JPS5823783A - 微生物菌体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な細菌によって細菌菌体を製造する方法に
関する。さらに詳しくはシュードモナス　メタノミガス
に属し、メタノールを資化しうる細菌をメタノールを主
九石炭素渾とする培地に培養し、培養液から細菌の菌体
を分離することを特徴とする細菌菌体を製造する方法に
関する。

従来、微生物菌体の製造原料としては糖蜜。

亜硫酸パルプ廃液およびｎ−パラフィンなどが使用され
てきた。しかしながら、これらの物質は瞭酵原料として
は供給量および価格の点で問題がある。さらＶＣｎ−パ
ラフィンは水に難溶性乃至不溶性であること、および微
生物の生産に多量の酸素が必要とされる点などで培養上
問題が多い。

一方、メタノールは化学工業により大量に得られ、かつ
比較的安価であシ、シかも水溶性が大であることなどか
ら、瞭酵原料として好ましい物質である。もしもメタノ
ールを強力に資化する微生物を発見することができれば
微生物菌体の製造は容易に行なうことができる。

本発明者らはメタノールを主炭素源としてこれを強力に
資化する細−を広く自然界より求めたところ、メタノー
ルを強力に資化し、なおかつ、たん白含量の高い細菌を
得ることができた。

すなわち１本発明における細菌（以下本細菌と記す）は
、糖などの他の炭素源の不存在下でもメタノールを唯一
の炭素源として資化し、短時間で増殖し、約８０９６の
たん白質を含有する極めて特異的な細菌である。

本細菌は、その菌学的性質によればシュードモナス属に
属するものとみられる。しかしながらクユードモナス属
に属する公知の菌種と比較した場合に種々の点で相違が
あり、新菌種と断定してこれをシュードモナス　メタノ
ミガス（Ｐｍｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｍ＠ｔｈａｎｏｍｉ
ｇａｓ　ｎｏｖ、ｓｐ、　）と命名し１本細菌を用いて
本発明を完成した。

すなわち９本発明はシュードモナス　メタノミガスに属
し、メタノールを資化しうる菌株をメタノールを主炭素
源として含有する培地中で培養して菌体を増殖させ、咳
菌体を採取することを特徴とする細菌の菌体を製造する
方法である。

本菌種のうち代表的な菌株であるシュードモナス　メタ
ノミガス　５ｕ−１８（微工研薗寄第２１８２号）１−
シュードモナス　メタノミガス　ＢＣ−１４５（微工研
薗寄第２１８３号）。

シュードモナス　メタノミガス　Ｂ−６１６（微工研薗
寄第２１８４号）およびシェードモナス　メタノミガス
　ＢＮＭ−７８（黴工研菌寄第２１８５号）のそれぞれ
の菌学的性質を示す。

シュードモナス　メタノミガス　５ｕ−１８株の菌学的
性質 Ｌｌ［黴鏡的形態 メタノール含有液体培地、メタノール含有寒天培地で３
７℃、３日間培養した。

■　細胞の形および大きさ 直桿状、長さ０．３〜０．５μ×１゜ ０〜３．０μ。また細胞の多形性はみ られない。

■　集団　単細胞或は双細胞になる。

■　運動性　あ抄。極鞭咄を有する。

■　胞子の有無　生産されず。

■　ダラム染色　ダラム陰性。

■　抗酸性　陰性。

■　細胞外粘着物　生産されることがある。

２　次の各培地における生育状態 ■　肉汁寒天平板培養　３７℃、３日間培養生育しない
かまたは生育は非常に悪い。

■　メタノール含有寒天平板培養　３７℃。

３日培養 旺盛な生育を示す。

コロニーの形状：外形は円形、大きさ は２〜３　Ｗ　、***は半球形、構造は均質。

表面は平滑１辺縁は平滑９色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は指状。

■　肉汁寒天斜面培養　３７℃、３日培養接種線に一様
に生育する。ただし生育 は非常圧悪い。

■　メタノール含有寒天斜面培養　３７℃。

３日培養 接種線に一様に旺盛に生育する。*** は中程度２表面は平滑９辺縁は平滑１色は白色、透明度
は不透明、硬度は高い粘稠性を示す。

■　肉汁液体培養　３７℃、７日培養 生育しない。

■　ペア７）ン水液体培養　３７℃、７日培養生育しな
い。

■　メタノール含有液体培養　３７℃、３日培養 全体に旺盛に生育し、にごる。沈澱あ り１表面の生育があり、菌膜を形成する。

菌膜は振とうＫよりこわれ沈降する。培養液の色社はぼ
白色となる。

■　肉汁穿刺培！１３７℃、７日培養 生育しない。

■　メタノール含有穿刺培養　３７℃、３日培養 小乳頭状に一様に生育する。７〜８１ ぐらいの表面の生育あ抄。

［相］　肉汁ゼラチン穿刺培養　２０℃で４週間培養 生育しない。

■　リトマスーミルタ　３７℃で４週間培養生育しない
。

ａ　生理学的性質 ［Ｆ］　硝酸塩の還元　硝酸塩を亜硝酸塩に還元する。

■　ＭＲテスト　陰性 ■　ｖｐテスト　陰性 ■　インドールの生成　陰性 ■　硫化水素の生成　陰性 ■　デンプンの加水分解　陰性 ■　クエン酸の利用（Ｋｏａａｒの培地。

Ｃｈｒｉｓｔ＠ｎｓ＠ｎの培地）　陰性■　無機窒素源
の利用　アンモニウム塩および硝酸塩をそれぞれ利用す
る。

■　色素の生成　はとんど生成しない。しかし液体培養
で高い画体濃度に達した場合に、黄色の水溶性色素を非
常にわずかに生成する。

［株］　ウレアーゼ　陽性 ＠　カタラーゼ　陽性 ＠　アンモニアの生成　陰性 ■　色素の還元　メチレンブルーを還元する。

［株］　脱窒反応　陰性 ■　オキシダーゼ　陽性 ＠Ｏ−Ｆテスト　陰性 ■　リジン分解　　陰性 ■　生育の範囲 ｐＩ（５〜９の範囲で生育する。６〜８が好ましい。

温度５〜４１℃で生育する。２５〜４０℃が好ましい。

■　酸素に対する態度　好気性 ■　糖類の資化性および酸、ガスの生成下記の糖類を資
化しない。また下記の 糖から酸およびガスを生成しない。

Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース。

Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ −フラクトース、Ｄ−ガラクトース。

麦芽糖、シリ１乳糖、トレノ・ロース。

Ｄ−ソルビット、Ｄ−マンニット、イ ノジット、グリセリン、デンプン の　糖類以外の炭素源の資化性 ■　各種有機物質による生育阻害 酵母エヤス、麦芽エキス等の有機物添 加により、生育は阻害される。

Ｏビタミンによる生育阻害 ｐ−アミノ安息香酸５＃／−添加で生 育は阻害される。

シュードモナス　メタノミガス　ＢＣ−１４５の菌学的
性質 シュードモナス　メタノミガス　５ｕ−１８との差異を
以下く示す。

２　次の各培地における生育状態 ■　メタノール含有寒天平板培養　３７℃。

３日培養 旺盛な生育を示す。

コロニーの形状：外形は円形、大きさ は２〜３藺、***は半球形、構造は均質。

表面は平滑９辺縁は平滑２色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は粘稠。

■　メタノール含有寒天斜面培養　３７℃。

３日培養 接種線に一様に生育する。***は中程 度９表面は平滑でしめりている１辺縁は平滑２色は白色
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。

■　メタノール含有液体培養　３７℃、３日培養 全体く旺盛に生育しにとる。沈澱あ抄。

表面の生育があり、菌膜を形成する。菌膜は振とうＫよ
りこわれ沈降する。培養液の色は赤みをおびただいだい
色となる。

ａ　生理学的性質 ■　色素の生成 はとんど生成しない。しかし液体培養 で高い菌体濃度に違した場合に赤みをおびただいだい色
の水溶性色素を生成する。

シュードモナス　メタノミガス　Ｂ−６１６の菌学的性
質 シュードモナス　メタノミガス　Ｓ　ｕ　−１８との差
異を以下に示す。

２　次の各培地忙おける生育状態 ■　メタノール含有寒天平板培養　３７℃。

３日培養 旺盛な生育を示す。

コロニーの形状：外形は円形、大きさ は２〜３１１Ｊ　、***は牛球形、構造は均質。

表面は平滑１辺縁は平滑１色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は粘稠。

■　メタノール含有寒天平板培養　３７℃。

３日培養 接種線に一様に生育する。***は中程 度２表面は平滑でしめっている。辺縁は平滑２色は白色
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。

ａ　生理学的性質 ■　硝酸塩の還元 硝酸塩を亜硝酸塩に還元しない。

■　各種有機物質による生育阻害 酵母エキス、麦芽エキス等の有機物質 添加によシ生育は阻害される。４１に７ラ　　　　−ク
トース、リボースの少量（１ｗｔｌＧ以下）添加によ抄
生育は阻害され、場合によっては生育は停止することも
ある。

シュードモナス　メタノミガス　ＢＮＭ−７８Ｓ　　の
菌学的性質 シュードモナス　メタノミガス　Ｓ　ｕ　−１８との差
異を以下に示す。

２　各培地における生育状態 ■　メタノール含有寒天平板培養　３７℃。

３日培養 生育旺盛。

コロニー：外形は円形、大きさは２〜 ３ＭＩ***は半球形、構造は均質１表面は平滑１辺縁は
平滑２色は白色で光沢あり、透明度は不透明、硬度は指
状。

■　メタノール含有寒天斜面培養　３７℃。

３日培養 生育旺盛。

接種線に一様忙生育する。***は中程 度１表面は平滑１辺縁は平滑で金縁１色は白色で光沢あ
抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。

ａ　生理学的性質 ■　硝酸塩の還元 硝酸塩を亜硝酸塩に還元しない。

［相］　生育の範囲 ｐＨ５〜９の範囲で生育する。６〜８ が好ましい。

温度５〜４５℃で生育する。２５〜４ ２℃が好ましい。

バージイス　マニュアル　オプ　ブタ−きネイティブ　
バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｓｙ’ａ　ｌムｎｕａｌｏ
ｆ　Ｄ＠ｔ＠ｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｍｌｅｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ　）　７版、〔編集者ブリード（Ｂｒｅ＠ｄ　）
　＊　ハレー（Ｈｕｒｒａｙ）及びスミス（Ｓｍｉｔｈ
）　　、ウィリアム　アンド　ゥイルキンス社（Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｌｌｋｉｎｓ　）パルチモア（
Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ　）　）　１９５７年によれば。

これらの菌株は微生物学的特徴によりシュードモナス属
に属するものである。この属に属する種の分類上の鍵と
なる性質をパージイス　マニュアルでたどってみると、
上記した性質を有する種は見あたらない。

「ジャーナル　オプ　バクテリオロジ（Ｊｏｕｒｎ＋ｏ
ｆ　Ｂａｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ）　Ｊｌｇ　７２巻、第
６４ｅ〜ａ５９ｊ［（１９５６）Ｊにはメタノールを資
化スる細菌としてシュードモナス　メタニカ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　ｍ＊ｔｈａｎ１ｃｍ＞が発表されてｂ
る。しかし本菌種とシュードモナス　メタニカ（Ｐａ＠
ｕｄｏｍｏｎａａ　ｍ＠ｔｈａｎｉｅａ　）とはｔ細胞
の大きさ、メタンの資化性、３７℃での生育、生育最適
温度、生育ｐＨおよび生育最適ｐＨなどが異なる。両者
の相違を下の表に示す。

従って、シュードモナス属に属するこれらの菌株はａ　
ｌｆｒ＠！ＩＫ属するものと結論される。

実験方法は、上記のバージイス　マニュアル、ｌ　　お
よび医科学研究所学友会編「細菌学実資提要」（１９５
ｇ）に従った。

またメタノール含有寒天平板培地、メタノール含有斜面
培地、メタノール含有穿刺培地として次の組成をもちい
た。すなわち、（ＰＪＩ（４）ｔＨｐＯａ３１　＋　Ｋ
ＨｔＰＯ＜　　’　Ｐ　１Ｍｇ５ｏ、−７Ｈ１００，４
ｆ　。

ＣａＣｌ２・２Ｈ１０５ｍｆｆ　　、Ｆ＠ＳＯ４嗜　７
Ｈ１０２０ｍ１／。

Ｚｎ８０４＠７Ｈ１０５ｍｌ、ＭｎＣ１１・４Ｈ１０２
ｍＬＣｕＳＯ４・５Ｈ２００，２ｍｐ−ＮａＣ１Ｏ，Ｓ
Ｐ、オ！ヒ寒天２０ｆを純水ｌｔに溶解しｐＨを６．８
に調整シて１２０℃で−２０分間殺菌した後、メタノー
ル１ｏｆを無菌的に添加した。またメタノール含有液体
培地として杜、上記の培地から寒天を除いたものを使用
し丸。

本細菌の培養に使用される培地はメタノールを主炭素源
として含有していることを要し、さらに窒素源、無機質
、ビタミン、その他生長促進愉質などの適量を含有する
培地ならば合成培地または天然培地のいずれでもよい。

培養液中のメタノールの濃度は６重量−以下が好ましく
、菌の生育および増殖の喪好さからは３重量−以下であ
ることが特に好ましい。

窒素源としては、たとえばアンモニウム塩。

硝酸塩などの無機窒素化合物、および／ｌたはたとえば
尿素、コーン・スティーゾ・リカー。

カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの有機
窒素含有物が用いられる。その他、カルシウム塩、マグ
ネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩、″ｗンガン塩、亜
鉛塩、鉄塩、鋼塩などの無機塩、および必ｌ！に応じて
ビタミン類、７２５〜４２℃である。たソし５ｕ−１８
，ＢＣ−１４５，お！びＢ−６１６につ’ｖｈ’ｃは２
０〜４１℃、好ましくは２５〜４０Ｃである。オたｐＨ
は５〜９．好ましく社６〜８である。このような条件で
好気的培養を行なう。また培養方式は回分培養または連
続培養のいずれでもよい。

窒素源としてアンモニウム塩を利用する場合は。

培養期間中にアンモニアが菌体生成のため消費されて培
養液のｐＨが低下するのでｐＨを一定圧保つためアンモ
ニア、力七イカリまたはカセイソーダなどのアルカリを
添加する。これらのうちアンモニアを添加することが好
ましい。

このようにして細菌を培養した後、菌体を培養液より分
離する。分離の方法としては、培養液その１１を遠心分
離する方法、培養液中に。

本発明の細菌よ炒比較的細胞の大きい他の微生物をろ過
助剤として加えたり、あゐいはプレコートすることによ
り培養液から菌体をろ過分離する方法、培養液中に種々
の凝集剤を加え菌体を凝集させ、ろ過あるいは遠心分離
により培養液から菌体を分離する方法、培養液のｐＨを
５以下にすることにより、あるいはｐＨを５以下にし、
さらに５０〜１００℃で加熱すること忙より菌体を凝集
させ、ろ過あるいは遠心分離によ秒菌体を分離する方法
などがある。

分離された菌体は必要ならば、各種の有機溶媒あるいは
水で沈浸され、湿潤菌体を得る。湿潤菌体は乾燥され、
その１１あるいはさらに種々の処理をｈとこされた後、
飼料などとして利用される。壇た得られた菌体からさら
に核酸。

ビタミン類、補酵素、たん白質または脂質などの菌体含
有物質が純粋な物質としてオたは相互の混合物として抽
出され調料１食品、医薬品および工業原料などに使用さ
れる。

本発明によって、工業生産によって容易に入手しうる物
質を原料として使用することが出来。

しかも高収率でたん白含量の高い菌体を得ることが出来
、かつ、Ｎ料物質は水溶性であるため培養が容易であり
、簡単な後処理で清浄な菌体を得ることが出来、工業上
極めて有利な方法である。

以下実施例によってさらに詳しく説明する。

実施例　１ 純水１ｔあたり　（Ｎ）Ｉ４）！ＨＰＯ４３＃、ＫＨｔ
ＰＯ４４ｇ　＋　Ｍｇ５ｏ４−７Ｈ１００，４ｔ、　Ｃ
ａＣ１１・２Ｈ１０５ｍＰ　ｐ　Ｆ　＠　Ｓ　０４　・
７　ＨＩＯ２０ｍｐ、　Ｚ　ｎ　Ｓｏ　４ＩＩ７Ｈ２０
５ｍ１　、　ＭｎＣＩ　Ｐ４Ｈ１０２ｍｌ　、　（’、
ｕＳＯ４”　ＨｔＯＯ，２ｍｌ　、　ＮａＣ１０，５ｇ
、および消泡剤としてシリコーン０．１ｐを溶解し、ｐ
Ｈが７．２に調整された培地５００−をＸｔ＠Ｓ二・ジ
ャーに入れ１２０℃で２０分間殺菌した後、メタノール
５ｇを無菌的に添加し、これに上記と同様な培地（メタ
ノール含有）で３７℃で１２時間前培養したシュードモ
ナス　メタノミガス　５ｕ−１８の菌体を含む前培養液
を２マｏ１％となるように接種し、培養期間中の培養液
のｐＨが７゜２＃／ｃ維持されるようにアンモニア水を
添加しながら３８℃で通気攪拌培養を行なった。４時間
の増殖誘導期間の後、対数増殖期となり、対数増殖期で
は世代時１ｓ５１．５時間で増殖し培養開始１５時間後
、培養液中のメタノール濃度は０００１　ｗｔ−以下と
なった。この培養液を遠心分離して菌体を分離２回収し
、８０℃で２４時間乾燥して、培養液１２あたＦ）３．
８ｆの乾燥菌体を得た。得られた菌体の粗たん白質量Ｆ
ｉ８４慢であった。

実施例　２ 純水１ｔあたり（ＮＨＪｔＨＰＯ番３ｔ、　ＩＧＩ、Ｐ
ｏ。

４　ｙ　、　Ｍｇ８０４−７Ｈ！ＯＩＩＱ、　ＣａＣ１
１＠２Ｈ１０５ｍｆ　、　Ｆｅ８０４ａ　７Ｈ２０２０
ｍｙ　、　ＺｎＳＯ４・７Ｈ，。

５　ｍｇ　、　ＭｎＣ１１・４Ｈ１０２ｍｇ　、　Ｃｕ
ＳＯ４＠５Ｈ２００，２ｍｌ　、　Ｎ参〇ｌ　　０．５
　ｆ　ｔおよび消泡剤としてシリコーンｏ、ｔｐを溶解
し、ｐＨが７．０に調節された培地５００−を１を容ｉ
二・ジャーな培地（メタノール含有）で３７℃で１２時
間前培養したシュードモナス　メタノミガス　Ｂ−６１
６の菌体を含む前培養液を２ｖｏ１％となるように接種
し、培養期間中の培養液のｐＨが７．０に維持されるよ
うにアンモニア水を添加　め［、なから３７℃で通気攪
拌培養を行なった。６時間の増殖誘導期間の後、対数増
殖期となり。

対数増殖期では世代時間１．７時間で増殖し。

培養開始２０時間後培養液中のメタノール濃度は、ｏ、
ｏｏｔｗｔ＊以下となった。この培養液を遠心分離して
菌体を分離９回収し８０℃で２４時間乾燥して、培養液
１ｔあたり４．Ｏｆの乾燥菌体を得た。得られた菌体の
粗たん白含量は８３−２−であった。

実施例　３ 純水１ｔあた抄（ＮＨａ）１ＨＰＯ４３ｇ　、幻（、Ｐ
Ｏ４４ｆ　　、Ｍｇ８０４”　）Ｈ２Ｏ０，４ｐ、Ｃａ
ｃｌ　ｔ＠２Ｈ１０５ｍＰＨＦｅＳＯ４・７Ｈ１０２０
ｍｐ、　ＺｎＳＯ４・７Ｈ１０５ｍｌ、　ＭｎＣ１１＊
　４Ｈ１０２ｍｌ　、　ＣｕＳＯ４＊　５Ｈ１００，２
ｍｌ　、　ＮａＣ１０，５ｇ　、および消泡剤としエシ
リコーン０．１ｔを溶解し、ｐＨが６．８に調節された
培地５００−をｌｔ容ミニ・ジャーに入れ１２０℃で２
０分間殺菌した後メタノール５ｔを無菌的に添加し、と
九に上記と同様な培地（メタノール含有）で、４０℃で
１２時間前培養したシュードモナス　メタノミガス　Ｂ
Ｃ−１４５の菌体を含む前培養液を２　ｖｏｌ　ｍとな
るように接種し、培養期間中の培養液のｐＨが６．８に
維持されるようにアンモニア水を添加しながら４０℃で
通気攪拌培養を行なった。８時間の増殖誘導期間の後、
対数増殖期となり対数増殖期では世代時間２．３時間で
増殖し、培養開始３０時間後培養液中のメタノール濃度
は０　、０．０１　Ｗｔ９Ｇとなった。この培養液を遠
心分離して菌体を分離、＠収し、８０℃で２４時間乾燥
して培養液１ｔあたり３．４ｔの乾燥菌体を得た。得ら
れた菌体の粗たん白含量は８１゜２ｓであった。

実施例　４ 純水１ｔあた抄（ＮＨ４）ｔｓＯ４３ｔ　＊　ＫＨｙＰ
Ｏａ４　ｐ　、　Ｍｇ８０４・７Ｈ１０１ｐ　、　Ｃａ
Ｃ１１ｅ２Ｈ１０１０ｍｇ　、　Ｆ＠８０４１１７Ｈ２
０６０ｍｇ　、　ＺｎＳＯ４１Ｉ７Ｈ１０１０ｎｓｐ　
、　Ｍｎ５０４−４Ｈ１０５ｍｔ、　ＣｕＳＯ４’５Ｈ
１００，５ｍｇ、ＮａＣ１１ＪＬおよび消泡剤としてシ
リコーン０．２ｔを溶解し、ｐＨが６゜５に調整された
培地１ｓｔを３０を容ジャーフ；メンタ−に入れ１２０
℃で２０分間殺菌した。

これにメタノール３０ｔを無菌的に添加して培地とした
。実施例１と同組成の培地（メタノール含有）で、３６
℃で１８時間前培養したシュードモナス　メタノミガス
　５ｕ−１８の菌体を含む前培養液を上記の培地に対し
て５マＯｌチとなるように添加し３６℃で通気攪拌培養
を行なった。アンモニア水の添加によってｐＨは自動的
に６．５に維持され、培養液中でのメタノール濃度が０
．２〜０．３重量−を維持されるようにメタ／−ルをそ
の消費量に合わせて連続的に添加した。培養２５時間後
にメタノール添加量は培養液１ｔあたり６０ｆＫ違した
。なお。

増殖中の世代時間は１．６時間であった。培養を停止し
遠心分離によや集菌した。この湿潤菌体を１２０℃で２
４時間乾燥し、培養液１ｔあたＦ）２３ｆの乾燥菌体を
得た。得られた菌体の粗たん白含量は８３−であった。

実施例　５ 純水１ｔあた抄（ＮＨｉ）ｔＨＰＯｉ　３　ｔ　、　Ｋ
ＨｔＰＯ４４ｙ　、　Ｍｇ５ｏ４−７）ｔｌｏ　　０．
４＃、ＣａＣ１１１Ｉ２Ｈ！０５ｍ１．Ｆ＠８０４＊　
７に１０　２０ｍｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ１０５ｍｆ、Ｍ
ｎＣ１１１１４Ｈ１０２ｍｌ　、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０
０，２？ＰＩ＃、ＮａＣ１０，５ｐおよび消泡剤としテ
シリコーン０．１ｇを溶解し＋ＰＨが６゜８に調整され
た培地５００ｍを１を容ミニｅジャーに入れ１２０℃で
２０分間殺菌した後、メタノール５ｔを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地（メタノール含有）で３７℃
で１２時間前培養しんシュードモナス　メタノミガス　
ＢＮＭ−７８の菌を含む前培養液を２ｖｏｌ−となるよ
うに接種し、培養期間中の培養液のｐＨが６゜８に維持
されるようにアンモニア水を添加しながら３７℃で通気
攪拌培養を行なった。３時間や増殖誘導期間の後、対数
増殖期とな抄、対数増殖期では世代時間５５分で増殖し
、培養開始１３時間後、培養液中のメタノール濃度は０
゜００１ｖｔ９Ｇ以下となった。仁の培養液を遠心分離
して菌体を分離９回収し、８０℃で２４時間乾燥して、
培養液１ｔあたり３．７ｔの乾燥菌体を得た。得られた
菌体の粗たん白含量は約８５チであった。

ｓ＋ｉｎｍ例　６ 実施例１と同じ組成の培地（メタノールを含着なｔ／１
）５００ｗ４ｔを１を容ミニージャーに入れ１２０℃で
２０分間殺菌した後、メタノール５ｔを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地（メタノール含有）で４２℃
で１２時間前培養したシュードモナス　メタノミガス　
ＢＮＭ−７８の菌体を含む前培養液をＺｖｏｌ−となる
ように接種し、培養期間中の培養液のｐＨが６゜８に＠
持されるようにアンモニア水を添加しながら４２℃で通
気攪拌培養を行なった。６時間の増殖誘導期間の後、対
数増殖期となり、対数増殖期では世・代時間１．３時間
で増殖し、培養開始１８時間後、培養液中のメタノール
濃度は０　、０　Ｏ１ｖｔ−以下となった。この培養液
を遠心分離して菌体を分離２回収し、８０℃で２４時間
乾燥して、培養液１ｔＴｏ九り３．５ｔの乾燥画体を得
た。得られた菌体の粗たん白含量は約８３−であつ九。

特許出願人　三菱瓦斯化学株式会社 代表者　　　長　野　和　吉

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. シュードモナス　メタノミガスに属し、メタノールを資
   化りうるＪｌｉＩＩＩをメタノールを主たる炭素源とす
   る培地に培養し、該培養液から細菌の菌体を分離するこ
   とを４Ｉ黴とする微生物菌体の製造方法