JPH0989858A - Liquid chromatography and analysis employing it - Google Patents
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は液体クロマトグラフ
ィ装置及びこれを用いた分析方法に係り、特にグラディ
エント溶出法を用いた液体クロマトグラフィ装置及びこ
れを用いた分析方法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a liquid chromatography device and an analysis method using the same, and more particularly to a liquid chromatography device using a gradient elution method and an analysis method using the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】液体クロマトグラフィ装置は化学物質を
分離・定量する化学分析手段として広く使われている。
特に、内径が１〜２ｍｍのセミミクロカラムを使った液
体クロマトグラフィ装置は高感度、高分解能および高精
度な分析結果を提供できる利点を有しており、活発な研
究がなされている。2. Description of the Related Art Liquid chromatography apparatuses are widely used as chemical analysis means for separating and quantifying chemical substances.
In particular, a liquid chromatography apparatus using a semi-micro column having an inner diameter of 1 to 2 mm has an advantage of providing high sensitivity, high resolution, and high precision analysis results, and has been actively studied.
【０００３】図４は、従来における液体クロマトグラフ
ィ装置の一例を示している。同図に示される液体クロマ
トグラフィ装置は、オートサンプラー１と６方スイッチ
ングバルブ（以下、スイッチングバルブという）２との
間に一次分離を行う前処理用カラム３が配設されてい
る。この前処理用カラム３は、内部にカラム充填剤が充
填されており、この前処理用カラム３においてオートサ
ンプラー１から供給される被測定試料の内の不要成分は
除去される。FIG. 4 shows an example of a conventional liquid chromatography apparatus. In the liquid chromatography apparatus shown in the figure, a pretreatment column 3 for performing primary separation is arranged between an autosampler 1 and a 6-way switching valve (hereinafter referred to as a switching valve) 2. The pretreatment column 3 is internally filled with a column packing material, and unnecessary components in the sample to be measured supplied from the autosampler 1 are removed in the pretreatment column 3.
【０００４】この前処理用カラム３の内部にはカラム充
填剤が充填されており、試料溶液の中の目的物質はこの
カラム充填剤により保持される。従来、この前処理用カ
ラム３は液体クロマトグラフィ装置に１個配設されたも
のが一般的であった。また、オートサンプラー１の内部
には、被測定試料をスイッチングバルブ２を介して分離
用カラム４に送り出すために、各種バルブ，シリンジ，
及びこれらの構成要素と共に機能する他の構成要素が組
み込まれた構成となっている。更に、ポンプ５Ａ及びポ
ンプ５Ｂは、スイッチングバルブ２と協働して被測定試
料を前処理用カラム３，分離用カラム４及び検出器６に
供給する被測定試料供給システムを構成する。The inside of the pretreatment column 3 is filled with a column packing material, and the target substance in the sample solution is retained by the column packing material. Conventionally, this pretreatment column 3 has generally been arranged in a liquid chromatography device. Further, inside the autosampler 1, various valves, syringes, in order to send the sample to be measured to the separation column 4 via the switching valve 2,
And other components that function together with these components are incorporated. Further, the pumps 5A and 5B cooperate with the switching valve 2 to form a measured sample supply system that supplies the measured sample to the pretreatment column 3, the separation column 4 and the detector 6.
【０００５】図４に示される構成によれば、被測定試料
はポンプ５Ａにより供給される溶媒（移動相Ａ）と共に
オートサンプラー１から前処理用カラム３に送られ不要
成分の除去が行われる。そして、前処理用カラム３にお
いて濃縮された被測定試料は、ポンプ５Ｂにより供給さ
れる溶媒（移動相Ｂ）と共に分離処理を行うために分離
用カラム４に供給される。この際、移動相Ａと移動相Ｂ
の切り換えは、先に述べたスイッチングバルブ２により
行われる。According to the configuration shown in FIG. 4, the sample to be measured is sent from the autosampler 1 to the pretreatment column 3 together with the solvent (mobile phase A) supplied by the pump 5A to remove unnecessary components. Then, the sample to be measured concentrated in the pretreatment column 3 is supplied to the separation column 4 for separation treatment together with the solvent (mobile phase B) supplied by the pump 5B. At this time, mobile phase A and mobile phase B
Is switched by the switching valve 2 described above.
【０００６】搬送された被測定試料は分離用カラム４に
おいて分離され、検出器６において被測定試料に対して
所定の分析処理が行われる。また、上記構成とされた液
体クロマトグラフィ装置は、分析処理の制御を行うため
にコンピューターにより構成されるコントローラー７を
具備している。このコントローラー７は、オートサンプ
ラー１，スイッチングバルブ２，及びポンプ５Ａ，５Ｂ
の駆動制御を行う。The transported sample to be measured is separated in the separation column 4, and the detector 6 performs a predetermined analysis process on the sample to be measured. Further, the liquid chromatography device configured as described above includes a controller 7 configured by a computer for controlling the analysis process. The controller 7 includes an auto sampler 1, a switching valve 2, and pumps 5A and 5B.
Is performed.
【０００７】続いて、コントローラー７の制御処理によ
り実施されるスイッチングバルブ２の切り換え動作につ
いて説明する。スイッチングバルブ２はコントローラー
７の制御処理により、液体クロマトグラフィ装置内に形
成される被測定試料の流路を第１の状態と第２の状態と
に切り換え処理を行う。Next, the switching operation of the switching valve 2 performed by the control processing of the controller 7 will be described. The switching valve 2 switches the flow path of the sample to be measured formed in the liquid chromatography apparatus between the first state and the second state by the control processing of the controller 7.
【０００８】スイッチングバルブ２が第１の状態となっ
ている時、ポンプ５Ａの発生するポンプ圧によりオート
サンプラー１から移動相Ａと共に圧送される被測定試料
は、前処理用カラム３を通過した後にスイッチングバル
ブ２に供給され、更に被測定試料は図中実線で示される
ラインに沿って図示されない廃液貯蔵槽に向け進んでゆ
く。この際、被測定試料に含まれる分析対象となる物質
のみが前処理用カラム３に捕獲され濃縮処理される。ま
た、同時に移動相Ｂもポンプ５Ｂの発生するポンプ圧に
よりスイッチングバルブ２に供給され、図４に実線で示
すラインに沿って分離用カラム４に向け流れる構成とな
っている。When the switching valve 2 is in the first state, the sample to be measured, which is pumped together with the mobile phase A from the autosampler 1 by the pump pressure generated by the pump 5A, passes through the pretreatment column 3 The sample to be measured is supplied to the switching valve 2 and further advances toward a waste liquid storage tank (not shown) along a line shown by a solid line in the figure. At this time, only the substance to be analyzed contained in the sample to be measured is captured by the pretreatment column 3 and concentrated. At the same time, the mobile phase B is also supplied to the switching valve 2 by the pump pressure generated by the pump 5B and flows toward the separation column 4 along the line shown by the solid line in FIG.
【０００９】一方、コントローラー７の制御処理により
スイッチングバルブ２が第２の状態となると、前処理用
カラム３において濃縮された被測定試料は、図４に破線
で示すラインに沿って流れて分離用カラム４に供給され
る。この分離用カラム４で被測定試料は分離処理された
上で検出器６に供給され、この検出器６において被測定
試料に対する所定の分析処理が行われる。尚、ポンプ５
Ｂから供給される移動相Ｂは、図中破線で示されるライ
ンに沿って図示しない廃液貯蔵槽に流出される構成とな
っている。On the other hand, when the switching valve 2 is brought into the second state by the control processing of the controller 7, the sample to be measured concentrated in the pretreatment column 3 flows along the line shown by the broken line in FIG. 4 for separation. It is supplied to the column 4. The sample to be measured is separated by the separation column 4 and then supplied to the detector 6, and the detector 6 performs a predetermined analysis process on the sample to be measured. In addition, pump 5
The mobile phase B supplied from B is configured to flow out to a waste liquid storage tank (not shown) along a line indicated by a broken line in the figure.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】しかるに、上記構成と
された液体クロマトグラフィ装置は、分析処理を行う第
２の状態において、前処理用カラム３において濃縮され
た被測定試料がポンプ５Ａから供給される移動相Ａの流
れに沿って分離用カラム４を介して検出器６に供給され
て分離処理が行われる構成とされており、移動相Ａの特
性（例えば，組成，ｐＨ，イオン強度等）は一定の所定
組成のものが使用されていた。However, in the liquid chromatography device having the above-mentioned configuration, the sample to be measured concentrated in the pretreatment column 3 is supplied from the pump 5A in the second state in which the analysis process is performed. The mobile phase A is configured to be supplied to the detector 6 through the separation column 4 along the flow of the mobile phase A to perform the separation process, and the characteristics (eg, composition, pH, ionic strength, etc.) of the mobile phase A are A certain predetermined composition was used.
【００１１】即ち、図４に示される従来の液体クロマト
グラフィ装置では、移動相Ａの特性を変化させる機能を
有していなかった。このため、従来の液体クロマトグラ
フィ装置では、移動相Ａの特性を変化させつつ分析処理
を行う分析方法であるグラディエント分析法を行うこと
ができず、従って広範囲な極性にわたる被測定資料を短
い時間で分析処理することができないという問題点があ
った。That is, the conventional liquid chromatography apparatus shown in FIG. 4 does not have the function of changing the characteristics of the mobile phase A. For this reason, the conventional liquid chromatography device cannot perform the gradient analysis method, which is an analysis method in which the analysis processing is performed while changing the characteristics of the mobile phase A. Therefore, the measured material over a wide range of polarities can be analyzed in a short time. There was a problem that it could not be processed.
【００１２】また、ここで内径が１ｍｍ未満の小口径カ
ラムをマイクロカラムと定義すると、このマイクロカラ
ムに関する文献は種々報告されている。この文献として
は、例えば(1)R.P.Scott,and P.J.Kucera, "J.Chromato
gr.,125(1978)271" 、(2)T.Tsuda, and M.Novotny,"Ana
l.Chem.50(1978)632" 、(3)D.Ishii,K.Asai,K.Hibi,T.J
anokuchi,and M.J.Nagaya,"J.Chromatogr.,124(1977)15
7"、(4)M.Novotny,"Anal.Chem.60(1988)500A等が挙げら
れる。If a small diameter column having an inner diameter of less than 1 mm is defined as a microcolumn, various literatures on this microcolumn have been reported. Examples of this document include (1) RPScott, and PJKucera, "J. Chromato
gr., 125 (1978) 271 ", (2) T.Tsuda, and M.Novotny," Ana
l.Chem.50 (1978) 632 ", (3) D.Ishii, K.Asai, K.Hibi, TJ
anokuchi, and MJ Nagaya, "J. Chromatogr., 124 (1977) 15
7 ", (4) M. Novotny," Anal. Chem. 60 (1988) 500A and the like.
【００１３】これら一連の報告では、マイクロカラムを
用いることの一般的な利点として、(1) 高理論段数、
(2) 濃度感応形検出器を用いた場合の濃縮効果による応
答の増大、(3) 質量分析計等の溶媒除去を要する機器へ
の接続の容易さ、(4) 溶媒消費量の節減等が挙げられて
いる。In these series of reports, the general advantages of using a microcolumn are as follows: (1) high theoretical plate number,
(2) Increased response due to concentration effect when using a concentration-sensitive detector, (3) easy connection to equipment that requires solvent removal such as mass spectrometer, (4) reduction of solvent consumption, etc. Listed.
【００１４】しかるに、上記のように優れた利点を有す
るマイクロカラムを用いた液体クロマトグラフィ装置が
現在でも一般に用いられていない理由は、本発明者の考
察では、マイクロカラムを用いた液体クロマトグラフィ
装置では、保持時間の管理に不可欠な流量モードの流量
安定性が劣る点、またカラム安定性が汎用サイズのカラ
ム（セミミクロカラム）を用いた場合に比べて劣る点に
あると思われる。However, the reason why the liquid chromatography device using the microcolumn having the above-mentioned excellent advantages is not generally used even now is that the inventors of the present invention have considered that the liquid chromatography device using the microcolumn is It seems that the flow stability of the flow mode, which is indispensable for retention time management, is inferior, and the column stability is inferior to the case of using a general-purpose column (semi-micro column).
【００１５】また、いまひとつのマイクロカラムを用い
た液体クロマトグラフィ装置の根本的な問題として、分
析を行おうとする分析試料調製のディメンジョン（数十
から数百マイクロリッター）とマイクロカラムを用いた
液体クロマトグラフィ装置の試料注入量（数マイクロリ
ッター）とでディメンジョンの不一致がある。マイクロ
カラムを用いた液体クロマトグラフィ装置は微小の試料
注入量にて分析を行うが、試料溶液中の分析対象物の濃
度が極端に低い場合、調製された溶液の殆どを分析に供
したいという願望が測定者には生じる。しかるに、従来
構成のマイクロカラムを用いた液体クロマトグラフィ装
置では、この要望に答えることができなかった。Further, as a fundamental problem of the liquid chromatography apparatus using another microcolumn, the dimension (several tens to several hundreds of microliters) of the analytical sample preparation to be analyzed and the liquid chromatography apparatus using the microcolumn are used. There is a discrepancy in dimensions with the sample injection amount (several microliters). A liquid chromatography apparatus using a microcolumn analyzes with a small amount of sample injection, but when the concentration of the analyte in the sample solution is extremely low, there is a desire to use most of the prepared solution for analysis. It happens to the measurer. However, the liquid chromatography apparatus using the microcolumn having the conventional configuration cannot meet this demand.
【００１６】また、前記した図４に示す液体クロマトグ
ラフィ装置において、分離用カラム４としてセミミクロ
カラム（内径が１〜２ｍｍ）を用いた場合と、マイクロ
カラム（内径が１ｍｍ未満）を用いた場合とにおける試
料溶液の流速について考察すると、分離用カラム４とし
てセミミクロカラムを用いた場合の流速は 1.0ｍｌ／ｍ
ｉｎ程度であるのに対し、マイクロカラムを用いた場合
には内径寸法が小さくなるため流速は最大で 0.2ｍｌ／
ｍｉｎ程度と遅くする必要が生じる。In the liquid chromatography apparatus shown in FIG. 4 described above, a semi-micro column (having an inner diameter of 1 to 2 mm) and a micro column (having an inner diameter of less than 1 mm) are used as the separation column 4. Considering the flow rate of the sample solution, the flow rate when using a semi-micro column as the separation column 4 is 1.0 ml / m.
In contrast, when using a microcolumn, the inner diameter becomes smaller, so the maximum flow rate is 0.2 ml /
It becomes necessary to slow it down to about min.
【００１７】試料溶液の流速は、上記のように分離用カ
ラム４の径寸法が小さくなるほど遅くなる傾向を有す
る。従って、単に大径を有する前処理用カラム３と小径
を有する分離用カラム４とを連通させた構成では測定に
要する時間が長くなり、効率的な測定処理を行うことが
できなくなってしまう。As described above, the flow rate of the sample solution tends to become slower as the diameter of the separation column 4 becomes smaller. Therefore, in the configuration in which the pretreatment column 3 having a large diameter and the separation column 4 having a small diameter are simply communicated with each other, the time required for measurement becomes long, and efficient measurement processing cannot be performed.
【００１８】本発明は上記の点に鑑みてなされたもので
あり、グラディエント分析法による分析処理を可能とす
ると共に測定感度及び測定効率の向上を図った液体クロ
マトグラフィ装置及びこれを用いた分析方法を提供する
ことを目的とする。The present invention has been made in view of the above points, and provides a liquid chromatography apparatus which enables an analysis process by a gradient analysis method and improves measurement sensitivity and measurement efficiency, and an analysis method using the same. The purpose is to provide.
【００１９】[0019]
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明では下記の手段を講じたことを特徴とするも
のである。請求項１記載の発明に係る液体クロマトグラ
フィ装置では、溶媒に混在する被測定試料を分離する分
離用カラムと、複数個配設されると共にその内の少なく
ともひとつは前記分離用カラムの内径寸法よりも大なる
内径寸法を有する構成とされており、かつ、前記溶媒と
共に供給される前記被測定試料を濃縮処理する機能及び
不要高分子物質を除去処理する機能を有した前処理用カ
ラムと、前記溶媒の特性を可変する特性可変手段と、前
記特性可変手段において生成された所定特性の溶媒、及
び試料注入手段より供給された前記被測定試料を前記前
処理用カラム或いは分離用カラムに供給する流路制御手
段と、前記分離用カラムで分離された前記被測定試料が
供給されると共に、供給された前記被測定試料を分析処
理する検出手段とを設けたことを特徴とするものであ
る。Means for Solving the Problems In order to solve the above problems, the present invention is characterized by taking the following means. In the liquid chromatography apparatus according to the invention of claim 1, a separation column for separating the sample to be measured mixed in the solvent and a plurality of separation columns are provided, and at least one of them is larger than the inner diameter of the separation column. A pretreatment column having a large inner diameter dimension and having a function of concentrating the sample to be measured supplied together with the solvent and a function of removing an unnecessary polymer substance, and the solvent. And a flow path for supplying the solvent having a predetermined characteristic generated in the characteristic changing means and the sample to be measured supplied from the sample injection means to the pretreatment column or the separation column. A control means and a detection means for supplying the measured sample separated by the separation column and for analyzing the supplied measured sample are provided. The one in which the features.
【００２０】また、請求項２記載の分析方法では、前記
請求項１記載の液体クロマトグラフィ装置を用いた分析
方法において、前記特性可変手段から供給された所定特
性の溶媒と、前記試料注入手段より供給される前記被測
定試料とを混合して被測定溶液を生成し、該被測定溶液
を前記大なる内径寸法を有する濃縮用カラムに導入して
不要な高分子物質を除去する除去工程と、前記除去工程
が終了した後、前記大なる内径寸法を有する前処理用カ
ラムの下流側に小なる内径寸法を有する濃縮用カラムを
接続して前記被測定試料の濃縮処理を行う濃縮工程と、
前記濃縮工程が終了した後、前記大なる内径寸法を有す
る前処理用カラムを取り除くと共に前記分離用カラムを
前記小なる内径寸法を有する濃縮用カラムの下流側に接
続し、前記特性可変手段により供給される溶媒の特性を
変化させつつ前記分離用カラムで前記被測定試料を分離
し、分離された被測定試料を前記検出手段に供給して分
析処理を行う分析工程とを有することを特徴とするもの
である。Further, in the analysis method according to claim 2, in the analysis method using the liquid chromatography device according to claim 1, the solvent having a predetermined characteristic supplied from the characteristic changing means and the sample injection means are supplied. A removal step of mixing the sample to be measured to produce a solution to be measured, introducing the solution to be measured into a column for concentration having the large inner diameter dimension to remove unnecessary polymer substances, and After the removal step is completed, a concentration step of concentrating the sample to be measured by connecting a concentration column having a smaller inner diameter dimension to the downstream side of the pretreatment column having the larger inner diameter dimension,
After completion of the concentration step, the pretreatment column having the large inner diameter dimension is removed, the separation column is connected to the downstream side of the concentration column having the small inner diameter dimension, and supplied by the characteristic varying means. An analysis step of separating the sample to be measured by the separation column while changing the characteristics of the solvent to be supplied, and supplying the separated sample to be measured to the detection means to perform an analysis process. It is a thing.
【００２１】上記した請求項１及び２に記載された各手
段は次のように作用する。上記構成の液体クロマトグラ
フィ装置は、溶媒の特性を可変する特性可変手段を有し
ており、この特性可変手段において生成された所定特性
（組成，ｐＨ，イオン強度等）の溶媒は、流路制御手段
による制御動作により試料注入手段より供給された被測
定試料を前処理用カラム，濃縮用カラム及び分離カラム
に供給し、更に各カラムの下流側に配設された検出手段
に供給する。Each means described in claims 1 and 2 described above operates as follows. The liquid chromatography device having the above-mentioned configuration has a characteristic varying means for varying the characteristic of the solvent, and the solvent having a predetermined characteristic (composition, pH, ionic strength, etc.) generated by the characteristic varying means is flow path controlling means. The sample to be measured supplied by the sample injecting means is supplied to the pretreatment column, the concentrating column, and the separation column by the control operation by the above, and further to the detecting means arranged on the downstream side of each column.
【００２２】よって、本願発明に係る液体クロマトグラ
フィ装置及びこれを用いた分析方法では、被測定試料の
検査時に特性可変手段により溶媒の特性を変化させるこ
とができるため、グラディエント分析法を実施すること
が可能となり、広範囲な極性にわたる被測定資料を前処
理を必要とせず分析処理することが可能となる。Therefore, in the liquid chromatography apparatus and the analysis method using the same according to the present invention, since the characteristic of the solvent can be changed by the characteristic changing means when the sample to be measured is inspected, the gradient analysis method can be carried out. It becomes possible, and it becomes possible to analyze the measured material over a wide range of polarities without requiring pretreatment.
【００２３】また、本願発明に係る液体クロマトグラフ
ィ装置及びこれを用いた分析方法では、被測定試料を種
々の内径寸法を有する濃縮用カラムにより濃縮処理を行
うことが可能となる。このように、分離用カラムに被測
定試料を導入する前において、濃縮用カラムへ被測定試
料を導入て濃縮処理を行うことにより、被測定試料の流
速低下を最小限に留めることが可能となり、測定時間の
短縮を図ることが可能となる。Further, in the liquid chromatography apparatus and the analysis method using the same according to the present invention, the sample to be measured can be concentrated by the concentration columns having various inner diameters. Thus, before introducing the sample to be measured into the separation column, by introducing the sample to be measured into the concentration column and performing the concentration process, it becomes possible to minimize the decrease in the flow rate of the sample to be measured, It is possible to reduce the measurement time.
【００２４】また、濃縮用カラムにより濃縮処理が行わ
れることにより、被測定試料の濃縮効率は向上する。こ
のため、検出手段により行われる測定処理は最終段の濃
縮用カラムで濃縮された濃縮密度の高い被測定試料にて
行われるため、測定感度を向上させることができる。Moreover, the concentration efficiency of the sample to be measured is improved by performing the concentration treatment by the concentration column. Therefore, the measurement process performed by the detection means is performed on the sample to be measured that has been concentrated in the final concentration column and has a high concentration density, so that the measurement sensitivity can be improved.
【００２５】更に、上記のように濃縮密度が向上するこ
とにより被測定試料の安定化を図ることができ、かつ上
記のように測定時間の短縮が図られるため、分離用カラ
ムとして内径寸法が１〜２ｍｍのいわゆるセミミクロカ
ラムを用いることが可能となり、(1) 高理論段数、(2)
濃度感応形検出器を用いた場合の濃縮効果による応答の
増大、(3) 質量分析計等の溶媒除去を要する機器への接
続の容易さ、(4) 溶媒消費量の節減等のセミミクロカラ
ムを用いることによる効果を享受することができる。Furthermore, since the sample to be measured can be stabilized by improving the concentration density as described above and the measuring time can be shortened as described above, the separation column has an inner diameter of 1 mm. It becomes possible to use a so-called semi-micro column of ~ 2 mm, (1) high theoretical plate number, (2)
Increased response due to concentration effect when using concentration-sensitive detector, (3) easy connection to equipment that requires solvent removal such as mass spectrometer, (4) semi-micro column to save solvent consumption etc. The effect of using it can be enjoyed.
【００２６】[0026]
【発明の実施の形態】次に本発明の実施の形態について
図面と共に説明する。図１は本発明の一実施例である液
体クロマトグラフィ装置１０を示す全体構成図である。
本実施例に係る液体クロマトグラフィ装置１０は、大略
するとオートサンプラー１１、六方弁として構成される
第１の６方スイッチングバルブ（以下、第１スイッチン
グバルブという）１２、前処理用カラム（以下、ＭＦカ
ラムという）１３、濃縮用カラム（以下、中間カラムと
いう）１４、分離用カラム１５、及び検出器１６を有し
た構成とされている。尚、上記のＭＦカラム１３と中間
カラム１４を総称する場合には、その機能面から前処理
用カラムというものとする。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Next, embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings. FIG. 1 is an overall configuration diagram showing a liquid chromatography device 10 which is an embodiment of the present invention.
The liquid chromatography apparatus 10 according to the present embodiment is roughly divided into an auto sampler 11, a first 6-way switching valve (hereinafter referred to as a first switching valve) 12 configured as a 6-way valve, a pretreatment column (hereinafter referred to as an MF column). 13), a concentration column (hereinafter, referred to as an intermediate column) 14, a separation column 15, and a detector 16. The MF column 13 and the intermediate column 14 are collectively referred to as a pretreatment column in terms of their functions.
【００２７】また、本実施例に係る液体クロマトグラフ
ィ装置１０は、第１ポンプ１７，第２ポンプ１８及び第
２スイッチングバルブ１９が配設されていることを特徴
とする。尚、第１及び第２スイッチングバルブ１２，１
９は流路制御手段として機能し、また第１及び第２ポン
プ１７，１８は特性可変手段として機能する。Further, the liquid chromatography apparatus 10 according to this embodiment is characterized in that the first pump 17, the second pump 18 and the second switching valve 19 are arranged. Incidentally, the first and second switching valves 12, 1
9 functions as a flow path control means, and the first and second pumps 17 and 18 function as characteristic varying means.
【００２８】オートサンプラー１１は、その内部に被測
定試料を各カラム１３〜１５に送り出すための各種バル
ブ，シリンジ，及びこれらの構成要素と共に機能する他
の構成要素が組み込まれた構成となっている。ＭＦカラ
ム１３は、例えばその内径が１〜４ｍｍ程度のカラムで
あり、またその長さは１０〜５０ｍｍであり比較的短い
寸法とされている。この構成とすることにより、ＭＦカ
ラム１３は約２００μｌの容積を有することとなる。こ
の容積を有するＭＦカラム１３の内部には、被測定試料
を前処理するための充填物質が詰められている。特に、
本実施例では充填物質として、上記の濃縮機能と共にタ
ンパク質等の高分子物質を除去しうる機能を有したもの
が選定されている。The autosampler 11 has a structure in which various valves and syringes for sending out a sample to be measured to each of the columns 13 to 15 and other components functioning together with these components are incorporated therein. . The MF column 13 is, for example, a column having an inner diameter of about 1 to 4 mm, and has a length of 10 to 50 mm, which is a relatively short dimension. With this configuration, the MF column 13 has a volume of about 200 μl. A packing substance for pretreating the sample to be measured is packed inside the MF column 13 having this volume. Especially,
In this embodiment, as the filling substance, one having a function of removing a polymer substance such as a protein in addition to the above-mentioned concentration function is selected.
【００２９】上記のようにＭＦカラム１３として短い寸
法のカラムを用いることにより、物質の定量を行うのに
必要な論理段数（分離効率の指数）は得られないもの
の、例えば繰り返し供雑物の多い生体試料液を注入した
際の圧力増加を緩和する点で大きな効果を奏する。尚、
ＭＦカラム１３における溶媒（移動相溶媒）の流速は例
えば０．５〜１．０ｍｌ／ｍｉｎに設定されている。By using a column having a short size as the MF column 13 as described above, the number of logical steps (index of separation efficiency) necessary for quantifying a substance cannot be obtained, but, for example, many repeated contaminants are present. A great effect is obtained in that the increase in pressure when the biological sample solution is injected is mitigated. still,
The flow rate of the solvent (mobile phase solvent) in the MF column 13 is set to, for example, 0.5 to 1.0 ml / min.
【００３０】中間カラム１４は、ＭＦカラム１３により
第１次分離処理が行われた試料溶液を更に分離し濃縮す
る処理を行うものである。また、中間カラム１４はその
内径寸法が２．０ｍｍ，長さが３５ｍｍとされている。
この中間カラム１４の内部には、被測定試料を濃縮する
ためのカラム充填剤が充填されている。The intermediate column 14 performs a process of further separating and concentrating the sample solution which has been subjected to the primary separation process by the MF column 13. Further, the intermediate column 14 has an inner diameter of 2.0 mm and a length of 35 mm.
The inside of the intermediate column 14 is filled with a column packing material for concentrating the sample to be measured.
【００３１】また、ＭＦカラム１３と中間カラム１４
は、後述するように各カラム４３，４４が連通された状
態において、試料溶液（被測定試料と溶媒とを混合した
ものをいう）の流れに対して上流側にＭＦカラム１３
が、下流側に中間カラム１４が配設されるよう構成され
ている。また、試料溶液の流れに対して上流側に配設さ
れたＭＦカラム１３の内径寸法は、下流側に配設された
中間カラム１４の内径寸法よりも大きくなるよう設定さ
れている。Further, the MF column 13 and the intermediate column 14
Is an upstream side of the MF column 13 with respect to the flow of the sample solution (which is a mixture of the sample to be measured and the solvent) in a state where the columns 43 and 44 are communicated with each other, as will be described later.
However, the intermediate column 14 is arranged on the downstream side. Further, the inner diameter dimension of the MF column 13 arranged on the upstream side with respect to the flow of the sample solution is set to be larger than the inner diameter dimension of the intermediate column 14 arranged on the downstream side.
【００３２】分離用カラム１５は試料溶液から被測定試
料を分離するものであり、この分離用カラム１５で分離
された被測定試料は検出器１６に搬送されて所定の測定
が行われる。分離用カラム１５は、例えばその内径寸法
が１．０ｍｍ，長さが２５０ｍｍとされたマイクロカラ
ムを用いている。また、検出器１６としては、例えば紫
外部吸収検出器が用いられている。The separation column 15 separates the sample to be measured from the sample solution, and the sample to be measured separated by the separation column 15 is conveyed to the detector 16 to perform a predetermined measurement. As the separation column 15, for example, a microcolumn having an inner diameter of 1.0 mm and a length of 250 mm is used. Further, as the detector 16, for example, an ultraviolet absorption detector is used.
【００３３】一方、第１ポンプ１７は第１の容器２０に
接続されており、この第１の容器２０に充填された第１
の溶媒を第２スイッチングバルブ１９に向け圧送する構
成とされている。また、第２ポンプ１８は第２の容器２
１に接続されており、この第２の容器２１に充填された
第２の溶媒を第２スイッチングバルブ１９に向け圧送す
る構成とされている。本実施例では、第１の容器２０に
充填される第１の溶媒として５０ｍＭのリン酸緩衝液が
選定されており、また第２の容器２１に充填される第２
の溶媒としてアセトニトリル（ＡｃＣＮ）が選定されて
いる。On the other hand, the first pump 17 is connected to the first container 20, and the first container 20 is filled with the first pump 17.
The solvent is sent under pressure to the second switching valve 19. In addition, the second pump 18 is the second container 2
1 and is configured to send the second solvent filled in the second container 21 by pressure toward the second switching valve 19. In this embodiment, a 50 mM phosphate buffer solution is selected as the first solvent with which the first container 20 is filled, and the second solvent with which the second container 21 is filled is selected.
Acetonitrile (AcCN) has been selected as the solvent.
【００３４】また、第１ポンプ１７の出力配管１７ａと
第２ポンプ１８の出力配管１８ａは、第２スイッチング
バルブ１９に至る途中位置で合流して１本の配管となっ
た上で第２スイッチングバルブ１９に接続されている。
従って、第１ポンプ１７及び第２ポンプ１８の出力を適
宜可変することにより、換言すれば各ポンプ１７，１８
が第１及び第２の溶媒を圧送する各速度（流速）を制御
することにより、第２スイッチングバルブ１９に向け供
給される溶媒の特性（本実施例ではアセトニトリルの濃
度。但し、ｐＨ，イオン強度等を可変することも可能で
ある）を可変することができる。尚、第２スイッチング
バルブ１９は六方弁として構成される第１スイッチング
バルブと同一構成とされている。The output pipe 17a of the first pump 17 and the output pipe 18a of the second pump 18 join at a position midway to the second switching valve 19 to form one pipe, and then the second switching valve. It is connected to 19.
Therefore, by appropriately varying the outputs of the first pump 17 and the second pump 18, in other words, each pump 17, 18
By controlling the respective speeds (flow rates) at which the first and second solvents are pressure-fed, the characteristics of the solvent supplied to the second switching valve 19 (concentration of acetonitrile in this embodiment. However, pH, ionic strength It is also possible to change) and the like. The second switching valve 19 has the same configuration as the first switching valve configured as a hexagonal valve.
【００３５】上記のように本実施例に係る液体クロマト
グラフィ装置１０では、移動相となる溶媒の特性を第１
ポンプ１７及び第２ポンプ１８を制御することにより変
化させることが可能となる。従って、溶媒（移動相）の
特性を変化させつつ分析処理を行うグラディエント分析
法を行うことが可能となり、広範囲な極性にわたる被測
定資料を短い時間で分析処理することが可能となる。As described above, in the liquid chromatography device 10 according to this embodiment, the characteristics of the solvent serving as the mobile phase are
It can be changed by controlling the pump 17 and the second pump 18. Therefore, it is possible to perform the gradient analysis method in which the analysis processing is performed while changing the characteristics of the solvent (mobile phase), and it is possible to perform the analysis processing on the measured material over a wide range of polarities in a short time.
【００３６】また、上記構成とされた液体クロマトグラ
フィ装置１０は、分析処理の制御を行うためにコンピュ
ーターにより構成されるコントローラー（図示せず）が
設けられている。このコントローラーは、オートサンプ
ラー１１、第１及び第２スイッチングバルブ１２，１
９、及び第１及び第２ポンプ１７，１８の駆動制御を行
う。Further, the liquid chromatography apparatus 10 having the above-mentioned configuration is provided with a controller (not shown) which is composed of a computer for controlling the analysis process. This controller includes an auto sampler 11, first and second switching valves 12, 1
9, and drive control of the first and second pumps 17 and 18 is performed.
【００３７】続いて、上記構成とさたれ液体クロマトグ
フィ装置の動作について説明する。各スイッチングバル
ブ１２，１９はコントローラーにより駆動制御されるこ
とにより、液体クロマトグラフィ装置１０内に形成され
る被測定試料の流路の形態を第１の状態〜第３の状態に
切り換え処理を行う。Next, the operation of the sagittal liquid chromatograph apparatus having the above configuration will be described. The switching valves 12 and 19 are driven and controlled by the controller to switch the form of the flow path of the sample to be measured formed in the liquid chromatography apparatus 10 from the first state to the third state.
【００３８】先ず、スイッチングバルブ１２，１９が図
２（Ａ）に示される状態（第１の状態）にセットされて
いる場合の動作について説明する。この第１の状態で
は、第１及び第２のスイッチングバルブ１２，１９は、
共に図１に“Ａ”で示されるバルブが開弁された状態
（Ａの両側の通路が連通した状態）である。First, the operation when the switching valves 12 and 19 are set to the state (first state) shown in FIG. 2A will be described. In this first state, the first and second switching valves 12, 19 are
Both are in the state in which the valve indicated by "A" in FIG. 1 is opened (the state in which the passages on both sides of A are in communication).
【００３９】この第１の状態では、溶媒の流れに対し上
流側から第１及び第２ポンプ１７，１８、オートサンプ
ラー１１、ＭＦカラム１３が順次連通した構成となって
いる。よって、この第１の状態では、先ず第１及び第２
のポンプ１７，１８から供給される溶媒はオートサンプ
ラー１１に供給され被測定試料が溶媒に混入される（試
料溶液が生成される）。In the first state, the first and second pumps 17 and 18, the autosampler 11 and the MF column 13 are sequentially connected from the upstream side with respect to the flow of the solvent. Therefore, in this first state, first the first and second
The solvent supplied from the pumps 17 and 18 is supplied to the autosampler 11 and the sample to be measured is mixed with the solvent (a sample solution is generated).
【００４０】続いて、オートサンプラー１１で生成され
た試料溶液はＭＦカラム１３に供給されるが、前記した
ようにＭＦカラム１３にはタンパク質等の高分子物質を
除去する機能を有した充填材が充填されている。従っ
て、ＭＦカラム１３では高分子物質の除去処理が行われ
る。例えば、生体液を被測定試料とした場合には、初期
段階においてタンパク質が流出し各カラム１３〜１５が
詰まるおそれがある。Subsequently, the sample solution produced by the autosampler 11 is supplied to the MF column 13, and as described above, the MF column 13 is provided with a packing material having a function of removing polymer substances such as proteins. It is filled. Therefore, the MF column 13 is subjected to the removal treatment of the polymer substance. For example, when a biological fluid is used as the sample to be measured, proteins may flow out in the initial stage and each of the columns 13 to 15 may be clogged.
【００４１】しかるに、本実施例に係る液体クロマトグ
ラフィ装置１０では、生体液を被測定試料としても第１
の状態（除去工程）においてタンパク質の除去を行うこ
とができるため、従来生体液の測定において必要とされ
た除タンパク，溶媒抽出，濃縮等の前処理を不要とする
ことができ、直接生体液を液体クロマトグラフィ装置１
０に打ち込むことが可能となる。よって、生体液に対す
る分析・測定処理を容易に行うことができる。また、高
分子物質の除去と共に被測定試料の濃縮処理も合わせて
行われる。従って、ＭＦカラム１３では測定を行おうと
する被測定試料（目標物質）のみが捕集され、測定に不
要な他の混入物は補集されることなく通過する。尚、こ
の時の第１ポンプ１７の流速は２４７μｌ／ｍｉｎとさ
れており、第２ポンプ１８の流速は３μｌ／ｍｉｎとさ
れている。However, in the liquid chromatography device 10 according to the present embodiment, even if the biological fluid is used as the sample to be measured,
Since the protein can be removed in the state (removal step), the pretreatment such as deproteinization, solvent extraction, concentration, etc., which is conventionally required in the measurement of biological fluid, can be eliminated, and the biological fluid can be directly Liquid chromatography device 1
It is possible to type in 0. Therefore, the analysis / measurement process for the biological fluid can be easily performed. In addition, the concentration of the sample to be measured is performed together with the removal of the polymer substance. Therefore, in the MF column 13, only the sample to be measured (target substance) to be measured is collected, and other contaminants unnecessary for the measurement pass without being collected. The flow rate of the first pump 17 at this time is 247 μl / min, and the flow rate of the second pump 18 is 3 μl / min.
【００４２】所定の時間が経過すると、コントローラー
は各スイッチングバルブ１２，１９を図２（Ｂ）に示さ
れる状態（第２の状態）に切り換える。この第２の状態
では、第１スイッチングバルブ１２は図１に“Ｂ”で示
されるバルブが開弁された状態（Ｂの両側の通路が連通
した状態）となり、第２スイッチングバルブ１９は図１
に“Ａ”で示されるバルブが開弁された状態を維持す
る。After a predetermined time has elapsed, the controller switches each of the switching valves 12 and 19 to the state (second state) shown in FIG. 2 (B). In this second state, the first switching valve 12 is in a state in which the valve indicated by “B” in FIG. 1 is opened (the passages on both sides of B are in communication), and the second switching valve 19 is in FIG.
The valve indicated by "A" is kept open.
【００４３】この第２の状態では、溶媒の流れに対し上
流側から第１及び第２ポンプ１７，１８、オートサンプ
ラー１１、ＭＦカラム１３，中間カラム１４が順次連通
した構成となっている。よって、この第２の状態（濃縮
工程）では、ＭＦカラム１３において一次的に濃縮処理
された被測定物質は溶け出し、そして各ポンプ１７，１
８から供給される溶媒（移動相）の流れにより中間カラ
ム１４に供給される。この中間カラム１４においても測
定に不要な混入物質は通り抜け、目標となる被測定物質
のみの濃縮処理が行われる。尚、この時の第１ポンプ１
７の流速は１４８μｌ／ｍｉｎとされており、第２ポン
プ１８の流速は２μｌ／ｍｉｎとされている。In the second state, the first and second pumps 17 and 18, the autosampler 11, the MF column 13, and the intermediate column 14 are connected in this order from the upstream side with respect to the flow of the solvent. Therefore, in this second state (concentration step), the substance to be measured that has been primarily concentrated in the MF column 13 is dissolved, and each pump 17, 1
It is supplied to the intermediate column 14 by the flow of the solvent (mobile phase) supplied from 8. In this intermediate column 14 too, contaminants unnecessary for measurement pass through, and only the target substance to be measured is concentrated. The first pump 1 at this time
The flow rate of No. 7 is 148 μl / min, and the flow rate of the second pump 18 is 2 μl / min.
【００４４】更に所定時間が経過し上記処理が終わる
と、コントローラーは各スイッチングバルブ１２，１９
を図２（Ｃ）に示される状態（第３の状態）に切り換え
る。この第３の状態では、第１スイッチングバルブ１２
は図１に“Ｂ”で示されるバルブが開弁された状態を維
持し、第２スイッチングバルブ１９は図１に“Ｂ”で示
されるバルブが開弁されるようバルブの切り換えが行わ
れる。When a predetermined time further elapses and the above processing is completed, the controller operates the switching valves 12, 19 respectively.
Is switched to the state (third state) shown in FIG. In this third state, the first switching valve 12
1 maintains the state in which the valve indicated by "B" in FIG. 1 is opened, and the second switching valve 19 is switched so that the valve indicated by "B" in FIG. 1 is opened.
【００４５】この第３の状態では、溶媒の流れに対し上
流側から第１及び第２ポンプ１７，１８、中間カラム１
４、分離カラム１５が順次連通した構成となっている。
よって、この第３の状態（分析工程）では、中間カラム
１４で濃縮された被測定物質は、中間カラム１４から分
離用カラム１５に向け移動してゆく。そして、分離用カ
ラム１５で分離された被測定物質は検出器１６に供給さ
れ、検出処理が行われる。In this third state, the first and second pumps 17 and 18 and the intermediate column 1 are arranged from the upstream side with respect to the solvent flow.
4. The separation column 15 is connected in sequence.
Therefore, in the third state (analysis step), the substance to be measured concentrated in the intermediate column 14 moves from the intermediate column 14 toward the separation column 15. Then, the substance to be measured separated by the separation column 15 is supplied to the detector 16 and a detection process is performed.
【００４６】この際、コントローラーは第１及び第２ポ
ンプ１７，１８を制御することにより、溶媒の特性を時
間の経過に伴い順次変化させる。具体的には、第１ポン
プ１７が生成する流速を徐々に少なくすると共に、第２
ポンプ１８が生成する流速を徐々に多くする。これによ
り、中間カラム１４及び分離用カラム１５に供給される
溶媒の特性は、リン酸緩衝液に対するアセトニトリル
（ＡｃＣＮ）の含有率が増大する特性となる。本実施例
では、リン酸緩衝液に対するアセトニトリルの含有率を
１％から８０％まで変化させている。尚、この時の第１
ポンプ１７と第２ポンプ１８の合計流速は１００μｌ／
ｍｉｎとされている。At this time, the controller controls the first and second pumps 17 and 18 to sequentially change the characteristics of the solvent with the passage of time. Specifically, the flow velocity generated by the first pump 17 is gradually reduced, and
The flow rate generated by the pump 18 is gradually increased. As a result, the characteristics of the solvent supplied to the intermediate column 14 and the separation column 15 are such that the content rate of acetonitrile (AcCN) in the phosphate buffer increases. In this example, the content of acetonitrile in the phosphate buffer is changed from 1% to 80%. In addition, the first at this time
The total flow rate of the pump 17 and the second pump 18 is 100 μl /
It is said to be min.
【００４７】このように、移動相となる溶媒の特性を第
１ポンプ１７及び第２ポンプ１８が生成する流速（流量
と等価）を制御して変化させることにより、溶媒（移動
相）の特性を変化させつつ分析処理を行うグラディエン
ト分析法を行うことが可能となり、従って広範囲な極性
にわたる被測定資料を短い時間で分析処理することが可
能となる。Thus, the characteristics of the solvent (mobile phase) are changed by controlling the flow rate (equivalent to the flow rate) generated by the first pump 17 and the second pump 18 to change the characteristics of the solvent serving as the mobile phase. It is possible to perform a gradient analysis method in which the analysis processing is performed while changing it, and thus it is possible to analyze the measurement target material over a wide range of polarities in a short time.
【００４８】また、上記の図２（Ｂ）から図２（Ｃ）へ
のスイッチングバルブ１２，１９の切換操作において、
中間カラム１４に過剰な圧力上昇が発生するのを避ける
ためには溶媒の流速を変更することが必要である。そこ
で、本実施例においては、中間カラム１４として内径が
１．０〜４．０ｍｍで長さが５０ｍｍ以下のものを用い
ることにより比較的高い流量を保持する構成とした。こ
れにより、被測定試料の濃縮処理が短縮され、よって大
量の被測定試料に対するマイクロカラム或いはセミマイ
クロカラムを用いた分析処理を短時間で行うことが可能
となり、よって測定に要する時間を大幅に短縮すること
ができる。In the switching operation of the switching valves 12 and 19 shown in FIG. 2 (B) to FIG. 2 (C),
It is necessary to change the solvent flow rate in order to avoid an excessive pressure rise in the intermediate column 14. Therefore, in this embodiment, the intermediate column 14 having an inner diameter of 1.0 to 4.0 mm and a length of 50 mm or less is used to maintain a relatively high flow rate. As a result, the concentration process of the sample to be measured can be shortened, so that the analysis process using a microcolumn or semi-microcolumn for a large amount of sample to be measured can be performed in a short time, and thus the time required for measurement can be significantly reduced. can do.
【００４９】図３は、上記した本実施例に係る液体クロ
マトグラフィ装置を用い、標準のヒト尿とイブプロフェ
ン投与３．５時間後のヒト尿を分析し比較した例であ
る。尚、測定条件は下記の通りである。 （１）ＭＦカラム１３による除去処理 ＭＦカラム：カプセルパックＭＦカートリッジカラム
（内径４．０ｍｍ，長さ１０ｍｍ） 移動相：（アセトニトリル）／（５０ｍＭ リン酸緩衝
液）＝３／２４７ （２）ＭＦカラム１３及び中間カラム１４による濃縮処
理 中間カラム：カプセルパック Phenyl（内径１．５ｍ
ｍ，長さ３５ｍｍ） 移動相：（アセトニトリル）／（５０ｍＭ リン酸緩衝
液）＝２／１４８ （３）分離カラム１５による分析処理（本分離） 分離カラム：カプセルパック Phenyl（内径１．５ｍ
ｍ，長さ２５０ｍｍ） 移動相：（アセトニトリル）／（５０ｍＭ リン酸緩衝
液）＝１％〜８０％ （４）その他 ・検出：ＵＶ吸収 ２５４ｎｍ ・温度：４０℃ ・試料注入量：１００μｌ 図３に示される結果より、イブプロフェン及びその代謝
物が明確に観測されており、よって本実施例に係る液体
クロマトグラフィ装置の効果を実証することができた。FIG. 3 is an example in which standard human urine and human urine 3.5 hours after administration of ibuprofen were analyzed and compared using the liquid chromatography apparatus according to the present embodiment described above. The measurement conditions are as follows. (1) Removal treatment by MF column 13 MF column: Capsule pack MF cartridge column (inner diameter 4.0 mm, length 10 mm) Mobile phase: (acetonitrile) / (50 mM phosphate buffer) = 3/247 (2) MF column 13 and intermediate column 14 Concentration treatment Intermediate column: Capsule pack Phenyl (inner diameter 1.5 m
m, length 35 mm) Mobile phase: (acetonitrile) / (50 mM phosphate buffer) = 2/148 (3) Analytical treatment by separation column 15 (main separation) Separation column: Capsule pack Phenyl (inner diameter 1.5 m)
m, length 250 mm) Mobile phase: (acetonitrile) / (50 mM phosphate buffer) = 1% to 80% (4) Others ・ Detection: UV absorption 254 nm ・ Temperature: 40 ° C. ・ Sample injection amount: 100 μl From the results shown, ibuprofen and its metabolites were clearly observed, and therefore the effect of the liquid chromatography apparatus according to this example could be demonstrated.
【００５０】尚、上記した実施例においては、使用する
カラムとしてＭＦカラム１３、中間カラム１４、分離カ
ラム１５の３個のカラムを使用する実施例を示したが、
カラムの数は３本に限定されるものではなく、測定する
被測定試料に応じて適宜カラム数を設定してもよい。In addition, in the above-mentioned embodiment, an embodiment using three columns of the MF column 13, the intermediate column 14, and the separation column 15 is shown.
The number of columns is not limited to three, and the number of columns may be set appropriately according to the sample to be measured.
【００５１】また、前処理用カラムの配列は必ずしも大
径のカラムから順に小径のカラムとなるよう配設する必
要はなく、濃縮効率に応じて適宜配列を選定することが
可能である。更に、前処理用カラムの径寸法は全て異な
らせる必要はなく、同一径のカラムを用いることも可能
である。The pretreatment column does not necessarily have to be arranged such that the column having the larger diameter is arranged in order from the column having the larger diameter, and the column can be appropriately selected according to the concentration efficiency. Furthermore, the diameters of the pretreatment columns do not have to be all different, and columns with the same diameter can be used.
【００５２】[0052]
【発明の効果】上述の如く本発明によれば、被測定試料
の検査時に特性可変手段により溶媒の特性を変化させる
ことができるため、グラディエント分析法を実施するこ
とが可能となり、広範囲な極性にわたる被測定資料を短
い時間で分析処理することが可能となると共に、高分子
物質が被測定試料に含まれている場合であっても高分子
物質の除去，溶媒抽出，濃縮等の前処理を不要とするこ
とができ、測定処理を容易に行うことができる。As described above, according to the present invention, the characteristic of the solvent can be changed by the characteristic changing means at the time of inspecting the sample to be measured, so that the gradient analysis method can be carried out and a wide range of polarities can be obtained. The sample to be measured can be analyzed in a short time, and even if the sample to be measured contains a polymeric substance, pretreatment such as removal of the polymeric substance, solvent extraction, and concentration is unnecessary. Therefore, the measurement process can be easily performed.
【００５３】また、分離用カラムに被測定試料を導入す
る前において複数の濃縮用カラムへ被測定試料を導入し
て濃縮処理を行うことにより、被測定試料の流速低下を
最小限に留めることができ測定時間の短縮を図ることが
可能となる。Further, by introducing the sample to be measured into a plurality of concentration columns and conducting the concentration process before introducing the sample to be measured into the separation column, it is possible to minimize the decrease in the flow rate of the sample to be measured. As a result, the measurement time can be shortened.
【図１】本発明の一実施例である液体クロマトグラフィ
装置の概略構成図である。FIG. 1 is a schematic configuration diagram of a liquid chromatography apparatus that is an embodiment of the present invention.
【図２】本発明の第１実施例である液体クロマトグラフ
ィ装置の動作を説明するための概略構成図である。FIG. 2 is a schematic configuration diagram for explaining the operation of the liquid chromatography apparatus that is the first embodiment of the present invention.
【図３】本発明に係る液体クロマトグラフィ装置を用い
て行った測定結果の一例を示す図である。FIG. 3 is a diagram showing an example of a measurement result obtained by using the liquid chromatography device according to the present invention.
【図４】従来の液体クロマトグラフィ装置の概要を示す
図である。FIG. 4 is a diagram showing an outline of a conventional liquid chromatography device.
１０ 液体クロマトグラフィ装置 １１ オートサンプララー １２ 第１スイッチングバルブ １３ ＭＦカラム １４ 中間カラム １５ 分離用カラム １６ 検出器 １７ 第１ポンプ １８ 第２ポンプ １９ 第２スイッチングバルブ 10 Liquid Chromatography Device 11 Autosampler 12 First Switching Valve 13 MF Column 14 Intermediate Column 15 Separation Column 16 Detector 17 First Pump 18 Second Pump 19 Second Switching Valve
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大津 裕 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株 式会社資生堂第１リサーチセンター内 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuing on the front page (72) Inventor Hiroshi Otsu 1050 Nippa-cho, Kohoku-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Inside Shiseido Daiichi Research Center
Claims (2)
離用カラムと、 複数個配設されると共にその内の少なくともひとつは前
記分離用カラムの内径寸法よりも大なる内径寸法を有す
る構成とされており、かつ、前記溶媒と共に供給される
前記被測定試料を濃縮処理する機能及び不要高分子物質
を除去処理する機能を有した前処理用カラムと、 前記溶媒の特性を可変する特性可変手段と、 前記特性可変手段において生成された所定特性の溶媒、
及び試料注入手段より供給された前記被測定試料を前記
前処理用カラム或いは分離用カラムに供給する流路制御
手段と、 前記分離用カラムで分離された前記被測定試料が供給さ
れると共に、供給された前記被測定試料を分析処理する
検出手段とを具備することを特徴とする液体クロマトグ
ラフィ装置。1. A separation column for separating a sample to be measured mixed in a solvent, and a plurality of separation columns, at least one of which has an inner diameter larger than an inner diameter of the separation column. And a pretreatment column having a function of concentrating the sample to be measured supplied with the solvent and a function of removing the unnecessary polymer substance, and a characteristic varying means for varying the characteristic of the solvent And a solvent having a predetermined characteristic generated by the characteristic changing means,
And flow path control means for supplying the measured sample supplied from the sample injection means to the pretreatment column or the separation column, and the measured sample separated by the separation column is supplied and supplied. And a detection means for analyzing the measured sample thus obtained.
置を用いた分析方法において、 前記特性可変手段から供給された所定特性の溶媒と、前
記試料注入手段より供給される前記被測定試料とを混合
して被測定溶液を生成し、該被測定溶液を前記大なる内
径寸法を有する前処理用カラムに導入して不要な高分子
物質を除去する除去工程と、 前記除去工程が終了した後、前記大なる内径寸法を有す
る前処理用カラムの下流側に小なる内径寸法を有する濃
縮用カラムを接続して前記被測定試料の濃縮処理を行う
濃縮工程と、 前記濃縮工程が終了した後、前記大なる内径寸法を有す
る前処理用カラムを取り除くと共に前記分離用カラムを
前記小なる内径寸法を有する濃縮用カラムの下流側に接
続し、前記特性可変手段により供給される溶媒の特性を
変化させつつ前記分離用カラムで前記被測定試料を分離
し、分離された被測定試料を前記検出手段に供給して分
析処理を行う分析工程とを有することを特徴とする液体
クロマトグラフィ装置を用いた分析方法。2. The analysis method using the liquid chromatography apparatus according to claim 1, wherein the solvent having a predetermined characteristic supplied from the characteristic changing means is mixed with the sample to be measured supplied from the sample injecting means. To generate a solution to be measured, introduce the solution to be measured into the pretreatment column having a large inner diameter, and remove unnecessary polymer substances; and A concentration step of concentrating the sample to be measured by connecting a concentration column having a smaller inner diameter dimension on the downstream side of a pretreatment column having an inner diameter dimension of The pretreatment column having the inner diameter is removed, the separation column is connected to the downstream side of the concentrating column having the smaller inner diameter, and the characteristic of the solvent supplied by the characteristic varying means is adjusted. A liquid chromatographic apparatus characterized in that it has an analysis step of separating the sample to be measured by the separation column while changing it, and supplying the separated sample to be measured to the detection means to perform an analysis process. Analysis method.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24320695A JPH0989858A (en) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | Liquid chromatography and analysis employing it |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24320695A JPH0989858A (en) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | Liquid chromatography and analysis employing it |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0989858A true JPH0989858A (en) | 1997-04-04 |
Family
ID=17100417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24320695A Pending JPH0989858A (en) | 1995-09-21 | 1995-09-21 | Liquid chromatography and analysis employing it |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0989858A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100399021C (en) * | 2004-01-30 | 2008-07-02 | 株式会社岛津制作所 | Liquid chromatograph |
-
1995
- 1995-09-21 JP JP24320695A patent/JPH0989858A/en active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100399021C (en) * | 2004-01-30 | 2008-07-02 | 株式会社岛津制作所 | Liquid chromatograph |
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