JPH1160500A - 血液凝固異常亢進抑制剤 - Google Patents
血液凝固異常亢進抑制剤Info
- Publication number
- JPH1160500A JPH1160500A JP9230294A JP23029497A JPH1160500A JP H1160500 A JPH1160500 A JP H1160500A JP 9230294 A JP9230294 A JP 9230294A JP 23029497 A JP23029497 A JP 23029497A JP H1160500 A JPH1160500 A JP H1160500A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inhibitor
- protein
- blood
- blood coagulation
- minutes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title abstract description 10
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 title description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 30
- 108010001953 Protein C Inhibitor Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 229940122929 Protein C inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 25
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000000873 Protein C Inhibitor Human genes 0.000 claims abstract 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 abstract description 10
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 abstract description 8
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 21
- 102100024078 Plasma serine protease inhibitor Human genes 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 13
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 13
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 10
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 10
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 10
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 10
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 10
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 7
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 7
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 6
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 6
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 5
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 5
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 5
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 4
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 2
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010058861 Fibrin Fibrinogen Degradation Products Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 1
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 108010055615 Zein Proteins 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000208 fibrin degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000000282 fibrinogen degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 201000005665 thrombophilia Diseases 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
- 150000008496 α-D-glucosides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 播種性血管内凝固などでみられる血液凝固系
の異常亢進を抑制できる薬剤を提供する。 【構成】 有効成分として血液凝固系の亢進を抑制する
分子量５４−５７ｋＤａ（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）のプロテ
インＣインヒビターを含有する血液凝固異常亢進抑制
剤。 【効果】 本発明のプロテインＣインヒビターを静脈内
投与することで、出血傾向などの副作用の心配がなく、
播種性血管内凝固でみられる典型的な凝固系異常亢進と
それに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑制するこ
とができる。
の異常亢進を抑制できる薬剤を提供する。 【構成】 有効成分として血液凝固系の亢進を抑制する
分子量５４−５７ｋＤａ（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）のプロテ
インＣインヒビターを含有する血液凝固異常亢進抑制
剤。 【効果】 本発明のプロテインＣインヒビターを静脈内
投与することで、出血傾向などの副作用の心配がなく、
播種性血管内凝固でみられる典型的な凝固系異常亢進と
それに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑制するこ
とができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト尿および血液
からの精製および分離により得られ、血液凝固系の異常
亢進を抑制する分子量５４−５７ｋＤａのプロテインＣ
インヒビターを有効成分とする血液凝固異常亢進抑制剤
に関する。
からの精製および分離により得られ、血液凝固系の異常
亢進を抑制する分子量５４−５７ｋＤａのプロテインＣ
インヒビターを有効成分とする血液凝固異常亢進抑制剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液凝固系の異常亢進により引き起こさ
れる疾病としては播種性血管内凝固（以下ＤＩＣと省略
する）が代表的である。ＤＩＣは、悪性腫瘍などによる
細胞の破壊および細菌感染（細菌が産生するエンドトキ
シンの作用）により露出した組織因子が血液と接触する
ことで血液凝固系が異常亢進し（血液中のトロンビン濃
度が顕著に上昇し）、全身の細小血管で血栓が形成され
る疾患である（凝固優位型ＤＩＣ）。しかし、ＤＩＣ患
者の線溶系は正常であるから形成された血栓を溶解する
ために二次的な線溶系の亢進がみられ、患者の体内では
高頻度で血液凝固−血栓溶解が繰り返されることになる
（代償性ＤＩＣ）。この時、フィブリノーゲンおよびフ
ィブリン分解産物（以下ＦＤＰと省略する）の血中濃度
が上昇する。さらに、重度の場合には血液凝固系の諸因
子（フィブリノーゲンなど）の消費量が生合成量を上回
り出血傾向（線溶優位型ＤＩＣ）となって死に至る場合
がある。
れる疾病としては播種性血管内凝固（以下ＤＩＣと省略
する）が代表的である。ＤＩＣは、悪性腫瘍などによる
細胞の破壊および細菌感染（細菌が産生するエンドトキ
シンの作用）により露出した組織因子が血液と接触する
ことで血液凝固系が異常亢進し（血液中のトロンビン濃
度が顕著に上昇し）、全身の細小血管で血栓が形成され
る疾患である（凝固優位型ＤＩＣ）。しかし、ＤＩＣ患
者の線溶系は正常であるから形成された血栓を溶解する
ために二次的な線溶系の亢進がみられ、患者の体内では
高頻度で血液凝固−血栓溶解が繰り返されることになる
（代償性ＤＩＣ）。この時、フィブリノーゲンおよびフ
ィブリン分解産物（以下ＦＤＰと省略する）の血中濃度
が上昇する。さらに、重度の場合には血液凝固系の諸因
子（フィブリノーゲンなど）の消費量が生合成量を上回
り出血傾向（線溶優位型ＤＩＣ）となって死に至る場合
がある。
【０００３】ＤＩＣはトロンビン血症とも称されるくら
い血中のトロンビン濃度が顕著に上昇し血液凝固系が異
常亢進する疾病であるため、従来使用されている主なＤ
ＩＣの治療薬には、ヘパリン（分子量４，０００〜４
０，０００の混合物）、低分子量ヘパリン（ヘパリンか
ら分子量４，０００〜５，０００のものを分画）および
アンチトロンビンIII 濃縮製剤がある。
い血中のトロンビン濃度が顕著に上昇し血液凝固系が異
常亢進する疾病であるため、従来使用されている主なＤ
ＩＣの治療薬には、ヘパリン（分子量４，０００〜４
０，０００の混合物）、低分子量ヘパリン（ヘパリンか
ら分子量４，０００〜５，０００のものを分画）および
アンチトロンビンIII 濃縮製剤がある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】現在ＤＩＣの治療に使
用されているヘパリンは、トロンビン（血液凝固系の主
要因子）だけでなく血液凝固第Ｘａ因子に作用して血液
凝固を阻害するが、主としてトロンビンがアンチトロン
ビンIII （血中に存在するトロンビン阻害因子）に反応
するのを仲介して、つまり間接的に血液凝固を阻害して
いる。一方、生体内でヘパリンが何度も本阻害反応に利
用されるのに対して、アンチトロンビンIII はトロンビ
ンと複合体を形成すると速やかに代謝され消失する。そ
のため、ヘパリンを使用しているＤＩＣ患者ではアンチ
トロンビンIII が不足する傾向にあるためアンチトロン
ビンIII の補充が必要となる場合もある。しかし、アン
チトロンビンIII 濃縮製剤は高価であるため使用に関し
て保険上の制限（血中アンチトロンビンIII 濃度が７０
％以下の患者でしかも１か月５日以内）があるくらいで
ある。さらに、ヘパリンは血液凝固時間をも延長させる
ため出血傾向になりやすい。この様にヘパリン療法では
出血傾向という副作用を伴うだけでなく、アンチトロン
ビンIII との関係から治療費用もかさむ。このため、ヘ
パリンに比して血液凝固第Ｘａ因子に対する特異性が高
い低分子量ヘパリンも使用されているが、用量によりト
ロンビンと同様出血傾向の副作用を伴うため煩雑な血中
濃度の管理が必要である。さらに、ヘパリンに比して弱
いものの低分子量ヘパリンにもトロンビン阻害作用があ
り、血液凝固系の亢進を抑制するためにアンチトロンビ
ンIII の消費を伴う。このように、ヘパリンおよび低分
子量ヘパリンいずれを用いた治療法でも、程度の違いこ
そあれ、出血傾向およびアンチトロンビンIII の消費を
伴う。
用されているヘパリンは、トロンビン（血液凝固系の主
要因子）だけでなく血液凝固第Ｘａ因子に作用して血液
凝固を阻害するが、主としてトロンビンがアンチトロン
ビンIII （血中に存在するトロンビン阻害因子）に反応
するのを仲介して、つまり間接的に血液凝固を阻害して
いる。一方、生体内でヘパリンが何度も本阻害反応に利
用されるのに対して、アンチトロンビンIII はトロンビ
ンと複合体を形成すると速やかに代謝され消失する。そ
のため、ヘパリンを使用しているＤＩＣ患者ではアンチ
トロンビンIII が不足する傾向にあるためアンチトロン
ビンIII の補充が必要となる場合もある。しかし、アン
チトロンビンIII 濃縮製剤は高価であるため使用に関し
て保険上の制限（血中アンチトロンビンIII 濃度が７０
％以下の患者でしかも１か月５日以内）があるくらいで
ある。さらに、ヘパリンは血液凝固時間をも延長させる
ため出血傾向になりやすい。この様にヘパリン療法では
出血傾向という副作用を伴うだけでなく、アンチトロン
ビンIII との関係から治療費用もかさむ。このため、ヘ
パリンに比して血液凝固第Ｘａ因子に対する特異性が高
い低分子量ヘパリンも使用されているが、用量によりト
ロンビンと同様出血傾向の副作用を伴うため煩雑な血中
濃度の管理が必要である。さらに、ヘパリンに比して弱
いものの低分子量ヘパリンにもトロンビン阻害作用があ
り、血液凝固系の亢進を抑制するためにアンチトロンビ
ンIII の消費を伴う。このように、ヘパリンおよび低分
子量ヘパリンいずれを用いた治療法でも、程度の違いこ
そあれ、出血傾向およびアンチトロンビンIII の消費を
伴う。
【０００５】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは出
血傾向の副作用を示さず血液凝固系の亢進を阻害し血液
凝固系の異常亢進および血栓形成を抑制することができ
ないかと考え、鋭意研究を重ねた結果、尿中に存在する
分子量５４−５７ｋＤａのタンパク質が意外にもＤＩＣ
におけるフィブリノーゲン消費、血液凝固時間延長およ
びＦＤＰ血中濃度上昇を抑制することを発見した。これ
は本タンパク質が血液凝固系の異常亢進を抑制する作用
を有することを示すものである。
血傾向の副作用を示さず血液凝固系の亢進を阻害し血液
凝固系の異常亢進および血栓形成を抑制することができ
ないかと考え、鋭意研究を重ねた結果、尿中に存在する
分子量５４−５７ｋＤａのタンパク質が意外にもＤＩＣ
におけるフィブリノーゲン消費、血液凝固時間延長およ
びＦＤＰ血中濃度上昇を抑制することを発見した。これ
は本タンパク質が血液凝固系の異常亢進を抑制する作用
を有することを示すものである。
【０００６】本タンパク質についてはその精製法、性
状、物性が数種の文献〔Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６
１，１２７５９−１２７６６（１９８６），Ｍｅｔｈｏ
ｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２２，３８５−３
９９（１９９３），他〕に発表され、セリンプロテア−
ゼインヒビターファミリーに分類されている。本タンパ
ク質は、尿に限らず血液および***からも検出されてお
り、多くの場合プロテインＣインヒビターと呼ばれてい
るので、本明細書においても以下このタンパク質をプロ
テインＣインヒビターと略称する。
状、物性が数種の文献〔Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６
１，１２７５９−１２７６６（１９８６），Ｍｅｔｈｏ
ｄ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２２２，３８５−３
９９（１９９３），他〕に発表され、セリンプロテア−
ゼインヒビターファミリーに分類されている。本タンパ
ク質は、尿に限らず血液および***からも検出されてお
り、多くの場合プロテインＣインヒビターと呼ばれてい
るので、本明細書においても以下このタンパク質をプロ
テインＣインヒビターと略称する。
【０００７】本発明は上記の新知見に基づくもので、血
液凝固系の亢進を抑制する分子量５４−５７ｋＤａのプ
ロテインＣインヒビターを有効成分としてなる血液凝固
異常亢進抑制剤に関する。
液凝固系の亢進を抑制する分子量５４−５７ｋＤａのプ
ロテインＣインヒビターを有効成分としてなる血液凝固
異常亢進抑制剤に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明に用いるプロテインＣイン
ヒビターは尿、血液中に含まれており尿に限らず血液か
ら精製、分離して得たものでもよい。遠心分離など適切
な処理をした尿、血液を金属キレーティングセファロー
スとコナカパリンＡセファロースおよびヘパリンセファ
ロースなどのアフィニティーカラム、さらにゲルろ過カ
ラムを組合わせて精製、分離することができる（実施例
１参照）。かくして種々の純度のプロテインＣインヒビ
ターが得られるが、有効成分の一定量を確実に投与する
ため、できるだけ高純度のものを用いるのが好ましい。
ヒビターは尿、血液中に含まれており尿に限らず血液か
ら精製、分離して得たものでもよい。遠心分離など適切
な処理をした尿、血液を金属キレーティングセファロー
スとコナカパリンＡセファロースおよびヘパリンセファ
ロースなどのアフィニティーカラム、さらにゲルろ過カ
ラムを組合わせて精製、分離することができる（実施例
１参照）。かくして種々の純度のプロテインＣインヒビ
ターが得られるが、有効成分の一定量を確実に投与する
ため、できるだけ高純度のものを用いるのが好ましい。
【０００９】静脈内投与された本発明のプロテインＣイ
ンヒビターは出血傾向を伴うことなく、血液凝固系の異
常亢進とそれに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑
制することができる（実施例２，３参照）。
ンヒビターは出血傾向を伴うことなく、血液凝固系の異
常亢進とそれに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑
制することができる（実施例２，３参照）。
【００１０】本発明の血液凝固異常亢進抑制剤は血液凝
固系の異常亢進を抑制するために精製物として成人一日
あたり、１００−２００ｍｇを静脈内に点滴注入するこ
とができる。プロテインＣインヒビターは通常血液中に
３．３−６．８μｇ／ｍｌ存在しているもので静脈内投
与による毒性はほとんど認められない。
固系の異常亢進を抑制するために精製物として成人一日
あたり、１００−２００ｍｇを静脈内に点滴注入するこ
とができる。プロテインＣインヒビターは通常血液中に
３．３−６．８μｇ／ｍｌ存在しているもので静脈内投
与による毒性はほとんど認められない。
【００１１】
【実施例】以下に実施例の形で本発明をさらに説明する
が本発明はこれによって限定されるものではない。
が本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１２】実施例１（プロテインＣインヒビター精製
物の製造） 以下の精製操作の全過程を４℃で行った。ベンズアミジ
ン（終濃度５ｍＭ）存在下採取した健常な成人男子の尿
（３０Ｌ）を−２０℃で一旦凍結させた後融解し、遠心
分離機（ＴＯＭＹ ＲＳ−２０，ＴＯＭＹ，東京）で
３，０００ｒｐｍ、３０分間遠心して得た上澄み液のｐ
Ｈを水酸化ナトリウム（６Ｎ）で７．４に調製した。こ
れをろ紙で濾過した後、３００ｍＭ塩化ナトリウムおよ
び５ｍＭベンズアミジンを含む２０ｍＭトリス酢酸緩衝
液（ｐＨ７．４）で平衡化した亜鉛−キレーティング・
セファロース（１４×６．９ｃｍ）のカラムにアプライ
し同緩衝液でカラムを洗浄した後、５０ｍＭイミダゾー
ルを含む同緩衝液で溶出した。吸収波長２８０ｎｍで極
大吸収を示す画分を集め、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、
５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭフェニルメチルスル
フォニルフロリド（以下ＰＭＳＦと省略する）を含む２
０ｍＭトリス酢酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したコ
ナカパリンＡセファロースカラム（２．５×７．１ｃ
ｍ）にアプライし、緩衝液を０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム、５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭフェニルメチル
スルフォニルフロリド（以下ＰＭＳＦと省略する）を含
む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に置換えた
後、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭベンズアミジン
および１ｍＭ ＰＭＳＦを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ７．４）でカラムを洗浄し、０．５Ｍメチル−
α−Ｄ−グルコシドを含む同緩衝液で溶出した。次に、
吸収波長２８０ｎｍで極大吸収を示す画分を集め、５０
ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．４）に対して、内液の電導度が同緩衝液の電導度
（４．５ｍＳ／ｃｍ）と同じになるまで透析を行った。
物の製造） 以下の精製操作の全過程を４℃で行った。ベンズアミジ
ン（終濃度５ｍＭ）存在下採取した健常な成人男子の尿
（３０Ｌ）を−２０℃で一旦凍結させた後融解し、遠心
分離機（ＴＯＭＹ ＲＳ−２０，ＴＯＭＹ，東京）で
３，０００ｒｐｍ、３０分間遠心して得た上澄み液のｐ
Ｈを水酸化ナトリウム（６Ｎ）で７．４に調製した。こ
れをろ紙で濾過した後、３００ｍＭ塩化ナトリウムおよ
び５ｍＭベンズアミジンを含む２０ｍＭトリス酢酸緩衝
液（ｐＨ７．４）で平衡化した亜鉛−キレーティング・
セファロース（１４×６．９ｃｍ）のカラムにアプライ
し同緩衝液でカラムを洗浄した後、５０ｍＭイミダゾー
ルを含む同緩衝液で溶出した。吸収波長２８０ｎｍで極
大吸収を示す画分を集め、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、
５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭフェニルメチルスル
フォニルフロリド（以下ＰＭＳＦと省略する）を含む２
０ｍＭトリス酢酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したコ
ナカパリンＡセファロースカラム（２．５×７．１ｃ
ｍ）にアプライし、緩衝液を０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム、５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭフェニルメチル
スルフォニルフロリド（以下ＰＭＳＦと省略する）を含
む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に置換えた
後、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭベンズアミジン
および１ｍＭ ＰＭＳＦを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝
液（ｐＨ７．４）でカラムを洗浄し、０．５Ｍメチル−
α−Ｄ−グルコシドを含む同緩衝液で溶出した。次に、
吸収波長２８０ｎｍで極大吸収を示す画分を集め、５０
ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．４）に対して、内液の電導度が同緩衝液の電導度
（４．５ｍＳ／ｃｍ）と同じになるまで透析を行った。
【００１３】この透析内液を５０ｍＭ塩化ナトリウム、
５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭＰＭＳＦを含む２０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したヘパ
リンセファロースカラム（１．５×４．５ｃｍ）にアプ
ライし、２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む２０ｍＭトリ
ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した後、５００ｍＭ
塩化ナトリウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．４）で溶出し、標準ヒト血漿（Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉ
ｎｇ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ社）のプロトロンビン時
間を延長させる（血液凝固系の亢進を阻害する）画分を
集めた（画分Ａ）。本画分を３００ｍＭ塩化ナトリウム
を含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液で平衡化したゲルろ過
用カラム（ＴＳＫ−Ｇ３００ＸＬ）でゲルろ過し主ピー
クを分取し（画分Ｂ）、使用するまで−２０℃で凍結保
存した。本精製で新鮮尿３０ＬからプロテインＣインヒ
ビター約６００μｇを得た。プロテインＣインヒビター
の定量には市販のプロテインＣインヒビター定量キット
（ＰＣＩ ａｎｔｉｇｅｎ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ， Ｔ
ｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ社）を用いた。上記の画分Ａ及び
Ｂについて電気泳動を行った（図１）。
５ｍＭベンズアミジンおよび１ｍＭＰＭＳＦを含む２０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したヘパ
リンセファロースカラム（１．５×４．５ｃｍ）にアプ
ライし、２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む２０ｍＭトリ
ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した後、５００ｍＭ
塩化ナトリウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
７．４）で溶出し、標準ヒト血漿（Ｇｅｏｒｇｅ Ｋｉ
ｎｇ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ社）のプロトロンビン時
間を延長させる（血液凝固系の亢進を阻害する）画分を
集めた（画分Ａ）。本画分を３００ｍＭ塩化ナトリウム
を含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液で平衡化したゲルろ過
用カラム（ＴＳＫ−Ｇ３００ＸＬ）でゲルろ過し主ピー
クを分取し（画分Ｂ）、使用するまで−２０℃で凍結保
存した。本精製で新鮮尿３０ＬからプロテインＣインヒ
ビター約６００μｇを得た。プロテインＣインヒビター
の定量には市販のプロテインＣインヒビター定量キット
（ＰＣＩ ａｎｔｉｇｅｎ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ， Ｔ
ｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ社）を用いた。上記の画分Ａ及び
Ｂについて電気泳動を行った（図１）。
【００１４】実施例２（エンドトキシン誘発ＤＩＣモデ
ルラットの作製） ＤＩＣが発症する原因の一つに細菌感染がある。これ
は、細菌の産生するエンドトキシンが最終的に血管内皮
細胞表面に組織因子を発現させ、凝固系の亢進を引き起
こすためである。よって、ＤＩＣモデルラットを作製す
るためにエンドトキシンを利用した。詳細は方法は次の
通り。ペントバルビタール麻酔した雄性ラット（１７０
〜２００ｇ）３匹に対して体重１ｋｇあたり５０ｍｇの
エンドトキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８，ＤＩ
ＦＣＯ社）を尾静脈から６０分かけて定速注入した。エ
ンドトキシン注入開始から１８０分間まで観察を行っ
た。つまり、エンドトキシン注入開始前、注入開始から
９０、１２０、１５０および１８０分それぞれの時間で
血液３００μｌをラット頸静脈から採取した。採取した
血液を下記（イ）、（ロ）、（ハ）の試験に用いた。さ
らに、観察終了直後に下行大静脈より３．８％クエン酸
ナトリウム２００μｌを入れたシリンジを用いて１８０
０μｌの血液を採取して遠心分離して得た血漿をプロト
ロンビン時間測定（ニ）のための試料とした。表１にこ
れら（イ）〜（ニ）の試験結果を示す。
ルラットの作製） ＤＩＣが発症する原因の一つに細菌感染がある。これ
は、細菌の産生するエンドトキシンが最終的に血管内皮
細胞表面に組織因子を発現させ、凝固系の亢進を引き起
こすためである。よって、ＤＩＣモデルラットを作製す
るためにエンドトキシンを利用した。詳細は方法は次の
通り。ペントバルビタール麻酔した雄性ラット（１７０
〜２００ｇ）３匹に対して体重１ｋｇあたり５０ｍｇの
エンドトキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８，ＤＩ
ＦＣＯ社）を尾静脈から６０分かけて定速注入した。エ
ンドトキシン注入開始から１８０分間まで観察を行っ
た。つまり、エンドトキシン注入開始前、注入開始から
９０、１２０、１５０および１８０分それぞれの時間で
血液３００μｌをラット頸静脈から採取した。採取した
血液を下記（イ）、（ロ）、（ハ）の試験に用いた。さ
らに、観察終了直後に下行大静脈より３．８％クエン酸
ナトリウム２００μｌを入れたシリンジを用いて１８０
０μｌの血液を採取して遠心分離して得た血漿をプロト
ロンビン時間測定（ニ）のための試料とした。表１にこ
れら（イ）〜（ニ）の試験結果を示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】（イ）血小板数 血液中の血小板数を計数するために上記の各時間に採取
した血液１００μｌを抗凝固剤としてエチレンジアミン
４酢酸をコーティングしてある採血ビン（Ｓｙｓｍｅｘ
社）に採った。この血液を自動血球計数装置Ｆ−８００
（Ｓｙｓｍｅｘ社）に供したところ、エンドトキシン注
入開始から９０分まではエンドトキシン注入前と比べて
もほとんど変化は認められなかったが、注入開始から１
２０および１８０分それぞれの時間で血小板数はエンド
トキシン注入前の７５．０±４．１（％）および５０．
２±１．５（％）まで減少した。
した血液１００μｌを抗凝固剤としてエチレンジアミン
４酢酸をコーティングしてある採血ビン（Ｓｙｓｍｅｘ
社）に採った。この血液を自動血球計数装置Ｆ−８００
（Ｓｙｓｍｅｘ社）に供したところ、エンドトキシン注
入開始から９０分まではエンドトキシン注入前と比べて
もほとんど変化は認められなかったが、注入開始から１
２０および１８０分それぞれの時間で血小板数はエンド
トキシン注入前の７５．０±４．１（％）および５０．
２±１．５（％）まで減少した。
【００１７】（ロ）フィブリノーゲン濃度 各時間に採取した血液９０μｌを１０μｌの９．８％ク
エン酸ナトリウムに加えて遠心分離することで得た血漿
を試料としてフィブリノーゲン・テストキット（和光純
薬）に供して血漿フィブリノーゲン濃度を測定した。こ
の結果、エンドトキシン注入開始から９０分まではエン
ドトキシン注入前と比べても濃度に差異は認められなか
ったが、注入開始から１２０および１８０分それぞれの
時間でフィブリノーゲン濃度はエンドトキシン注入前の
８０．７±６．６（％）および４１．０±３．７（％）
まで減少した。
エン酸ナトリウムに加えて遠心分離することで得た血漿
を試料としてフィブリノーゲン・テストキット（和光純
薬）に供して血漿フィブリノーゲン濃度を測定した。こ
の結果、エンドトキシン注入開始から９０分まではエン
ドトキシン注入前と比べても濃度に差異は認められなか
ったが、注入開始から１２０および１８０分それぞれの
時間でフィブリノーゲン濃度はエンドトキシン注入前の
８０．７±６．６（％）および４１．０±３．７（％）
まで減少した。
【００１８】（ハ）ＦＤＰ濃度 各時間に採取した血液１００μｌをＦＤＰテストキット
（帝国臓器）に添付されていた凝固促進剤で凝固させた
後、遠心分離して得た血清のＦＤＰ濃度を本キットを用
いて測定した。エンドトキシン注入開始から９０分まで
はＦＤＰは検出できなかったが、開始から後１２０分お
よび１８０分それぞれの時間で３．３±１．４（μｇ／
ｍｌ）および２０．０±０．０（μｇ／ｍｌ）まで上昇
した。この結果はエンドトキシン注入開始から１２０分
以降で線溶系が亢進したことを示唆している。
（帝国臓器）に添付されていた凝固促進剤で凝固させた
後、遠心分離して得た血清のＦＤＰ濃度を本キットを用
いて測定した。エンドトキシン注入開始から９０分まで
はＦＤＰは検出できなかったが、開始から後１２０分お
よび１８０分それぞれの時間で３．３±１．４（μｇ／
ｍｌ）および２０．０±０．０（μｇ／ｍｌ）まで上昇
した。この結果はエンドトキシン注入開始から１２０分
以降で線溶系が亢進したことを示唆している。
【００１９】（ニ）プロトロンビン時間 上記の様にして得た血漿１００μｌをプロトロンビン時
間測定用キット（和光純薬）を用いて測定したところ、
２６．５±１．９秒であり、エンドトキシン注入前の１
２．６±０．４秒に比べて顕著に延長した。これは本モ
デルにおいて血液凝固外因系因子が急激に消費されてい
ることを表している。
間測定用キット（和光純薬）を用いて測定したところ、
２６．５±１．９秒であり、エンドトキシン注入前の１
２．６±０．４秒に比べて顕著に延長した。これは本モ
デルにおいて血液凝固外因系因子が急激に消費されてい
ることを表している。
【００２０】以上、（イ）と（ロ）の結果から、エンド
トキシン注入開始から１２０分以降で血液凝固系の異常
亢進により著しい血栓形成が起こっていることが、
（ハ）の結果から凝固系の異常亢進に伴って線溶系が亢
進していることが、（ニ）の結果から本モデルでは凝固
因子の急激な消費が起こることがわかった。つまり、本
モデルでは、エンドトキシン注入開始から１２０分以降
で代償性ＤＩＣでみられる典型的な凝固系の異常亢進が
起こることがわかった。そこで、エンドトキシン注入開
始から１２０分を経たラットをエンドトキシン誘発ＤＩ
Ｃモデルとして実施例３で利用した。
トキシン注入開始から１２０分以降で血液凝固系の異常
亢進により著しい血栓形成が起こっていることが、
（ハ）の結果から凝固系の異常亢進に伴って線溶系が亢
進していることが、（ニ）の結果から本モデルでは凝固
因子の急激な消費が起こることがわかった。つまり、本
モデルでは、エンドトキシン注入開始から１２０分以降
で代償性ＤＩＣでみられる典型的な凝固系の異常亢進が
起こることがわかった。そこで、エンドトキシン注入開
始から１２０分を経たラットをエンドトキシン誘発ＤＩ
Ｃモデルとして実施例３で利用した。
【００２１】実施例３（エンドトキシン誘発ＤＩＣモデ
ルラットに対するプロテインＣインヒビターの影響） 実施例１で得たプロテインＣインヒビター（９０μｇ／
ｍｌ）１ｍｌもしくは対照として３００ｍＭ塩化ナトリ
ウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）１
ｍｌを実施例２で記した様にエンドトキシン注入開始か
ら１２０分を経たエンドトキシン誘発ＤＩＣモデルラッ
ト（各群３匹）の大腿静脈から６０分間かけて定速で注
入し、表２で示した時間、つまり、プロテインＣインヒ
ビターもしくは緩衝液注入開始前（１２０分）、注入開
始から３０（１５０分）、６０分（１８０分）それぞれ
の時間で採取した血液中の血小板数、フィブリノーゲン
濃度およびＦＤＰ濃度を測定した。さらに、観察終了直
後（１８０分）に下行大静脈より３．８％クエン酸ナト
リウム２００μｌを入れたシリンジを用いて１８００μ
ｌの血液を採取して遠心分離して得た血漿を用いてプロ
トロンビン時間を測定した。これらの操作の手順を表２
に、結果を表３に示す。
ルラットに対するプロテインＣインヒビターの影響） 実施例１で得たプロテインＣインヒビター（９０μｇ／
ｍｌ）１ｍｌもしくは対照として３００ｍＭ塩化ナトリ
ウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）１
ｍｌを実施例２で記した様にエンドトキシン注入開始か
ら１２０分を経たエンドトキシン誘発ＤＩＣモデルラッ
ト（各群３匹）の大腿静脈から６０分間かけて定速で注
入し、表２で示した時間、つまり、プロテインＣインヒ
ビターもしくは緩衝液注入開始前（１２０分）、注入開
始から３０（１５０分）、６０分（１８０分）それぞれ
の時間で採取した血液中の血小板数、フィブリノーゲン
濃度およびＦＤＰ濃度を測定した。さらに、観察終了直
後（１８０分）に下行大静脈より３．８％クエン酸ナト
リウム２００μｌを入れたシリンジを用いて１８００μ
ｌの血液を採取して遠心分離して得た血漿を用いてプロ
トロンビン時間を測定した。これらの操作の手順を表２
に、結果を表３に示す。
【００２２】
【表２】
【００２３】
【表３】
【００２４】各採血時間（プロテインＣインヒビターも
しくは緩衝液注入開始前、開始から３０および６０分）
で血液中の血小板数、フィブリノーゲン濃度およびＦＤ
Ｐ濃度を測定した。両投与群間で血小板数（％）の減少
を比較したところ、注入開始から３０分、６０分いずれ
の時間でも差異は認められなかった。血栓の形成に利用
され消費される血漿フィブリノーゲン濃度を比較する
と、対照群では注入開始から３０分および６０分それぞ
れの時間で注入開始前の７５．２±９．９および５０．
８±２．８（％）と減少したのに対して、プロテインＣ
インヒビター投与群ではそれぞれ９３．４±７．９およ
び６４．７±２．０（％）とその減少は有意に抑制され
ていた。さらに本モデルは血液凝固外因系を亢進させて
作製したモデルであることから外因系凝固因子の消費を
検討するために観察終了直後（１８０分）の血漿のプロ
トロンビン時間（正常ラット血漿で１２．６±０．４
秒）を測定したところ、対照群では２６．５±１．９秒
であったのに比してプロテインＣインヒビター投与群で
は２０．４±０．５秒と有意にその時間が短縮され、正
常値に近づいた。一方、血液凝固系の亢進に伴って起こ
る線溶系亢進の指標となるＦＤＰの血中濃度は、対照群
で注入開始から３０分および６０分それぞれの時間で１
１．７±７．６および２０．０±０．０（μｇ／ｍｌ）
と上昇していたが、プロテインＣインヒビター投与群で
はそれぞれ５．０±０．０および１０．０±０．０（μ
ｇ／ｍｌ）とその上昇は抑制されていた。
しくは緩衝液注入開始前、開始から３０および６０分）
で血液中の血小板数、フィブリノーゲン濃度およびＦＤ
Ｐ濃度を測定した。両投与群間で血小板数（％）の減少
を比較したところ、注入開始から３０分、６０分いずれ
の時間でも差異は認められなかった。血栓の形成に利用
され消費される血漿フィブリノーゲン濃度を比較する
と、対照群では注入開始から３０分および６０分それぞ
れの時間で注入開始前の７５．２±９．９および５０．
８±２．８（％）と減少したのに対して、プロテインＣ
インヒビター投与群ではそれぞれ９３．４±７．９およ
び６４．７±２．０（％）とその減少は有意に抑制され
ていた。さらに本モデルは血液凝固外因系を亢進させて
作製したモデルであることから外因系凝固因子の消費を
検討するために観察終了直後（１８０分）の血漿のプロ
トロンビン時間（正常ラット血漿で１２．６±０．４
秒）を測定したところ、対照群では２６．５±１．９秒
であったのに比してプロテインＣインヒビター投与群で
は２０．４±０．５秒と有意にその時間が短縮され、正
常値に近づいた。一方、血液凝固系の亢進に伴って起こ
る線溶系亢進の指標となるＦＤＰの血中濃度は、対照群
で注入開始から３０分および６０分それぞれの時間で１
１．７±７．６および２０．０±０．０（μｇ／ｍｌ）
と上昇していたが、プロテインＣインヒビター投与群で
はそれぞれ５．０±０．０および１０．０±０．０（μ
ｇ／ｍｌ）とその上昇は抑制されていた。
【００２５】これらの結果から、プロテインＣインヒビ
ターは、ＤＩＣなどの様に血液凝固系の異常亢進がみら
れる病態において、止血血栓（白色血栓）の形成に重要
な血小板凝集を抑制することなく、血栓形成に関与する
因子であるフィブリノーゲンの減少（消費）および外因
系凝固因子の消費を抑制することが判った。さらに、血
液凝固系の異常亢進を抑制することで血液凝固系異常亢
進に伴って起こる二次的な線溶系の亢進をも抑制するこ
とも判明した。したがって、プロテインＣインヒビター
は、出血傾向などの副作用を伴うことなく、ＤＩＣで高
頻度に起こっている血液凝固−血栓溶解の繰返しを抑制
する作用を有すると言うことができる。
ターは、ＤＩＣなどの様に血液凝固系の異常亢進がみら
れる病態において、止血血栓（白色血栓）の形成に重要
な血小板凝集を抑制することなく、血栓形成に関与する
因子であるフィブリノーゲンの減少（消費）および外因
系凝固因子の消費を抑制することが判った。さらに、血
液凝固系の異常亢進を抑制することで血液凝固系異常亢
進に伴って起こる二次的な線溶系の亢進をも抑制するこ
とも判明した。したがって、プロテインＣインヒビター
は、出血傾向などの副作用を伴うことなく、ＤＩＣで高
頻度に起こっている血液凝固−血栓溶解の繰返しを抑制
する作用を有すると言うことができる。
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば出血傾向などの副作用の
心配がなく、ＤＩＣでみられる典型的な血液凝固系の異
常亢進とそれに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑
制する血液凝固異常亢進抑制剤が提供される。
心配がなく、ＤＩＣでみられる典型的な血液凝固系の異
常亢進とそれに伴って起こる二次的な線溶系の亢進を抑
制する血液凝固異常亢進抑制剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例１における精製プロテインＣインヒビ
ターの電気泳動パターンを示す。染色は０．２５％クー
マジー・ブリリアント・ブルーで行った。左から順にＭ
は分子量マーカー（上から２００，９７．４，６８，４
３，２９，１８．４，１４．３ｋＤａ）、１はヘパリン
カラム溶出画分（Ａ）、２はゲルろ過画分（Ｂ）であ
る。
ターの電気泳動パターンを示す。染色は０．２５％クー
マジー・ブリリアント・ブルーで行った。左から順にＭ
は分子量マーカー（上から２００，９７．４，６８，４
３，２９，１８．４，１４．３ｋＤａ）、１はヘパリン
カラム溶出画分（Ａ）、２はゲルろ過画分（Ｂ）であ
る。
Claims (3)
- 【請求項１】 有効成分として血液凝固系の亢進を抑制
する分子量５４−５７ｋＤａ（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）のプ
ロテインＣインヒビターを含有する血液凝固異常亢進抑
制剤。 - 【請求項２】 静脈内投与用の剤形である請求項１記載
の血液凝固異常亢進抑制剤。 - 【請求項３】 プロテインＣインヒビターがヒト尿およ
び血液からの精製、分離により得られるプロテインＣイ
ンヒビター画分である請求項１記載の血液凝固異常亢進
抑制剤。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9230294A JPH1160500A (ja) | 1997-08-11 | 1997-08-11 | 血液凝固異常亢進抑制剤 |
| DE69810724T DE69810724T2 (de) | 1997-08-11 | 1998-08-11 | Verwendung von Protein C Inhibitor zur Behandlung disseminierter intravasaler Gerinnung (DIC) |
| AT98115110T ATE231001T1 (de) | 1997-08-11 | 1998-08-11 | Verwendung von protein c inhibitor zur behandlung disseminierter intravasaler gerinnung (dic) |
| CA002244801A CA2244801A1 (en) | 1997-08-11 | 1998-08-11 | Suppressory agents against hypercoagulation |
| US09/132,534 US5948752A (en) | 1997-08-11 | 1998-08-11 | Suppressory agents against hypercoagulation |
| EP98115110A EP0904785B1 (en) | 1997-08-11 | 1998-08-11 | Use of protein C inhibitor for the treatment of disseminated intrvascular coagulation (DIC) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9230294A JPH1160500A (ja) | 1997-08-11 | 1997-08-11 | 血液凝固異常亢進抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1160500A true JPH1160500A (ja) | 1999-03-02 |
Family
ID=16905575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9230294A Pending JPH1160500A (ja) | 1997-08-11 | 1997-08-11 | 血液凝固異常亢進抑制剤 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5948752A (ja) |
| EP (1) | EP0904785B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1160500A (ja) |
| AT (1) | ATE231001T1 (ja) |
| CA (1) | CA2244801A1 (ja) |
| DE (1) | DE69810724T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002010783A (ja) * | 2000-06-29 | 2002-01-15 | Jcr Pharmaceuticals Co Ltd | 改変型ヒトプロテインｃインヒビター |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW200407335A (en) * | 2002-07-22 | 2004-05-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Non-neutralizing antibody to inhibit the inactivation of activated protein C |
| WO2004065418A1 (ja) * | 2003-01-20 | 2004-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗pci中和抗体 |
| FR2945126B1 (fr) * | 2009-04-29 | 2019-11-01 | Commissariat A L'energie Atomique | Procede et appareil de comptage des thrombocytes |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3705745A1 (de) * | 1987-02-23 | 1988-09-01 | Behringwerke Ag | Protein c-inhibitor (pci) als pharmazeutikum und in vitro-diagnostikum, verfahren zur herstellung eines solchen pharmazeutikums oder diagnostikums sowie ein mittel enthaltend pci |
| WO1993000926A1 (en) * | 1991-07-02 | 1993-01-21 | Children's Medical Center Corporation | Treatment of periodontal disease with protease inhibitors |
-
1997
- 1997-08-11 JP JP9230294A patent/JPH1160500A/ja active Pending
-
1998
- 1998-08-11 AT AT98115110T patent/ATE231001T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 DE DE69810724T patent/DE69810724T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 EP EP98115110A patent/EP0904785B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 US US09/132,534 patent/US5948752A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 CA CA002244801A patent/CA2244801A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002010783A (ja) * | 2000-06-29 | 2002-01-15 | Jcr Pharmaceuticals Co Ltd | 改変型ヒトプロテインｃインヒビター |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0904785B1 (en) | 2003-01-15 |
| DE69810724T2 (de) | 2003-05-08 |
| CA2244801A1 (en) | 1999-02-11 |
| US5948752A (en) | 1999-09-07 |
| EP0904785A1 (en) | 1999-03-31 |
| DE69810724D1 (de) | 2003-02-20 |
| ATE231001T1 (de) | 2003-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Markwardt | Past, present and future of hirudin | |
| CA2080462C (en) | Therapeutic uses of actin-binding compounds | |
| Markwardt et al. | Pharmacological studies on the antithrombotic action of hirudin in experimental animals | |
| Hörl et al. | Release of granulocyte proteinases during hemodialysis | |
| FI104790B (fi) | Menetelmä aktivoidun proteiini C:n valmistamiseksi | |
| Jochum et al. | Clotting and other plasma factors in experimental endotoxemia: Inhibition of degradation by exogenous proteinase inhibitors | |
| Kumada et al. | Comparative study on heparin and a synthetic thrombin inhibitor No. 805 (MD-805) in experimental antithrombin III-deficient animals | |
| US20140323404A1 (en) | Anticoagulant polypeptide and applications thereof | |
| JPS58225023A (ja) | α―１―プロテイナーゼ阻害剤の製法 | |
| US20110212900A1 (en) | Method for prophylactic and/or therapeutic treatment of pain associated with hematopoietic cell transplantation | |
| Kang | Coagulation and liver transplantation: current concepts | |
| EP0652900B1 (en) | Thrombin inhibitors | |
| Egberg et al. | Platelet aggregation induced by ADP and thrombin in Reptilase defibrinated dogs | |
| Sieunarine et al. | Elastase levels in salvaged blood and the effect of cell washing | |
| JPH1160500A (ja) | 血液凝固異常亢進抑制剤 | |
| WO1997035609A1 (fr) | Inhibiteur de la neoformation de vaisseaux sanguins renfermant un inhibiteur du mecanisme d'action du facteur tissulaire | |
| Gralnick | ∈-AMINOCAPROIC ACID IN PREOPERATIVE CORRECTION OF HÆMOSTATIC DEFECT IN CYANOTIC CONGENITAL HEART-DISEASE | |
| Weiss | The use of plasma and plasma fractions in the treatment of a patient with von Willebrand's disease | |
| Fattorutto et al. | Recombinant activated factor VII decreases bleeding without increasing arterial thrombosis in rabbits | |
| Kierulf et al. | Fibrinaemia and Multiple Thrombi in Pancreatic Carcinoma: A Case Studied with Quantitative N‐Terminal Analysis | |
| Spaet et al. | Effect of intravenous blood thromboplastin intermediates on clotting in rats | |
| EP0239644A1 (en) | Novel physiologically active substance having blood coagulation controlling activity | |
| GIERCKSKY et al. | Protection of rats by phospholipase C from Bacillus cereus against the effects of intravenous infusions of purified tissue thromboplastin | |
| MXPA03007069A (es) | Acido carboxilico tal como acido citrico para desinfectar o mejorar la produccion de productos sanguineos tales como el plasma, crioprecipitado y/o plaqueta. | |
| EP1067879B1 (en) | Method for inhibiting thrombosis in a patient whose blood is subjected to extracorporeal circulation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061010 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070227 |