JPS5823783A - 微生物菌体の製造方法 - Google Patents
微生物菌体の製造方法Info
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- JPS5823783A JPS5823783A JP13249382A JP13249382A JPS5823783A JP S5823783 A JPS5823783 A JP S5823783A JP 13249382 A JP13249382 A JP 13249382A JP 13249382 A JP13249382 A JP 13249382A JP S5823783 A JPS5823783 A JP S5823783A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methanol
- culture
- growth
- bacterial cells
- microbial cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な細菌によって細菌菌体を製造する方法に
関する。さらに詳しくはシュードモナス メタノミガス
に属し、メタノールを資化しうる細菌をメタノールを主
九石炭素渾とする培地に培養し、培養液から細菌の菌体
を分離することを特徴とする細菌菌体を製造する方法に
関する。
関する。さらに詳しくはシュードモナス メタノミガス
に属し、メタノールを資化しうる細菌をメタノールを主
九石炭素渾とする培地に培養し、培養液から細菌の菌体
を分離することを特徴とする細菌菌体を製造する方法に
関する。
従来、微生物菌体の製造原料としては糖蜜。
亜硫酸パルプ廃液およびn−パラフィンなどが使用され
てきた。しかしながら、これらの物質は瞭酵原料として
は供給量および価格の点で問題がある。さらVCn−パ
ラフィンは水に難溶性乃至不溶性であること、および微
生物の生産に多量の酸素が必要とされる点などで培養上
問題が多い。
てきた。しかしながら、これらの物質は瞭酵原料として
は供給量および価格の点で問題がある。さらVCn−パ
ラフィンは水に難溶性乃至不溶性であること、および微
生物の生産に多量の酸素が必要とされる点などで培養上
問題が多い。
一方、メタノールは化学工業により大量に得られ、かつ
比較的安価であシ、シかも水溶性が大であることなどか
ら、瞭酵原料として好ましい物質である。もしもメタノ
ールを強力に資化する微生物を発見することができれば
微生物菌体の製造は容易に行なうことができる。
比較的安価であシ、シかも水溶性が大であることなどか
ら、瞭酵原料として好ましい物質である。もしもメタノ
ールを強力に資化する微生物を発見することができれば
微生物菌体の製造は容易に行なうことができる。
本発明者らはメタノールを主炭素源としてこれを強力に
資化する細−を広く自然界より求めたところ、メタノー
ルを強力に資化し、なおかつ、たん白含量の高い細菌を
得ることができた。
資化する細−を広く自然界より求めたところ、メタノー
ルを強力に資化し、なおかつ、たん白含量の高い細菌を
得ることができた。
すなわち1本発明における細菌(以下本細菌と記す)は
、糖などの他の炭素源の不存在下でもメタノールを唯一
の炭素源として資化し、短時間で増殖し、約8096の
たん白質を含有する極めて特異的な細菌である。
、糖などの他の炭素源の不存在下でもメタノールを唯一
の炭素源として資化し、短時間で増殖し、約8096の
たん白質を含有する極めて特異的な細菌である。
本細菌は、その菌学的性質によればシュードモナス属に
属するものとみられる。しかしながらクユードモナス属
に属する公知の菌種と比較した場合に種々の点で相違が
あり、新菌種と断定してこれをシュードモナス メタノ
ミガス(Pmeudomonas m@thanomi
gas nov、sp、 )と命名し1本細菌を用いて
本発明を完成した。
属するものとみられる。しかしながらクユードモナス属
に属する公知の菌種と比較した場合に種々の点で相違が
あり、新菌種と断定してこれをシュードモナス メタノ
ミガス(Pmeudomonas m@thanomi
gas nov、sp、 )と命名し1本細菌を用いて
本発明を完成した。
すなわち9本発明はシュードモナス メタノミガスに属
し、メタノールを資化しうる菌株をメタノールを主炭素
源として含有する培地中で培養して菌体を増殖させ、咳
菌体を採取することを特徴とする細菌の菌体を製造する
方法である。
し、メタノールを資化しうる菌株をメタノールを主炭素
源として含有する培地中で培養して菌体を増殖させ、咳
菌体を採取することを特徴とする細菌の菌体を製造する
方法である。
本菌種のうち代表的な菌株であるシュードモナス メタ
ノミガス 5u−18(微工研薗寄第2182号)1−
シュードモナス メタノミガス BC−145(微工研
薗寄第2183号)。
ノミガス 5u−18(微工研薗寄第2182号)1−
シュードモナス メタノミガス BC−145(微工研
薗寄第2183号)。
シュードモナス メタノミガス B−616(微工研薗
寄第2184号)およびシェードモナス メタノミガス
BNM−78(黴工研菌寄第2185号)のそれぞれ
の菌学的性質を示す。
寄第2184号)およびシェードモナス メタノミガス
BNM−78(黴工研菌寄第2185号)のそれぞれ
の菌学的性質を示す。
シュードモナス メタノミガス 5u−18株の菌学的
性質 Ll[黴鏡的形態 メタノール含有液体培地、メタノール含有寒天培地で3
7℃、3日間培養した。
性質 Ll[黴鏡的形態 メタノール含有液体培地、メタノール含有寒天培地で3
7℃、3日間培養した。
■ 細胞の形および大きさ
直桿状、長さ0.3〜0.5μ×1゜
0〜3.0μ。また細胞の多形性はみ
られない。
■ 集団 単細胞或は双細胞になる。
■ 運動性 あ抄。極鞭咄を有する。
■ 胞子の有無 生産されず。
■ ダラム染色 ダラム陰性。
■ 抗酸性 陰性。
■ 細胞外粘着物 生産されることがある。
2 次の各培地における生育状態
■ 肉汁寒天平板培養 37℃、3日間培養生育しない
かまたは生育は非常に悪い。
かまたは生育は非常に悪い。
■ メタノール含有寒天平板培養 37℃。
3日培養
旺盛な生育を示す。
コロニーの形状:外形は円形、大きさ
は2〜3 W 、***は半球形、構造は均質。
表面は平滑1辺縁は平滑9色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は指状。
は不透明、硬度は指状。
■ 肉汁寒天斜面培養 37℃、3日培養接種線に一様
に生育する。ただし生育 は非常圧悪い。
に生育する。ただし生育 は非常圧悪い。
■ メタノール含有寒天斜面培養 37℃。
3日培養
接種線に一様に旺盛に生育する。***
は中程度2表面は平滑9辺縁は平滑1色は白色、透明度
は不透明、硬度は高い粘稠性を示す。
は不透明、硬度は高い粘稠性を示す。
■ 肉汁液体培養 37℃、7日培養
生育しない。
■ ペア7)ン水液体培養 37℃、7日培養生育しな
い。
い。
■ メタノール含有液体培養 37℃、3日培養
全体に旺盛に生育し、にごる。沈澱あ
り1表面の生育があり、菌膜を形成する。
菌膜は振とうKよりこわれ沈降する。培養液の色社はぼ
白色となる。
白色となる。
■ 肉汁穿刺培!137℃、7日培養
生育しない。
■ メタノール含有穿刺培養 37℃、3日培養
小乳頭状に一様に生育する。7〜81
ぐらいの表面の生育あ抄。
[相] 肉汁ゼラチン穿刺培養 20℃で4週間培養
生育しない。
■ リトマスーミルタ 37℃で4週間培養生育しない
。
。
a 生理学的性質
[F] 硝酸塩の還元 硝酸塩を亜硝酸塩に還元する。
■ MRテスト 陰性
■ vpテスト 陰性
■ インドールの生成 陰性
■ 硫化水素の生成 陰性
■ デンプンの加水分解 陰性
■ クエン酸の利用(Koaarの培地。
Christ@ns@nの培地) 陰性■ 無機窒素源
の利用 アンモニウム塩および硝酸塩をそれぞれ利用す
る。
の利用 アンモニウム塩および硝酸塩をそれぞれ利用す
る。
■ 色素の生成 はとんど生成しない。しかし液体培養
で高い画体濃度に達した場合に、黄色の水溶性色素を非
常にわずかに生成する。
で高い画体濃度に達した場合に、黄色の水溶性色素を非
常にわずかに生成する。
[株] ウレアーゼ 陽性
@ カタラーゼ 陽性
@ アンモニアの生成 陰性
■ 色素の還元 メチレンブルーを還元する。
[株] 脱窒反応 陰性
■ オキシダーゼ 陽性
@O−Fテスト 陰性
■ リジン分解 陰性
■ 生育の範囲
pI(5〜9の範囲で生育する。6〜8が好ましい。
温度5〜41℃で生育する。25〜40℃が好ましい。
■ 酸素に対する態度 好気性
■ 糖類の資化性および酸、ガスの生成下記の糖類を資
化しない。また下記の 糖から酸およびガスを生成しない。
化しない。また下記の 糖から酸およびガスを生成しない。
L−アラビノース、D−キシロース。
D−グルコース、D−マンノース、D
−フラクトース、D−ガラクトース。
麦芽糖、シリ1乳糖、トレノ・ロース。
D−ソルビット、D−マンニット、イ
ノジット、グリセリン、デンプン
の 糖類以外の炭素源の資化性
■ 各種有機物質による生育阻害
酵母エヤス、麦芽エキス等の有機物添
加により、生育は阻害される。
Oビタミンによる生育阻害
p−アミノ安息香酸5#/−添加で生
育は阻害される。
シュードモナス メタノミガス BC−145の菌学的
性質 シュードモナス メタノミガス 5u−18との差異を
以下く示す。
性質 シュードモナス メタノミガス 5u−18との差異を
以下く示す。
2 次の各培地における生育状態
■ メタノール含有寒天平板培養 37℃。
3日培養
旺盛な生育を示す。
コロニーの形状:外形は円形、大きさ
は2〜3藺、***は半球形、構造は均質。
表面は平滑9辺縁は平滑2色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は粘稠。
は不透明、硬度は粘稠。
■ メタノール含有寒天斜面培養 37℃。
3日培養
接種線に一様に生育する。***は中程
度9表面は平滑でしめりている1辺縁は平滑2色は白色
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
■ メタノール含有液体培養 37℃、3日培養
全体く旺盛に生育しにとる。沈澱あ抄。
表面の生育があり、菌膜を形成する。菌膜は振とうKよ
りこわれ沈降する。培養液の色は赤みをおびただいだい
色となる。
りこわれ沈降する。培養液の色は赤みをおびただいだい
色となる。
a 生理学的性質
■ 色素の生成
はとんど生成しない。しかし液体培養
で高い菌体濃度に違した場合に赤みをおびただいだい色
の水溶性色素を生成する。
の水溶性色素を生成する。
シュードモナス メタノミガス B−616の菌学的性
質 シュードモナス メタノミガス S u −18との差
異を以下に示す。
質 シュードモナス メタノミガス S u −18との差
異を以下に示す。
2 次の各培地忙おける生育状態
■ メタノール含有寒天平板培養 37℃。
3日培養
旺盛な生育を示す。
コロニーの形状:外形は円形、大きさ
は2〜311J 、***は牛球形、構造は均質。
表面は平滑1辺縁は平滑1色は白色で光沢あり、透明度
は不透明、硬度は粘稠。
は不透明、硬度は粘稠。
■ メタノール含有寒天平板培養 37℃。
3日培養
接種線に一様に生育する。***は中程
度2表面は平滑でしめっている。辺縁は平滑2色は白色
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
で光沢あ抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
a 生理学的性質
■ 硝酸塩の還元
硝酸塩を亜硝酸塩に還元しない。
■ 各種有機物質による生育阻害
酵母エキス、麦芽エキス等の有機物質
添加によシ生育は阻害される。41に7ラ −ク
トース、リボースの少量(1wtlG以下)添加によ抄
生育は阻害され、場合によっては生育は停止することも
ある。
トース、リボースの少量(1wtlG以下)添加によ抄
生育は阻害され、場合によっては生育は停止することも
ある。
シュードモナス メタノミガス BNM−78S の
菌学的性質 シュードモナス メタノミガス S u −18との差
異を以下に示す。
菌学的性質 シュードモナス メタノミガス S u −18との差
異を以下に示す。
2 各培地における生育状態
■ メタノール含有寒天平板培養 37℃。
3日培養
生育旺盛。
コロニー:外形は円形、大きさは2〜
3MI***は半球形、構造は均質1表面は平滑1辺縁は
平滑2色は白色で光沢あり、透明度は不透明、硬度は指
状。
平滑2色は白色で光沢あり、透明度は不透明、硬度は指
状。
■ メタノール含有寒天斜面培養 37℃。
3日培養
生育旺盛。
接種線に一様忙生育する。***は中程
度1表面は平滑1辺縁は平滑で金縁1色は白色で光沢あ
抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
抄、透明度は不透明、硬度は粘稠。
a 生理学的性質
■ 硝酸塩の還元
硝酸塩を亜硝酸塩に還元しない。
[相] 生育の範囲
pH5〜9の範囲で生育する。6〜8
が好ましい。
温度5〜45℃で生育する。25〜4
2℃が好ましい。
バージイス マニュアル オプ ブタ−きネイティブ
バクテリオロジ−(Bergsy’a lムnualo
f D@t@rminative Mlerobiol
ogy ) 7版、〔編集者ブリード(Bre@d )
* ハレー(Hurray)及びスミス(Smith
) 、ウィリアム アンド ゥイルキンス社(Wil
liams and Wllkins )パルチモア(
Baltimore ) ) 1957年によれば。
バクテリオロジ−(Bergsy’a lムnualo
f D@t@rminative Mlerobiol
ogy ) 7版、〔編集者ブリード(Bre@d )
* ハレー(Hurray)及びスミス(Smith
) 、ウィリアム アンド ゥイルキンス社(Wil
liams and Wllkins )パルチモア(
Baltimore ) ) 1957年によれば。
これらの菌株は微生物学的特徴によりシュードモナス属
に属するものである。この属に属する種の分類上の鍵と
なる性質をパージイス マニュアルでたどってみると、
上記した性質を有する種は見あたらない。
に属するものである。この属に属する種の分類上の鍵と
なる性質をパージイス マニュアルでたどってみると、
上記した性質を有する種は見あたらない。
「ジャーナル オプ バクテリオロジ(Journ+o
f Bact@riology) Jlg 72巻、第
64e〜a59j[(1956)Jにはメタノールを資
化スる細菌としてシュードモナス メタニカ(Pseu
domonas m*than1cm>が発表されてb
る。しかし本菌種とシュードモナス メタニカ(Pa@
udomonaa m@thaniea )とはt細胞
の大きさ、メタンの資化性、37℃での生育、生育最適
温度、生育pHおよび生育最適pHなどが異なる。両者
の相違を下の表に示す。
f Bact@riology) Jlg 72巻、第
64e〜a59j[(1956)Jにはメタノールを資
化スる細菌としてシュードモナス メタニカ(Pseu
domonas m*than1cm>が発表されてb
る。しかし本菌種とシュードモナス メタニカ(Pa@
udomonaa m@thaniea )とはt細胞
の大きさ、メタンの資化性、37℃での生育、生育最適
温度、生育pHおよび生育最適pHなどが異なる。両者
の相違を下の表に示す。
従って、シュードモナス属に属するこれらの菌株はa
lfr@!IK属するものと結論される。
lfr@!IK属するものと結論される。
実験方法は、上記のバージイス マニュアル、l お
よび医科学研究所学友会編「細菌学実資提要」(195
g)に従った。
よび医科学研究所学友会編「細菌学実資提要」(195
g)に従った。
またメタノール含有寒天平板培地、メタノール含有斜面
培地、メタノール含有穿刺培地として次の組成をもちい
た。すなわち、(PJI(4)tHpOa31 + K
HtPO< ’ P 1Mg5o、−7H100,4
f 。
培地、メタノール含有穿刺培地として次の組成をもちい
た。すなわち、(PJI(4)tHpOa31 + K
HtPO< ’ P 1Mg5o、−7H100,4
f 。
CaCl2・2H105mff 、F@SO4嗜 7
H1020m1/。
H1020m1/。
Zn804@7H105ml、MnC11・4H102
mLCuSO4・5H200,2mp−NaC1O,S
P、オ!ヒ寒天20fを純水ltに溶解しpHを6.8
に調整シて120℃で−20分間殺菌した後、メタノー
ル1ofを無菌的に添加した。またメタノール含有液体
培地として杜、上記の培地から寒天を除いたものを使用
し丸。
mLCuSO4・5H200,2mp−NaC1O,S
P、オ!ヒ寒天20fを純水ltに溶解しpHを6.8
に調整シて120℃で−20分間殺菌した後、メタノー
ル1ofを無菌的に添加した。またメタノール含有液体
培地として杜、上記の培地から寒天を除いたものを使用
し丸。
本細菌の培養に使用される培地はメタノールを主炭素源
として含有していることを要し、さらに窒素源、無機質
、ビタミン、その他生長促進愉質などの適量を含有する
培地ならば合成培地または天然培地のいずれでもよい。
として含有していることを要し、さらに窒素源、無機質
、ビタミン、その他生長促進愉質などの適量を含有する
培地ならば合成培地または天然培地のいずれでもよい。
培養液中のメタノールの濃度は6重量−以下が好ましく
、菌の生育および増殖の喪好さからは3重量−以下であ
ることが特に好ましい。
、菌の生育および増殖の喪好さからは3重量−以下であ
ることが特に好ましい。
窒素源としては、たとえばアンモニウム塩。
硝酸塩などの無機窒素化合物、および/lたはたとえば
尿素、コーン・スティーゾ・リカー。
尿素、コーン・スティーゾ・リカー。
カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの有機
窒素含有物が用いられる。その他、カルシウム塩、マグ
ネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩、″wンガン塩、亜
鉛塩、鉄塩、鋼塩などの無機塩、および必l!に応じて
ビタミン類、725〜42℃である。たソし5u−18
,BC−145,お!びB−616につ’vh’cは2
0〜41℃、好ましくは25〜40Cである。オたpH
は5〜9.好ましく社6〜8である。このような条件で
好気的培養を行なう。また培養方式は回分培養または連
続培養のいずれでもよい。
窒素含有物が用いられる。その他、カルシウム塩、マグ
ネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩、″wンガン塩、亜
鉛塩、鉄塩、鋼塩などの無機塩、および必l!に応じて
ビタミン類、725〜42℃である。たソし5u−18
,BC−145,お!びB−616につ’vh’cは2
0〜41℃、好ましくは25〜40Cである。オたpH
は5〜9.好ましく社6〜8である。このような条件で
好気的培養を行なう。また培養方式は回分培養または連
続培養のいずれでもよい。
窒素源としてアンモニウム塩を利用する場合は。
培養期間中にアンモニアが菌体生成のため消費されて培
養液のpHが低下するのでpHを一定圧保つためアンモ
ニア、力七イカリまたはカセイソーダなどのアルカリを
添加する。これらのうちアンモニアを添加することが好
ましい。
養液のpHが低下するのでpHを一定圧保つためアンモ
ニア、力七イカリまたはカセイソーダなどのアルカリを
添加する。これらのうちアンモニアを添加することが好
ましい。
このようにして細菌を培養した後、菌体を培養液より分
離する。分離の方法としては、培養液その11を遠心分
離する方法、培養液中に。
離する。分離の方法としては、培養液その11を遠心分
離する方法、培養液中に。
本発明の細菌よ炒比較的細胞の大きい他の微生物をろ過
助剤として加えたり、あゐいはプレコートすることによ
り培養液から菌体をろ過分離する方法、培養液中に種々
の凝集剤を加え菌体を凝集させ、ろ過あるいは遠心分離
により培養液から菌体を分離する方法、培養液のpHを
5以下にすることにより、あるいはpHを5以下にし、
さらに50〜100℃で加熱すること忙より菌体を凝集
させ、ろ過あるいは遠心分離によ秒菌体を分離する方法
などがある。
助剤として加えたり、あゐいはプレコートすることによ
り培養液から菌体をろ過分離する方法、培養液中に種々
の凝集剤を加え菌体を凝集させ、ろ過あるいは遠心分離
により培養液から菌体を分離する方法、培養液のpHを
5以下にすることにより、あるいはpHを5以下にし、
さらに50〜100℃で加熱すること忙より菌体を凝集
させ、ろ過あるいは遠心分離によ秒菌体を分離する方法
などがある。
分離された菌体は必要ならば、各種の有機溶媒あるいは
水で沈浸され、湿潤菌体を得る。湿潤菌体は乾燥され、
その11あるいはさらに種々の処理をhとこされた後、
飼料などとして利用される。壇た得られた菌体からさら
に核酸。
水で沈浸され、湿潤菌体を得る。湿潤菌体は乾燥され、
その11あるいはさらに種々の処理をhとこされた後、
飼料などとして利用される。壇た得られた菌体からさら
に核酸。
ビタミン類、補酵素、たん白質または脂質などの菌体含
有物質が純粋な物質としてオたは相互の混合物として抽
出され調料1食品、医薬品および工業原料などに使用さ
れる。
有物質が純粋な物質としてオたは相互の混合物として抽
出され調料1食品、医薬品および工業原料などに使用さ
れる。
本発明によって、工業生産によって容易に入手しうる物
質を原料として使用することが出来。
質を原料として使用することが出来。
しかも高収率でたん白含量の高い菌体を得ることが出来
、かつ、N料物質は水溶性であるため培養が容易であり
、簡単な後処理で清浄な菌体を得ることが出来、工業上
極めて有利な方法である。
、かつ、N料物質は水溶性であるため培養が容易であり
、簡単な後処理で清浄な菌体を得ることが出来、工業上
極めて有利な方法である。
以下実施例によってさらに詳しく説明する。
実施例 1
純水1tあたり (N)I4)!HPO43#、KHt
PO44g + Mg5o4−7H100,4t、 C
aC11・2H105mP p F @ S 04 ・
7 HIO20mp、 Z n So 4II7H20
5m1 、 MnCI P4H102ml 、 (’、
uSO4” HtOO,2ml 、 NaC10,5g
、および消泡剤としてシリコーン0.1pを溶解し、p
Hが7.2に調整された培地500−をXt@S二・ジ
ャーに入れ120℃で20分間殺菌した後、メタノール
5gを無菌的に添加し、これに上記と同様な培地(メタ
ノール含有)で37℃で12時間前培養したシュードモ
ナス メタノミガス 5u−18の菌体を含む前培養液
を2マo1%となるように接種し、培養期間中の培養液
のpHが7゜2#/c維持されるようにアンモニア水を
添加しながら38℃で通気攪拌培養を行なった。4時間
の増殖誘導期間の後、対数増殖期となり、対数増殖期で
は世代時1s51.5時間で増殖し培養開始15時間後
、培養液中のメタノール濃度は0001 wt−以下と
なった。この培養液を遠心分離して菌体を分離2回収し
、80℃で24時間乾燥して、培養液12あたF)3.
8fの乾燥菌体を得た。得られた菌体の粗たん白質量F
i84慢であった。
PO44g + Mg5o4−7H100,4t、 C
aC11・2H105mP p F @ S 04 ・
7 HIO20mp、 Z n So 4II7H20
5m1 、 MnCI P4H102ml 、 (’、
uSO4” HtOO,2ml 、 NaC10,5g
、および消泡剤としてシリコーン0.1pを溶解し、p
Hが7.2に調整された培地500−をXt@S二・ジ
ャーに入れ120℃で20分間殺菌した後、メタノール
5gを無菌的に添加し、これに上記と同様な培地(メタ
ノール含有)で37℃で12時間前培養したシュードモ
ナス メタノミガス 5u−18の菌体を含む前培養液
を2マo1%となるように接種し、培養期間中の培養液
のpHが7゜2#/c維持されるようにアンモニア水を
添加しながら38℃で通気攪拌培養を行なった。4時間
の増殖誘導期間の後、対数増殖期となり、対数増殖期で
は世代時1s51.5時間で増殖し培養開始15時間後
、培養液中のメタノール濃度は0001 wt−以下と
なった。この培養液を遠心分離して菌体を分離2回収し
、80℃で24時間乾燥して、培養液12あたF)3.
8fの乾燥菌体を得た。得られた菌体の粗たん白質量F
i84慢であった。
実施例 2
純水1tあたり(NHJtHPO番3t、 IGI、P
o。
o。
4 y 、 Mg804−7H!OIIQ、 CaC1
1@2H105mf 、 Fe804a 7H2020
my 、 ZnSO4・7H,。
1@2H105mf 、 Fe804a 7H2020
my 、 ZnSO4・7H,。
5 mg 、 MnC11・4H102mg 、 Cu
SO4@5H200,2ml 、 N参〇l 0.5
f tおよび消泡剤としてシリコーンo、tpを溶解
し、pHが7.0に調節された培地500−を1を容i
二・ジャーな培地(メタノール含有)で37℃で12時
間前培養したシュードモナス メタノミガス B−61
6の菌体を含む前培養液を2vo1%となるように接種
し、培養期間中の培養液のpHが7.0に維持されるよ
うにアンモニア水を添加 め[、なから37℃で通気攪
拌培養を行なった。6時間の増殖誘導期間の後、対数増
殖期となり。
SO4@5H200,2ml 、 N参〇l 0.5
f tおよび消泡剤としてシリコーンo、tpを溶解
し、pHが7.0に調節された培地500−を1を容i
二・ジャーな培地(メタノール含有)で37℃で12時
間前培養したシュードモナス メタノミガス B−61
6の菌体を含む前培養液を2vo1%となるように接種
し、培養期間中の培養液のpHが7.0に維持されるよ
うにアンモニア水を添加 め[、なから37℃で通気攪
拌培養を行なった。6時間の増殖誘導期間の後、対数増
殖期となり。
対数増殖期では世代時間1.7時間で増殖し。
培養開始20時間後培養液中のメタノール濃度は、o、
ootwt*以下となった。この培養液を遠心分離して
菌体を分離9回収し80℃で24時間乾燥して、培養液
1tあたり4.Ofの乾燥菌体を得た。得られた菌体の
粗たん白含量は83−2−であった。
ootwt*以下となった。この培養液を遠心分離して
菌体を分離9回収し80℃で24時間乾燥して、培養液
1tあたり4.Ofの乾燥菌体を得た。得られた菌体の
粗たん白含量は83−2−であった。
実施例 3
純水1tあた抄(NHa)1HPO43g 、幻(、P
O44f 、Mg804” )H2O0,4p、Ca
cl t@2H105mPHFeSO4・7H1020
mp、 ZnSO4・7H105ml、 MnC11*
4H102ml 、 CuSO4* 5H100,2
ml 、 NaC10,5g 、および消泡剤としエシ
リコーン0.1tを溶解し、pHが6.8に調節された
培地500−をlt容ミニ・ジャーに入れ120℃で2
0分間殺菌した後メタノール5tを無菌的に添加し、と
九に上記と同様な培地(メタノール含有)で、40℃で
12時間前培養したシュードモナス メタノミガス B
C−145の菌体を含む前培養液を2 vol mとな
るように接種し、培養期間中の培養液のpHが6.8に
維持されるようにアンモニア水を添加しながら40℃で
通気攪拌培養を行なった。8時間の増殖誘導期間の後、
対数増殖期となり対数増殖期では世代時間2.3時間で
増殖し、培養開始30時間後培養液中のメタノール濃度
は0 、0.01 Wt9Gとなった。この培養液を遠
心分離して菌体を分離、@収し、80℃で24時間乾燥
して培養液1tあたり3.4tの乾燥菌体を得た。得ら
れた菌体の粗たん白含量は81゜2sであった。
O44f 、Mg804” )H2O0,4p、Ca
cl t@2H105mPHFeSO4・7H1020
mp、 ZnSO4・7H105ml、 MnC11*
4H102ml 、 CuSO4* 5H100,2
ml 、 NaC10,5g 、および消泡剤としエシ
リコーン0.1tを溶解し、pHが6.8に調節された
培地500−をlt容ミニ・ジャーに入れ120℃で2
0分間殺菌した後メタノール5tを無菌的に添加し、と
九に上記と同様な培地(メタノール含有)で、40℃で
12時間前培養したシュードモナス メタノミガス B
C−145の菌体を含む前培養液を2 vol mとな
るように接種し、培養期間中の培養液のpHが6.8に
維持されるようにアンモニア水を添加しながら40℃で
通気攪拌培養を行なった。8時間の増殖誘導期間の後、
対数増殖期となり対数増殖期では世代時間2.3時間で
増殖し、培養開始30時間後培養液中のメタノール濃度
は0 、0.01 Wt9Gとなった。この培養液を遠
心分離して菌体を分離、@収し、80℃で24時間乾燥
して培養液1tあたり3.4tの乾燥菌体を得た。得ら
れた菌体の粗たん白含量は81゜2sであった。
実施例 4
純水1tあた抄(NH4)tsO43t * KHyP
Oa4 p 、 Mg804・7H101p 、 Ca
C11e2H1010mg 、 F@804117H2
060mg 、 ZnSO41I7H1010nsp
、 Mn504−4H105mt、 CuSO4’5H
100,5mg、NaC11JLおよび消泡剤としてシ
リコーン0.2tを溶解し、pHが6゜5に調整された
培地1stを30を容ジャーフ;メンタ−に入れ120
℃で20分間殺菌した。
Oa4 p 、 Mg804・7H101p 、 Ca
C11e2H1010mg 、 F@804117H2
060mg 、 ZnSO41I7H1010nsp
、 Mn504−4H105mt、 CuSO4’5H
100,5mg、NaC11JLおよび消泡剤としてシ
リコーン0.2tを溶解し、pHが6゜5に調整された
培地1stを30を容ジャーフ;メンタ−に入れ120
℃で20分間殺菌した。
これにメタノール30tを無菌的に添加して培地とした
。実施例1と同組成の培地(メタノール含有)で、36
℃で18時間前培養したシュードモナス メタノミガス
5u−18の菌体を含む前培養液を上記の培地に対し
て5マOlチとなるように添加し36℃で通気攪拌培養
を行なった。アンモニア水の添加によってpHは自動的
に6.5に維持され、培養液中でのメタノール濃度が0
.2〜0.3重量−を維持されるようにメタ/−ルをそ
の消費量に合わせて連続的に添加した。培養25時間後
にメタノール添加量は培養液1tあたり60fK違した
。なお。
。実施例1と同組成の培地(メタノール含有)で、36
℃で18時間前培養したシュードモナス メタノミガス
5u−18の菌体を含む前培養液を上記の培地に対し
て5マOlチとなるように添加し36℃で通気攪拌培養
を行なった。アンモニア水の添加によってpHは自動的
に6.5に維持され、培養液中でのメタノール濃度が0
.2〜0.3重量−を維持されるようにメタ/−ルをそ
の消費量に合わせて連続的に添加した。培養25時間後
にメタノール添加量は培養液1tあたり60fK違した
。なお。
増殖中の世代時間は1.6時間であった。培養を停止し
遠心分離によや集菌した。この湿潤菌体を120℃で2
4時間乾燥し、培養液1tあたF)23fの乾燥菌体を
得た。得られた菌体の粗たん白含量は83−であった。
遠心分離によや集菌した。この湿潤菌体を120℃で2
4時間乾燥し、培養液1tあたF)23fの乾燥菌体を
得た。得られた菌体の粗たん白含量は83−であった。
実施例 5
純水1tあた抄(NHi)tHPOi 3 t 、 K
HtPO44y 、 Mg5o4−7)tlo 0.
4#、CaC111I2H!05m1.F@804*
7に10 20mg、ZnSO4・7H105mf、M
nC11114H102ml 、CuSO4・5H20
0,2?PI#、NaC10,5pおよび消泡剤としテ
シリコーン0.1gを溶解し+PHが6゜8に調整され
た培地500mを1を容ミニeジャーに入れ120℃で
20分間殺菌した後、メタノール5tを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地(メタノール含有)で37℃
で12時間前培養しんシュードモナス メタノミガス
BNM−78の菌を含む前培養液を2vol−となるよ
うに接種し、培養期間中の培養液のpHが6゜8に維持
されるようにアンモニア水を添加しながら37℃で通気
攪拌培養を行なった。3時間や増殖誘導期間の後、対数
増殖期とな抄、対数増殖期では世代時間55分で増殖し
、培養開始13時間後、培養液中のメタノール濃度は0
゜001vt9G以下となった。仁の培養液を遠心分離
して菌体を分離9回収し、80℃で24時間乾燥して、
培養液1tあたり3.7tの乾燥菌体を得た。得られた
菌体の粗たん白含量は約85チであった。
HtPO44y 、 Mg5o4−7)tlo 0.
4#、CaC111I2H!05m1.F@804*
7に10 20mg、ZnSO4・7H105mf、M
nC11114H102ml 、CuSO4・5H20
0,2?PI#、NaC10,5pおよび消泡剤としテ
シリコーン0.1gを溶解し+PHが6゜8に調整され
た培地500mを1を容ミニeジャーに入れ120℃で
20分間殺菌した後、メタノール5tを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地(メタノール含有)で37℃
で12時間前培養しんシュードモナス メタノミガス
BNM−78の菌を含む前培養液を2vol−となるよ
うに接種し、培養期間中の培養液のpHが6゜8に維持
されるようにアンモニア水を添加しながら37℃で通気
攪拌培養を行なった。3時間や増殖誘導期間の後、対数
増殖期とな抄、対数増殖期では世代時間55分で増殖し
、培養開始13時間後、培養液中のメタノール濃度は0
゜001vt9G以下となった。仁の培養液を遠心分離
して菌体を分離9回収し、80℃で24時間乾燥して、
培養液1tあたり3.7tの乾燥菌体を得た。得られた
菌体の粗たん白含量は約85チであった。
s+inm例 6
実施例1と同じ組成の培地(メタノールを含着なt/1
)500w4tを1を容ミニージャーに入れ120℃で
20分間殺菌した後、メタノール5tを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地(メタノール含有)で42℃
で12時間前培養したシュードモナス メタノミガス
BNM−78の菌体を含む前培養液をZvol−となる
ように接種し、培養期間中の培養液のpHが6゜8に@
持されるようにアンモニア水を添加しながら42℃で通
気攪拌培養を行なった。6時間の増殖誘導期間の後、対
数増殖期となり、対数増殖期では世・代時間1.3時間
で増殖し、培養開始18時間後、培養液中のメタノール
濃度は0 、0 O1vt−以下となった。この培養液
を遠心分離して菌体を分離2回収し、80℃で24時間
乾燥して、培養液1tTo九り3.5tの乾燥画体を得
た。得られた菌体の粗たん白含量は約83−であつ九。
)500w4tを1を容ミニージャーに入れ120℃で
20分間殺菌した後、メタノール5tを無菌的に添加し
、これに上記と同様な培地(メタノール含有)で42℃
で12時間前培養したシュードモナス メタノミガス
BNM−78の菌体を含む前培養液をZvol−となる
ように接種し、培養期間中の培養液のpHが6゜8に@
持されるようにアンモニア水を添加しながら42℃で通
気攪拌培養を行なった。6時間の増殖誘導期間の後、対
数増殖期となり、対数増殖期では世・代時間1.3時間
で増殖し、培養開始18時間後、培養液中のメタノール
濃度は0 、0 O1vt−以下となった。この培養液
を遠心分離して菌体を分離2回収し、80℃で24時間
乾燥して、培養液1tTo九り3.5tの乾燥画体を得
た。得られた菌体の粗たん白含量は約83−であつ九。
特許出願人 三菱瓦斯化学株式会社
代表者 長 野 和 吉
Claims (1)
- シュードモナス メタノミガスに属し、メタノールを資
化りうるJliIIIをメタノールを主たる炭素源とす
る培地に培養し、該培養液から細菌の菌体を分離するこ
とを4I黴とする微生物菌体の製造方法
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP13249382A JPS5835678B2 (ja) | 1982-07-29 | 1982-07-29 | 微生物菌体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP13249382A JPS5835678B2 (ja) | 1982-07-29 | 1982-07-29 | 微生物菌体の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5823783A true JPS5823783A (ja) | 1983-02-12 |
JPS5835678B2 JPS5835678B2 (ja) | 1983-08-04 |
Family
ID=15082658
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP13249382A Expired JPS5835678B2 (ja) | 1982-07-29 | 1982-07-29 | 微生物菌体の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5835678B2 (ja) |
-
1982
- 1982-07-29 JP JP13249382A patent/JPS5835678B2/ja not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5835678B2 (ja) | 1983-08-04 |
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