JPS583679B2 - タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、体液中の血液及び他のペルオキシダーゼ作用
物質を検出するための、容易に製造することができる安
定な試験片に関する。

肉眼でもはや確認することのできない少量の、尿、糞便
又は嘔吐物中の血液の検出は、胃、腸及び尿路の出血を
診断するのに非常に重要である。

そのような出血は例えば相応する器官の腫瘍、潰瘍又は
炎症によって起る。

それと共に尿及び血漿中で特定の溶血性毒素の作用下に
ヘモグロビンが遊出しうる。

血液及びヘモグロビンはペルオキシダーゼ作用を行なう
。

即ちそれらはヒドロペルオキシドから酸素を遊離しかつ
これを一定の受容体に運搬する。

他のペルオキシダーゼ作用物質は白血球及び細菌中で現
出する。

これらの物質の検出は腎及び尿路の疾患及び感染の診断
に重要である。

同様にペルオキシダーゼ作用のミオグロビンは例えば心
臓硬塞後に尿中に見出される。

特に、膀胱結石又は腎臓結石を患っている場合には屡々
血尿を伴う。

これらのすべての物質を敏感に検出するにはそれらのペ
ルオキシダーゼ作用が特に好適である。

この際に、ヒドロペルオキシドから遊離せる酸素は色原
体に運搬され、この色原体は色素に酸化されるのでペル
オキシダーゼ作用物質の存在を示す。

特に血液を検出するために、従来この反応は医学及び法
医学分析に適用されている。

たいていの場合に、これは試験管反応又は斑点反応とし
て実施され、その際にヒドロペルオキシド（酸化剤）と
してはたいていの場合に過酸化水素が使われる。

色原体としては、殊にベンジジン、ｃ−トルイジン又は
ロイコマラカイト緑が使われる。

迅速試験が最近達成した大きな重要性により、そのよう
な試験は体液中の血液の検出に既に度々展開された。

一般に、迅速試験は吸引性担体、たいていの場合、検出
反応に必要とされるすべての試薬が含浸されておりかつ
簡単に体液中に浸漬することによって着色反応を示す紙
である。

そのような試験紙は例えば米国特許第３０１２９７６号
明細書及び米国特許第３０９２４６４号明細書に記載さ
れている。

そこでは酸化剤として有機ヒドロペルオキシド、例えば
クモールヒドロペルオキシド又はｐ−メンタンヒドロペ
ルオキシドが使われた。

これらの試験紙を敏感に反応するようにすべきでありか
つ殊に血液に対して無機ヒドロペルオキシドによる迅速
試験よりも大きな特異性を有するようにすべきである。

酸化剤及び色原体が相互に非常に緊密に存在するこの試
験紙は予想する程には安定ではない。

それ故、ドイツ国特許出願公告第１２６５４５３号公報
には、両方の成分を有機ヒドロペルオキシドの被包によ
り相互に分離する方法が記載されている。

この場合、被包にはジアルデヒド多糖類で架橋されてい
るアラビアゴム及びゼラチンが使われている。

この方法は煩雑で、妨害され易い。

従って例えばコスト高なホモゲナイザーのような機械が
必要とされる。

その上、長い乾燥時間が連続的な含浸法を著しく損う。

ところで、ヒドロペルオキシドを一般式■：〔式中Ｒ１
はジメチルアミノ基、アルコキシ基、フエノキシ基、ア
ルキル基又はフエニル基もしくはＮ−モルホリノ基を表
わしかつＲ２及びＲ３は同一のものであり、ジメチルア
ミノ基又はＮ−モルホリノ基を表わす〕の燐酸アミドも
しくはホスホン酸アミドと一諸に試験片に施す場合に、
意外にも簡単に製造できかつ安定な試験片が得られるこ
とが判明した。

アルコキシ基もしくはアルキル基のＲ１としては、アル
キル連鎖が約１０個までの炭素原子を有する基が優れて
いる。

本発明方法では、ヒドロペルオキシドを■式のアミドと
一諸にかつ場合により緩衝液及び湿潤剤と共に溶剤、殊
に水／アルコール混合物中で溶解する。

この溶液で濾紙を含浸しかつ乾燥する。これには揮発性
溶剤を適用する場合には僅かに数分間を要するに過ぎな
い。

従って、この方法によってＰ紙を困難なく連続的に含浸
しかつ乾燥することができる。

便中のペルオキシダーゼ作用物質の検出には、本発明に
よる安定剤を含有する試薬をドイツ国特許公開公報第１
５９８１５３号により耐水性膜中に装入加工することも
可能である。

これは、着色反応を測定するために試験片の表面を簡単
にふき取ることによって清浄しうるという利点を有する
。

従って、本発明の目的は、ヒドロペルオキシド並びに少
なくとも１つの色原体で含浸されている担体から成る、
体液中のペルオキシダーゼ作用物質を検出するための試
験片であり、これは担体が安定剤として一般式■の化合
物を含有することを特徴とする。

本発明の他の目的は、ヒドロペルオキシド並びに少なく
とも１つの色原体で含浸されている試験片を安定化する
ために■式の化合物を使用することである。

■式の化合物は大部分が知られておりかつ公知の簡単な
方法で製造することができる。

一般式■について挙げられている化合物群類のうちの若
干の代表的なものは室温で液状で存在し、若干のものは
水に難溶である。

固体のかつ水に易溶の化合物■は試験片の安定化に優れ
ていることは明らかである。

それというのもこれらは特に有用な市販製品に関するか
らである。

例えばヘキサメチル燐酸トリアミドの場合のように化合
物■が液状である場合、試験片は油性の不十分な外観を
有し、非水溶性の化合物■は不所望な疎水化に案内しう
る。

■式に包含される化合物は次の文献に記載されている公
知方法により製造することができる。

“ケミカル・アブストラクツ（Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．
）”，４８，９１０９ｃ（１９５４）によれば、ホスホ
リルモルホリン〔ＣＨ２・ＣＨ２・Ｏ・ＣＨ２・ＣＨ２
・Ｎ〕３Ｐ：Ｏは、モルホリン２６１ｇをＰＯＣｌ３
１５３ｇに激しく撹拌しながら生成する。

その後、温度を生成物の融点に高め、ＥｔＯＨから再結
晶させるとホスホリルモルホリンが融点１６４〜１６５
℃の針状物として得られる。

“ケミカル・アブストラクツ”，６４， ９７１７ｈ（１９６６）により、ＥｔＯＨ５ｍｌ中のエ
チルホスホロジモルホリダイト２．４８ｇの混合物をＥ
ｔＯＨ１５ｍｌ中のブロムシアノアセタミド１．６３ｇ
に−７０℃で加え、溶液を１晩室温に放置し、真空中で
ＥｔＯＨを除去し、ＣＨＣｌ３を添加し、不溶のシアノ
アセタミドを分別し、かつ濃縮した分別残渣の分別によ
り沸点０．００８１２９〜１３１℃のエチルホスホロジ
モルホリデート１．２０ｇが得られる。

“ケミカル・アブストラクツ”，５３， ４１３２ｂ〜ｃ（１９５９）により、ガス状Ｍｅ２ＮＨ
９３．６部を反応器中のＰＯＣｌ３１０３部及びトリク
ロルエチレン４６５部の表面下に５５〜６５℃で撹拌下
に通し、次にガス状ＮＨ３３７．４部を混合物中に５５
〜６５℃で通し、混合物をこの温度に０．５時間保持し
、２０〜３０℃に冷却し、副生成物ＮＨ４Ｃｌを濾別し
かつトリクロルエチレン３９６部で洗いかつ除去し、合
した濾液と洗浄物をポット温度１２０℃に加熱して溶剤
を除去しかつポット温度１４０〜１５０℃で蒸留させる
とヘキサメチルホスホルアミド８２％が得られる。

同様にして、Ｐｈテトラメチルホスホノジアミド、融点
８２〜８４℃が得られる。

“ケミカル・アブストラクツ”５４，５１７２ｂ〜ｃ（
１９６０）により、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
フエニルホスホニツクジアミドは、Ｍｅ２ＮＨガスを無
水Ｅｔ２Ｏ２５０ｍｌ中のフエニルホスホニルジクロリ
ド１９．５ｇを通して吹込み、固体ＣＯ２／アセトンで
冷却し、溶液が塩基性になった時に、（Ｍｅ）２ＮＨ・
ＨＣｌを濾別し、Ｅｔ２Ｏの蒸発の際に結晶として得ら
れる、融点７８〜８０℃（ヘキサン／Ｃ６Ｈ６混合物か
ら）。

またＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルクロルメチルホ
スホニツクジアミドはＭｅ２ＮＨガスを無水Ｅｔ２Ｏ１
５０ｍｌ中のクロルメチルホスホニルジクロリド１６．
８ｇを通して平行して冷却しながら吹込み、Ｍｅ２ＮＨ
・ＨＣｌの濾過及びＥｔ２Ｏの蒸発後に油状物１５．６
ｇのものとして得られ、これは真空蒸留により沸点２．
５１１０〜１１２℃、融点３５℃である。

本発明による試験片の安定性は驚異的である。

それというのも過酸化水素の安定剤として作用すること
が知られている物質、例えば尿素、マンニット、アセト
アニリド等はこの場合には全く安定化作用を示さないか
らである。

■式の化合物は、ヒドロペルオキシ基１個当り少なくと
も１モルの割合で使用する。

２〜４倍の過剰量が有効であった。

Ｒ１基、Ｒ２基及びＲ３基の１個又は数個が芳香族環を
含有する化合物Ｉはヒドロペルオキシドの反応性を若干
低下させるので、それらを特に反応性のヒドロペルオキ
シドに対する安定剤として選択することができる。

、例えばｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドのよ
うにヒドロペルオキシドが余り揮発性でない場合には、
それらとしては常用のものが該当する。

殊に、固体の化合物２，５−ジメチルヘキサン−２，５
−ジヒドロペルオキシド、テトラリンヒドロペルオキシ
ド及びジイソプロピルベンゼンジヒドロペルオキシドが
有効であったが、ジイソプロピルベンゼン−、クモール
−、ｐ−メンタン−及びピナンヒドロペルオキシドのよ
うな液状のものも有用である。

ヒドロペルオキシドは含浸液１００ｍｌ当り０．５〜５
ｇ、殊に１〜３ｇの量で使用する。

本発明による試験紙の他の成分は色原体、緩衝液、湿潤
剤、粘稠剤及び場合により活性剤である。

色原体としては、深い色の化合物に容易に酸化されるす
べてのものが該当する。

殊にベンジジン及びその同族体、特にｏ−トルイジンで
ある。

更に、ドイツ国特許第１６４８８４０号によるヘテロ環
式アジンが極めて有効であった。

指示薬は、含浸液１００ｍｌ当り０．０５〜５ｇ、殊に
０．２〜１．０ｇの量で使用する。

緩衝液としては、例えばクエン酸塩、燐酸塩、フタル酸
塩又はコハク酸塩の緩衝液が該当し、その際にｐＨ値及
び容量は、試験片を体液中に浸漬した後でこの試験片上
でｐＨ値が４〜７、殊に５〜６であるように選択しなけ
ればならない。

処方にメタ燐酸ナトリウム又はエチレンジアミン−テト
ラ酢酸のような少量の（１００ｍｌ当り０．０５〜０．
５ｇ）錯形成体を供給することもまた有利であり、これ
によって痕跡量の金属により起りうる偽陽性反応が回避
される。

この試験紙が比較的多量の水溶性物質に基いている場合
にはそれらが流出する傾向がありうるので、処方にメチ
ルセルロース及び特にゼラチンのような粘稠剤を１００
ｍｌ当り約０．５〜５ｇの量で添加することは実用的で
ある。

反応の敏感性を高めるために、所謂活性剤を添加するこ
とができる。

これは例えばキノリン又はドイツ国特許出願公告第１２
４２９０５号公報による誘導体である。

湿潤剤としては、長鎖状の有機サルフエート又はスルホ
ネート、例えばドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム又はラウリル硫
酸ナトリウムを使用すると有利であり、これらは周知の
ように酸化せるｏ−トルイジンのようなラジカルカチオ
ンを安定化する。

本発明による試験紙を製造するには、例えば濾紙、セル
ロース又は人造繊維フリースのような吸引性担体を易揮
発性溶剤中の試薬の溶液で含没する。

これは２つの別工程で行なうと有利である。初めに、一
般式■のアミド並びにヒドロペルオキシド、湿潤剤、緩
衝液及び場合により粘稠剤を含有する溶液で含浸する。

その後で指示薬及び場合により活性剤の溶液で含浸する
。

疎水性モノヒドロペルオキシドを使用する場合には、緩
衝液とヒドロペルオキシドを別個の含浸工程で担体に施
すのが適当である。

耐水性膜を製造するには、全試薬を■式の安定剤と一諸
に、例えばポリビニルエステル又はポリアミドのような
膜形成物質の溶液又は分散液中に装入しかつ均質に混合
する。

次いでこの混合物をプラスチック担体上に薄層で塗布し
かつ乾燥する。

本発明による試験片を乾燥後、条片に切断しかつ殊にプ
ラスチックシ一トを微細な網状物の間にドイツ国特許第
２１１８４５５号明細書により封入する。

本発明による試験紙は、最低１年の貯蔵性を有している
。

後記の例１及び２に記載した、活性剤としてキニンを含
有する試験紙は検出感度５０〜１００（赤血球数／ｍｍ
３）を有し、本発明による安定剤を含まない試験紙は例
１に記載したように数日後には帯緑色乃至緑褐色を呈し
、これは赤血球数２００／ｍｍ３以上で初めて確実な判
定を可能にしかつ長期間貯蔵する際に該試験紙は試験に
不適当となる。

次に本発明を実施例につき詳説する。

例１ 次の成分から溶液を製造する。

スルホコハク酸ジオクチルナトリウ ２００ｇム エチレンジアミンテトラ酢酸、ジナト １０ｇリウム塩 ２，５−ジメチルヘキサン−２．５ １６０ｇジヒド
ロペルオキシド 燐酸トリモルホリド １２７０ｇクエン酸
塩緩衝液（１．２モル， ３．５ｌｐＨ５．２
５） エタノール ３．０ｌ蒸留水
全量１０．０ｌ溶液を、転向
ロールを備えている槽中に装入する。

その後で帯状濾紙を約２ｍ／分の速度で連続的に溶液中
を通しかつ長さ１５ｍの乾燥溝中４０℃の流動空気で乾
燥する。

そのように前処理した紙を、活性剤としてキニン０．２
％を含有するトルオール中のｏ−トルイジンの０．３％
−溶液で同様にして後含浸する。

その結果、一般的な貯蔵で１年後でも変色しない真白な
試験紙が得られる。

前記の処方で燐酸トリモルホリドを除くと、既に第２含
浸工程の間に弱い緑色化が起り、数日後には濃い緑褐色
に転ずる。

色原体及び活性剤をそれぞれそのままで、燐酸トリモル
ホリドの代りに等モル量の次のアミドを含む試験紙は、
検出感度及び呈色において、更に安定化作用においても
同一の性質を示す：燐酸−（ジメチルアミド）−ジモル
ホリド燐酸−エチルエステル−ジモルホリド エタンホスタン酸−ジモルホリド 例２ 濾紙を次の溶液■で含浸しかつ８０℃で約１５分間乾燥
箱中で乾燥する。

溶液■ ジイソプロピルベンゼンヒドロペルオ ３．５ｇキシド
（５０％） ベンゼンホスホン酸ジモルホリド ６．１ｇドデシ
ルベンゼンスルホン酸、ナトリ ２．０ｇウム塩 メタノール 全量１００．０ｇその後
、次の溶液で後含浸しかつ４０℃で乾燥する。

溶液■ １．２モル−クエン酸塩緩衝液 ３５．０ｍｌｐ
Ｈ５．２５ メタ燐酸ナトリウム ０．２ｇ蒸留水
全量１００．０ｍｌ溶液■ ビス〔Ｎ−エチル−キノロン−２〕− ０．１ｇアジ
ン キニン ０．２ｇトルエ
ン 全量１００．０ｍｌそのよう
にして得られた試験紙は著しい安定性により優れており
かつ変色しない。

例２の色原体により淡黄色の試験紙が得られ、これはペ
ルオキシド及びペルオキシダーゼにより紫色を呈色する
。

安定剤を用いると、その試験紙は一年後にも検出感度５
０（赤血球数／ｍｍ３）を有する。

この調製から安定剤を除いた場合には、帯褐色試験紙が
得られ、これは貯蔵すると数日間で褐紫色に変色してし
まうので、僅少量のペルオキシダーゼ作用物質をもはや
検出することはできなくなる。

この場合の試験片の呈色に関する明瞭な差異は赤血球２
００／ｍｍ３以上との反応で初めて可能である。

色原体及び活性剤が各々そのままで、ベンゼンホスホン
酸ジモルホリドの代りに次のアミドを等モル量で含有す
る試験紙は、検出感度及び呈色において、更に安定化作
用においても同じ性質を示す： ベンゼンホスホン酸−ビス−（ジメチルアミド）燐酸−
フエニルエステル−ジモルホリド 例３ 濾紙を次の溶液で含浸させかつ８０℃で約１５分間乾燥
箱中で乾燥させる： クエン酸塩緩衝液（ｐＨ５．２５， ３０ｍｌ１
モル） エチレンジアミンテトラ酢酸 ０．５ｇ燐酸ト
リモルホリド １５．２５ｇ水
１０ｍｌスルホコハク酸ジ
オクチルナトリウム ０．５ｇ３，３’，５，５’−テ
トラメチルベン ０．２８ｇジジン フエナントリジン ０．２５ｇクモー
ルヒドロペルオキシド（約 １．２５ｇ８０％） メタノール ３０ｍｌ水／メ
タノール混合液（４０： 全量１００ｍｌ１５） 白色の試験紙が得られ、これは一年間の貯蔵後にも変色
せず、赤血球約５〜１０／ｍｍ３で呈色する。

燐酸トリモルホリドを含まない相応する試験紙は既に１
週間後には帯黄色に変色し、赤血球約２５／ｍｍ３では
っきり呈色する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ヒドロペルオキシド並びに色原体で含浸されている
   担体から成る、体液中のペルオキシダーゼ作用物質を検
   出するための試験片において、担体が安定剤として一般
   式■： 〔式中Ｒ１はジメチルアミノ基、アルコキシ基、フエノ
   キシ基、アルキル基又はフエニル基もしくはＮ−モルホ
   リノ基を表わしかつＲ２及びＲ３は同じものを表わし、
   ジメチルアミノ基又はＮ−モルホリノ基を表わす〕の化
   合物を含有することを特徴とする体液中のペルオキシダ
   ーゼ作用物質を検出するための試験片。