JPS58129259A - 免疫化学的測定試薬 - Google Patents
免疫化学的測定試薬Info
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- JPS58129259A JPS58129259A JP1132182A JP1132182A JPS58129259A JP S58129259 A JPS58129259 A JP S58129259A JP 1132182 A JP1132182 A JP 1132182A JP 1132182 A JP1132182 A JP 1132182A JP S58129259 A JPS58129259 A JP S58129259A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、免疫化学的測定法で用いる、新規な測定試
薬に関するものである。
薬に関するものである。
免疫化学的測定法とは、抗原（ハプテンを含む）で実験
動物（例えば家兎）を免疫して、上記無銀と特異的に結
合する抗体（例えば抗体免疫グロブリン）を＊Ｉｋｌｌ
！１４１ＩＫ作もぜ、この抗体と上記抗原との陶の特異
的な納会反応を利用して、抗原また會ま抗体を測定する
方法である。
動物（例えば家兎）を免疫して、上記無銀と特異的に結
合する抗体（例えば抗体免疫グロブリン）を＊Ｉｋｌｌ
！１４１ＩＫ作もぜ、この抗体と上記抗原との陶の特異
的な納会反応を利用して、抗原また會ま抗体を測定する
方法である。
仁の測定法では、測定対象物である抗原または杭体と、
試薬として用いる抗原または抗体とを抗原抗体反応場ぜ
るに際し、後者の抗原まえは杭体を欺射性−位元素、酵
素、螢光物質、不対電子を一つ化合物等で標識しておき
、抜駆抗体反応した標識抗原または標識抗体と、未反応
の標識抗原まえは標識抗体の傭れか一方の標識を測定す
る。しえがって、この測定法ては、透電抗原抗体反応し
た（ ｌｏｕｍｓｌ ）標識抗原資えは標識抗体と、未
反応の（Ｆｒ５ｅ ）標識抗原ま九社標―抗体とを、分
離（ｌ／Ｆ分離）することが必要とされる。
試薬として用いる抗原または抗体とを抗原抗体反応場ぜ
るに際し、後者の抗原まえは杭体を欺射性−位元素、酵
素、螢光物質、不対電子を一つ化合物等で標識しておき
、抜駆抗体反応した標識抗原または標識抗体と、未反応
の標識抗原まえは標識抗体の傭れか一方の標識を測定す
る。しえがって、この測定法ては、透電抗原抗体反応し
た（ ｌｏｕｍｓｌ ）標識抗原資えは標識抗体と、未
反応の（Ｆｒ５ｅ ）標識抗原ま九社標―抗体とを、分
離（ｌ／Ｆ分離）することが必要とされる。
しかし、均一な１１１波として抗原抗体反応を行なつ九
場ｈＫ＃′ｉ、Ｂ／Ｆ分■が極めて繁雑となる。
場ｈＫ＃′ｉ、Ｂ／Ｆ分■が極めて繁雑となる。
そこで、ＩＩ／Ｆ分−を春易にするため、抗ｌ［または
抗体を一体状の担体に結合させ、こうして得られる固相
化抗原ｉたけ幽相化抗体を用いることが提案された。こ
のようｔｋｍ相化航ｌ［または固相化抗体としては、セ
ルロースｔた社セファロースを担体とし、そのヒドロキ
シル基をブロムシアンを用いて活性化し、抗原または抗
体と結合させ九もの、および、ポリスチレンのビーズを
担体とし、抗原または抗体を物理的に吸着させたものが
知られている。しかし、これらは、担体と抗原ま九は抗
体との結合率が悪いという欠点があり九。
抗体を一体状の担体に結合させ、こうして得られる固相
化抗原ｉたけ幽相化抗体を用いることが提案された。こ
のようｔｋｍ相化航ｌ［または固相化抗体としては、セ
ルロースｔた社セファロースを担体とし、そのヒドロキ
シル基をブロムシアンを用いて活性化し、抗原または抗
体と結合させ九もの、および、ポリスチレンのビーズを
担体とし、抗原または抗体を物理的に吸着させたものが
知られている。しかし、これらは、担体と抗原ま九は抗
体との結合率が悪いという欠点があり九。
この発明者は、上記の欠点を改咎しようと考えた。そし
て、熱°可塑性セルロースま良けそＯＩＩ導体にアミ７
基を導入し、アミ７基を利用、して抗原まえは抗体を化
学的に結合させると、結合率がよくなることを実験によ
り確諷した。この発明は、このようなｌｍｍ１Ｋ基つい
てなされ九４のである。
て、熱°可塑性セルロースま良けそＯＩＩ導体にアミ７
基を導入し、アミ７基を利用、して抗原まえは抗体を化
学的に結合させると、結合率がよくなることを実験によ
り確諷した。この発明は、このようなｌｍｍ１Ｋ基つい
てなされ九４のである。
すなわち、この発明は、アミノ基が導入され九熱可■性
セルロースｉたはその誘導体におけるアミノ基に１抗ａ
ｔ走は抗体を化学的に結合させてなる、免疫化学約測定
試薬である。
セルロースｉたはその誘導体におけるアミノ基に１抗ａ
ｔ走は抗体を化学的に結合させてなる、免疫化学約測定
試薬である。
上記アミノ基が導入され九熱可■性セルロースまたはそ
の誘導体には、セルロースま九は七ルロース＃導体にお
いて、グルコース単位中のしドロキシル基がアミノ基Ｋ
ｌ見られた化金物、およびセルロース誘導体に＆？て、
グルコース単位以外の部分にアミノ基が存在している化
金物が含まれる ここて、セルロース１ＩＪ１体ＫＦｉ、セルロースエス
テル、セルロースエーテルおよびセルロースエステルの
エーテルが禽憬れる。そのうチ、セルロースエステルに
＃ｉ、セルロースの有機酸エステル、無機酸エステル、
および有機酸・無機酸混合エステルが含まれる。有機酸
エステルに＃ｉ、低級脂肪酸セルロース（例えば＃酸セ
ルロース、プロピオン鹸セルロース、酪酸セルロース、
セルロースの酢酸１１混舎エステル）、畠緻脂肪酸セル
ロース（例えばカプリン蒙セルロース、）へルミチン酸
セルロース）、スル傘ン酸セルｐ−ス（飼えばトシル（
ルロース）４１が食まれる。無機酸エステルＫｒｉ、硝
酸セルロース、硫酸セルロース等が含まれる。有機酸１
１１Ｉ員会エステルには、１１硝酸混合エステル幡が舎
まれる。さらに１上に述べたものの部分加水分解物も、
本尭明におけるセルロ−ス誘導体［−まれる。セルロー
スエーテルには、エチルセルロース、２−ヒドロキンプ
ロピルセルロース、２．３−ジＬドロキシグチルセルロ
ース等が含まれる。
の誘導体には、セルロースま九は七ルロース＃導体にお
いて、グルコース単位中のしドロキシル基がアミノ基Ｋ
ｌ見られた化金物、およびセルロース誘導体に＆？て、
グルコース単位以外の部分にアミノ基が存在している化
金物が含まれる ここて、セルロース１ＩＪ１体ＫＦｉ、セルロースエス
テル、セルロースエーテルおよびセルロースエステルの
エーテルが禽憬れる。そのうチ、セルロースエステルに
＃ｉ、セルロースの有機酸エステル、無機酸エステル、
および有機酸・無機酸混合エステルが含まれる。有機酸
エステルに＃ｉ、低級脂肪酸セルロース（例えば＃酸セ
ルロース、プロピオン鹸セルロース、酪酸セルロース、
セルロースの酢酸１１混舎エステル）、畠緻脂肪酸セル
ロース（例えばカプリン蒙セルロース、）へルミチン酸
セルロース）、スル傘ン酸セルｐ−ス（飼えばトシル（
ルロース）４１が食まれる。無機酸エステルＫｒｉ、硝
酸セルロース、硫酸セルロース等が含まれる。有機酸１
１１Ｉ員会エステルには、１１硝酸混合エステル幡が舎
まれる。さらに１上に述べたものの部分加水分解物も、
本尭明におけるセルロ−ス誘導体［−まれる。セルロー
スエーテルには、エチルセルロース、２−ヒドロキンプ
ロピルセルロース、２．３−ジＬドロキシグチルセルロ
ース等が含まれる。
上記アミノ基が導入され九熱可■性セルＶ−スまたはそ
の誘導体は、セルロースまたはセルロース＊＊体にアミ
ノ基を導入することによ鰺製造されるが、ζζで用いる
熱可■性セルロースｔた祉そのｌＩＩ萼体としては、成
形され九ものが好ましい、。
の誘導体は、セルロースまたはセルロース＊＊体にアミ
ノ基を導入することによ鰺製造されるが、ζζで用いる
熱可■性セルロースｔた祉そのｌＩＩ萼体としては、成
形され九ものが好ましい、。
そのｖＬ形された粒子は、０．１ないし１０■の大きさ
をもち、球状または円柱状等の形状であることがＷまし
い。成形は、射出成形流等の熱町履性樹脂の一般鈎な成
形法によることができる。なお、成形され九粒子は、表
層のみがセルロースまたはその誘導体であり、中心部が
値の物質（例えばポリスチレン、ガラス４１）であって
４よい。１１り、表層のみがセルロースであり、中心部
がセルロースエステルであってもよい。
をもち、球状または円柱状等の形状であることがＷまし
い。成形は、射出成形流等の熱町履性樹脂の一般鈎な成
形法によることができる。なお、成形され九粒子は、表
層のみがセルロースまたはその誘導体であり、中心部が
値の物質（例えばポリスチレン、ガラス４１）であって
４よい。１１り、表層のみがセルロースであり、中心部
がセルロースエステルであってもよい。
また、熱可薯性セルロースとしては、Ｉｌ、形されたセ
ルロースエステルを加水分解し九４のが好嬉である。加
水分解は、例えばセルロースエステルを水酸化ナトリク
＾京嬉＊に３５〜・０℃で０．６〜２時岡浸漬し、水洗
し、歇％の駿溶波中に短時間装置することＫより行なわ
れる。
ルロースエステルを加水分解し九４のが好嬉である。加
水分解は、例えばセルロースエステルを水酸化ナトリク
＾京嬉＊に３５〜・０℃で０．６〜２時岡浸漬し、水洗
し、歇％の駿溶波中に短時間装置することＫより行なわ
れる。
アミノ基の導入け、次のような色々な方法で行なうこと
がて龜る。
がて龜る。
セルロースにエピクロルヒドリンを反応させて２．３−
エボキシプロビルセルローストシ、次いでアンモニア、
ジアミン、あるいはトリアミン、テトラミン等のポリア
ミンを反応させてアミ７基を導入することがてきる。セ
ルロースの代ｌ）Ｋセルロースエステルの部分加水分解
物を用いると、アミノ基が導入され友セルロースのニス
ｆ ＃ カ得られる。
エボキシプロビルセルローストシ、次いでアンモニア、
ジアミン、あるいはトリアミン、テトラミン等のポリア
ミンを反応させてアミ７基を導入することがてきる。セ
ルロースの代ｌ）Ｋセルロースエステルの部分加水分解
物を用いると、アミノ基が導入され友セルロースのニス
ｆ ＃ カ得られる。
まえ、セルロースにビスオキシクンを反応させて１．４
−エポキシ−２−ヒドロキシブチルセルロースとし、こ
れにアンモニア撞たはトリアミン、テトラミン４１０ポ
リアミンと反応させることによりアミノ基を導入するこ
とができる。セルロースの代りにセルロースエステルの
部分加水分解物を用いると、アミノ基が導入されたセル
ロースのエステルが得られる。
−エポキシ−２−ヒドロキシブチルセルロースとし、こ
れにアンモニア撞たはトリアミン、テトラミン４１０ポ
リアミンと反応させることによりアミノ基を導入するこ
とができる。セルロースの代りにセルロースエステルの
部分加水分解物を用いると、アミノ基が導入されたセル
ロースのエステルが得られる。
この発明における抗原としては、各種ポリペプチド系ホ
ルモン、ステロイド系ホルモン、ビタミン８１意、莱駿
、サイロキシン、トリヨードサイロニン、補体、α−７
エト“プロティン、カルシノエンプリオ二ックアンチグ
ン、臓器および血液中の各種酵素および蛋白質、ＨＢ−
抗原等０４Ｉ［微生物抗原、植物ホルモン、抗生物質、
航てんかん剤等の薬物等が用いられる。そのうち特に重
要なものは、甲状腺ホルモン、下垂体ホルモン、１１１
ｍｍ１ｌ［、インシュリン、免疫グロブリンおよび肝酵
素である。
ルモン、ステロイド系ホルモン、ビタミン８１意、莱駿
、サイロキシン、トリヨードサイロニン、補体、α−７
エト“プロティン、カルシノエンプリオ二ックアンチグ
ン、臓器および血液中の各種酵素および蛋白質、ＨＢ−
抗原等０４Ｉ［微生物抗原、植物ホルモン、抗生物質、
航てんかん剤等の薬物等が用いられる。そのうち特に重
要なものは、甲状腺ホルモン、下垂体ホルモン、１１１
ｍｍ１ｌ［、インシュリン、免疫グロブリンおよび肝酵
素である。
この発明における抗体としては、上に述べ九航原に対応
して動物体内で生産される−のが含まれる。
して動物体内で生産される−のが含まれる。
上記のメルカプト基に抗原ｉ良は抗体を化学絢に結合さ
せるＫは、これらを直錬結に壊せる方法と、架橋基を介
して結合させる方法とがある。
せるＫは、これらを直錬結に壊せる方法と、架橋基を介
して結合させる方法とがある。
−後結合させる方法は、例えば抗原または抗体かカルボ
キシル基を元々４つている場合、およびカルボキシル基
を導入されえものである場合（以下、これらをあわせて
カルボキシル基を有する場合という。他の基についても
−じ）Ｋ適用される。
キシル基を元々４つている場合、およびカルボキシル基
を導入されえものである場合（以下、これらをあわせて
カルボキシル基を有する場合という。他の基についても
−じ）Ｋ適用される。
具体＃３ Ｋいうと、カルボキシル基を活性形に導いた
徒、または縮合剤の存在下にアミノ基と反応させると、
アミド結合が形直され、それによって、セルロースまた
はその＃Ｉ専体上のアミノ基に抗原また社抗体が直接結
合するに至る。上記カルボキシル基の活性形ＫＦｉ、滉
合酸焦合酸無水物活性アミド等が含まれる。會だ、縮合
剤としては、ジシクロへキシルカルボジイミド、Ｎ、Ｎ
’−カルボニルジイミダゾール等が用いられる。また抗
原あるいＦｉ杭体がスルホン酸基をもっている場合にも
、アミノ基が導入された熱可■性セルロースｉ九はその
Ｉｌｊ導体上のアミノ基とスルホンアミド結合ヲＩ１１
．ｆＬさせることＫより直接結合させることができる。
徒、または縮合剤の存在下にアミノ基と反応させると、
アミド結合が形直され、それによって、セルロースまた
はその＃Ｉ専体上のアミノ基に抗原また社抗体が直接結
合するに至る。上記カルボキシル基の活性形ＫＦｉ、滉
合酸焦合酸無水物活性アミド等が含まれる。會だ、縮合
剤としては、ジシクロへキシルカルボジイミド、Ｎ、Ｎ
’−カルボニルジイミダゾール等が用いられる。また抗
原あるいＦｉ杭体がスルホン酸基をもっている場合にも
、アミノ基が導入された熱可■性セルロースｉ九はその
Ｉｌｊ導体上のアミノ基とスルホンアミド結合ヲＩ１１
．ｆＬさせることＫより直接結合させることができる。
架橋基を介して結合させる方法では、アミノ基が導入さ
れた熱可履性セルロースま九はその誘導体と、架橋剤と
、抗原またＦｉ抗体とを逐次を九は同時に反応させる。
れた熱可履性セルロースま九はその誘導体と、架橋剤と
、抗原またＦｉ抗体とを逐次を九は同時に反応させる。
ここで用いる架橋鋼としては、一端にアミノ基と結合し
得る基をもち、他端にメルカプト基またはアミノ基と結
合し得る基をもつものが用いられる。具体的には、抗原
または抗体がメルカプト基を有する場合には、飼えばに
−（ｍ−マレイミドベンゾイルオキシ）Ｖクシンイミド
が架橋剤として用いられる。この場合ＫＦｉ、Ｆｉ、九
は抗体のメルカプト基と、熱可■性セルロースまたはそ
の誘導体上のメルカプト基とが、下式 （但し、右側に抗ＩｊＬｉ九は抗体のアミ７基が結合し
左側にアミノ基が導入されえ熱可■性セルロースまた祉
その誘導体のアミノ基が結合する）で示される架橋基を
介して結合するに至る。また抗原ｉたは抗体がアミノ基
をもつ場合はアミノ基とアミノ基を架橋する華僑剤例え
ばグルタル１ルダヒド等により結合させる仁とができる
。
得る基をもち、他端にメルカプト基またはアミノ基と結
合し得る基をもつものが用いられる。具体的には、抗原
または抗体がメルカプト基を有する場合には、飼えばに
−（ｍ−マレイミドベンゾイルオキシ）Ｖクシンイミド
が架橋剤として用いられる。この場合ＫＦｉ、Ｆｉ、九
は抗体のメルカプト基と、熱可■性セルロースまたはそ
の誘導体上のメルカプト基とが、下式 （但し、右側に抗ＩｊＬｉ九は抗体のアミ７基が結合し
左側にアミノ基が導入されえ熱可■性セルロースまた祉
その誘導体のアミノ基が結合する）で示される架橋基を
介して結合するに至る。また抗原ｉたは抗体がアミノ基
をもつ場合はアミノ基とアミノ基を架橋する華僑剤例え
ばグルタル１ルダヒド等により結合させる仁とができる
。
ここで、抗原または抗体にメルカプト基を導入するに＃
−ｊ、抗ｆＩｉまたは抗体がアミノ基をもつ場合は、例
えばメルカプトアルキルイミデート、イミ／チオシクン
管のような化合物を用いることができる。また抗原が水
酸基をもつ場合は、例えば２−イミノチオシクンのよう
な化金物を用いることがてきる。を九、カルボキシル基
を導入するには、抗原がアミ７基や水酸基をもつ場合Ｉ
ＫＦｉ、例えば黒水こはく酸を用いてこれらの基をサク
シニル化することｋよシ行なうことができる。
−ｊ、抗ｆＩｉまたは抗体がアミノ基をもつ場合は、例
えばメルカプトアルキルイミデート、イミ／チオシクン
管のような化合物を用いることができる。また抗原が水
酸基をもつ場合は、例えば２−イミノチオシクンのよう
な化金物を用いることがてきる。を九、カルボキシル基
を導入するには、抗原がアミ７基や水酸基をもつ場合Ｉ
ＫＦｉ、例えば黒水こはく酸を用いてこれらの基をサク
シニル化することｋよシ行なうことができる。
この発明の測定試Ｊ［は、アミノ基が導入された熱町履
性セルロースまたはその誘導体を用い九ので、セルロー
スにプロムシアンを用いて結合させる鳩舎およびポリス
チレンの物理吸着による場合に此歓して、抗原を九は抗
体の結合率が高い。し九がって、仁の発明の測定試薬を
用いると、精度＃）１４い測定を行なう仁とができる。
性セルロースまたはその誘導体を用い九ので、セルロー
スにプロムシアンを用いて結合させる鳩舎およびポリス
チレンの物理吸着による場合に此歓して、抗原を九は抗
体の結合率が高い。し九がって、仁の発明の測定試薬を
用いると、精度＃）１４い測定を行なう仁とができる。
これが、このｉ九、アミノ基という反応性の高い基を用
いて結合させるのて、抗原まえは抗体との結合方法とし
て、色々な方法を用いることができ、その結果、結合で
きる抗原また社抗体の＠Ｓが拡大されている。すなわち
、抗ａｔ九社抗体が、メルカプト基、アミ／基、カルボ
キシル基、スル本ン酸基のうち少なくと４何れか１つの
基をもっていると、その基をアミノ基が導入された熱可
塑性セルロースま九はその誘導体上のアミノ基と結合さ
ぜることかできる。さらに１アミノ基を熱可蓋性セルロ
ースま九はその誘導体のグルコース単位以外の部分に導
入するか、ま九はアミノ基と抗原または抗体との間に架
橋基を介在させることによ抄、抗原筐友は抗体をグルコ
ース単位から離すことができ、それＫよって、抗原抗体
反応を行なう際の立体障害を避けることができる。
いて結合させるのて、抗原まえは抗体との結合方法とし
て、色々な方法を用いることができ、その結果、結合で
きる抗原また社抗体の＠Ｓが拡大されている。すなわち
、抗ａｔ九社抗体が、メルカプト基、アミ／基、カルボ
キシル基、スル本ン酸基のうち少なくと４何れか１つの
基をもっていると、その基をアミノ基が導入された熱可
塑性セルロースま九はその誘導体上のアミノ基と結合さ
ぜることかできる。さらに１アミノ基を熱可蓋性セルロ
ースま九はその誘導体のグルコース単位以外の部分に導
入するか、ま九はアミノ基と抗原または抗体との間に架
橋基を介在させることによ抄、抗原筐友は抗体をグルコ
ース単位から離すことができ、それＫよって、抗原抗体
反応を行なう際の立体障害を避けることができる。
ｉ九、熱可塑性セルロースま九けその１ｌＩＩＩ＃体を
基本骨格とするのて、―清中の妨害物質の軟着が少なく
、その結果測定誤差が少ない。さらに１セルロ一スＩＩ
ｊ導体は成形が容易であ秒、取扱い易い大きさの粒子と
することができる。このように、この発明の測定試薬は
、歇多くの利点を有する。
基本骨格とするのて、―清中の妨害物質の軟着が少なく
、その結果測定誤差が少ない。さらに１セルロ一スＩＩ
ｊ導体は成形が容易であ秒、取扱い易い大きさの粒子と
することができる。このように、この発明の測定試薬は
、歇多くの利点を有する。
以下、実施例および比較例によ抄、この発明の真施飾様
と効果を詳細に説明する。
と効果を詳細に説明する。
実施例１
＾ アミノ基が導入されたセルロース誘導体の製造
２酢酸セルロースを、底−の直？！に６■、＾さ４閤の
円柱状に射出成形し、これを４９６水酸化ナトリクム水
溶液中に５０℃で１時間浸漬して、加水分解した。その
後水洗し、（）、ＩＮ塩酸中に室温で１時間浸漬し、水
洗、乾燥して、表−が加水分解され、中央部が２ｆＩ￥
蒙セルロースのままの円柱状成形物を得た。
円柱状に射出成形し、これを４９６水酸化ナトリクム水
溶液中に５０℃で１時間浸漬して、加水分解した。その
後水洗し、（）、ＩＮ塩酸中に室温で１時間浸漬し、水
洗、乾燥して、表−が加水分解され、中央部が２ｆＩ￥
蒙セルロースのままの円柱状成形物を得た。
これを、０．４Ｎ水酸化ナトリクム水溶液中て、Ｏｌ・
輩エビクロル鉱ドリン水＊＊と４０℃で２時ＩＩＩｂＬ
応させ、水洗後、直ちに・ＩＭエチレンジアミン水ｍ液
と３０℃でｌ・時−反応させ丸。次いで水洗し、Ｎ−１
ミノエチル−２−ｔドロキシ−３−アミノプロピル酢酸
セルロース（部分加水分解物）（以下担体Ａという）を
得え。
輩エビクロル鉱ドリン水＊＊と４０℃で２時ＩＩＩｂＬ
応させ、水洗後、直ちに・ＩＭエチレンジアミン水ｍ液
と３０℃でｌ・時−反応させ丸。次いで水洗し、Ｎ−１
ミノエチル−２−ｔドロキシ−３−アミノプロピル酢酸
セルロース（部分加水分解物）（以下担体Ａという）を
得え。
（ト） 測定試薬の製造
担体Ａを容器に入れ、ツナギＩｇＧに対する、１１１で
標識した抗体の０．１Ｍ！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ値７．４
）溶ｊ（抗体の濃度二１ｑ／ｄ）を６ｄ量加え、続い
て２．！６重量％のグルタルアルデヒド水溶液をＩｓｄ
加え九のち、２０℃で１時間インキュベートした。次い
で０．１ＭＩＪン蒙毅衡波で洗浄し、０．１重量％の牛
血清アルブミンを含む０．１ＭＩＪン蒙緩衝液５−中に
移し４℃で１＠時間インキエペートし九。インキュベー
ト後の担体を取出しくこれを測定試薬ＡＧと名付ける）
、放射活性を測定した。１対照として、担体Ａと同一形
状のポリスチレン賦形物（以下担体Ｂという）Ｋ同じ地
理を施しえもの（これを測定試薬ＢＧと名付ける）と、
担体Ａ。
標識した抗体の０．１Ｍ！Ｊン酸緩衝液（ｐＨ値７．４
）溶ｊ（抗体の濃度二１ｑ／ｄ）を６ｄ量加え、続い
て２．！６重量％のグルタルアルデヒド水溶液をＩｓｄ
加え九のち、２０℃で１時間インキュベートした。次い
で０．１ＭＩＪン蒙毅衡波で洗浄し、０．１重量％の牛
血清アルブミンを含む０．１ＭＩＪン蒙緩衝液５−中に
移し４℃で１＠時間インキエペートし九。インキュベー
ト後の担体を取出しくこれを測定試薬ＡＧと名付ける）
、放射活性を測定した。１対照として、担体Ａと同一形
状のポリスチレン賦形物（以下担体Ｂという）Ｋ同じ地
理を施しえもの（これを測定試薬ＢＧと名付ける）と、
担体Ａ。
ＢＫりいて２．５９６のグルタルアルデヒド本＃１波の
代シに蒸溜水を加えた以＃Ｆは同じ地理を施こしえもの
（これらを夫々測定試薬ＡＰ、ＢＰと名付ける）を用意
し、放射活性を測定した。
代シに蒸溜水を加えた以＃Ｆは同じ地理を施こしえもの
（これらを夫々測定試薬ＡＰ、ＢＰと名付ける）を用意
し、放射活性を測定した。
ｔＯＳ＋定試薬と抗原の反応
試験管Ｋ Ｈｊｌｉで標識し九りナギＩｇＧ （以下抗
原という）の０．１重量％の牛ｍ４アルブミ１含む０１
Ｍリン酸緩衝液のｆＩＮ績（濃度 １０岬／ｄ ”）を
客＠１００ｓｆずつとシ、（至）で製造し圧測定試薬Ａ
Ｇ。
原という）の０．１重量％の牛ｍ４アルブミ１含む０１
Ｍリン酸緩衝液のｆＩＮ績（濃度 １０岬／ｄ ”）を
客＠１００ｓｆずつとシ、（至）で製造し圧測定試薬Ａ
Ｇ。
ＢＩＧｖＡＰ％ＢＰを加え、２０℃で１６時同インキュ
ベートした。インキュベート後、ｌｄの０．１重量９６
の午処膚ア７１／ブミゝを含む０．１麺リン酸緩衝１１
ＫｊすＳ−ずつ測定試薬ＡＧ、ＢＧ、ＡＰ、ＢＰを沈降
し、次いでこれらの測定試薬を取出し放射活性を測定し
た。
ベートした。インキュベート後、ｌｄの０．１重量９６
の午処膚ア７１／ブミゝを含む０．１麺リン酸緩衝１１
ＫｊすＳ−ずつ測定試薬ＡＧ、ＢＧ、ＡＰ、ＢＰを沈降
し、次いでこれらの測定試薬を取出し放射活性を測定し
た。
（至）で測定した放射活性との差を求め、測定試薬ムＧ
、ＢＧ、ＡＰ、ＢＰ中の抗体と反応した抗原の量ＯＭｃ
較をしえ。
、ＢＧ、ＡＰ、ＢＰ中の抗体と反応した抗原の量ＯＭｃ
較をしえ。
０ＩｊＩＩ果
館１図＃ｉ（至）て測定した放射活性をグク７Ｋしたも
のであるが、担体ムに−１）いてＶｉ測定試１１［ＡＰ
よ抄も、本発明による測定ＸＪＩＡＧの方がよ抄多く結
合していることがわか″）え。これＦｉ測定試薬ＡＰの
場合は、抗体が物履鈎に組体ム上ＫＩＬ看しているＫす
ぎないのに対し、測定試薬ムＧの場合は抗体がグルタル
アルデヒドという架橋剤により化学＃ＪＫ姐体担体に結
合していることを示す。
のであるが、担体ムに−１）いてＶｉ測定試１１［ＡＰ
よ抄も、本発明による測定ＸＪＩＡＧの方がよ抄多く結
合していることがわか″）え。これＦｉ測定試薬ＡＰの
場合は、抗体が物履鈎に組体ム上ＫＩＬ看しているＫす
ぎないのに対し、測定試薬ムＧの場合は抗体がグルタル
アルデヒドという架橋剤により化学＃ＪＫ姐体担体に結
合していることを示す。
又、測定試薬ＢＰ、ＢＧと比較して４、測定試薬ＡＧの
方が抗体との結合量が多いことがわかる。
方が抗体との結合量が多いことがわかる。
＊ｚｓ＃′ｉ、ｔｏで測定し九款射活性と（６）で測定
した放射活性の差、すなわち抗体と反応した抗原の量に
相当する情をグク７ＫＬ九ものである。本発明による測
定試薬ＡＧの方が対照となる測定試薬ＡＰ％ＢＰ、ＢＧ
Ｋ比較してより多くの抗原と反応していることを示す。
した放射活性の差、すなわち抗体と反応した抗原の量に
相当する情をグク７ＫＬ九ものである。本発明による測
定試薬ＡＧの方が対照となる測定試薬ＡＰ％ＢＰ、ＢＧ
Ｋ比較してより多くの抗原と反応していることを示す。
このため、本発明による測定試薬ＡＧは、款射線免疫測
定（ＲＩＡ）、酵素免疫調定（ＩＩＡ）吟による免疫血
清検査において、測定可鋭頷坂を広くとることかで色、
精度のよい測定かで龜ることになる。
定（ＲＩＡ）、酵素免疫調定（ＩＩＡ）吟による免疫血
清検査において、測定可鋭頷坂を広くとることかで色、
精度のよい測定かで龜ることになる。
第１図社実施例１＠で測定した測定試薬ＡＧ。
ＡＰ、ＢＧ、ＢＰの夫々の放射活性の倫を示すグラフで
あり、又第１■実施ＮＩＩＱで一定した款射活性Ｏ饋か
ら（至）で測定し九放射活性の値を差引いた個を測定試
薬ＡＧ％ＡＰ、ＢＧ、ＢＰの夫々について示すグラフで
ある。 特許出願人 積本化学工業株式金社 代表者 ５ｆｉ３ 基 利
あり、又第１■実施ＮＩＩＱで一定した款射活性Ｏ饋か
ら（至）で測定し九放射活性の値を差引いた個を測定試
薬ＡＧ％ＡＰ、ＢＧ、ＢＰの夫々について示すグラフで
ある。 特許出願人 積本化学工業株式金社 代表者 ５ｆｉ３ 基 利
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌ アミノ基が導入され良熱可塑性セルロースまたはそ
の＃導体ＫＪ？叶る前記アミノ基に１抗原ｉ九Ｆｉ抗体
を化学的に結合させてなることを特徴とする、免疫化学
的測定試薬 友 熱可塑性セルロースのＩＩ萼体がセルロースエステ
ルである、特許請求の範１１１１１１［記載の測定試薬 ＆ ｍｊ１１１性セルロースの５１１１１体がセルロ
ースエステルのエーテルである、特許請求の範１１項記
載の測定試薬 表 熱可塑性セルロースの誘導体がセルロースエーテル
である、特許請求の範５ｗ１ｍ記穣の測定試薬 翫 熱可塑性セルロースのＩＩ誘導体部分加水分解物で
ある、特許請求の範囲１１Ｉ２項から＠４項のいずれか
記載の渕１７に試薬 亀 抗ｌＫまたは抗体がアミノ基ま九はメルカプト基を
有する化合物であ抄、そのアミノ基またはメルカプト基
と、アミノ基が導入されえ熱可塑性セルロースｉたはそ
の＃導体のアミノ基とが架橋基を介して結合している、
特許請求のＩＩＩＩＩＩ１項紀載の測定試薬。 ７、 抗原を九は抗体がカルボキシル基を有する化合物
であり、そのカルボキシル基と１ミノ基が導入された熱
可塑性セルロースま九はその誘導体のアミノ基とがアミ
ド結合している、特許請求の範１１１１１１項記載の測
定試薬、亀 抗ｌＫまたは抗体がスルホン酸基を有する
化金物であり、そのスルホン酸基とアミノ基が導入さ些
九熱可■性セルロースを九はそのＩＩＩ萼体のアミノ基
とがスルホンアミド結合している、特許請求の範囲１１
１項記載の測定試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1132182A JPS58129259A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | 免疫化学的測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1132182A JPS58129259A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | 免疫化学的測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58129259A true JPS58129259A (ja) | 1983-08-02 |
Family
ID=11774756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1132182A Pending JPS58129259A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | 免疫化学的測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58129259A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5463894A (en) * | 1977-09-19 | 1979-05-23 | Merieux Inst | New substance capable of reverstbly fixing biological gigantic molecule* and making method and applying method of said substance |
| JPS54147913A (en) * | 1978-05-12 | 1979-11-19 | Unitika Ltd | Preparation of immunoadsorbent |
| JPS54158994A (en) * | 1978-06-06 | 1979-12-15 | Shinotesuto Kenkiyuushiyo Kk | Method and reagent for measuring antigen substance |
-
1982
- 1982-01-26 JP JP1132182A patent/JPS58129259A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5463894A (en) * | 1977-09-19 | 1979-05-23 | Merieux Inst | New substance capable of reverstbly fixing biological gigantic molecule* and making method and applying method of said substance |
| JPS54147913A (en) * | 1978-05-12 | 1979-11-19 | Unitika Ltd | Preparation of immunoadsorbent |
| JPS54158994A (en) * | 1978-06-06 | 1979-12-15 | Shinotesuto Kenkiyuushiyo Kk | Method and reagent for measuring antigen substance |
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