JPH11152299A - 新規アミリン作動薬ペプチドおよびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 インスリン誘導低血糖症を含めた、糖尿病お
よび低血糖症の治療および防止。 【解決手段】 アミリンの作動薬アナログおよびその関
連医薬組成物、および糖尿病および他のインスリン−要
求症状の治療方法、ならびに低血糖症の治療方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ここに参照して一
体化させる、１９９１年３月８日付け出願の米国特許出
願第０７／６６７０４０号の一部継続出願である。

【０００２】本発明の分野は医療、特に、低血糖症、そ
の他糖尿病のごときインスリン要求性状態を始め、促進
されたアミリンの作用が有益な疾患の治療および防止で
ある。さらに詳しくは、本発明は、ペプチドホルモン・
アミリンの作動薬アナログ類の製造および使用に関す
る。

【０００３】

【従来の技術】糖尿病は、血中グルコースの臨床的に上
昇したレベル（高血糖症）の存在によって定義される深
刻な代謝病である。高血糖症のこの状態はペプチドホル
モンであるインスリンの活性の相対的もしくは絶対的欠
乏の結果である。インスリンは膵臓のβ細胞によって産
生され、分泌される。インスリンはグルコースの利用、
蛋白の合成、および中性脂質の形成および貯蔵を促進す
ると報告されている。グルコース、すなわち炭水化物エ
ネルギーの主要源は、身体中でグリコーゲン、すなわ
ち、代謝要件に適合させるべくグルコースに変換され得
る重合したグルコースの形態で貯蔵される。通常の条件
下では、インスリンは基礎速度およびグルコース刺激に
よる促進速度の双方にて分泌されて、グルコースのグリ
コーゲンへの変換によって代謝の恒常性を維持する。

【０００４】糖尿病なる語は数個の異なる高血糖症状態
を含む。これらの状態はタイプ１（インスリン−依存性
糖尿病またはＩＤＤＭ）およびタイプ２（インスリン非
依存性糖尿病またはＮＩＤＤＭ）の糖尿病を包含する。
タイプ１糖尿病を持つ個体に存在する高血糖症は、生理
学的範囲にある血中グルコースレベルを維持するのに不
十分な、インスリンの欠乏した、減少した、または存在
しないレベルと関連している。タイプ１糖尿病の治療
は、一般に、非経口経路による、インスリンの置換用量
の投与を含む。タイプＩＩ糖尿病を持つ個体に存在する
高血糖症は、まず、インスリンの通常または上昇したレ
ベルに関連する；しかしながら、これらの個体は、末梢
組織および肝臓におけるインスリン耐性の状態のためお
よび、病気の進行としての、インスリンの分泌の原因と
なる膵臓β細胞の進行性悪化のため、代謝的恒常性を維
持することができない。かくして、タイプ２糖尿病の最
初の治療は、ダイエットや、スルホニル尿素のごとき経
口血糖低下剤での治療によってなされる生活スタイルの
変化に基づくものであり得る。しかしながら、特に、高
血糖症をいくらか制御し、糖尿病合併症を最小化する試
みにおける、糖尿病の後者の段階においては、インスリ
ン療法がしばしば必要である。かくして、多くのタイプ
２糖尿病は生存のためには究極的にインスリンを必要と
する。

【０００５】アミロイドは、β−シート蛋白フィラメン
トの細胞外沈積物に与えられた名称である。アミロイド
物質の沈積物はタイプ２糖尿病を持つ患者の膵臓で発見
されたと報告されている。他の研究は、アミロイド沈積
の程度はヒトにおける高血糖症の程度およびタイプ２糖
尿病の重症度に伴い増大することを示している。膵臓ア
ミロイドの化学分析は、ペプチドホルモンアミリンの驚
くべきかつ予期せぬ発見に導いた。クラーク・エイ(Cla
rk，A.)ら、ランセット（Lancet)ii：２３１−２３４
（１９８７）。このペプチドは３７個のアミノ酸よりな
ることが発見されており、そのいずれも酸性残基でな
く、２位および７位におけるシステイン残基の間にジス
ルフィド結合を有し、Ｃ−末端がアミド化されている。
アミリンは、タイプ２糖尿病を持つ患者の膵臓ランゲル
ハンス島で発見されたアミロイドの主要蛋白構成物であ
ると報告されている。

【０００６】合成分子のペプチド構造において、分子内
システイン架橋およびカルボキシル末端アミド基の双方
の存在が、骨格筋でグリコーゲン合成を阻害する最大の
生物学的活性の増大をもたらしたと報告されている。例
えば、クーパー，ジイ・ジェイ・エス（Cooper,G.J.S.)
ら、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシズ（Proc.Natl.Acad.Sci.)（ＵＳ
Ａ）８４：８６２８−８６３２（１９８７）；クーパー
・ジイ・ジェイ・エスら、ダイアベーテス（Diabete
s)、１９８８、ラーキンス・アール、ツィメット・ピイ
およびチショルム・ディ（Larkins,R.,Zimmet,P.& Chis
holm,D.)（エルセビエ（Elsevier)、アムステルダム、
４９６−４９６頁（１９８９））。アミリンのアミノ酸
配列（配列番号：５）（図１参照）は、ヒト・カルシト
ニン遺伝子関連ペプチド２（ＣＧＲＰ−２）と４６％の
相同性を有する。

【０００７】１つの報告は、アミリン分子の限定された
セグメント、残基２０−２９は、タイプ２糖尿病でのラ
ンゲルハンス島におけるアミロイドフィブリル形成への
可能な寄与体であると述べている。グレナー（Glenner)
ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサ
ーチ・コミューニケーションズ（Biochem.Biophys.Res.
Commun.)１５５：６０８−６１４（１９８８）。また、
ある哺乳動物種からのアミリン間のアミノ酸配列の相違
がこの領域で起こっていると報告されており、さらなる
研究は、アミロイド形成に関連した残基の同定に焦点を
当ててきた。ウェスターマーク(Westermark)ら、プロシ
ーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンシズ(Proc.Natl.Acad.Sci.)(ＵＳＡ）８７：５
０３６−５０４０(１９９０)。ウェスターマーク（West
ermark)らの研究は、異なる種からのアミリン配列の種
々の２０−２９アミノ酸セグメントを合成し、続いてア
ミロイドフィブリルを形成するその能力を比較する試み
を報告している。ヒト・アミリンの残基２５−２９は最
も強力なアミロイド形成性であり、いくつかの囓歯類種
におけるごとく、２８位におけるセリンの代わりのプロ
リン置換は研究したデカペプチドにおいてフィブリル形
成を有意に阻害することが提案されている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】アミリンは複雑なペプ
チドであり、アミリンの生物活性調製物の合成は骨が折
れる。また、アミリンは溶液中で限定的な溶解度および
限定的な安定性を有することが判明している。本発明者
らは、ラット・アミリンはヒト・アミリンよりも高い溶
液中溶解度および安定性を有することを見い出した。こ
れは知られていなかったにも拘わらず、これは、幾分、
異なる種からのアミリンの異なる凝集特性によるもので
あろう。ヒト、非ヒト霊長類、およびネコ種のアミリン
のみが、invivoにて凝集して島アミロイドを形成すると
報告されている。今回、多数の種から単離されたと報告
されているアミリンの配列を図２に記載する（配列番
号：５−１１）。

【０００９】タイプＩ糖尿病において、アミリンのレベ
ルは通常の対照と比較してひどく減少しているか、ある
いは存在しない。タイプＩ糖尿病の疾患状態において、
インスリンおよびアミリンの生産者であるβ−細胞が自
己免疫プロセスによって破壊されている。アミリンは、
インスリン誘導低血糖症を含めた、糖尿病および低血糖
症の治療で有効であることが提案されている。また、ア
ミリンと一緒でのインスリンの共投与は、インスリン単
独の現行投与よりも優れた療法であり、低血糖症の治療
のためのグルカゴンと一緒でのアミリンの共投与はグル
カゴン単独の現行投与よりも優れた療法であると提案さ
れている。かかる目的やその他の目的で、天然ヒト・ア
ミリンの活性を有するより複雑でない化合物、ならびに
天然ヒト・アミリンよりも促進された溶解度および／ま
たは安定性を示す化合物を提供するのは有用であろう。
かかる化合物を記載し特許請求する。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、ペプチドホル
モン・アミリンの新規アナログに指向される。これらの
化合物はアミリンの効果を模倣しており、アミリン作動
薬またはアミリンの作動薬アナログという。また、本発
明は、本発明の作動薬アナログよりなる医薬組成物、お
よびアミリンの作動薬アナログを（単独でまたはインス
リンもしくはグルカゴンと組み合わせて）動物に投与す
ることを特徴とする、糖尿病のごときインスリン要求性
状態を含めた、促進されたアミリン作用が有益である低
血糖症および他の疾患の治療法および防止法に指向され
る。

【００１１】定義 本明細書で用いる以下の用語は、特に断りのない限り以
下の意味を有する：「アルキル」なる語は直鎖および分
岐鎖のアルキル基双方をいう。「低級アルキル」なる語
は合計１〜６個の炭素原子を有する直鎖および分岐鎖の
アルキル基双方をいい、第一級、第二級および第三級ア
ルキル基を包含する。典型的な低級アルキルは、例え
ば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ
−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ
−ヘキシル等を包含する。「アリール」なる語は、フェ
ニルおよびナフチルのごとき６個ないし１４個の炭素原
子の炭素環芳香族基、ならびにピリジル、トリアゾロピ
ラジン、ピリミジン等のごとき１個ないし３個のヘテロ
原子（窒素、酸素、硫黄等）を含有する複素環芳香族基
を包含する。「アラルキル」なる語は、１個ないし４個
の炭素原子の「アルキル」基に直接結合した６個〜１０
個の炭素原子の「アリール」基をいい、例えば、ベンジ
ル、ｐ−クロロベンジル、ｐ−メチルベンジル、および
２−フェニルエチルを包含する。「シクロアルキル」と
は、５ないし８個の炭素原子の環状アルキル基をいう。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明により、アミリンの新規作
動薬アナログが提供される。これらのアナログは血糖上
昇薬を含めたアミリンの作動薬として有用であり、図３
（配列番号：１２）によって示され得る。

【００１３】１の態様において、本発明は、配列表の配
列番号１で示されるアミノ酸配列：¹ Ａ₁-Ｘ-Ａsn-Ｔhr-⁵Ａla-Ｔhr-Ｙ-Ａla-Ｔhr-¹⁰Ｇln-
Ａrg-Ｌeu-Ｂ₁-Ａsn-¹⁵Ｐhe-Ｌeu-Ｃ₁-Ｄ₁-Ｅ₁-²⁰Ｆ₁-
Ｇ₁-Ａsn-Ｈ₁-Ｇly-²⁵Ｐro-Ｉ₁-Ｌeu-Ｐro-Ｊ₁-³⁰Ｔhr-
Ｋ₁-Ｖal-Ｇly-Ｓer-³⁵Ａsn-Ｔhr-Ｔyr-Ｚ ［式中、Ａ₁はＬys、Ａla、Ｓerまたは水素；Ｂ₁はＡl
a、ＳerまたはＴhr；Ｃ₁はＶal、ＬeuまたはＩle；Ｄ₁
はＨisまたはＡrg；Ｅ₁はＳerまたはＴhr；Ｆ₁はＳer、
Ｔhr、ＧlnまたはＡsn；Ｇ₁はＡsn、ＧlnまたはＨis；
Ｈ₁はＰhe、ＬeuまたはＴyr；Ｉ₁はＩle、Ｖal、Ａlaま
たはＬeu；Ｊ₁はＳer、ＰroまたはＴhr；Ｋ₁はＡsn、Ａ
spまたはＧln；ＸおよびＹは、独立して、相互に化学結
合して分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択
され、ここに、該分子内架橋には、ジスルフィド結合、
ラクタムまたはチオエーテル架橋が含まれ；および、Ｚ
はアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロ
アルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、
アルキルオキシ、アリールオキシまたはアラルキルオキ
シを意味する；但し、Ａ₁がＬys、Ｂ₁がＡla、Ｃ₁がＶa
l、Ｄ₁がＡrg、Ｅ₁がＳer、Ｆ₁がＳer、Ｇ₁がＡsn、Ｈ₁
がＬeu、Ｉ₁がＶal、Ｊ₁がＰroであって、Ｋ₁がＡsnで
ある場合には、Ａ₁〜Ｋ₁のうちいずれかの１またはそれ
以上はＤ−アミノ酸であって、Ｚはアルキルアミノ、ジ
アルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミ
ノ、アラルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキ
シ、およびアラルキルオキシよりなる群から選択され
る］を有するアミリンの作動薬アナログ、または、治療
的投与用の形態に混合した、治療学的に有効な量の該ア
ミリンの作動薬アナログと、インスリンもしくはグルカ
ゴンとからなる組成物に指向される。

【００１４】ＸおよびＹについての適当な側鎖は、ジス
ルフィド結合を形成し得るアルキルスルフヒドリル；環
状ラクタムを形成し得るアルキル酸およびアルキルアミ
ン；縮合し、還元されてアルキルアミン架橋を形成し得
るアルキルアルデヒドまたはアルキルハライドおよびア
ルキルアミン；または連結してアルキル、アルケニル、
エーテルまたはチオエーテル結合を形成し得る側鎖；か
ら由来する基を包含する。好ましいアルキル鎖は約１個
〜約６個の炭素原子を有する低級アルキル基を包含す
る。

【００１５】本発明の別の態様は、配列表の配列番号２
で示されるアミノ酸配列：¹ Ａ₁-Ｘ-Ａsn-Ｔhr-⁵Ａla-Ｔhr-Ｙ-Ａla-Ｔhr-¹⁰Ｇln-
Ａrg-Ｌeu-Ｂ₁-Ａsn-¹⁵Ｐhe-Ｌeu-Ｃ₁-Ｄ₁-Ｅ₁-²⁰Ｆ₁-
Ｇ₁-Ａsn-Ｈ₁-Ｇly-²⁵Ｐro-Ｉ₁-Ｌeu-Ｊ₁-Ｐro-³⁰Ｔhr-
Ｋ₁-Ｖal-Ｇly-Ｓer-³⁵Ａsn-Ｔhr-Ｔyr-Ｚ ［式中、Ａ₁はＬys、Ａla、Ｓerまたは水素；Ｂ₁はＡl
a、ＳerまたはＴhr；Ｃ₁はＶal、ＬeuまたはＩle；Ｄ₁
はＨisまたはＡrg；Ｅ₁はＳerまたはＴhr；Ｆ₁はＳer、
Ｔhr、ＧlnまたはＡsn；Ｇ₁はＡsn、ＧlnまたはＨis；
Ｈ₁はＰhe、ＬeuまたはＴyr；Ｉ₁はＩle、Ｖal、Ａlaま
たはＬeu；Ｊ₁はＳer、Ｐro、Ｌeu、ＩleまたはＴhr；
Ｋ₁はＡsn、ＡspまたはＧln；ＸおよびＹは、独立し
て、相互に化学結合して分子内架橋を形成する側鎖を有
する残基から選択され、ここに、該分子内架橋には、ジ
スルフィド結合、ラクタムまたはチオエーテル架橋が含
まれ；およびＺはアミノ、アルキルアミノ、ジアルキル
アミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラ
ルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたは
アラルキルオキシを意味する；但し、(ａ)Ａ₁がＬys、
Ｂ₁がＡla、Ｃ₁がＶal、Ｄ₁がＡrg、Ｅ₁がＳer、Ｆ₁が
Ｓer、Ｇ₁がＡsn、Ｈ₁がＬeu、Ｉ₁がＶal、Ｊ₁がＰroで
あって、Ｋ₁がＡsnである場合；または(ｂ)Ａ₁がＬys、
Ｂ₁がＡla、Ｃ₁がＶal、Ｄ₁がＨis、Ｅ₁がＳer、Ｆ₁がA
sn、Ｇ₁がＡsn、Ｈ₁がＬeu、Ｉ₁がＶal、Ｊ₁がＳerであ
って、Ｋ₁がＡsnである場合には、Ａ₁〜Ｋ₁のうちいず
れかの１またはそれ以上はＤ−アミノ酸であって、Ｚは
アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキルア
ミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アルキルオ
キシ、アリールオキシ、およびアラルキルオキシよりな
る群から選択される］を有するアミリンの作動薬アナロ
グ、または、治療的投与用の形態に混合した、治療学的
に有効な量の該アミリンの作動薬アナログと、インスリ
ンもしくはグルカゴンとからなる組成物に指向される。

【００１６】本発明のさらなる別の態様は、配列表の配
列番号３で示されるアミノ酸配列：¹ Ａ₁-Ｘ-Ａsn-Ｔhr-⁵Ａla-Ｔhr-Ｙ-Ａla-Ｔhr-¹⁰Ｇln-
Ａrg-Ｌeu-Ｂ₁-Ａsn-¹⁵Ｐhe-Ｌeu-Ｃ₁-Ｄ₁-Ｅ₁-²⁰Ｆ₁-
Ｇ₁-Ａsn-Ｈ₁-Ｇly-²⁵Ｉ₁-Ｊ₁-Ｌeu-Ｐro-Ｐro-³⁰Ｔhr-
Ｋ₁-Ｖal-Ｇly-Ｓer-³⁵Ａsn-Ｔhr-Ｔyr-Ｚ ［式中、Ａ₁はＬys、Ａla、Ｓerまたは水素；Ｂ₁はＡl
a、ＳerまたはＴhr；Ｃ₁はＶal、ＬeuまたはＩle；Ｄ₁
はＨisまたはＡrg；Ｅ₁はＳerまたはＴhr；Ｆ₁はＳer、
Ｔhr、ＧlnまたはＡsn；Ｇ₁はＡsn、ＧlnまたはＨis；
Ｈ₁はＰhe、ＬeuまたはＴyr；Ｉ₁はＡlaまたはＰro；Ｊ
₁はＩle、Ｖal、ＡlaまたはＬeu；Ｋ₁はＡsn、Ａspまた
はＧln；ＸおよびＹは、独立して、相互に化学結合して
分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択され、
ここに、該分子内架橋には、ジスルフィド結合、ラクタ
ムまたはチオエーテル架橋が含まれ；および、Ｚはアミ
ノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキ
ルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アルキ
ルオキシ、アリールオキシまたはアラルキルオキシを意
味する；但し、Ａ₁がＬys、Ｂ₁がＡla、Ｃ₁がＶal、Ｄ₁
がＡrg、Ｅ₁がＳer、Ｆ₁がＳer、Ｇ₁がＡsn、Ｈ₁がＬe
u、Ｉ₁がＰro、Ｊ₁がＶalであって、Ｋ₁がＡsnである場
合には、Ａ₁〜Ｋ₁のうちいずれかの１またはそれ以上は
Ｄ−アミノ酸であって、Ｚはアルキルアミノ、ジアルキ
ルアミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、ア
ラルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシ、お
よびアラルキルオキシよりなる群から選択される］を有
するアミリンの作動薬アナログ、または、治療的投与用
の形態に混合した、治療学的に有効な量の該アミリンの
作動薬アナログと、インスリンもしくはグルカゴンとか
らなる組成物に指向される。

【００１７】本発明のなおさらなる別の態様は、配列表
の配列番号４で示されるアミノ酸配列：¹ Ａ₁-Ｘ-Ａsn-Ｔhr-⁵Ａla-Ｔhr-Ｙ-Ａla-Ｔhr-¹⁰Ｇln-
Ａrg-Ｌeu-Ｂ₁-Ａsn-¹⁵Ｐhe-Ｌeu-Ｃ₁-Ｄ₁-Ｅ₁-²⁰Ｆ₁-
Ｇ₁-Ａsn-Ｈ₁-Ｇly-²⁵Ｐro-Ｉ₁-Ｌeu-Ｐro-Ｐro-³⁰Ｔhr
-Ｊ₁-Ｖal-Ｇly-Ｓer-³⁵Ａsn-Ｔhr-Ｔyr-Ｚ ［式中、Ａ₁はＬys、Ａla、Ｓerまたは水素；Ｂ₁はＡl
a、ＳerまたはＴhr；Ｃ₁はＶal、ＬeuまたはＩle；Ｄ₁
はＨisまたはＡrg；Ｅ₁はＳerまたはＴhr；Ｆ₁はＳer、
Ｔhr、ＧlnまたはＡsn；Ｇ₁はＡsn、ＧlnまたはＨis；
Ｈ₁はＰhe、ＬeuまたはＴyr；Ｉ₁はＩle、Ｖal、Ａlaま
たはＬeu；Ｊ₁はＡsn、ＡspまたはＧln；ＸおよびＹ
は、独立して、相互に化学結合して分子内架橋を形成す
る側鎖を有する残基から選択され、ここに、該分子内架
橋には、ジスルフィド結合、ラクタムまたはチオエーテ
ル架橋が含まれ；およびＺはアミノ、アルキルアミノ、
ジアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アリールア
ミノ、アラルキルアミノ、アルキルオキシ、アリールオ
キシまたはアラルキルオキシを意味する；但し、Ａ_１が
Ｌｙｓ、Ｂ₁がＡla、Ｃ₁がＶal、Ｄ₁がＡrg、Ｅ₁がＳe
r、Ｆ₁がＳer、Ｇ₁がＡsn、Ｈ₁がＬeu、Ｉ₁がＶalであ
って、Ｊ₁がＡsnである場合には、Ａ₁〜Ｋ₁のうちいず
れかの１またはそれ以上はＤ−アミノ酸であって、Ｚは
アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキルア
ミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アルキルオ
キシ、アリールオキシ、およびアラルキルオキシよりな
る群から選択される］を有するアミリンの作動薬アナロ
グ、または、治療的投与用の形態に混合した、治療学的
に有効な量の該アミリンの作動薬アナログと、インスリ
ンもしくはグルカゴンとからなる組成物に指向される。
また、１またはそれを超える特定部位において個々のア
ミノ酸の立体化学が（Ｌ）／Ｓから（Ｄ）／Ｒに変換さ
れ得る前記図３（配列番号：１２)作動薬アナログの生
物学的活性誘導体も本発明範囲内のものである。

【００１８】また、Ａｓｎ、Ｓｅｒおよび／またはＴｈ
ｒ残基のグリコシル化により修飾した作動薬アナログも
本発明範囲内のものである。ペプチド特性をより少なく
含有するアミリンの生物学的活性作動薬アナログも本発
明の範囲内のものである。かかるペプチド模擬体は、例
えば、−ＣＯ−ＮＨ−アミド結合についての以下の１ま
たはそれを超える置換基：デプシペプチド（−ＣＯ−Ｏ
−）、イミノメチレン（−ＣＨ₂−ＮＨ−）、トランス
−アルケン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、β−エナミンニトリル
（−Ｃ（＝ＣＨ−ＣＮ）−ＮＨ−）、チオアミド（−Ｃ
Ｓ−ＮＨ−）、チオメチレン（−Ｓ−ＣＨ₂−または−
ＣＨ₂−Ｓ−）、メチレン（−ＣＨ₂−ＣＨ₂−）および
レトロ−アミド（−ＮＨ−ＣＯ−）を包含し得る。

【００１９】本発明の化合物は、種々の無機および有機
酸および塩基とで塩を形成する。かかる塩は有機および
無機の酸、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ₂ＳＯ₄、Ｈ₃Ｐ
Ｏ₄、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン
酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸および
ショウノウスルホン酸とで調製した塩を包含する。塩基
とで調製した塩は、例えば、アンモニウム塩、（ナトリ
ウムおよびカリウム塩のごとき）アルカリ金属塩、（カ
ルシウム塩およびマグネシウム塩のごとき）アルカリ土
類金属塩を包含する。酢酸塩、塩酸塩、およびトリフル
オロ酢酸塩が好ましい。該塩は常法、例えば、生成物の
遊離酸または塩基を、該塩が不溶な溶媒または媒質、あ
るいは次いで凍結乾燥によって真空中でまたは適当なイ
オン交換樹脂上のもう１つのイオンについての存在する
塩のイオンを交換することによって除去される水のごと
き溶媒中で、１またはそれを超える当量の適当な塩基ま
たは酸のと反応させることによって形成し得る。

【００２０】本発明の化合物は種々の立体異性体を包含
する。本発明の好ましい化合物において、ペプチド骨格
上のキラル中心はすべてＳである。本発明の化合物は、
当該分野で公知のある種の常法カップリング反応を用い
ることによって調製し得る。本発明のアナログは、順
次、所望のアミノ酸を成長するペプチド鎖に付加するこ
とによって調製される。典型的には、α−Ｎ−カルバモ
イル保護アミノ酸および樹脂支持体上の成長するペプチ
ド鎖に付加されたアミノ酸を、ジイソプロピルエチルア
ミンのごとき塩基の存在下、ジシクロヘキシルカルボジ
イミド １−ヒドロキシベンゾトリアゾールのごときカ
ップリング剤の存在において、Ｎ−メチルピロリドン、
ジメチルホルムアミドまたは塩化メチレンのごとき不活
性溶媒中、室温で反応させる。該α−Ｎ−カルバモイル
保護基は、トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき
薬剤で得られたペプチドから除去し、カップリング反応
を次の所望のＮ−保護アミノ酸とで繰り返す。適当なＮ
−保護基は当該分野で公知であり、ｔ−ブチルオキシカ
ルボナルが好ましい。

【００２１】合成のためのある好ましい方法が、通常に
譲渡された同時継続および通常に譲渡された特許出願第
６６７０４０号（「アミリンおよびアミリンアナログの
合成的調製（Synthetic Preparation of Amylin and Am
ylin Analogs」、１９９１年３月８日出願）に記載され
ている。これらの方法は、促進された生物学的活性を有
し、実質的に欠失および他の汚染ペプチドがないアミリ
ンまたはアミリンアナログよりなるペプチドの固相合成
を提供するものであり、該ペプチドは連続的合成サイク
ルを用いて合成され、かかる各サイクルでは、成長する
ペプチドのα−アミノ基と指定されたアミノ酸のα−カ
ルボキシルとの間にペプチド結合を形成することによっ
て、指定されたアミノ酸を不溶性樹脂支持体に連結した
成長するペプチドに付加し；各合成サクイルは（ａ）α
−アミノ基を除去するためのα−アミノ脱保護条件下で
成長するペプチドを処理し；（ｂ）α−アミノ保護され
た指定アミノ酸のα−カルボキシル基を活性化し；
（ｃ）カップリング条件下で成長するペプチド鎖と指定
アミノ酸を接触させて、ペプチド鎖についての遊離α−
アミノと指定アミノ酸の活性化されたα−カルボキシル
との間にペプチド結合を形成させ；（ｄ）工程（ｃ）の
カップリング効率が約９７％未満であると工程（ｂ）お
よび（ｃ）を反復することよりなる。カップリング効率
が約９９％未満であるときに工程（ｂ）および（ｃ）を
反復するのが好ましい。もう１つの好ましい態様におい
て、工程（ｂ）および（ｃ）を各合成サイクル中で反復
する。所望により、カップリング効率を各カップリング
工程後に測定する。

【００２２】適当なカップリング条件は、合成サイクル
間において、固体支持体の膨潤を最大とし、ペプチド鎖
の第２の構造要素を最小とし、かつペプチド内およびペ
プチド間の水素結合を最小とする溶媒系の使用を包含す
る。好ましくは、該合成サイクルはカップリング工程後
のキャッピング工程を包含し、そこでは、ペプチド鎖の
反応しなかったα−アミノ基を非反応性とする。適当な
保護α−アミノ酸を用いて合成サイクルを順次反復して
特定配列のアミリンまたはアミリンアナログを得る。順
次の合成サイクルの完了後、該アミリンまたはアミリン
アナログを固体支持体から切断する。ペプチド鎖のシス
テイン残基を選択的に脱保護し、ペプチド結合を固体支
持体から切断する前に分子内ジスルフィド結合を形成さ
せるのが好ましい。

【００２３】適当なα−アミノ保護基は−ブトキシカル
ボニルおよび９−フルオレニルメトキシカルボニルを包
含する。１つの好ましい態様において、ｔ−ブトキシカ
ルボナルをα−アミノ保護基として用いる場合、α−カ
ルボキシル基はジシクロヘキシルカルボジイミドおよび
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを用いて活性化し、
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルを形成させ
る。特に好ましい溶媒系はＮ−メチルピロリドンよりな
る。

【００２４】本発明の範囲内のある種の作動薬アナログ
の調製を実施例１ないし１７に記載する。加えて、前記
手法に従って調製され得る他の作動薬アナログを表IIに
記載する。本発明の化合物は組換えＤＮＡ技術を用い、
当該分野で今日知られている方法を用いて調製すること
もできる。例えば、サムブルック(Sambrook)ら、モレキ
ュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル
（Molecular Cloning:A Laboratory Manual)、第２版、
コールド・スプリンギ・ハーバー(Cold SpringHarbor)
（１９８９）参照。

【００２５】本発明の化合物の命名法を用いて、ヒト・
アミリンのごときいずれもの基本的ペプチドアミリン配
列およびそれになされた修飾に配列が基づく双方のペプ
チドを示すことができる。添数字が先行するアミノ酸
は、命名されたアミノ酸が基本的アミノ酸配列における
添字のアミノ酸部分に通常存在するアミノ酸を置き換え
ることを示す。例えば、「¹⁸Ａｒｇ^25,28Ｐｒｏ−ｈ−
アミリン」とは、以下の置換：残基１８におけるＨｉｓ
を置換するＡｒｇ、残基２５におけるＡｌａを置換する
Ｐｒｏおよび残基２８においてＳｅｒを置換するＰｒｏ
を有する「ｈ−アミリン」または「ヒト−アミリン」の
配列に基づいたペプチドをいう。「デス−¹Ｌｙｓ−ｈ
−アミリン」なる語は、第１の、またはＮ−末端アミノ
酸が欠失したヒト・アミリンの配列に基づいたペプチド
をいう。

【００２６】本発明のアミリンの作動薬アナログはその
薬理学的特性の観点より有用である。特に、本発明の化
合物は、各々、実施例１８および１９に記載されたレセ
プター結合アッセイおよびヒラメ筋アッセイにおける活
性から明らかなごとく、アミリン作動剤としての活性を
有する。また、化合物のアミリン作動薬活性は、哺乳動
物における高乳酸血症および／または高血糖症を誘導す
る能力によっても評価され得る。図３（配列番号：１
２）の化合物の記載に加えて、ある種の好ましい化合物
を表Iに記載する。好ましい化合物デス−¹Ｌｙｓ−ｈ−
アミリン、²⁸Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、^25,28,29Ｐｒｏ−
ｈ−アミリン、¹⁸Ａｒｇ^25,28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、
およびデス−¹Ｌｙｓ¹⁸Ａｒｇ^25,28−ｈ−アミリンはす
べて処理したテスト動物でin vivoのアミリン活性、誘
因する顕著な高乳酸血症、続いて高血糖症を示す。アミ
リンに特徴的な活性を有するに加え、本発明のある種の
好ましい化合物は、ヒト・アミリンと比較した場合、よ
り望ましい溶解度および安定性を有する。これらの好ま
しい化合物は²⁵Ｐｒｏ²⁶Ｖａｌ^28,29−ｈ−アミリン、
^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、および¹⁸Ａｒｇ^25,28
−ｈ−アミリンを包含する。

【００２７】特に好ましいものである本明細書に記載の
化合物は¹⁸Ａｒｇ^25,28−ｈ−アミリン、デス−¹Ｌｙｓ
¹⁸Ａｒｇ^25,28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、¹⁸Ａｒｇ
^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、デス−¹Ｌｙｓ¹⁸Ａｒ
ｇ^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ
−アミリン、デス−¹Ｌｙｓ−^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−ア
ミリン、および²⁵Ｐｒｏ²⁶Ｖａｌ^25,28Ｐｒｏ−ｈ−ア
ミリンを包含する。さらに好ましい作動薬ペプチド化合
物は表IIにリストする。それらは、²³Ｌｅｕ²⁵Ｐｒｏ²⁶
Ｖａｌ^28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；²⁵Ｌｅｕ²⁵Ｐｒｏ
²⁶Ｖａｌ²⁸Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；デス−¹Ｌｙｓ²³Ｌ
ｅｕ²⁵Ｐｒｏ²⁶Ｖａｌ²⁸Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；¹⁸Ａｒ
ｇ²³Ｌｅｕ²⁵Ｐｒｏ²⁶Ｖａｌ²⁸Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、
¹⁸Ａｒｇ²³Ｌｅｕ^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；¹⁸Ａ
ｒｇ²³Ｌｅｕ^25,28−Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；¹⁷Ｉｌｅ
²³Ｌｅｕ^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；¹⁷Ｉｌｅ
^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；デス−¹Ｌｙｓ¹⁷Ｉｌ
ｅ²³Ｌｅｕ^25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン；¹⁷Ｉｌｅ¹⁸
Ａｒｇ²³Ｌｅｕ−ｈ−アミリン；¹⁷Ｉｌｅ¹⁸Ａｒｇ²³Ｌ
ｅｕ²⁶Ｖａｌ²⁹Ｐｅｏ−ｈ−アミリン；¹⁷Ｉｌｅ¹⁸Ａｒ
ｇ²³Ｌｅｕ²⁵Ｐｒｏ²⁶Ｖａｌ^28,29Ｐｅｏ−ｈ−アミリ
ン；¹³Ｔｈｒ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ²⁶Ａｌａ²⁸Ｌｅｕ²⁹Ｐｒ
ｏ³¹Ａｓｐ−ｈ−アミリン；¹³Ｔｈｒ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ
²⁶Ａｌａ²⁹Ｐｒｏ³¹Ａｓｐ−ｈ−アミリン；デス−¹Ｌ
ｙｓ¹³Ｔｈｒ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ²⁶Ａｌａ²⁸Ｐｒｏ³¹Ａｓ
ｐ−ｈ−アミリン；¹³Ｔｈｒ¹⁸Ａｒｇ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ
²⁶Ａｌａ²⁹Ｐｒｏ³¹Ａｓｐ−ｈ−アミリン；¹³Ｔｈｒ¹⁸
Ａｒｇ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ²⁶Ａｌａ^28,29Ｐｒｏ³¹Ａｓｐ
−ｈ−アミリン；¹³Ｔｈｒ¹⁸Ａｒｇ²¹Ｈｉｓ²³Ｌｅｕ²⁵
Ｐｒｏ²⁶Ａｌａ^28,29Ｐｒｏ³¹Ａｓｐ−ｈ−アミリンを
包含する。

【００２８】本発明の化合物は医薬上許容される賦形剤
と組み合わせて、非経口投与に適した医薬形態を調製す
ることができる。化合物の実験的応答は、糖尿病および
他のインスリン−要求性状態の治療、ならびに低血糖症
の偶発の防止および治療におけるかかる医薬組成物の臨
床的適用を支持する。本発明の化合物は糖尿病および他
のインスリン−要求性状態の治療につきインスリンと組
み合わせることもできる。「インスリン」とは、血中グ
ルコースレベルの調節に有用なポリペプチドまたはその
同等物を意味する。かかるインスリンの一般的記載は、
グッドマンおよびギルマン（Goodman and Gillman)のザ
・ファルマコロジカル・ベイシス・オブ・セラピューテ
ィックス（The Pharmacological Basis of Therapeutic
s)、第８版、ペルガモン（Pergamon Press)（１９９
０）に提供されている。かかるインスリンは速効性、中
間作用性、または遅効性であり得る。インスリンの種々
の誘導体が存在し、本発明で有用である。例えば、米国
特許第５０４９５４７号、第５０２８５８７号、および
第５０１６６４３号参照。インスリンペプチドもまた有
用であり（例えば、米国特許第５００８２４１号参
照）、アナログも同様である（例えば、米国特許第４９
９２４１７号および４９９２４１８号参照）。かかる組
成物は、鼻孔内投与（例えば、米国特許第４９８８５１
２号および第４９８５２４２号、ならびに２バイオワー
ルド・トゥデイ（BioWorld Today)、１２５号（１９９
１）参照）を含めたいずれの標準的経路によっても投与
できる。また、本発明の化合物は低血糖症の防止および
治療用にグルカゴンと組み合わせても有用である。ヤン
グ（Young）ら、ここに参照して一体化させる、「血糖
上昇剤組成物（Hyperglycemic Compposition)なる発明
の名称の、１９９１年１月１０日付け出願の米国特許出
願第０７／６４０４７８号参照。

【００２９】本発明の組成物または生成物は、便宜に
は、（静脈内、筋肉内および皮下を含めた）非経口投与
または鼻孔内あるいは経口投与に適当した液剤の形態で
提供する。多くの場合、一緒に投与するための単一の組
成物または液剤中のアミリンの作動薬アナログおよびイ
ンスリンまたはグルカゴンにて提供するのが便宜であ
る。他の場合、該作動薬アナログとは別にしたインスリ
ンまたはグルカゴンを投与するのがより便宜である。適
当な投与フォーマットは、個々に、各患者の医療実施者
によって決定されるのが最良である。適当な医薬上許容
される賦形剤およびその処方は標準的な処方論文、例え
ば、イー・ダブリュー・マーチン（E.W.Martin)による
レミントンズ・ファルマシューティカル・サイエンシズ
（Remington'sPharmaceutical Sciences)に記載されて
いる。また、ワング，ワイ・ジェイおよびハンソン・エ
ム・エイ（Wang,Y.J. and Hanson,M.A.)、「蛋白および
ペプチドの非経口処方：安定性および安定剤（Parenter
al Formulations of Proteinsand Peptides:Stability
and Stabilizers)、ジャーナル・オブ・パレンテラル・
サイエンス・アンド・テクノロジー（Journal of Paren
teral Science and Technology)、テクニカル・レポー
ト（Technical Report)１０号、補選４２：２Ｓ（１９
８８）参照。インスリンまたはグルカゴンを包含する適
当な処方は当該分野で公知である。

【００３０】本発明の作動薬調製物は中性のｐＨで安定
化され得る。本発明の生成物は両親媒性であるので、遊
離塩基、酸付加塩または金属塩として利用され得る。勿
論、該塩は医薬上許容される塩でなければならず、これ
らは、金属塩、特にアルカリおよびアルカリ土類金属
塩、例えば、カリウムまたはナトリウム塩を包含する。
前記したごとく、広範囲の医薬上許容される酸付加塩が
利用可能である。これらは、有機および無機酸、好まし
くは鉱酸から調製したものである。例示し得る典型的な
酸はクエン酸、コハク酸、乳酸、塩酸および臭化水素酸
を包含する。かかる生成物は当該分野でよく知られた手
法によって容易に調製される。

【００３１】本発明の生成物は通常注射または注入用の
非経口組成物として提供される。それらは、例えば、不
活性油、適当には、ゴマ油、落花生油、またはオリーブ
油のごとき植物油に懸濁させる。別法として、それら
は、ｐＨ約５.６ないし７.４の水性等張緩衝液に懸濁さ
せることができる。有用な緩衝液はクエン酸ナトリウム
−クエン酸およびリン酸ナトリウム−リン酸を包含す
る。容器または「貯蔵器（depot)」遅延放出調製物は、
調製物の治療上有効量を、経皮注射に続き長い時間また
は日にわたって血流に送達させるように使用され得る。
所望の等張性は、塩化ナトリウムまたはデキストロー
ス、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコー
ル、（マンニトールおよびソルビトールのごとき）ポリ
オール、または他の無機もしくは有機溶質のごとき他の
試薬上許容される剤を用いる達成され得る。塩化ナトリ
ウムはナトリウムイオンを含有する緩衝液で特に好まし
い。所望ならば、前記組成物の溶液はメチルセルロース
のごとき濃厚剤で濃厚とすることもできる。それらは、
エマルジョン化形態、油中水、水中油の形態で調製でき
る。広範囲の医薬上許容される乳化剤のいずれも使用す
ることができ、例えば、アカシア粉末、（ツイーン（Tw
een)のごとき）非イオン性界面活性剤、または（アルカ
リポリエーテルアルコールサルフェートまたはスルホネ
ート、例えば、トリトン（Triton)のごとき）イオン性
界面活性剤を包含する。本発明の治療上有用な組成物
は、一般的に許容される手法により成分を混合すること
によって調製される。例えば、選択された成分をブレン
ダーまたは他の標準的な装置で単に混合し、濃縮された
混合物が得られ、次いで、水または濃厚剤およびある場
合はｐＨ調整用の緩衝液または等張性を制御するための
付加溶質の添加によって最終濃度および粘度を調整する
ことができる。

【００３２】医者による使用には、該組成物は、インス
リンまたはグルカゴンと共にあるいはそれ無しで、選択
されたレベルで血糖を制御しあるいは再確立する単一ま
たは複数投与量にて有効な作動薬化合物の量を含有する
投与単位にて提供される。低血糖症の治療のために記載
するアミリンの作動薬アナログの治療上有効量は、血糖
レベルを好ましくは８０ｍｇ／ｄｌを超えて増加させる
ものである。糖尿病および他のインスリン−要求性状態
の治療用のかかる作動薬アナログの治療上有効量はイン
スリン過剰用量または望まない低血糖症の減少確率に十
分なものである。当業者に認識されるように、治療剤の
有効量は、患者の年令および体重、患者の身体の状態、
得るべき血糖レベル、および他の因子を含めた多くの因
子で変動する。糖尿病の治療のための典型的な用量単位
は、アミリン作動薬化合物の約０.１ないし５ｍｇおよ
び、所望ならば、インスリンの約０.５ないし約１０ｍ
ｇを含有する。低血糖症の治療のための典型的な用量単
位は、アミリン作動薬化合物の約０.５ないし１.０ｍｇ
および、所望ならば、グルカゴンの当該分野で認識され
ている量またはそれ未満を含有する。前記したごとく、
本発明で有用な組成物は標準的な手法によって調製され
る。また、これらの組成物は、標準的な手法によって投
与される。適当な用量は当業者によって容易に決定さ
れ、その例は前記した通りである。

【００３３】本発明の理解のために、以下の実施例は一
連の実験の結果を記載するものを含む。本発明に関する
以下の実施例は、勿論、本発明を限定するものと理解さ
れるべきでない。今知られ、あるいは後に開発される、
当業者の意識内にある本発明のかかる変形も、後に特許
請求する本発明の範囲内にあるものと考えられる。

【００３４】

【実施例】実施例１²⁸ Ｐro-ヒト-アミリンの製造 このヒト（「ｈ-」）アミリンの類似体の固相合成を、
メチルベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂およびＮ
^a−Ｂoc／ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成
法に従って実施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保
護システインをタリウム（III）トリフルオロアセター
トと反応させることにより、²'⁷−[ジスルフィド]アミ
リン−ＭＢＨＡ−樹脂を得た。環化がなされた後、該樹
脂および側鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソール
の存在下、液体フッ化水素酸（「ＨＦ」）で切断した。
²⁸Ｐro-ｈ-アミリンを分取用ＨＰＬＣにより精製した。
該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動によっ
て均質であることが判明し、その構造をアミノ酸分析お
よび配列分析により確認した。その生成物は所望の質量
イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ＋１）
／ｅ＝３９１４。

【００３５】実施例２²⁵ Ｐro²⁶Ｖal²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造 このアミリン類似体の固相合成を、メチルベンズヒドリ
ルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖
保護を用い、標準ペプチド合成法に従って実施した。ト
リフルオロ酢酸中、タリウム（III）トリフルオロアセ
タートと反応させることにより、²'⁷−[ジスルフィド]
アミリン−ＭＢＨＡ−樹脂を得た。環化がなされた後、
該樹脂および側鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソ
ールの存在下、液体ＨＦを用いて切断した。²⁵Ｐro²⁶Ｖ
al²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンを分取用ＨＰＬＣにより精製
した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動
によって均質であることが判明し、その構造をアミノ酸
分析および配列分析により確認した。その生成物は所望
の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ
＋１）／ｅ＝３９３６。

【００３６】実施例３² '⁷シクロ-[²Ａsp,⁷Ｌys]-ｈ-アミリンの製造 このアミリン類似体の固相合成を、メチルベンズヒドリ
ルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖
保護を用い、標準ペプチド合成法に従って実施した。²
Ａspおよび⁷Ｌysを、Ｂoc-²Ａsp(Ｆmoc)-ＯＨおよびＢo
c-⁷Ｌys(Ｆmoc)-ＯＨを用いて導入した。ピペリジンで
選択的に側鎖を脱保護し、側鎖と側鎖（²Ａsp-⁷Ｌys）
の環化をベンゾトリアゾール-１イル-オキシ-トリス(ジ
メチルアミノ)-ホスホニウムヘキサフルオロホスファー
ト（ＢＯＰ試薬）を用いて行った。環化は、ジマイオ・
ジェイ（Di Maio,J.）ら、ジャーナル・オブ・メディシ
ナル・ケミストリー（J. Med.Chem.）３３：６６１−６
６７（１９９０）；フェリックス・エイ・エム（Felix,
A.M.）ら、イント・ジェイ・ペント・プロト・レス（In
t J.Pent.Prot.Res.）３２：４４１（１９８８）の記載
に従った。環化後に得られた²'⁷シクロ-[²Ａsp,⁷Ｌys]
アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を、硫化ジメチルおよびアニソ
ールの存在下、液体ＨＦで切断した。該²'⁷シクロ-(²Ａ
sp,⁷Ｌys)-ｈ-アミリンを分取用ＨＰＬＣで精製した。
該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動により
均質であることが判明し、その構造をアミノ酸分析およ
び配列分析により確認した。ＦＡＢ質量スペクトル：
（Ｍ＋１）／ｅ＝３９２５。

【００３７】実施例４ デス-¹Ｌys-ｈ-アミリンの製造 デス-¹Ｌys-ｈ-アミリン（また、^2-37ｈ-アミリンと称
される）の固相合成を、メチルベンズヒドリルアミンア
ンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖保護を用
い、標準ペプチド合成法により実施した。トリフルオロ
酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタリウム（III）ト
リフルオロアセタートと反応させることにより、²'⁷-
[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を得た。環化が
なされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫化ジメチルおよ
びアニソールの存在下、液体ＨＦを用いて切断した。デ
ス-¹Ｌys-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣにより精製
した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動
によって均質であることが判明し、その構造をアミノ酸
分析および配列分析により確認した。その生成物は所望
の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ
＋Ｈ）⁺＝３,７７５。

【００３８】実施例５¹ Ａla-ｈ-アミリンの製造¹ Ａla-ｈ-アミリンの固相合成を、メチルベンズヒドリ
ルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖
保護を用い、標準ペプチド合成法により実施した。トリ
フルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタリウム
（III）トリフルオロアセタートと反応させることによ
り、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を得
た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫化ジ
メチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦを用いて切
断した。¹Ａla-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣによ
り精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電
気泳動によって均質であることが判明し、その構造をア
ミノ酸分析および配列分析により確認した。その生成物
は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクト
ル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,８４７。

【００３９】実施例６¹ Ｓer-ｈ-アミリンの製造¹ Ｓer-ｈ-アミリンの固相合成を、メチルベンズヒドリ
ルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖
保護を用い、標準ペプチド合成法により実施した。トリ
フルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタリウム
（III）トリフルオロアセタートと反応させることによ
り、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を得
た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫化ジ
メチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦを用いて切
断した。¹Ｓer-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣによ
り精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電
気泳動によって均質であることが判明し、その構造をア
ミノ酸分析および配列分析により確認した。その生成物
は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクト
ル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,８６３。

【００４０】実施例７²⁹ Ｐro-ｈ-アミリンの製造 このヒトアミリン類似体の固相合成を、メチルベンズヒ
ドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル
側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法に従って実施し
た。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタ
リウム（III）トリフルオロアセタートと反応させるこ
とにより、²'⁷-(ジスルフィド)アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂
を得た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫
化ジメチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦを用い
て切断した。²⁹Ｐro-ｈ-アミリンを分取用ＨＰＬＣによ
り精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電
気泳動によって均質であることが判明し、その構造をア
ミノ酸分析および配列分析により確認した。その生成物
は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクト
ル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３９１６。

【００４１】実施例８²⁵ '²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの製造²⁵ '²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メチルベンズヒ
ドリルアミンアンカー結合樹脂とＮa−Ｂoc／ベンジル
側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法により実施した。
トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタリウ
ム（III）トリフルオロアセタートと反応させることに
より、²'⁷-(ジスルフィド)アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を得
た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫化ジ
メチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦで切断し
た。²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣによ
り精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電
気泳動によって均質であることが判明し、その構造をア
ミノ酸分析および配列分析により確認した。その生成物
は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクト
ル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,９３９。

【００４２】実施例９ デス-¹Ｌys²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの製造 デス-¹Ｌys²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メチ
ルベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc
／ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法に従っ
て実施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システ
インをタリウム（III）トリフルオロアセタートと反応
させることにより、²'⁷-(ジスルフィド)アミリン-ＭＢ
ＨＡ-樹脂を得た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保
護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、液体
ＨＦを用いて切断した。デス-¹Ｌys²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミ
リンを分取用ＨＰＬＣにより精製した。該ペプチドは分
析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動によって均質であるこ
とが判明し、その構造をアミノ酸分析および配列分析に
より確認した。その生成物は所望の質量イオンを付与し
た。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,８１１。

【００４３】実施例１０¹⁸ Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの製造¹⁸ Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メチルベ
ンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベ
ンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法により実施
した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインを
タリウム（III）トリフルオロアセタートと反応させる
ことにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹
脂を得た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、
硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦで切
断した。¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンを分取用逆相Ｈ
ＰＬＣにより精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣお
よび界面電気泳動によって均質であることが判明し、そ
の構造をアミノ酸分析および配列分析により確認した。
その生成物は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量
スペクトル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,９５９。

【００４４】実施例１１ デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの製造 デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成
を、メチルベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ
^a−Ｂoc／ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成
法により実施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護
システインをタリウム（III）トリフルオロアセタート
と反応させることにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン
-ＭＢＨＡ-樹脂を得た。環化がなされた後、該樹脂と側
鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、
液体ＨＦを用いて切断した。デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐr
o-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣにより精製した。
該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動によっ
て均質であることが判明し、その構造をアミノ酸分析お
よび配列分析により確認した。その生成物は所望の質量
イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ＋Ｈ）
⁺＝３,８３２。

【００４５】実施例１２¹⁸ Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造¹⁸ Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メチル
ベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／
ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法により実
施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システイン
をタリウム（III）トリフルオロアセタートと反応させ
ることにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-
樹脂を得た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基
を、硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦ
で切断した。¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンを分取用
逆相ＨＰＬＣにより精製した。該ペプチドは分析用ＨＰ
ＬＣおよび界面電気泳動によって均質であることが判明
し、その構造をアミノ酸分析および配列分析により確認
した。その生成物は所望の質量イオンを付与した。ＦＡ
Ｂ質量スペクトル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,９７１。

【００４６】実施例１３ デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造 デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成
を、メチルベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ
^a−Ｂoc／ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成
法により実施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護
システインをタリウム（III）トリフルオロアセタート
と反応させることにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン
-ＭＢＨＡ-樹脂を得た。環化がなされた後、該樹脂と側
鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、
液体ＨＦを用いて切断した。デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹
Ｐro-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣにより精製し
た。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動に
よって均質であることが判明し、その構造をアミノ酸分
析および配列分析により確認した。その生成物は所望の
質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ＋
Ｈ）⁺＝３,８４３。

【００４７】実施例１４²⁵ '²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造²⁵ '²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メチルベンズ
ヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジ
ル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法により実施し
た。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護システインをタ
リウム（III）トリフルオロアセタートと反応させるこ
とにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂
を得た。環化がなされた後、該樹脂と側鎖保護基を、硫
化ジメチルおよびアニソールの存在下、液体ＨＦで切断
した。²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣ
により精製した。該ペプチドは分析用ＨＰＬＣおよび界
面電気泳動によって均質であることが判明し、その構造
をアミノ酸分析および配列分析により確認した。その生
成物は所望の質量イオンを付与した。ＦＡＢ質量スペク
トル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝３,９４９。

【００４８】実施例１５ デス-¹Ｌys²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造 デス-¹Ｌys²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの固相合成を、メ
チルベンズヒドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂo
c／ベンジル側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法に従
って実施した。トリフルオロ酢酸中、Ａｃｍ−保護シス
テインをタリウム（III）トリフルオロアセタートと反
応させることにより、²'⁷-[ジスルフィド]アミリン-Ｍ
ＢＨＡ-樹脂を得た。環化が得られた後、該樹脂と側鎖
保護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの存在下、液
体ＨＦを用いて切断した。デス−¹Ｌys²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ
-アミリンを分取用逆相ＨＰＬＣにより精製した。該ペ
プチドは分析用ＨＰＬＣおよび界面電気泳動によって均
質であることが判明し、その構造をアミノ酸分析および
配列分析により確認した。その生成物は所望の質量イオ
ンを付与した。ＦＡＢ質量スペクトル：（Ｍ＋Ｈ）⁺＝
３,８２３。

【００４９】実施例１６ デス-¹Ｌys²⁵Ｐro²⁶Ｖal²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンの製造 このｈ−アミリン類似体の固相合成を、メチルベンズヒ
ドリルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル
側鎖保護を用い、標準ペプチド合成法により実施し、ト
リフルオロ酢酸中、タリウム（III）トリフルオロアセ
タートと反応させることにより、²'⁷-[ジスルフィド]ア
ミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を得る。環化が得られた後、該樹
脂と側鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの存
在下、液体ＨＦを用いて切断する。ついで、デス-¹Ｌys
²⁵Ｐro²⁶Ｖal²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンを分取用ＨＰＬＣ
により精製する。

【００５０】実施例１７ ［(Ｄ)-¹¹Ａrg]-アミリンの製造 このアミリン類似体の固相合成を、メチルベンズヒドリ
ルアミンアンカー結合樹脂とＮ^a−Ｂoc／ベンジル側鎖
保護を用い、標準ペプチド合成法により実施する。
（Ｄ)-¹¹ＡrgをＢoc-(Ｄ)-¹¹Ａrg(Ｍtr)-ＯＨを用いて
導入する。トリフルオロ酢酸中、タリウム（III）トリ
フルオロアセタートと反応させることにより得られた²'
⁷-[ジスルフィド]アミリン-ＭＢＨＡ-樹脂を環化し、該
樹脂と側鎖保護基を、硫化ジメチルおよびアニソールの
存在下、液体ＨＦで切断する。ついで、［(Ｄ)-¹¹Ａrg]
-アミリンを分取用ＨＰＬＣにより精製する。

【００５１】実施例１８ 受容体結合検定 本発明の化合物のアミリン受容体に対する結合評価を以
下のように行った。¹²⁵Ｉ−ラットのアミリン（Ｎ−末
端のリジンで標識化したボルトン−ハンター（Bolton-H
unter))をアメルシャム・コーポレーション（Amersham
Corporation）（アーリントン・ハイツ，イリノイ州（A
rlington Heights，ＩＬ））より購入した。使用時間で
の比活性度は１９５０〜２０００Ｃi／ｍｍｏｌであっ
た。未標識化ペプチドをバチャム・インコーポレイテッ
ド（BACHEM Inc.)（トランス、カリフォルニア州（Torr
ance，CA））およびペニンスラ・ラボラトリース（Peni
nsula Laboratories）（ベルモント、カリフォルニア
州）から入手した。雄のスプラギュー−ダウレイ・ラッ
ト（２００−２５０ｇ）を断頭により殺した。脳を冷却
したリン酸塩−緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に摘出した。腹
部面より、切断部を視床下部までくちばし状にし、嗅索
により側部方向に結合させ、これらの嗅索から中央方向
に４５°の角度で伸張させた。その側座核および周辺領
域を含むこの基底前脳組織を秤量し、氷冷した２０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ酸、ｐＨを
２３℃でＮａＯＨで７．４に調整）中で均質化した。新
たな緩衝液中にて３回、４８，０００×ｇで１５分間遠
心分離に付すことにより膜を洗浄した。最終の膜ペレッ
トを０．２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド
（ＰＭＳＦ）含有の２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液に再度
懸濁させた。

【００５２】¹²⁵Ｉ-アミリン結合を測定するのに、４ｍ
ｇの原型湿式重量の組織からの膜を、バシトラシン０.
５ｍｇ／ｍｌ、ウシ血清アルブミン０.５ｍｇ／ｍｌお
よび０.２ｍＭのＰＭＳＦを含有する２０ｍＭのＨＥＰ
ＥＳ緩衝液中、１２−１６ｐＭで¹²⁵Ｉ-アミリンと一緒
にインキュベートした。溶液を２３℃で６０分間インキ
ュベートした。ラジオ標識化したペプチドの非特異的結
合を減少させるために、０．３％ポリエチレンイミン中
に４時間予め浸漬したＧＦ／Ｂガラス繊維フィルターを
通して濾過し、インキュベートを終えた。濾過の直前に
冷ＰＢＳ５ｍｌを用い、濾過の直後に冷ＰＢＳ１５ｍｌ
を用いてフィルターを洗浄した。フィルターを取り外
し、γ−カウンターにて７７％の計数効率で放射能を評
定した。１０^-12〜１０^-6Ｍの未標識化試験化合物の存
在下での結合を測定することにより競合曲線を作成し、
４−パラメーターのロジスティック方程式(インプロッ
トプログラム；グラフパッド・ソフトウエア，サンディ
エゴ（Inplot program；GraphＰＡＤ Software,San Die
go）を用いる非線状回帰線により解析した。この検定に
おいて、精製したヒトアミリンは約５０ｐＭのＩＣ₅₀測
定値でその受容体に結合する。本発明の試験化合物につ
いての結果を表Ｉに示す。その結果は、該化合物が、各
々、有意な受容体結合活性を有することを示す。

【００５３】実施例１９ ヒラメ筋アッセイ 本発明の化合物のアミリン作動剤活性の評価を以下のヒ
ラメ筋アッセイを用いて行った。ヒラメ筋の質量を４０
ｍｇ以下に維持するのに、約２００ｇの雄のハーラン・
スプラギュー−ダウレイ（Harlan Sprague-Dawley）ラ
ットを用いた。断頭により殺す前の４時間、動物を絶食
させた。下部の脚より皮膚を除去し、ついでそれをコル
ク板にピンで留めた。アキレス腱を前記のように切断
し、踵骨および腓腹筋（os calcisおよびm. gastrocnemi
us）を脛骨の後部面よりリフレクトさせた。ついで、腓
腹筋の骨面にある、ヒラメ筋、１５−２０mm長、０.５m
m厚のフラットな筋をきれいに剥がし、細いはさみおよ
び鉗子を用いて筋周膜を除去した。ついで、ヒラメ筋を
ブレードを用い、該筋のベリーを介して前−後方向に突
き通して均等に分配し、各動物より合計４つの筋ストリ
ップを得た。動物から筋を切開した後、短期間、生理食
塩水中に保持した。この筋はラジオグルコースをグリコ
ーゲン中に取り込むことについて明白な効果を有しない
ため、該筋を張力下に保持する必要はなかった。

【００５４】以下に詳説するように、１リットル当た
り、ＮaＣl １１８.５ミリモル（６．９３ｇ）、ＫＣl
５.９４ミリモル（４４３ｍｇ）、ＣaＣl₂ ２.５４ミリ
モル（２８２ｍｇ）、ＭgＳＯ₄ １.１９ミリモル（１４
３ｍｇ）、ＫＨ₂ＰＯ₄ １.１９ミリモル（１６２ｍ
ｇ）、ＮaＨＣＯ₃ ２５ミリモル（２.１ｇ）、５.５ミ
リモルのグルコース（１ｇ）および組換えヒトインスリ
ン（Humulin-R，Eli Lilly，ＩＮ）および試験化合物を
含有する予めガス処理したクレーブス−リンガー（Kreb
s−Ringer）炭酸水素塩緩衝液１０ｍｌを含む５０ｍｌ
のエルレンマイヤー（Erlenmeyer）フラスコに筋を加え
た。３７℃でのpＨが７.１と７.４の間にあることを確
認した。各動物からの４つの筋片が種々のアッセイ条件
間で均一に分配されるように、筋を異なるフラスコに割
り当てた。振動型水浴中、３７℃で連続的に撹拌しなが
ら、カーボゲン（９５％Ｏ₂、５％ＣＯ₂）をその面全体
に穏やかにブローすることによりインキュベート培地を
ガス処理した。「プレインキュベーション」を半時間行
った後、０.５μＣiのＵ-¹⁴Ｃ-グルコースを各フラスコ
に加え、それをさらに６０分間インキュベートした。つ
いで、各筋片を速やかに取り出し、ブロットし、液体Ｎ
₂中で凍結させ、秤量し、その後の¹⁴Ｃ-グリコーゲンの
測定用に貯蔵した。

【００５５】¹⁴Ｃ-グリコーゲン測定は７ｍｌのシンチ
レーションバイアル中で行った。凍結した各筋試験片を
バイアルに入れ、連続撹拌下、７０℃で４５分間、６０
％水酸化カリウム１ｍｌにて消化した。３ｍｌの無水エ
タノールを添加し、−２０℃で一夜冷却することにより
溶解したグリコーゲンをバイアル中に沈殿させた。上澄
液をアスピレートし、その沈殿物を真空下で乾燥させ
た。エタノールをすべて蒸発させ、シンチレーション計
数の間のクエンチを回避した。残りのグリコーゲンを水
１ｍｌおよびシンチレーション液４ｍｌ中に再度溶か
し、¹⁴Ｃを計数した。グルコースのグリコーゲンへの取
り込み速度（μｍｏｌ／ｇ／時間で表す）を、５.５ｍ
Ｍのインキュベート培地における¹⁴Ｃ−グルコースの特
異活性、および各筋から抽出したグリコーゲン中に残っ
ている合計の¹⁴Ｃ数より得た。用量／応答曲線を、最小
二乗式繰り返しルーチンを用いる４パラメーター・ロジ
スティック・モデル（ALLFIT,v2.7,NIH,MD）に適合させ
てＥＣ₅₀を得た。ＥＣ₅₀は対数が正規的に分布している
ため、それは対数の±標準誤差で表される。ＳＹＳＴＡ
Ｔ（ウィルキンソン（Wilkinson）、“ＳＹＳＴＡＴ：
統計のためのシステム”，シスタット・インコーポレイ
テッド（SYSTAT Inc.），Evanston IL（１９８９))のル
ーチンに基づくｔ−試験を用いてペアーワイス（pairwi
se）比較を行った。

【００５６】用量−応答曲線を、７.１ｎＭ（１０００
μＵ／ｍｌ）インスリンおよび０、１、３、１０、３
０、１００、３００および１０００ｎＭの最終濃度で添
加された各試験化合物を含有する培地に加えた筋で作成
した。各アッセイはまた、単一バッチのラットアミリン
からなる内部陽性対照を含み、凍結乾燥して−７０℃で
貯蔵した。ヒトアミリンは公知の血糖上昇ペプチドであ
り、ヒラメ筋アッセイにおけるアミリン調製物のＥＣ₅₀
測定値は、純度が９０％以下の市販の調製物では不純物
が存在するため高いＥＣ₅₀を有し、その結果として低い
測定活性を示すが、典型的には、約１〜１０ｎＭの範囲
にある。試験化合物の結果を表Ｉに示す。その結果は各
化合物がアミリン活性を有することを示している。

【００５７】

【表１】

【００５８】

【表２】

【００５９】

【発明の効果】インスリン誘導低血糖症を含めた、糖尿
病および低血糖症の治療の目的やその他の目的で、天然
ヒト・アミリンの活性を有するより複雑でない化合物、
ならびに天然ヒト・アミリンよりも促進された溶解度お
よび／または安定性を示す化合物を提供し得る。

【００６０】

【配列表】

<110> AMYLIN Pharmaceutials Incorporated <120> Novel Amylin Agonist Peptide and Uses Theref
or <130> 162841 <150> US 07/667,040 <151> 1991-03-08 <150> US 07/794,266 <151> 1991-11-19 <160> 12

【００６１】<210> 1 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> UNSURE <222> 1 <223> Lys, Ala, Ser or hydrogen <220> <221> UNSURE <222> 13 <223> Ala, Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 17 <223> Val, Leu or Ile <220> <221> UNSURE <222> 18 <223> His or Arg <220> <221> <222> 19 <223> Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 20 <223> Ser, Thr, Gln or Asn <220> <221> UNSURE <222> 21 <223> Asn, Gln or His <220> <221> <222> 23 <223> Phe, Leu or Tyr <220> <221> UNSURE <222> 26 <223> Ile, Val, Ala or Leu <220> <221> UNSURE <222> 29 <223> Ser, Pro or Thr <220> <221> UNSURE <222> 31 <223> Asn, Asp or Gln <220> <221> UNSURE <222> 38 <223> amino, alkylamino, dialkylamino, cycloalkyla
mino, arylamino,aralkylamino, alkyloxy, aryloxy or
aralkyloxy <220> <221> UNSURE <223> Xaa at positions 2 and Xaa at position 7 are
independentlyselected residues having side chains
which are chemically bondedto each other to form
an intramolecular linkage comprising adisulfide bo
nd, a lactam or a thioether linkage. <400> 1 Xaa Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Ala Thr Gln Arg Leu Xaa Asn Phe Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Gly Pro Xaa Leu Pro Xaa Thr Xaa Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Xaa 35

【００６２】<210> 2 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> UNSURE <222> 1 <223> Lys, Ala, Ser or hydrogen <220> <221> UNSURE <222> 13 <223> Ala, Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 17 <223> Val, Leu or Ile <220> <221> UNSURE <222> 18 <223> His or Arg <220> <221> UNSURE <222> 19 <223> Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 20 <223> Ser, Thr, Gln or Asn <220> <221> UNSURE <222> 21 <223> Asn, Gln or His <220> <221> UNSURE <222> 23 <223> Phe, Leu or Tyr <220> <221> UNSURE <222> 26 <223> Ile, Val, Ala or Leu <220> <221> UNSURE <222> 28 <223> Ser, Pro, Leu, Ile or Thr <220> <221> UNSURE <222> 31 <223> Asn, Asp or Gln <220> <221> UNSURE <222> 38 <223> amino, alkylamino, dialkylamino, cycloalkyla
mino, arylamino,aralkylamino, alkyloxy, aryloxy or
aralkyloxy <220> <221> UNSURE <223> Xaa at positions 2 and Xaa at position 7 are
independentlyselected residues having side chains
which are chemically bondedto each other to form
an intramolecular linkage comprising adisulfide bo
nd, a lactam or a thioether linkage. <400> 2 Xaa Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Ala Thr Gln Arg Leu Xaa Asn Phe Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Gly Pro Xaa Leu Xaa Pro Thr Xaa Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Xaa 35

【００６３】<210> 3 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> UNSURE <222> 1 <223> Lys, Ala, Ser or hydrogen <220> <221> UNSURE <222> 13 <223> Ala, Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 17 <223> Val, Leu or Ile <220> <221> UNSURE <222> 18 <223> His or Arg <220> <221> UNSURE <222> 19 <223> Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 20 <223> Ser, Thr, Gln or Asn <220> <221> UNSURE <222> 21 <223> Asn, Gln or His <220> <221> UNSURE <222> 23 <223> Phe, Leu or Tyr <220> <221> UNSURE <222> 25 <223> Ala or Pro <220> <221> UNSURE <222> 26 <223> Ile, Val, Ala or Leu <220> <221> UNSURE <222> 31 <223> Asn, Asp or Gln <220> <221> UNSURE <222> 38 <223> amino, alkylamino, dialkylamino, cycloalkyla
mino, arylamino,aralkylamino, alkyloxy, aryloxy or
aralkyloxy <220> <221> UNSURE <223> Xaa at positions 2 and Xaa at position 7 are
independentlyselected residues having side chains
which are chemically bondedto each other to form
an intramolecular linkage comprising adisulfide bo
nd, a lactam or a thioether linkage. <400> 3 Xaa Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Ala Thr Gln Arg Leu Xaa Asn Phe Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Gly Xaa Xaa Leu Pro Pro Thr Xaa Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Xaa 35

【００６４】<210> 4 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> UNSURE <222> 1 <223> Lys, Ala, Ser or hydrogen <220> <221> UNSURE <222> 13 <223> Ala, Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 17 <223> Val, Leu or Ile <220> <221> <222> 18 <223> His or Arg <220> <221> UNSURE <222> 19 <223> Ser or Thr <220> <221> UNSURE <222> 20 <223> Ser, Thr, Gln or Asn <220> <221> UNSURE <222> 21 <223> Asn, Gln or His <220> <221> UNSURE <222> 23 <223> Phe, Leu or Tyr <220> <221> UNSURE <222> 26 <223> Ile, Val, Ala or Leu <220> <221> UNSURE <222> 31 <223> Asn, Asp or Gln <220> <221> UNSURE <222> 38 <223> amino, alkylamino, dialkylamino, cycloalkyla
mino, arylamino,aralkylamino, alkyloxy, aryloxy or
aralkyloxy <220> <221> UNSURE <223> Xaa at positions 2 and Xaa at position 7 are
independentlyselected residues having side chains
which are chemically bondedto each other to form
an intramolecular linkage comprising adisulfide bo
nd, a lactam or a thioether linkage. <400> 4 Xaa Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Ala Thr Gln Arg Leu Xaa Asn Phe Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Gly Pro Xaa Leu Pro Pro Thr Xaa Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Xaa 35

【００６５】<210> 5 <211> 38 <212> PRT <213> human <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 5 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００６６】<210> 6 <211> 38 <212> PRT <213> cat <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 6 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００６７】<210> 7 <211> 38 <212> PRT <213> dog <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 7 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Thr Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００６８】<210> 8 <211> 38 <212> PRT <213> rat <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 8 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００６９】<210> 9 <211> 38 <212> PRT <213> mouse <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 9 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００７０】<210> 10 <211> 38 <212> PRT <213> hamster <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 10 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Asn Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Ser Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００７１】<210> 11 <211> 38 <212> PRT <213> guinea pig <220> <221> DISULFID <222> (2)...(7) <400> 11 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr NH₂ 35

【００７２】<210> 12 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> UNSURE <222> <223> <400> 12 Xaa Xaa Asn Thr Ala Thr Xaa Ala Thr Gln Arg Leu Xaa Asn Phe Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Gly Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Thr Xaa Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr Xaa 35

【００７３】配列表フリーテキスト 配列番号１ １位 <223> Lys, Ala, Serまたは水素 １３位 <223> Ala, SerまたはThr １７位 <223> Val, LeuまたはIle １８位 <223> HisまたはArg １９位 <223> SerまたはThr ２０位 <223> Ser, Thr, GlnまたはAsn ２１位 <223> Asn, GlnまたはHis ２３位 <223> Phe, LeuまたはTyr ２６位 <223> Ile, Val, AlaまたはLeu ２９位 <223> Ser, ProまたはThr ３１位 <223> Asn, AspまたはGln ３８位 <223> アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルア
ミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラル
キルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたはア
ラルキルオキシ <223> ２位および７位は、独立して、相互に化学結合し
て分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択さ
れ、ここに該分子内架橋には、ジスルフィド結合、ラク
タムまたはチオエーテル架橋が含まれる。

【００７４】配列番号２ １位 <223> Lys, Ala, Serまたは水素 １３位 <223> Ala, SerまたはThr １７位 <223> Val, LeuまたはIle １８位 <223> HisまたはArg １９位 <223> SerまたはThr ２０位 <223> Ser, Thr, GlnまたはAsn ２１位 <223> Asn, GlnまたはHis ２３位 <223> Phe, LeuまたはTyr ２６位 <223> Ile, Val, AlaまたはLeu ２８位 <223> Ser, Pro, Leu, IleまたはThr ３１位 <223> Asn, AspまたはGln ３８位 <223> アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルア
ミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラル
キルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたはア
ラルキルオキシ <223> ２位および７位は、独立して、相互に化学結合し
て分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択さ
れ、ここに該分子内架橋には、ジスルフィド結合、ラク
タムまたはチオエーテル架橋が含まれる。

【００７５】配列番号３ １位 <223> Lys, Ala, Serまたは水素 １３位 <223> Ala, SerまたはThr １７位 <223> Val, LeuまたはIle １８位 <223> HisまたはArg １９位 <223> SerまたはThr ２０位 <223> Ser, Thr, GlnまたはAsn ２１位 <223> Asn, GlnまたはHis ２３位 <223> Phe, LeuまたはTyr ２５位 <223> AlaまたはPro ２６位 <223> Ile, Val, AlaまたはＬｅｕ ３１位 ＜２２３＞ Ａｓｎ， ＡｓｐまたはGln ３８位 <223> アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルア
ミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラル
キルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたはア
ラルキルオキシ <223> ２位および７位は、独立して、相互に化学結合し
て分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択さ
れ、ここに該分子内架橋には、ジスルフィド結合、ラク
タムまたはチオエーテル架橋が含まれる。

【００７６】配列番号４ １位 <223> Lys, Ala, Serまたは水素 １３位 <223> Ala, SerまたはThr １７位 <223> Val, LeuまたはIle １８位 <223> HisまたはArg １９位 <223> SerまたはThr ２０位 <223> Ser, Thr, GlnまたはAsn ２１位 <223> Asn, GlnまたはHis ２３位 <223> Phe, LeuまたはTyr ２６位 <223> Ile, Val, AlaまたはLeu ３１位 <223> Asn, AspまたはGln ３８位 <223> アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルア
ミノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラル
キルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシまたはア
ラルキルオキシ <223> ２位および７位は、独立して、相互に化学結合し
て分子内架橋を形成する側鎖を有する残基から選択さ
れ、ここに該分子内架橋には、ジスルフィド結合、ラク
タムまたはチオエーテル架橋が含まれる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１はヒト・アミリンのアミノ酸配列（配列
番号：５）を示す。

【図２】 図２はいくつかの哺乳動物から単離したアミ
リンのアミノ酸配列を比較したものを示す（配列番号：
５−１１）。

【図３】 図３は新規アミリン作動薬ペプチドのアミノ
酸配列（配列番号：１２）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハワード・ジョーンズ アメリカ合衆国カリフォルニア州92064、 ポーウェイ、セント・ジェームズ・ドライ ブ16870番 (72)発明者 エリザベス・アルブレヒト アメリカ合衆国カリフォルニア州92126、 サンディエゴ、バニスター・ウェイ10540 番

Claims (41)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１で示されるアミノ酸
   配列：［但し、１位がＬys、１３位がＡla、１７位がＶ
   al、１８位がＡrg、１９位がＳer、２０位がＳer、２１
   位がＡsn、２３位がＬeu、２６位がＶal、２９位がＰro
   であって、３１位がＡsnである場合には、上記アミノ酸
   残基のうちいずれかの１またはそれ以上はＤ−アミノ酸
   であって、３８位はアルキルアミノ、ジアルキルアミ
   ノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキ
   ルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシ、およびア
   ラルキルオキシよりなる群から選択される］を有するア
   ミリンの作動薬アナログ。
2. 【請求項２】 ２位および７位が、ジスルフィド結合に
   より架橋したＣys残基からなる請求項１記載のアミリン
   の作動薬アナログ。
3. 【請求項３】 ３８位がアミノである請求項２記載のア
   ミリンの作動薬アナログ。
4. 【請求項４】 配列表の配列番号２で示されるアミノ酸
   配列：［但し、 (ａ)１位がＬys、１３位がＡla、１７位がＶal、１８位
   がＡrg、１９位がＳer、２０位がＳer、２１位がＡsn、
   ２３位がＬeu、２６位がＶal、２８位がＰroであって、
   ３１位がＡsnである場合；または(ｂ)１位がＬys、１３
   位がＡla、１７位がＶal、１８位がＨis、１９位がＳe
   r、２０位がＡsn、２１位がＡsn、２３位がＬeu、２６
   位がＶal、２８位がＳerであって、３１位がＡsnである
   場合には、上記アミノ酸残基のうちいずれかの１または
   それ以上はＤ−アミノ酸であって、３８位はアルキルア
   ミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アリ
   ールアミノ、アラルキルアミノ、アルキルオキシ、アリ
   ールオキシ、およびアラルキルオキシよりなる群から選
   択される］を有するアミリンの作動薬アナログ。
5. 【請求項５】 ２位および７位が、ジスルフィド結合に
   より架橋したＣys残基よりなる請求項４記載のアミリン
   の作動薬アナログ。
6. 【請求項６】 ３８位がアミノである請求項５記載のア
   ミリンの作動薬アナログ。
7. 【請求項７】 配列表の配列番号３で示されるアミノ酸
   配列：［但し、１位がＬys、１３位がＡla、１７位がＶ
   al、１８位がＡrg、１９位がＳer、２０位がＳer、２１
   位がＡsn、２３位がＬeu、２５位がＰro、２６位がＶal
   であって、３１位がＡsnである場合には、上記アミノ酸
   残基のうちいずれかの１またはそれ以上はＤ−アミノ酸
   であって、３８位はアルキルアミノ、ジアルキルアミ
   ノ、シクロアルキルアミノ、アリールアミノ、アラルキ
   ルアミノ、アルキルオキシ、アリールオキシ、およびア
   ラルキルオキシよりなる群から選択される］を有するア
   ミリンの作動薬アナログ。
8. 【請求項８】 ２位および７位が、ジスルフィド結合に
   より架橋したＣys残基からなる請求項７記載のアミリン
   の作動薬アナログ。
9. 【請求項９】 ３８位がアミノである請求項８記載のア
   ミリンの作動薬アナログ。
10. 【請求項１０】 配列表の配列番号４で示されるアミノ
    酸配列：［但し、１位がＬys、１３位がＡla、１７位が
    Ｖal、１８位がＡrg、１９位がＳer、２０位がＳer、２
    １位がＡsn、２３位がＬeu、２６位がＶalであって、３
    １位がＡsnである場合には、上記アミノ酸残基のうちい
    ずれかの１またはそれ以上はＤ−アミノ酸であって、３
    ８位はアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアル
    キルアミノ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アル
    キルオキシ、アリールオキシ、およびアラルキルオキシ
    よりなる群から選択される］を有するアミリンの作動薬
    アナログ。
11. 【請求項１１】 ２位および７位が、ジスルフィド結合
    により架橋したＣys残基からなる請求項１０記載のアミ
    リンの作動薬アナログ。
12. 【請求項１２】 ３８位がアミノである請求項１１記載
    のアミリンの作動薬アナログ。
13. 【請求項１３】 １８位がＡrgである請求項１〜１２い
    ずれか１項記載のアミリンの作動薬アナログ。
14. 【請求項１４】 ２６位がＶalである請求項１〜６また
    は１０〜１２いずれか１項記載のアミリンの作動薬アナ
    ログ。
15. 【請求項１５】 ２６位がＶalである請求項７〜９いず
    れか１項記載のアミリンの作動薬アナログ。
16. 【請求項１６】 １位が水素である請求項１〜１２いず
    れか１項記載のアミリンの作動薬アナログ。
17. 【請求項１７】 ¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリン。
18. 【請求項１８】 デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミ
    リン。
19. 【請求項１９】 ^25,28,29Ｐro-ｈ-アミリン。
20. 【請求項２０】 デス-¹Ｌys²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリ
    ン。
21. 【請求項２１】 ¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリン。
22. 【請求項２２】 デス-¹Ｌys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-ア
    ミリン。
23. 【請求項２３】 ²⁵Ｐro²⁶Ｖal²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリ
    ン。
24. 【請求項２４】 酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、または
    塩酸塩である請求項１〜１６いずれか１項記載のアミリ
    ンの作動薬アナログ。
25. 【請求項２５】 酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、または
    塩酸塩である請求項１７〜２３いずれか１項記載のアミ
    リンの作動薬アナログ。
26. 【請求項２６】 治療学的に有効な量の請求項３に記載
    のアミリンの作動薬アナログを配合した組成物。
27. 【請求項２７】 治療学的に有効な量の請求項６に記載
    のアミリンの作動薬アナログを配合した組成物。
28. 【請求項２８】 治療学的に有効な量の請求項９に記載
    のアミリンの作動薬アナログを配合した組成物。
29. 【請求項２９】 治療学的に有効な量の請求項１２に記
    載のアミリンの作動薬アナログを配合した組成物。
30. 【請求項３０】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項３に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、インスリンとからなる組成物。
31. 【請求項３１】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項６に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、インスリンとからなる組成物。
32. 【請求項３２】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項９に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、インスリンとからなる組成物。
33. 【請求項３３】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項１２に記載のアミリン
    の作動薬アナログと、インスリンとからなる組成物。
34. 【請求項３４】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項３に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、グルカゴンとからなる組成物。
35. 【請求項３５】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項６に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、グルカゴンとからなる組成物。
36. 【請求項３６】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項９に記載のアミリンの
    作動薬アナログと、グルカゴンとからなる組成物。
37. 【請求項３７】 治療的投与用に適した形態に混合し
    た、治療学的に有効な量の請求項１２に記載のアミリン
    の作動薬アナログと、グルカゴンとからなる組成物。
38. 【請求項３８】 アミリンの作動薬アナログが²⁵'²⁸'²⁹
    Ｐro-ｈ-アミリンである請求項２６〜３７いずれか１項
    記載の組成物。
39. 【請求項３９】 アミリンの作動薬アナログがデス-¹Ｌ
    ys²⁵'²⁸'²⁹Ｐro-ｈ-アミリンである請求項２６〜３７い
    ずれか１項記載の組成物。
40. 【請求項４０】 アミリンの作動薬アナログが¹⁸Ａr
    g²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンである請求項２６〜３７いずれ
    か１項記載の組成物。
41. 【請求項４１】 アミリンの作動薬アナログがデス-¹Ｌ
    ys¹⁸Ａrg²⁵'²⁸Ｐro-ｈ-アミリンである請求項２６〜３
    ７いずれか１項記載の組成物。