JPS5813394A - １−β−Ｄ−リボフラノシル−４，５−置換イミダゾ−ルの製造法 - Google Patents
１−β−Ｄ−リボフラノシル−４，５−置換イミダゾ−ルの製造法Info
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- JPS5813394A JPS5813394A JP11171481A JP11171481A JPS5813394A JP S5813394 A JPS5813394 A JP S5813394A JP 11171481 A JP11171481 A JP 11171481A JP 11171481 A JP11171481 A JP 11171481A JP S5813394 A JPS5813394 A JP S5813394A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物起源の酵素を利用して次の一般式（２）
で表わされる１−β−Ｄ−リボフラノシルー４．５−置
換イミダゾールを製造する方法１こ関する。
換イミダゾールを製造する方法１こ関する。
一般式（２）ｒ−於てＸがカルバモイル基、Ｙが水酸基
である４−カルバモイル−１−β−Ｄ−リボフラノシル
ー５−オレイトはブレデニンと称される化合物で免疫抑
制作用を有しており、医薬として利用できるものである
。
である４−カルバモイル−１−β−Ｄ−リボフラノシル
ー５−オレイトはブレデニンと称される化合物で免疫抑
制作用を有しており、医薬として利用できるものである
。
プレデニンの製造方法としては化学的合成法の他に４−
カルバモイル−イミダゾリウム−５−オレイ）Ｃ特定の
微生物を作用させる方法が知られて（゛）る（特開昭５
ｌ−１６９３）。本発間者等は「りに効率的な製造法を
開発することを目的として研究を行った結果、４，５−
置換イミダゾール、リン酸塩及びヌクレオシド若しくは
ヌクレオチドの混合物１こヌクレーイーシド・ホスホリ
ラーゼを作用させると１−β−Ｄ−リボフラノシルー４
．５−置換イミダゾールが生成されることを見い出した
。
カルバモイル−イミダゾリウム−５−オレイ）Ｃ特定の
微生物を作用させる方法が知られて（゛）る（特開昭５
ｌ−１６９３）。本発間者等は「りに効率的な製造法を
開発することを目的として研究を行った結果、４，５−
置換イミダゾール、リン酸塩及びヌクレオシド若しくは
ヌクレオチドの混合物１こヌクレーイーシド・ホスホリ
ラーゼを作用させると１−β−Ｄ−リボフラノシルー４
．５−置換イミダゾールが生成されることを見い出した
。
しかしながら、この反応は精製した酵素では良好１こ進
行するが、酵素源として微生物菌体等を使用する場合に
は副反応が起り収率が低下してしまう欠点が有ることが
わかった。精製酵素の代り１こ安価な微生物菌体等が使
用できれば経済的１こ有利であるので副反応を防ぐ方法
について更ｒこ検討を行ったところ、上記反応を４０〜
７０Ｃの高温で行うと畠１反応が抑えられ高収率で目的
化合物が生成されることを発見し本発明□：・を完成す
るｔこ至った。
行するが、酵素源として微生物菌体等を使用する場合に
は副反応が起り収率が低下してしまう欠点が有ることが
わかった。精製酵素の代り１こ安価な微生物菌体等が使
用できれば経済的１こ有利であるので副反応を防ぐ方法
について更ｒこ検討を行ったところ、上記反応を４０〜
７０Ｃの高温で行うと畠１反応が抑えられ高収率で目的
化合物が生成されることを発見し本発明□：・を完成す
るｔこ至った。
本発明は、次の一般式（１）
テ表ワされる４、５−置換イミダゾール化合物、リン酸
塩及びヌクレオシド若しくはヌクレオシドヲ含む水溶液
にこ微生物？こ含まれるヌクレオシドホスホリラーゼを
４０〜７０ｃで作用させＩ〜β−Ｄ−リボフラノシル−
４，５−置換イミダゾールを生成せしめ、これを分離・
採取することを特徴とする１−β−Ｄ−リボフラノシル
ー４．５−置換イミタソールの製造法１こ係るものであ
る。
塩及びヌクレオシド若しくはヌクレオシドヲ含む水溶液
にこ微生物？こ含まれるヌクレオシドホスホリラーゼを
４０〜７０ｃで作用させＩ〜β−Ｄ−リボフラノシル−
４，５−置換イミダゾールを生成せしめ、これを分離・
採取することを特徴とする１−β−Ｄ−リボフラノシル
ー４．５−置換イミタソールの製造法１こ係るものであ
る。
以下、本発明１こりいて説明する。
ヌクレオシドホスホリラーゼはプリンヌクレオシドある
いはピリミジンヌクレオシドを加リン酸分解してピリミ
ジン又はプリンとリポース−１＝リン酸を生じせしめる
酵素で、プリンヌクレオシドに作用するプリンヌクレオ
シ１゛ホスホリラーゼとピリミジンヌクレオシド１こ作
用するピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼが有り、
微生物によって生産される２とが知られている（特開昭
５６１”ｊｌｌ。
いはピリミジンヌクレオシドを加リン酸分解してピリミ
ジン又はプリンとリポース−１＝リン酸を生じせしめる
酵素で、プリンヌクレオシドに作用するプリンヌクレオ
シ１゛ホスホリラーゼとピリミジンヌクレオシド１こ作
用するピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼが有り、
微生物によって生産される２とが知られている（特開昭
５６１”ｊｌｌ。
−８６９５）。 □
本発明でいう微生物に含まれるヌクレオチドホスホリラ
ーゼとはヌクレオシドホスホリラーゼを主として菌体内
１こ生成する能力を有する微生物を栄養培地で培養して
ｔＵられる微生物菌体、菌体の処理物をいう。
ーゼとはヌクレオシドホスホリラーゼを主として菌体内
１こ生成する能力を有する微生物を栄養培地で培養して
ｔＵられる微生物菌体、菌体の処理物をいう。
ヌクレオシドホスホリラーゼを生産する能力ヲ有する微
生物としてはシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属、フラポバクテリウＡ （Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属、アクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃ
Ｌｅｒ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、
シトロバクタ−（Ｃ１ｔｒｏｂａｅｔｅｒ）属、エシェ
リヒア（Ｅｓｃｂｅｒ ｉｅｈ Ｉａ）属、スポロサル
シナ（Ｓｐｏｒｏａａｒｃｊｎａ）属、アルカリゲネス
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、エンテロバクタ−（Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、エーロモナス（Ａｅｒｏ
ｍｏｎａｓ）属、アースＰバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ）属、セラチア（８ｓｒｒａｔｌａ）属、
エルビニア（］ｉ：ｒｗｌ ｎ ｉ ａ ）属、プｐデ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、１リネ／（クテリウム（Ｃ
ｏｒｙｎｅｂａｃＬｅｒｉｕ＋ｎ）属、セルロモナス（
Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ）属、キサントモナス（Ｘａ
ｎ ｔｈｏｍｏｎａｓ ）属、タレプシエラ（Ｋｌａｂ
ｓｉａｌｌａ）属、ミクロコツカス（Ｍｌｃｒｏｃｏｃ
ｃｕｓ）属、バシルス（ＢａＣ目１ｕ８）属又はバクテ
リウム（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、＝ ５ − キャンジダ、＋４ （Ｃａｎｄｊｄａ） 、サツカロミ
セス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｇ）属、スタヒロコツ
カス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、ビブリオ（
Ｖｉｂｒｉｏ）属、あるいはマイコプラナ（Ｍｙｃｏｐ
ｌａｎａ）属ｔこ属する微生物が使用され、更に具体的
ｅこは次の微生物が挙げられる。
生物としてはシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属、フラポバクテリウＡ （Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属、アクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃ
Ｌｅｒ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、
シトロバクタ−（Ｃ１ｔｒｏｂａｅｔｅｒ）属、エシェ
リヒア（Ｅｓｃｂｅｒ ｉｅｈ Ｉａ）属、スポロサル
シナ（Ｓｐｏｒｏａａｒｃｊｎａ）属、アルカリゲネス
（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、エンテロバクタ−（Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、エーロモナス（Ａｅｒｏ
ｍｏｎａｓ）属、アースＰバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ）属、セラチア（８ｓｒｒａｔｌａ）属、
エルビニア（］ｉ：ｒｗｌ ｎ ｉ ａ ）属、プｐデ
ウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、１リネ／（クテリウム（Ｃ
ｏｒｙｎｅｂａｃＬｅｒｉｕ＋ｎ）属、セルロモナス（
Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ）属、キサントモナス（Ｘａ
ｎ ｔｈｏｍｏｎａｓ ）属、タレプシエラ（Ｋｌａｂ
ｓｉａｌｌａ）属、ミクロコツカス（Ｍｌｃｒｏｃｏｃ
ｃｕｓ）属、バシルス（ＢａＣ目１ｕ８）属又はバクテ
リウム（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、＝ ５ − キャンジダ、＋４ （Ｃａｎｄｊｄａ） 、サツカロミ
セス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｇ）属、スタヒロコツ
カス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、ビブリオ（
Ｖｉｂｒｉｏ）属、あるいはマイコプラナ（Ｍｙｃｏｐ
ｌａｎａ）属ｔこ属する微生物が使用され、更に具体的
ｅこは次の微生物が挙げられる。
シ五−ドモナス自デイミヌタ ＡＴＣＣ１１５
６８（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｄｉｍｉｎｏｔａ）
フラボバクテリウムＩレーナヌム ＣＣＭ ２９
Ｂ（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｅｎａｎｕｍ
）アクロモバクタ−・ラフチウム ＣＣＭ ６
９（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ Ｉａｃｔｉｕｍ）サ
ルモネラ争スコツトムニレ１１ ＡＴＣＣ８７
５９（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｃｈｏｔｔｍｕｅｌｌ
ｅｒｉ）エルビニア・ヘルビコラ ＡＴＣ
Ｃ１４５３６（Ｅｒｗｌｎｉａ ｈｅｒｂｉｃｏｌａ
）プロテウス嘗ブルガリス ＦＥＲＭ−Ｐ
４７９５（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）バク
テリウム［相］カダベリス ＡＴＣＣ９７６
０（Ｂａｅｔｅｒｉｕｎ＋ ｅａｄａｖｅｒｉｓ）キサ
ントモナス−シトリ−ＦＥＲＭ−Ｐ ３３９６（Ｘａｎ
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｃｊｔｒｌ） ６− マイコプラナ・デモノファ ＡＴＣＣ４２７
９（Ｍｙｃｏｐｌａｎａ ｄｉｍｏｒｐｈａ）エシェリ
ヒア−コリ ＡＴＣＣ１０７９８（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）エンテロバクタ−・クロ
アカニ ＡＴＣＣＩ：１０４７（Ｅｎｔｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ）セラチア書マルセツ
センス ＴＦＯ３０４６（Ｓｅｒｒａｔｉａ
ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）クレブシェラ・ニューモニア
ＡＴＣＣ９（ｉ２１（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌ
ａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ミクロコツカス・ルテウス
ＡＴＣＣ３９８（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｅｕｓ
Ｉｕｔｅｕｅ）コリネバクテリウム舎ミシカネンス
ＡＴＣＣ７４２９（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ）バチルス・プレビス
ＡＴ（：Ｃ８］８５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ） セルロモナス・フラビゲラ ＡＴＣＣ１１１
８３（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ ｆｌａｖｉｇｅｒ
ａ）アースロバクターφグロビポルミス ＡＴＣＣ８
０１０（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｈｏ
ｒｍｌｓ）ブレビバクテリウム・７ンモニアゲネス Ａ
’ｌ’ＣＣ６８７１（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｍｍｏｎｉａｇａｎｏｓ）１′ １゜ アルカリゲネスーメタル力リゲネス Ａ ’］” Ｃ
Ｃ１３２７０（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｍｅｔａｌｃ
ａｌｉｇｅｎｅｓ）スポロサルシナ・ウレアエ
ＡＴＣＣ６４７３（Ｓｐｏｒｏａａｒｃｉｎｓ ｕ
ｒｅａｅ）エーロモナス・サルモンシダ ＡＴ
ＣＣ１４１７４（Ａｅｒｏｒｎｏｎａｓ ｓａｌｍｏ
ｎｉｃｉｄａ）キャンシダ・トロピカリス
ＡＴＣＣ１４０５６（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａ
ｌｉｓ）サツカロミセス・セレビシユー ＡＴＣ
Ｃ２６０１（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）スタフィロコッカス・エビデルミデス
ＡＴＣＣ１５５（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐ
ｉｄｅｒｍｉｄｉａ）クルチア拳シフイー
ＡＴＣＣ６９００（Ｋｕｒｔｈｉａ ｚｏｐｈｉ
ｉ） ビブリオΦメチニコビ ＡＴＣＣ７７０８（
Ｖｉｌ）ｒｉＯｍ６ｔａｈｎｉｋｏｖｉｉ）これら微生
物を培養する方法は、炭素源、窒素源、無機イオン及び
四に必要ならばビタミン等の有機微量栄養素を含有する
通常の培地用いて培養すればよく、特別な方法を要せず
、従来知られている方法が適宜採用される。
６８（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｄｉｍｉｎｏｔａ）
フラボバクテリウムＩレーナヌム ＣＣＭ ２９
Ｂ（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｅｎａｎｕｍ
）アクロモバクタ−・ラフチウム ＣＣＭ ６
９（Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ Ｉａｃｔｉｕｍ）サ
ルモネラ争スコツトムニレ１１ ＡＴＣＣ８７
５９（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｃｈｏｔｔｍｕｅｌｌ
ｅｒｉ）エルビニア・ヘルビコラ ＡＴＣ
Ｃ１４５３６（Ｅｒｗｌｎｉａ ｈｅｒｂｉｃｏｌａ
）プロテウス嘗ブルガリス ＦＥＲＭ−Ｐ
４７９５（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）バク
テリウム［相］カダベリス ＡＴＣＣ９７６
０（Ｂａｅｔｅｒｉｕｎ＋ ｅａｄａｖｅｒｉｓ）キサ
ントモナス−シトリ−ＦＥＲＭ−Ｐ ３３９６（Ｘａｎ
ｔｈｏｍｏｎａｓ ｃｊｔｒｌ） ６− マイコプラナ・デモノファ ＡＴＣＣ４２７
９（Ｍｙｃｏｐｌａｎａ ｄｉｍｏｒｐｈａ）エシェリ
ヒア−コリ ＡＴＣＣ１０７９８（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）エンテロバクタ−・クロ
アカニ ＡＴＣＣＩ：１０４７（Ｅｎｔｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ）セラチア書マルセツ
センス ＴＦＯ３０４６（Ｓｅｒｒａｔｉａ
ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）クレブシェラ・ニューモニア
ＡＴＣＣ９（ｉ２１（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌ
ａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ミクロコツカス・ルテウス
ＡＴＣＣ３９８（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｅｕｓ
Ｉｕｔｅｕｅ）コリネバクテリウム舎ミシカネンス
ＡＴＣＣ７４２９（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ）バチルス・プレビス
ＡＴ（：Ｃ８］８５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ） セルロモナス・フラビゲラ ＡＴＣＣ１１１
８３（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｓ ｆｌａｖｉｇｅｒ
ａ）アースロバクターφグロビポルミス ＡＴＣＣ８
０１０（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｈｏ
ｒｍｌｓ）ブレビバクテリウム・７ンモニアゲネス Ａ
’ｌ’ＣＣ６８７１（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｍｍｏｎｉａｇａｎｏｓ）１′ １゜ アルカリゲネスーメタル力リゲネス Ａ ’］” Ｃ
Ｃ１３２７０（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｍｅｔａｌｃ
ａｌｉｇｅｎｅｓ）スポロサルシナ・ウレアエ
ＡＴＣＣ６４７３（Ｓｐｏｒｏａａｒｃｉｎｓ ｕ
ｒｅａｅ）エーロモナス・サルモンシダ ＡＴ
ＣＣ１４１７４（Ａｅｒｏｒｎｏｎａｓ ｓａｌｍｏ
ｎｉｃｉｄａ）キャンシダ・トロピカリス
ＡＴＣＣ１４０５６（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａ
ｌｉｓ）サツカロミセス・セレビシユー ＡＴＣ
Ｃ２６０１（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ）スタフィロコッカス・エビデルミデス
ＡＴＣＣ１５５（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐ
ｉｄｅｒｍｉｄｉａ）クルチア拳シフイー
ＡＴＣＣ６９００（Ｋｕｒｔｈｉａ ｚｏｐｈｉ
ｉ） ビブリオΦメチニコビ ＡＴＣＣ７７０８（
Ｖｉｌ）ｒｉＯｍ６ｔａｈｎｉｋｏｖｉｉ）これら微生
物を培養する方法は、炭素源、窒素源、無機イオン及び
四に必要ならばビタミン等の有機微量栄養素を含有する
通常の培地用いて培養すればよく、特別な方法を要せず
、従来知られている方法が適宜採用される。
微生ａｔｐｙｎこ含まれるヌクレオチドホスホリラーゼ
としては、上記の方法で得られた培養液そのまま、或い
は洗滌菌体が赫用できる他に、菌体処理物も１（ 使用できる。菌体処理物としては、アセトン乾燥菌体、
菌体の摩砕物、菌体の超音波処理物、界面活性剤又はト
ルエン等に接触せしめた菌体、リゾチーム等の酵素で処
理した菌体、１７１体より抽出した後、塩析等ｔこより
分離した菌体の蛋白区分、更に上記菌体または、菌体処
理物の天然あるいは合成ポリマー等による固定化物等い
ずれもが使用できる。
としては、上記の方法で得られた培養液そのまま、或い
は洗滌菌体が赫用できる他に、菌体処理物も１（ 使用できる。菌体処理物としては、アセトン乾燥菌体、
菌体の摩砕物、菌体の超音波処理物、界面活性剤又はト
ルエン等に接触せしめた菌体、リゾチーム等の酵素で処
理した菌体、１７１体より抽出した後、塩析等ｔこより
分離した菌体の蛋白区分、更に上記菌体または、菌体処
理物の天然あるいは合成ポリマー等による固定化物等い
ずれもが使用できる。
４．５−置換イミダゾールとしては一般式（１）で表わ
されるイミダゾール誘導体、例えば４−カルバモイル−
５−ハイドロキシ−イミダゾールが使用される。
されるイミダゾール誘導体、例えば４−カルバモイル−
５−ハイドロキシ−イミダゾールが使用される。
本発明で使用するりボスクレオシド類としてはウリジン
、シチジン、イノシン、アデノシン、グアメゾン等の天
然リボシド等が用いられ、又ヌクレオチドとしてはこれ
らヌクレオチドンこリン酸の結合したウリジル酸、イノ
シン酸、グアニル酸等が使用される。添加量は０．１チ
以」二、望ましくは１．０％であり、０．１−以下では
反応が遅く、効率が低くて実用的ではない。
、シチジン、イノシン、アデノシン、グアメゾン等の天
然リボシド等が用いられ、又ヌクレオチドとしてはこれ
らヌクレオチドンこリン酸の結合したウリジル酸、イノ
シン酸、グアニル酸等が使用される。添加量は０．１チ
以」二、望ましくは１．０％であり、０．１−以下では
反応が遅く、効率が低くて実用的ではない。
９−
ヌクレオシドとしてプリンヌクレオシド、ヌクレオチド
としてプリンヌクレオチドを用いる場合ｅこけプリンヌ
クレオシドホスホリラーゼ単独で反応は進行するがピリ
ミジンヌクレオシド又はピリミジンヌクレオチドを原料
として用いる場合にはプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼの他Ｆこピリミンヌクレオシドホスホリラーゼが必要
である。この場合ｔこは両方の酵素を生成する能力を有
する微生物を使用すれば良く、面記の微生裔盲両者がバ
ランス良く含まれている。
としてプリンヌクレオチドを用いる場合ｅこけプリンヌ
クレオシドホスホリラーゼ単独で反応は進行するがピリ
ミジンヌクレオシド又はピリミジンヌクレオチドを原料
として用いる場合にはプリンヌクレオシドホスホリラー
ゼの他Ｆこピリミンヌクレオシドホスホリラーゼが必要
である。この場合ｔこは両方の酵素を生成する能力を有
する微生物を使用すれば良く、面記の微生裔盲両者がバ
ランス良く含まれている。
酵素反応を行う際？こは一般式（１）の４，５−置換イ
ミダゾール化合物、リン酸塩、及びヌクレオシド若しく
はヌクレオチドを含む水溶液を調製しｐＩ（を４〜１０
の範囲に調節しこれにヌクレオシドホスホリラーゼ活性
を有する微生物菌体、又は菌体処理物若しくは未精製酵
素を加え４０〜７０Ｃの高温１こ保持する。この間時々
攪拌しながら１〜２０時間保持すると反応液中ｔこ目的
とする１−β−Ｄ−リポフラノンルー４，５−置換イミ
ダゾールが蓄積される。反応する際の酵素活性は０．０
１−１０− 〜ＩＵ／−で行えば良い。
ミダゾール化合物、リン酸塩、及びヌクレオシド若しく
はヌクレオチドを含む水溶液を調製しｐＩ（を４〜１０
の範囲に調節しこれにヌクレオシドホスホリラーゼ活性
を有する微生物菌体、又は菌体処理物若しくは未精製酵
素を加え４０〜７０Ｃの高温１こ保持する。この間時々
攪拌しながら１〜２０時間保持すると反応液中ｔこ目的
とする１−β−Ｄ−リポフラノンルー４，５−置換イミ
ダゾールが蓄積される。反応する際の酵素活性は０．０
１−１０− 〜ＩＵ／−で行えば良い。
本発明の方法では反応温度を４０〜７０υの範囲とする
ことが必要で、４０Ｃ未嵩では副反応が起り、長時間反
応させても収率が低く、又副反応によって生ずる不純物
の分離ｔこ手間がかかるので不利である。
ことが必要で、４０Ｃ未嵩では副反応が起り、長時間反
応させても収率が低く、又副反応によって生ずる不純物
の分離ｔこ手間がかかるので不利である。
反応液より生成物を分離・採取する方法は公知の方法に
従って行えば良く、遠心分離等１こより不溶性残渣を除
去した後、水等の溶媒Ｖこ対する溶解度差な利用する方
法あるいはイオン交換クロマトグラフィー等によって分
離することができる。
従って行えば良く、遠心分離等１こより不溶性残渣を除
去した後、水等の溶媒Ｖこ対する溶解度差な利用する方
法あるいはイオン交換クロマトグラフィー等によって分
離することができる。
以下、実施例にて詳細に説明する。
実施例１
酵母エキ７、０．５ ｆ ／ ｄｌｓベプ） ７ ｔ、
ｏ ｔ ／ｄｉｓ肉エキス１．ｏｙ／ｄｉ及び食塩ｏ、
５ｔ／ｃｔｐの組成の培地を調製しｐＨ７，０に１ｉＩ
１１！節した。これを５００１１１（１１ 耐容の肩付フラスコｔこ１００＊／宛分注し１２０Ｃで
１０分間加熱した。これｔこクレブシェラ・ニューモニ
アＡＴＣＣ９６２１を接種し３０Ｃで２０時間振盪培養
した。培養液を遠心分離して菌体を集め、０．０５ Ｍ
リン酸緩衝液（ｐ）１７．０ ）Ｅ懸濁した（湿潤菌体
濃度ｓｏｎｇ／ｌｄ）。この菌体懸濁液を５Ｃｔ８−冷
却し１０分間超音波照射して菌体を破砕し遠心分離して
得られる上清液にはウリジンホスホリラーゼ活性及びプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼ活性が認められた。次
ぐこ未処理菌体懸濁液１．０ｍ／ｌｎウリシフ １０
■、ＫＨ，Ｐｏ、 ４．０ ｍｇ及び４−カルバモイ
ル−イミダゾリウム−５−オレイト２．０１１ｇを添加
し、ｐＨ７，０に調節した後、１０ないし７５ｔｌ’で
３時間保持し、その間時々攪拌した。反応液中のプレデ
ニンの生成量を高速液体クロマトグラフィー（日立製作
所＠６３５Ｗ）を用いて定量した。その結果を第１表に
示す。
ｏ ｔ ／ｄｉｓ肉エキス１．ｏｙ／ｄｉ及び食塩ｏ、
５ｔ／ｃｔｐの組成の培地を調製しｐＨ７，０に１ｉＩ
１１！節した。これを５００１１１（１１ 耐容の肩付フラスコｔこ１００＊／宛分注し１２０Ｃで
１０分間加熱した。これｔこクレブシェラ・ニューモニ
アＡＴＣＣ９６２１を接種し３０Ｃで２０時間振盪培養
した。培養液を遠心分離して菌体を集め、０．０５ Ｍ
リン酸緩衝液（ｐ）１７．０ ）Ｅ懸濁した（湿潤菌体
濃度ｓｏｎｇ／ｌｄ）。この菌体懸濁液を５Ｃｔ８−冷
却し１０分間超音波照射して菌体を破砕し遠心分離して
得られる上清液にはウリジンホスホリラーゼ活性及びプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼ活性が認められた。次
ぐこ未処理菌体懸濁液１．０ｍ／ｌｎウリシフ １０
■、ＫＨ，Ｐｏ、 ４．０ ｍｇ及び４−カルバモイ
ル−イミダゾリウム−５−オレイト２．０１１ｇを添加
し、ｐＨ７，０に調節した後、１０ないし７５ｔｌ’で
３時間保持し、その間時々攪拌した。反応液中のプレデ
ニンの生成量を高速液体クロマトグラフィー（日立製作
所＠６３５Ｗ）を用いて定量した。その結果を第１表に
示す。
第 １ 表
１０ ０．１５
１５ ０．２０
２０ ０．２８
２５ ＋１．３０
３０ ０．３５
３５ ０．４５
４０ ０．５０
４５ ０．７０
ｓ ｏ ｏ、ｓ 。
５５ （１，８５
６０１，００
６５０，９５
７００，５２
７５Ｑ
−１３一
実施例２
実施例１で用いた液体培地を５．０ｄ宛大型試験管に分
注し１２０Ｃで１０分間滅菌した。この培地に第２表に
示す微生物を１白金耳ずつ接種し、３０Ｃにて２４時間
振盪培養した。得られた培養液より菌体な遠心分離して
集め、生理食塩水ｔこて洗滌後０．０５ Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７，０）ｒ−懸濁した（５０ＩＩｇ−湿量／ｄ）
。
注し１２０Ｃで１０分間滅菌した。この培地に第２表に
示す微生物を１白金耳ずつ接種し、３０Ｃにて２４時間
振盪培養した。得られた培養液より菌体な遠心分離して
集め、生理食塩水ｔこて洗滌後０．０５ Ｍ燐酸緩衝液
（ｐＨ７，０）ｒ−懸濁した（５０ＩＩｇ−湿量／ｄ）
。
上記の菌体懸濁液０．５ｍ／をウリシフ２．Ｏｔ／ｄｉ
、４−カルバモイル−イミダゾリウム−５−オレイ）
０．２ ｔ ／ ｄｉ１ｘＨ１ｌｐｏ４ｏ、ｓ ｔ ／
ｄｌを含みｐＨ７，０に調節した反応液０．５ｄに加
えた。これを６０ＣＥ５時間保ち、その間時々攪拌し、
次いで１００Ｃにて５分間加熱した。
、４−カルバモイル−イミダゾリウム−５−オレイ）
０．２ ｔ ／ ｄｉ１ｘＨ１ｌｐｏ４ｏ、ｓ ｔ ／
ｄｌを含みｐＨ７，０に調節した反応液０．５ｄに加
えた。これを６０ＣＥ５時間保ち、その間時々攪拌し、
次いで１００Ｃにて５分間加熱した。
反応液中の生成物を高速液体クロマトグラフィーで調べ
たところ、第２表に示す結果が得られた。
たところ、第２表に示す結果が得られた。
第２表ｔこはウリジンの代りにイノシンを用いた時の結
果を併記した。
果を併記した。
−１４−
第２表 プレデニンの生成量
基 質
ＡＴＣＣ１１５６８Ｆ１５ ２０ＣＣＭ
２９８ １２０ ３５ＣＣＭ
６９ １３５ ５
５ＡＴＣＣ８７５９７２４０ ＡＴＣＣ１４５３６１５５４Ｏ ＦＦＲＭ−Ｐ ４７９５ ８３ ３５
ＡＴＣＣ−９７６０７５３０ ＦＥＲＭ−Ｐ ３３９６ ５５ １
０ＡＴＣＣ８０９０１１０５０ ＡＴＣＣ４２７９１５１０ ＡＴＣＣ１０７９８７１１２０ ＡＴＣＣ１３０４７９５３０ ＩＦ０ ３０４９ ２８
５ＡＴＣＣ９６２１１００２０ ＡＴＣＣ’３９８ ５２ １０ＡＴＣ
Ｃ７４２９２５１０ ＡＴＣＣ８１８５１００５０ ＡＴＣＣ８１８３１５０２５ ＡＴＣＣ８０１０１２０３０ ＡＴＣＣ６８７１３５１０ ＡＴＣＣ１３２７０３０１０ ＡＴＣＣ６４７３７５２５ ＡＴＣＣ１４１７４７，（１： ３゜い ＡＴＣＣ２６０１１２０’ ３０ＡＴＣＣ
１４０５６３８１０ ＡＴＣＣ１５５１１１０２０ ＡＴＣＣ６９，００５５２５ ＡＴＣＣ７７０８７８１０ 実施例３ 実施例１＃こ示した液体培地の１００ｍｌヲ５００−容
肩付フラスコｔこ入れ殺菌した。これ１こエシェリヒア
−コリＡＴＣＣ１０７９８を接種し３０Ｃに保ちつつ、
３６時間振盪した。遠心分離にて菌体を集め、５２（湿
重）をＲｏｄのリン酸バッファー（ｐＨ７，０）Ｃ懸濁
し、１５分間の超音波処理を行った。遠心分離後得られ
た上清１０ｍ／を４−カルバモイル−イミダゾリウム−
５−オレイトｔｏｏｓｙ１ウリジル酸５００叩、ＫＨ，
Ｐｏ、 ３５０ｍｇを含み、ｐＨ７，０ｔこ調節した
反応液９０ａｆｆ中に添加した。これを６０ＣＥ１０時
間保った。反応後、１００Ｃ，５分間処理した後、反応
液を遠心分離してタンパクを除き上清を濃縮し、濃縮液
をセファデックスＧ−１０のカラムにチャージレ、水ｔ
こて溶出した。溶出液を濃縮し冷所ｅこ置き結晶：、′
：。
２９８ １２０ ３５ＣＣＭ
６９ １３５ ５
５ＡＴＣＣ８７５９７２４０ ＡＴＣＣ１４５３６１５５４Ｏ ＦＦＲＭ−Ｐ ４７９５ ８３ ３５
ＡＴＣＣ−９７６０７５３０ ＦＥＲＭ−Ｐ ３３９６ ５５ １
０ＡＴＣＣ８０９０１１０５０ ＡＴＣＣ４２７９１５１０ ＡＴＣＣ１０７９８７１１２０ ＡＴＣＣ１３０４７９５３０ ＩＦ０ ３０４９ ２８
５ＡＴＣＣ９６２１１００２０ ＡＴＣＣ’３９８ ５２ １０ＡＴＣ
Ｃ７４２９２５１０ ＡＴＣＣ８１８５１００５０ ＡＴＣＣ８１８３１５０２５ ＡＴＣＣ８０１０１２０３０ ＡＴＣＣ６８７１３５１０ ＡＴＣＣ１３２７０３０１０ ＡＴＣＣ６４７３７５２５ ＡＴＣＣ１４１７４７，（１： ３゜い ＡＴＣＣ２６０１１２０’ ３０ＡＴＣＣ
１４０５６３８１０ ＡＴＣＣ１５５１１１０２０ ＡＴＣＣ６９，００５５２５ ＡＴＣＣ７７０８７８１０ 実施例３ 実施例１＃こ示した液体培地の１００ｍｌヲ５００−容
肩付フラスコｔこ入れ殺菌した。これ１こエシェリヒア
−コリＡＴＣＣ１０７９８を接種し３０Ｃに保ちつつ、
３６時間振盪した。遠心分離にて菌体を集め、５２（湿
重）をＲｏｄのリン酸バッファー（ｐＨ７，０）Ｃ懸濁
し、１５分間の超音波処理を行った。遠心分離後得られ
た上清１０ｍ／を４−カルバモイル−イミダゾリウム−
５−オレイトｔｏｏｓｙ１ウリジル酸５００叩、ＫＨ，
Ｐｏ、 ３５０ｍｇを含み、ｐＨ７，０ｔこ調節した
反応液９０ａｆｆ中に添加した。これを６０ＣＥ１０時
間保った。反応後、１００Ｃ，５分間処理した後、反応
液を遠心分離してタンパクを除き上清を濃縮し、濃縮液
をセファデックスＧ−１０のカラムにチャージレ、水ｔ
こて溶出した。溶出液を濃縮し冷所ｅこ置き結晶：、′
：。
を析出させた。得られた結晶を水から再結し７５冨ｇの
結晶を得た。
結晶を得た。
このものは、ブレデニンの標品とＮＭＲスペクトル、赤
外線吸収スペクトル、Ｕｖスペクトルが一致しているこ
とからプレデニンであることが確認された。
外線吸収スペクトル、Ｕｖスペクトルが一致しているこ
とからプレデニンであることが確認された。
特許出願人 味の素株式会社
−１７−
第１頁の続き
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１／４２５
１／４４
７６４
１／７２
１／８５
０発 明 者 小林忠雄
横浜市金沢区六浦３−３９−２３
０発 明 者 山中茂
横浜市南区大岡３−４０−１３
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 一般式（１） で表わされる４、５−置換イミダゾール、リン酸塩及び
ヌクレオシド若しくはヌクレオチドを含有する水溶液に
微生物に含まれるヌクレオシドホスホリラーゼを添加し
て４０ないし７０ｔｒこ保持し１−β−Ｄ−リボフラノ
シルー４，５−置換イミダゾールを生成せしめ、これを
分離・採取することを特徴とする１−β−１） −１Ｊ
ポフラノシル−４，５−置換イミダゾールの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11171481A JPS5813394A (ja) | 1981-07-17 | 1981-07-17 | １−β−Ｄ−リボフラノシル−４，５−置換イミダゾ−ルの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11171481A JPS5813394A (ja) | 1981-07-17 | 1981-07-17 | １−β−Ｄ−リボフラノシル−４，５−置換イミダゾ−ルの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5813394A true JPS5813394A (ja) | 1983-01-25 |
| JPH0365957B2 JPH0365957B2 (ja) | 1991-10-15 |
Family
ID=14568292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11171481A Granted JPS5813394A (ja) | 1981-07-17 | 1981-07-17 | １−β−Ｄ−リボフラノシル−４，５−置換イミダゾ−ルの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5813394A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0393920A2 (en) * | 1989-04-17 | 1990-10-24 | Efamol Holdings Plc | Antiviral nucleoside derivatives |
| EP0428879A2 (en) * | 1989-11-10 | 1991-05-29 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Anhydrous crystal of 4-carbamoyl-1-beta-D-ribofuranosyl imidazolium-5-olate |
-
1981
- 1981-07-17 JP JP11171481A patent/JPS5813394A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0393920A2 (en) * | 1989-04-17 | 1990-10-24 | Efamol Holdings Plc | Antiviral nucleoside derivatives |
| US5216142A (en) * | 1989-04-17 | 1993-06-01 | Efamol Holdings Plc | Anti-virals |
| EP0693498A1 (en) * | 1989-04-17 | 1996-01-24 | Scotia Holdings Plc | Antiviral compounds |
| EP0428879A2 (en) * | 1989-11-10 | 1991-05-29 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Anhydrous crystal of 4-carbamoyl-1-beta-D-ribofuranosyl imidazolium-5-olate |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0365957B2 (ja) | 1991-10-15 |
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