JPH11310530A - 一酸化窒素産生抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ＮＯ産生抑制剤として有用な医薬組成物を提供
する。 【解決手段】 ケリドニン、コリノリン、サンギナリ
ン、プロトピン、コリダリン、ベルベリン誘導体等を一
酸化窒素産生抑制剤の有効成分として含有する医薬組成
物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、一酸化窒素（Ｎ
Ｏ）産生抑制作用を有する化合物またはその塩を有効成
分として含有する医薬組成物に関する。さらに詳しく
は、この発明は、細胞の一酸化窒素産生抑制作用を有す
る化合物または医薬として許容される塩を有効成分とし
て含有する、敗血症性ショック、低血圧症、炎症性組織
障害、虚血性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、
慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病等の予防お
よび／または治療に有用な医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】細胞
はＮＯ合成酵素 (nitric oxide synthase,ＮＯＳ）に触
媒され、Ｌ−アルギニンから一酸化窒素 (nitric oxid
e、ＮＯ) を産生する。ＮＯＳには非誘導型(constituti
ve NOS, ｃＮＯＳ）と誘導型 (inducible NOS,ｉＮＯ
Ｓ) のアイソザイムが存在し、ｃＮＯＳにはさらに内皮
型と神経型が存在する。内皮型ｃＮＯＳは主に血管内皮
細胞に存在し、神経型ｃＮＯＳは中枢神経細胞や末梢神
経細胞などに分布している。ｉＮＯＳはマクロファー
ジ、好中球、肝細胞、軟骨細胞、滑膜細胞、血管平滑筋
細胞、気管支上皮細胞、グリア細胞等に存在する。細胞
に恒常的に存在するｃＮＯＳはその活性が細胞内カルシ
ウム濃度に依存し、刺激に関わりなくＮＯを産生する。
一方、ｉＮＯＳ活性は細胞内カルシウム濃度に依存して
おらず、エンドトキシンや各種サイトカイン等による刺
激によりはじめて誘導される。いずれのＮＯＳもカルモ
ジュリンが結合して活性型となる。

【０００３】ＮＯＳ触媒反応により産生されるＮＯの作
用は多彩であるが、その作用がｃＮＯＳ由来のＮＯによ
るのか、ｉＮＯＳ由来のＮＯによるのかは明確でない。
ＮＯの作用としては，例えば，血管弛緩作用、血小板凝
集阻害作用、白血球付着阻害作用、血管透過性亢進作
用、樹状細胞の抗原提示機能低下作用、リンパ球の***
や機能低下作用、神経情報伝達作用、中枢神経系の機能
調節作用、抗微生物・抗腫瘍作用ならびに、敗血症性シ
ョック、敗血症性低血圧、虚血性脳障害、自己免疫疾
患、アレルギー性疾患、腎炎、肝炎、潰瘍性大腸炎、関
節炎、心筋症およびインスリン依存性糖尿病等の発症お
よび進展が挙げられる。

【０００４】ＮＯは多様な生理作用を有するため、ＮＯ
Ｓ阻害剤などによる細胞のＮＯ産生抑制は、種々の疾患
の治療法として有用であることが期待され、種々のＮＯ
産生抑制剤の開発が進められている。種々の公知文献、
例えば、新臨床医のための分子医学シリーズ、「ＮＯラ
ジカルの医学」,42-58, 羊土社 (1996) 、「ドラッグ・
ニューズ・ アンド・ パースペクティブス」 (Drug News
and Perspectives), 204-219 (1996))、「エキスパート
・ オピニオン・ オン・ セラピューティック・ パテンツ」
(Expert Opinion on Therapeutic Patents),7, 717-727
(1996) では、ＮＯＳの基質競合剤としてＬ−アルギニ
ン誘導体が開示されている。そのようなＬ−アルギニン
誘導体としては、例えば、Ｎ^G −モノメチル−Ｌ−アル
ギニン（Ｌ−ＮＭＭＡ）、Ｎ^G −ニトロ−Ｌ−アルギニ
ン（Ｌ−ＮＡ）、Ｎ^G −ニトロ−Ｌ−アルギニンメチル
エステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）等が知られている。また、ｉ
ＮＯＳ誘導抑制剤としては、コルチコステロイド、ＩＬ
−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、セリンおよびシステイ
ン・ プロテアーゼ阻害剤等が知れている。さらに、ＮＯ
Ｓの各アイソザイムに対して比較的特異性の高い阻害剤
として、例え ば、ｉＮＯＳに対しては、アミノグアニ
ジン、Ｎ−イミノエチル−Ｌ−リジン、Ｓ−メチルイソ
チオウレア、Ｓ−( アミノエチル) イソチオウレア、３
−アミノ−４’−ヒドロキシフラボン、７−プロピル−
ホモイミノピペリジニウムクロライド等が知られてい
る。また、ｃＮＯＳに関しては、内皮型ｃＮＯＳに対し
てはポリフェノール類であるタンニンやケルセチン、カ
ビの産生物であるブレフェルジンＡ等が知られており、
神経型ｃＮＯＳに関しては７−ニトロインダゾール、８
−ブロモ−７−ニトロインダゾール、Ｓ−メチル( また
はエチル) −Ｌ−チオシトルリン等が知られている。

【０００５】これらの物質以外にも種々のＮＯＳ阻害剤
が報告されており、例えば、「エキスパート・ オピニオ
ン・ オン・ セラピューティック・ パテンツ」,7, 717-72
7 (1996)、同7, 1207-1210 (1997) には、さらにアミノ
酸誘導体およびそれらの類似体、非環式アミジン類およ
びグアニジン類、環式アミジン類、グアニジン類、イソ
チオウレア類、アミノピリジン類、フェノール類、アニ
リン誘導体等が示されている。

【０００６】他方、前記の化合物（Ｉ）および化合物
（ＩＩ）に類似の化合物、例えばベルベリン(berberin
e) が免疫抑制作用（特開平７−３１６０５１）および
神経細胞死抑制効果（特開平７−３３０６２３）を有
し、テトラヒドロプロトベルベリン第４級アンモニウム
化合物が不整脈や心室細動を抑制し、心筋性虚血を保護
し（特開平７−１０９２７６）、コリダリン(corydalin
e)がＡＣＡＴ（ａｃｙｌ−ＣｏＡ−ｃｈｏｌｅｓｔｅｒ
ｏｌ ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）阻害作用を示
し、コレステロール吸収抑制剤および動脈硬化予防・治
療剤として有用であること（特開平８−５９４６９）も
知られている。しかし、この発明の化合物（Ｉ）および
化合物（ＩＩ）がＮＯ産生抑制作用を有することは、こ
れらの文献では示唆されていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】この発明は、ＮＯ産生
抑制剤として有用な医薬組成物を提供することをその課
題としている。

【０００８】

【課題を解決するための手段】この発明の発明者らは，
細胞からのＮＯ産生を抑制する物質を得るべく研究をし
た結果、一般式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）で表される化合
物またはそれらの塩を有効成分として含有する医薬組成
物が、マクロファージおよび／または内皮細胞のＮＯ産
生抑制剤として有用であることを見出した。

【０００９】この発明は、一般式（Ｉ）：

【化３】 ［式中、Ｒ¹ およびＲ² は低級アルコキシ基であるか、
または互いに結合して−ＯＣＨ₂ Ｏ−を表わし、Ｒ³ は
水素原子であるか、または酸素原子を介してＲ⁵ と結合
しており、Ｒ⁴ は低級アルキル基であり、Ｒ⁵ はヒドロ
キシ基もしくは低級アルカノイルオキシ基であるか、ま
たは酸素原子を介してＲ³ と結合しており、Ｒ⁶ は水素
原子または低級アルキル基であり、------は単結合また
は二重結合を表わす］で表わされる化合物（Ｉ）もしく
はその塩、または一般式（II）

【化４】 ［式中、Ｒ¹¹およびＲ¹²は低級アルコキシ基であるか、
または互いに結合して−ＯＣＨ₂ Ｏ−を表わし、Ｒ¹³は
低級アルキル基であるか、またはＲ¹⁶と一緒になって単
結合を表わし、Ｒ¹⁴およびＲ¹⁵は低級アルコキシ基であ
るか、または互いに結合して−ＯＣＨ₂Ｏ−を表わし、
Ｒ¹⁶はＲ¹³と一緒になって単結合を表わすか、あるいは
Ｒ¹⁷と一緒になって＝Ｏを表わし、Ｒ¹⁷は水素原子であ
るか、またはＲ¹⁶と一緒になって＝Ｏを表わし、Ｒ¹⁸は
水素原子または低級アルキル基であり、------は単結合
または二重結合を表わす］で表される化合物（ＩＩ）も
しくはその塩を一酸化窒素産生抑制剤の有効成分として
含有する医薬組成物に関する。

【００１０】

【発明の実施の形態】前記の一般式（Ｉ）および（Ｉ
Ｉ）において、低級アルコキシ基とは炭素数が１〜４の
直鎖または分岐状のアルコキシ基であり、例えば、メト
キシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキ
シ、tert- ブトキシ等が挙げられる。低級アルカノイル
オキシ基とは炭素数が１〜４の直鎖または分岐状のアル
カノイルオキシ基であり、例えば、アセチルオキシ、プ
ロピオニルオキシ、ブチリルオキシ等が挙げられる。

【００１１】化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）の塩と
しては、医薬として許容される塩であれば特に限定され
ず、具体的には例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩ま
たはリン酸塩等の無機酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、
クエン酸塩、コハク酸塩またはメタンスルホン酸塩等の
有機酸塩が挙げられる。化合物（Ｉ）または化合物（Ｉ
Ｉ）が４級アンモニウム塩である場合の対イオンとして
は、例えばハロゲンアニオンが挙げられ、なかでも塩素
アニオンが好ましい。

【００１２】化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）はいず
れも公知であり、公知の方法、例えばヘルベチカ・キミ
カ・アクタ(Helvetica Chimica Acta),66,473 (1983)、
アルチーフ・デア・パルマチー(Archiv der Pharmazi
e),317,223(1984)、テトラヘドロン(Tetrahedron) 35,1
099(1979) 、同35,1977(1979) 、テトラヘドロンレター
ズ(Tetrahedron Letters),1979,495、アナーレン・デア
・パルマチー(Annalen der Pharmcie),29,113(1839) 、
カナディアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー(Canad
ian Journal of Chemistry),47,3701 (1969)、ケミカル
・ファーマシューティカル・ブレティン(Chemical&Phar
maceutical Bulletin),21,1020(1993)、同21,1096(197
3) 等に記載の方法により得るか、またはこれら公知の
方法により得られた化合物から常法に従って得ることが
できる。

【００１３】化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）の代表
例を以下に示すが、本発明はこれらの例に限定されるも
のではない。

【００１４】（Ａ）（＋）−ケリドニン （Ｂ）（＋）−Ｏ−アセチルケリドニン （Ｃ）（±）−コリノリン （Ｄ）（±) −コリノロキシン （Ｅ）サンギナリン クロライド （Ｆ）（＋）−ホモケリドニン （Ｇ）プロトピン （Ｈ）（±) −メソコリダリン （Ｉ）１３−メチルベルベリンクロライド （Ｊ）１３−エチルベルベリンクロライド

【００１５】上記の化合物はそれぞれ次の構造式で表わ
される。

【化５】

【００１６】化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）には種
々の立体異性体、互変異性体が存在するが、これらの異
性体はいずれもこの発明に含まれる。また、分子中に不
斉中心を含む場合には、不斉中心の立体配置はＲ、Ｓの
いずれでもよく、またそれらの混合物であってもよい。
そして、これらの異性体は、例えば光学活性な化合物を
出発原料として用いるか、または得られた異性体混合物
をカラムクロマトグラフィーや再結晶により精製して得
ることができる。

【００１７】また、化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）
の塩は、通常の塩形成反応により製造し、精製すること
ができる。

【００１８】化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）ならび
にそれらの医薬として許容される塩は、後記の試験例で
示すように、細胞のＮＯ産生を有意に抑制し、かつ毒性
も少ないことから、ヒトや哺乳動物に対するＮＯ産生抑
制剤として有用である。具体的には、細胞のＮＯ産生に
起因する各種疾患、例えば敗血性ショック、低血圧、炎
症性組織障害、虚血性疾患、アレルギー性疾患、自己免
疫疾患、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病等
の予防または治療剤として有用である。

【００１９】この発明の医薬組成物は、その目的に応じ
て各種の剤型、例えば錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒
剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤、注射
剤、点滴剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、貼付剤、エアゾー
ル等の非経口剤として使用される。これら製剤は、この
分野で通常知られた慣用的な方法により製造することが
できる。

【００２０】また、この発明の医薬組成物には、その効
果を損なわない限り、所望により着色剤、保存剤、香
料、風味料、甘味剤等のような通常の添加剤、および他
の医薬品を配合することもできる。

【００２１】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えば乳糖、デンプン、結晶セルロース等の通常の
賦形剤を用いて常法に従って製造する。この場合、所望
により、デンプン液、カルボキシメチルセルロース等の
結合剤、乾燥デンプン、炭酸カルシウム等の崩壊剤、白
糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊
抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリ
ウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿
剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイ
ド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、
ほう酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用
できる。

【００２２】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
して例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化
植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム
末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、
カンテン等の崩壊剤等を使用できる。

【００２３】なお、錠剤、丸剤及び顆粒剤等は、必要に
応じて通常の剤皮を施した剤形、例えば糖衣錠、ゼラチ
ン被包剤、腸溶被包剤、フィルムコーティング剤等とす
ることができ、また錠剤は二重錠等の多層錠とすること
もできる。

【００２４】カプセル剤は、常法に従って、本発明の化
合物またはその塩を上記で例示した各種の担体と混合し
て、硬化ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して
調製される。

【００２５】経口用液体製剤を調製する場合は、本発明
の有効成分に、必要に応じて矯味剤、緩衝剤、安定化剤
等の担体を加えて、常法により内服液剤、シロップ剤、
エリキシル剤等を製造することができる。この場合、矯
味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が使用
でき、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化
剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が使
用できる。

【００２６】注射剤または点滴剤を調製する場合は、本
発明の化合物またはその塩に、必要に応じてpH調製剤、
緩衝剤、安定化剤、局所麻酔剤、等張化剤等の担体また
は希釈剤を添加し、常法により静脈内、筋肉内、皮下、
皮内または腹腔内用の注射剤または点滴剤を製造するこ
とができる。

【００２７】pH 調製剤および緩衝剤としては、クエン
酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等
が、安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、エチレン
ジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸等が、局
所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等
が、また等張化剤としては食塩、ブドウ糖あるいはグリ
セリン等を使用することができる。また、希釈剤として
は、例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロ
ピレングリコール等を挙げることができる。

【００２８】なお、注射剤または点滴剤は殺菌され、か
つ血液と等張であるのが好ましい。

【００２９】坐剤は、本発明の化合物またはその塩に基
剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた後、常法
に 従って調製することができる。基剤としては、例え
ばマクロゴール、ラノリン、カカオ油、脂肪酸トリグリ
セライド、ウィテップゾール（ダイナマイトノーベルズ
社製）等の油性基剤を用いることができる。

【００３０】軟膏剤を調製する場合は、本発明の化合物
またはその塩に通常使用される基剤、安定化剤、湿潤
剤、保存剤等の担体が必要に応じて配合され、常法によ
り混合、製剤化される。基剤としては流動パラフィン、
白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアル
コール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としてはパ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、
パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。

【００３１】貼付剤は、通常の支持体に前記軟膏、ペー
スト、クリーム、ゲル等を常法により塗布することによ
り調製することができる。支持体としては綿、スフ、化
学繊維からなる織布または不織布、軟質塩化ビニル、ポ
リエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体
シートを挙げることができる。

【００３２】この発明の医薬組成物は、剤形、患者の年
齢、疾患の程度等に応じて、経口投与、静脈内投与、皮
下・皮内投与、筋肉内投与、関節内投与、直腸投与、経
粘膜投与等の非経口投与により使用され得るが、経口投
与、静脈内投与および関節内投与が好ましい。

【００３３】本発明化合物を治療上用いる場合の投与量
は、疾病の種類、患者の症状・重篤度、体重、年齢、性
別、薬物に対する認容度、薬物の投与形態やその他の条
件等に応じて適宜増減されるが、通常成人に１日あたり
１〜２０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇとする
ことができる。

【００３４】

【実施例】以下、参考例、試験例および実施例によりこ
の発明を説明するが、この発明はこれらの参考例、試験
例および実施例に限定されるものでない。

【００３５】合成例１ （＋）−ケリドニン(chelidoni
ne) （Ａ）の製造

【化６】 白屈菜（大和商会k.k., 乾燥重量30Kg）から常法により
メタノールエキスを作り、３級非フェノール性アルカロ
イド分画を得た。次いで、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（ベンゼン/ エーテル）で分離すると主塩基と
して７ｇの油性物が得られ、これをメタノール/ エーテ
ルから再結晶すると、ｍ．ｐ．１３６℃の標題化合物が
無色プリズム状結晶として得られた。

【００３６】合成例２ （＋）−Ｏ−アセチルケリドニ
ン(acetylchelidonine) （Ｂ）の製造

【化７】 （＋）−ケリドニン７０ｍｇを無水酢酸０．５ｍｌに溶
解し、ピリジン数滴を加えて室温で４時間放置した。反
応後、反応液中に少量の氷片を加えて無水酢酸を分解
後、アンモニア水を加えてアルカリ性とした後、エーテ
ルで抽出を行った。次いで、抽出液を無水炭酸カリウム
で乾燥後、エーテルを留去し、得られた無色の油状残査
をアセトン/ エーテル混合溶媒で再結晶すると、m.p.16
5-166 ℃の板状結晶として７０．５ｍｇの（＋）−Ｏ−
アセチルケリドニンが得られた。

【００３７】合成例３ (±) −コリノリン(corynoline)
（Ｃ）の製造

【化８】 乾燥重量3.7 kgのムラサキケマン（福井県産）のメタノ
ールエキスを３％酒石酸で抽出した。酒石酸層はエーテ
ル抽出により、中性および酸性物質を除去後、アンモニ
ア水でアルカリ性とした後エーテル抽出を行なった。こ
のエーテル層は無水炭酸カリウムで乾燥後、エーテルを
留去し赤褐色油状の残査１４．１ｇを得た。この残査を
クロロホルム／メタノール混合溶媒で再結晶し、m.p.21
6-217 ℃の無色プリズム状の（±) −コリノリン３．５
ｇを得た。

【００３８】合成例４ (＋) −コリノロキシン(corynol
oxine)（Ｄ）の製造

【化９】 （＋) −コリノリン１００ｍｇを５％酢酸に溶解してHg
₂(OAc)₂ ２１０ｍｇを加え水浴上で４時間加熱した。反
応後析出したHg(OAc)₂をろ別して、ろ液をアンモニア水
でアルカリ性とした後エーテルで抽出した。エーテル層
を無水炭酸カリウムで乾燥後、溶媒を留去すると帯黄色
油状物質が得られた。これをアルミナカラムクロマトグ
ラフィー（ベンゼン）により精製し、メタノールから再
結晶すると、m.p.147-148 ℃の無色プリズム状結晶とし
て（＋) −コリノロキシンが５５ｍｇ得られた。

【００３９】合成例５ サンギナリンクロライド(sangu
inarine chloride) （Ｅ）の製造

【化１０】

【００４０】（＋）−Ｏ−アセチルケリドニン５ｇを５
％酢酸１０００ｍｌに溶解し、酸化水銀１５ｇを加え、
４時間加熱還流させた。冷後、固形物をろ別除去し、ろ
液を２８％アンモニア水でアルカリ性としてエーテル３
００ｍｌで２回抽出した。エーテル層は無水炭酸カリウ
ムで乾燥後、減圧濃縮すると５，６−ジヒドロサンギナ
リン２．７ｇがｍ．ｐ．１９０−１９２℃（クロロホル
ム／メタノール）のプリズム晶として得られた。この
５，６−ジヒドロサンギナリン２ｇをベンゼン８０ｍｌ
に溶解し、５％水酸化ナトリウム水溶液３６ｍｌを加
え、攪拌下にベンゼンに溶解した２，３−ジクロロ−
５，６−ジシアノ−パラ−ベンゾキノン１．９６ｇを少
量ずつ滴下した。滴下終了後１時間室温で攪拌した。反
応後、反応溶液中に１０％水酸化ナトリウム水溶液２０
００ｍｌを加え、酢酸エチル３００ｍｌで２回抽出し
た。酢酸エチル層は飽和食塩水で洗浄後、無水炭酸カリ
ウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を留去させると油性の残
査２ｇが得られた。この油状物質をメタノール１０ｍｌ
に懸濁させ、３５％塩酸を加え酸性にするとサンギナリ
ンクロライドが赤橙色針状晶として２．１ｇ得られた。
分解点２８７−２８９℃。

【００４１】合成例６ (+)−ホモケリドニン(homocheli
donine) （Ｆ）の製造

【化１１】 白屈菜（大和商会k.k., 乾燥重量30Kg）から、常法によ
りメタノールエキスを作り、３級非フェノール性アルカ
ロイド分画を得た。この分画をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ベンゼン／エーテル）で分離し、(+) −
ケリドニンの次に溶出する分画を単離した。その分画か
らアセトン／エーテル混合溶媒より再結晶するとm.p.18
1-182 ℃のプリズム状結晶として(+) −ホモケリドニン
が80mg得られた。

【００４２】合成例７ プロトピン(protopine) （Ｇ）
の製造

【化１２】

【００４３】白屈菜（大和商会k.k., 乾燥重量30Kg）か
ら常法によりメタノールエキスを作り、３級非フェノー
ル性アルカロイド分画を得た。プロトピンはこの分画か
らシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン／エ
ーテル＝１／１次いでメタノール）で分離し、これをク
ロロホルム/ メタノールから再結晶すると、ｍ．ｐ．２
０５−２０６℃の標題化合物が無色プリズム状結晶とし
て１．５ｇ得られた。

【００４４】合成例８ (±) −メソコリダリン(meso-co
rydaline) （Ｈ）の製造

【化１３】

【００４５】分液ロートにパルマチンクロライド１０
ｇ、アセトン２００ｍｌそして１０％水酸化ナトリウム
水溶液（１００ｍｌ）を入れ、３０分間室温で振とうし
た後、析出した結晶をろ過して、パルマチンアセトン付
加体を得た。加圧ビン中でパルマチンアセトン付加体
（２ｇ）をアセトンに溶解し、ヨウ化メチル５ｍｌを加
え４．５時間、５０℃で反応させた。反応後、析出した
結晶をろ別し、１３−メチルパルマチンアイオダイドを
得た。ナス型フラスコに１３−メチルパルマチンアイオ
ダイド２．０ｇ、メタノール３００ｍｌ、Ｚｎ末２ｇお
よび濃塩酸６ｍｌを入れ、水浴上６時間、６０℃で加熱
した。反応後、Ｚｎ末をろ別し、水２０ｍｌを加えた後
メタノールを減圧下留去した。得られた残査に水を加え
全量を約２００ｍｌとした後、２５％アンモニア水を加
えアルカリ性とし、クロロホルム３００ｍｌで２回抽出
を行った。抽出液は無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次
いで、溶媒を留去して油状の（±）−コリダリンと
（±）−メソコリダリンの反応混合物を得た。これをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン／エーテ
ル／メタノール）により分離し、クロロホルムから再結
晶することによりｍ．ｐ．１５５．５−１５６．７℃の
（±）−メソコリダリンを１８０ｍｇ得た。

【００４６】合成例９ １３−メチルベルベリンクロラ
イド（Ｉ）の製造

【化１４】

【００４７】分液ロートにベルベリンクロライド１０
ｇ、アセトン２００ｍｌおよび１０％水酸化ナトリウム
水溶液（１００ｍｌ）を入れ、３０分間室温で振とうし
た後、析出した結晶をろ過して、ベルベリンアセトン付
加体を得た。加圧ビン中でベルベリンアセトン付加体２
ｇをアセトン８０ｍｌに溶解し、ヨウ化メチル５ｍｌを
加え４．５時間、５０℃で反応させた。反応後、析出し
た結晶をろ別し、１３−メチル−ベルベリンアイオダイ
ドを得た。次いで、１．５ｇのアンバーライトＣＧ−４
００を水に懸濁させてカラムに充填し、２０ｍｌのメタ
ノールに５０ｍｇの１３−メチル−ベルベリンアイオダ
イドを溶解した溶液を注入した。水／メタノールにより
溶出した溶出液を減圧下濃縮乾固することにより、１３
−メチル−ベルベリンクロライド３８ｍｇを黄色粉末と
して得た。分解点１６２．３−１６５．８℃。

【００４８】合成例１０ １３−エチルベルベリンクロ
ライド（Ｊ）の製造

【化１５】

【００４９】加圧ビン中でベルベリンアセトン付加体１
ｇをアセトン３０ｍｌに溶解し、ヨウ化エチル８ｍｌを
加え６０℃で５時間反応させた。反応後、析出した結晶
をろ別して１３−エチルベルベリンアイオダイド３５０
ｍｇを黄色針状晶として得た。分解点２０７．８−２１
０．７℃。次いで参考例９と同様の操作により１３−エ
チルベルベリンクロライド２８．６ｍｇを黄色粉末とし
て得た。分解点１７４．８−１７７．４℃。

【００５０】試験例１ 誘導型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）を介するＮＯ産生に対する抑
制作用 マクロファージ由来株化細胞ＲＡＷ２６４を４８穴プレ
ートに１ｃｍ² 当たり４×１０⁵ 個植え込み、10% 牛胎
児血清を含むダルベッコ変法イーグル培養液(Dulbecco'
s modified Eagle's medium)中で、１ｎｇ／ｍｌのリポ
ポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｓｅｒｏ
ｔｙｐｅ ０１１１：Ｂ４）により３７℃で２０時間刺
激した。試験化合物はＬＰＳと同時に細胞へ添加した。
刺激後、培養液中のＮＯ産生量は、グリース法 (グリー
ン（Green ）LCら、アナリティカル・バイオケミストリ
ー（Analytical Biochemistry), 126, 131-138 (1982)
により亜硝酸イオン（ＮＯ₂ ^- ) 量として測定した。す
なわち、７５μｌの培養上清に５０μｌのグリース試薬
（０．１％ナフチルエチレンジアミン、１％スルファニ
ルアミド、５％リン酸を含む) を加え、１０分後に５４
０ｎｍ−６５０ｎｍの吸光度を測定した。抑制活性は
｛( 化合物無添加でのＬＰＳ刺激細胞のＮＯ産生量) −
( 化合物無添加での無刺激細胞のＮＯ産生量) ＝１００
％｝として算出した。この値を表１に示す。なお、比較
薬物として、ｉＮＯＳ誘導抑制剤であるデキサメサゾン
（Ｄｅｘ）、およびｉＮＯＳよりも非誘導型ＮＯＳ（ｃ
ＮＯＳ）を相対的に強く阻害するといわれるＮ ^G−ニト
ロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）を
用いた。

【００５１】

【表１】

【００５２】試験例２ 非誘導型ＮＯＳ（ｃＮＯＳ）を介するＮＯ産生に対する
抑制作用 ２４穴プレートでコンフルエントになるまで培養した牛
肺動脈内皮細胞 (CPAE)を、１０％牛胎児血清を含むダ
ルベッコ変イーグル培養液 (Dulbecco's modified Eagl
e's medium) 中で、１０μＭのイオノマイシン（カルシ
ウムイオノフォア）により３７℃で４０時間刺激した。
試験化合物はイオノマイシンと同時に細胞へ添加した。
培養液中のＮＯ産生量は、試験例１と同様の操作により
測定した。抑制活性は｛( 化合物無添加でのイオノマイ
シン刺激細胞のＮＯ産生量) −(化合物無添加での無刺
激細胞のＮＯ産生量) ＝１００％｝として算出した。こ
の値を表２に示す。比較薬物として試験例１と同様に、
デキサメサゾン（Ｄｅｘ）およびＮ^G −ニトロ−Ｌ−ア
ルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）を用いた。

【００５３】

【表２】

【００５４】試験例３ 表１および表２に記載された化合物について、以下の方
法により細胞毒性試験を行い、記載濃度において毒性が
認められないことを確認した。すなわち、試験例１およ
び試験例２と同条件で試験化合物を添加して細胞を培養
した後、培養液を除き、細胞へ０．３ｍｇ／ｍｌのＷＳ
Ｔ−１（２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニト
ロフェニル）−５−（２、４−ジスルフォフェニル）−
２Ｈ−テトラゾリウム）および６．４μｇ／ｍｌの１−
メトキシＰＭＳ（１−メトキシ−５−メチルフェナジニ
ウムメチルスルフェート）を含むＰＢＳ(phosphate-buf
fered saline) を加えた。これを３７℃で１時間インキ
ュベ−トした後、生成したホルマザンを４５０ｎｍ−６
５０ｎｍの吸光度で測定し、試験化合物無添加の場合と
比較した。その結果、生存細胞の作用により生成したホ
ルマザン量は、試験化合物を添加しても変化しなかっ
た。

【００５５】試験例４ マウス腹腔内投与による急性毒性作用 ５％ポリエチレングリコール４００および１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０を含むリン酸緩衝液生理食塩水に懸濁させた試験
化合物（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ）を、ＢＡＬＢ／ｃ雄性マ
ウス（２０〜２５ｇ、１群４匹）の腹腔内に、６時間の
間隔をおいて２回、１００ｍｇ／ｋｇ投与したが、１回
目の投与後２４時間で死亡例は認められなかった。

【００５６】実施例１ （±）−コリノリン２０ｇをとり、乳糖９０ｇ、コーン
スターチ５９．５ｇ、結晶セルロース２０ｇ、カルボキ
シメチルセルロースカルシウム１０ｇおよびステアリン
酸マグネシウム０．５ｇを加えて全量を２００ｇの粉末
とし、これをよく混合した後、１錠２００ｍｇの錠剤を
製造した。 実施例２ （±）−コリノロキシン４０ｇをとり、乳糖７８ｇ、コ
ーンスターチ５１．５ｇ、結晶セルロース２０ｇ、カル
ボキシメチルセルロースカルシウム１０ｇおよびステア
リン酸マグネシウム０．５ｇを加えて全量を２００ｇの
粉末とし、これをよく混合した後、１錠２００ｍｇの錠
剤を製造した。

【００５７】

【発明の効果】この発明の化合物（Ｉ）および化合物
（ＩＩ）は、細胞からのＮＯ産生抑制作用を有し、敗血
症性ショック、低血圧症、炎症性組織障害、虚血性疾
患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、慢性関節リウマ
チまたはインスリン依存性糖尿病の予防および／または
治療に有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/435 ＡＢＮ Ａ６１Ｋ 31/435 ＡＢＮ ＡＢＶ ＡＢＶ ＡＤＰ ＡＤＰ 31/395 ＡＤＺ 31/395 ＡＤＺ // Ａ６１Ｋ 35/78 35/78 Ｃ Ｃ０７Ｄ 455/03 Ｃ０７Ｄ 455/03 491/056 491/056 491/147 491/147 491/153 491/153 (72)発明者 上垣内 みよ子 豊中市新千里北町３−８−６

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、Ｒ¹ およびＲ² は低級アルコキシ基であるか、
   または互いに結合して−ＯＣＨ₂ Ｏ−を表わし、Ｒ³ は
   水素原子であるか、または酸素原子を介してＲ⁵ と結合
   しており、Ｒ⁴ は低級アルキル基であり、Ｒ⁵ はヒドロ
   キシ基もしくは低級アルカノイルオキシ基であるか、ま
   たは酸素原子を介してＲ³ と結合しており、Ｒ⁶ は水素
   原子または低級アルキル基であり、------は単結合また
   は二重結合を表わす］で表わされる化合物(I) もしくは
   その塩または、一般式（II） 【化２】 ［式中、Ｒ¹¹およびＲ¹²は低級アルコキシ基であるか、
   または互いに結合して−ＯＣＨ₂ Ｏ−を表わし、Ｒ¹³は
   低級アルキル基であるか、またはＲ¹⁶と一緒になって単
   結合を表わし、Ｒ¹⁴およびＲ¹⁵は低級アルコキシ基であ
   るか、または互いに結合して−ＯＣＨ₂Ｏ−を表わし、
   Ｒ¹⁶はＲ¹³と一緒になって単結合を表わすか、あるいは
   Ｒ¹⁷と一緒になって＝Ｏを表わし、Ｒ¹⁷は水素原子であ
   るか、またはＲ¹⁶と一緒になって＝Ｏを表わし、Ｒ¹⁸は
   水素原子または低級アルキル基であり、------は単結合
   または二重結合を表わす］で表される化合物(II)もしく
   はその塩を一酸化窒素産生抑制剤の有効成分として含有
   する医薬組成物。
2. 【請求項２】 化合物（Ｉ）が（＋）−ケリドニン、
   （＋）−Ｏ−アセチルケリドニン、（±) −コリノリ
   ン、（±) −コリノロキシン、サンギナリンクロライド
   または（＋）−ホモケリドニンである請求項１に記載の
   医薬組成物。
3. 【請求項３】 化合物(II)がプロトピン、（±) −メソ
   コリダリン、１３−メチルベルベリンクロライドまたは
   １３−エチルベルベリンクロライドである請求項１に記
   載の医薬組成物。
4. 【請求項４】 一酸化窒素産生抑制剤が敗血症性ショッ
   ク、低血圧症、炎症性組織障害、虚血性疾患、アレルギ
   ー性疾患、自己免疫疾患、慢性関節リウマチまたはイン
   スリン依存性糖尿病の予防・治療剤である請求項１に記
   載の医薬組成物。