JPS5836395A - 多糖類の製造方法 - Google Patents
多糖類の製造方法Info
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- JPS5836395A JPS5836395A JP13261581A JP13261581A JPS5836395A JP S5836395 A JPS5836395 A JP S5836395A JP 13261581 A JP13261581 A JP 13261581A JP 13261581 A JP13261581 A JP 13261581A JP S5836395 A JPS5836395 A JP S5836395A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、液体培養によって得られるマイタケ属に属
する菌株の菌糸体と、糖類の溶液を接触させ、溶液中に
多糖類を生成せしめる多糖類の新規な製造方法に関する
ものである。
する菌株の菌糸体と、糖類の溶液を接触させ、溶液中に
多糖類を生成せしめる多糖類の新規な製造方法に関する
ものである。
マイタケは担子菌類に属するきのこで、従来より食用に
供される外、薬用効果も知られ、例えば立社＝士ツ翠→
ヨ日巳ピ駄チョレイ等は利尿効果を有し、シロマイタケ
は抗菌効果を有するので、漢方薬として使用されて来た
。
供される外、薬用効果も知られ、例えば立社＝士ツ翠→
ヨ日巳ピ駄チョレイ等は利尿効果を有し、シロマイタケ
は抗菌効果を有するので、漢方薬として使用されて来た
。
近年、この種のきのこの薬用効果が更に広く知られるに
及び、その用途も拡大し、天然のきのこに頼ることなく
人工的に栽培せんとする研究も広く行なわれている。培
養は、子実体に限られることなく菌糸体を培養し、有効
成分を得んとするもので、例えば特公昭５２−４４２８
６号公報には培養した菌糸体から制がん効果のある多糖
体を抽出することが記載されている。しかしながら、従
来の多糖体を得る方法は、子実体、菌子体から抽出する
か、或は液体培養した培地から分離するもので、多くの
不純物を含み精製に多くの手間と熟練を必要とするもの
である。
及び、その用途も拡大し、天然のきのこに頼ることなく
人工的に栽培せんとする研究も広く行なわれている。培
養は、子実体に限られることなく菌糸体を培養し、有効
成分を得んとするもので、例えば特公昭５２−４４２８
６号公報には培養した菌糸体から制がん効果のある多糖
体を抽出することが記載されている。しかしながら、従
来の多糖体を得る方法は、子実体、菌子体から抽出する
か、或は液体培養した培地から分離するもので、多くの
不純物を含み精製に多くの手間と熟練を必要とするもの
である。
この発明者らは、長年まいたけの研究を行い、まいたけ
より簡単にして安価に多糖類物質（以下単に多糖類とい
う）を得んと研究を進めた結果、まいたけの菌株のみな
らず、しいたけ、きくらげ、ひらたけ等多くのきのこ類
の菌糸体に低分子糖類を多糖類に転換する能力のあるこ
とを知り、きのこ類を液体培養して菌糸体を集め、充分
洗滌した後、溶液中でグルコース等の低分子糖類と接触
させたところ、多量の多糖類が生成することを発見し、
マイタケ属に属する菌株を液体培養し、得られた菌子体
を酸性領域下で糖類の溶液と接触させ該溶液中に多糖類
を蓄普せしめてこれを分離採取することにより解決した
。
より簡単にして安価に多糖類物質（以下単に多糖類とい
う）を得んと研究を進めた結果、まいたけの菌株のみな
らず、しいたけ、きくらげ、ひらたけ等多くのきのこ類
の菌糸体に低分子糖類を多糖類に転換する能力のあるこ
とを知り、きのこ類を液体培養して菌糸体を集め、充分
洗滌した後、溶液中でグルコース等の低分子糖類と接触
させたところ、多量の多糖類が生成することを発見し、
マイタケ属に属する菌株を液体培養し、得られた菌子体
を酸性領域下で糖類の溶液と接触させ該溶液中に多糖類
を蓄普せしめてこれを分離採取することにより解決した
。
本発明に使用するマイタケ属に属する菌株としては、一
般にシロマイタケ、クロマイタケ、≠嗟゛ °
チョレイマイタケ等として知られている天然のきのこ
よシ分離した菌株、或は公知の保存菌株、例えばグリフ
ォラ・フロンドッサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏ
ｓａ ） ＩＦＯ４ｇ １１ 。
般にシロマイタケ、クロマイタケ、≠嗟゛ °
チョレイマイタケ等として知られている天然のきのこ
よシ分離した菌株、或は公知の保存菌株、例えばグリフ
ォラ・フロンドッサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏ
ｓａ ） ＩＦＯ４ｇ １１ 。
グリフォラ−７ｏ７ドツサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎ
ｄｏｓａ）ＩＦＯ７０４０，グリフォラ・フロンドッサ
・パル嬉トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄ
ｏｓａ ｖａｒｔｏｋａｃｈｊａｎａ ） （微工研
菌寄第４９７９号、暫開昭５５−１５０８９２号参照）
をあげることができる。使用に際し、これらの菌株は予
め斜面培地で継代培養し、純化しておき、菌糸体の製造
に供する。
ｄｏｓａ）ＩＦＯ７０４０，グリフォラ・フロンドッサ
・パル嬉トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄ
ｏｓａ ｖａｒｔｏｋａｃｈｊａｎａ ） （微工研
菌寄第４９７９号、暫開昭５５−１５０８９２号参照）
をあげることができる。使用に際し、これらの菌株は予
め斜面培地で継代培養し、純化しておき、菌糸体の製造
に供する。
糖液と接触反応を行なわす菌糸体の製造は、富力によシ
前記菌株を天然培地又は合成培地に接種し、好気条件下
で培養を行うが、このときの培地としては、グルコース
、糖蜜等を糖質源とし、これにコーンステイブリカー、
肉エキス、酵母エキス等を添加したものが好ましい。培
養後は可及的に冷却し、遠心分離又はｆ過して菌糸体を
集める。
前記菌株を天然培地又は合成培地に接種し、好気条件下
で培養を行うが、このときの培地としては、グルコース
、糖蜜等を糖質源とし、これにコーンステイブリカー、
肉エキス、酵母エキス等を添加したものが好ましい。培
養後は可及的に冷却し、遠心分離又はｆ過して菌糸体を
集める。
この菌糸体は直接糖質溶液に添加してもよいが、好まし
くは可及的純粋な無菌水で洗滌した後、可及的純粋な無
菌水に懸濁し、添加するのが良い。
くは可及的純粋な無菌水で洗滌した後、可及的純粋な無
菌水に懸濁し、添加するのが良い。
又、一時に大量培養し、菌糸体を凍結保存しておき、必
要に応じて解凍使用しても良いものである。
要に応じて解凍使用しても良いものである。
上記菌糸体と接触さす糖質としては、アラビノース、キ
シロース、フラクトース、グルコース、マンノース、ガ
ラクトース、マルトース、シュクロース、メリビオース
、ラクトース、ラフィノース、イノシトール、マニトー
ルの如き低分子糖類、デンプン、デキストリン、アラビ
アゴムの如き高分子糖類及びこれらの糖類を含む糖蜜、
クエン酸等の有機酸、或はグリセリン、ｄ−メチル−’
Ｄ−グリコシド等が使用でき、グルコース、フラクトー
ス、マンノース、マルトース、テキストリン、でん粉あ
るいはその加水分解物が常用される。
シロース、フラクトース、グルコース、マンノース、ガ
ラクトース、マルトース、シュクロース、メリビオース
、ラクトース、ラフィノース、イノシトール、マニトー
ルの如き低分子糖類、デンプン、デキストリン、アラビ
アゴムの如き高分子糖類及びこれらの糖類を含む糖蜜、
クエン酸等の有機酸、或はグリセリン、ｄ−メチル−’
Ｄ−グリコシド等が使用でき、グルコース、フラクトー
ス、マンノース、マルトース、テキストリン、でん粉あ
るいはその加水分解物が常用される。
本発明では、上記糖質の溶液に前記まいたけ菌糸体の懸
濁液を混合し、酸性領域下で攪拌しながら反応を行なわ
すものであるが、このとき反応時の糖濃度は１５％（Ｗ
／ｖ）以下に押えることが好ましい。今これを実験例に
より説明すると、実験はグルコースを使用し、クエン酸
を加えて酸性となし、これにグリフォラ・フロンドツサ
ＩＦＯ４９１１、グリフォラ・フロンドツサＩＦＯ７０
４０゜グリフォラ・フロンドツサ・パル・トカチアーナ
ＦＥＲＭ−Ｐ１Ａ４９７９の菌糸体懸濁液を加え、最終
糖濃度が２〜２０ ％ ｗ／ＶとなるようにＬＡ２５℃
で６日間振盪反応させたものである。
濁液を混合し、酸性領域下で攪拌しながら反応を行なわ
すものであるが、このとき反応時の糖濃度は１５％（Ｗ
／ｖ）以下に押えることが好ましい。今これを実験例に
より説明すると、実験はグルコースを使用し、クエン酸
を加えて酸性となし、これにグリフォラ・フロンドツサ
ＩＦＯ４９１１、グリフォラ・フロンドツサＩＦＯ７０
４０゜グリフォラ・フロンドツサ・パル・トカチアーナ
ＦＥＲＭ−Ｐ１Ａ４９７９の菌糸体懸濁液を加え、最終
糖濃度が２〜２０ ％ ｗ／ＶとなるようにＬＡ２５℃
で６日間振盪反応させたものである。
第 １ 表
但し、＋１）菌糸懸濁液添加後１００ ｍｌ中濃度来２
） １００ ｍｌ中乾物量ｍｆ（以下同じ）◎ Ｐ
Ｈ調整はクエン酸で行い、初発ＰＨはＧ、ｆｒｏｎｄｏ
ｓａ ＩＦＯ４９１１＋ＩＦ０７０４０−４．０
Ｇ、ｆｒｏｎｄｏｓａ ｖａｒｔｏｋａｃｈｉａｎａ
−Ａ４９７９・＝３．５ である。
） １００ ｍｌ中乾物量ｍｆ（以下同じ）◎ Ｐ
Ｈ調整はクエン酸で行い、初発ＰＨはＧ、ｆｒｏｎｄｏ
ｓａ ＩＦＯ４９１１＋ＩＦ０７０４０−４．０
Ｇ、ｆｒｏｎｄｏｓａ ｖａｒｔｏｋａｃｈｉａｎａ
−Ａ４９７９・＝３．５ である。
第１表よシ判明する如く、何れの菌株においても糖濃度
がほぜ５％（ｗ／Ｖ）において、最高蓄積量を示し、そ
れより糖濃度を高くしても多糖類の蓄積は少ない。一方
、原糖糖質に対する多糖類収率は糖濃度が減少するにつ
れ向上するが、回収の経済性を考慮し、２〜１０ ％
（Ｗ／ｖ）が適当である。然しこの濃度範囲は、使用す
る糖質の種類によシ糖圧迫の程度が異なるので、前以て
試験しておくのがよい。
がほぜ５％（ｗ／Ｖ）において、最高蓄積量を示し、そ
れより糖濃度を高くしても多糖類の蓄積は少ない。一方
、原糖糖質に対する多糖類収率は糖濃度が減少するにつ
れ向上するが、回収の経済性を考慮し、２〜１０ ％
（Ｗ／ｖ）が適当である。然しこの濃度範囲は、使用す
る糖質の種類によシ糖圧迫の程度が異なるので、前以て
試験しておくのがよい。
又、前記した本発明の酸性条件下とは、ＰＨ３〜４５が
好ましい。今、これを実験例により説明すると、グルコ
ースの最ｇ濃度が５％（ｗ／ｖ）になるよう調製し、こ
れにクエン酸を加えて初発ＰＨを２．５〜５．０となし
、これにまいたけの菌糸体懸濁液を加えて２５℃で６日
間反応させた。このときの結果を第２表に示す。
好ましい。今、これを実験例により説明すると、グルコ
ースの最ｇ濃度が５％（ｗ／ｖ）になるよう調製し、こ
れにクエン酸を加えて初発ＰＨを２．５〜５．０となし
、これにまいたけの菌糸体懸濁液を加えて２５℃で６日
間反応させた。このときの結果を第２表に示す。
第 ２ 表
但し、 、Ｐｆ（調整はクエン酸、にょる。１第２表よ
シ判明するように、ＰＨが３，５〜４ｏを中心にその前
後においては多糖類の生成は著しく減少するものである
。初発ＰＨの調整は、通常クエン酸、酒石酸、乳酸など
の緩衝性のある有機酸が主として使用され、鉱酸、各種
緩衝液の使用も可能である。又、第２表より判明するよ
うに反応によりＰＨは変動するので、適正ＰＨに保持す
るため酸又はアルカリを添加し、反応中のＰＨの補正を
行うことも必要である。
シ判明するように、ＰＨが３，５〜４ｏを中心にその前
後においては多糖類の生成は著しく減少するものである
。初発ＰＨの調整は、通常クエン酸、酒石酸、乳酸など
の緩衝性のある有機酸が主として使用され、鉱酸、各種
緩衝液の使用も可能である。又、第２表より判明するよ
うに反応によりＰＨは変動するので、適正ＰＨに保持す
るため酸又はアルカリを添加し、反応中のＰＨの補正を
行うことも必要である。
接触反応は好気下で行なわれ、通常２０〜３００Ｃの温
度で２〜８日間行うが、反応の進行により多量の多糖類
が蓄積するに到る。反応完了後は菌糸体を分離し、液部
はそのま１或はこれを濃縮し、これにメタノール、エタ
ノール、アセトン、酢酸エチル、エーテル等の有機溶媒
を加えると多量の多糖類が沈澱するに到る。この沈澱物
は、相当純粋な形で得られるので、単にエタノール溶液
で洗滌するだけで高純度のものが得られる。これを更に
適当な溶媒で溶解し、セチルピリジウム・クロライド、
アクリノールなどの沈澱剤で処理し、多糖類を精製する
ことも可能である。得られた多糖類は凍結乾燥すると白
色の綿状あるいは繊維状となる。
度で２〜８日間行うが、反応の進行により多量の多糖類
が蓄積するに到る。反応完了後は菌糸体を分離し、液部
はそのま１或はこれを濃縮し、これにメタノール、エタ
ノール、アセトン、酢酸エチル、エーテル等の有機溶媒
を加えると多量の多糖類が沈澱するに到る。この沈澱物
は、相当純粋な形で得られるので、単にエタノール溶液
で洗滌するだけで高純度のものが得られる。これを更に
適当な溶媒で溶解し、セチルピリジウム・クロライド、
アクリノールなどの沈澱剤で処理し、多糖類を精製する
ことも可能である。得られた多糖類は凍結乾燥すると白
色の綿状あるいは繊維状となる。
一方、前記分離した菌糸体は廃棄することなく再度繰返
し使用することが可能で、前記した糖質浴液に添加する
と再び溶液中に犬歓の多糖類を蓄積するに到る。例えば
、前記第１表のＧ、 ｆ ｒｏ’ｎｄｏｓａｖａｒ
ｔｏｋａｃｈｉａｎａの５％（Ｗ／ｖ）糖区分よシ分離
した菌糸体を脱塩水で十分洗滌した後これを脱塩水に懸
濁せしめ、前記同様５．４（Ｗ／ｖ）のグルコース溶液
と接触させ、２５℃で６日間振盪した後、繭糸体をＦ別
し、液部にエチルアルコールを加えると再び沈澱が生成
する。
し使用することが可能で、前記した糖質浴液に添加する
と再び溶液中に犬歓の多糖類を蓄積するに到る。例えば
、前記第１表のＧ、 ｆ ｒｏ’ｎｄｏｓａｖａｒ
ｔｏｋａｃｈｉａｎａの５％（Ｗ／ｖ）糖区分よシ分離
した菌糸体を脱塩水で十分洗滌した後これを脱塩水に懸
濁せしめ、前記同様５．４（Ｗ／ｖ）のグルコース溶液
と接触させ、２５℃で６日間振盪した後、繭糸体をＦ別
し、液部にエチルアルコールを加えると再び沈澱が生成
する。
尚上記実験では凍結保存した菌糸体を使用しだが、凍結
させない菌糸体を使用すると、糖質との反応時に多少糖
圧迫に対する抵抗が高くなシ、より高濃の糖液を使用で
きる外は凍結したものと同じ結果が得られる。
させない菌糸体を使用すると、糖質との反応時に多少糖
圧迫に対する抵抗が高くなシ、より高濃の糖液を使用で
きる外は凍結したものと同じ結果が得られる。
次に本発明の実施例１で得だ多糖類の特性を示す。
（１）呈色反応
モーリッシュ反応、アンスロン反応、フェノール硫酸反
応 ・・・・・・陽性 ヨード反応、ニンヒドリン反応、ビューレット反応
・・・・・・陰性 （２）酸性、中性、塩基性の区別 中性（水溶液のＰＨ６〜８） （３）溶解性 水に溶解、 メタノール、エタノール、アセトンに不溶（４）外観 白色の綿状あるいは繊維状 （５）粘度 ０１チ水溶液 １７５Ｃ，ｐ （東京計器製作新製Ｂ型粘度計を一使用し、２０℃、１
２ｒｐｍで測定） （６）成分分析値 全 糖 分 ９９．８チ 全 窒 素 ０２％ 灰 分 １．３チ但し、全糖分
はフェノール硫酸法により定量し、グルコースとして計
算した。
応 ・・・・・・陽性 ヨード反応、ニンヒドリン反応、ビューレット反応
・・・・・・陰性 （２）酸性、中性、塩基性の区別 中性（水溶液のＰＨ６〜８） （３）溶解性 水に溶解、 メタノール、エタノール、アセトンに不溶（４）外観 白色の綿状あるいは繊維状 （５）粘度 ０１チ水溶液 １７５Ｃ，ｐ （東京計器製作新製Ｂ型粘度計を一使用し、２０℃、１
２ｒｐｍで測定） （６）成分分析値 全 糖 分 ９９．８チ 全 窒 素 ０２％ 灰 分 １．３チ但し、全糖分
はフェノール硫酸法により定量し、グルコースとして計
算した。
（力 構成糖
ｌ規定硫酸で１００’Ｃ，８時間加水分解後分解物を液
体クロマトグラフィーにかけて分析するとグルコースの
みが検出される。
体クロマトグラフィーにかけて分析するとグルコースの
みが検出される。
（８）赤外線吸収スペクトル
図面の通シである。
かように、この発明で得る多糖類は水可溶性で、水溶液
は粘性を帯びグルコースを構成単位として多重結合して
構成されていると推察される。
は粘性を帯びグルコースを構成単位として多重結合して
構成されていると推察される。
以上のべた如くこの発明は液体培養によって得たマイタ
ケ菌糸体を培養物から分離し、これをそのま・か或は凍
結保存したものの形態でグルコースのような糖質を含む
溶液に加え、ＰＨを３〜４．５の範囲とし、温度２０〜
３０’Ｃで２〜８日間振盪あるいは通気攪拌して多糖類
を生成せしめ、多糖類を収得するには菌糸体を沢別した
残液にアルコール等の有機溶媒を加え沈澱物を生せしめ
、同溶媒で十分洗滌した後、沈澱物を熱水溶解して凍結
乾燥する簡単な手段でよいもので、複雑な手法を必要と
しない。又、高純度の製品を得ることができ、更に、こ
のマイタケ菌糸体は凍結保存可能で取扱い、使用が便利
であると共に繰返し使用できるとか、低いＰＨ条件で反
応を行なわすから雑菌の汚染がほとんどない等の理由に
ょシ多糖類の工業的な量産をより容易とするものである
。
ケ菌糸体を培養物から分離し、これをそのま・か或は凍
結保存したものの形態でグルコースのような糖質を含む
溶液に加え、ＰＨを３〜４．５の範囲とし、温度２０〜
３０’Ｃで２〜８日間振盪あるいは通気攪拌して多糖類
を生成せしめ、多糖類を収得するには菌糸体を沢別した
残液にアルコール等の有機溶媒を加え沈澱物を生せしめ
、同溶媒で十分洗滌した後、沈澱物を熱水溶解して凍結
乾燥する簡単な手段でよいもので、複雑な手法を必要と
しない。又、高純度の製品を得ることができ、更に、こ
のマイタケ菌糸体は凍結保存可能で取扱い、使用が便利
であると共に繰返し使用できるとか、低いＰＨ条件で反
応を行なわすから雑菌の汚染がほとんどない等の理由に
ょシ多糖類の工業的な量産をより容易とするものである
。
この発明によって得る多糖類は、構成単位をグルコース
とするもので水溶液は粘性を呈するところから、食品添
加物としてはゲル化食品の製造やコーテング用として、
農業用としては各棟農薬の懸濁剤として、或はまた医薬
用途など各方面の用途が期待されるところである。
とするもので水溶液は粘性を呈するところから、食品添
加物としてはゲル化食品の製造やコーテング用として、
農業用としては各棟農薬の懸濁剤として、或はまた医薬
用途など各方面の用途が期待されるところである。
以下実施例によりこの発明の詳細な説明する。
実施例１
米糠エキス、ノコクズエキス添加マルトエキス寒天斜面
培地に、予め２週間培養したマイタケ菌株グリフォラ・
フロンドッサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）
ＩＦＯ４９１１を甘蔗糖蜜２ ％ （ｗ／ｖ） （糖基
準）、ポリペプトン０４％（ｗ／ｖ）、Ｐ ）（５，５
の培地５０ｍ１の入った２００ｍｇ容三角フラスコ（オ
ートクレーブ滅菌済）に寒天と共に２白金耳接種し、２
５℃３週間定期的に振盪し、菌体をよく分散させなから
静置培養した。この培養物をグルコース２ ％ （Ｗ／
ｖ）、甘蔗糖蜜２ ％ （Ｗ／ｖ） （糖基準）、ポリ
ペブト７０．６％（Ｗ／ｖ）、Ｐｌ（４，５１１７）培
地１００ｍ１の入った！５０Ｑｍｌ容振盪フラスコ（滅
困済）２本に５ｍｌ宛接種し、２５℃１４日間振盪培養
した。
培地に、予め２週間培養したマイタケ菌株グリフォラ・
フロンドッサ（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）
ＩＦＯ４９１１を甘蔗糖蜜２ ％ （ｗ／ｖ） （糖基
準）、ポリペプトン０４％（ｗ／ｖ）、Ｐ ）（５，５
の培地５０ｍ１の入った２００ｍｇ容三角フラスコ（オ
ートクレーブ滅菌済）に寒天と共に２白金耳接種し、２
５℃３週間定期的に振盪し、菌体をよく分散させなから
静置培養した。この培養物をグルコース２ ％ （Ｗ／
ｖ）、甘蔗糖蜜２ ％ （Ｗ／ｖ） （糖基準）、ポリ
ペブト７０．６％（Ｗ／ｖ）、Ｐｌ（４，５１１７）培
地１００ｍ１の入った！５０Ｑｍｌ容振盪フラスコ（滅
困済）２本に５ｍｌ宛接種し、２５℃１４日間振盪培養
した。
培養物を脱塩水で約２倍に稀釈し、遠心分離（３ｏｏｏ
ｒｐｍ）で菌糸体を分離し、脱塩水で洗滌ｆｆｌｌｏＯ
ｍｌの脱塩水に懸濁して凍結保存した。２８日保存後、
約３０℃の温水で解凍し、菌糸体を十分に分散させて遠
心分離し、分離した菌糸体に脱塩水を加え、全容が２０
０ｍ１の菌糸体が一様に分散した懸濁液を調製した。こ
の懸濁液の２０ｍ１宛（菌糸体乾物量で約２６０ ｍｙ
含む）をデキストリン６、２５ ％ （Ｗ／ｖ ）、ク
エン酸０．６２５％（Ｗ／ｖ ）からなるＰＨ４の糖質
溶液Ｂ□ｍｌの入った５００ｍ１容振盪フラスコ１０本
に添加し、２５℃で６日間振盪（１２０回／分）してグ
ルコースと菌糸体を接触させた。振盪終了後、遠心分離
で菌糸体を除き、分離液に２／３倍量のエタノールを加
えて多糖類を沈澱させた。沈澱物を４０％エタノール水
浴液で３回洗滌し、熱水に溶解して凍結乾燥し、１．０
６９の多糖類を得た。
ｒｐｍ）で菌糸体を分離し、脱塩水で洗滌ｆｆｌｌｏＯ
ｍｌの脱塩水に懸濁して凍結保存した。２８日保存後、
約３０℃の温水で解凍し、菌糸体を十分に分散させて遠
心分離し、分離した菌糸体に脱塩水を加え、全容が２０
０ｍ１の菌糸体が一様に分散した懸濁液を調製した。こ
の懸濁液の２０ｍ１宛（菌糸体乾物量で約２６０ ｍｙ
含む）をデキストリン６、２５ ％ （Ｗ／ｖ ）、ク
エン酸０．６２５％（Ｗ／ｖ ）からなるＰＨ４の糖質
溶液Ｂ□ｍｌの入った５００ｍ１容振盪フラスコ１０本
に添加し、２５℃で６日間振盪（１２０回／分）してグ
ルコースと菌糸体を接触させた。振盪終了後、遠心分離
で菌糸体を除き、分離液に２／３倍量のエタノールを加
えて多糖類を沈澱させた。沈澱物を４０％エタノール水
浴液で３回洗滌し、熱水に溶解して凍結乾燥し、１．０
６９の多糖類を得た。
実施例２
マイタケ菌株グリフォラ・フロンドッサ（Ｇｒｉｆｏｌ
ａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ） ＩＦＧ ７０４０を、実
施例１と同様に処理して得た菌糸体の懸濁液の２ｏｍｌ
宛（菌糸体乾物量で約２４０ ｍｙを含む）を、マルト
ース６．２５％（Ｗ／ｖ）、クエン酸０６２５％（ｗ／
ｖ）からなるＰＨ４の糖質溶液８ｏ１ｎｌの入った５０
０ｍ１容振盪フラスコ１０本に添加し、以下実施例１と
同様に処理して乾燥多糖類１１ｏ２を得た。
ａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ） ＩＦＧ ７０４０を、実
施例１と同様に処理して得た菌糸体の懸濁液の２ｏｍｌ
宛（菌糸体乾物量で約２４０ ｍｙを含む）を、マルト
ース６．２５％（Ｗ／ｖ）、クエン酸０６２５％（ｗ／
ｖ）からなるＰＨ４の糖質溶液８ｏ１ｎｌの入った５０
０ｍ１容振盪フラスコ１０本に添加し、以下実施例１と
同様に処理して乾燥多糖類１１ｏ２を得た。
実施例３
一？’（タケｉ株グリフォラ・フロンドッサ・）Ｚ ル
・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａ ’ｆｒｏｎｄｏｓ
ａ ｖａｒ ｔ。
・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａ ’ｆｒｏｎｄｏｓ
ａ ｖａｒ ｔ。
ｋａｃｈｉａｎａ ） ＦＥＲＭ−Ｐ−Ｎｏ、４９７９
を実施例１と同様に寒天斜面培地培養、静置培養した培
養物をデキストリフ２ ％ （Ｗ／ｖ） 、甘蔗糖蜜２
チ０６（糖基率）、ポリペプトン０．６ ％ （Ｗ／ｖ
） 、 ＰＨ４，５の培地１００ｍＡ！の入った５００
ｍ１容振盪フラスコ２本に５ｍｅ宛接種して２５℃で１
３日間振盪培養し、培養物を実施例１と同様に処理して
得た菌糸体を凍結保存した。・１８日間保存後、約３０
’Ｃの温水で解凍、マグネチックスタラで菌体をよく分
散させて遠心分離で集菌し、この菌糸体に脱塩水を加え
菌糸体を十分にほぐし一様とした懸濁液、２００１ｎｌ
を調製した。
を実施例１と同様に寒天斜面培地培養、静置培養した培
養物をデキストリフ２ ％ （Ｗ／ｖ） 、甘蔗糖蜜２
チ０６（糖基率）、ポリペプトン０．６ ％ （Ｗ／ｖ
） 、 ＰＨ４，５の培地１００ｍＡ！の入った５００
ｍ１容振盪フラスコ２本に５ｍｅ宛接種して２５℃で１
３日間振盪培養し、培養物を実施例１と同様に処理して
得た菌糸体を凍結保存した。・１８日間保存後、約３０
’Ｃの温水で解凍、マグネチックスタラで菌体をよく分
散させて遠心分離で集菌し、この菌糸体に脱塩水を加え
菌糸体を十分にほぐし一様とした懸濁液、２００１ｎｌ
を調製した。
この懸濁液の２０ｍ１宛（陪糸体乾燥物で約２７０ｍｙ
含む）を初回としてデキストリン６２５％（ｗ／ｖ）酒
石酸０．６２５％（Ｗ／ｖ）からなるＰ Ｈ３，５の糖
質溶液８０ｍ１の入った５００ａｌ容振盪フラスコ１０
本に添加し、以下実施例１と同様に処理して多糖類１．
０４Ｆを得た。次いで、糖質溶液から分離した使用済の
菌糸体を再度脱塩水に懸濁させて２００ｍ１の菌体懸濁
液を調製し、この懸濁液を前記初回逅同様調製した糖質
溶液に同要領で添加、処理した結果、第２回として多糖
類１．２９Ｆを得た。この結果から菌糸体は繰返し使用
しても多糖類生成能は低下しない。
含む）を初回としてデキストリン６２５％（ｗ／ｖ）酒
石酸０．６２５％（Ｗ／ｖ）からなるＰ Ｈ３，５の糖
質溶液８０ｍ１の入った５００ａｌ容振盪フラスコ１０
本に添加し、以下実施例１と同様に処理して多糖類１．
０４Ｆを得た。次いで、糖質溶液から分離した使用済の
菌糸体を再度脱塩水に懸濁させて２００ｍ１の菌体懸濁
液を調製し、この懸濁液を前記初回逅同様調製した糖質
溶液に同要領で添加、処理した結果、第２回として多糖
類１．２９Ｆを得た。この結果から菌糸体は繰返し使用
しても多糖類生成能は低下しない。
実施例４
実施例３と同様に寒天斜面培養、静置培養したグリフォ
ラ・フロンドッサ・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌ
ａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ｖａｒ ｔｏｋａｃｈｉ
ａｎａ ）ＦＥＫＭ Ｐ−Ｎｏ、４９７９の培養物
（菌体を含む）を実施例３と同じ液体培地１００ｄ宛を
入れた、５００ｍ１容振盪フラスコ４本に夫々５ｍｌ宛
接種し、２５℃で１０日間振盪培養し、以下実施例１と
同様に処理して未凍結菌糸体懸濁液３ｏｏｍｇを調製し
た。この懸濁液の３０ｍ１苑（劇糸体乾燥物で約３７０
ｍ？含む）を初回としてグルコース７．１４％（Ｗ／ｖ
）、クエン酸０．７１４ ％からなるＰＩ−１４の糖質
溶液７０ｍ１の入った５００ｒｎｌ容振盪フラスコＩＯ
本に加え２５℃で３日間振盪し、以下実施例１と同様に
菌糸体を分離し、液部より多糖類１．１Ｏｆを得た。次
いで分離した使用済の菌糸体に脱塩水を加え、菌糸体の
懸濁液３００ｍ１を調製し、この懸濁液を前記初回と同
様調製した糖質浴液に同要領で添加、２５℃で４日間振
盪し、以下前記と同様にして第２回として多糖類２．４
１Ｆを得た。
ラ・フロンドッサ・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌ
ａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ｖａｒ ｔｏｋａｃｈｉ
ａｎａ ）ＦＥＫＭ Ｐ−Ｎｏ、４９７９の培養物
（菌体を含む）を実施例３と同じ液体培地１００ｄ宛を
入れた、５００ｍ１容振盪フラスコ４本に夫々５ｍｌ宛
接種し、２５℃で１０日間振盪培養し、以下実施例１と
同様に処理して未凍結菌糸体懸濁液３ｏｏｍｇを調製し
た。この懸濁液の３０ｍ１苑（劇糸体乾燥物で約３７０
ｍ？含む）を初回としてグルコース７．１４％（Ｗ／ｖ
）、クエン酸０．７１４ ％からなるＰＩ−１４の糖質
溶液７０ｍ１の入った５００ｒｎｌ容振盪フラスコＩＯ
本に加え２５℃で３日間振盪し、以下実施例１と同様に
菌糸体を分離し、液部より多糖類１．１Ｏｆを得た。次
いで分離した使用済の菌糸体に脱塩水を加え、菌糸体の
懸濁液３００ｍ１を調製し、この懸濁液を前記初回と同
様調製した糖質浴液に同要領で添加、２５℃で４日間振
盪し、以下前記と同様にして第２回として多糖類２．４
１Ｆを得た。
実施例５
実施例３と同様にして、マイタケ函株グリフォラ・フロ
ンドッサ・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆ。
ンドッサ・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆ。
Ｉａ ｆｒｏｎｄｏｓａ ｖａｒ ｔｏｋａ、ｃ
ｈｉａｎａ）ＦＥＢＭＰ−Ｎｏ、４９７９を５００ｆｆ
ｌｌ容振盪フラスコ５本で１１日間振盪培養して得た未
凍結菌糸体を脱塩水に懸濁して懸濁液５ＱＱｍｇを調製
した。この懸濁液の全量（菌糸体乾物量で約６，７５０
ｍ９含む）をグルコース７．５％（Ｗ／ｖ）溶液１１の
入った２１容ミニジャファーメンタ−（東京理化製Ｍ−
１ｏ。
ｈｉａｎａ）ＦＥＢＭＰ−Ｎｏ、４９７９を５００ｆｆ
ｌｌ容振盪フラスコ５本で１１日間振盪培養して得た未
凍結菌糸体を脱塩水に懸濁して懸濁液５ＱＱｍｇを調製
した。この懸濁液の全量（菌糸体乾物量で約６，７５０
ｍ９含む）をグルコース７．５％（Ｗ／ｖ）溶液１１の
入った２１容ミニジャファーメンタ−（東京理化製Ｍ−
１ｏ。
型）に加え、直ちに自動Ｐ）（コントローラを作動させ
、ＩＮ−硫酸とＩＮ−苛性ソーダ溶液によりＰ）（を４
．５に調整した。以後ＰＨを４．５にコントロールしな
がら攪拌数２０Ｏｒｐｍ、通気量８００ｍｅ／ＩＪの条
件で２５℃、３日間グルコースと菌糸体の接触をはかっ
た。終了後、遠心分離により菌糸体を分離し、分離液を
実施例１と同様に処理して多糖類２．２８ ｆを得た。
、ＩＮ−硫酸とＩＮ−苛性ソーダ溶液によりＰ）（を４
．５に調整した。以後ＰＨを４．５にコントロールしな
がら攪拌数２０Ｏｒｐｍ、通気量８００ｍｅ／ＩＪの条
件で２５℃、３日間グルコースと菌糸体の接触をはかっ
た。終了後、遠心分離により菌糸体を分離し、分離液を
実施例１と同様に処理して多糖類２．２８ ｆを得た。
実施例６
実施例３と同様にして５００ｍ１容振盪フラスコ１２本
で１４日間振盪培養して得たグリフォラ・フロンドッサ
・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａｆｒｏｎｄｏｓ
ａ ｖａｒ ｔｏｋａｃｈｉａｎａ ）ＦＥｌｌ（
ＩＭ−Ｐ、Ｎ。
で１４日間振盪培養して得たグリフォラ・フロンドッサ
・パル・トカチアーナ（Ｇｒｉｆｏｌａｆｒｏｎｄｏｓ
ａ ｖａｒ ｔｏｋａｃｈｉａｎａ ）ＦＥｌｌ（
ＩＭ−Ｐ、Ｎ。
４９７９の未凍結菌糸体に脱塩水を加えて菌糸体懸濁液
１．２００ ｒｎｌを調製した。この懸濁液の全量（菌
糸体乾物量で約１．ａｏＯＯｗ含む）をグルコース６、
２５ ％ （Ｗ／ｖ）、クエン酸０６２５％（ｗ／ｖ）
からなるＰ Ｈ４の糖質溶液４，８００７７１１の入っ
た１０１容ジヤーフアメンター（丸菱理化装置研究所製
）に加え、攪拌数３０Ｏｒｐｍ、通気量２１／ｆ＋の条
件で２５℃、６日間グルコースと菌糸体の接触をはかり
、以下実施例１と同様に行って多糖類１１．６Ｆを得た
。
１．２００ ｒｎｌを調製した。この懸濁液の全量（菌
糸体乾物量で約１．ａｏＯＯｗ含む）をグルコース６、
２５ ％ （Ｗ／ｖ）、クエン酸０６２５％（ｗ／ｖ）
からなるＰ Ｈ４の糖質溶液４，８００７７１１の入っ
た１０１容ジヤーフアメンター（丸菱理化装置研究所製
）に加え、攪拌数３０Ｏｒｐｍ、通気量２１／ｆ＋の条
件で２５℃、６日間グルコースと菌糸体の接触をはかり
、以下実施例１と同様に行って多糖類１１．６Ｆを得た
。
図面はこの発明で得られた多糖類の赤外線スペクトルで
ある。 特許出願人日本甜菜製糖株式会社 手続補正書（自発） 昭和３６年ｉｏ月８日 特許庁長官 島田春樹殿 ｌ 事件の表示 昭和！１年特許原第１３コＡ／ｊ号
３ 発明の名称 多糖類の製造方法 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 東京都中央区京橋−丁目３番！３号弘 補正
の対象 明細書の「発明の詳細な説明の欄」 よ 補正の内容 ｆｌ） 明細書第３頁第１２行目「菌子体」を「菌糸
体」に補正する。 （２）明細書第９頁第７行目「製糖糖質」を「原料糖質
」に補正する。 （３）明細書第９頁第７行目「糖圧迫」を「浸透圧」に
補正する。 （４）明細書第９頁第７行〜第を行目「酢酸エチル、エ
ーテル」を削除する。 （５）明細書第９頁第１／行〜第Ｒ行目「これを更Ｋ・
・・可能である。」を削除する。 （６）明細書第１０頁第９行目「糖圧迫」を「浸透圧」
に補正する。 （７）明細書第１？ｊｊ第９行目「赤外線スペ」を「赤
外線吸収スペ」Ｋ補正する。
ある。 特許出願人日本甜菜製糖株式会社 手続補正書（自発） 昭和３６年ｉｏ月８日 特許庁長官 島田春樹殿 ｌ 事件の表示 昭和！１年特許原第１３コＡ／ｊ号
３ 発明の名称 多糖類の製造方法 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 東京都中央区京橋−丁目３番！３号弘 補正
の対象 明細書の「発明の詳細な説明の欄」 よ 補正の内容 ｆｌ） 明細書第３頁第１２行目「菌子体」を「菌糸
体」に補正する。 （２）明細書第９頁第７行目「製糖糖質」を「原料糖質
」に補正する。 （３）明細書第９頁第７行目「糖圧迫」を「浸透圧」に
補正する。 （４）明細書第９頁第７行〜第を行目「酢酸エチル、エ
ーテル」を削除する。 （５）明細書第９頁第１／行〜第Ｒ行目「これを更Ｋ・
・・可能である。」を削除する。 （６）明細書第１０頁第９行目「糖圧迫」を「浸透圧」
に補正する。 （７）明細書第１？ｊｊ第９行目「赤外線スペ」を「赤
外線吸収スペ」Ｋ補正する。
Claims (5)
- （１）マイタケ属に属する菌株を培養した菌糸体を、酸
性領域下で糖質の溶液と接触させ、該溶液中に多糖類を
生成せしめ、これを分離採取することを特徴とする多糖
類の製造方法。 - （２）菌糸体と糖類の溶液の接触が、使用済みの菌糸体
を繰返し使用し、新しい糖類の溶液と接触さすものであ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項の多糖類の製
造方法。 - （３）菌糸体が、培養後凍結保存した菌糸体であること
を特徴とする特許請求の範囲第１項の多糖類の製造方法
。 - （４）酸性領域がＰＨ３〜４５であることを特徴とする
特許請求の範囲第１項の多糖類の製造方法。 - （５）菌糸体と糖類の溶液の接触が、攪拌下で行なわれ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項の多糖類の製
造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13261581A JPS5918995B2 (ja) | 1981-08-26 | 1981-08-26 | 多糖類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13261581A JPS5918995B2 (ja) | 1981-08-26 | 1981-08-26 | 多糖類の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5836395A true JPS5836395A (ja) | 1983-03-03 |
| JPS5918995B2 JPS5918995B2 (ja) | 1984-05-01 |
Family
ID=15085465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13261581A Expired JPS5918995B2 (ja) | 1981-08-26 | 1981-08-26 | 多糖類の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5918995B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59210901A (ja) * | 1983-05-17 | 1984-11-29 | Nippon Kinoko Kenkyusho | プロテオグルカン及びそれからなる抗ガン剤 |
| JPS60255733A (ja) * | 1984-05-30 | 1985-12-17 | Nippon Beet Sugar Mfg Co Ltd | β−Ｄ−グルカン |
| KR100461960B1 (ko) * | 2002-10-10 | 2004-12-16 | 한불화장품주식회사 | 신규한 담자균류 그리폴라 프론도사 ｈｂ0071 ｋｃｔｃ10337ｂｐ와 이 균주로부터 생산된 다량의 다당류의 제조방법과 이의 용도 |
-
1981
- 1981-08-26 JP JP13261581A patent/JPS5918995B2/ja not_active Expired
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59210901A (ja) * | 1983-05-17 | 1984-11-29 | Nippon Kinoko Kenkyusho | プロテオグルカン及びそれからなる抗ガン剤 |
| JPS6356881B2 (ja) * | 1983-05-17 | 1988-11-09 | Nippon Kinoko Kenkyusho | |
| JPS60255733A (ja) * | 1984-05-30 | 1985-12-17 | Nippon Beet Sugar Mfg Co Ltd | β−Ｄ−グルカン |
| JPH0248161B2 (ja) * | 1984-05-30 | 1990-10-24 | Nippon Beet Sugar Mfg | |
| KR100461960B1 (ko) * | 2002-10-10 | 2004-12-16 | 한불화장품주식회사 | 신규한 담자균류 그리폴라 프론도사 ｈｂ0071 ｋｃｔｃ10337ｂｐ와 이 균주로부터 생산된 다량의 다당류의 제조방법과 이의 용도 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5918995B2 (ja) | 1984-05-01 |
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