JPH1183823A - Simple injecting method for liquid chromatography - Google Patents
Simple injecting method for liquid chromatographyInfo
- Publication number
- JPH1183823A JPH1183823A JP24012197A JP24012197A JPH1183823A JP H1183823 A JPH1183823 A JP H1183823A JP 24012197 A JP24012197 A JP 24012197A JP 24012197 A JP24012197 A JP 24012197A JP H1183823 A JPH1183823 A JP H1183823A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- liquid
- sample loop
- loop
- column
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ法）による分析方法に関する。[0001] The present invention relates to an analysis method by high performance liquid chromatography (HPLC method).
【０００２】[0002]
【従来の技術】ＨＰＬＣで分析法全体の検出感度を上げ
るには、導入試料量を多くするのが手軽な方法である。2. Description of the Related Art To increase the detection sensitivity of an entire analytical method by HPLC, it is a simple method to increase the amount of an introduced sample.
【０００３】しかし、多量の試料液を導入するとカラム
での分離に悪影響が及ぶので、試料量の増加には一定の
限度がある。特に、カラムの内径を通常のＨＰＬＣより
小さくしたセミミクロＬＣによる分析の場合，カラム外
での試料の拡散を抑制するため、その注入量は通常のＨ
ＰＬＣよりも制限される。したがって，注入量増加によ
る感度向上を図るため，カラムスイッチング法を用いて
濃縮カラムによる試料濃縮を行うか、または、グラジェ
ント溶出法を用いて多量に導入した試料をカラムの先端
で一旦濃縮した後分離分析させる方法を利用する必要が
ある。However, the introduction of a large amount of sample liquid adversely affects the separation on the column, so that there is a certain limit in increasing the amount of sample. In particular, in the case of analysis by semi-micro LC in which the inner diameter of the column is smaller than that of ordinary HPLC, the amount of injected H
More limited than PLC. Therefore, in order to improve the sensitivity by increasing the injection volume, use a column switching method to concentrate the sample using a concentration column, or use a gradient elution method to concentrate a large amount of the sample once at the top of the column. It is necessary to use a method of separating and analyzing.
【０００４】上述のカラムスイッチング法またはグラジ
ェント溶出法を利用する場合、通常のＨＰＬＣ装置以外
に他の周辺装置（たとえば送液ポンプが更に1台または
高圧流路切替えバルブ等）が必要になり、装置構成が複
雑化する。また、多種類の移動相を必要とするのでカラ
ム条件の安定化のために、実際の分析時間以外にカラム
安定化の時間が必要になり、短時間での分析を妨げる。When the above-described column switching method or gradient elution method is used, other peripheral devices (for example, one liquid feed pump or a high-pressure flow path switching valve, etc.) are required in addition to a normal HPLC device. The device configuration becomes complicated. In addition, since various types of mobile phases are required, a column stabilization time other than the actual analysis time is required to stabilize the column conditions, which hinders analysis in a short time.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明は特別な装置や
追加の移動相を必要とせず、試料導入量を増加すること
のできるＨＰＬＣの試料導入方法を提供することを課題
とする。SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a method for introducing a sample into an HPLC which does not require a special apparatus or an additional mobile phase and can increase the amount of the sample to be introduced.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】このような課題を解決す
るために、本発明においては、サンプルループの内容積
が試料導入量より２倍以上大きいものを使用する。そし
て、試料充填する前にサンプルループ内を、分析用移動
相よりも溶出力の弱い液体(以下調整液とよぶ)で満たし
た後に試料を充填する。このとき当該試料はサンプルル
ープの上流側すなわち、送液ポンプが接続される側の端
部から充填される。In order to solve such a problem, the present invention uses a sample loop whose internal volume is at least twice as large as the sample introduction amount. Then, before filling the sample, the inside of the sample loop is filled with a liquid having a lower melting power than the mobile phase for analysis (hereinafter referred to as an adjustment liquid), and then the sample is filled. At this time, the sample is filled from the upstream side of the sample loop, that is, from the end to which the liquid feed pump is connected.
【０００７】その後、サンプルループが分析経路に挿入
されると、サンプルループ内の試料は、充填された流路
方向と同じ流路方向に流れて当該ループの分析カラム側
の端部から流路に入りカラムに到達する。カラムの先端
部では、試料注入前に注入した調整液によって試料の拡
散が抑制されて，その後移動相によってカラム内へ導入
され、分離される。Thereafter, when the sample loop is inserted into the analysis path, the sample in the sample loop flows in the same flow path direction as the filled flow path, and flows from the end of the loop on the analysis column side to the flow path. Reaches the containing column. At the tip of the column, the diffusion of the sample is suppressed by the adjustment liquid injected before the sample injection, and thereafter, the sample is introduced into the column by the mobile phase and separated.
【０００８】従来は、サンプルループに試料を充填する
際に、サンプルループ内に残っている移動相を押し出し
て充填し、バルブを切り替えサンプルループをライン内
に戻したとき、充填された試料液は、充填した流路方向
と逆の方向に流れてカラムに導入される。このため、試
料量が微量の場合は、流路内の拡散が抑制されるが、反
面、試料量が多い場合は、カラム先端部での拡散が著し
いため、試料成分分離の効率（カラム効率）は著しく低
下する。Conventionally, when the sample loop is filled with a sample, the mobile phase remaining in the sample loop is extruded and filled, and when the valve is switched and the sample loop is returned to the line, the filled sample liquid is , And flows into the column in the direction opposite to the filled channel direction. For this reason, when the sample amount is very small, diffusion in the flow channel is suppressed. On the other hand, when the sample amount is large, the diffusion at the column tip is remarkable. Is significantly reduced.
【０００９】このような問題点をサンプルループ内の移
動相を調整液と入れ替えることおよびサンプルループの
接続を変更することによって解決した。[0009] These problems have been solved by replacing the mobile phase in the sample loop with the adjusting solution and changing the connection of the sample loop.
【００１０】[0010]
【発明の実施の形態】以下に本発明の詳細を図示した実
施例に基づいて説明する。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The details of the present invention will be described below with reference to the illustrated embodiments.
【００１１】図中番号１〜６は、六方バルブ１１のそれ
ぞれポート番号を示している。六方バルブ１１は、イン
ジェクトまたはロードの２方向の流路（図１の実線また
は破線）が切り替えられる。すなわち、ロード状態（破
線）でサンプルループ１２は、送液ポンプと分析カラム
を接続するラインから、切断される。また、インジェク
ト状態（実線）でサンプルループ１２は、送液ポンプと
分析カラムを接続するラインに挿入される。In the figure, numbers 1 to 6 indicate port numbers of the six-way valve 11, respectively. The two-way flow path (solid line or broken line in FIG. 1) of the six-way valve 11 for injection or load is switched. That is, in the loaded state (broken line), the sample loop 12 is disconnected from the line connecting the liquid sending pump and the analysis column. In the injection state (solid line), the sample loop 12 is inserted into a line connecting the liquid sending pump and the analysis column.
【００１２】本実施例はセミミクロＬＣの実施例であ
り、カラムの内径は２ｍｍ、送液ポンプの流量は０．２
ｍＬ／分、試料量は５０〜１００マイクロリッターであ
る。したがって好ましいサンプルループの内容積は、２
００マイクロリッター以上であり、内径０．８ｍｍのス
テンレススチール製パイプを使用すればその長さは４０
０ｍｍ以上である。This embodiment is a semi-micro LC embodiment, in which the inner diameter of the column is 2 mm and the flow rate of the liquid sending pump is 0.2.
mL / min, sample volume is 50-100 microliters. Therefore, the internal volume of the preferred sample loop is 2
If a stainless steel pipe with an inner diameter of 0.8 mm is used, its length is 40 microliters or more.
0 mm or more.
【００１３】また、調整液はＨＰＬＣ分析に使用するよ
りも溶出力の小さい液体である。ＨＰＬＣで多用される
Ｃ１８やＣ８の逆相カラムの場合には、移動相としてメ
タノールやアセトニトリル等の有機溶媒と、蒸留水や塩
の水溶液の一定割合の混合液体が多用されるので、これ
らより溶出力の小さい液体とは、蒸留水や塩の水溶液あ
るいは当該一定割合以上に蒸留水や塩の水溶液を含むこ
れらとメタノールやアセトニトリル等の有機溶媒との混
合溶液をいう。[0013] The adjusting liquid is a liquid having a lower dissolving power than that used for HPLC analysis. In the case of a C18 or C8 reverse phase column frequently used in HPLC, a mixed liquid of an organic solvent such as methanol or acetonitrile and a fixed ratio of an aqueous solution of distilled water or salt is frequently used as a mobile phase, and thus elution is performed from these. The liquid having a small force refers to an aqueous solution of distilled water or salt or a mixed solution containing an aqueous solution of distilled water or salt at a certain ratio or more and an organic solvent such as methanol or acetonitrile.
【００１４】続いて試料注入操作を説明する。Next, the sample injection operation will be described.
【００１５】まず、六方バルブ１１をロード位置にし
て、サンプルループ１２を送液ポンプと分析カラムを接
続するラインから切断する。First, the six-way valve 11 is set to the load position, and the sample loop 12 is cut from the line connecting the liquid sending pump and the analysis column.
【００１６】続いて、ポート１からシリンジを用いて、
サンプルループの内容積以上の調整液（たとえば蒸留
水）を注入する。これにより、サンプルループ１２内に
存在した移動相はポート５の廃液口から排出され、サン
プルループ内は調整液で満たされる。Subsequently, using a syringe from port 1,
Inject a control liquid (for example, distilled water) that is equal to or larger than the internal volume of the sample loop. Thereby, the mobile phase existing in the sample loop 12 is discharged from the waste liquid port of the port 5, and the inside of the sample loop is filled with the adjusting liquid.
【００１７】次に、ポート1へ、マイクロシリンジを用
いて試料を充填する。なお、このとき充填した容量と同
じ容量の調整液がポート５に接続された廃液管から排出
される。Next, the port 1 is filled with a sample using a microsyringe. At this time, the adjusting liquid having the same volume as the filled volume is discharged from the waste liquid pipe connected to the port 5.
【００１８】次に、六方バルブ１１をインジェクト位置
にする。サンプルループ１２内の試料液は、送液ポンプ
からポート２を通り送られてくる移動相の流れに乗っ
て、サンプルループからポート４、ポート３を通ってカ
ラムへ導入される。この時サンプルループ内の調整液が
まずカラムに導入されその後試料液が導入されることに
なる。Next, the six-way valve 11 is set to the injection position. The sample liquid in the sample loop 12 rides on the flow of the mobile phase sent from the liquid sending pump through the port 2 and is introduced from the sample loop into the column through the ports 4 and 3. At this time, the adjustment liquid in the sample loop is first introduced into the column, and then the sample liquid is introduced.
【００１９】なお、この実施例はマニュアルインジェク
タを例にとって説明したが、同様のことをオートインジ
ェクタ（たとえば島津製作所製オートインジェクタSIL-
10A）を用いて行うことができる。またサンプルループ
を適宜交換してその内容積を変更することにより、注入
量の増減に対応することができる。Although this embodiment has been described by taking a manual injector as an example, the same can be said for an automatic injector (for example, an automatic injector SIL- manufactured by Shimadzu Corporation).
10A). In addition, by changing the sample loop appropriately and changing the internal volume, it is possible to cope with an increase or decrease in the injection amount.
【００２０】本例では試料の溶媒は移動相と同じ液体を
用いたが、試料の溶媒としてさらに溶出力の強い液体を
使用して試料液を調整した場合であっても同様の効果が
期待できる。In this example, the same solvent as the mobile phase was used as the solvent for the sample. However, the same effect can be expected even when the sample solution is prepared by using a liquid having a higher solution output as the solvent for the sample. .
【００２１】[0021]
【発明の効果】本発明においては、多量の試料を注入し
た場合でも、カラム効率を低下することなく分析が可能
となる。また本発明は、特別の装置を必要としない。According to the present invention, even when a large amount of sample is injected, analysis can be performed without lowering the column efficiency. Also, the present invention does not require a special device.
【００２２】セミミクロＬＣに本発明を適用した場合
の、注入量とカラムの理論段数の関係を図２の実線(本
発明)で示した。あわせて、従来の試料導入方法で分析
した場合の注入量とカラムの理論段数の関係を同じく図
２の破線(従来法)で示した。The relationship between the injection amount and the theoretical number of columns in the case where the present invention is applied to a semi-micro LC is shown by a solid line (the present invention) in FIG. In addition, the relationship between the injection amount and the theoretical number of columns of the column when the analysis was performed by the conventional sample introduction method is also shown by the broken line (conventional method) in FIG.
【００２３】図２から明らかなように本発明は従来法と
比べると、試料量が微量域では低いカラム理論段数を与
えるが、試料量が多量域では、本発明の方法の方が高い
カラム理論段数を与えた。As is apparent from FIG. 2, the present invention provides a lower number of column theoretical plates in a small amount of sample area than the conventional method, but a higher column theoretical amount in a large amount of sample area. The number of stages was given.
【００２４】また本発明の方法は、注入量の変化に対し
てカラム理論段数がほとんど変化しないという効果も有
する。The method of the present invention also has the effect that the number of theoretical columns hardly changes with a change in the injection amount.
【図１】図１は、本発明の一実施例であるＨＰＬＣの試
料注入装置を示すものである。FIG. 1 shows an HPLC sample injection apparatus according to one embodiment of the present invention.
【図２】図２は、本発明を適用した場合の、注入量とカ
ラムの理論段数の関係の図である。FIG. 2 is a diagram showing a relationship between an injection amount and a theoretical plate number of a column when the present invention is applied.
１１ 六方バルブ １２ サンプルループ 11 Hex valve 12 Sample loop
Claims (1)
ンと、当該ラインに挿入可能なサンプルループを有する
液体クロマトグラフを使用し、 １．前記サンプルループを前記ラインから切断する第一
行程 ２．前記サンプルループに試料液を充填する第二行程 ３．前記サンプルループを前記ラインに挿入する第三行
程 よりなる液体クロマトグラフィーの試料導入方法におい
て 前記サンプルループに試料量の２倍以上の内容積を持つ
サンプルループを使用し、かつ、当該サンプルループの
なかで、前記ライン挿入時に前記送液ポンプ側となるサ
ンプルループの端部に試料充填手段が接続されるサンプ
ルループを使用するとともに、 前記第一行程と前記第二行程の間に、当該サンプルルー
プの内容積の全体を、前記送液ポンプより送液する分析
用移動相よりも溶出力の弱い溶液で満たす行程を加えた
ことを特長とする液体クロマトグラフィーの試料導入方
法。1. A liquid chromatograph having a line connecting a liquid sending pump and an analytical column and a sample loop insertable into the line is used. 1. First step of cutting the sample loop from the line 2. Second step of filling the sample loop with a sample solution In the liquid chromatography sample introduction method comprising a third step of inserting the sample loop into the line, a sample loop having an internal volume of twice or more the sample amount is used for the sample loop, and Then, while using a sample loop in which the sample filling means is connected to the end of the sample loop that is on the liquid sending pump side when the line is inserted, between the first step and the second step, A method for introducing a sample into liquid chromatography, characterized by adding a step of filling the entire internal volume with a solution having a lower solution output than the analytical mobile phase sent from the liquid sending pump.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24012197A JPH1183823A (en) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | Simple injecting method for liquid chromatography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24012197A JPH1183823A (en) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | Simple injecting method for liquid chromatography |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1183823A true JPH1183823A (en) | 1999-03-26 |
Family
ID=17054815
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24012197A Pending JPH1183823A (en) | 1997-09-05 | 1997-09-05 | Simple injecting method for liquid chromatography |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1183823A (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001343371A (en) * | 2000-06-05 | 2001-12-14 | Shimadzu Corp | Liquid chromatograph |
| JP2007163153A (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-28 | Yamazen Corp | Condition determination support device of liquid chromatography, liquid chromatograph, and condition determination support program of liquid chromatography |
| JP2008070125A (en) * | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Tosoh Corp | Sample injection method in liquid chromatograph, and the liquid chromatograph |
| JP2009133726A (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-18 | Tosoh Corp | Viscometer for liquid chromatograph |
-
1997
- 1997-09-05 JP JP24012197A patent/JPH1183823A/en active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001343371A (en) * | 2000-06-05 | 2001-12-14 | Shimadzu Corp | Liquid chromatograph |
| JP4530485B2 (en) * | 2000-06-05 | 2010-08-25 | 株式会社島津製作所 | Liquid chromatograph |
| JP2007163153A (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-28 | Yamazen Corp | Condition determination support device of liquid chromatography, liquid chromatograph, and condition determination support program of liquid chromatography |
| JP2008070125A (en) * | 2006-09-12 | 2008-03-27 | Tosoh Corp | Sample injection method in liquid chromatograph, and the liquid chromatograph |
| JP2009133726A (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-18 | Tosoh Corp | Viscometer for liquid chromatograph |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7347936B2 (en) | Liquid chromatograph | |
| US11692980B2 (en) | Valve and splitting system for multi-dimensional liquid analysis | |
| JP5012148B2 (en) | Liquid chromatograph | |
| US7214313B2 (en) | Liquid chromatograph | |
| US7135111B2 (en) | Separation analyzer | |
| EP3452820B1 (en) | Method and apparatus for injecting a chromatographic sample | |
| US9945762B2 (en) | Apparatus and method for introducing sample into a separation unit of a chromatography system without disrupting a mobile phase | |
| US9003868B2 (en) | Liquid chromatograph and sample introducing apparatus | |
| US20200025723A1 (en) | Dispersive element in liquid chromatography systems | |
| JP3865119B2 (en) | Mobile phase gradient apparatus and high-performance liquid chromatograph using the same | |
| US11079360B2 (en) | Systems and methods for chromatographic analysis | |
| JP2005140659A (en) | Gradient liquid feed device | |
| US6498040B1 (en) | HPLC apparatus for fractioning and preparing sample for NMR spectrometry and method of changing mobile phase | |
| US6780325B1 (en) | Diffusion promoting apparatus for low flow velocity gradient high-speed liquid chromatography | |
| JPH1183823A (en) | Simple injecting method for liquid chromatography | |
| US11061003B2 (en) | Method and apparatus for injecting a chromatographic sample | |
| JP4573471B2 (en) | High performance liquid chromatograph | |
| GB2586064A (en) | Sample dispatching with fluidic sample retaining | |
| US20240011957A1 (en) | Testing a sampling unit fluidically coupled to a source | |
| US20220283129A1 (en) | Fluid processing with withdraw-transfer modulation | |
| JP2005128030A (en) | Liquid chromatograph | |
| Daoud et al. | precolumn-venting plug technique for direct injection of untreated blood plasma samples into reversed-phase liquid chromatography systems | |
| JPH02130466A (en) | Liquid chromatograph | |
| JPH07280789A (en) | Liquid chromatography | |
| JPH0989858A (en) | Liquid chromatography and analysis employing it |