０．００３ ３１
１５，９寮捲例４−２ ０．０１ ２
１ １６．７９！總例４−３ ０．０３
１４ １４．３実施例４−４
０．１ １０ ９．６賽験例
４ ←括添加 ８．１
′４Ｉ！捲例 ５ 実施例１と同様にバチルス・プミルス４１４Ｂ−５−１
６（ＦＥＲＭ ＢＰ−６、ＩＦｏ １２４８３）を用い
て主発酵を開始するに当って、初発培地に添加するアデ
ニン含有物質として、リボ被酸に替えて、表５に示す物
質を０．０００１ｍｏｊ・／ｌ添加し九培地で主発酵を
開始し、Ｕ、 ０． Ｄ、が７ｔｋいし畠になっ九時点
から、それぞれのアデニン含有物質を初発添加量ＦＩ０
１−０．０００２Ｗ：ｒＯ１ｅｒ／ｌ／ｂｙ 、 Ｋ
−０，１ｈｒ−１０Ｊｌｋｆｌｆ ？’添加をはじめ、
アデニン含有物質の総添加量が、０．００１ｍｏ＃ｅ／
ｊまたは０．００Ｌ’ｍｏｊｅ／ｊ Ｋなるまで、１時
間毎に添加をつづけて培養し、７２時間目の発酵液中の
ダアノシン含量を測定し友。表５に示す結果が得られた
。
１５，９寮捲例４−２ ０．０１ ２
１ １６．７９！總例４−３ ０．０３
１４ １４．３実施例４−４
０．１ １０ ９．６賽験例
４ ←括添加 ８．１
′４Ｉ！捲例 ５ 実施例１と同様にバチルス・プミルス４１４Ｂ−５−１
６（ＦＥＲＭ ＢＰ−６、ＩＦｏ １２４８３）を用い
て主発酵を開始するに当って、初発培地に添加するアデ
ニン含有物質として、リボ被酸に替えて、表５に示す物
質を０．０００１ｍｏｊ・／ｌ添加し九培地で主発酵を
開始し、Ｕ、 ０． Ｄ、が７ｔｋいし畠になっ九時点
から、それぞれのアデニン含有物質を初発添加量ＦＩ０
１−０．０００２Ｗ：ｒＯ１ｅｒ／ｌ／ｂｙ 、 Ｋ
−０，１ｈｒ−１０Ｊｌｋｆｌｆ ？’添加をはじめ、
アデニン含有物質の総添加量が、０．００１ｍｏ＃ｅ／
ｊまたは０．００Ｌ’ｍｏｊｅ／ｊ Ｋなるまで、１時
間毎に添加をつづけて培養し、７２時間目の発酵液中の
ダアノシン含量を測定し友。表５に示す結果が得られた
。
表 ５
５−１ アデニン６ （７ｊり ０Ｄ８１ １
４．７５−２ アデニン６ （７，０） ０．００
２ １２．８５−３ ｙｒＪｓｔ：ｙ ７
（７，０） ０ｊ）８１ １６．４５−
４ アデノシン７ （７，０） （１００２１Ｊ
１．Ｓ実施例 ６ Ｗ’ｌ ｌ１ｊｉ Ｎ Ｉ Ｋ 承したに＝０．１０ｈ
ｒ−１の場合の培養液（グアノシン１５４９／ｌ含有）
Ｉｌを８０℃に加温［７て速む分離し、上清液を２℃に
冷却してグアノシンを析出さゼ、１６．：ｌの粗グアノ
シン結晶を得た。この粗グアノシンを１１の水にｉ！濁
し、８０℃に加ｒ＝ Ｌ、て溶解したのち、２℃に冷却
して再結晶化し、グアノシンの結晶１８．３−を得た。
４．７５−２ アデニン６ （７，０） ０．００
２ １２．８５−３ ｙｒＪｓｔ：ｙ ７
（７，０） ０ｊ）８１ １６．４５−
４ アデノシン７ （７，０） （１００２１Ｊ
１．Ｓ実施例 ６ Ｗ’ｌ ｌ１ｊｉ Ｎ Ｉ Ｋ 承したに＝０．１０ｈ
ｒ−１の場合の培養液（グアノシン１５４９／ｌ含有）
Ｉｌを８０℃に加温［７て速む分離し、上清液を２℃に
冷却してグアノシンを析出さゼ、１６．：ｌの粗グアノ
シン結晶を得た。この粗グアノシンを１１の水にｉ！濁
し、８０℃に加ｒ＝ Ｌ、て溶解したのち、２℃に冷却
して再結晶化し、グアノシンの結晶１８．３−を得た。
、葆゛
Claims (1)
- アデニン要求性およびグアノシン生産能を有する微生物
を培地に墳費しグアノシンを培養物中に生成蓄積ゼしめ
培養物からグアノシンを採取する方＆において、アデニ
ン含有物質の所要量の約５０囁以下を含有する培地で培
養を開始し、培地中のアデニン含有物質のは埋消費され
た時点からその所要量の残部會閲歇的まえは連続的に添
加して培養することを特徴とするグアノシンの製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097309A JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
| GB08217563A GB2101131B (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing guanosine by fermentation |
| FR8210827A FR2508060A1 (fr) | 1981-06-22 | 1982-06-21 | Procede de production de guanosine |
| KR8202779A KR880002417B1 (ko) | 1981-06-22 | 1982-06-22 | 구아노신의 제조법 |
| US06/688,286 US4593000A (en) | 1981-06-22 | 1985-01-07 | Method of producing guanosine |
| SG841/88A SG84188G (en) | 1981-06-22 | 1988-11-30 | Method of producing guanosine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097309A JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58896A true JPS58896A (ja) | 1983-01-06 |
| JPH0339678B2 JPH0339678B2 (ja) | 1991-06-14 |
Family
ID=14188881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56097309A Granted JPS58896A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | グアノシンの製造法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4593000A (ja) |
| JP (1) | JPS58896A (ja) |
| KR (1) | KR880002417B1 (ja) |
| FR (1) | FR2508060A1 (ja) |
| GB (1) | GB2101131B (ja) |
| SG (1) | SG84188G (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5942895A (ja) * | 1982-07-27 | 1984-03-09 | Takeda Chem Ind Ltd | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
| US4792519A (en) * | 1985-03-05 | 1988-12-20 | International Technology Corporation | Method for the monitoring and control of microbial populations |
| US5204245A (en) * | 1991-05-15 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Extraction of thymidine and other nucleosides |
| CN112301071A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-02-02 | 赤峰蒙广生物科技有限公司 | 一种发酵法生产腺嘌呤的方法 |
| CN112592946A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-02 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种环保型高产鸟苷的工艺方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2822319A (en) * | 1954-08-17 | 1958-02-04 | Monod Jacques | Methods for the cultivation of micro-organisms |
| NL157656B (nl) * | 1967-04-13 | 1978-08-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Werkwijze voor het bereiden van l-glutaminezuur met behulp van een micro-organisme. |
| JPS515075B1 (ja) * | 1970-02-05 | 1976-02-17 | ||
| JPS4833392A (ja) * | 1971-09-02 | 1973-05-09 | ||
| SE380040B (ja) * | 1972-03-20 | 1975-10-27 | Marabou Ab | |
| JPS5414673B2 (ja) * | 1973-10-24 | 1979-06-08 | ||
| JPS5417033B2 (ja) * | 1973-06-14 | 1979-06-27 | ||
| JPS5545198B2 (ja) * | 1973-09-22 | 1980-11-17 | ||
| NZ183731A (en) * | 1976-04-02 | 1980-04-28 | Ici Ltd | Process for culturing cells(microorganism and tissue culture) dependent on the relationship between cycle time and biomass efficiency ratio |
-
1981
- 1981-06-22 JP JP56097309A patent/JPS58896A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-17 GB GB08217563A patent/GB2101131B/en not_active Expired
- 1982-06-21 FR FR8210827A patent/FR2508060A1/fr active Granted
- 1982-06-22 KR KR8202779A patent/KR880002417B1/ko active
-
1985
- 1985-01-07 US US06/688,286 patent/US4593000A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-11-30 SG SG841/88A patent/SG84188G/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2508060A1 (fr) | 1982-12-24 |
| GB2101131B (en) | 1986-01-02 |
| KR880002417B1 (ko) | 1988-11-08 |
| FR2508060B1 (ja) | 1984-12-21 |
| SG84188G (en) | 1989-04-14 |
| KR840000643A (ko) | 1984-02-25 |
| GB2101131A (en) | 1983-01-12 |
| US4593000A (en) | 1986-06-03 |
| JPH0339678B2 (ja) | 1991-06-14 |
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