JPS5847492A - 微生物生菌体の固定化・増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物生菌体の固定化・増殖法に係り、特に
、弾力性に富み機械的強度に優れた高含水性ゲル中に微
生初生１体を包括（捕捉）後、これを効果的に増殖させ
る方法に関する。

本発明は、ポリビニルアルコールと微生物生菌体とを含
む懸濁水溶液から所定条件下に得られる凍結・乾燥体（
ゲル）がその空洞に、微生物生菌体を包括（捕捉・包埋
）しここへ増殖用培地を供給することにより、微生物囲
体包括空洞が膨張すること、しかも、この空洞の大きさ
を一定限＆（直径５５０μｍ）にとどめるよう、前記増
殖用培地の供給量を制御することにより、ゲル内の固定
化微生物生菌体の効果的増殖と活用が達成されることを
見いだした事実に基づくものである。

即ち、本発明は、けん化度９５モルー以上で、しかも粘
度平均重合度１，５００以上のポリビニルアルコールの
水溶液と微生物生菌体より成る懸濁液を、成型用鋳型へ
注入しこれｔ−−６℃より低い温度で凍結・成型し、し
かる後、この凍結・成型体を融解即ち凍結解除させるこ
となく脱水率５ｖｔｌｌＧ以上に真空脱水し必要に応じ
水中に浸漬することにより、含水率２０〜９２ｗｔ−（
湿潤体基準）Ｋ到達させ微生物生菌体を包括（包埋）し
たゲルを得て後このゲルに微生物増殖用培地を供給しこ
れにより形成される増殖微生物１体集落の直径を５０ｐ
、〜５５０　ｐｆＩ＠の範門にまで拡大させることｔｌ
−特徴どする微生物生菌体の固定化・増殖法を提供する
ものである。

微生物生菌体をゲル内に捕捉（包括）稜、これを増殖さ
せる試みは既に公知であるへ下記（１）−（６）に要約
するとおり、いずれにも難点があり、更に優れ九固定化
増殖法の開発が望まれてきた。

（１）：ｆｌノ５クテリウム・シンプレックス（Ｃｏｒ
ｙｎ・−ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｓｉｍｐｌｅｘ　）、
別名アルド付バクター・シンプレックス（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ　　５１ｍ１ｅｘ　）、　　バシルス・サ
プチルス（ｌ１ａｃｉｌｌｕｓ　　５ａｂｔｉｌｕｓ　
）、シュードモナス・グチダ（Ｐｇ＋ｓｕｄｏｍｏｎａ
ｓ　　ｐｕｔｉｄａ　）等の細菌を、ポリ・アクリルア
ミドゲル中に固定化後、栄養源（培地）を供給して増殖
させ、それぞれの活性、すなわち、ステロイド変換能、
α−アミラーゼ生産能、ベンゼンの酸化分解能などを高
める方法が公知である（　Ｎａｔｕｒｅｔ６％、Ｏｃｔ
、　　２８．７９６（１９７６）、Ｂｉｏｔｅｅｈ−Ｂ
ｉｅｅｎｇ−ｓ　２０．１２６７（１９７８）、Ｅｕｒ
６ｐ、　Ｊ。

＾ＰＰＩ−Ｍｉｃｙｏｂｌｏｌ　　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ、ｓ　　５、　２３３（１？７８）、４，７５（１９
７７））。

しかしこれらの場合、増殖による活性上昇率は、たかだ
か５〜１０倍程度にすぎないは力Ｎこの固定化担体の原
料であるモノマー（アクリルアミド）が猛毒であるため
、微生物に対し有害であり（醗酵と工業、ｌ互、９２（
１９７７）、Ｂｌｏｔｅｃｈ、　Ｂｉｏ＠ｎｇ、　　２
０゜１２６７（１９７８））、さらに、固定化（モノマ
ーの重合およびポリマーの架橋）に用いるラジカル開始
剤により、微生物（タンパク質）が損傷を受ける（　８
ｅｉ＠ｍｅ・・１４２．６７８（１−９６３）、ムｄｖ
−Ｂｉｏｃｈｅｍ　ｌａｇ。

臣、１２５（１９７７）、Ａｇｒ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ＠ｍ
、、４２．６８３（１９７８）、化学　工学、土ｕｓ２
６？（１９７９））はカー固定化ゲル自体が軟弱で（化
学工学、土０，１３９（１９７４））、実用上、きわめ
て不満足表点が多い◎ （２）寒天に各種微生物を固定化後、これを増殖させる
ことは、古来広く行なわれているが、この寒天ゲルは、
機械的強度に劣り、実験室的に利用することはできるも
のへ固定化担体として工業的に用いるには難がある。ま
た、微生物の増殖に伴ない、ゲル内部から亀裂の生じる
難点も指摘されている（Ｂ％ｏｔ＠ｅｈ、　　Ｂ％ｏｅ
ｎｇ、　　２２゜６８１（１９８Ｇ））。

（５）　　ロイコノストック・メセンテｐイデス（Ｌ・
ｕｉｏｎｏｓｔｏｃ醜・腸・ｎｔ＠ｒｏｉｄ＠ｓ　）　
ｆ、ポリビニルアルコール・ホウ酸錯体ゲルに包括後、
これを増殖させる試みもある（特開昭５４−１５５２９
５）。しかしこの場合、けん化度の高いポリビニルアル
コールから生成するホウ酸錯体（ゲル）は軟弱で、成型
し難いＯこの場合、けん化度の低いポリビニルアルコー
ルを用いることにより、この難点はかなり改善されるが
、ゲルの粘着性が強いため成型後の形状は維持され難く
、実用に耐えない０（４）　　サラカルマイセス・セレ
ビシェ（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓＳ＠ｒ・マ１１１
・）を、ゼラチン膜に固定化後、増殖させる提案もある
が、活性は４倍程度に上昇するＫとどｔす、また、ゲル
成型体は軟弱でその形状は不安定である（　Ｂｉｏｔ＠
ｃｈ　、　　Ｂｌｏ＠ｎｇ　、、　　２２．１７５５（
１９８０））。

（５）　　サツカロマイセス・セレビシェをアルギン酸
カルシウム・ゲルに固定化後、これを増殖させる試みも
あるカー天然系多糖類ゲルにしばしば見受けられるとお
り、維■汚染を招きやすいうえ、指先につまみわずかに
指圧を加えることにより、直ちに形くずれして軟弱な糊
状を呈するほか、栄養源として供給輝れるリン酸塩によ
り、ゲル構造組織が破壊される（　Ｂｉｏｔ＠ｃｈ、　
Ｂｉｏｅｎｇ−，１９゜５８７（１９７７））。

（６）　　寒天と同じくポリガラクトースの酸性硫酸エ
ステル型構造を有する天然系多糖類としてのに一力２ゲ
ナンに、サツカロマイセス中セレビシェ（５ａｅｅｂａ
ｒ＠ｍｙｅ＠ｓＣ＠ｒ・マ１５１ｍ５）、サツカロマイ
セス番カルスベルゲンシス（８ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ　　ｅａｒｌａｂ＠ｒｇ＠ｎｓ１ｍ）、アセトバクタ
ー・サブオキシダ７ス（Ａｃ５ｔｏｂａｅｔ＠ｒ　　５
ｕｂｏｘｙ−ムｎｍ）、セラチアΦマルセセンス（８＠
ｒｒａｔｉｍｍａｒａｃ＠ｍｅ＠ｍｓ　）、ニジエリシ
ア・コリ（Ｋｓｅｈ＠ｒ１ｃｈｉａｃ＋ｅｌｉ　）、ブ
レビバクテリウム・フラブム（Ｂｒ・マ１−ｂａｃｔｅ
＋ｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ　）、ストレプトマイセス
・７エオクロモゲネス（８ｔｒｓｐｔｏｍｙｅｅｓ　　
ｐｈａ＠ｏｅｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）ブレビバクテリウ
ム・アンモニアゲネス（Ｂｒｅｖｉ−ｂａｅｔｅｒｉｕ
ｍ　ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅａ　）などを固定化後、こ
れらを増殖させる試みもある。しかし、このゲルは軟弱
で（引張り強度〈１ＫＩＩ／−）、更に塩化カリウム、
ヘキサメチレンジアミン、グルタルアルデヒド、タンニ
ン等ヲ用いる硬化処理を施しても、ポリアクリルアミド
・ゲルと同程度の強度（１〜１．５　Ｋ４／ａｉ　）に
まで改善されるにすぎず、きわめて軟弱である。従って
、ゲル内で微生物が増殖するに伴ない、ゲル組織に亀裂
が発生−破壊される（　Ｊ、　５ｏｌｉｄ　　Ｐｈａｓ
＠Ｂｉｏｓｈｓｍ　ｅ　　２．　２２５（１９７７）、
Ｅｎｚｙｍ＠Ｍｉ＊ｒｏｂ−Ｔ＠ｅｈｎｏ１．　　ｌＸ
９５（１９７９）、Ｊ、　Ｆｅｒｍ＠ｎｔ、　Ｔ＠ｃｈ
ｎｏ１．８８゜（４）３２７（１９８０）、高分子、主
！、２３８（１９８０））０ これらの例に見るとお９、従来の微生物固定化用担体の
いずれにも、問題点があり、更に優れた担体（ゲル）が
望まれている（高分子、主！、２３８（１９８０））０
これら公知の手法と異なり、本発明によれば、ポリビニ
ルアルコールと微生物生菌体の混合懸濁液を凍結・成型
・脱水する過程でゲルが生成し　しかも、微生初生１体
のほぼ全量−一このゲル中に包括される。本発明では、
この固定化（包括）過程で、酸、アルカリ、放射線、ラ
ジカル発生剤、−有機溶媒、反応試薬などを全く用いず
、また、２次的硬化処理も全く必要としない。本発明の
ゲルは、含水性に富み、像生物生菌体の活動に要する炭
素源、窒素源、酸素ガス、二酸化炭素ガスその他の無機
物の透過性にも　優れるゴム状の弾性体であり、引張り
強度の点でも、前記のカラダナン（＜１４／ｊ）または
、２次的硬化処理を施したカラゲナン（１〜１５　ｍ４
／ｄ　）　’ｉはるかにしのぐ強度（４〜６　Ｋｇ／ｄ
以上）ｔ−有する。

このゲルに増殖用培地を供給することにより、微生初生
１体は当然のことながら増殖する力ζ本発明のゲルにお
いては、この増殖に伴なぺ微生物包括空洞が押し拡げら
れる０しかし本発明のゲルがきわめて弾力性に富み、し
かも機械的強度に優れることから、ゲル内空洞の直径力
ζ尚初（６〜５０μ常）の２０〜７０倍（５５０ｐｍ）
に達する激しい増殖（膨張）にも耐え、ゲル組織は破壊
されない特長を有する〇 もっとも、本発明のゲルにおいて、増殖集落直径が約１
５０μ慣に達すると、増殖菌体の一部は、空洞壁（微細
網目構造から成るゲル組織）の少なくとも一部の網目を
くぐ９抜け、空洞外へ排出され、その排出位置（小空洞
）において、引続き増殖・排出の過程を反復１最終的に
は、ゲル表面近傍の空洞から、ゲル外へ排除される。ま
た、更に増殖用培地を供給することにより、増殖集落直
径が約５５０　ｐｍｔ超えると、上記菌体流失量が著し
く増加する。

したがって、増殖菌体の流失（損失）１回避するＫは、
大部分の増殖菌体集落の直径を１５０μｍ以下にとどめ
るのが良い。

ところで、一般に、微生物生繭体は、増殖すると同時に
、少なくともその一部は死滅する。この死滅菌体の自己
消化残留分（主として細胞壁構成分）が生菌体集落中に
蓄積し続けることは好ましくないため、本発明のゲルに
おいても、これを断続的または連続的に、ゲル外へ排除
しなければならない。しかるに、死菌体（自己消化残留
分）のみを選択的にゲル外へ排出する方法はまだ知られ
ていないため、止むを得ず、生菌体および死菌体から成
る集落菌体の一部を、断続的または連続的にゲル外へ流
失させなければならない。

これに関しては、本発明において、集落直径を前記の１
５０ｐｍ以上に達せしめることにより、容易に上記の目
的を達成することができる。

また、集落直径が５５０μｍを超えることは、前記の増
殖菌体の大量流失を招き、好１しくない。

従って、本発明においては、菌体集落の直径ｔ−５５０
μｍ以下、例えば５０〜５５０ｐｍに維持することによ
り、増殖生菌体の無益な大量流失を回避すると共に、固
定化生菌体を有効に増殖せしめ、これ全活用すると共に
、必要に応じ、死菌体を排出することができる。

本発明における菌体集落の直径の制御は、たとえば、該
集落の拡大状況を追跡観察することＫより、増殖用培地
の供給量を制御することによって容易に行なうことがで
きる。

一方、ポリビニルアルコールの水溶液を０〜５０℃で１
日〜１週間貯菫することにより、粘度上昇あるい嬬ゲル
化の現象がしばしば見受けられること社、古くから周知
である。しか獣このゲルは、前記天然産多糖類のゲルに
しばしば見られるとおり、例えば寒天のように軟弱であ
り、しかも、単に激しくかきまぜるも水を加えてかきま
′ぜる力Ｎあるいは若干温めることにより溶解するため
、微生物固定化担体として用いることは不可能である。

さらにポリビニルアルコール水溶液に微生物生繭体を混
合後、風乾して、微生物生繭体含Ｖ膜を得る方法がある
が、この膜扛、耐水性に劣り、軟弱で、また微生物捕捉
容量も低い。この膜をナイロン布等により支持（補強）
する提案もあるが、上記の難点の大部分は依然として解
消されない。

また、ポリビニルアルコール・フィルムの特色として、
微生物の活動に要する炭素源、窒素源、無機物郷の透過
性に乏しいことに因り、固定化微生物生菌体の活性が減
退する（％開昭５２−１４５９２、輯公昭５５−３５４
１５、プラスチック材料講座１４、Ｐ、１５５、Ｐ、１
５５　（昭４５）、日刊工業新聞社）０ ポリビニルアルコール水溶液と微生物または酵素とを混
合後、酸素を排除してコバルト６０（ｒ線）ｔ″照射る
ポリビニルアルコールの架橋・ゲル化法も周知である。

しかしこの場合、グリセリン等の放射線障害保膜物質を
併用しても、なお、微生物または酵素への悪影響をまぬ
がれず、照射経費もかさむはｉｓ得られるゲルが軟弱で
、しばしば、他の化学試薬による２次的硬化処理を要す
る（　Ｂ　ｉｏｔ＠ｃｈ　、。

Ｂｉ＊＊ｎｇ、、　　１５，４０７’（１９７５）、醗
酵と工業、５５．９２（１９７７））。

ポリビニルアルコール、テトラエチルシリケートおよび
微生物を含む懸濁水溶液に酸を加え風乾することによる
、ポリビニルアルコール・ケイ酸複合酵母膜の製法も提
案されたが、やはりこの膜も軟弱である。

この場合、酸を加えた後、凍結・乾燥しても、生成する
膜の機械的強度はかえって低下しほとんど成型不能であ
る。

いずれにしても、微生物の懸濁液へ酸を加えてｐＨ３以
下に調整する工程が含まれてお１微生物への悪影響もし
ばしば無視できない（％公昭５５−１１３１１、特公昭
５５−３０３５８）。

ポリビニルアルコールと酵素とを溶解した水溶液を低温
ゲル化（凍結・固化）させることによる酵素の固定化法
も提案されている（％ｉＲ昭５Ｏ−５２２７６）。しか
し単なる凍結・固化処理により得られるゲルは、弾性を
示さず、機械的強度もきわめて低く、ゼリ一様の軟弱品
（又は粘液）であり、激しいベトッキ（粘着性）を示す
うえ、耐水性に乏しく水中に溶出し残部は糊状と化す。

また、凍結・固化・融解後に風乾する場合は、軟弱な湿
潤フィルムあるいは含水性の低いフィルムが生成するに
すぎず、微生物生菌体の固定化用担体として好ましくな
い。

なお、凍結・固化・融解後に減圧脱水を試みる場合は、
融解液の泡立ちが激しく、シばしば、操作続行不能の状
態をきたすはカーたとえ長時間を費し脱水しても、はと
んど弾性を示さぬ、もろい白濁ゲルが得られるにすぎず
、その含水性も低いため、微生物生菌体の固定化・増殖
用担体としては、好ましくない。

本発明に用いるゲルは、水またＦｉ温水に不溶で、前記
のポリビニルアルコールの貯蔵により生成するゲルとは
全く異なる。

また、本発明のゲルは、粘着性を示さず、弾性に富み、
その引張り強度、圧縮強度とも、４麺／−以上に及び、
しかも、微生物生菌体の激しい増進によっても、ゲル組
織の破裂をきたさないなどの諸点でも、前記（公知）の
微生物固定化用担体のいずれにも勝る利点を有している
。なお、本発明のゲルは、γ線、ラジカル開始剤、酸、
アルカリ、化学試薬、有機溶媒、水以外の無機溶媒など
を全く用いない点でも、公知の手法のいずれにも勝る利
点を有する０本発明に用いるポリビニルアルコールのけ
ん化度は９５モルチ以上、好ましくは９７モルー以上で
あることを景する０けん化度８０〜８８モル嘔、特に８
５七ル参以下のポリビニルアルコールを用いても、軟弱
なゲルが得られるにすぎず、本発明の目的は達成されな
い。

また、本発明では、粘度平均重合度１．５００以上のポ
リビニルアルコールを用いる。ポリビニルアルコールの
重合度が低下すると共に、得られるゲルの機械的強度も
低下するため、本発明では、通常市販されている高重合
度品（重合度１，７００〜２．６００程度）ｔ−用いる
のが良い。

本発明では、まず、ポリビニルアルコールの水溶液を調
合する。そのｓ度に特に制限はないが、例えば１〜２０
ｗｔチ、好ましくは７〜１５ｗｔチとすることができる
。

この＃１度を、更に例えば９０　ｗ　ｔチまで高めるこ
ともできるが、常温における水溶液の粘度がＩＱＯＯＯ
ｅＰ以上にも達Ｌ／％また、貯蔵中に粘度上昇あるいは
ゲル化をき九すこともあり、若干取扱い離い。この濃度
を３ｗｔ−以下とすることもできるめζ後述の脱水（乾
燥）所要時間が長びき、経費（脱水動力費）がかさむ。

本発明においては、上記ポリビニルアルコール水溶液へ
微生物生菌体を添加するに先立ち、ポリビニルアルコー
ル水溶液を滅菌する。滅菌処理条件として社、１００℃
ｘ５ｍｉｎ　で目的を達する場合もあるが、耐熱性ＩＩ
！に汚染されている場合は、たとえば、１２０℃Ｘ１５
ｍ１ｍ〜６ｈの高圧・蒸気滅菌を施す。紫外線照射滅菌
法も使用できる力ζその有効性が照射表面に限られるこ
とから、前記の加熱滅菌法と併用するのが望ましい。い
ずれにしても、これらの処理により、本発明に用いる資
材が変質することはなく、本発明の実施になんら支障を
きたさない。

滅菌された水溶液は、次に、固定化対象とする微生物生
菌体と混合される。微生物生菌体としては、アスペルギ
ルス属、リゾプス属、シュードモナス属、アセトバクタ
ー属、ストレプトマイセス属、ニジユリシア属、サツカ
ロマイセス属、カンデイダ属等のかび、すなわち糸状鉋
、放線１、細菌、酵母、藻類など多くの微生物生菌体を
対象とすることができる。

この場合、凍結・乾燥保存し念生菌体、生菌体の増殖培
養液、あるいは増殖培養液から遠心分離された生菌体濃
縮懸濁液などのいずれを用いることもできる。この微生
物生菌体の添加（混合）操作は、１０〜３５℃程度で行
なうのが至便であるが、耐熱性生菌体を固定する場合に
は、それぞれの耐熱性に応１３５℃以上で操作すること
もできる。

１０℃以下では水溶液の粘度が上昇し生菌体の混合・分
散が緩慢である〃ζこの点に留意するならば、上記操作
を１０℃以下で実施することも差支えない。

微生物生菌体の添加量（乾燥体基準）としては、水溶液
中のポリビニルアルコールの７倍量以下にとどめるのめ
ζ微生物生菌体のほぼ全量を固定化する観点から好まし
く、この場合、後述の脱水（ゲル化）工程を経ることＫ
より、微生物生菌体の９６〜９８−を確実に捕捉（包括
・固定化）できる。

後述の凍結・成型・脱水工１！ヲ経て得られる本発明の
ゲ六を、走査型電子顕微鍵により観察した結果、例えば
、ポリビニルアルコールの１／４相当重量に及ぶサラカ
ルマイセス・セレビシェを固定化し九場合でさえ、微生
物生繭体は個別分散しそれぞれ８〜５Ｏｐｓの空洞に包
埋されており、空洞壁は、主として１１〜１ｐｍの網状
組織から構成されている。しかもこの個別分散包埋され
た微生物生菌体は、後述の増殖操作により容易に激しく
増殖する。従って、本発明においては、あらかじめゲル
内へ特に大量の微生物生菌体を包埋するより、むしろ後
述の増殖による包括空洞の膨張の余地を残すのが良い。

すなわち、本発明における固定化歯切の微生物学１体添
加量として框、ポリビニルアルコール使用量の７倍以下
と１例えば／　　　以上、２へ０００ 好ましく１１／　　　　　〜／とすることができる。

１５．０００　　２ 本発明では、このようにして得たポリビニルアルコール
と微生物生菌体の混合懸濁水溶液へ線菌が混入しないよ
う留意し、しかも殺菌燈（紫外線）が直接照射されぬよ
う留意しつつ、懸濁水溶液を成型用鋳型へ注入し、凍結
・成型する。とこで成型用鋳型とは最終用途の形状のも
のが望ましいが、板状物を得るための任意形状の容器で
もよく、これらも本発明にいう成型用鋳型に包含される
。凍結するための冷却剤としては、例えば、食塩−氷（
２，３ニア７）（−２１℃）、塩化カルシウム−氷（３
０ニア０）（−５５℃）などの寒剤、あるいはドライア
イス−メチルアルコール（−７２℃）、液体窒素（−１
９６℃）などを用い、−６℃より低いｍｔに冷却し、凍
結させる。冷却が不十分であると、後述する乾燥工程を
経て得られるゲルの形状が、当初予期した形態すなわち
、ポリビニルアルコール水溶液注入容器また鉱成聾用鋳
型の形状と合致し難いほか、ゲルの機械的強度に劣る０
液体ヘリウムを用いれば、−２６９℃まで冷却できるが
、実用上はフレオン冷凍機を用へ例えば−３５℃以下に
冷却するのが良い。微生物生菌体の多くは、−２０’Ｃ
近辺のｍ度に長時間さらされると好ましくないことから
、むしろ−２０℃以下、例えば−５５−８０℃まで急速
に冷却するのが良い。仁のような低温で凍結・成型する
ことは、微生物生菌体担持用ゲルの機械的強ｌｅｔ高め
ることに寄与１．、−２０℃と一６℃との間の温度で凍
結・成型するより好ましい。

本発明による凍結拳成型においては、ポリビニルアルコ
ール水溶液は任意の形状の鋳型内で固化（氷結）・成型
され、しかる後、鋳型に−Ｌ自カバーまたはト園カバー
（あるいはその双方）がある場合はそれらの一方又は双
方を取りはずし、成型体の形状を保持しつつ凍結・脱水
することができる。

したがって、本発明のゲルの形状としては、固定化微生
物生菌体の増殖・生育活動に好都合な気・液・固相間の
拡散を考慮−任意の大きさと形状を凍結時に選定するこ
とができる。好ましい成型体の形状として鉱、既に化学
工業において、蒸留塔またはガス吸収塔などに用いられ
ているラシヒリング（ｒａｍｃｈｉｇ　ｒｉｎｇ　）、
多孔板（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄｐｌａｔ＠＋　５ｉｅｖ
＠ｔｒａｙ）、テラレット（ｔｅｌｌｅｒａｔｔａ　）
、インター四ツク愉サドル（１ｎｔａｌｏｘ　５ａｄｄ
ｌｅ　）、ボールリング（ｐａｉｌ　　ｒｉｎｓｒ　）
などの成型用鋳型によることができる。また特願昭５６
−５１０９６に記載した突起を有する千板又扛曲板状の
鋳型を用いることもできる。これらの成型用鋳型を用い
て得られる本発明の微生物生菌体固定化ゲルは、いずれ
も、固定化微生物生菌体の増殖・生育活動に必要な栄養
源また社基質との接触、物質移動の点において優れ、ま
た反応塔へ充てんした場合の塔内圧損失の低い点におい
ても、粒状品、球状品、板状晶または膜状品などに比べ
てより勝れている。

もちろん粒状８郷も本発明に含まれるし、板状体會得て
後に切断する等の方法も本発明に含まれる０前述の凍結
・成型を目的とする冷却操作の冷却速度としては、前述
の微生物生菌体への影響を考慮して、−１０℃程ｆまで
はα１〜ｂ ないが、その後は、７〜ｔｏ００℃／　ｍ　ｉ　ｍ　の
急速冷却が好ましい。

本発明においては、前述の容器または鋳型へ注入され九
ポリビニルアルコールと微生物生菌体との混合懸濁水溶
液が凍結されたことを確認後、仁れに真空脱水管施す。

この場合、冷凍室から凍結・成型体を取り出しこれを真
空乾燥室へ移賦直ちに吸引・脱水するならば、水分の除
去（昇華）・に伴ない、試料が冷却されるので、４ＩＫ
外部冷却を施さなくとも、凍結・成型体が融解すること
はない０凍結−ｍ１１１体が融解しない程度に加熱する
こと社差支えなく、これにより脱水を促進することがで
きる。つまり脱水工程のｉｌ［としては、凍結・成型体
を融解即ち凍結解除させないかぎゃ、％に制限はなく、
これがゲルの品位Ｋ特に影響することはない。この脱水
工程においては、脱水率を５ｖｉ−以上とし、たとえば
ゲルの含水率を２０〜９２チ、好ましくは６０〜９０ｖ
ｔ％（湿潤体基準）に到達させる。

含水率″Ｉｋ２０１１！以下とすることもできる汎この
場合においても捗記するように水中に浸漬させることに
より含水率５０〜９０　ｖ　ｔ　９Ｇに到達させること
ができる。

本発明においては、ポリビニルアルコールのｌＩＪ［の
いかんにかかわらず、凍結・成型体に若干の脱水処理（
真空乾燥）を施す。この場合、脱水率（凍結・成型体の
重量減少率）としては、例えば５　ｖ　ｔチさらには１
５ｗｔ−以上が採用される。すなわち、脱水が進行する
とともにゲル強度が着しくｌｌｌ１ｌまることから、Ｎ
望Ｊ）ゲル惰−に応じ、議本儀を選定するのが良い。

この脱水工程（凍結・乾燥）を省略することはできない
。

すなわち、これを実施しないかぎ九本発明の弾性に富む
、しかも機械的強度の優れた高含水性ゲルは得られず、
シ九がって、固定化微生物生菌体ゲルはきわめて軟弱で
ある。

また、凍結状態を維持することなく、凍結・成型体を融
層後、減圧脱水する方式によるときは、泡立ちが激しく
、はとんど、操作続行不可能であるうえ、たとえ長時間
を資して脱水しても、弾性に乏しい白濁ゲルが生成する
ＫすぎないＯ 本発明における真空脱水の真空贋は凍結水分が脱水しつ
るものであればいずれでもよく、たとえば、１ｏ冒Ｈｆ
以下、好ましくＩｒ１１■Ｈｇ以下、さらに好ましくは
α１■Ｈｇ以下飛通常用いられる。

本発明では、次に凍結・成型・脱水体を、例えば常温放
置し融解（解凍）させることにより、弾性に富む微生物
固定化ゲルが得られる。この場合の融解操作としては、
１〜ｂ 慮したうえで、場合によっては３〜１．０１１０℃／ｍ
ｉｎ　　の急速昇温による仁ともできる。いずれにして
も、６０℃以上では、ゲルの表面に硬質皮膜が衾速に生
じることから、微生物生菌体の耐熱性のいかんにかかわ
らず、解凍（融解）操作温度としては４０〜５０℃以下
が望ましい。この解凍操作後、容器またヰ鋳型の支持部
から、微生物固定化ゲルを容易に取り出すことができる
。このゲルは必要により水中に浸漬することにより吸水
し、含水率５０〜９５ｖｔチ（湿橢体基準）Ｋ達するか
、なお強固な弾性体であるため、ゲル内に包括された微
生物の生育活動に好適である。前述の走査型電子顕微鏡
による知見ならびに、上記の含水率このような高含水率
のゲルとして喀きわめて優れた弾性体である。高含水性
と機械的強度とは、従来か呟医用高分子および選択的透
過膜等を開発するうえで、両立し酸４題とされている八
本発明のゲルは、上述の高含水性と強度とを有臥従来の
、ポリビニルアルコール水溶液の風乾皮膜あるいは、前
述のポリビニルアルコール水溶液を０〜３０℃に貯蔵す
る場合、あるいはポリビニルアルコール水溶液を単に凍
結−融解する場合などに得られる軟弱なゲルとは全く異
なる。多くの水分を強固に保持することからも明らかな
とおり、このゲルの塾は比重はは埋水と同Ｓ度であり、
水中で辛うじて沈降するにすぎなへ本発明のゲルには粘
着性がない。板状（８■×８■×２−）、円筒状（内径
３−１外径６■、長さ６■）、球状（直径４■）等ｒｃ
ＩＲｍｔ、たゲル檜１ｏｔを５０−の水中で１０日間が
きまぜても、相互付着、形くずれ等の埃象は全く認めら
れない。なお、水道水中に、１年間浸漬した力ζ溶解せ
ず、弾性および強度も変らない（これは、例えばこんに
ゃくを数日間水道水に浸漬した場合、激しい形くずれが
起るのと、きわめて対照的である）Ｏ本発明においては
、ポリビニルアルコール単一成分がゲル素材（ゲル化成
分）として用いられるＯしかしポリビニルアルコールの
ゲル化現象管阻害し危いかぎり無機物または有機物が共
存すやことは、本発明に差支えなく、その共存量として
は、例えば、ポリビニルアルコールの４量以下とするこ
とができる。これに反し、ポリビニルアルコール（また
は変性ポリビニルアルコールとしてのポリビニルアセタ
ール、ポリビニルブチラール等）に作用して複合−ゲル
を生成する物質ならびにポリビニルアルコールと反応し
てこれを変性させる物質は、たとえ少量共存することべ
よっても、しばしば、本発明のゲル形成（ポリビニルア
ルコ−羨単−成分ゲルの形成）に好ましくない影響を及
はし、機械的強度の優れた高含水性ゲルの生成を困難と
する。このような物質としては、既にポリビニル、アル
コール類トの相互作用が知られているコロイド状アルカ
リ・シリケート（米国特許２．８３へ６４１（１９５８
））、コロイド状シリカ（米国特許２，８５！５６６１
（１９５８））、アルカリ性コロイド状シリカ（特開昭
５４−１５３７７９）、有機ケイ素化合物（酢酸ビニル
樹脂、Ｐ、９３、日刊工業新聞社（１９４２））、テト
ラアルキルシリケート（％公開５５−３０５５８、特公
昭５５−１１３１１）、ホウ素、ホウ砂（フランス特許
７４５９４２（１９５５））、フェノール、ナフトール
、メタ・クレゾール、ピロガロール、サリチルアニリド
、ジサリチルベンジジド、レゾルシノール、ポリアミン
類（高分子化学、１ユ（１０５）２３、（１？５４））
、カオリン（ｋａｏｌｌｎ　）　（Ｎａｔｕｒｅ　ｍ１
７０．４６１（１９５５））などが挙げられる。これら
は、いずれも、その共存量に対応して、ポリビニルアル
コールとの複合ゲルを形成して不都合を生ずるので、本
発明においてに回避される。

本発明では、微生物生菌体の懸濁水溶液を凍結・成型す
ることを不可欠としているｏ−ｆｆに、微生物または生
体組織、あるいはこれらの懸濁水を凍結する場合、多少
とも、これらが凍結障害金受けることは、古くからよく
知られている。この生体またはその組１タンパク質等へ
の凍結障害を回避する力へおるいは、これを著しく軽減
するには、前述の一３０℃以下の低ｉｉ＆まで急冷する
方法のはカーカルボキシメチルセルロース等の水酸基含
有水溶性高分子物質、さらには各種の凍結・乾燥障害保
護剤を少量添加する方法が著名である。本発明において
は、ポリビニルアルコール（ゲル化素材）自体が強力な
凍結・乾燥障害保護剤として作用するため、通常微生物
生菌体の大部分が保饅され、後述するとおり十分な増殖
・生育活動が確保されるが、更に公知の凍結・乾燥障害
保護剤を共存させることができる。

凍結・乾燥障害を軽減する物質は、一般に１保鰻剤、保
鰻物質（Ｐｒｏｔ＠ｅｔａｎＬ　ｐｒｏｔ＠ｅｔｔｏｅ
　　５ｕｂｓｔａｎｃｅ）、添加剤、添加物（ａｄｄｉ
ｔｉｖｅｓ、　ａｄｄ％ｔ％０！Ｉｌｌ　５ｕｂｓｔａ
ｎｃｅ　）、媒質、媒剤、媒液（ａｄｊｕｖａｎｔ）、
分散媒（ｓｕｓｐｅｎｄｅｄｍｅｌｉｕｍ）、安定剤（
５ｔａｂｌｌｉｚｅｒ　）などと呼ばれ、具体例として
は、マグネシウムイオン、グリセリン、ジメチルスルホ
キシド、蜂蜜、ペプトン（ｐｅｐｔｏｎ・）、肉エキ入
酵母エキス、脱脂乳（スキンミルク）、血清、アルブミ
ン（ａｌｂｕｍｉｍ　）、Ｌ−またはＤ−グルタミン酸
のナトリウム塩、カリウム塩、Ｎ−アセチルグルタミン
酸塩、Ｄ−またはＬ−アルギニン、ＤＩ、−２−ピロリ
ドン−５−カルボン駿塩、ポリビニルピロリドン、Ｌ−
ホモアルギン酸、Ｄ−グルコース、Ｄ−１たはＬ−アス
パラギン酸（ａｓｐａｒｔｉｅａｃｉｄ　）、アスコル
ビン酸、ＤＬ−）レオニン（ｔｈｒ＠ｏｎｉｎ＠χＤ、
Ｌ−アロトレオニン（ａｌｌｏｔｈｒ＠ｏｎｉｎｓ　）
、ゼラチン、ムチン、乳糖、ＤＬ−リンゴ酸、Ｌ−シス
ティン（ｃｙｓｔ％ｎ・）、Ｌ−ソルビトール、アラビ
トール、ペクチン、アラビアゴム、マンノース、〃ラタ
トース、Ｌ　−’ＩレジンＤ−７４＃ドース、デキスト
リン、デキストラン、スクロース、可■性駁粉、ラフィ
ノース、クエン酸、アセチルグリシン、Ｄ−キシリトー
ルなどが知られているほか、Ｌ−グルタミン酸塩−脱脂
乳（またはデキストラン、可溶性殿粉ポリビニルピロリ
ドン、カルボキシメチルセルロー人ゼラチン、乳糖）の
組合せ、あるいはデキストラン−塩化アンモニウム−チ
オ尿素−アスコルビン酸の組合せ、脱脂乳−７ｘ：フル
ビン＠（またはスクロース）の組合せ、グルコースと血
清の併用処決も知られているＯその添加量としては、前
述゛のポリビニルアルコール水溶液にα５〜２−加えて
十分目的を達することが多い力ζ　１０４程度加えるこ
ともできる。

仁のように本発明により微生物生菌体を高含水性の弾性
に富む機械的強度の優れたゲル内に捕捉するととができ
るが、このようにして得られる固定化微生物生菌体は、
本発明の増殖制御により著しく増殖して活性を高め、本
発明の目的とする微生物生菌体の固定化・増殖が達成さ
れる。

微生物生菌体が増殖用培地の供給を受けて増殖すること
自体は、なんら％銀すべき新事実ではなく、古来きわめ
て轟然の原理であるが５本発明のゲルが弾性に富むこと
から、ゲル中に包埋された微生物生菌体は、容易にその
包括空洞を押し拡げつつ増殖して巨大な集落に成長し、
しかも本発明のゲルが機械的強度に優れることから、微
生物生菌体の増殖に伴なうゲル組織の破壊（亀裂）が回
避される。本発明のゲルは引張り強度、圧縮強度とも４
麺／−以上に及び、天然系多糖類（寒天、カラダナン、
ペクチン等、強度１１ｃｆ／−以下）！または、カラゲ
ナンの２次的硬化処理品（強、度１〜１．５１１／ｃｓ
ｉ　）に比ｌＡ遥かに優れるｏしかし本発明のゲルにお
いて、増殖菌体集落の直径が１５０ｐｍ程度に達すると
、増殖菌体の一部は、空洞壁の少なくとも一部の網目を
くぐり抜け、空洞外へ排出され、その排出位置（小空洞
において、引続き、増殖・排出の過程を反復し最終的に
は、ゲル表面近傍の空洞からゲル外へ排除される０また
、なおも増殖用培地を供給し続けると、増殖１体集落直
径が約５５０７ｇｍを超え、これに因り、上記１体流失
量も著しく増加する。したがって、本発明において増殖
一体の流失を回避するには、集落の直径を通常１５０ｐ
講以下にとどめることが好ましい０また、集落中に死１
体の蓄積するのを回避するには、多量の増殖用培地を供
給して集落直径を１５０ｐ講以上に達せしめる手法を採
ることができる。ただ昧集落直径が５５０ｐｍｔ超える
ことは、前述のとお抄増殖菌体の大量流失をきたし好ま
しくない。従って、本発明においては、菌体集落の直径
’ｆｆ５５０ｐ解以下、例えば５０〜５５０μｍ１好ま
しくは１００〜５００ｐｖｍＫ維持して、増殖一体の無
益な大量流失を回避すると共に１菌体集落直径を断続的
または連続的に１５０〜５５０ｐｗａに達せしめること
によ九菌体集落から死菌体（自己消化残留分）を含む一
部の菌体をゲル外へ排除する。すなわち、本発明では、
増殖菌体集落の直径′ｔ−５５０ｐｇ以下にとどめるよ
う、増殖用培地の供給を制御することにより、増殖一体
の無益な大量流失を回避する。

本発明においては、固定化微生物生菌体へ増殖用培地を
供給μ断続的にゲルの極ＩＩ［ｔを採取μ例えば走査型
電子顕微鏡により、ゲル内の増殖集落を観察しその直径
が５５０ＦＩＩｌ以下に達した時点で、増殖用培地の供
給を停止することによ九増殖生菌体の大量流失ｔ−まぬ
がれることができる。

一方、固定化微生物生菌体の活性を高めるには、ゲル内
の生菌体製［を高める必要がある０単位体積のゲルに収
容しうる生菌体数はもちろん有限で、その限界値（ｊｌ
密充て−ん濃ｆ）は、生菌体の形状と大きさに基づき、
数学的に算出され、例えばサツカロマイセス・セレビシ
ェ（球形または楕円形、平均約５μｍ）では、約４・１
０・個／ｓｇである。実際のゲルにおいては、ゲル素材
も若干の空間を占有するため、上記の極限値を完全に達
成すること社不可能である力ζ本発明において、増殖菌
体集落の直径が前記５５０μ餌を超えない範囲で、上記
極限値にきわめて近い菌体濃［を達成することができる
。すなわち、ポリビニルアルコールに対重例えばしｉ。

（乾燥菌体基準重量）のサツカロマイセス・セレビシェ
を添加し本発明の包括処理を施し増殖用培地を３〜４日
供給した場合、ゲル内に直径約４００μ講の１体集落が
密集１酵母濃度は約１０”個／−−ゲルと推算された０
また、同じくサツカロマイセス・セレビシェを、ポリビ
ニルアルコールに対ｕ’／、、程度添加程度添加層増殖
用培地間供給した場合、ゲル内に直径２００μ調程度の
菌体集落が密集１酵母濃度社、やはり１ａ−個／５ｆｆ
−ゲルと推算される。

このようにして得られる固定化増殖画体の活性は、増殖
用培地の供給停止後も急激に低下すること社なく、シば
しば２〜３週間同様の活性が維持される。もっとも１〜
２力月後ＫＦｉ、―体集落の直径が当初の２〜４割程度
減少し活性も３割程度低下する例が多いが、このような
事ｍを招いた後も、再び増殖用培地１に１２〜２４ｈ供
給する仁とにより、固定化菌体の活性及び集落直径は元
に復する。

本発明においては、ゲル内に直径５０〜５５０ｐＷ＠、
好マシく扛１００〜５ＱＯｐ南の菌体集落を多数生成せ
しめ、しかる後、ここへ増殖用培地を断続的もしくは少
量ずつ連続的に供給することにより、当初の菌体活性を
維持する仁とを特徴とする０本発明のゲルに、上記操作
ｔ−４カ月以上反後・継続しても、ゲル組織の強度に変
化扛なく、ゲル組織の亀裂・破壊は全く認められない。

本発明のポリビニルアルコールゲルに１ポリビニルアル
コール繊維またはポリビニルアルコール拳フィルムに対
スる硬化処理を施すことにより、更に若干、ゲルの機械
的強度が高まる。仁の公知の硬化（架橋）処理として框
、例えば、アルデヒド、ジアルデヒド、ジインシアナー
ト、フェノール類、あるいは、チタニウム、クロム、ジ
ルコニウム等の金属化合物、さらにはホウ砂、アクリロ
ニトリル、トリメチロールメラミン、エビクーロヒドリ
ン、ビス−（−一ヒドロキシエチル）スルホン、ポリア
ク゛リル酸、ジメチロール尿素、無水マレイン酸等によ
る方法を挙げることができる〇 しかし本発明のゲルは、既に述べたとおりの強度（耐荷
重性）を有し、また上記の補助的硬化処理により固定化
微生物生菌体がしばしば損傷を受けることや、ゲルの製
造費がいたずらＫかさむことｔ考ｌするならば、天然多
糖類にしばしば用いられるこれらの硬化処理を、本発明
においては、用いない方が望ましいといえる０ 次に実施例により本発明を説明する。

実施例　１ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９７モル一、粘度
平均重合［２，２００，４９１水溶液の粘１ｊ（２０℃
）５４ｅＰ）の粉末８５ｆ（含水率６ｗｔ１ｇ）を、水
９１ｓｔに溶解１．、！ＬＯｖｔｌ！水溶１’［（ｐＨ
＆９）を得た◇仁の水溶液５７８１に１２０℃Ｘ２Ｇｍ
ｉｎの加圧水蒸気滅１処理を施し無鉋室において放冷後
、ここへ、サツカワマイセス９セレビシエ（８ａｅｅｈ
ａｒｏｍｙｅ＊ｍ　ｅ＠ｒｅｖｉｓｉｍｓ）　−［１２
ｔを含む懸濁水（リン酸緩衝液ｐＨ７）　（培養液濃縮
液）２０−を添加し、７ｍ１ｎ間かきまぜた。この懸濁
水溶液のポリビニルアルコール濃度は７．６　ｗ　ｔ　
％である。

この懸濁水溶液２００ｆを、無菌室において、ラシヒリ
ング（８ｍＸ　８　ｍ　）成型用鋳型（６６５個分）へ
注入臥−４５℃×α５ｈの冷却（ａ［ｌ結・成型）を施
し食後、鋳型の上面カバーを除き、成型体を支持する下
面カバーに１１−Ｈｇで６ｈの真空脱水処理を施した。

解凍後、１３２Ｆ（含水率８８　ｗ　ｔ　ＩＧ、脱水率
３５ｗｔ１）のゲルを得た。

このゲルを、あらかじめ滅菌したα９−食塩水１５（１
−に６ｈ浸漬した結果、成型ゲルは吸水して１ｓａｒ（
含水率８９　ｗ　ｔチ）に達しな。この浸漬液に前記酵
母Ｆｉ認められず、酵母の余量がラシヒリング内に包括
されたことを確かめた〇 直径３５１、高さ６０５１のアクリル樹脂製カラムへ、
上記ラシヒリ／グ１３０ｔ−不規副光てんし、あらかじ
め１２０℃Ｘ１５ｍ１ｍの滅菌処理を施した培地（グル
コース１−１ぺｙトンＬＩＬ５Ｉｓ１酵母工讐スα５％
、麦芽エキスｒｌｓ哄、塩化カリウム１％、ｐＨ５，５
，２５℃）ｉ１２０ｓｆ／にの流速で塔底から送入した
。この培地送入操作の前後において、ラシヒリングの極
微量を採取１走査型電子顕微鏡により観察し友結果、培
地送入開始前には、ゲル中に少数の酵母が個別分散・包
括されているにすぎなかっためζλ４ｈ後には多数の酵
母集落（直径７０μｍ）を容易に認めることができた。

５８ｂ後には、集落の直径が２００μｍに違賦各集落が
膨張して互いに接近してきたことを知り、直ちに、培地
の送入を停止して、エチルアルコール合成用基質溶液（
グルコースＩＱｗｔチ、硫酸マグネシウム七水和物！Ｏ
ｐｐｍ、ＰＨ！Ｌ５．５２℃）ｔ８０ｓｓｇ／ｈの流速
で塔底から送入した結果、１２ｈ後の流出液のエチルア
ルコール濃Ｉ［は４ｗｔ１（理論収率の７７１１）Ｋ達
した。この操作を１力月間継続したことにより、塔頂流
出液のエチルアルコール濃度は五５　ｗ　ｔ　Ｉｓに低
下レゲル中の生菌体集落の直径は１４０μｍに縮小した
ことを知ったＯしか改前記培地を１ｚｏ−／ｈの流速で
再び塔底から送入することにより、１２ｈ後には元の集
落直径（２００μｍ）に復した。しかる後、ここへ前記
エチルアルコール合成用基質溶液を８０ｄ／ｈの流速で
送入り、％　ｓｈｉには流出液のエチルアルコール濃匿
扛、再びＡｗｔｌＧＫ後したＯ 実施例　２ 市販ポリビニルアルコール（けん化１ｊ９７モルチ、粘
度平均重合ＷＬ１，７００．４％水溶液の粘度（２０℃
）２６ｃＰ）の粉末８８ｔ（含水率７ｖｔｌＧ）を水９
１７ｔに溶解ＬＡ　８ｖｔ−水溶液とした。

この水溶液４４ｔに、１２０℃Ｘ１５ｍ１ｎの加圧水蒸
気滅菌処理を一１次に無菌室において放冷後、ここへク
ルイフエロマイ篭ス・マルキシアヌス（Ｋｌｕｙマ・ｒ
ｏｍｙｏａｓｍａｒｘｌａｎｍｌｍ）１００８　ｆｔ−
含む懸濁液（培養液）４ｆｔ−注ぎ、７ｍ１ｎ間かきま
ぜた。この懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃ＷＬは
ｚＳｖｔチであった。この懸濁水４１ｔｔ１無繭室にお
いて、ラシヒリング（８雪×８■）成型用鋳型（１３０
個分）へ注入り、　−５８℃Ｘ［１５ｈの冷却（凍結・
成型）を施し食後、成型体を鋳型から取り出し６ｈの真
空脱水を施した。解凍後２３ｔ（含水率８５　Ｗｔ　’
４ｓ脱水率４３ｗｔｌ５）の成嬰ゲルを得た０こ、のゲ
ルを、あらかじめ滅菌したａ９ｓ食塩水４０ｓｄ″４Ｃ
６ｈ浸漬した結果、成型ゲルは吸水し２７ｆ（含水率８
７ｗｔチ）に達した０直径３ｃ１１、高さ１０５１のガ
ラス製カラムに、上記ラシヒリング２７ｆｔ−不規則光
てん獣あらかじめ１２０℃Ｘ２０ｍ１ｎの滅菌処理を施
した培地（イヌリン１１％麦芽エキスα３先酵母ｊ−’
Ｉ’　ス（１５１％　　ＰＨ”、２５℃）ｔ１２ｄ／ｈ
の流速で塔底から送入した。４０ｈ後のゲルを、走査型
電子顕微鏡を用い観察した結果、ゲル内に直径４５０ｐ
ｍの集落ｉ認めた妙ζゲル組織に裂目はなかった０培地
を更に１０ｈ送入後、同様の観察を行った結果、集落の
直径が５５０μｗｓｔ−超えた段階で塔頂流出液に濁り
が目立ち、酵母が若干流失し始めたことを知った。した
がって、集落直径５５０μｍ以下に制御する必ｖＩを閣
めた〇実施例　３ 市販ポリビニルアルコール（けん化、ｌ［９＆４モルー
１粘度平均重合［１，８００，４９Ｇ水溶液の粘度（２
０℃）２９．５ｅＰ）の粉末８５ｔ（含水率５ｖｔＩｓ
）ｔ、水９１３２に溶解ＬＡ　８ｗｔ−水溶液（ｐＨ７
）とした。

この水溶液１８ｆに、１２０℃Ｘ２０ｍ１ｎの加圧′水
蒸気絨曹処理を施ム次に無菌室において放冷後、ここへ
バシルス°サブチリス（Ｂａｅｉｌｌｕｇ　　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ　）　　ａ　ＯＱ　２ｔを含む邂濁水（培養液
、ｐＨ７）２ｆｆ注ぎ、７’ｍ　ｉ　ｎ間かきまぜた。

この懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃度は７ｗｔ−
である。

この懸濁水溶液１８ｆｔ、無菌室において、ポリエチレ
ン製容器（底面６　Ｘ　６　ｔｙａ　）に注ぎ、−４８
℃×α６ｈの冷却（凍結・成型）ｔ−施した後、５ｈの
真空脱水を施した。

解凍後、１ａ４ｆ（含水率８６　ｗ　ｔ　％、脱水率４
２ｗｔチ）の白色不透明ゲルを得た。これを、あらかじ
め滅菌したａ９−食塩水３０ｓｄｋ８ｈ浸漬した結果、
ゲルは吸水し１２ｔ（含水率８８ｗｔ５６）に達した。

このゲルを、多数の細片（８ｍＸ８■×４霞うに裁断後
、滅菌した培地（可溶性殿粉５チ、ペグトン１−１肉エ
キス１チ、酵母エキスミ１チ、食塩ａ５−１塩化カルシ
ウムａ０２％、硫酸マグネシウム七水和物（１０１％、
ｐＨ７，３０℃）４〇−中へ投入し、３０〜３３℃の恒
温室において４８ｈ振とうした時点で、ゲルの極微量を
採取し走査型電子顕微鏡を用いて観察した結果、直径３
７０声ｍの細菌集落を多数認めたが、ゲル組織に亀裂は
認められなかった。しかる後、更に１２ｈ振とうしつつ
、同様に観察した結果、細■の集落直径５５０μｍｋ超
えた後、培地の濁度が目立ち始め、細■がかなり流失し
たことを知った。従って、細１集落直径５５０μｍの段
階で、増殖用培地をゲルから分離するのが適切であるこ
とを確認した。

実施例　４ 市販ポリビニルアルコール（けん化度９７モル一、粘度
平均重合度１，７００．４チ水溶触の粘度（２０℃）２
６ｅＰ）の粉末８５ｔ（含水率７　ｖ　ｔ　’３６　）
　ｔ、水９１２ｆに溶解１８ｗｔ−水溶液（ｐＨ瓜９）
を得た０この水溶液１７１ｔに１２０℃Ｘ２０ｍ１ｎの
加圧水蒸気滅菌処理を施賦次に無菌室において放冷後、
ここへアルトロバクターシンプレックス（ムｒｔｈｒｏ
ｂａｅｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅｘ）　　（別名コリネバク
テリウム・シンプレックス、Ｃｏｒｙｎｅ−ｂａｅｔ＠
ｒｉｍｍ　ｍｉｍｐｌ＠ｘ　）　１　ｓａｔ含む懸濁液
（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン・塩酸緩衝
液ｐＨ７，５）２０ｆｔ：注ぎ、７ｍ１ｎ間かきまぜた
。この懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃度は７　ｗ
　ｔ　Ｔｏ　テある。

この懸濁水溶液１９０ｆｔ、無菌室において、ラシヒリ
ング（８■×８箇）成型用鋳型（６３０個分）へ注入し
−４８℃Ｘα５ｈの冷却（ａｋ結・成型）を施した後、
成型体を取り出し、６ｈの真空脱水を施した。解凍後、
１３２ｔ（含水率８９ｗｔｌ５１脱水率５ｏｗｔ＊）の
ゲルを得た）このゲルを、あらかじめ滅菌したα２％グ
ルコース水溶液（リン酸緩衝液、ｐＨ７）１００−に７
ｈ浸漬した結果、成型ゲルに吸水して１ｓｔｆ（含水率
９０ｖｔｌＧ）に達したＯ ［１１径ＳｅＩｍ、高さ６０国のガラス製円筒（カラム
）へ上記ラシヒリング１３９ｆｔ−不規則光てんＬＡあ
らがじめ１２０℃×１５ｍ１ｎの滅菌処理を施したグレ
ドニゾロン（ｐｒｅｄｎｌｓｏｌｏｎａ、′　１１β、
１７α、２１−トリヒドロキシ−ｔ４−プレグナジェン
−４２０−ジオン）合成用基質溶液（コルチゾルｃｏｒ
ｔ１ｓｏｌ三１１β、１７ｆｆｓ２１−トリヒドロキシ
−４−ルグネンーへ２ｏ−ジオン（Ｌ　Ｉ　Ｍ、メチル
アｓｐコ−ｈ４％、ｐＨ７，３４℃）ｔ１２゜ｄ／ｈの
流速で塔底から送入すると共に、無菌フィルターを通へ
空気を塔底へ２００５ｇ／ｈの流速で送入した力ζ搭頂
流出液は、２〜２０ｈにわなり、プレドニゾロン濃度Ｉ
ＩＬ３ｗｔ−以下にすぎなかった。

次に、このカラムの塔底へ、培地（ペプトン１５％、コ
ルチゾ４１ｍＭ、メチルアルコール４チ、３０℃）を２
８ｓｄ／ｈの流速で４０に送入後、ゲルの極微量を採取
し走査型電子顕微鏡を用い観察した結果、直径１９０ｐ
、の細菌集落を認めた。次に、プレドニゾロン合成用基
質溶液を１２０ｄ／ｈの流速で塔底から送入すると共に
、無菌フィルター金通じ、空気を塔底へ２００ｄ／ｈの
流速で送入１紫外線吸収スペクトλ分析（２８５ｎｍ吸
光度）、薄層クロマト分析（シリカ・ゲループ党ピレン
グリコールークロロホルム）、高速液体クロマト分析（
クロロホルム抽出）により流出液を分析した結果、２０
日間にわたり、プレドニゾｐン濃度は１．８〜２．０ｗ
ｔ％（収率５５〜６１モルチ）であった。しかし、３１
日後には、この濃度がｔ　５　ｗ　ｔ　％へ低下したた
め、ゲルの極微量につき、光学顕微鏡により観察した結
果、細菌集落が直径約７０μ調に収縮していることを知
った。次に、上記カラムの塔底へ、培養液（ペプトンα
５−、グルコース（Ｌ２９Ｇ、塩化マグネシウム１ｍ１
戦塩化カルシウム１ｍＭ、コルチゾル１、メチルアルコ
ール４Ｉｓ、　リン酸緩衝液ｐＨ７，３０Ｃ）１に３０
ｄ／ｈの流速で２４に送入後、ゲルの極微量を採取し走
査型電子顕微鏡により観察の結果、直径２２０１ｍｇの
細菌集落を認めた。

しかる後、再び前記９基質溶液を送入したところ、前向
同様、流出液の紫外線吸収スペクトル分析により、グレ
ドニゾロン収率６１七ルーが達成されたことを知った。

このような基質溶液の送入および断続的培養液の送入を
８回反復実施した〃ζゲル内の細菌集落包括空洞には、
全く亀裂線発生しなかった。

実施例　５ 、市販ポリビニルアルコール（けん化［９１１４モル−
１粘度平均重合Ｈｚａｏｏ、４−水溶液の粘［（ｚｏｃ
）２ｔｓ＠Ｐ）の粉末８４ｔ（含水率ｓｗｔ−）ｔ、水
９１６ｆに溶解Ｉ、、、８ｖｔ−水溶液（ｐＨ７）を得
た。

この水溶液１８Ｆに、１２０℃Ｘ２０ｍ１ｎの加圧水蒸
気滅菌処理を施１次に無菌室において放冷後、ここへサ
ツカロマイセス・セレビシェ（８ａｅｅｈａｒｏｍｙｅ
＠ｓＣ＠ｒ・マ１ｇ１ａ・）　　２０ｗｇを含む懸濁水
（リン酸緩衝液、ＰＨ７）２ｆｔ−注ぎ、７ｍ１ｎ間か
きまぜた。この懸濁水溶液のポリビニルアルコール濃ｆ
は７．２ｗｔ−である。

この懸濁水溶液１８ｆを、無菌室において、ラシヒリン
グ（８■×８■）成型用鋳型（５９個分）へ注入し一３
８℃ｘｏ、ｓｈの冷却（凍結・成型）を施した後、成型
体を取り出ＬＡ　６ｈの真空脱水を施した。解凍後、１
α４ｆ（含水率８６ｗｔ％、脱水率４２ｗｔ％）の成型
ゲルを得た。これをあらかじめ滅菌した（Ｌ９１Ｇ９１
α５ｏ−に６ｈ浸漬した結果、ゲルは吸水し１２ｔ（含
水率ａａｖｔ＊）に達した。

直径３１、高さ１０５＋のガラス製円筒に上記ラシヒリ
ング１２Ｆを不規側光てんＬＡあらかじめ１２０℃×２
０ｍ１ｎの滅菌処理を施したエチルアルコール合成用基
質水溶液（グルコース１０ｗｔ１Ｇ、硫酸マグネシウム
七水和物１０１００ｐｐ　ＰＨ！Ｌ５．３２℃）を、１
０ｄ／ｈの流速で塔底から送入した力（流出液のエチル
アルコール濃ｆはｌ１１ｗｔ＊（理論収率の２−）にす
ぎなかった０次に、この成型ゲルの微量を採り、走査型
電子顕微鏡により観察したが、酵母が個別に分散包括さ
れてはいるものの、酵母集落は全く認められなかった０
続いて、上記カラムの塔底へ、培地（グルコース４−１
酵母エキス１載塩化アンモニウムａ２−１硫酸マグネシ
ウム七水和物αＯＩ　Ｌｓ、塩化カルシウム１００４Ｌ
Ｐ’５．５．２８℃）を、５−／ｈの流速で５５ｈ送入
後、ゲルの黴量會採り、同様に観察したところ、直径５
２Ｑｐ気の酵母集落を多数認めたが、包括空洞の亀裂は
見られなかつｌ−０ 次に、塔底へ前記エチルアルコール合成用基質水溶液を
２０ｍ／にの流速で送入し流出液につきエチルフルコー
ル（ガスハマト分析ｍ＞とグルコース（ジニトロサリチ
ル−法）を分析した結束、クル；ドースＪ）精舎率は＋
１１１−にすぎず、エチルアルコール１！に度４．７　
ｗ　ｔ　’Ｉｋ　（理論収率の９２慢）に達したことを
知った。

１力月後に、上記エチルアルコール濃度は′５．５　ｗ
　ｔチに低下したため、このゲルの微量を採取し走査型
電子顕微鏡により観察した結果、多数の酵母集落がいず
れも直径２５０ｐ＊に収縮したことを知った。

上記カラムの塔底へ再び前記培地ｔ−５ｍ／ｈの流速で
１７に供給後、同様に観察した結果、多数の集落、は、
−いずれも直径３００μｍに復したことを知った。その
後、塔底へ前記エチルアルコール合成用基質水溶液ｔ−
２０ｓｄ／にの流速で供給１．．４ｈ後、流出液のエチ
ルアル；−ル濃度４．７ｖｔ−が再現された０上記諸操
作を通じ、流出液には、酵母は極微量検出されるにすぎ
ず、固定化当初の酵母はもちろん、カラム内で増殖し九
酵母も、ゲル内にほぼすべてｈｌｌｌ虻釧１（い４Ｉ仁
と食−かｋ“Ｉ九。

比較例　１ 実施例５のポリビニルアルコール水溶液６０９に、１２
０℃Ｘ２０ｍ１ｎの加圧水蒸気滅菌処理を施し無菌室に
おいて放冷後、この水溶液へ実施例５と同様のサツカロ
マイセス嗜セレビシェａ０２ｆ’ｉ含む懸濁水（リン酸
緩衝液）７ｆ′ｆｔ注ぎ、７ｍ１ｍ間かきまぜた０次に
、この懸濁水溶液６０ｆを、底面１０ａ＋Ｘ　１０ａｗ
の容器に注ぎ、２日間放置することにより、湿潤セロノ
・ン紙に供た、全く剛直性に欠ける粘着性フィルム１４
．６Ｆ（含水率６２　ｗ　を−）ヲ得た。このフィルム
（厚さ約１．５■）１に１あらかじめ絨麿し九ａ９チ食
塩水２０−に浸漬した結果、４ｈ後に、フィルムは１″
７．５　？　（含水率６７ｗｔチ）に達した。このフィ
ルムを多数の細片（８■×８■ｘ　ｔ　ｓ　ｗａ　）　
Ｋ裁断後、滅菌処理を施した実施例５の培養液４ｒＪ−
へ投入し焼綿栓を付１．，３０〜３２℃の恒温室におい
て４ｓｈ振とう後、このフィルムの微量を採り、走査型
電子顕微鏡によりフィルム内部を観察したが、酵母の大
集落は認められず、直径２５μ餌程度の小集落が点在す
るにすぎず、フィルム内の酵母菌数は１０１個／−以下
と推算され友。

実施例５０基質水溶液４０＋ｄｔ−坂ロフラスコ（５０
Ｇ＋ｄ）に採り、１２０℃Ｘ１５ｍ１ｎの滅菌処理を施
した後、無菌室で放冷しここへ上記フィルム裁断片１７
ｆｅ投入後、焼綿栓を付り、、３０〜３２℃の恒温室に
おいて振とうした力ζ　２４ｈ後のエチルアルコール濃
［は［１４ｖ　ｔ　−（理論収率の１５−）にすぎず、
また、ポリビニルアルコールが溶出したことを知った。

このようにポリビニルアルコールを用いる公知の手法に
よる場合、増殖効果に、乏しいうえ、ポリビニルアルコ
ール・フィルムの耐水性にも問題があり、解糖（エチル
アルコール生成）活性の高い固定化酵母は得難い。

比較例　２ 実施例５のポリビニルアルコールのかわりに、けん化度
９３モル−１粘度平均重合度１，７００．４−水溶液の
粘度（２０℃）　５０　ｃＰの市販ポリビニルアルコー
ルを用い、同様に操作した。凍結・成型１税水体１０ｆ
（含水率８５ｗ　ｔ　％、脱水率４４ｖｕｉ）が得られ
た力ζ解凍後は、５℃においても軟弱化し少量のゲル層
のほかに１多量のポリビニルアルコール濃厚水溶液が層
分離するのを認めた０したがって、これを、反応用カラ
ムに充てんすることは不可能であり、フラスコに移す操
作によっても、完全に形くずれした。

比較例　３ 実施例５のポリビニルアルコールのかわりに、けん化度
９　？、　２モル−１°粘度平均重合度５００．４チ水
溶液の粘度（２０℃）ａ６ｅＰの市販ポリビニルアルコ
ールｔ−用い、そのｔＳｗｔ−水溶液１８Ｆにつき、同
様に操作した力ζ寒天に似たもろいゲル１αｓｒ（含水
率８４　ｗ　ｔ　１、脱水率４２ｗｔ％）が得られたに
すぎず、カラムへ充てんすることはできなかった・−ｑ
ｌ、 比較例　４ 比較例３と同じ重合［５００のポリビニルアルコール水
溶液の濃［（−５０ｖｔ−まで高め、その水溶液１８ｔ
につき同様に操作し、１ａ４ｆ（含水率８４ｗｔ％、脱
水車４２ｖｔｌ＆）のゲルを得たが、このゲルは、水中
で著しく軟化μ形くずれした。

比較例　５ 市販ポリビニルアルコール（けん化＃ｔ９９モルー１粘
度平均蓋合［２，６００，４−水溶液の粘ｆ（２０℃）
、６６ｃＰ　）の粉末６５ｔ（含水率８ｗｔ％）を、水
９３５ｆに溶ｗ４Ｌ、、６ｗｔ−とした。この水溶液５
４ｆに加圧水蒸気数ｉｌＮを施し放冷後、実施例５と同
様の酵母懸濁水５ｆｔ−添加［Ａ−７０℃Ｘ（Ｌ５にの
凍結・成型処理後、常温で２ｈ放置した結果、軟質ゲル
（５７ｔ、脱水車０−１含水率９４ｗｔ９Ｇ）を得ため
一弾性を示さず、水中に１晩浸漬することにより形〈ず
れし水層に濁りを生じた０すなわち、たとえ、ポリビニ
ルアルコール水溶液に凍結・成型を施しても、引続きこ
れに凍結・乾燥を施さないかぎり、本発明のタルにルー
耐水性の乏しい軟弱なゲルが生成するにすぎず、酵母を
固定化して実用に供するに耐えないことが明らかである
〇 比較例　６ 比較例５の凍結・成型処理後、成型体５４ｆ１に常温で
融解させ、しかる後、真空乾燥器に移し減圧脱水を試み
たが融解液の泡立ちが激しく、操作を停止しなければな
らなかった０次に、泡立ち対策として、上記成型体融解
筒のし、。（１７１）を採取−これをポリエチレン製ビ
ーカー（１００ｓｄ）の底面に塗布後、減圧乾燥を試み
た。これにより、ビーカーの底面に１ｆのゲル（含水率
７４　ｗ　ｔ　Ｔｏ、脱水率７２ｗｔ９１）が生成した
力ζその弾性は乏しく、また６ｏｏｔ／−の引張り応力
により直ちに切断された。

仁のようにまたとえ、ポリビニルアルコール水溶液を凍
結・成型しても、その後、これを融解させることなく（
凍結状態を維持しつつ）脱水しないかぎり、本発明の高
含水性で、しかも弾力性に富む機械的強健の優れたゲル
（酵母含有ゲル）は得られない。

実施例　６ 市販ポリビニルアルコール（けん化［９ｈ４モルー１粘
度平均重合度１，８００．４−水溶液の粘［（２０℃）
　２９．５ｃＰ）の粉末８４ｆ（含水率５ｖｔ憾）を水
９１６ｆｔＩＣ溶解ＬＡ　ＪＬＯｗｔチ水溶液ＣｐＨ＆
？）を得た。

この水溶液１ｓｔに、１２０℃Ｘ２０ｍ１ｍの加圧水蒸
気滅菌処理を施し次に無１室において放冷後、ここへサ
ツカロマイセス・セレビシェ（８ａｃｅｈａｒ＠ｍｙｅ
＠ｓｅ＠ｒ・マ１ａｉａ・）　１４ｆｔ含む懸濁水（り
ン酸緩衝液、ＴｉＨ２）２ｔｔ−注ぎ、７ｍ１ｎ間かき
まぜた。この懸濁水溶液のポリビニルアルコールＩｌＫ
は、７．２ｖｔＬｓである０この懸濁水溶液１８ｆｔ、
無菌室において、ポリ　エチレン製容器（底面４　Ｘ　
４　ｅｓ　）に注ぎ、−５３℃×α６ｈの冷却（凍結・
成型）を施した後、５ｈの真空脱水を施した。

解凍後、１［Ｌ５Ｆ（含水率８４　ｗ　ｔ　Ｓｓ脱水率
４２ｗｔ１）の白色不透明ゲルを得た。これをあらかじ
め滅菌したα９−食塩水４０ｄｌｌｆＣ６に浸漬した結
果、ゲルは吸水し１２ｆ（含水率８６ｗｔ’ｌＧ）に達
した。この浸漬液には前記酵母は検出されなかった。次
に、このゲルを多数の断片（２ｃＮＸ４ａｗＸＡ■）に
裁断後、あらかじめ滅菌したα９−食塩水４０−で洗浄
し　この洗浄液を光学顕微鏡により観察した結果、前記
酵母が少数縁められたが、洗浄液の濁度に基づき、これ
を定量し当初の酵母の少なくとも９８％がゲル中に確実
に包括されたこと金知った。

次に、このゲル裁断片につき、機械的強［ｔ−測定した
ところ、引張り強度ｄ　Ｋｆ／ｃｄ、また圧縮強度は４
　Ｋｆ１５＃以上であった◇また、指先につまんで強烈
に圧迫しても、全く形（ず些せず、再び元に後した。

実施例６のゲル強度を、比較例２〜６の場合と比較測定
した。

引張強度　　　圧縮強度 （Ｋｆ／ｄ）　　　（ｊｃｆ／ａｉ） 実施例６（本発明）６〉４ 比較例２　　　　　　　　　　くα２　　　　くａ２２
比較３　　　　　　　　　　＜ａ２　　　　　＜（１２
比較例４　　　　　　　　　　　＜ａ２　　　　　（ａ
２２比較５　　　　　　　　　　　（（Ｌ２　　　　　
＜（Ｌ２２比較６　　　　　　　　　　くα６　　　　
〈ａ８本発明の微生物生繭体固定化・増殖用ゲル２＞Ｌ
％従来公知のポリビニルアルコール系ゲル（比較例５、
比較例６、ならびに本発明によらないポリビニルアルコ
ール系ゲル（比較例２〜４）Ｋ比し機械的強度において
格段と優れていることがわかる。

比較例　７ （１）アルギン瞭ナトリウム５ｗｔ％ｆ溶解した（１９
５６食塩水５０ｍ（３５℃）に、サツカロマイ七ス吻セ
レビシェ（１５ｆｔ−含む［Ｌ？’１食塩水４０ｄ（５
５℃）を混合後、これｉ（ＬＯ２Ｍ塩化カルシウム水溶
液５００ｄへ　ピペットから滴下１球状ゲル（直径３−
１計Ｉｆ、０００個）會得た。

（２）Ｋ−カラゲナン４　ｗ　ｔ　＊を溶解したα９嘩
食塩水（３５℃）４０−へ上記酵母懸濁液２０ｍｇ（５
５℃）を添加嶋混合ム底面５５ＩＸ５ｃｍのポリスチレ
ン灸容器へ注ぎ、２０℃に冷却して、板状ゲル（厚さ２
．４５１　）　ｆ得た。

（滲　上記ゲル２ｔ（ｔ２Ｘ２．４Ｘ［Ｌ２ｏｗ）ｔ、
硬化剤水溶液（５−塩化カリウム）　２　Ｑ−（３０℃
）に２ｈ浸漬した。

（４）　　前畝２）のゲに２ｆ（４，２Ｘ２．４×＠２
ａｓ）ｔ、硬化剤水溶液（ヘキサメチレンジアミン０．
０５　Ｍ、グルタアルデヒド（ＬＩＭ）２０＋ｄ（５０
℃）に２ｈ浸漬後、水洗した０ （５）　　寒天粉末２ｗｔチを溶解したａ９嗟食塩水（
３６℃）４０−へ（１）の酵母懸濁液２０ｗ１（５６℃
）を添加・混合Ｌ％底面５ｃＩＲＸ５５＋のポリスチレ
ン製容器へ注ぎ、０℃に冷却して、板状ゲル（厚さ２．
４　ｃｍ　）ｔ−得た。

（６）ペクチン（レモン系）粉末４ｗｔ％を溶解したα
９−食塩水（３６℃）４０−へ（りの酵母懸濁液２〇−
°（５６℃）を添加・混合し底面５ｃｍＸ５ｃＭ１のポ
リスチレン製容器へ注ぎ、５５℃に冷却して板状ゲ＃（
厚さ２、４　ｃｍ　）を得た。

上１１）、（２入（３）、　（４）、（５）、（６）の
ゲルはいずれも軟弱でもろく、指先でつまみ、軽く指圧
を加えることにより、直ちに押しつぶされた。を九、引
張抄強度は、共に１．５　Ｖ４／ｄに耐えず、直ちに破
断さｎた。

比較例　８ 比較例７（１）、（２）、（３）、（４入（５）、（６
）のゲル細片（球または３Ｘ３Ｘ５ｍ立方体）につき実
施例５に準医増殖用培地を送入した。４−４）ｌｌの観
察給米で、すべてのゲルに亀裂が見らへいずれの場合の
流出液も着しく懸濁し、酵母の流失が確認された。

直ちに培地の供給を停止１がわりに、エチルアルコール
合成用基質水溶液を送入したが、それぞれのゲルの亀裂
は消失することなく、むしろ亀ｌ！！箇所数は増加し酵
母の流失か１２ｈ以上持続した。特に比較例７（へ（３
入（４入（５）、（６）のゲルでに、成形体の表面が更
に軟弱化し徐々に脱落するのが認められた。

手続補正書 昭和５６年１１月１７日 特許庁長官　島　１）春　Ｓ＋　　殿 １、事件の表示 昭和５６年特許劇第１４３９８３号 ２、発明の名称 微生物生鉋体の固定化・増殖法 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　（４４４）　　日本石油株式会社゛、・　　り゛ ５、補正により増加する発明の数　　　な　し　　　−
′６、補正の対象 ７、補正の内容 （１）　　特許請求の範囲を別紙の通９補正する。

（２）　ｑ＃細書の下記の箇所を補正する。

特許請求の範囲 けん化度９５モル係以上で、しかも粘度平均重合度ｉ、
ｓｏ。

以上のポリビニルアルコールの水溶液と微生物生菌体よ
り成る懸濁水酪滌を、成型用鉤皺・＼注入し、仁れｔ−
６υ工り帆一温度で凍結・成型し、しかる後、この凍結
・成型体を融解させることなく脱水率５ｗ１４以上に真
空脱水し、必要に応じ水中に浸漬することによフ、含水
率２０〜９２ｗｔｆｂ　（湿潤体基準）に到達させ、微
生物生菌体を包括（包埋）したゲルを得て擲工このゲル
に微生物増殖用培地を供給し、これによ多形成される増
殖微生物菌体集落や直径を５０μＳ〜５５０μ愼の範囲
にまで拡大させることを特徴とする微生物生菌体の固定
化・増殖法。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. けん化度９５モル−以上で、しかも粘度平均重合度１、
   ５００以上のポリビニルアルコールの水溶液と微生物生
   菌体より成る懸濁水溶液を、成！１３４１鋳型へ注入し
   、これを−６℃より低い！［で凍結・成型し、しかる後
   、この凍結・成型体を融解させることなく脱水率５ｕｙ
   ｔｅｓ以上に真空脱水し必要に応じ水中に浸漬すること
   により、含水率２０〜？　２　ｗ　ｔ　％　（湿潤体基
   準）に到達させ微生物生菌体を包括（包１１）したゲル
   を得て後このゲルに微生物増殖用培地を供給しこれによ
   り形成される増殖微生物画体集落の直径ｆｓＱｐ隋〜５
   ５０　ｐ＠の範囲にまで拡大させることｔ−特徴とする
   微生物生菌体の固定化φ層端法〇