JPS5823791A - ポルフイリン類の分離方法及びそれに用いる樹脂吸着剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、少なくとも二種のポルフィリン類を含有する
培養ずみプロスから、たとえばメチル化、エチル化の如
きエステル化操作を必要とすることｅＬＫ、ｆｉポルフ
ィリン傾をフリーのカルボン酸の形で、高収量且つ高純
度をもって分離回収できるポルフィリン類の分離方法に
関し、とくに、簡単で且つ容易な吸庸−溶出操作及び装
置をもって、満足すべき早い吸着及び溶出速度で且つ優
れた吸着剤耐久性及び優れた吸宥剤再便用耐久性で、九
とえば９０嘩を越える顕著に尚い回収率及び選択性をも
って、高純度の精製ポルフィリンを高収量で分離し回収
できるポルフィリン類の分離方法に関する６本発明は父
、上記方法に実施に用いるのに適した共重合体樹脂吸着
剤にも関する。

ポルフィリン類は、各種の生物の組織内に広く存在して
おシ、生体内の酸素の運搬、生体内の鍍化逮元反応の触
媒などの生理学的作用に関連するヘムタンパクの構成成
分として重決な化合物であり、その医業的用途に関して
も、例えば肝愼能改嵜など１器に対するａ１４節作用、
その他の興味ある生理学的活性を有する物質として注目
される活性物質である。

ポルフィリン類は、血液中の血色素からの抽出、或はポ
ルフィリン類生家性徴生吻の培養などによって製造され
るのが一般的であるが、共存する他の生体組織成分から
、或は該培養物から、ポルフィリン類の単離を効率よく
行なうことは、必ずしも容易ではない。

特に微生物１体を包含して生体内でポルフィリンが生産
される際に、各種のポルフィリン類が２種類以上生産さ
れる場合があシ、これらを効率よ〈分離回収できる且つ
又工業的実施に適し念容易な手段の一発が−１１まれで
いる。。

従来、ポルフィリンを分離回収する手段はいくつか知ら
れている。たとえば、咋凍−酢酸エチルの如き溶媒を用
いて溶媒抽出し、ついで抽出されたポルフィリンをメチ
ルエステル化し、次いで、アルｉナの如き吸着剤を用匹
て吸着クロマトグラフィ一手段に賦する方法（Ｊ、　Ｃ
ｈｒｏｒｓαｔａｇ、、　５（１９６１）！７７〜２９
９　ＨＢｉｏｃｈｇスＪ、。

６２　（１９５６）フ８〕、−に、芳・香族炭化水素に
溶解し、沸騰させた後冷却し、結晶を析出させる方法〔
日特公昭和５２−３７０４２号〕などが知られている。

これら従来提案においては、いずれもエステル化の操作
が必要である賭点があり、更に、二種以上のポルフィリ
ン類を含有する混合物から各ポルフィリンを分離する手
段としては、分離効率、操作などの点で工業的実施に不
向きである。

他の提案として、アニオン交換樹脂全利用し７、ポルフ
ィリン類をフリーの酸の形で＋１ｆｍする方法〔日本展
芸化宇会誌第５０巻４１〜４７（１９７６）〕が提案さ
れているが、回収率が低い問題があり工業上有利な方法
とはいえない。

本発明者等は、上述の如き従来広の欠陥を克服できるポ
ルフィリン類の分離方法を開発すべく研究を行ってきた
。

その結果、下記（１）〜Ｏｖ）、 （１）少なくとも二項のポルフィリンｇ４１に含有する
培養ずみブロスの液相部のｐＨを約２−５〜約４に調節
して、形成された葭ボルツイリン類含有固形分を採取し
、 （ｉｔ）　　該固形分の水性酸溶液を調製して、その不
溶物を除去した溶液相のｐＨを約６〜約８に調節し、 （ｉ）ｔａｐＨｒＪ４ｍし九溶液を、ジビニルベンゼン
、スチレンもしくはその官能性誘導体及び式のアルケニ
ル基をボし、ｎは２もしくＦｉａを示す、で表わされる
ベンゼン多価カルボン酸アルケニルエステルより導かれ
た共ぼ合体樹脂であって且つその衣ｉ檀が約’ｌ００ｙ
／／を以上の樹脂と接ぺさせて、該樹脂に該ボルフイリ
：ｙＡを吸着させ、 （１ｖ）次いで、浴出剤により溶出させて各ポルフィリ
ン画分を取得すること、 によって、簡単で且つ尋易なｅ、４−溶出操作及び装置
をもって、満足すべき早い吸着及び１＃出速度で且つ優
れた吸着剤耐久性及び優れた吸着剤再便用耐久性で、た
とえば９０チを越える顕著に高い回収率及び選択性をも
って、高純度の４製ポルフイリンを高収緻で分離し回収
できることを発見した。

本発明者等の研究によれば、アースロノ（フタ−・ヒア
リナス（ＦＥＲＭ−Ｐｓｓ　１２　ｓ　；　ＡＴＣＣ３
１２６３冨ＤＳＭ−８６’ｌ＞やアースロノ（イタ−・
バラセンス（ＡＴＣＣ１３３４６ｉ　１ＦＯ１２１３９
）、更には、それらの変異ないし変櫨劇の如含ポルフィ
リン生産菌は、カルボン酸基を、夫々、４個、５個、６
個、７個もしくは８１固有するフリーの酸の形のボルフ
イリ／＠を２棟乃至５橿含有する培養ブロスを形成する
能力をゼするが、前記（１）及び（ｉ）の手股ｔ−経て
得られるｐＨ調節された溶液中のこれらカルボン酸基含
有ポルフィリン類に対して、これらを高い吸着型をもっ
て選択的に吸着する能力に優れ、且つその溶出に際して
は、活性分画区分中のポルフィリン楕襄度が充分に嵩い
という選択的溶出能乃至高度なポルフィリン分離能を示
し、斯くて、付加的な追加及び／父は予備精襄手ＩＲｔ
必要とすることなしに、吸着−溶出の１覇単且つ容易な
操作及び装置ｄによって９０％をこえる高回収率で、精
製ポルフィリンを分離採取するのが可能となることが発
見された。

更に父、前記（１）及び（ｉ）の手攻で得られるｐＨＡ
節さしｆｅ、溶液中のカルボン酸≠言有コブロボルフイ
リン類に対して、満足すべき吸着−溶出流速を示し、反
復操作においても目づまシ元生のトラブルを回避して、
優れた耐久性を示し、挾雑成分を富むポルフィリン類含
有固形分中のポルフィリンの精製及び分離の１栗的実施
を極めて有利にできることを発見し念。

従って、本発明の目的は、少なくと本二攬のポルフィリ
ン＠を含有する培養ずみブロスから含有される各ポルフ
ィリンを高純度状態で且つ各別に分譲採取できるポルフ
ィリン類の分離方法を提供するにある。

本発明の他の目的は、上記方法の実施に利用するのに適
したポルフィリン類分離用技層剤を提供するにある。

本発明の上記鎖目的及びさらに多くの曲の目的ならびに
利点は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。

本発明方法によって分離処理されるポルフィリン含有ブ
ロスは、少なくとも二種のポルフィリン類を含有する培
養ずみのブロスであれば、どのような培養ブロスであっ
てもよい。本発明においてポルフィリン類とνま、ウロ
ポルフィリン■〜〜、コブロボルフイリンＩ−ＩＶ、お
よびこれらの部分エステル化物、部分脱炭酸化物、など
を包含する呼称であり、側鎖としてのカルボン酸基ｒ、
夫々、４個〜８個の範囲の任意の個数で有するポルフィ
リンを少なくとも２檀含Ｍする培養ずみのブロスが利用
できる。

この工うな少なくとも二種のポルフィリン類を含有する
ブロス會形成するポルフィリン生産菌は珈々知られてお
り、列えば、％開昭５２−７４７９号（％ｍ昭５０−８
３１６５号）、特開昭５３−１０９９２９号（％頒昭５
２−２２７３０号）、特開昭５６−６８３９８号（特願
昭５４−１４３１９８号）−１特開昭５６−！７８５９
５号（特願昭５４−１５３６４８号）などに公知のポル
フィリン生ｔＳが利用できる。これら公知のポルフィリ
ン生産菌の中でも、アースロパクター属に属するポルフ
ィリン生産ｔｉｔ”培養することにより形成された培養
ずみブロスが、高ａｒｔにｖｉ故橿のポルフィリン類を
含有するブロスである点でより好ましい。

このような好ましい公知ポルフィリン生産菌の例として
は、上記例示の特開昭公報に開示されたアースロバフタ
−・ヒアリナス（ＡｒｔｈｒｏｂαｏｔｏデｈｙａＬｉ
ｎｓａ　）　（ＦＥＲＭ−Ｐｇ　３１２５　ＨＡＴＣＣ
３１２６３；ＤＳ＆−８６７）、アースロノくフタ−・
バラセンス（Ａｒｔｋｒｏｂａｃｔｏｒ　ｐａａｃｅｎ
ａ　〕（ＡＴＣＣ１Ｂ３４６１１Ｆ０１２１３９）、こ
れらの変異ないし変種菌、九とえば、アースロノ（フタ
−・ヒアリナスの５メチル−ＤＬ−トリプトファン抵抗
株（ＦＥＥＭ−Ｐｓｓ　２５６　）、アースロバフタ−
・ヒアリナスのコブロボルフイリン■抵抗株（ＦＥＲＭ
−Ｐｓｓｚｓ＊）、アースロパクター・バラセンスのＬ
−）リブドアアン抵抗株（ＦＥＲＭ−ＰＡＮ　２５丁）
などを例示することができる。

他の公知ポルフィリン生産菌の例としては、アースロバ
フタ−・クレメ９ス（Ａｒｔｈｒｏｂａｅｔｏｒａｒｅ
ｔｎｅｕａ　’）　（ＦＥＲＮ−Ｐｇ３１２　＠　）、
アースロバフタ−・レジノサス（Ａｒｇｋｒｏｂαａｔ
ｅデデ＃＃イー引■ｓｓ　）（ＦＥＲＭ−Ｐｇ３１３１
　）、アースロパクター・イソプｐパノ四フイラ（Ａデ
ｔｈｒｏｂａａ＠ｏｒ１ａｍｐｒｏｐａｓａｌｏｐｈｉ
ｌａ　　）　　（Ｆｋ：　ＲＭ　−Ｐｓ　３　１　２９
）、アースロバフタ−・フラビダス（Ａｒｔｈｒｏ−ｈ
ａｅｔａｒ　　／Ｊｇｖｊｄｓａ　　）　　（ＦＥＲＭ
−Ｐｓ　３　１　３　Ｇ　：）、ブレビバクテリウム・
エバネウス（Ｂｒｅｗｉｂａａｔａ−ｒｉｓｖｓ　ａｂ
ｍｒｎａｘａ　〕（ＦＥＲＭ−ＰＡ３１２８　）、プレ
ビバクテリウム−ラクチカラー（Ｂｒｇｗｉｂα−ａｔ
ｅｒｉｍ　　１ｇｅｔｉｔｔｅｌｏｒ　）（ＦＥＲＮ　
−Ｐ雇３１２７）などを例示することができる。そして
これらポルフィリン生産菌の菌学的特徴については、前
記特開昭公報などに詳細に記載されている。

又、上記例示の如きポルフィリン生産菌を培養して、ポ
ルフィリン類含有ブロスを形成する手法、培養条件など
くついても前記特開昭公報に詳細に開示されてお夛、本
発明における原料培養ずみプロスの形成に利用できる。

以下に、要約して該原料培養ずみプロスの形成に関して
述べる。

上記プロスを形成するための培養は、例工ば、適当な炭
素源、窒素源、ミネラル源などを含有する培地を用いて
、前記例示の如き公知菌株に公知の至適ｐＲ榮件、至適
温度条件付近の適当な培養条件を選択して行うことがで
きる。

例えば、本発明方法の実施にとくに適した上記５種類の
ポルフィリン類（カルボン酸基を、夫々、４個、Ｓ個、
６個、７１固及び８個有するポルフィリン類の混合物）
を含有する原料プロスを得るＫは、アースロバフタ−属
に属するポルフィリン生産菌、好ましくはアースロバフ
タ−・ヒアリナス、アースロパクター・バラセンス及び
それらの変異ないし変種菌よりえらばれたｉ１１株を、
例えば；温度約！Ｏ℃〜約４０℃、ｊＨ約４〜約甑５の
如き培養条件下で培養する培養条件を例示することがで
きる。培養時間は適宜に選択でき、例えば約２日〜約Ｓ
日の如き培養時間を例示することができる。

上記窒素源の例としては、たとえば、コーン・スチープ
・リカー、酔母エキス、肉エキス、ペプトン、アばノ酸
類、蛋白水解吻、フィツシュミール、アンモニウム４拳
、硝＃Ｉ塩類、尿素、などをあげることができ、これら
Ｖｉ凌数檜併用して利用することができる。又、炭素源
の例としては、たとえば、＃ｌｆｔ４、アルコール類、
ふすま、などを例示でき、これらも複数極利用すること
ができる。

さらに％ミネラル源の一］としては、リン酸塩類、マグ
ネシウム塩類、亜鉛４類、カルシウム塩類、マンガン塩
類、モリブデン塩類、銅塩類などを例示することができ
、これらもａ数種利用することができる。

本発明方法によれは、（１）たとえば上述のようにして
得ることのできる少なくとも二層のポルフィリン類を含
有する培養ずみプロスの液相部のｊＨ１約１約ｚｓ〜、
好ｔしくは約２８〜約＆８Ｋｔｊ４節して、形成された
該ポルフィリンｇＪ４官有固形分を採取する。

上記液相部のｐＨａ４節によって、譲敏相邪に含有され
た少なくとも二種のポルフィリンａｔ含有する混合固形
分が形成できる。このポルフィリン類含有固形分は、通
常、沈殿吻の形で形成され、該固形分を任意の固−液分
離手段、たと、ｔは、傾斜、遠心分離、−過などの手段
を利用して採取することができる。

上記操作（１）に於て、ｐＨ’ｔＡ節に利用する酸性吻
質の例としては、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸などの如き
無機ｆｉＲ類、及びギ酸、酢酸、シュウ酸、乳酸などの
如き有機酸類を例示することかで睡る。

上述のようにして採取できるポルフィリン類含有固形分
は、液相部中和包含され得る炭素源、窒素源、ミネラル
類その他の挾雑成分から可成シ良好に選択的に分電され
九少なくとも二種のボル７イリｙ類から成る固形分とし
て取得することができる。

本発明方法によれば、（ｉｉ）上述のようにして採取し
九該固形分の水性酸溶液を調製して、その不溶物を除去
した溶液相のｐＨ金約６〜約８、好ましくは約７±ａ５
付近ＫＡｔＪする。

上記操作（ｉｉ）における水性酸溶液の調製は、九とえ
ば、操作（：）で採取したポルフィリン類含有固形分を
、水性酸溶液に再溶解することによりｆＪ！４製するこ
とができる。利用する酸の例としては、塩酸、硫酸、硝
酸、リン酸などの如き無機酸類、及びギ酸、酢酸、クエ
ウ酸、乳酸などの如き有機酸類を例示することができる
。又、酸の傾度としては約１ないし約４規定の濃度の液
を用いることができるが、好ましくは約２規定前後の＃
度がよい。

上述のようＫして得ることのできるポルフィリン類含有
ＩｊＩ形分の水性酸溶液からの不溶物の除去は、任意の
同一液分離手段、九とえば、傾斜、遠心分離、−過など
の手段を利用して行うことができる。このようにして、
不溶物を除去して得ることのできる溶液相のｐＥの調節
は、適当なアルカリ性物質を用いて行うことができる。

このｐＨ調節に利用するアルカリ性物藏の列としては、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水、炭
酸ナトリウム、炭酸カリウムなど全例示することができ
る。

本発明方法によれば、（ｉ）上述のようにして得られた
該ｐＨｌＩ４節した溶液を、ジビニルベンゼン、スチレ
ンもしくはその官能性誘導体及び式ルケニル基を示し、
鴨は意もしくｔ−ｉｎを示す、で表わされるベンゼン多
価カルボン酸アルケニルエステルより導かれた共重合体
樹脂（以下、ＤＳＴ樹脂と略記することがある）であっ
て且つその表面積が約フ００ｙ／／ｆ以上の樹脂と接触
させて、σ樹脂にポルフィリン類を吸着させる。

上記操作（ｉ）は、該表［Ｉｉｌ積が約７００ｉ／Ｐ以
上のＤＳＴ樹脂吸麿剤と上記ｐＨ調節した溶液とを、光
分に淡触させることのでさる任、よの手段で行うことが
できる。列えば、該吸、ｄ剤を該ポルフィリン頑含Ｍ液
とを混合し、所望により、攪拌して両者を接触させるバ
ッチ方式が採用できるし、父、適当なカラムに該吸涜削
を充てんし、この充てん層中を該ポルフィリンｍ’ｉ含
有する上６己ｐＨ調節した溶液を通過せしめるカラムク
ロマトグラフィ一方式を採用することもできる。

本発明方法によれば、Ｏｖ）上述のようにしてポルフィ
リン類を吸着させた表ｍｌ積が約７００ｙｙ／／ｆ以上
のＤＳＴ＃脂から、溶出剤により溶出させて、原料プロ
スの液相部に含有されていた少なくとも二種のポルフィ
リン類を、各ポルフィリン画分に分−取得して、各ポル
フィリン成分を高純１＆關収率で分離し、取得すること
ができる。

利用する溶出剤としては、低級アルコールの水溶液が好
ましく利用できる。約１０〜約４（ｌ濃度の低級アルコ
ール類水溶液の利用が好ましく、この際、ｐＨ約７〜約
１２のｐＨ条件を満是する低級アルコール類水溶液とし
て利用するのがよい。

このような低級アルコールの例としては、メタノール、
エタノール、イソプロパツールなどの如きアルコール類
を例示することができる。またｐＨ条件の調節には、例
えば、水敏化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア
水酸化カルシウムの如きアルカリ性物質を利用すること
ができる。

溶出操作は、室温で行うことができ、とくに加温もしく
は冷却の必要はない０例えば、約ｌＯ〜約６０℃の如き
浴出温度を例示することができる。

上述のようにして得ることのできる各ポルフイリンー分
は、操作（ｉ）におけると同様に、そのｐＥを約′Ｌ５
〜約４にｆｌｌてポルフィリフ画分固形物として析出さ
せ、固形分の形で採取することができる。

上記操作（ｉｖ）に於て、ポルフィリン類及び挾雑成分
の溶出パターンの一態様を示すと、溶出剤による溶出操
作によって、まず、挾雑物實である不純物が溶出し、次
いで８個のカルボン酸基を有するポルフィリンが溶出し
てくる。次いで７１固のカルボン酸基を有するポルフィ
リンが俗出し、順次、６１固、５個、４個と、順次によ
り少ないカルボン酸基を有するポルフィリンの順で溶出
してくる。

そして残りの挾雑祷質はカラムに吸着し九ままとなって
いる。

本発明方法によれば、上述のようにして、少なくとも二
種のポルフィリン類を含有する培養ず与プロスの液相部
から各ポルフィリン画分を、高収率且つ高純度をもって
容易な操作で且つ間単な装置をもって、顕著に優れ九回
収率及び選択性をもって分離することができる。

本発明は又、上述した本発明方法の実権に利用するのに
適したポルフィリン類分離用吸智剤にも関する。該吸着
剤は、上述したようにしてプロスからみちびかれたボル
フイリｙ類含有水性溶・改を包含して、少なくとも二種
のポルフィリン類を含有する水性溶液から各ポルフィリ
ンを分離するのに１広く利用でき且つ卓越し九分離性能
を示す。

とくに適した該吸着剤に於ては、前記ＤＳＴ樹脂におい
て、該樹脂の表面積が約７００ｙｙ／／ｆ以上であり、
該樹脂のスチレンもしくはその官能性誘導体成分含有量
が、該ジビニルベンゼン及び該スチレンもしくはその前
舵性誘導体の合計量に基いて約３０〜約８０重量嘔であ
り、且つ該ベンゼン多価カルボン酸アルケニルエステル
成分含有量が、該ジビニルベンゼン、該スチレンもしく
はその官能性誘導体及び護ベンゼン多価カルボン酸アル
ケニルエステルの合計量に暴いて約αｌ〜約３０　ｆ＠
−である。

本発明方法で用いる前ａｒｃ　Ｄ　Ｓ　Ｔ樹脂は、たと
えば、アンバーライトＸＡＤ系樹脂（ローム・アンド・
ハース社製品：スチレンージビニルベンゼン樹脂）が極
性表ｒｋＪを持たないのに対して、前記式／酸アルケニ
ルエステルに由来する適度な慣性表面全吸着剤表面に有
し、従来樹脂に比して、ポルフィリン類に対する吸！Ｍ
に於て約５〜ｌＯ倍の顕著に優れたポルフィリン吸着能
を示し、更に、その吸着及び溶出時の選択性においても
優れた性能を発揮し、その上、吸着及び溶出速度が早く
、且つ優れた吸着剤耐久性及び吸着剤再使用耐久性を示
す等、ポルフィリン類の分離用吸着剤とじて卓越した諸
性能を有する。

斯くて、本発明によれば、ジビニルベンゼン、スチレン
もしくはその官能性誘導体及び式アルケニル基金示し、
籠は２もしくＦｉ３を示す、〕で表わされるベンゼン多
価カルボン酸アルケニルエステルより導かれた共重合体
樹脂であって、該樹脂の表面積が約７００ｍ’／ｆ以上
であり、好ましくは、該樹脂のスチレンもしくはその官
能性誘導体成分含Ｖｔが、該ジビニルベンゼン及び該ス
チレンもしくはその官能性誘導体の合計量に基いて約３
０〜約８０直ｔＳであり、且つ好ましくは、該ベンゼン
多価カルボン酸アルケニルエステル成分含有量が、該ジ
ビニルベンゼン、該スチレンもしくはその官能性誘導体
及び該ベンゼン多価カルボン酸アルケニルエステルの合
計量に基いて約α１〜約３０重１に％であって、少なく
とも二種のポルフィリン類含Ｍ水性溶赦から各ポルフィ
リンを分離するのに使用することを特徴とするポルフィ
リン類分離用吸着剤が提供できる。

本発明のポルフィリン填梢製が雌用吸着剤の形状は自由
に選択でき、例えば、粉状、粒状、等の形状であること
ができる。その表面ｆ３ｉｔは約ＴＯＯ靜／ｆ以上、好
筐しくに約８００　ｎｌ／　１以上、例えば約７００〜
約Ｌ２００１ｄ／ｙ、好ましくは約８００〜約１．２０
０　ｍ’／　ｆ　程蜜である。

ここで言う表ｒｘｉ横は以下の方法により測定決定する
ものである。

すなわち！Ｍ脂を筒内へ充てんし、得られた樹脂光てん
筒内へ、それぞれの分子鎖長が確認されている１０種類
のポリスチレンのクロロホルム溶液およびスチレンのり
ａロホルム溶液を流通させ、それぞれの溶出体積１測定
する。

それぞれのポリスチレンは浴出ピークの分子鎖長が１０
４Ａ（オングストローム）から１０”Ａまでの範囲にあ
り、かつ、分子鎖長分布がきわめて狭いものである。

分子鎖長（Ａ）および溶出体積Ｆ（ＣＣ）と筒内圧充て
んした樹脂１１４’　（ｆ　）を用いて次式により表面
積（Ｓ−ｒｒｌ／ｆ）を得る。

−（１）Ｖｉ　（ｏｃ／ｒ）＝（Ｖｔｙｒ−Ｖｎ）／Ｗ
（２）Ｓ４（ｉ／ｆ）＝８−１７＜−ｔｏ’／（ｍ＋ｗ
）ｉ　＝ｘ　ｌ　５ Ｖｉ：ｍＡｚｎＡの孔容積、 Ｖ惰：、常Ａのポリスチレンの溶出体ｍ、Ｖ％：％Ａの
ポリスチレンの溶出体積、Ｓ（：惰Ａ〜ｇｔＡの表面積
、 惰および覚：分子ｌａ長 上記スチレン系単量体及びベンゼン多価カルボン酸アル
ケニルエステル単量体は、夫々、ａ数穐利用することも
できる。これらの使用ｔは適宜に選択できるが、好まし
くは、区スチレｙ系成分含有量が、ジビニルベンゼン及
びスチレンモジくはその官能性誘導体の合、ｔｔｔに基
いて約３０〜約８０選着優、より好ましくは約４５〜約
７０者薯ｌｆ、ｄベン４フ４価カルボン酸アルケニルエ
ステル含有ｔが、ジビニルベンゼン、該スチレン系成分
及び該アルケニルエステルの合計被に着いて約αｌ〜約
３０重量−１より好ましくは約１〜約１０直量嘩である
。１兼的に普通に入手されるジビニルベンゼンは、ｍ−
１１ｔ、（ｆ：ｖ−ジビニルベンゼンが約４０〜約７０
１ｆ％、ｏ−、ｍ−およびアーエチルスチレンが約３０
〜約６０電量−程、！含有されており、これを上記ジビ
ニルベンゼン及びスチレン系単量体として、そのまま使
用することもできる。

共（合反応は、それ自体公知の手法に従って行うことが
でき、闇えば、ジビニルベンゼン、スチレンもしくはそ
の官能性誘導体及びベンゼン多面カルボン酸アルケニル
エステルとを、水性媒体中で懸濁共重合することＫよっ
て製造できる。重合開始剤としては、上ｍｌ率を体に可
溶性の公知ラジカル重合開始剤が利用でき、例えば、ベ
ンゾイルパーオキサイド、ラウロイルパーオキサイド、
ｔａｒｔ−ブチルパーアセテート、ｔａｒｔ−ブチルパ
ーピバレート、アゾビスイソブチロニトリルなどを例示
できる。その使用瀘は適宜に選択でき、たとえば約へ１
〜約１０重１１襲、よシ好ましくは約４５〜約７０ｉＩ
％の如き使用１１例示できる。

懸濁共重合において、粒状の重合刃を得るためには、分
散剤を用、いることが好ましい。分散剤としては、嬢溶
性塩類、例えば硫酸パリクム、炭酸カルシウムめるいは
シん酸三カルシウムなど、難溶性Ｓ機化合物、例えばベ
ントナイトあるいは粘土など、もしくは天然および合成
水ｍ性高分子、例えばデンプン、メチルセルロース、ゼ
ラｆ７、ポリビニルアルコール、部分ケン化ポリビニル
アルコールあるいはポリアクリルば塙などが使用できる
。分散剤の１は、適宜に選択で酋るが、モノマー混合＃
に対して約ｏ、　ｔ−約１０１１−一、より好ましくは
約α５〜約７１％％のμ口き量を例示できる。

また分散剤に加えて分、次女定則を便用することができ
る０分献安廻剤としては、例えば；　ドブフルベンゼン
スルホン酸ソーダその曲の各種界面活性剤を使用するこ
とができる。これら分散剤、あるいはこれに加えて分数
安定剤を使用することにより、懸濁重合において溶媒と
重合成分とが部分的に合体してゲルが大きくなることを
防ぎ、均一なジビニルベンゼン／スチレン系単着体／ベ
ンゼン多価カルボン酸アルケニルエステル共重合体を製
造することができる。また、ゲル粒子の粒径分布が改轡
され、ポルフィリン分離能の優れ次吸７ｄ剤樹脂を得る
ことができる。

更に、多量の１水を媒体左する懸濁共重合に除しソ、所
望により、ジビニルベンゼン及びベンゼン多価カルボン
酸アルケニルエステルの少なくとも一方の単量体に対し
て良溶媒となるような溶媒を併用し九混合溶媒系を利用
することができる。このような良溶媒の例としては、ジ
ビニルベンゼンに対する良溶媒としてジエチルベンゼン
、トリメチルベンゼン、メチルイソプロピルベンゼンナ
トの如きアルキル置換ベンゼン類が、またベンゼン多価
カルボン酸アルケニルエステルに対するＩＬ溶媒として
ｔａｒｔ−イソアミルアルコール、ｔａｒｔ−ブチルア
ルコールなどの脂肪族アルコール類を例示することがで
きる０例えば、溶媒としてｔ＃デｔ−４ノアはルアルコ
ールとジエチルベンゼンとの混合物を用いた場合、こｎ
らの溶媒は一方のモノマーに対しては良溶媒として慟〈
一方、もう一方の七ツマ−に対しては貧俗媒として働く
ため、それぞれが形成される樹脂粒子にマクロレテイキ
ュラー構造を均等に付与し、全体の多孔性を高めるのに
役立つ。このため、本発明吸曾剤樹脂の膨潤度を押える
のに有効に作用すると共に、該樹脂によりすぐれたポル
フィリン分離能を与えるのに役立つ。

ｌ＠濁共這合は、通常、不活性ガス、調えばチッ素のず
囲気下で行うことが好ましく、重合温度、時間は、重合
開始剤の１１＃４などにより適宜に１択できるが、例え
ば約５〜約１０’Ｃ１好ｔＬ＜は約５０〜約１００℃橿
変及び例えば約５〜約１０時關程度である。

以下、実施例により、不発明吸着列を用いて、本発明方
法によりポルフィリンｆＡ　’ｖ　ｊｆｌ　Ｉｆ！分離
する数例を示す。

実施例１ １５０ｊの攪拌槽中に、工業用ジビニルペンゼア（Ｎｆ
約ｓｓｌ、残部はエチルビニルベンゼン）ｔｏｌｌ、１
．２．４ベンゼントリカルボ／酸トリグロペニルエステ
ルＩＫｆ、ジエチルベンゼン＆０〜、イソアミルアルコ
ール３−、ペンソイルパーオ中サイド５ｏＫＩＩ、水１
ＯＯＩ、りん酸三カル７つ７４４ＫＪＩオよびドデフル
ベンゼンスルフォ７ｄｌｌ−ダ６ｆを仕込み、攪拌しな
がら９０℃で８時間懸濁重合して粒状の架橋重合体を得
た。

生成した粒状電合体を口過後、筒内でメタノール、クロ
ロホルム洗浄し、再び口過した後６〇−８０℃で減圧乾
燥して、白色不透明な粒状重合体＆３〜ｅ４た。

生成物を分級して得た区分！０−２５＾の１性を測定し
たところ、表面積８７４ｉ／ｆ、ボア容積ｔｙｃｃ／ｌ
であった。

この樹脂は１〒４０ｃｍ−”のカルボニル基にモトづく
赤外吸収があり、１，２．４ベンゼントリカルボン酸ト
リプロペニルエステルが有効にポリマー中に共重合して
くみこまれたことを示している。

他方、ポルフィリン類生産菌アースロバクター・ヒアリ
ナス（微工研蘭寄第３１２５号）菌株を、イオン交僕純
水１ｊあたりイソプロピルアルコールｔｏｙ、酵母エキ
スＬＯ？、ペプトン＆Ｏｆ１硫酸アンモニウムＳａｔ、
リン酸−カリウムα４ｆ、リン酸二ナトリウム１５Ｆ、
硫酸！グネシウム＆Ｏｆ、硫酸マンガン１０１７．硫酸
亜鉛１０ダ、硫酸鋼！ＯＯμｆ、二酸化モリブデン１０
μｆ。

炭酸カルシウムＬｏｔおよびＬ−シスチンα２ｆを含有
する殺菌した培地２５０ＭＩｔ−収容した５０〇−三角
フラスコに植菌して３０℃で３日間振とう培養した。以
後２〜３日毎にイングロピルアルコールを添加し、培養
１７日間で１ｊの培養液当り８５ｄのイソプロピルアル
コールｔ−Ｓ加した。

このときの培養液に蓄積した８カルボン醸ポルフイリン
の濃度ｔｘ２６０ａｐ／Ｉ、Ｔカルボン酸ポルフィリン
８０Ｗ／１．６カルボン虐ポルフイリン３１）ＩＰ／ｊ
、５カルボン酸ポルフイリン２１９／Ｉ、４力ルボン酸
ポルフイリン３００ｊ％ｌｌ／ｊであった。

このように培養し之培養液１ｊ？１ａＯＯＯＧで１０分
間遠心分離して菌体等の不溶分を除去し、液相部を得た
。この液相部のｐｌｆｔ−１６に調幣し沈殿物を１，０
ＯＯＧで１０分間遠心分離により分離した。得られた沈
殿物を５ＱＱｄの２規定塩酸に溶解し、ろ過により不溶
物を除いたあと、水酸化ナトリウムでｐＨ７とした。得
られた溶液を３Ｉの上記樹脂粒子が充てんされたカラム
に上昇流法で一分間に２００１１７の流速で泥し、ポル
フィリン類を吸着せしめる。連続してｐＨｘ２の１０チ
メタノール水溶液を流し、８カルボン酸ポルフイリン、
７カルポン酸ポルフイリン、６カルボン酸ポルフイリン
の順序で浴出したそれぞれの両分４００ｄを分画する。

次いで、ｐＨ７の１０チメｆｉ／−ル水溶液を流し、５
カルボン酸ポルフイリン、４カルボン酸ポルフイリンの
順序で溶出したそれぞれの一分を前者について４００ｍ
、後者について２ｊを分画する。それぞれ分取した両分
を塩酸でｐＨ’＆２とし、生成した沈殿をろ過して集め
念。得られたポルフィリン固形物は、８カルボン酸ポル
フイリン２４０ｆｆ、？カルボン酸ポルフィリン？１Ｍ
ｇ、６カルボン酸ポルフイリン２７１ｖ。

５カルボン酸ポルフイリン１９＃、４カルボン酸ポルフ
イリン２９０Ｉｖであり、回収率はそれぞれ１２％、８
９嘩、９０係、９０％、９７チであった。

実施例２ ポルフィリン類生並菌アースロノ（フタ−・）くツセン
ス１株（ＺＦ０１２１３９）を実施例１と同様にして培
養した結果、培養液中に蓄積したポルフィリン類の濃度
は、８カルボン酸ポルフイ１ノン２００ｖ／ｊ、？カル
ボン酸ポルフイリｙ７７ダ／１．６カルボン噴ポルフイ
リン２７９／ｊ、５カルボン酸ポルフイリン１６Ｑ７１
．４カルボン１ポルフイリン２３０ダ／ノであり実翔例
１と同様の操作で分離回収したところ、回収率はそれぞ
れ９３１９１％、８８Ｉｓ、８７％、９４％であったＯ 特許出願６　日本石油株式会社　ｒ−＝’−代　理　人
　弁理士　小田島　平　吉１；−第１頁の続き ０発　明　者　佐藤鉄夫 横浜市港北区高田町４７７の２７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ（１）少なくとも二種のポルフィリン類を含有する培
   養ずみプロスの液相部のｐＨを約λ５、〜約４ＫｙＩ４
   ）ｉシて、形成された該ポルフィリン類含有固形分を採
   取し、 （ｉｉ）該固形分の水性酸溶液ｆ：調製して、その不溶
   物を除去したｆ４液相のｐＨを約６〜約８に調節し、 （―）該ｐＨＩ４節した溶液を、ジビニルベンゼン、ス
   チレン本しくけその官能性誘導体及びのアルケニル基を
   示し、ｎＦｉ２もしくは３を示す、で表わされるベンゼ
   ン多唾カルボン酸アルケニルエステルより導かれた共重
   合体樹脂であって且つその表面積が約７０ＯＦＦ／／ｆ
   以上の樹脂と接触させて、訳樹脂ＫｒＪポルフィリン類
   を吸増させ、 （１ｖ）次いで、溶出剤により溶出させて各ポルフィリ
   ン画分を取得すること、 を特徴とするポルフィリン類の分離方法。 ２　該ポルフィリン類が、カル・ボン酸基を、夫々、４
   個、５個、６４２！、７１固もしくＶｉｌＮ固有するフ
   リーの酸の形のポルフィリン類の少なくとも二種を含有
   する混合物であることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ＆　咳培譬ずみプロスが、゛アースロバフタ−属に属す
   るポルフィリン生産菌を培養することにより形成された
   培養ずみプロスであることをＩＴｊ徴とする特許請求の
   範囲＠１項もしくは第２項記−の方法。 ４　ｆａポルフィリン生生産水、アースロパクター量ヒ
   アリナス、アースロバフタ−・パラセンス及びそれらの
   変異ないしＲ１菌よりなる群からえらばれた該生産菌で
   あることを特徴とする特許６★求の＃囲第１項紀械の方
   法。 ＆　ａ溶出剤が低級アルコールの水性溶液である特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ＆　　該共重合本樹脂のスチレンもしくはその官能性誘
   導体成分含有酸が、該ジビニルベンゼン及び該スチレン
   もしくはその官能性誘導体の合計量に基いて約３０〜約
   ８０ｆｉ量係であり、且つ該ベンゼン多価カルボン酸ア
   ルケニルエステル成分含有量が、該ジビニルベンゼン、
   狽スチレンモジくはその官能性誘導体及び該ベンゼン多
   価カルボン酸アルケニルエステルの合計量に氷いて約α
   １〜約３０重量％である特許請求の範囲第１項記載の方
   法。 ７、　ジビニルベンゼン、スチレンもしくハそのＲｄＣ
   ，〜Ｃ１６のアルケニル基を示し、ｎは２もしく＃ｉ３
   を示す、〕で表わされるベンゼン多価カルボン酸アルケ
   ニルエステルより導かれた共重合本樹脂であって、該樹
   脂の表面積が約？ＯＯＷ？／ｆ以上であり、該樹脂のス
   チレンもしくはその官能性誘導体成分含有量が、該ジビ
   ニルベンゼン及び該スチレンもしくはその官能性誘導体
   の合計量に基いて約３０〜約８０重量嘩であり、且つ該
   ベンゼン゛多価カルボン酸アルケニルエステル成分含有
   量が、該ジビニルベンゼン、該スチレンモジくはその官
   能性誘導体及び該ベンゼン多価カルボン酸アルケニルエ
   ステλの合計量に基いて約α１〜約３０重量嘩であり、
   少なくとも二橿のポルフィリン類含有水性溶液から各ポ
   ルフィリンを分離するのに使用することを特徴とするポ
   ルフィリン類分離用吸層剤。