JPS58138395A - ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 - Google Patents
ヒト免疫応答抑制因子の製造方法Info
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- JPS58138395A JPS58138395A JP57019560A JP1956082A JPS58138395A JP S58138395 A JPS58138395 A JP S58138395A JP 57019560 A JP57019560 A JP 57019560A JP 1956082 A JP1956082 A JP 1956082A JP S58138395 A JPS58138395 A JP S58138395A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト免疫応答抑制因子の製造方法に関する。
ヒト免疫応答抑制因子（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒ
ｅｓｐｏｎａｅｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ、以後ｈＩＲ８と
いう）は、ヒト由来の細胞から調製される免疫応答抑制
因子である。
ｅｓｐｏｎａｅｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ、以後ｈＩＲ８と
いう）は、ヒト由来の細胞から調製される免疫応答抑制
因子である。
免疫応答抑制因子は、 Ｃａｒｌ Ｗａｌｔｅｎｂａｕ
ｇｈ著（１９７９年）、＝ １３ｉｏ１ｏｇｙ ｏｆ
ｔｈｅ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ”（Ｓ、Ｃｏｈｅｎ。
ｇｈ著（１９７９年）、＝ １３ｉｏ１ｏｇｙ ｏｆ
ｔｈｅ Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ”（Ｓ、Ｃｏｈｅｎ。
Ｅ、 ｐｉｃｋ、 Ｊ、 Ｊ、 Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ編
）第４２２〜４２７頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ
、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの記載から明らかなように、抗
原に非特異的に免疫応答の抑制作用を示す体液性の蛋白
性物質であることより、免疫応答過敏症１例えばアレル
ギー、アナフイラキシーンヨック、自己免疫疾患などの
予防剤、治療剤として、また組織移植、臓器移植などに
際して起きる免疫拒絶反応の抑制剤などとしての利用が
期待されている。また、免疫応答抑制因子は、その作用
が種依存性を示さないことより、ヒト疾患の治療に際し
、ヒト以外の動物細胞由来の免疫応答抑制因子を使用す
ることも考えられるが、ヒトに供するには、ヒト生細胞
由来のｈＩＲ８を使用するのが安全であり、優れている
。
）第４２２〜４２７頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ
、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの記載から明らかなように、抗
原に非特異的に免疫応答の抑制作用を示す体液性の蛋白
性物質であることより、免疫応答過敏症１例えばアレル
ギー、アナフイラキシーンヨック、自己免疫疾患などの
予防剤、治療剤として、また組織移植、臓器移植などに
際して起きる免疫拒絶反応の抑制剤などとしての利用が
期待されている。また、免疫応答抑制因子は、その作用
が種依存性を示さないことより、ヒト疾患の治療に際し
、ヒト以外の動物細胞由来の免疫応答抑制因子を使用す
ることも考えられるが、ヒトに供するには、ヒト生細胞
由来のｈＩＲ８を使用するのが安全であり、優れている
。
しかしなか、ら、ヒト疾患の予防や治療に使用し得るｈ
ＩＲ８の製造は、未だ工業的規模で実施されるに至って
いない。
ＩＲ８の製造は、未だ工業的規模で実施されるに至って
いない。
本発明者は、工業的規模で容易に実施し得るｈＩＲ８の
製造方法を鋭意検討した。
製造方法を鋭意検討した。
その結果、意外にもｈＩＲ８産生能を有するヒト由来の
細胞をヒト以外の温血動物を利用して増殖させて得た細
胞が、インビトロでの組織培養で得られる細胞よりもｈ
ＩＲ８の産生が著しく高く、細胞当り約２〜ｌＯ倍、ま
たはそれ以上にも達することを見いだし、本発明を完成
した。
細胞をヒト以外の温血動物を利用して増殖させて得た細
胞が、インビトロでの組織培養で得られる細胞よりもｈ
ＩＲ８の産生が著しく高く、細胞当り約２〜ｌＯ倍、ま
たはそれ以上にも達することを見いだし、本発明を完成
した。
すなわち１本発明は、ｈＩＲ８産生能を有するヒト由来
の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植、またはその温
血動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細
胞からｈＩＲ８を産生させることを特徴とするｈＩＲ８
の製造方法に関するものである。
の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植、またはその温
血動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細
胞からｈＩＲ８を産生させることを特徴とするｈＩＲ８
の製造方法に関するものである。
本発明の方法は、従来のインビトロで組織培養する場合
と比較して、大量のｈＩＲ８を生成できるだけでなく、
高価な血清などを含む栄養培地が不要、または大幅に節
約でき、更に細胞増殖中の維持管理も極めて容易である
。すなわち、ｈＩＲ８産生能を有するヒト由来細胞をヒ
ト以外の温血動物体内に移植し、またはその動物の体液
の供給を受けることのできるチャンバーに収容し、通常
の飼育をすれば、温血動物体から供給される栄養物を含
有する体液を利用してその細胞が容易に増殖しうるので
ある。更に、インビトロで組織培養する場合と比較して
、細胞の増殖が安定していること、その増殖速度が大き
いこと、大量の細胞が得られること、更には細胞当りの
ｈＩＲ８産生量が大きいことが特徴である。
と比較して、大量のｈＩＲ８を生成できるだけでなく、
高価な血清などを含む栄養培地が不要、または大幅に節
約でき、更に細胞増殖中の維持管理も極めて容易である
。すなわち、ｈＩＲ８産生能を有するヒト由来細胞をヒ
ト以外の温血動物体内に移植し、またはその動物の体液
の供給を受けることのできるチャンバーに収容し、通常
の飼育をすれば、温血動物体から供給される栄養物を含
有する体液を利用してその細胞が容易に増殖しうるので
ある。更に、インビトロで組織培養する場合と比較して
、細胞の増殖が安定していること、その増殖速度が大き
いこと、大量の細胞が得られること、更には細胞当りの
ｈＩＲ８産生量が大きいことが特徴である。
本発明で使用するヒト由来の細胞は、ｈＩＲ８産生能を
有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移植して容易に
増殖するものであればよい。例えば、ヒト末梢血細胞、
ヒト肺臓細胞、ヒト扁桃細胞、或いはヒト扁桃腫瘍細胞
、ヒト肝臓癌細胞、ヒト肺臓腫瘍細胞、ヒト肺癌細胞な
ど、更にはこれら細胞を培養株化させたものなどが好適
である。
有し、かつヒト以外の温血動物の体内に移植して容易に
増殖するものであればよい。例えば、ヒト末梢血細胞、
ヒト肺臓細胞、ヒト扁桃細胞、或いはヒト扁桃腫瘍細胞
、ヒト肝臓癌細胞、ヒト肺臓腫瘍細胞、ヒト肺癌細胞な
ど、更にはこれら細胞を培養株化させたものなどが好適
である。
また、培養株化された公知のヒト由来の細胞としては、
例えば、組織培養Ｖｏ１，６．第１，７〜５４６頁（１
９８０年）に記載されているＡｄ−Ｌ、 ＨＬ−４゜Ｌ
８４−Ｌ）’、 ＮＰＣ−５０１，ＨＢ−７などが適宜
選択される。
例えば、組織培養Ｖｏ１，６．第１，７〜５４６頁（１
９８０年）に記載されているＡｄ−Ｌ、 ＨＬ−４゜Ｌ
８４−Ｌ）’、 ＮＰＣ−５０１，ＨＢ−７などが適宜
選択される。
また、これら細胞のｈＩＲ８産生能を持つ遺伝子を例え
ば、ポリエチレングリコールやセンダイウィルスなどを
利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素
（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利
用する遺伝子組み換えの手段などによって、より容易に
継代培養しうる培養株化されたヒトリンパ芽球様細鞠に
導入して使用することは、その増殖速度が大きいだけで
なく、細胞当りのｈＩＲ８産生能が約２〜１０倍、また
はそれ以上にも高まるので特に好都合である。
ば、ポリエチレングリコールやセンダイウィルスなどを
利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素
（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼなどの酵素を利
用する遺伝子組み換えの手段などによって、より容易に
継代培養しうる培養株化されたヒトリンパ芽球様細鞠に
導入して使用することは、その増殖速度が大きいだけで
なく、細胞当りのｈＩＲ８産生能が約２〜１０倍、また
はそれ以上にも高まるので特に好都合である。
また、培養株化されたヒトリンパ芽球様細胞を利用すれ
ば、ヒト以外の温血動物に移植する際、その宿主動物の
細胞と混りにくい軟腫瘤を形成し易く、摘出後の分散も
容易なので、ヒトリンパ芽球様生細胞だけを採取するの
にきわめて有利である。
ば、ヒト以外の温血動物に移植する際、その宿主動物の
細胞と混りにくい軟腫瘤を形成し易く、摘出後の分散も
容易なので、ヒトリンパ芽球様生細胞だけを採取するの
にきわめて有利である。
このようなヒトリンパ芽球様細胞には、ヒト白血病もし
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ ）細胞。
くはヒト悪性リンパ腫由来の細胞株が適しており、例え
ばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ ）細胞。
ＢＡＬＬ−１細胞、ＮＡＬＬ−１細胞、Ｔ木ＬＬ−１細
胞、ＪＢＬ細胞などの公知ヒト由来細胞株が、特に有利
に使用しうる。
胞、ＪＢＬ細胞などの公知ヒト由来細胞株が、特に有利
に使用しうる。
本発明のｈＩＲ８の製造方法に使用する温血動物は、ｈ
ＩＲ８産生能を有するヒト由来の細胞が増殖しうるもの
であればよく、例えば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、イ
ヌ、ネコ、サル、ヤギ、ブタ。
ＩＲ８産生能を有するヒト由来の細胞が増殖しうるもの
であればよく、例えば、ニワトリ、ハトなどの鳥類、イ
ヌ、ネコ、サル、ヤギ、ブタ。
ウシ、ウマ、ウサギ、モルモット、ラット、ハムスター
、普通マウス、ヌードマウスなどの哺乳類などが使用で
きる。
、普通マウス、ヌードマウスなどの哺乳類などが使用で
きる。
これら動物にヒト由来の細胞を移植すると、好ましくな
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい、。
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、胚、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい、。
また、これら動物に例えば、約２００〜６００レムのエ
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。使用する動
物がヌードマウスの場合には、成長１〜だものであって
も免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要とするこ
となく、培養株化されたヒト由来の細胞が移植でき、急
速に増殖できるので特に好都合である。
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。使用する動
物がヌードマウスの場合には、成長１〜だものであって
も免疫反応が弱いので、これらの前処置を必要とするこ
となく、培養株化されたヒト由来の細胞が移植でき、急
速に増殖できるので特に好都合である。
また、ヒト由来の細胞を、例えば先ずハムスターに移植
し増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植す
るなどのように、ヒト以外の温血動物間で移植して、ヒ
ト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更にそれらか
ら生成されるｈｌＲ８量を増加させることも自由である
。この場合、同種間、同属間は勿論のこと囲網間、同門
間移植であってもよい。
し増殖させた後、この細胞を更にヌードマウスに移植す
るなどのように、ヒト以外の温血動物間で移植して、ヒ
ト由来の細胞の増殖をより安定化したり、更にそれらか
ら生成されるｈｌＲ８量を増加させることも自由である
。この場合、同種間、同属間は勿論のこと囲網間、同門
間移植であってもよい。
ヒト由来の細胞を移植する動物体内の部位は、移植した
細胞が増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静
脈、腹腔、皮下など自由に選ばれる。
細胞が増殖し得る部位であればよく、例えば尿液腔、静
脈、腹腔、皮下など自由に選ばれる。
また、直接動物体内にヒト由来の細胞を移植することな
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜１例え
ば孔径約１Ｏ−７〜ｔｏ−５ｍを有するメンブランフィ
ルタ−１限外濾過膜またはホローファイバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化さｔたヒト由来の細胞を何れも増殖させることがで
きる。
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の濾過膜１例え
ば孔径約１Ｏ−７〜ｔｏ−５ｍを有するメンブランフィ
ルタ−１限外濾過膜またはホローファイバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化さｔたヒト由来の細胞を何れも増殖させることがで
きる。
また、必要に応じて、この拡散チャンバー内の栄養物を
含む体液を動物体内のそれと接続しａ流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバ一部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に昼め
ることもできる１、 これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
含む体液を動物体内のそれと接続しａ流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバー内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバ一部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に昼め
ることもできる１、 これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒト由来の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免疫反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。ヒト由来の細胞を増殖させ
るだめの期間は通常１〜２０週である。移植する培養株
化された細胞が腫瘍細胞であるかリンパ芽球様細胞であ
る場合には、その増殖速度が特に犬であり、通常１〜５
週の期間で目的を達成することができる。このようにし
て得られるヒト由来の細胞数は、動物個体当り約１０’
〜１０１２、またはそれ以上に達することも見い出した
。
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。ヒト由来の細胞を増殖させ
るだめの期間は通常１〜２０週である。移植する培養株
化された細胞が腫瘍細胞であるかリンパ芽球様細胞であ
る場合には、その増殖速度が特に犬であり、通常１〜５
週の期間で目的を達成することができる。このようにし
て得られるヒト由来の細胞数は、動物個体当り約１０’
〜１０１２、またはそれ以上に達することも見い出した
。
換言すれば１本発明で使用するｈＩＲ８の製造方法によ
り増殖させたヒト由来の細胞数は、動物個体当り移植し
た細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上にも達
し、インビトロで栄養培地に接種して増殖させる場合の
約１０’〜１０’倍、またはそれ以上にも達して、ｈＩ
Ｒ８の製造にはきわめて好都合である。
り増殖させたヒト由来の細胞数は、動物個体当り移植し
た細胞数の約１０２〜１０７倍、またはそれ以上にも達
し、インビトロで栄養培地に接種して増殖させる場合の
約１０’〜１０’倍、またはそれ以上にも達して、ｈＩ
Ｒ８の製造にはきわめて好都合である。
このようにして増殖させたヒト由来の生細胞からｈＩＲ
８を産生させる方法は自由である。
８を産生させる方法は自由である。
例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由来の細
胞を採取し、または皮下で増殖した腫瘤を摘出し１分散
させた後採取し、この細胞を約２０〜４０℃に保った栄
養培地に細胞濃度が約１０〜１０／−になるように浮遊
させてｈＩＲ８を産生させればよい。この際、必要なら
ばｈＩＲ８誘導剤を作用させてもよい。ｈＩＲ８誘導剤
は、温血動物を利用して増殖させて得られるヒト由来細
胞からｈＩＲ８を誘導生成できる物質であれば何でもよ
く、例えば、フィトヘマグルチニン、コンカナバリンＡ
、ボークウィードミトーゲン、リポポリサツカリド、エ
ンドトキシン、多糖類、細菌などのミトーゲンやウィル
ス、核酸、ポリヌクレオチドなどが適宜選択される。
胞を採取し、または皮下で増殖した腫瘤を摘出し１分散
させた後採取し、この細胞を約２０〜４０℃に保った栄
養培地に細胞濃度が約１０〜１０／−になるように浮遊
させてｈＩＲ８を産生させればよい。この際、必要なら
ばｈＩＲ８誘導剤を作用させてもよい。ｈＩＲ８誘導剤
は、温血動物を利用して増殖させて得られるヒト由来細
胞からｈＩＲ８を誘導生成できる物質であれば何でもよ
く、例えば、フィトヘマグルチニン、コンカナバリンＡ
、ボークウィードミトーゲン、リポポリサツカリド、エ
ンドトキシン、多糖類、細菌などのミトーゲンやウィル
ス、核酸、ポリヌクレオチドなどが適宜選択される。
また、ｈＩＲ８産生に際し、ｈＩＲ８安定剤を添加し、
生成したｈＩＲ８の安定化を計ってｈＩＲ８の収量を高
めることも自由である。
生成したｈＩＲ８の安定化を計ってｈＩＲ８の収量を高
めることも自由である。
このようにして誘導生成されたｈＩＲ８は、公知の精製
分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心分離、＊縮、
凍結乾燥などを行なうことによって容易に精製分離し、
採取することができる。更に、高度の精製を必要とする
場合には、例えば、イオン交換体への吸着−脱着、ゲル
濾過、アフィニティクロマトグラフィー、等電点分画、
電気泳動などの公知の方法を更に組み合わせればよく、
最高純度のｈＩＲ８を採取することも可能である。
分離法、例えば、塩析、透析、濾過、遠心分離、＊縮、
凍結乾燥などを行なうことによって容易に精製分離し、
採取することができる。更に、高度の精製を必要とする
場合には、例えば、イオン交換体への吸着−脱着、ゲル
濾過、アフィニティクロマトグラフィー、等電点分画、
電気泳動などの公知の方法を更に組み合わせればよく、
最高純度のｈＩＲ８を採取することも可能である。
本発明により製造したｈＩＲ８は、単独で、またはこれ
に例えば、ピタミ／、ホルモン、抗癌剤などその他の一
種もしくは二種以上の物質を含有せしめ、内服薬、注射
薬などとしてヒト疾病の予防や治療に有利に利用できる
。
に例えば、ピタミ／、ホルモン、抗癌剤などその他の一
種もしくは二種以上の物質を含有せしめ、内服薬、注射
薬などとしてヒト疾病の予防や治療に有利に利用できる
。
なお、明細書を通じてｈＩＲ８の活性は、 Ｒｏｂｅｌ
ｔＲ，Ｒｉｃｈ ＆ Ｃａｒｌ Ｗ、ｐｉｅｒｃｅ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 、 Ｖｏｌ、１１２゜第１３
６０〜１３６８頁（１９７４年）に記載されている方法
に準じてプラーク形成細胞の応答を抑制する活性蓋で示
した。
ｔＲ，Ｒｉｃｈ ＆ Ｃａｒｌ Ｗ、ｐｉｅｒｃｅ、
Ｊ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 、 Ｖｏｌ、１１２゜第１３
６０〜１３６８頁（１９７４年）に記載されている方法
に準じてプラーク形成細胞の応答を抑制する活性蓋で示
した。
すなわち、Ｃ５７ＢＬ／６ マウスからの肺臓細胞を
１ ｍ／ （１０７個）ずつになるようにペトリ皿にと
りこれに段階的に希釈したｈＩＲ８含有液αｌ−を加え
インキュベートした後のプラーク数を測定した。
１ ｍ／ （１０７個）ずつになるようにペトリ皿にと
りこれに段階的に希釈したｈＩＲ８含有液αｌ−を加え
インキュベートした後のプラーク数を測定した。
ｈＩＲ８の活性単位は、プラーク数が５０係に減少する
希釈倍数とした。
希釈倍数とした。
以下、２〜Ｂの実施例を挙げて更に詳細に説明する。
実施例 １
成長したヌードマウスの皮下−に、ヒトアデノイド細胞
を培養株化させたＡｄ−Ｌ細胞を移植した後１通常の方
法で３週間飼育した。皮下に生じた腫瘤的１２ｒを摘出
して細切した後、トリプ／ン含有生理食塩水に浮遊させ
細胞を分散させた。
を培養株化させたＡｄ−Ｌ細胞を移植した後１通常の方
法で３週間飼育した。皮下に生じた腫瘤的１２ｒを摘出
して細切した後、トリプ／ン含有生理食塩水に浮遊させ
細胞を分散させた。
この細胞を血清無含有ＲＰＭＩ １６４０培地（ｐＨ
７２）で洗浄した後、細胞濃度約１×ｌＯ／ｍｌになる
ように同培地に浮遊させ、これにコンカナバリンＡを−
当り約１μ？加え、３７℃で２０時間保ってｈＩＲ８を
産生させた。この細胞浮遊液を約３０００ ｒｐｍで３
０分間遠心分離し得られる上清にきまれるｈＩＲ８の量
を測定したところ、浮遊故旧−当り約２，４００単位で
あった。
７２）で洗浄した後、細胞濃度約１×ｌＯ／ｍｌになる
ように同培地に浮遊させ、これにコンカナバリンＡを−
当り約１μ？加え、３７℃で２０時間保ってｈＩＲ８を
産生させた。この細胞浮遊液を約３０００ ｒｐｍで３
０分間遠心分離し得られる上清にきまれるｈＩＲ８の量
を測定したところ、浮遊故旧−当り約２，４００単位で
あった。
対照として、Ａｄ−Ｌ細胞を仔牛血清１ ｖ／ｖ ％及
び肉エキス２０ ｖ／ｖ％を含有するＥａｇｌｅ培地（
ｐＨ７２）を用い８７℃１インビトロで組織培養して得
た対照の細胞を用いて、前記同様にｈＩＲ８を産生せし
めたところ、浮遊液αｌ−当り約９０単位の産生量にす
ぎなかった。
び肉エキス２０ ｖ／ｖ％を含有するＥａｇｌｅ培地（
ｐＨ７２）を用い８７℃１インビトロで組織培養して得
た対照の細胞を用いて、前記同様にｈＩＲ８を産生せし
めたところ、浮遊液αｌ−当り約９０単位の産生量にす
ぎなかった。
実施例 ２
肺臓腫瘍患者から摘出、細切、分散させた腫瘍細胞とリ
ンパ芽球様ナマルバ細胞（ＮａｍａｌｖａＣｅｌｌ ）
とをｔ４０ ｍＭ Ｎａｃｌ、 ５４ ｍＭ ＫＣＩ、
１ ｍＭＮａＨ２ＰＯ４１２ｍＭ ＣＪＬＣ１２を含
有する塩類溶液ニそれぞれ約１０ ”／ｓｇになるよう
に浮遊させ、これに予め紫外線で不活化したセンダイウ
ィルスを含有する前記塩類溶液を、水冷下で混合し、約
５分後に８７℃恒温水槽に移して、約８０分間攪拌しつ
つ細胞融合させ、リンパ芽球様ナマルバ細胞にｈＩＲ８
産生能を導入した。このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成
長したヌードマウスの腹腔内に移植した後、通常の方法
で６週間飼育した。
ンパ芽球様ナマルバ細胞（ＮａｍａｌｖａＣｅｌｌ ）
とをｔ４０ ｍＭ Ｎａｃｌ、 ５４ ｍＭ ＫＣＩ、
１ ｍＭＮａＨ２ＰＯ４１２ｍＭ ＣＪＬＣ１２を含
有する塩類溶液ニそれぞれ約１０ ”／ｓｇになるよう
に浮遊させ、これに予め紫外線で不活化したセンダイウ
ィルスを含有する前記塩類溶液を、水冷下で混合し、約
５分後に８７℃恒温水槽に移して、約８０分間攪拌しつ
つ細胞融合させ、リンパ芽球様ナマルバ細胞にｈＩＲ８
産生能を導入した。このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成
長したヌードマウスの腹腔内に移植した後、通常の方法
で６週間飼育した。
生じた腫瘤的１５ｔを摘出し、−当り１０μｆのフィト
ヘマグルチニンを加えた培地を使用した以外は実施例１
と同様に処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液０１
−当りのｈＩＲ８産生量は約１２．８００単位であった
。
ヘマグルチニンを加えた培地を使用した以外は実施例１
と同様に処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液０１
−当りのｈＩＲ８産生量は約１２．８００単位であった
。
対照として細胞融合させたリンパ芽球様ナマルバ細胞を
実施例１と同様にインビ５トロで組織培養して得た細胞
を用いて、ｈＩＲ８を産生せしめたところ、浮遊液α１
−当り約４００単位の産生量にすぎなかった。
実施例１と同様にインビ５トロで組織培養して得た細胞
を用いて、ｈＩＲ８を産生せしめたところ、浮遊液α１
−当り約４００単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ８
ハムスター新生児にウサギから公知の方法で調製した抗
血清を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後、
その皮下に、実施例２の方法に準じてｈＩＲ８産生能を
導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植し、その後通常
の方法で８週間飼育した。
血清を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後、
その皮下に、実施例２の方法に準じてｈＩＲ８産生能を
導入したリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植し、その後通常
の方法で８週間飼育した。
生シタ腫瘤約１８Ｆを摘出し、ＲＰＭＩ １６４０培地
に代えて、肉エキス２０ｖ／ｖ％を含有するＥａｇｌｅ
培地（ｐ）ｔ’１２）を用いたこと以外は実施例１と同
様に処理してｈＩＲ８を産生させた。浮遊液α１−当り
のｈＩＲ８産生量は約ａ５００単位であった。
に代えて、肉エキス２０ｖ／ｖ％を含有するＥａｇｌｅ
培地（ｐ）ｔ’１２）を用いたこと以外は実施例１と同
様に処理してｈＩＲ８を産生させた。浮遊液α１−当り
のｈＩＲ８産生量は約ａ５００単位であった。
対照として細胞融合させたリンパ芽球様ＪＢＬ細胞を実
施例１と同様にインビトロで培養増殖させ、次いでｈＩ
Ｒ８を産生せしめたところ、浮遊液（１１−当り約２４
０単位の産生量にすぎなかった。
施例１と同様にインビトロで培養増殖させ、次いでｈＩ
Ｒ８を産生せしめたところ、浮遊液（１１−当り約２４
０単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ４
ラット新生児の静脈内へ、リンパ芽球様ナマルバ細胞の
代りにリンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を用いた以外実施
例２と同様にしてｈＩＲ８産生能を導入したリンパ芽球
様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し１通常の方法で４週間飼育
した。
代りにリンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を用いた以外実施
例２と同様にしてｈＩＲ８産生能を導入したリンパ芽球
様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し１通常の方法で４週間飼育
した。
生じた腫瘤的８５９を摘出し、実施例２と同様に処理し
てｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１−当りのｈＩＲ
８産生量は約４００レムであった。
てｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１−当りのｈＩＲ
８産生量は約４００レムであった。
これに対して、対照としてインビトロで培養増殖させ、
ｈＩＲ８を産生せしめたものは、浮遊液０１−当り約８
６０単位の産生量にすぎなかった。
ｈＩＲ８を産生せしめたものは、浮遊液０１−当り約８
６０単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ５
成長した普通マウスに、約４００レムのガンマ線を照射
してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下にヒトリン
パ節細胞を培養株化させたＨＬ−４細胞を移植し、その
後通常の方法で４週間飼育した。
してマウスの免疫反応を弱めた後、その皮下にヒトリン
パ節細胞を培養株化させたＨＬ−４細胞を移植し、その
後通常の方法で４週間飼育した。
皮下に生じた腫瘤的１５ｆを摘出し、実施例８と同様に
処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１７！当り
のｈＩＲ８産生量は約４００レムであった。
処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１７！当り
のｈＩＲ８産生量は約４００レムであった。
これに対して、対照としてインビトロで培養増殖せしめ
次いでｈＩＲ８を産生させたものでは、浮遊液ａｌ−当
り約８０単位の産生量にすぎなかった。
次いでｈＩＲ８を産生させたものでは、浮遊液ａｌ−当
り約８０単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ６
孔径約０５ミクロンのメンブランフィルタ−を設けた内
容量的１０−のプラスチック製円筒型拡散チャンバー内
に、実施例１で用いたＡｄ−Ｌ細胞を生理食塩水に浮遊
させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
容量的１０−のプラスチック製円筒型拡散チャンバー内
に、実施例１で用いたＡｄ−Ｌ細胞を生理食塩水に浮遊
させ、これを成長したラットの腹腔内に埋設した。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、この拡散
チャンバーを取り出した。これにより得られたヒト由来
の細胞濃度は、約１０”／−にも達し、インビトロの炭
酸ガスインキュベーター中で培養する場合の約１０２倍
以上にも達することが判明した。
チャンバーを取り出した。これにより得られたヒト由来
の細胞濃度は、約１０”／−にも達し、インビトロの炭
酸ガスインキュベーター中で培養する場合の約１０２倍
以上にも達することが判明した。
こうして得た細胞を実施例８と同様に処理してｈＩＲ８
を産生せしめた。浮遊液Ｑｌｄ当りのｈＩＲ８産生量は
約４２００単位であった。
を産生せしめた。浮遊液Ｑｌｄ当りのｈＩＲ８産生量は
約４２００単位であった。
実施例 ７
予め８７℃で５日間保温しておいたニワトリの受精卵に
実施例４の方法でｈＩＲ８産生能を導入したリンパ芽球
様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、次いで８７℃に１週間保
った。
実施例４の方法でｈＩＲ８産生能を導入したリンパ芽球
様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、次いで８７℃に１週間保
った。
この卵を割卵して増殖細胞を採取し、実施例１と同様に
処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１−当シの
ｈＩＲ８産生量は約４００レムであった。
処理してｈＩＲ８を産生せしめた。浮遊液α１−当シの
ｈＩＲ８産生量は約４００レムであった。
特許出願人
株式会社林原生物化学研究所
手続補正書
昭和５７年１１月１５日
特許庁長官若杉和夫殿
Ｌ 事件の表示
昭和５７年特許願第１９５６０号
２ 発明の名称
ヒト免疫応答抑制因子の製造方法
ａ 補正をする者
事件との関係 特許出願人
屯 補正の対象
明細書における「発明の詳細な説明」の項ａ 補正の内
容 （１１明細書第６頁第７〜８行記載の゛「ラット、ハム
スター、」を「ラット、ヌードラット、ハムスター、」
に補正します。
容 （１１明細書第６頁第７〜８行記載の゛「ラット、ハム
スター、」を「ラット、ヌードラット、ハムスター、」
に補正します。
（２） 同頁末行記載の「ヌードマウス」を「ヌード
マウスやヌードラットなどの免疫不全動物」に補正しま
す。
マウスやヌードラットなどの免疫不全動物」に補正しま
す。
（３）明細書第９頁第１７〜１８行記載の「好都合であ
る。」の後に、次文を挿入します。
る。」の後に、次文を挿入します。
「増殖ヒト由来細胞は、ｈＩＲ８産生に供する前に、イ
ンビトロの栄養培地で適当期間、通常１〜４日培養し、
細胞代謝を整えてもよい。」（４）明細書第１３頁第９
行記載のｒ １４０ｍＭ Ｎａｃｌ、 Ｊをｒ １４０
ｍＭ ＮａＣＬ Ｊに補正します。
ンビトロの栄養培地で適当期間、通常１〜４日培養し、
細胞代謝を整えてもよい。」（４）明細書第１３頁第９
行記載のｒ １４０ｍＭ Ｎａｃｌ、 Ｊをｒ １４０
ｍＭ ＮａＣＬ Ｊに補正します。
Claims (2)
- （１） ヒト免疫応答抑制因子産生能を有するヒト由
来の細胞をヒト以外の温血動物体内に移植し。 またはその温血動物の体液の供給を受けながら増殖させ
、得られる細胞からヒト免疫応答抑制因子を産生せしめ
ることを特徴とするヒト免疫応答抑制因子の製造方法。 - （２） ヒト免疫応答抑制因子を産生せしめるに際し
、得られる細胞にヒト免疫応答抑制因子誘導剤を作用せ
しめることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載のヒ
ト免疫応答抑制因子の製造方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57019560A JPS58138395A (ja) | 1982-02-12 | 1982-02-12 | ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 |
| KR1019830000414A KR900005860B1 (ko) | 1982-02-12 | 1983-02-03 | 인간의 면역응답 억제인자의 제조방법 |
| IT47689/83A IT1167074B (it) | 1982-02-12 | 1983-02-10 | Procedimento per produrre l'agente soppressore di risposta immunitaria nell'uomo e prodotto ottenuto |
| FR8302180A FR2521588B1 (fr) | 1982-02-12 | 1983-02-11 | Procede de production de suppresseur de reponse immunitaire humain |
| GB08303870A GB2118560B (en) | 1982-02-12 | 1983-02-11 | Process for producing human immune response suppressor |
| CH805/83A CH661745A5 (fr) | 1982-02-12 | 1983-02-14 | Application d'un procede a la production de suppresseur de reponse immunitaire humain. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57019560A JPS58138395A (ja) | 1982-02-12 | 1982-02-12 | ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58138395A true JPS58138395A (ja) | 1983-08-17 |
| JPH0214038B2 JPH0214038B2 (ja) | 1990-04-05 |
Family
ID=12002686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57019560A Granted JPS58138395A (ja) | 1982-02-12 | 1982-02-12 | ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58138395A (ja) |
| KR (1) | KR900005860B1 (ja) |
| CH (1) | CH661745A5 (ja) |
| FR (1) | FR2521588B1 (ja) |
| GB (1) | GB2118560B (ja) |
| IT (1) | IT1167074B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57105191A (en) * | 1980-12-11 | 1982-06-30 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Production of human urogastrone |
| WO1987006591A1 (en) * | 1986-05-02 | 1987-11-05 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. | Immunosuppressive factor |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2016015B (en) * | 1978-01-22 | 1982-05-06 | Hayashibara Co | Method of preparing interferon and preparations containing interferon |
| JPS6045848B2 (ja) * | 1980-07-31 | 1985-10-12 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト成長ホルモンの製造方法 |
| JPS5729294A (en) * | 1980-07-30 | 1982-02-17 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human insulin |
-
1982
- 1982-02-12 JP JP57019560A patent/JPS58138395A/ja active Granted
-
1983
- 1983-02-03 KR KR1019830000414A patent/KR900005860B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-02-10 IT IT47689/83A patent/IT1167074B/it active
- 1983-02-11 FR FR8302180A patent/FR2521588B1/fr not_active Expired
- 1983-02-11 GB GB08303870A patent/GB2118560B/en not_active Expired
- 1983-02-14 CH CH805/83A patent/CH661745A5/fr not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57105191A (en) * | 1980-12-11 | 1982-06-30 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Production of human urogastrone |
| JPS609795B2 (ja) * | 1980-12-11 | 1985-03-13 | 株式会社林原生物化学研究所 | ヒト上皮細胞成長因子の製造方法 |
| WO1987006591A1 (en) * | 1986-05-02 | 1987-11-05 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. | Immunosuppressive factor |
| US5037958A (en) * | 1986-05-02 | 1991-08-06 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. | Immunosuppressive factor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0214038B2 (ja) | 1990-04-05 |
| KR900005860B1 (ko) | 1990-08-13 |
| IT1167074B (it) | 1987-05-06 |
| FR2521588A1 (fr) | 1983-08-19 |
| GB8303870D0 (en) | 1983-03-16 |
| FR2521588B1 (fr) | 1985-10-25 |
| GB2118560A (en) | 1983-11-02 |
| IT8347689A0 (it) | 1983-02-10 |
| CH661745A5 (fr) | 1987-08-14 |
| GB2118560B (en) | 1985-06-05 |
| KR840003419A (ko) | 1984-09-08 |
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