JPS58501675A - 物質ｐ「きつ」抗質からなる薬材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 物質Ｐ拮抗質からなる薬剤 本発明は物質Ｐにより解放される疾病の予防または治療処理用の薬剤に用いる物 質、Ｐ拮抗質（ＳｕｂｓｔａｎｃｅＰ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）　、かかる疾病 を予防的にまたは治療的に処理する方法、および炎症を予防的にまたは治療的に 処理する薬剤に関する″。特に、本発明は物質Ｐに関して、位置２のＬ−プロリ ンをＤ−プロリンで置換し、位置７のＬ−フェニルアラニンおよび位Ｎ９のグリ コールをＤ−）リプトファンで置換した構造を有する物質Ｐ拮抗質に関する。

本発明の物質Ｐ拮抗質は次式： ％式％ を有する（Ｄ−ＰｒＯ２，Ｄ−Ｔｒｐ７＋９）物質Ｐである。

バックグラウンド 最近、神経系に信号を伝達する物質、いわゆる、伝達物質はアドレナリンおよび アセチルコリンに関する物質（アドレナリン作用性およびコリン作用性神経のそ れぞれ）のみならず、ペプチド結合により結合した一連のアミ°ノ酸から作った 化学物質、すなわち、ポリペプチドまたはオリゴペプチドからなることが知られ ている。多くの場合、ペプチドのみが神経伝達物質として作用することができる 。この作用を有する。全系列のペプチドはすでに知られている（例えば、［ザ　 ニュー　イングランド　ジャーナル　オブ　メゾシン（ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅｎｇ ｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）Ｊ　、ｖＯｌ、８０４゜ ｐ、　８７６〜８８５および９４４〜９５１に報告された論文参照）。

現今、ポリペプチドと称する物質Ｐは伝達物質に分類することができる。この理 由としては、神経において伝達衝動（ｔｒａｎｓｍｉｔｔｉｎｇ　ｉｍｐｕｌｓ ｅｓ）を体の末梢部から脳（輸入管（ａｆｆｅｒｅｎｔｓ）　）におよび脳から 異なる末梢器官（輸出管（ｅｆｆｅｒｅｎｔＥｉ）　）に延長する神経に生ずる ことが知られているためである。

物質Ｐは末梢から脳に苦痛刺激を伝達する重要な役割を演するものと思われる。

物質Ｐを含有する輸出神経は内分泌腺からの分泌を刺激することができ、および 平滑筋の血管拡張および収縮を生ずることができる。

物質Ｐは１９３１年にすでに７オン　ユーレー（Ｖｏｎ　Ｅｕ１ｅｒ）およびガ ダム（Ｇａｄｄｕｍ）氏によって発見されているけれども（ｒＪ、　Ｐｈｙｓｉ ｏｌ、Ｊ　７２　、７４（１９８１））、次式： ％式％ で示す物質Ｐの構造はチャック（Ｃｈａｎｇ）氏等により１９７１年までには発 見されていない（［ＮａｔｕｒｅＮｅｗ　Ｂｉｏｌ、Ｊ　２３２　、８　ｅ　（ １９７ｉ　）。

神経伝達物質によって生ずる刺激作用を減少または中断できることは以前から知 られている。神経衝動またはその作用のかかる遮断は伝達物質自体に対し密接な 化学的関係にあり、かつこのためにセンサー（受体）と反応する物質によって達 成することができ、かかるセンサーを介して伝達物質は衝動を神経シナプスＧこ 伝達し、またはその標的に作用する。神経伝達物質に遮断（拮抗）作用を有する 多数の物質は知られているが、その多くはアドレナリン作用性またはコリン作用 性神経における神経伝達物質に属、する。

従　来　技　術 物質ＰＧ二対する拮抗質は数年前に見出されている。

物質Ｐに対するある種の拮抗質についての研究の結果、最近これらの拮抗質は物 質Ｐ−誘導分泌に、および物質Ｐにより刺激された平滑筋に対する抑制作用を有 することが報告されている（　Ｋ、フォルカース（Ｋ　、　Ｔｏｌｋ−〜５０６ （１９８１））。

本明細書に記載する構造（Ｄ　−ＰｒＯ２１Ｄ−Ｔｒｐ”）物質Ｐを有する化合 物とは物質Ｐに対する拮抗質を意味する。この化合物は、特に生体内でロカス　 、コエリュレン神経単位（ｌｏｃｕｓ　ｃｏｅｒｕｌｅｎｓ　ｎｅｕｒｏｎｓ） 　ノ物質Ｐ誘導刺激を遮断し、このために物質ＰＧこ対するＣＮＳ拮抗質である と考察されている。

これまで、物質Ｐに対する拮抗質について報告されている研究は、もっばら拮抗 質を見出すのに向けており、このために体の生理学的作用を物質Ｐにより制御お よび影響を及ぼすことを達成することができるが、しかし任意の効果的な薬剤の 開発に向けられていない。

発明の開示 本発明者らが合成した物質（Ｄ　−Ｐｒｏ　、　Ｄ　−Ｔｒｐ７＋９）物質Ｐは 体、特に皮膚、上部気道、腸および目における炎症状態に対して抑制作用を有す る極めて驚くべきことを見出した。

このために、本発明は物質Ｐによって解放される疾病の予防または治療処理用薬 剤に用いる物質Ｐ拮抗質（Ｄ　−Ｐｒｏ２．　Ｄ　−Ｔｒｐ７＋’　）物質Ｐ　 ニ関する。更に、本発明は炎症、特に目の炎症の予防または治療処理用薬剤に関 する。更に、本発明は物質Ｐにより解放される疾病、特に皮膚、上部気道、腸お よび／または目における炎症の如き病気を予防的にまたは治療的に処理する方法 に関する。本発明の薬剤を投与する適当な形態は局所的適用によるものである。

本発明の物質Ｐ拮抗質の製造 次に示す略語を用いる： ＤＣＣジシクロへキシル　カルボジイミドＡＣ２０無水酢酸 ＢＯＣ”、−ブチルオキシカルボニル ＴＦＡ　）リフルオロ酢酸 ＤＭＦ　ジメチルホルムアミド ＢＨＡ　ベンズヒドリルアミン 次式： ％式％ を有する（　Ｄ　−Ｐｒｏ２．　Ｄ　−Ｔｒｐ７＋９）物質Ｐはこの特定分野に おける通常の手段によって、すなわち、ＲｌＢ、メリフィルド（Ｍｅｒｒｉｆｉ ｅｌｄ　）氏により報告された固相方法（「Ｊ、　Ａｍ−Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　 Ｊ　８５　、２１４９〜２１５４（１９６３））によって作ることができる。

使用する固相はモナハン（ＭＯｎａｈａｎ）氏はかにより報告されたベンズヒド リルアミンｍ脂であル（「Ｂｌｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、ＲｅＳ、　Ｃｏｍ、　Ｊ　４８　、１１　ｏ　Ｏ〜１１０５（ １９７２））。

製造において用いる出発材料としてはスエーデン国マルメのフェーリング・アー ベー（Ｆｅｒｒｉｎｇ　ＡＢ　）社がら（７）　ＢＯＣ−Ａｒｇ−ＴＯ８、Ｂｏ ｃ’−Ｇｌｎ−ＯＮｐおよびＢｏｃ−Ｌｅｕ　ｉドイツ連邦共和国のメルク　ダ ルムスタッ）　（ＭｅｒｃｋＤａｒｍｓｔａｄｔ　）社からのＤ　−Ｐｒｏ　、 　ｐｒｏ　、　Ｄ　−ＴｒｐおよびＰｈｅ　；およびベクマン社（Ｂｅｃｋｍａ ｎ　Ｉｎｃ、）がらのベンズヒドリルアミン樹脂を用いた。

ｔ−ブチルオキシカルボニル保護基（Ｂｏａ　）は２−（ｔ−ブチルオキシカル ボニル　オキシイミ／）−２−フェニルアセトニトリル（Ｂｏｃ−ＯＮ）によっ てＤ　−Ｐｒｏ　、　Ｐｒｏ　、　ＰｈｅおよびＤ　−Ｔｒｐに結合させた（　 Ｍ−伊藤、Ｄ、萩原およびＴ、神屋氏［テトラヘドロンＬ／　タース（Ｔｅｔｒ ａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　）　Ｊ　４３９３（１，９７５）　）。

合成は５９　ＢＨＡ樹脂、０．５１−　ｍｅｑ、ＮＨ２／ｌから出発する段階に おいて行い、本発明の化合物におけるアミノ酸を次に示す予定段階に従って結合 させた。

ｌ　Ｂｏｃ−Ｍｅｔ　−ＮＨ−Ｂ）ＬＡ２　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ−Ｂ ＨＡ３　Ｂｏａ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅ仁−ＮＨ−ＢＨＡ７　Ｂｏｃ−Ｇｌ ｎ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ−Ｂ）Ｉ Ａｌ、ＯＢｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｄ− Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ−ＢＨＡｌｌ　Ｂｏｃ−Ａ ｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｄ−Ｔ ｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ−ＢＨＡ結合段階後、ペプチ ドを樹脂から分離し、ペプチドをゲル濾過、カラムクロマトグラフィーおよび凍 結乾燥によって精製した後、所望の生成物を得、次いで分力ラム　：μｍボンダ バック（Ｂｏｎｄａｐａｋ）　Ｃｌ　８１（ウォータース）、２．４Ｘ３００ｍ ｍ移動相：　３２％ＣＨ３０Ｎ　、６８％リン酸塩緩衝剤０．１　Ｍ　、ｐＨ３ −０ 流　ｉｉ　：　１．５　ｍｌ１分 検　出　：２１０ｎｍ このシステムにおいて、物質は８．１４．分の滞留時間を有していた。９８．１ 面積率（ａｒｅａ　ｐｅｒｃｅｎｔ）の整数を有する単一対称無ショルダー　ビ ークを与えた。

薄層クロマトグラフィー 薄層クロマトグラフィーをメルクＨＰＴＬＣプレート（シリカゲル６０）上で行 った。操作距離：１５ｃｍ０物質を次に示す溶剤系において均質にした：ＣＨＣ ｌ　８−濃ＮＨａ−ＣＨａＯＨ＝　６０／２０／４５　Ｒｆ：　０．４ＥｔＯＡ ｃ−Ｐｙ−ＡｃＯＨ−Ｈ○−５１５／１／３　Ｒｒ：　０．７８ｎ−ＢｕＯＨ− ＥｔＯＡｃ−ＡＣＯＨ−ＨＯ＝２／２／１／Ｉ　Ｒｆ：０．０２ｎ−ＢｕＯＨ− Ｐｙ−ＡＣＯＨ−Ｈ２Ｏ−３０／３／’６／２４’　Ｒｆ：、０．５９２−Ｐｒ ＯＨ−ＩＮ　ｈｃｏＨ＝　２／Ｉ　Ｒｆ：ｏ、ｏａアミノ酸分析 分析のために、物質（１■）を封管中１２０°Ｃで２４時間にわたって０．２％ トリプタミンを含有する４Ｍメタンスルホン酸１ｆｒＬ！、中において加水分解 した。アミノ酸分析はビオトロニツターＬＣ−２０００アミノ酸アナライザーで 行った。個々のアミノ酸に対して次に示す結果を得た： Ｇｌｕ　：　２．０８　ｉ　ＰｒＯ：　２．００　ｉ　Ｍｅｔ　：　１．０５　 ｉ　Ｌｅｕ　：　０．９９　＋Ｐｈｅ　：　１．０１　；　Ａｒｇ　：　１．０ ６　；　Ｔｒｐ　：　１．９材料のペプチド含有母はトリアセテートに対して８ ６．７％であった。

旋光 測定はパーキング−ニルマー旋光計を用いて行った。

測定のために、１０Ｔｎ９の物質を１艷のメタノールに溶解し、１０ｃｍの層厚 さで測定した。

温度＝２５°Ｃ 炎症における（　Ｄ　−Ｐｒｏ”　、　Ｄ−Ｔｒｐ７＋９）物質Ｐの効見 本発明において用いる物質Ｐ拮抗質は次の試験により炎症を抑制しまたけちゆす ることを確めた。

物質Ｐをうさぎの目の硝子体に注入して炎症反応を誘発させる。炎症効果はちゆ する縮瞳、およびチャン特表昭５８−５０１６７５（４） バー流体（ｃｈａｍｂｅｒ　ｒｌｕｉｄ）内のたん白質の増加量を基準として記 録した。瞳孔直径の変化を定規で測定し、チャンバー流体中のたん白質の量を、 いわゆる、光路（ｌｉｇｈｔ　ｐａｔｈ）を測定することによって評価しｔｏか かる光路は、明るい光線を目に通してアイ　チャンバー　（ｅｙｅ　Ｃｈａｍｂ ｅｒ）におけるチンダル現象を記録して測定する。このチンダル現象はチャンバ ー流体中のたん白質の光線反射能の結果による。この反射現象はアンジョー（Ａ ｎｊｏｕ）およびクラカラ（Ｋｒａｋａｕ）氏により予じめ記載された方法によ る基準によって測定しかつ関類似する炎症性反応を絞り上に制限された面積の赤 外線によって誘発することができる。

３匹のうさぎの左目の硝子体に３０ｎモルの本発明の物質Ｐ拮抗質を、および右 目の硝子体に０．９％食塩水（ｓａｌｉｎｅ）を注入した。３時間後、３ｎモル の物質Ｐを同じ場所に注入した。１時間後、両目の瞳孔直径の差を測定し、左目 の瞳孔直径が約Ｑ、５ｍｍ程度まで減少したのに対して、右目の瞳孔直径は約２ ．１ｍｍ程度まで減少したこと、および右目におけるチャンバー流体中のたん白 質の母が左目におけるその母の２倍に増加したことを確めた。これらの試験によ って、本発明の物質Ｐ拮抗質はそれ自体目に対して優れた作用を与えうろことを 確めた。

９０ｎモルの本発明の物質Ｐ拮抗質を３匹のうさぎの左目の硝子体に注入した。

対照の目的のため、に、右目には０．９％食塩水を与えた。３時間後、両目の絞 りを赤外線に曝した。照射後、１時間してチャンバー流体中のたん白質の量を測 定した所、左目（処理した目）のいわゆる光路は殆んど変化していないのに対し て、右の対照目では３倍であったことを確めた。

類似試験を、物質Ｐ拮抗質および食塩水をアイ　ドロップ（ｅｙｅ　ｄｒｏｐｓ ）状態で投与して行い、いわゆる、光路は対照目においては処理目の大きさの２ 倍以上であることを確めた。

炎症を赤外線により誘発する試験を行い、試験において記録しうる効果の最小投 与量を食塩水において０．９ｎモルの物質Ｐ拮抗質にし、これに対して最大効果 に対する最小投与量を食塩水において９０ｎモルにした。拮抗質の効果は投与量 に依存するが、むしろ直線的であることを確めた。

要約すると、物質Ｐを硝子体に注入することによって、または絞りの赤外線照射 によって誘発した目の炎症は、硝子体に注入またはアイ　ドロンブ状態で投与す る本発明の物質Ｐ拮抗質によって抑制またけちゆできることを確めた。

局所的適用する溶液の調製 凍結乾燥状態に維持した精製物質（１）　−ｐｒｏ”　。

Ｄ　−Ｔｒｐ７・９）物質を食塩水に適当な濃度で溶解した。

この溶液を無菌条件下で濾過し、滅菌びんに充填し、上述する試験に用いた。

上述する試験において、本発明の物質Ｐ拮抗質は注入によりおよびアイドロップ で投与するために食塩水に溶解して用いたが、しかし噴霧、吸入、点滴注入、ガ ス注入および注射により局所的適用で投与する他の投与手段を用いることができ る。更に、軟膏、クリーム、座薬、錠剤、カプセル剤および粒剤に調製でき、こ の場合の有効成分を本発明の物質Ｐ拮抗質とし、他の成分を通常の不活性担体、 稀釈剤、賦形剤等とする。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　物質Ｐによって解放される疾病の予防または治療処理用薬剤に用いる物質Ｐ 拮抗質において、１次式：％式％ を有する（　Ｄ−Ｐｒｏ２．　Ｄ　−Ｔｒｐ７，９　）物質Ｐかラナルことを特 徴とする物質Ｐ拮抗質。 ２　有効成分としての（Ｄ　−Ｐｒｏ２．　Ｄ、　−Ｔｒｐ７　、９　）物質Ｐ および不活性担体または賦形剤からなることを特徴とする炎症の予防または治療 処理用薬剤。 ３　有効成分としての（Ｄ−Ｐｒｏ２．　Ｄ−Ｔｒｐ”９）物質Ｐおよび不活性 担体または賦形剤か′らなることを特徴とする目における炎症の予防または治療 処理用薬剤。 ４　局所的適用に適当な形態で用いる請求の範囲第２または３項記載の薬剤。 ５　予防的にまたは治療的に有効量の（Ｄ　−Ｐｒｏ２．。 Ｄ　−Ｔｒｐ７・９）物質Ｐを投与することを特徴とする物質Ｐにより解放され る疾病の予防または治療処理方法。 ６、　予防的にまたは治療的に有効量の（Ｄ−ｐｒｏ琴。 Ｄ　−Ｔｒｐ７・９）物質Ｐを局所的適用によって投与する請求の範囲第５項記 載の方法。 ７　予防的にまたは治療的に有効量の（Ｄ　−Ｐｒｏ２゜Ｄ　−Ｔｒｐ７・９） 物質Ｐを投与することを特徴とする炎症の予防または治療処理方法。 ８　予防的にまたは治療的に有効量の（Ｄ　−Ｐｒｏ２゜Ｄ　−Ｔｒｐ７・９） 物質Ｐを局所的適用によって投与する請求の範囲第７項記載の方法。 ９　予防的にまたは治療的に有効量の（Ｄ　−Ｐｒｏ２゜ｐ　−Ｔｒｐ７．９　 ）物質Ｐを投与することを特徴とする目における炎症を予防または治療処理する 方法。 ＩＯ予防的にまたは治療的に有効量の（１）　−Ｐｒｏ”　。 Ｄ−Ｔｒｐ７・９）物質Ｐを局所的適用によって投与する請求の範囲第９項記載 の方法。