JPS5817589B2 - コウボノセイゾウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はキャンデイダ属に属する新種キャンデイダ・ミ
ツイエンシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｍ１ｔｓｕｉｅｎｓｉ
ｓ）をエタノール、酢酸、糖類および炭化水素から選ば
れた一種あるいは二種以上を含む培地に接種し、好気的
に培養して酵母を製造する方法に関するものであり、食
品用および飼料用として品質のよい微生物蛋白質を供給
することを目的としている。

これまで菌体蛋白質の製造法として糖質、ノルマルパラ
フィン、メタン、メタノール、エタノールを炭素源とし
て用いる方法が知られている。

各々の炭素源を用いる方法にはそれぞれ特徴がある。

どの原料を用いるかは、立地条件、その他の要因によっ
て左右される。

しかし、いずれの原料を用いるにしても菌体蛋白生産を
工業的観点から見ると、高温でしかも低いｐＨで増殖速
度が速い菌株が先ず要求される。

また生産される菌体は蛋白含量が高く栄養価も高く安全
であることが必要である。

本発明者らは自然界よりこうした条件を満す菌株の探索
を行った結果、エタノール、酢酸、グルコース、でんぷ
んおよびでんぷんの分解物等の糖類によく生育する菌株
を見出した。

上記の物質は人類が長年に渡って食用あるいは飲料とし
て用いて来たものであり、原料に帰因する毒性の問題は
ないと考えられる。

また本菌株はノルマルパラフィンのような炭化水素を炭
素源として増殖することが出来る。

最近ノルマルパラフィンからの菌体蛋白についてもその
安全性テストが長期に渡って慎重に行われているのでや
がて安全性が確認されると考えられる。

本菌株は各種の炭素源を利用出来るので、工場立地条件
、経済条件に応じて炭素源を切りかえることができる有
利な方法を提供するものである。

本菌株の菌学的性質を示すと次の通りである。

（ａ） 各培地における生育状態 ■ ＭＹ液体培地における生育 ＭＹ液体培地に２８°Ｃ，３日間培養：形は主として円
形ないし卵形（１，８〜４ ） Ｘ（１，，８〜５）μ
であり、小形（２Ｘ２）μの細胞が主体である。

伸長細胞を多数生ずる。皮膜形成は旺盛である（ ｗｒ
ｉｎｋｌｅｄ又はｈｅａｖｙ）。

出芽法で増殖する。

■ ＭＹ培地での生育 ＭＹ寒天培地で２８℃、５日間培養；形は円形又は卵形
で（２〜４）Ｘ（２〜５）μ、伸長細胞の生成が多い。

生育は良好でコロニーは白色、外観は粉状で表面は粗面
散状を呈している。

コロニーは台状であり、周辺は乱糸状である。

■ 馬鈴薯寒天培地によるスライド培養馬鈴薯・グルコ
ース寒天培地で偽菌糸及び菌糸を旺盛に生ずる。

（ｂ） 子のう胞子の形成 石骨培地、ゴロドコワ培地、酢酸ナトリム培地、Ｖ−８
培地でテストしたが子のう胞子の形成は認められない。

（ｃ） 射非胞子の形成 なし くｄ） 各生理的性質 ■ 最適生育条件 最適ｐＨ； ｐＨ３ないし６ 最適生育温度；３０ないし４３℃ ■ 生育の範囲 ｐＨ；２ないし９．５、温度１５ないし４７°Ｃ■ 硝
酸塩を同化する。

■ 脂肪の分解 アルブチンを分解する。

■ 尿素の分解能（ウレアーゼ；クリステン培地で）は
陰性である。

■ ゼラチンの液化性はほとんどない。

■ 耐浸透圧性；２０係食塩を含むＭＹ寒天培地には生
育しない。

２０％食塩を含むＭＹ寒天培地には３週間の観察でわず
かにコロニーの形成が認められた。

■ カロチノイドの生成はない。

■ 顕著な有機酸の生成 酸の生成が認められる。

［相］ でんぷん様物質の生成はない。

■ ビタミン要求性；ビタミンがなくても生育する。

しかし全ビタミンを含む培地よりも生育は弱い。

０ リドマスミルク培地における反応 皮膜を形成する。

ペプトン化しない。色調は青紫色に変化する。

（ｅ） 各種炭素源の発酵性と同化性 （１）発酵性 グルコース ＋、ガラクトース ＋、シュクロ
ース ＋、マルトース ＋、ラクトース −
、ラフィノース ＋、（２）炭素化合物の同化
性 グルコース ＋、ガラクトース ＋（Ｓ）、シ
ュクロース 士、マルトース ＋、ラクトー
ス ＋（Ｓ）山−ンルボース ＋、セロビオー
ス 士、トレハロース ＋、メリビオース ＋
、ラフィノース ＋、メレジトース ＋、イヌ
リン −、可溶性デンプン士、キシロース
＋、Ｌｒアラビソース＋、Ｄ −アラビノ
ース ＋、Ｄ−リボース 士、Ｌ−ラムノース
＋（Ｓ）、エタノール ＋、グリセロール
＋、エリスリトール＋、アドニトール ＋
、ズルシトール 士、Ｄ−マニトール ＋、Ｄ−
ソルビトール＋、α−メチルグ）レコサイド＋、サリシ
ン 干、乳酸 ＋、コハク酸
＋、クエン酸 ＋、イノシトール 士、 （Ｓ）：おそい 本菌株は、子のう胞子を形成せず、カロチノイド性色素
の生成がなく、出芽法で増殖し、偽菌糸を形成するので
キャンデイダ属に属する酵母である。

本菌株は硝酸塩を唯一の窒素源として利用出来る点に特
徴がある。

Ｊ、Ｌｏｄｄｅｒは硝酸塩を窒素源として利用出来るキ
ャンデイダ属の酵母を「ＴｈｅｙｅａｓｔｓＪ （１９
７１年版）の９０９頁表２１にまとめて示している。

それによると、Ｃ，ｃｕｒｉｏｓａ、Ｃ，ａｑｕａ−ｔ
ｉｃａ、Ｃｏｍｅｌｉｎｉ ｉ、Ｃ，ｕｔｉｌｉｓ、Ｃ
，ｖａｒｔｉｏｖａａｒａｉなど（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ
に入るものは除外した）がこの仲間に入るが表１に示す
ように発酵性と同化性がかなりの点で本菌株と異ってい
る。

その上生育最高温度の点でも上記の菌株とは明らかに異
っているので本菌株はこれらの菌株とは別の種に属する
と判断される。

また、特開昭４９−７１１８８号に示されているカンテ
イダ・エタノサーモフィラム、カンデイタ・ユカサーモ
フイラム、カンデイダ・アシドサーモフィラムとは第一
に硝酸塩の利用性力にとなり、アルブチンの分解性も異
っている。

その他表１に示すように炭素源の発酵性、同化性におい
て著しく差が認められる。

従って本菌株を新種と認め、キャンディダミミツイエン
シスＭＴ １０２７ （Ｃａｎｄｉｄａ ｍ１ｔｓｕｉ
ｅｎｃｉｓ ｎ、Ｓｐ−ＭＴ１０２７）と命名した。

またこの菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微工
研菌寄第３１２２号として寄託されている。

本発明の使用菌としては上記菌株の他に、キャンデイダ
・ミツイエンシスに属する変異株もすべて用いることが
できる。

酵母の製造を工業的に行うには、一般に連続、半連続ま
たはバッチ式の通気攪拌培養法が用いられるが、エアリ
フト型発酵槽、気体巻き込み、方式の発酵槽などにより
、充分好気的な条件で培養すればいずれの方法をとって
もよい。

培養温度は工業的には高温の方が好ましい。

本菌株は４７°Ｃまで生育可能な酵母であり、とくに３
０ないし４３°Ｃで培養するのが好ましい。

４５°Ｃでもあまり速度を低下させずに培養することが
できる。

培養液のｐＨは雑菌の繁殖を防ぐ点から低い方が好まし
い。

本菌株はｐＨ３ないし６でよく生育するので、ｐＨ３な
いし４で培養するのが好ましい。

本発明を実施する際の培地は、主たる炭素源として、エ
タノール、酢酸、グルコース、糖蜜、でんぷん、および
ノルマルパラフィン、とくに炭素数９ないし１８のノル
マルパラフィンの中から選ばれる一種又は二種以上混合
して用いることができ、その濃度は０．５ないし１０％
位が適当である。

培養液の窒素源としては、たとえば硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウム
、リン酸アンモニウム、アンモニア水などの無機窒素源
または尿素、ペプトン、アミノ酸類などの様な有機窒素
源から選ばれた一種または二種以上を混合して用いるこ
とが出来る。

培養液に加える無機塩類としては、たとえばりん酸二水
素カリウム、りん酸水素二カリウム、りん酸水素二ナト
リウム、硫酸マグネシウム、七水塩などがあげられる。

以上の他に必要に応じて酵母エキス、コーンステイブリ
カー、肉エキス、麦芽エキスなどさらに鉄、亜鉛、マン
ガン、カルシウムなどの微量金属塩類を培養液の調製に
際して加えることができる。

本発明で使用する培養液組成の一例を示すと次の如くで
ある。

炭素源（例えばグルコース）１０ないし４０９／ｌ、窒
素源（例えば硫酸アンモニウム）５ないし１０ＥＩ／ｌ
、りん酸水素二カリウム０．２ないし２９／ｌ、りん酸
二水素カリウム０．２ないし１ ＆／ｌ、イーストエキ
スまたはコーンステイープリカー０．２ないし２Ｅｌ／
ｌ、硫酸第一鉄・七水塩２ないし５０ｍ９／ｌ、塩化ナ
トリウム５０ないし２００〜／１１塩化カルシウム１ｏ
ないしｉｏｏ〜／ｌの割合で蒸留水、水道水あるいは井
戸水に添加する。

最初の培養液のｐＨを６程度に調整する。

これを減菌した後、冷却し、種菌（たとえばキャンデイ
ダ・ミツイエンシスＭＴ １０２７ ）を接種する。

３０ないし４７℃の間適当な温度で振とう培養又は通気
攪拌培養のような好気的条件で培養を行う。

酵母の増殖にともなってｐＨが変動するのでアンモニア
水のようなアルカリ溶液又は塩酸のような酸性溶液を用
い、ｐＨ３ないし６の適当な値にコントロールする。

回分式培養では基質がほとんど消費した時培養物から遠
心分離などの手段で酵母菌体を集め、洗浄、乾燥する。

連続式培養では培地を適当な速度で供給し、適当な滞留
時間を保ちながら通気攪拌を行う。

菌体は培養物から上記のようにして集め乾燥する。

次に実施例を示すが、これらは本特許を限定するもので
はない。

実施例 １ 硫安３ｇ、りん酸二水素カリウム１ｇ、りん酸水素二カ
リウム１ｇ、硫酸マグネシウム・七水塩０．５ｇ、コー
ンスチープリカ−１ｍ１を水道水１１に溶解し、この５
０ｍ１を５００ｍ１容量の振とうフラスコに分注し１２
０°Ｃ５分減菌した。

冷却後１％相当のエタノールを無菌的に加え、前培養し
たキャンデイク・ミツイエンシスＭＴ１０２７を接種し
、３８℃の往復式振とう器で振とう培養した。

ｐＨはアンモニア水で１日１回ｐＨ４に調節した。

・ ２日間培養後、遠心分離で菌体を集め洗浄後転 。

燥した。

その結果７．２９／ｌの乾燥菌体を得た。エタノールに
対する収率は７２％であった。

この菌体の分析を行った結果、粗蛋白含量４５％であっ
た。

；実施例 ２ 酢酸ナトリウム５ｇ１硫酸アンモニウム６ｇ１りん酸水
素二カリウム１ｇ、りん酸二水素カリウム１ｇ、硫酸マ
グネシウム１ｇ１硫酸第一鉄５ｍ９、コーンステイープ
リカー１ｍｌを１１の水道水に溶ン解し小型ジャーファ
ーメンタ−に仕込み１２０°ＣＩ５分滅菌した。

冷却後別に培養したキャンデイダ・ミツイエンシスＭＴ
１０２７の懸濁液を５０ｍ１接種し、温度３５℃、通気
量０．４ＶＶＡ、攪拌５００ ｒｐｍの条件で通気攪拌
培養を行った。

増殖がはじまるとｐＨがアルカリ性になるので酢酸を添
加してｐＨを４に保った。

培養開始４８時間後に酢酸１．５ｍｌ／１１．酢酸ナト
リウム７９／ｌ、硫安６ｇ／ｌ、りん酸水素二カリウム
１ｇ／ｌ、りん酸二水素カリウム１ｇ、＃、硫酸マグネ
シウム０．５ｐ／ｌ３．硫酸鉄５ｍ９／ｌ、 ：Ｊ−７
ステイ一ブリカー１ｍｌ／ｌの組成の培地を連続的に供
給し連続的に培養を行った。

はじめ４０ ｍｌ、Ａｎｒの速度で次に６０ ｍｌ／ｈ
ｒの速度で培地を供給し、１週間連続運転を行った。

培養物１１を遠心分離し、菌体を採取し、乾燥した結果
５．４８ｇの菌体を得た。

連続培養用培地に含まれる酢酸量は１８．８ｐ／ｌなの
でこれに対する菌体収率は２９．１％であった。

実施例 ３ グルコース２０ｇ１硫安３ｇ１りん酸二水素カリウム１
ｇ、りん酸水素二カリウム０．５ｇ、硫酸マグネシウム
０．５．！ｌｉ’、食塩０．１．？、コーンステイープ
リカー１ｍｌを１１の水道水に溶解し、小型ジャーファ
ーメンタ−に仕込み、１２０°ＣＩ５分滅菌した。

別に同じ組成の培地に前培養したキャンプイタ・ミツイ
エンシスＭＴ １０２７の懸濁液５０ｍ１を無菌的に接
種し、温度４３℃、通気量０．５ＶＶＭ。

攪拌６００ｒｐｍに保ち通気攪拌培養を行った。

培養中はアンモニア水でｐＨを４に自動調節した。

培養開始後２０時間から上記組成の培地を減菌後１００
ｍＶｈｒの速度で連続的に供給した。

滞留時間は１０時間である。

連続培養開始後５０時間目にサンプリングを行い、遠心
分離機で菌体を集め水洗後乾燥した。

１１の培養液から１０．８．！ｉ’の乾燥菌体を得た。

この時残糖はＯ，，０３３％であった。原料グルコース
に対する菌体の収率は５４係である。

この菌体の粗蛋白は４０係であった。実施例 ４ 可溶性でんぷん２０ｇ、硫酸アンモニウム７ｇ。

りん酸二水素カリウム１．５．９．硫酸マグネシウム・
上水塩０．５ｇ、イーストエキス１ｇを１１の水道水に
溶解し、この５０ｍ１を５００ｍ１容量の振とうフラス
コに分注し１２０°Ｃで１０分滅菌した。

同じ組成の培地に前培養したキャンデイダ・ミツイエン
シスＭＴ １０２７を接種し、４５℃で振とう培養を行
った。

アンモニア水で１日２回ｐＨを５に調節しながら２日間
振とう培養を継続した後遠心分離で菌体を集め、洗浄後
乾燥した。

その結果８．２ｐ／ｌ３の乾燥菌体を得た。

可溶性でんぷんに対する収率は４１係であった。

実施例 ５ 硫酸アンモニウム７ｇ、リン酸二水素カリウム１ｇ、リ
ン酸二素カリウム０．５ｇ、硫酸マグネシウム・上水塩
０．５ｇ、イーストエキス１ｇを１４水道水に溶解し、
この５０ｍ１を５００ｍ１容量の振とうフラスコに分注
し、これに混合ノルマルパラフィン（Ｃ１３０，３％、
Ｃ１４５０，５％、Ｃ１５４８，８％、Ｃｌ６０．４係
）２ｍｌを加え、１２０℃で１０分滅菌した。

同じ組成の培地に前培養したキャンデイダ・ミツイエン
シスＭＴ１０２７を接種し、３５°Ｃで振とう培養を行
った。

アンモニア水で１日２回ｐＨを４に調節しながら４日間
振とう培養を行った後遠心分離で菌体を集め洗浄後乾燥
した。

その結果２２．５９／ｌの乾燥菌体を得た。

実施例 ６ 実施例４において、可溶性でんぷん２０ｇの代わりに糖
蜜２０ｇを用いる以外は同様に行なった。

その結果、１０．５ｇ／ｌの乾燥菌体を得た。

糖蜜に対する収率は、５３％であった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 主たる炭素源としてエタノール、酢酸、グルコース
   、糖蜜、でんぷんおよびノルマルパラフィンの中から選
   ばれた一種あるいは二種以上を含む培地にキャンデイダ
   ・ミツイエンシスあるいはその変異株から選ばれた菌株
   を接種し、好気的に培養することを特徴とする酵母の製
   造法。