JPS58140053A - 抗生物質化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新水溶性（プチド抗生物質１．その製造及び
半生物質の使用法に関する。

本発明の新抗生物質は、Ｄ−プロリン、Ｄ−セリフ、Ｌ
−フロリン、Ｌ−アルギニン、Ｄ−スレオ−β−ヒドロ
キシアスパルチン酸、Ｄ−セリン、Ｌ−トランス−８−
ヒドロキシプロリン及びＬ−スレオ−β−ヒドロキシア
スパルチン酸及び８−ヒドロキシテトラデカン酸のＣ１
４脂肪酸残基を含有する水溶性環状アシルオクタ（プチ
ドである。この新抗生物質は、エムベトバクター（Ｉ！
Ｓｐ　ａ　ｄ　ｏ　ｂαｃｔａｒ）種の菌株Ｇ８９Ｂ−
Ｂ４４５ＣＡＴＣＣ８１９６２）（１）醗酵によって製
造される。

本出願人のために実施された文献検索によって本発明の
抗生物質（発明者によりＢｓ　−２５１７と命名された
）と同じ構成アミノ酸及び脂肪酸残基を含有するポリペ
プチド抗生物質は見出されなかっ九。然し、Ｉｈｂ　−
２５１７は、文献に報告されているポリペプチド抗生物
質のうち、その両性１９７８；米国特許８ユ２６．８１
７　）に、産生菌及び構成アミノ酸のいくつかが抗生物
質ＢＡ−８４８（日本公開１８０．６０１１５Ｂ）に、
環状デスピイプチド構造がパー１９７９）に若干の類似
性を有している。Ｂｕ−２５１７の１アミノ醸成分、ト
ランス−Ｌ−８−ヒドロキシプロリンは、テロマイシン
（Ａ％ｔｉｈｉｏｔｉｃａ　Ａ？Ｉ長、１９５７／１９
５８．８５２〜８５５；米国特許８，０１６．５１６　
）の構造成分の−である。然し、上に挙げた抗生物質は
すべて、それらの化学的及び生物学的性質がＢｗ−２５
１７と明らかに区別することができる。

本発明によって、同化可能な炭素及び窒素源をき有する
水性栄養培地中で深部好気性条件下にエムベトバクター
棟の菌株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４６ＣＡＴＣＣ８１９６２＞と
命名されたエム（ドバクターの新株、或いはその変株又
は変異株を、該培地中該生物によって実質的な量のＢｕ
−２５１７と命名された新水溶性イプチド抗生物質が産
生されるまで培養し、次に、培地からＢｕ−２５１７抗
生物質を回収することによって製造される、Ｂｗ　−２
５１７抗生物質が提供される。８％−２５１７は両性化
合物であり、両性イオンの形態又は医薬として使用可能
な酸又は塩基付加塩として得ることができる。

本発明は、本明細書中Ｂ％−２５１７と命名される新水
溶性ペプチド抗生物質及びエムベトバクター樵の１株Ｇ
３９ｇ−８４４５と命名されるエムベトバクターの新菌
株の醗酵によるその製造に関する。この産生生物は普通
でない細菌株であり、修飾花粉ベート技術ＣＪ、Ｅｌｉ
ｓんａ　ＭｉｔｃｈａｌｌＳ：ｉ、Ｓｅｃ、’１９　：
　５Ｂ　〜７０（１９６８）参照〕を用い、東京山手通
で集めた土壌試料から分離された。この生物は、土壌−
水懸濁液の表面に浮遊するマツ花粉の粒に付着し、その
上で生育する。この生物の培養物は、ワシントン、ＤＣ
のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄
託され、ＡＴＣＣ８１９６２としてその微生物永久コレ
クションに加えられている。

産生生物の分類学 １株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４６は、グラム陰性、無胞子性杆菌
である。細胞は、形が球桿状から細長い桿状まで変シ、
運動性で菌体かも突出する鞭毛をもつ。菌株０８９Ｂ−
８４４６の形態学を下の表ＩＫ要約する。

表　　１ 細胞の形　　　：球桿状ないし細長い桿状。

時に部分的に膨張又は屈曲した糸状体 及び空砲化した細胞を生じる。

細胞の大きさ、＃ＪＬ　：　０．５〜０．８　Ｘ　８．
０．若干、長さ５〜胞子　　　　　　：形成し麿い。

運動性　　　　　二連動性で菌体から突出する鞭毛をも
つ。

同時に鞭毛のない非運動性細胞の形成。

細胞中鞭毛の数　：４〜１゜ ふさ状ヘリ　　　：備かに生じる。

単−細胞父は＃ｌ胞：なし 塊のすべ夛運動 グラム陰性　　：陰性 菌株Ｇ３９Ｂ−８４４６は、栄養寒天及びＹＰ＠地（イ
ースト抽出液ｏ、ｏ　ｓ％、ペプ）　７０．１％、　Ｎ
ＧＣＩ　０．０１％、ｊｆ６．６〜６．８）上はげしく
生育し、２種の型の集落、Ｒ（ラフ）及びＳ（スムーズ
）を生じる。中温性、酸化性、アルカリ感受性及びハロ
ゲン塩類嫌忌性である。菌株Ｇ８９ｇ−Ｂ４４６の培養
及び生理学的を下の表２に示す。

ベンジッチの方法ＣＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚ’／
ｍｏｌｏｇ！、　ＩＩＩ巻。

７１５〜７２８貞、　Ｂ、ｐ、ｆｏウィッ−Ｆ−及びＮ
、Ｏ，カブラン編、アカデミツク・プレス、ニューヨー
ク、１９５７）Ｉｃよって分析した細胞ＤＮＡのダアニ
ン及びシトシン含量は６６．５±１．５モル−であった
。菌株０８９Ｂ−８４４５の抗生物質感受性を紙円板−
寒天拡散法によって定量した。

結果を表８に示す。

表２ テトラサイクリア　　　　　８０ｍｃｌ　　　　Ｓ　　
　　　　Ｓ　　　　　　Ｓ辛　ディフコの抗生物質感受
性円板 来電　栄養寒天上２８℃で２日装置区定敬。略号：ｓ（
感受性）、Ｒ（抵抗性）、Ｉ（中間）。

Ｂａｒｇｇｙ’ａ　Ｍａｎｎｕａｌ　　（１９７４）中
の６ピ畝によれば、菌株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４５は属フラボ
バクテリウム（Ｆｌａｖｏ　−ｂａｃｔｇｒｉｕｒｎ）
の１節に記載されている椙に似ているが、それは異種の
種を含む。数人の研究者は、フラボバクテリ１７Ａ輌の
内配列を勧告し、低いＧＣ含量（ぐ４ｏ囁）をもつダラ
ム陰性、非運動性、非すべり性、非拡散性菌株は属フラ
ボバクテリウムに属すべきであり、一方高いＧＣ含量（
６０〜７０嘩）をもつダラム陰性、非運動性又は運動性
の雌体から鞭毛が突出した種は属エムベトバクターに移
されるべきことを提案しそいる。菌株Ｇ３９Ｂ−８４４
５の形相学的及び生理学的特性及び上述した新しい分類
学的基準から見ると、菌株Ｇ３９Ｂ−８４４５は、補エ
ムベトバクターに属すると考えられる。

７７１１株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４５は、次の理由でエムベト
バクター属の新種であると信じられる： Ｌ　菌株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４６Ｆｉ、その生理学的及び生
化きる。

２、ｉ１株ＧＢ９Ｂ−Ｂ４４５は、その非運動性、８７
℃で生育しないこと、シュクロースの加水分解陰性その
他の生化学的反応がペプチド抗生物質ＢＡ−８４８の産
生Ｈ１７１６（日本公開１８０６０１　／　５８　：Ｆ
ａｒｖｙｉｏｃ９２０５２Ａ１５１）から区別すること
ができる。

ゲン場類耐容（５％Ｈａ（ＡＪ中生冑陽性）である。菌
株Ｇ３９８−Ｂ４４５は、対照的に明らかなハロゲン塩
類禁忌性を有し、１％又はそれ以下のＭａｃｅ濃度にお
いてのみ生育する。

他の生物の場合と同じく、菌株ＧＢ９Ｂ−８４４５の特
性は変動を受ける。例えば、Ｇ３９３−Ｂ４４５の人工
変株及び変異株は、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線及び
化学物質のような檀々の訝知の変異誘発豊凶で処理する
ことによって得ることができる。Ｂｕ　−２５１７抗生
物質を生じるエムイドバクタ一種の菌株のすべての天然
及び人工変株及び変異株（本明細書中以丁変異株という
）は、本発明の範囲に包含されるものである。

抗生物質産生 抗生物質Ｂｕ−２５１７は、水性栄誉培誉中深部好気性
φ件下でＡＴＣＣ８１９６２の同定特性を有するエムペ
ドバフタ一種のＢｂ−２５１７産生株、最も好適には１
株五九すドバクタ一種の菌株Ｇ３９Ｂ−８４４６を培養
することによって産生される。この生物は、同化可能な
炭素源、例えば、同化可能な炭水化物を含有する栄養培
地中で生育させる。適当な炭素源の例は、グルコース、
リボース、ガラクトース、フラクトース、マンノース、
シュクロース、ラクトース、可溶性デンプン及びグリセ
ロールを包含する。栄養培地は父、魚肉、大豆ミール、
コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、落花生粉
、イーストエキス又はアンモニウム塩のような同化可能
なｉｊＩ素源を含有する。塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、硫酸マグネシウム、炭酸力ルシシウム、燐酸塩等の
ような無機塩が、所要の場合には添加される。銅、マン
ガン、鉄、亜鉛等が、所望の場合に培地１１ に添加されるか、又は培地の他の成分の不純物として供
給されてよい。湿量温度は、Ｂｕ−２５１７産生株力を
生育することができる任意の温度、例えば７℃〜４２Ｃ
であってよいが、２５〜８５℃、特に２７〜８２℃で醗
酵を実施することが好適である。媒地中中性又は中性に
近い初期ｐＨ１ｆ用いるのが好適であり、抗生物質の産
生け、一般に約２〜７日間実施される。通常、至適の産
生はｆＪ２〜８日（振とり培養）で達成される。比較的
少量の生産のためには、振とりフラスコ及び表面培養を
用いることができるが、比較的大量の生産の丸めには、
無菌タンク中深部造気培養が好適である。タンク醗酵が
実施されるべき時には、ブロス培養にこの生物の斜面又
は土壌培養又は凍結乾燥培養を接種することによって栄
養ブロス中に増殖接種物を生産することが望ましい。こ
のようにして活性接種物を得て後、醗酵タンク培地に無
菌的に移される。タンク及びびんの中の通気は、醗酵培
地を通してか又はその上に無鉋空気’ｔ’ｊｌｉ劇的に
送ることによって得ることができる。機械インペラーに
よって更に攪拌を得ることができる。必要な場合に４ｉ
ラード油のような消泡剤も添加することができる。

醗酵培地中のＢ％−２５１７の産生は、試験菌としてバ
シラス・サブチリス（ＢａｅｔＬ１％１Ｊ製ｂｔｔｌｉ
ｓ）ＰＣＩ−一−−−−−−−□−−□−□−“１１１
１１″′１１１１２１９を使用する紙円板−寒天拡散定
量によって醗酵の過揚で容易に追跡することができる。

Ｂ％−２６１７の単−及び精製 至適のブロス力価が得られて後、得られたブｐスｔｐＨ
約８まで酸性にし、次に算−ブタノールのような水非混
和性有機溶媒と攪拌する。抗生物質活性を含有する有機
溶媒層を次に分離し、真空Ｓ発乾固する。次に残留−を
適当な有機溶媒、例えばメタノールに溶解し、溶液を適
当な抗溶媒、例えばアセトンで希釈して粗製の固体とし
てＢｓ−２６１７抗生物質を析出させる。

上述し九とおり得られたＢｓ−２５１７抗生物質は、ダ
ウエックス１−Ｘ２のような陰イオン交換樹脂を用いる
イオン交換クロマトグラフィーによって精製することか
できる。１例として、粗Ｂ％−２５１’ｌダ９エックス
１−Ｘ　２　（ＣＨｍＣＯＯ−形）のカラムに施用し、
水、０．５Ｍ酊酸アンモニウム及び１：１（νｌ／ｌ）
酢酸アンモニウム−メタノール混合物で順次展開するこ
とができる。精製Ｂｓ−２５１７をメタノール性酢酸ア
ンモニウム溶液で溶離し、ダイアイオンＨｐ−２０のよ
うな非イオン系マクロ網状菖酋体上カラムクロマトグラ
フィーによって更に精製することができる。

Ｂ％−２５１７の特性 Ｂｍ−２６１７は、上述した精製処理において白色無定
形固体として単離される。この抗生物質は、中性及びア
ルカリ性ｐＨで水溶性（溶解度：ン１０％）でめる。そ
の水溶液は、２．４〜４．２のｐＨ範囲で沈Ｍｔ生成す
る。Ｂ１４−２６１７は、メタノール、エタノール、水
性アセトン、ジメチルホルムアンド及びジメチルスルホ
キシドに可溶性である。算−プロパノール、駕−ブタノ
ール及びジオキサンに溶解性は小さく、他の有機溶媒に
実際上不溶性である。

Ｂ襲−２６１７は、板目試薬に陽性反応上水すカーニン
ヒドリン及びアンスロン反応陰性である。下に示される
シリカゲル（Φ−ゼルグル６０Ｆ８４．メルク）薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）系中Ｂ％−２５１７につい
て次のＲｆ値が得られた： Ｒｆ　Ｏ，５５１０％酢酸アンモニウム：メタノール（
１：１ｆ／Ｗ） Ｒｆ　Ｏ，２８％−プロパツール：　ＨｘＯ：酢酸（７
０：８０　：　１　　ｖ／ｗ） Ｂｓ−２５１７の分析標品は憤ｐ２２４〜２２７℃（分
解）を有する。浸透圧法によって分子量１２７０を示し
、ＨＴ、８８．Ｎ１２．６Ｔ。実験値：　Ｃ４８，５１
、Ｈ６，９０。

Ｎ１２．５８゜Ｂｓ−２５１７は両性物質であり、水中
ｐＫα８．０．４．１及び１１．ｏｋ有し、滴定当量１
２５０ｔ−示す。

元学活性二（”）Ｄ　＋９’　　（ｃ　ＬＯ、ＣＨｓＯ
Ｈ）　でｈる。

Ｂｂ　−２５１７は、ＵＶスペクトルにおいて２１０ｓ
ｍよシ上に吸収極大を示さない。Ｂｓ−２５１７の赤外
スペク）ル社、８８５０□Ｉ付近にポリヒドロキシル吸
収、１７８５−でにエステルカルボニル、１６８ｏ及び
１５４０１１にアミノカルボニル吸収帯を示す。Ｂｘ　
−２６１７のプロトンＮＭＲスペクトルは、８重線メチ
ル基及び数個のメチレン及びメチンプロトン上水す。芳
香族又は二重結合プロトンは観察されない。

＃５−２５１７の構造 Ｂｕ−２５１７＃ｉ、封管中１０５℃で１６時間６ＮＩ
ｉＣＩｌによって加水分解された。得られた溶液をジエ
チルエーテルと振とうして酸性親油性物質を抽出した。

アきノ酸断片の混合物を含有する水層をダウエックス５
０Ｗ−７４のカラム上クロマトグラフ処理して５種のア
ミノ酸−セリン、プロリン、アルギニン及びＩ及び■と
命名された２種の普通でないアミノ酸を分離した。アミ
ノ酸Ｉの構造は。

ｓｙＣｇａ）種により産生される微生−の代謝産物とし
て報告されているＣＪ、Ａ％ｔｉｈｉｏｔｉｃｓ　２８
　：　　８２１〜８２８．１９？６）スレオ−！−ヒド
ロキシアスバルチン酸でアルと決定された。アミノ酸■
は、テロマイシンの構造成分の１９６７／１９５Ｂ、８
６２〜８６５））ランス−Ｌ−８−ヒドロキシプロリン
と同定された。

次のＢｕ　−２５１７のアミノ酸成分のモル比及び−元
方が、定量アミノ酸分析及び単離されたアミノ酸の各々
（こついて旋光値の測定の結果確立されも ルチン酸 トランス−８−ヒドロキシプロ　　　１　　　　　　ｌ
Ｌリン セリン　　　　　　　　　　　　２　　　　２Ｄプロリ
ン　　　　　　　　　　　　　　　２　　　　ｌＤ＋ｌ
Ｌアルギニン　　　　　　　　　　　　１　　　　　１
ＬＢｓ−２５１７の酸加水分解−から抽出された酸性親
油性物質をそのメチルエステルに変換し、ＮＭＲ及び質
量分析法によって分析した。この練性化合物の構造は、
式會有する８−ヒドロキシテトラデカ／酸と決定され友
。

上述したように、Ｂ％−２５１７の構造成分として８棟
のβ−ヒドロキシ基金有するアミノ酸部分が存在する。

β−ヒドロキシアミノ酸を含むアミド結合は、Ｎ−４０
移動によって酸加水分解上受は何いことが刈られている
。かくして、温和な酸性条件下にＢｕ−２５１７のコン
トロールされた加水分解によって一連の小ペプチド断片
が得られた。

常法によるペプチド断片の各々についてアミノ酸配列の
解明によって下に示されるようなり５−２５１７の全構
造が確立された： Ｐｒｏ　　　＝プロリン Ｓａｙ　　−セリン Ａｒｇ　　　−アルギニン β−０＃−Ａｓｐ　＝ｙ、ｖｌ−β−ヒドロキシアスバ
ルチン酸 ８−０＃−Ｐｒｏ　＝上之ヱ２−８−ヒドロキシプロリ
ン 環生成 上に示したとおシＢｕ　−２５１７は両性物質であり、
酸及び塩基によシ共に塩を生成する。医薬として使用可
能な酸及び塩基とのＢｓ−２５１７の塩は、両性イオン
の形態のＢｗ　−２５１７に抗生物質の性質が実賞的に
均等であるので、本発明の範囲内に包含されるものであ
る。有機又は無機酸、金Ｍ（例えば、アルカリ土類金属
、アルカリ金属、アルミニウム等）、アンモニア及び有
機塩基金用いる常用の環生成操作によって適当な塩を生
成させることができる。

適当な塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム及びアルミニウムとの金属塩、アンモニウム塩
、トリエチルアミン、駕−プロビルアミン、トリーｎ−
ブチルアミン、ピペリジン、エタノールアミン、ジエタ
ノールアンン、トリエタノールアミン、エチレンジアミ
ン、Ｎ、Ｎ’−シベンジルエチレンジアミン、ベンジル
アｌ’、ｌス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びピ
ロリジンのようなアミンとの塩、並びに塩酸、臭化水素
酸、　ｉｔｓ、燐酸、酢酸、フロピオン酸、オレイン酸
、バルミチン酸、クエン酸、コハク酸、硝酸、乳酸、酒
石酸、マレイン酸等のような有機又は無機酸との塩を包
含する。環生成の１例として、Ｂｓ−２６１７に水に溶
解し、適当なＭを添加して所望の酸付加塩を得ることが
できる。同様に、Ｂｕ−２６１７の任意の水溶液に塩基
性ｐＨを得るのに十分な塩基を添加し、次に凍結乾燥し
て固体形態の塩を回収することによって塩基付加塩ｔ−
擬遺することができる。

生物学的性質 Ｂｍ−２５１７は、試験管内及び生体内共に種々の好気
性及び嫌気性ダラム陽性画の生１ｉｔｔｌ−阻止する。

Ｂｓ−２５１７の最小阻止＋１度（ＭＩＣ）ｔ−１多］
１接檜装置を使用する系列２倍希釈法によって種々の好
気性及び嫌気性菌について測定した。好気性菌に対して
はミュラー一ヒントン寒天を一般に、連鎖状球菌、ナイ
セリア（Ｎａｉａｓａｒｉａ）及びヘモフイラｘ（Ｈａ
ｍｍｏｐｈｉＬｕｇ）棟のような＠餐しにくい好気性−
に対してはＧＣ培地（栄研）。

並びに嫌気性菌に対してはＧＡＭ寒大倍地（日永）ｌｒ
ｆ用した。！ｊＩＣ種材料サイズは、連鎖状琢鉋、ナイ
セリア及びヘモフィラス檀については１０”ＣＦＵ／ｍ
、他の好気性菌については１０’そしてすべての！ＩＩ
気性−についてＵＩＯ’〜１０”に１％ｍｅした。アン
ホマイシン、アンピシリン、クロラムフェニコール、タ
リンダマイシン、エリスロマイシ／、カナマイシン及び
バンコマイシンを参照抗生物質として使用した。

Ｂｓ−２５１７の試験管内抗菌スペクトルｔ、好気性菌
について下の表４、嫌気性菌について表５に示す、試験
した好気性ダラム陽性菌（多くの抗生資質耐性連鎖状球
菌を含む）はすべて、１．６惧Ｃ１ｉ／′ＩＬｔ又紘そ
れ以下でＢｓ−２６１７によって阻止された。Ｂｓ−２
６１７は、一般にブドウ状球菌に対してアンホマイシン
（両性ペプチド抗生物質）より２〜４倍、連鎖状原菌に
対して８〜８２倍活性が高かった。Ｂｓ　−２５１７は
、好気性ダラム陰性−に対して活性を示さなかった。嫌
気性菌に対しては、種々のαＣ算−８）の菌株ｔ−含む
試験したグラム陽性桿菌及び球菌のシンーエリス日マイ
シ／抵抗＆Ｕ、　　１．６〜８．１ｍｃｆ／ｍのＢｓ−
２５１７に感受性であった。バタテロイデス（Ｂａｃｔ
ａｒｏｉｄａａ）及び７ンバクテリウＡ（Ｆｕａｏｂａ
ｃ−ｔａｒｉｗｔｎ）種のような嫌気性ダラム陰性桿−
は一般にＢｕ−２５１７に対して抵抗性であり、一方り
エイロネラ（Ｖａｉｌｌｏｘａｌｌａ）樵（グラム簾性
球Ｈ）の２株はＢｕ−２５１７の低績度において阻止さ
れた。Ｂｓｃ−２５１７の抗嫌気性劇活性は、アンホマ
イシンより２〜１６倍高かった。

表　　４　（続） プロテウス・ミラビリス　　　Ａ９５５４　　　　　　
　ン１００　　　ン１００プロテウス・バルガリス　　
　Ａ９４８６　　　　　　　＞１００　　　　＞１００
Ａ２２４８１　　　　　　　　　　　　ン１００　　　
＞１０００．４　　　０Ｊ３１６０　　　　０．８　　
＞１０００．８　　　　　Ｌ６　　　　１００　　　　
０．２　　）１０００．８　　　１ＳＬ６　　　　ン１
００　　　　０．４　　＞１０００．４　　　　　＆１
　　　　１００　　　　０．４　　＞１００００　　　
）１００　　　　１００　　　＞１００　　　ン１００
α４　　　　　　　　　　　　　　　　　　ンｉｏ。

Ｑ、４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　＞
１０００．８　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　＞１００５０　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　）１００表　　６　（続） ＣＵＨ−２４２１００＞１００ Ａ２０９２６　　　　２５　　　５０ Ａ２０９２８−１　　　　２５　　　２５Ａ２０９２９
　　　　　８．１　　５ＯＡ２１９００　　　　　６．
８　　２５．４２２０５８　　　　＞１００　　＞１０
ＯＡ２２５８８　　　　２１００　　　＞１００Ａ２２
６９６　　　　）１０Ｇ　　＞１００８．１　　　１．
６　　　　５０　　　　　Ｕ　　　　５０５０　　　１
．６　　ン１００　　　＞１００　　　　２５０．２　
　　８．１　　　　００２６　　＜０．０５　　　　ｍ
１０．２　　　　Ｂ、１　　　　　　α０２６　　０．
０１８　　　　ｍ１０．８　　　８．１　　　　　ｇ、
１　　　　１．６　　　　　側０．２　　　８．１　　
　　　１．６　　　　　ＯＪ　　　　　ｍ８６．８　　
　　Ｂ、１　　　　　０．２　　　　２Ｌ１　　　　５
０＞１００　　　８．Ｉ　　　　　ＱＯ２５０，４５０
ン１００　　　　８．Ｉ　　　　　Ｑ、ｌ　　　　　Ｌ
ｌ　　　　２５２５　　　　１．６　　　　　６．８　
　＞１００　　　　５０＞１００　　　　６．８　　　
　１２．５　　＞１００　　　　ン１００１２．６　　
　６．８　　　　　１．６　　　　１．６　　　　　　
邸１２Ｊ　　　　６．８　　　　　１Ｊ　　　　　１．
６　　　　　＆８α０２５　　１．６　　　　　　α０
１ｇ　　　　０．２　　　　　１．６ＯＡ８．１　　　
　　０４　　　　　＆Ｉ　　　　　Ｑ、８Ｂ％−２６１
７の生体内有効性を、好気性及び嫌気性グラム陽性病原
菌％　８８オーレウス（αｓｒｇｓａ）スミス、Ｓ。

オーレウスＢＸ−１６８８、Ｓ、ピオゲネスＡ２０２０
１゜Ｓ、　二ｘ−モニｘ−（Ｐｓ＊ｓｍｏｓｊｃｎ　）
　Ａ　２０７５９及びＣ。

バー７リンゲンスによって生じたマウスの実験感染で評
価した。マウスをブタ胃ムチン（アメリカンラボラトリ
−、オマハ、ネブラスカ州）の６％懸濁液中病原菌の多
回の致死量で攻撃した。Ｂｓ−２５１７は、＃ｌＩ！ｌ
ｉ攻撃の直前に筋肉内投与され九マウスｔ−６日間観察
して中央防御量ＣＰＤｍ）ｔ−決定した。対照抗生物質
としてアンホマイシンを比較して試験した。表６中下に
示すように、１３ｗ−２６１７の生体内活性は、アンホ
マイシンの力価と同等ないし８倍の範囲であった。

マウスにおける血中濃度ｉＢ１！−２５１７の静詠内又
は筋肉内投与に引続いて測定した。血液試料を眼窩側か
ら集め、試験舊としてＳ、ルテア（ｈ４ｔ−α）７’Ｃ
１１００１ｔ−使用する紙円板−叢天拡散法によって定
量した。表７に示されるように、Ｂｗ　−２５１７は、
非経口的によく吸収さｊ。

高い持続性の血中濃度が得られ友。８０Ｉ！に９／ｋＩ
Ｉの筋肉内投与の際、７時間後向測定可能な血中＃度が
観察され九Ｂｍ−２５１７は、経口投与した時吸収され
なかった。

表　　７ １分　ＴＯ２２４−−− ６４１１６２−−− １０８８１８１１１２２− １６−−−−４５ ２０２８６８１８８２− ８０１８７８１４４８４５ ４５１８６４１４４１− １時間　１４　　　５０　　１８　　　８６　　４７Ｌ
、６　７９８２１１　８５− ２　　＆６２ａ　＆９２８− ８　　＆１１４　ｕ　１８５５ ５　　　　　−−（２，０＆９　　− ？−−−＆８２！１ １ｇ　　−−−−１５ ２４−−−−＜側 半減脈時間）ＱＪ３１　　　（＆８７　　　＆６　　　
１Ｊ　　　＆７普　曲線下面積 Ｂｓ　−２５１７の急性毒性１−、靜詠内及び筋肉内径
路によって測定した。４００■／ゆ（ｉτ）又は１６０
０ダ／に９（ｉｓ）の用量まで死亡はなかった。マウス
は、８００〜／ゆの靜詠内用量で死亡し、静詠内ＬＤ、
。は５６０１１１１Ｐ／ｉ’ｇと計算された。

上に論じた試験管内及び生体内データによって示される
ように％Ｂ％−２５１７は抗菌剤として有用であり、単
独又は他の抗菌剤と組合せて使用してグラム陽性好気性
及び嫌気性細菌の生育を防止するか、或いはその数音減
少させることができる。Ｂｓ　−２５１７に感受性であ
る細菌によっておこされる感染性疾病の処置のために、
家禽及び動物（ヒトを含む）において治療剤として特に
有用である。又、Ｂ％−２５１７は、動物飼料中の栄養
補充剤として又痙癒の処置剤として価値がある。

本発明は、不活性医薬用担体又は希釈剤と組合せ友有効
抗鉋量のＢｓＬ−２１５７（その医薬として使用可ｎヒ
な堪を含む）を含有する医薬用組成物？その範囲内に包
含する。

このような組成物は、問題の投与径路に遍当な任意の医
薬用形態で調合することができる。非経口投与のための
このような組成物の例は、無菌の溶液、懸濁液及び乳濁
液を包含する。非経口投薬形態は又、使用直前に無―水
、生理食塩水又はいくつかの無―注射用媒質に＃解する
ことができる無菌固形組成物の形態で製造することがで
きる。ＢｓＬ−２５１７は又、軟膏、クリーム、ローシ
ョン、乳液、サーブ、皮膚軟化剤及び噴霧剤のような局
所用製剤中に配合することができる。

本発明のＢ％−２５１７抗生１ＩＩＩ實（その医薬とし
て使用可能な塩を含む）は、抗生物質の濃度が処置され
る特定の菌について最小阻止濃度より大きくなるように
投与される。

勿論使用される抗生物質の実際の用量は、年令、体重、
性、食事、投与径路、***速度、患者の条件、薬の組合
せ及び処置される特定の位置及び疾病のような因子を考
直して後医師又は獣医師によって決定されることが認め
られる。

本発明は又、グラム陽性好気性又は嫌気性細菌に侵され
良動物宿主に有効抗菌用量のＢｗ　−２５１７又はその
医薬として使用可能な塩を投与することにより該宿主（
特に家禽及びヒ）ｆ含む動物）”ｔｆｔ３僚処置する方
法を提供する。

次の実施例は、例示としてのみ示され、本発明の範囲を
限定するものではない。ダイアイオンＨＰ−２０（三菱
化成工業の商標）は、非イオン系マクロ網状（マクロ孔
性）重合体樹脂である。ダウエックス１−Ｘ２（米国ミ
シガン州ミドランド在ダウ・ケミカル・カンパニーの商
標）は、ポリスチレン型の強塩基性陰イオン交換樹脂で
ある。ダウエックス５０Ｗ−Ｘ４（ダウ・ケミカル・カ
ンパニーの商標）は、ポリスチレン展の強酸性陽イオン
交換樹脂である。

例　　Ｌ エムベトバクタ一種の菌株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４４５の生物学
的純粋培養のよく生育した斜面培養物を使用して２％の
可溶性デンプン、１％のグルコース、０．２％の肉エキ
ス、０．２％のイーストエキス、０．５％のＮＺケース
及び０．２％のＣａＣ０ｍ　を官有する樵培地（減陳の
前にｐＨ７，０に調節）に接種した。この種培養を回転
式振とう器（２５０ｒｐｍ）上２８℃で２４時間温重し
、生育物５１１ｊｔ−１８％のシュクロース、２％のア
マニ油、０．８％の（ＮＨ番）、ＳＯ，及び０．５％の
ＣａＣＯ２よりなる醗酵培地１００１１１１ｔ−含有す
る５００１の三角フラスコに移した。培地のｐＨｔ＃Ｉ
の前に７．０に調節した。２８℃において回転式振とり
器上醗酵を実施し、醗酵ブロス中の抗生物質活性を試験
−としてチャ２？・用する紙円板−鎌天拡散定量によっ
て追跡しも振とり培養中の抗生物質生産は、一般に４８
〜７０時間後最大に達し六− 又、上述したのと同じ組成を有する生産培地１Ｇ’Ｊツ
トルを含有するジャー醗酵器２０において醗酵研究を行
なっ九１１１１紘、２８℃において２６０デｐｔｈの攪
拌下に２０〜２ｓ時間行なわれも 例　　え 収得シ九Ｂ％−２６１７のブロス（８７リツトル）ｔ６
ＮＭＣＩの添加によってｐＨ８，０まで酸性に１１等量
の襲−ブタノールと共に１時間攪拌しも抗生物質生産を
含有する襲−ブタノール層を分、離し、乾固するまで真
空蒸発させた。残留物をメタノール（１００１１７）に
溶解し、溶液管アセトン１リットルで希釈してＢ葛−２
５１７抗生物エツクスＩ　　Ｊ２（ＣＨｓＣＯＯ−形、
８００ｊｌｊ）に施用し、これを水（５リツトル）、０
．６Ｍ酢酸アンモニウム（５リツトル）及び１　：　１
　（ｖ／ｗ）　１．０Ｍ［ｒＦａｌアンモニウム：メタ
ノール混合物（５リツトル）で順次展開した。メタノー
ル性酢酸アンモニウム溶液で溶離した生物活性画分をプ
ールし、小容（約８０−）になるまで真空濃縮した。こ
の溶液【ダイアイオンＨ／’−２０（８００１１ｊ）の
カラムに通し、これ上水（６リツトル）、５０％水性メ
タノール（８リツトル）及び８０％水性メタノール（５
リツトル）で順次展開した。８０％水性メタノール溶離
液から得られた生物活性画分を蒸発して純Ｂｓ−２４１
７１１品（８，８Ｏｆ　）　ｔ−白色固体として得た。

第１頁の続き ■発　明　者　管厚孝子 和光市広沢２−２ ０発　明　者　富田康二 東京都世田谷区上用賀５−２− 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５８年特許願第３５７６号 ２、発明の名称 抗生物質化合物 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　プリストル萬有研究所株式金社 願書に添付の手書き明細書 龜補正の内容゛ 別紙のとおり手書き明細書をタイプ浄書に補正した。

丸だし、内容の補正はない。

手続補正書 昭和５８年４月１日 特許庁長官若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５８年特許ａ第３５７６号 ２、発明の名称 抗生物質化合物 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　プリストル萬有研究所株式会社 ６、補正の対象 明細書の特許請求の範囲および発明の詳細な説明の欄７
、補正の内容− （１）　　％許請求の範囲を別紙のとおり補正する。

（２）明細書を次のとおシ補正する。

（３）同書８頁６行の［ｘ３．ｏ　　〜　長さ５〜」と
あるを次のとおシ補正する。

ｒＸｌ、０〜３．０゜　１部のものは、長さ５〜１０」
（４）同１１３５頁表６中の「細胞／マウス　　ＸＬＺ
）、、ｊとある１次のとおシ補正する。

特許請求の範囲 １９式 のペプチド抗生物質化合物Ｂ１４−２５１７又はその医
薬として使用可能な塩（ただし式中Ｐｒｏはプロリン′
に表わし、Ｓａｒはセリンを嵌わし、ｋｌはアルギニン
１表わし、β−０Ｈ−ルｐはスレオーーーヒドロキシア
スハｌｋチン酸ｔ−表わＬ、３−０Ｈ−Ｐｒｏ　ハ）　
ラ／スー３−ヒドロキシプロリンを表わす）。

２、その両性イオンの形態の特許請求の範囲第１項記載
のペプチド抗生物質Ｂｓ−２５１７゜ ３、同化可能な炭素及び窒素原管含有する水性栄養培地
中で深部好気性条件下にエムベトバクタ一種のＢｇ−２
５１７産生株金、該培地中に該生物によって実質的な量
のＢｕ−２５１７が産生されるまで培養し、次に培地か
らＢ％−２５１７抗生物質會回収することを特徴とする
ペプチド抗生物質Ｂｂ　−２５１７の製法。

４、　　Ｂ％−２５１７産生株がＡＴＣＣ３１９６２の
同定４ＩｌＦ性會有する特許請求の範囲第３項記載の方
法。

５、　　Ｂ％−２５１７抗生物質會その医薬として使用
可能な塩に変換する追加工程を包含する特許請求の範囲
第３項又は第４項記載の方法。

６、不活性の医薬として使用可能な担体又は希釈剤と組
合せた有効抗菌量のＢｇ−２５１７又はその医薬として
使用可能な塩よ〉なる医薬用組成物。

７、有効抗菌用量のＢｓ−２５１７又はその医薬として
使用可能な基管細菌感染に侵され九動物宿主に投与する
ことよシなる骸宿主の治療処置法。

８、式 （ただし式中Ｐｒｏはプロリンを表わし、Ｓａｙはセリ
ン全表わし、＃ｇはアルギニンを表わし、β−０Ｈ−Ａ
ｓｐＦｉＸどオーβ−ヒドロキシアスパルチン酸ヲ表わ
し、３−０Ｈ−Ｐｒｏはトランス−３−ヒドロキシプロ
リンを表わす）の抗生物質Ｂｕ−２５１７を、水性栄養
培地中培養する時回収可能な量で産生ずることができる
微生物エムベトバクタ一種の菌株Ｇ３９３−　Ｂ４４５
（ＡＴＣＣ３１９６２）、或いはその変異株の生物学的
純粋培養物。

３４０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 のペプチド抗生物質化合物Ｂｓ−２５１７又はその医薬
   として使用可能な塩（ただし式中Ｐｒｏはプロリンを表
   わし、Ｅａｒはセリンを表わし、／ｋｒｇはアルギニン
   を表わし、β−ＯＨ−Ａｓｐ　ハスレオーーーヒドロキ
   シアスパルチン酸ヲ表わし、８−０Ｈ−Ｐｒｏはトラン
   ス−８−ヒドロキシプロリンを表わす）。 ２、その両性イオンの形態の特許請求の範囲第１項記載
   の（プチド抗生物質８１＆−２５１７゜ ８、同化可能な縦木及び窒素源を含有する水性栄養培地
   中で深部好気性条件下にエムベトバクター機のＢｕ−２
   ５１？産生株を、該培地中に該生物によって実質的な量
   のＢｕ　−２５１７が産生されるまで培養し、次に培地
   からＺ？ｕ−２５１７抗生物質を回収することを特徴と
   するペプチド抗生物質Ｂ％　−２５１７の製法。 ４．８に一２５１７産生株がＡＴＣＣ３１９６２の同定
   特性を有する特許請求の範囲第８項記載の方法。 ５、　８Ｍ−２５１７抗生物質をその医薬として使用可
   能な塩に変換する追加工程を包含する特許請求の範囲第
   ８項又は第４項記載の方法。 ６、不活性の医薬として使用可能な担体父は希釈剤と組
   合せた有効抗鴎量のＢｕ−２５１７又はその医薬として
   使用可能な塙よりなる医薬用組成物。 ７、有効抗菌用量のＢｗ　−２５１７又はその医薬とし
   て使用可能な塩を細菌感染に侵された動物宿主に投与す
   ることよりなる該宿主の治療処置法。 ８、式 （ただし式中Ｐｒｏはプロリンを表わし、ｓ＃ｒはゼリ
   ンを表わし、とりはアルギニンを表わし、β−０Ｈ−Ａ
   ｌｐはスレ」ニーβ−ヒドロキシアメパルチン酸を表わ
   し、ＩＪ−ＯＨ−Ｐｒｏは一トランスー８−ヒドロキシ
   プロリンを表わす）の抗生物質Ｂｓ　−２５１７を、水
   性栄養培地中培養する時回収可能な量で産生ずることが
   できる微生物エム（ドパフタ一種の菌株Ｇ３９Ｂ−Ｂ４
   ４６ＣＡＴＣＣ８１９６２）、或いはその変異株の生物
   学的純粋培養物。