JPH10508828A - 毛髪成長の制御 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 アロマターゼインヒビターを処置されるべき領域で哺乳動物（ヒトを含む）に局所投与することによる、脱毛を処置または防止するための方法。

Description

【発明の詳細な説明】 毛髪成長の制御 発明の分野 本発明は、脱毛の素因の決定方法および毛髪成長の調節のための調製物に関す る。これらの調製物は、ヒトを含む哺乳動物における頭皮における毛髪後退およ び脱毛症（baldness）の処置ならびに脱毛剤に特に適用可能である。発明の背景 多毛症および女性の男性ホルモン性脱毛症は、一般的な男性ホルモン依存性の 問題である。例えば、毎年これらの症状を有する約200人の女性が、Department of Dermatology in Sheffieldに行くようにいわれる。患者はまた内分泌科医お よび婦人科医に行くようにいわれる。毛髪は、重要な美容上価値のあるものであ り、そしてこれらの症状は肉体的には欠陥はないが、それらはクオリティオブラ イフに対し深い有害な影響を有し得る。現在の多毛症のための処置は、せいぜい わずかにしか有効ではない。女性の男性ホルモン性脱毛症のための価値のある処 置は存在せず、そしてほとんどの場合、管理は、重篤な内分泌病状が存在しない ことを確認することおよび重篤に冒された患者についてかつらを指示することに 限られている。より良い処置が必要であるが、その開発は、基礎的な生物学の乏 しい理解により妨げられている。特に、我々は、なぜ男性ホルモンが毛髪成長を 大部分の皮膚にわたって刺激するのに、頭皮における毛髪成長を阻害するかを理 解していない。 脱毛症は一般に、頭皮毛髪成長の様式の変化である。脱毛症は男性および女性 の両方を冒すが、脱毛の程度は、女性においてより少なく、そしてより拡散した 様式で生じる傾向がある。遺伝的要因が重要であると考えられ、そして有病率に おいて人種的差違が存在する。脱毛症の発達には男性ホルモンが必要であるとい う強い証拠が存在するが、毛包に対するホルモン作用の様式は知られていない。 現在、満足な処置は存在しない。しかし、以下がいくらか有益であると判明して いる；ミノキシジル ミノキシジルの局所塗布は、被験体の約30％において初期の脱毛症におけるわ ずかな回復をもたらす。ミノキシジルは、脈管平滑筋におけるカリウムチャンネ ルアゴニストである。多数の他のカリウムチャンネルアゴニストが、毛髪成長を 刺激することが報告されている（例えば、ジアゾキシド、ニコランジル（nicora ndil））。このことは、この薬理学的特性が、これらの多毛症的効果に関係する ことを示唆する。しかし、作用のメカニズムは知られていない。酢酸シプロテロン（CPA） これは、ステロイド性男性ホルモンレセプターブロッカーであり、プロゲステ ロン的活性も有する。いくつかの小規模の試行は、女性の脱毛における小さな陽 性の効果を示している。CPAは、経口で摂取されなければならず、そしてそれゆ え男性において使用され得ない（CPAがその男性を雌性化する）。本発明者らが 知る限り、利用可能な局所処方物は存在しない。毛髪手術、例えば、毛髪移植、頭皮整復 これらの技術は容易に利用可能ではなく、そして非常に限定された適用を有す る。多数のその他の製品が脱毛症の処置のために販売促進されているが、上に挙 げたもの以外は、結果についての十分な臨床的データは存在しない。 脱毛症のための新たな有効な処置の開発は、我々の基礎的な生物学の乏しい理 解、および化合物のルーチン試験のための適切な動物モデルがないことにより制 限されてきた。生物学的背景 男性ホルモン（例えば、テストステロン）は、男性における毛髪成長に対する 主要な全身性の影響物質である。大部分の身体部位において（例えば、あごひげ および恥丘皮膚）、男性ホルモンは毛周期の成長相（発育相）を延長し、そして 毛包サイズを増大させることにより、毛髪成長を刺激する。頭皮における毛髪成 長は男性ホルモンを必要としないが、逆説的に、男性ホルモンは遺伝的に素因を 有する個体（男性ホルモン性脱毛症）（発育相期間および毛包サイズにおける連 続的減退が存在する）において頭皮における脱毛症に必要である。思春期以前に 去勢した男性はあごひげを成長させることができず、そして脱毛症にならない。 その後テストステロンて処置すると、男性の去勢者の約３分の１は脱毛症を示す [１]。男性ホルモン性脱毛症はまた女性においても一般的であり、この場合男性 において見られる様式ではなく、通常拡散した脱毛を示す。 現在の考えは、テストステロンは脱毛症の発達に必要であるが、一部の男性の みが脱毛症を示し、そして脱毛症の男性と脱毛症でない男性との間には循環テス トステロンのレベルに差がないので、脱毛が生じるためにはその他の要因が必要 であるに違いないというものである。本研究が行われるまで、これらのその他の 要因が何であり得るかについて、示すものはほとんどなかった。男性ホルモンを 脱毛症（ならびにあごひげおよび体毛の成長）に関連付けるさらなる証拠は、細 胞内男性ホルモンレセプターを欠く遺伝的男性（精巣性女性化症）は、高レベル の循環テストステロンにかかわらず、体毛を成長させることができず脱毛症にな らないことである。大部分の身体部位において、テストステロンは、毛髪成長に 作用する前に、酵素５αレダクターゼにより強力な男性ホルモンであるジヒドロ テストステロン（DHT）に皮膚において代謝されると一般に考えられている。男 性および女性の両方におけるDHTの脱毛への関与に関する多数の文献が存在する （国際特許出願第8 502 543号、国際特許出願第8 602 269号、欧州特許出願第0 566 979号、欧州特許出願0 163 490号、国際特許出願第8 601 402号、独国特許 出願第2 840 144号、米国特許出願第4 684 635号、J．Steroid Biochem.第19巻 ，第１号，第587-590頁，1983、JCE and M，第39巻，第６号，第1012-1019頁，1 974、JCE and M，第38巻，第５号，第811-819頁，1974、J．Endocr.，第59巻， 第２号，第345-351頁，1973、J．Cutan Pathol 1991: 19: 309-314、およびM．E ．Sawaya: Steroid Chemistry and Hormone Control during the Hair Follicle Cycle，第377-384頁）。２型５αレダクターゼ欠損症の遺伝的男性は、正常な または上昇した循環テストステロンのレベルを有するが、女性様式の体毛および 薄いあごひげの成長またはあごひげの成長のないことを示す。２型５αレダクタ ーゼ欠損症の男性は、脱毛症にならないといわれているが、この代謝経路を脱毛 症に関連付ける証拠は、あまり明白ではない。これらの場合が報告された正常集 団 における脱毛症の有病率は何も知られておらず、そして現在までの研究によって は、正常頭皮において２型形態の５αレダクターゼを示すことができていない。 マカク（男性ホルモン依存性頭皮脱毛を経る霊長類種）における５αレダクター ゼインヒビターの投与は、脱毛症過程を防止し、そして部分的に逆転させると報 告されたが、ヒトにおける発表された臨床試行データは存在しない。DHTが脱毛 症に関与するのであれば、その効果は頭皮において合成されたDHTではなく、循 環DHTに由来するようである。これは、なぜ一部の男性のみが脱毛症の特徴を示 すかを説明しない。 毛髪は、毛包の基部（毛球マトリックス）に位置する高度に増殖性の集団の上 皮細胞の角質化された分化産物である。毛髪は連続的には産生されない；個々の 毛包は、毛周期として知られる成長（発育相）および休止（休止期）の反復的連 続を経る。毛周期の制御は、主に毛包自体の中で決定されるが、この内因性作用 は、内分泌系により主に媒介される全身性の影響により調整され得る[２]。毛包 はまた、胚間葉に由来する皮膚成分を含有する。皮膚成分は、毛包を取り囲む皮 膚鞘（dermal sheath）および毛球の基部を陥入させる真皮乳頭を包含する。齧 歯類における移植研究は、真皮乳頭が毛髪成長において重要な役割を担うことを 示した。真皮乳頭は、毛包上皮の成長および分化の誘導を担う。真皮乳頭は毛包 型（ひげ、毛など）およびおそらく毛髪の直径を決定し、そして真皮乳頭が毛周 期の調節を担うという間接的な証拠が存在する[３、４]。多数の研究が、毛包に おいて（ここで男性ホルモンが毛髪成長を刺激する）ホルモンが主に真皮乳頭に 作用することを示唆している。ヒト毛包から培養される真皮乳頭細胞は、飽和可 能な高親和性男性ホルモンレセプターを発現し、そしてこのレセプター濃度は後 頭頭皮の毛包（比較的男性ホルモン応答性でない部位）由来の細胞よりもあごひ げの毛包由来の細胞において高い[５]。男性ホルモンレセプターはまた、組織切 片中の真皮乳頭細胞の核中に、特異的なモノクローナル抗体を用いる免疫組織化 学により示されている[６]。重要なことに、毛球の上皮区画中の細胞を染色する 抗体は存在しなかった。あごひげの毛包から培養される真皮乳頭細胞はまた、２ 型５αレダクターゼを発現するが、頭皮毛包から培養される真皮乳頭細胞は、２ 型５αレダクターゼを発現しない[７]。１型５αレダクターゼは頭皮中に存在す るが、５αレダクターゼ欠損症の男性は、正常レベルのこの酵素を有する。それ ゆえ、あごひげに対する男性ホルモンの作用は、主に真皮乳頭に対して作用する DHTにより媒介されるようであるが、同じ根拠で頭皮毛髪成長に対する男性ホル モンの阻害的効果を説明するのは困難である。 結論として、先行技術は、集団の一部において観察される脱毛の様式を説明で きない点で混乱している。先行技術はまた、脱毛に対する素因を予測する合理的 な仮説を提供せず、そして新たなかつ改善された処置のための系統だった検索の 基礎となる根拠をほとんど提供しない。 本発明者らは研究により、代わりに、それぞれアンドロステンジオンおよびテ ストステロンのエストロンおよびエストラジオールへの代謝を触媒するチトクロ ームp450酵素であるアロマターゼをいくらか詳細に研究するように導かれた。ア ロマターゼは主に卵巣および胎盤に局在化し、そして生殖機能の調節に関与する 。アロマターゼ活性はまた、生殖腺外組織（extra-gonadal tissue）（例えば、 脳、肝臓脂肪組織および生殖器皮膚線維芽細胞）において見出される。男性ホル モン代謝のアロマターゼ経路は、毛髪生物学においてわずかな興味しか受けてお らず、そしてヒト毛髪成長に対するエストロゲンの影響についてはほとんど知ら れていない。しかし、多数の系統の証拠により、本発明者らはこれが重要であり 得ることを示唆された： ＊研究されたすべての哺乳動物種（種々の齧歯類、イヌ）において、エストロゲ ンは毛髪成長を阻害する[８]。 ＊アロマターゼ活性は、引き抜かれたヒト頭皮毛包において検出された[９]。 ＊アロマターゼタンパク質は、ヒト頭皮毛包において免疫化学により検出された [10]。 ＊本研究者らは近年、ラット毛包においてインビボでアロマターゼ活性の証拠を 見出した。これは、新規なプレエストロゲン性ステロイド（pre-oestrogenic st eroid）の皮脂分泌に対する効果を測定するために設計された研究における偶発 的な発見であった。問題の化合物はアロマターゼの作用によりエストロゲンに代 謝され、そしてエストロゲンレセプターおよびアロマターゼ活性を有する組織に おいてのみエストロゲンとして作用する。局所塗布は、ラットにおける毛髪成長 を約35％まで阻害した。 ＊生殖器皮膚線維芽細胞において、アロマターゼ活性は男性ホルモンレセプター 媒介性メカニズムを介してテストステロンにより刺激される[11]。 結果として、本発明者らは以下の仮説をたてた： 大部分の身体部位における毛包中で、テストステロンはプレホルモンとして作 用し、そしてテストステロンに対する応答は、どの代謝経路が優勢であるかによ って決定される。５αレダクターゼ活性が高い皮膚部位（例えば、あごひげ）に おいて、テストステロンはDHTに代謝され、DHTは毛髪成長に対する刺激作用を有 する。頭皮において、テストステロンは主にアロマターゼ経路を介してエストロ ゲンに代謝されて、毛髪成長を阻害する。アロマターゼ活性はレセプター媒介性 男性ホルモン制御下にある；従って、脱毛症は精巣性女性化症においては生じな い。女性に比較して男性において脱毛症の重篤度がより大きいことは、男性ホル モンに刺激されたアロマターゼ活性によって男性頭皮において達せられる、より 高いレベルのエストロゲンにより説明され得る。類似の状態が脳に存在し、ここ では多数の鳥類および哺乳動物種における雄性の挙動の特定の局面が、男性ホル モン依存性の男性ホルモンのアロマ化（aromatisation）により局所的に合成さ れたエストロゲンにより決定される[12]。この仮説はまた、５αレダクターゼの 役割を包含し行る；DHTはテストステロンより強力な男性ホルモンであるので、 循環するDHTまたは局所的に形成されるDHTは、アロマターゼのより有効な誘導物 質であり得る。発明の要旨 その最も広い局面において、本発明はアロマターゼ、およびより詳細には男性 ホルモンで制御されるアロマターゼが、脱毛において果たす役割を有するという 認識に関する。 本発明の第１の局面によれば、それゆえアロマターゼインヒビターの美容剤と しての使用が提供される。 本発明の第２の局面によれば、アロマターゼインヒビターを処置されるべき領 域に投与する工程を包含する、脱毛を処置または防止するための美容方法が提供 される。 本発明のこの局面の好ましい実施態様において、アロマターゼインヒビターは 本明細書に列挙される任意の１つまたはそれ以上のインヒビターを包含する；ア ミノグルテチミド、4-OHアンドロステンジオン、6-ヒドロキシミノ-アンドロス テンジオン（6-hydroximino-androstenedione）、9,10-ジメチル1,2-ベンズアン トラセン、1,4,6-アドロスタトリエン3,17-ジオン（1,4,6-adrostatrien 3,17-d ione）、アタメスタン（atamestane）、エキセムスタン（exemstane）、ファド ロゾール（fadrozole）、ボロゾール（vorozole）、1,2,4-トリアゾール-3-アラ ニンおよびログレチミド（rogletimide）。あるいは、アロマターゼインヒビタ ーは、前記アロマターゼ酵素の少なくとも一部分に対して惹起された抗体を包含 し得る。抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであり得るが、その均質性 ゆえにモノクローナル抗体が好ましい。しかし、ポリクローナル抗体は、酵素の 少なくとも一部分での適切な実験動物の注射およびその後の動物からの血清の採 集ならびに公知の技術を使用する特異的血清の単離により、より容易に産生され る。あるいは、モノクローナル抗体はまた、当業者に周知の技術を用いて産生さ れ得る。 本発明の第３の局面によれば、酵素アロマターゼに対して惹起された抗体が提 供される。理想的には、抗体は美容手順において脱毛を防止するために使用され る。 本発明の第４の局面によれば、毛髪成長の後退の軽減または脱毛症の緩和のた めの調製物の製造におけるアロマターゼインヒビターの使用が提供される。この ような調製物は、毛髪成長を誘導、維持または増加させ、そして脱毛症の発症を 逆転、阻止または防止し得る。 好ましくは、調製物は、ローション剤の形態で適切な賦形剤とともに局所塗布 のために処方される。 あるいは、調製物は、クリーム剤、シャンプー剤、コンディショナー剤または スプレー剤の形態をとり得る。 好ましくは、アロマターゼインヒビターは、それが容易に調製物から皮膚およ び適切な皮膚細胞に吸収されることから選択される。これを達成するための１つ の手段は、親脂性の性質を有するアロマターゼインヒビターを使用することてあ る。このようなインヒビターの１つの例は、4-ヒドロキシアンドロステンジオン である。原則として任意の公知のまたは新規のアロマターゼインヒビターが、こ のような処方物において使用され得る。 本発明の第５の局面によれば、男性ホルモンレセプターに選択的に結合し、そ の結果アロマターゼのレセプター媒介性男性ホルモン制御が抑制されるかまたは 防止されるように適合された薬剤の、美容剤としての使用が提供される。 本発明のこの局面の好ましい実施態様において、前記薬剤は、前記レセプター に結合し得るがレセプター媒介性応答を生じさせ得ないアンタゴニストである。 好ましくはアンタゴニスト剤は、合成的に産生されるか、または天然に存在す るか、あるいは天然に存在する男性ホルモンの操作された形態であり得る。例え ば、このアンタゴニスト剤は、関連のレセプターを結合し、その結果ブロックし 得るが、レセプター媒介性応答を生じさせ得ない天然に存在する男性ホルモンの 形態を含み得る。 本発明の第６の局面によれば、アロマターゼインヒビターおよび男性ホルモン レセプターアンタゴニストを含有する医薬品および／または美容剤が提供される 。 本発明のこの局面の好ましい形態においては、アロマターゼインヒビターおよ び男性ホルモンレセプターアンタゴニストは、対応するアロマターゼおよびレセ プターの細胞濃度に関連する比率で提供される。 好ましくは、前記インヒビターは、アロマターゼ酵素の一部分に対して惹起さ れた抗体（ポリクローナルまたはモノクローナル）である。 本発明の第７の局面によれば、アロマターゼインヒビターおよび男性ホルモン レセプターアンタゴニストを継続的または同時のいずれかで投与する工程を包含 する、脱毛を処置または防止するための美容方法が提供される。 本発明の好ましい方法においては、前記アロマターゼインヒビターは、本明細 書において列挙される任意の１つまたはそれ以上のインヒビターである。これは 例えば、4-OHアンドロステンジオンである。 好ましくは、前記男性ホルモンレセプターアンタゴニストは、例えば酢酸シプ ロテロンである。 本発明の第８の局面によれは、個体における脱毛症の傾向がある種々の皮膚部 位から細胞のサンプルをとり、これらの細胞を培養し、それらのアロマターゼ活 性を測定し、そしてこの活性をコントロール群内のヒトについてのコントロール 値および脱毛を患うヒト由来の値と比較することにより、個体が毛髪成長後退ま たは脱毛症の素因を有するか否かを検出する美容方法が提供される。 本発明の第９の局面によれば、個体がアロマターゼインヒビター調製物を用い る処置から恩恵を受けそうであるか否かを検出するための事前方法（afore meth od）が提供される。クリニックに現れる人の一部のみがこのような処置に応答す る可能性がある。なぜなら、アロマターゼ活性は脱毛を担う唯一のメカニズムで はないかもしれないからである。異常レベルのアロマターゼ活性のこの検出は、 この形態の処置がうまくいきそうであるか、または価値がありそうであることを 示し得る。説明 上記の仮説が正しければ、本発明者らは以下を予測する： ＊後頭皮およびあごひげのような非脱毛症部位よりも、脱毛症の傾向がある皮膚 部位（すなわち、前頭皮および頭頂）において、より高いレベルのアロマターゼ 活性が存在する。 ＊皮膚アロマターゼ活性は男性ホルモンレセプターを介して男性ホルモンにより 誘導される。 上記の仮説を調べるための予備的な研究において、本発明者らは、男性ホルモ ンに対して異なる応答を有する身体部位由来の培養ヒト毛包真皮乳頭細胞株およ び非毛包性皮膚線維芽細胞におけるアロマターゼ活性を測定した。アロマターゼ を、トリチウム化水放出アッセイ（tritiated water released assay）[13]を用 いて測定した。結果を以下に要約する。 ＊あごひげ（Ｎ＝５）、後頭皮（Ｎ＝５）および前頭皮（Ｎ＝７）由来の皮膚線 維芽細胞株は全てアロマターゼ活性を有した。酵素速度論値は、細胞を一定の範 囲の濃度の基質（アンドロステンジオン）とともにインキュベートすることによ り確立した。最高の活性は、前頭皮（すなわち、潜在的な脱毛症部位）由来の細 胞株において見出された。あごひげ細胞、後頭皮細胞および前頭皮細胞における 平均V_max（fmol/mgタンパク質/時間）+/-SEMは、それぞれ892+/-155，914+/-188 および2,817+/-866であった。３つの部位間で、アンドロステンジオンに対するK mにおいて差はなかった（平均約25nmol）。この値は他の組織について見積もら れた値と同様である。 ＊線維芽細胞のアロマターゼを、細胞を生理学的濃度（10nmol）でのテストステ ロンとともにプレインキュベートすることにより刺激した。19個の細胞株を研究 した。アロマターゼ活性における平均増加倍数（+/-SEM）は、2.69+/-0.38（p＜ 0.0 2両側検定）であった。３つの細胞株に対する別の実験において、一定範囲 の濃度のテストステロンおよびDHTに対する応答を研究した。テストステロンは1 0nmolでアロマターゼの最大の２倍の増加をもたらした。同じ濃度で、DHTに対す る応答はその２倍より大きかった（4.3倍）。このテストステロンおよびDHTに対 する応答は酢酸シプロテロン（これは男性ホルモンレセプターをブロックする） により阻害された。このことは、皮膚アロマターゼの男性ホルモン刺激が、男性 ホルモンレセプター依存性メカニズムを介することを示す。 ＊アロマターゼは、任意の上記部位から培養された毛包真皮乳頭（１４細胞株 ）においても検出されなかった。テストステロンは、真皮乳頭細胞においてアロ マターゼを誘導できなかった。 ＊デキサメタゾンは、線維芽細胞（６細胞株）においてアロマターゼを10〜20 倍刺激し、そして真皮乳頭細胞（４細胞株）においてアロマターゼを誘導した。 ＊線維芽細胞アロマターゼは、4-OHアンドロステンジオン（他の組織における アロマターゼの公知のインヒビター）により阻害された。３つの細胞株における 速度論研究は、不可逆競合阻害と一致した。50％阻害は、約25nmol濃度で生じた 。 現時点での考えは、男性ホルモンが真皮乳頭において作用しているというもの である。毛包真皮乳頭細胞に検出可能なアロマターゼ活性が存在しないという所 見は、本発明者らの仮説から外れる。確立された考え方と対照的に、本発明者ら は、非毛包性皮膚線維芽細胞におけるアロマターゼ活性がより重要であり、そし て脱毛症部位で見られる皮膚組織の変化の原因となり得ると考える。 前頭皮由来の線維芽細胞におけるアロマターゼレベルが高いことは、本発明者 らの独創的な仮説と一致する。アロマターゼ活性が真皮乳頭細胞に存在しないの で、毛髪成長に対するエストロゲンの推定阻害効果は、周囲の真皮に由来する必 要がある。男性ホルモンが脱毛症過程において毛包に直接作用するという証拠は なく、そして脱毛症頭皮の主観的観察は、皮膚組織において一般的な変化がある ことを示唆する。従って、毛髪成長の阻害は、皮膚の局所生物学的作用のより一 般的な変化に対する二次応答であり得る。 テストステロンに対する応答および男性ホルモンレセプター遮断によるその阻 害は、精巣性女性化症には脱毛症が存在しないことと一致する。DHTはテストス テロンより強力なアロマターゼ誘導物質であり、そしてこのことは、５αレダク ターゼ欠損症において脱毛症が存在しないという注目に値することを説明し得る 。アロマターゼが同じ組織サンプル由来の皮膚線維芽細胞において高レベルで存 在するときに、真皮乳頭細胞においてアロマターゼが存在しないことは驚くべき 知見であり、そしてこれらの２つの細胞型間の質的な生化学的差異の最初の証拠 である。テストステロンおよびデキサメタゾンに対して皮膚乳頭細胞および線維 芽細胞の応答が異なることはまた、アロマターゼが、これらの２つの細胞型にお いて異なるように調節されていることを示唆する。アロマターゼの組織特異的調 節は十分に認識されており［14、15］、そして、鳥類の脳においては非ゲノム調 節もまた記載されているが、この調節は、おそらく遺伝子転写レベルで生じる。 これらの知見は、アロマターゼ活性が存在しないことが真皮乳頭機能の重要な特 徴であり、そして「低エストロゲン」環境の維持が毛髪成長の進行に必要であり 得ることを示唆する。 このように、アロマターゼインヒビターでの処置は、テストステロンからエス トロゲンへの変換を減少させるかまたは除去し、従って、脱毛過程を遅延させる かまたは逆転さえするという結果となる。アロマターゼインヒビターは、種々の 方法で処方され得る。全身投与が可能であるが、局所適用により副作用が最小に なることが期待される。これは、ローション剤またはクリーム剤（通常の賦形剤 、クリーム基剤、安定化剤などを含む）、あるいはシャンプー剤、コンディショ ナー剤、またはスプレー剤によって達成され得る。このような処方は、薬剤師（ 薬学分野の当業者）には周知であり、そしてこの点においてさらなる詳細は必要 で はない。 あるいは、特定の個体由来の培養皮膚細胞におけるアロマターゼ活性を測定し 、そしてこの活性を、頭全体に毛髪を有するヒトからのコントロール値および脱 毛症を患うヒトからの値と比較することにより、個体が毛髪成長の後退または脱 毛症の素因を有するか否かを決定することが可能である。 その活性を最大にするために、同一調製物において２つ以上のアロマターゼイ ンヒビターの組合せを用いることもまた可能である。このようなインヒビターは 、目的のために特に設計され得るか、または以下に示される公知のインヒビター の非包括的なリストから選択され得る； 要約すると、上記調製物は、毛髪成長を誘導、維持、または増加させ、そして 脱毛症の発症を逆転、阻止、または防止させる。従って、それらは、このような 状態の素因を有するヒトに特に適用可能であり得る。 アロマターゼ酵素が毛髪成長の特定の局面の調節において重要であれば、プレ エストロゲンでの処置により、エストロゲン濃度を増加させ、従って毛髪成長を軽減 させることもまた可能であることが理解される。このような化合物は当業者 に公知であり、そして適切な従来手段を用いて局所適用のために処方され得る。 それらはインビボでエストロゲンに変換され、次いで毛周期においてその公知の 影響を及ぼし得る。 プレエストロゲンの局所適用は、多毛症の処置のために、および脱毛剤として 特に普通である。また、アロマターゼ活性の存在について皮膚細胞をアッセイす ることは、このような処置が有効であるらしいという事前の徴候を与え得る。 好ましくは、アロマターゼインヒビターまたは他の活性成分は、実質的に純粋 な薬学的形態である。投与は、任意の適切な経路により得るが、経皮経路が好ま しい。局所調製物は、クリーム剤、シャンプー剤、コンディショナー剤、または スプレー剤の形態であり得る。 液体調製物は、例えば、水性または油性の懸濁剤、液剤、乳濁剤の形態であり 得るか、あるいは使用前に水または他の適切なビヒクルで再構成されるための乾 燥製品として与えられ得る。このような液体調製物は、従来の添加剤（例えば、 懸濁化剤、乳化剤、非水性ビヒクル、および所望であれば、従来の矯味剤、矯臭 剤(perfuming)、または着色剤）を含有し得る。 投与はまた、皮下注射によっても可能であり、本発明の化合物および滅菌ビヒ クルを含有する液体単位用量剤形が調製される。 プレエストロゲン（１つまたは複数）の選択は、皮膚への吸収容易性により部 分的に指示されるはずである。 アロマターゼインヒビター（完全なリストではない） アミノグルテチミド 4-OHアンドロステンジオン 6-ヒドロキシミノ-アンドロステンシオン 9,10-ジメチル1,2-ベンズアントラセン 1,4,6-アドロスタトリエン3,17-ジオン アタメスタン エキセムスタン ファドロゾール ボロゾール 1,2,4-トリアゾール-3-アラニン ログレチミド この文脈では、インヒビターは、アロマターゼ酵素がその通常の機能を実施す ることを防止できる任意の薬剤である。これは、部分的および完全なアンタゴニ ストを包含し、そしてまたアロマターゼ酵素の少なくとも一部分に対して惹起さ れた抗体をも包含する。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得 、当業者に周知の技術を用いて生成され得る。天然に存在する男性ホルモンの操 作された形態もまた用いられ得る。結びおよび要約 男性ホルモンは男性の脱毛症の発達に必要であるが、その頭皮毛包における作 用メカニズムは明らかではなかった。本発明者らは、脱毛症がエストロゲンによ り引き起こされることを提唱した。エストロゲンは、頭皮中で循環男性ホルモン （テストステロン、アンドロステンジオン）から酵素アロマターゼの作用により 局所的に合成される。エストロゲンは、他の哺乳動物において毛髪成長を阻害す ることが知られている。また、アロマターゼ活性は、いくつかの組織（例えば、 脳）において男性ホルモン依存性である。この仮説を調べるために、本発明者ら は、脱毛症男性頭皮および非脱毛症男性頭皮、女性頭皮、および男性あごひげ（ ここで、男性ホルモンは毛髪成長を刺激する）由来の皮膚におけるアロマターゼ を研究した。これらの研究には、培養皮膚線維芽細胞、培養毛包真皮乳頭細胞、 および皮膚組織を用いた。結果 あごひげ（ｎ＝５）、後頭皮（ｎ＝５）、および前頭皮（ｎ＝７）由来の皮膚 線維芽細胞株は全てアロマターゼ活性を有した。酵素速度論値を、細胞を基質（ アンドロステンジオン）とある濃度範囲でインキュベートすることにより確立し た。最高活性は、前頭皮（すなわち、潜在的な脱毛症部位）由来の細胞株におい て見出された。あごひげ、後頭、および前頭細胞における平均V_max（fmol/mgタ ンパク質/時間）+/-SEMは、それぞれ892+/-155、914+/-188、および2817+/-866 であった。３つの部位間で、アンドロステンジオンについてKmに差異はなかった （平均＝25nmol）。この値は、他の組織について見積もられた値と類似する。 線維芽細胞アロマターゼを、細胞を生理的濃度（10nmol）でのテストステロン とプレインキュベートすることにより刺激した。19細胞株を研究した。アロマタ ーゼ活性の平均倍増加（+/-SEM）は、2.69+/-0.38（p＜0.02、両側ｔ検定）であ った。３つの細胞株の別個の実験において、ある濃度範囲のテストステロンおよ びDHTへの応答を研究した。テストステロンにより、10nmolでアロマターゼ最大 の２倍増加を得た。同一の濃度で、DHTへの応答は、大きさが２倍を上回った（4 .3倍）。このテストステロンおよびDHTへの応答は、酢酸シプロテロン（これは 、男性ホルモンレセプターをブロックする）により阻害された。このことは、皮 膚アロマターゼの男性ホルモン刺激が男性ホルモンレセプター依存性メカニズム を介することを示す。 アロマターゼは、任意の上記部位から培養した毛包真皮乳頭細胞（１４細胞株 ）においても検出されなかった。テストステロンは、真皮乳頭細胞においてアロ マターゼを誘導できなかった。 デキサメタゾンは、線維芽細胞（６細胞株）においてアロマターゼを10〜20倍 刺激し、そして真皮乳頭細胞（４細胞株）においてアロマターゼを誘導した。 線維芽細胞アロマターゼは、4OH-アンドロステンジオン（他の組織におけるア ロマターゼの公知のインヒビター）により阻害された。３つの細胞株における速 度論研究は、不可逆競合阻害と一致した。50％阻害は、約25nmol濃度で生じた。 アロマターゼmRNAは、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）により皮膚線維芽細胞（ ４細胞株）において検出された。測定可能な酵素活性が存在しないことにも関わ らず、本発明者らは、真皮乳頭細胞（４細胞株）においてもアロマターゼmRNAを 検出した。半定量希釈技術を用いると、発現レベルは、真皮乳頭細胞においてよ り皮膚線維芽細胞において、より大きいようであり、このことは、この２つの細 胞型間の酵素活性の差異が転写レベルで決定されることを示唆した。PCRは信頼 性のあるmRNA定量法ではなく、そして本発明者らは転写後調節の可能性を除外で きない。しかし、皮膚線維芽細胞を真皮乳頭細胞培養物からの馴化培地とインキ ュベートした実験、または真皮乳頭細胞と共存培養した実験において、本発明者 らは、真皮乳頭細胞が、アロマターゼを阻害する因子を含有するかまたは放出す るという証拠を見出さなかった。 細胞培養物を用いて得られた結果がインビボで生じる事象に対応するか否かを 決定するために、アロマターゼを男性および女性の頭皮由来の皮膚サンプルにお いてトリチウム化水アッセイにより測定した。組織を細断し、次いでNADPH源と 共に、１β³H-アンドロステンジオンとインキュベートした。各アッセイを、ア ロマターゼインヒビター（4OH-アンドロステンジオン）の存在下および非存在下 で行った。胎盤組織を陽性コントロールとして用いた。アロマターゼは、男性前 頭皮由来の12サンプルのうち９サンプルで検出された。しかし、女性頭皮由来の ５サンプルでは１サンプルでしか検出されなかった。この差異は統計学的に有意 であった（ｐ＜0.01）。 平均のアロマターゼ活性は、非脱毛症頭皮（55.0fmol/g組織/時間 ｎ＝４） においてよりも脱毛症頭皮（110.0fmol/g組織/時間 ｎ＝８）において大きかっ たが、この差異は、この少数のサンプルにおいては有意ではなかった。25nmolの 4OH-アンドロステンジオンの添加は、活性をバックグラウンドレベルに低下させ た。 本発明者らの結果は、独創的な仮説を支持する。アロマターゼ活性は男性頭皮 に存在するが、女性頭皮には稀に検出可能であるかまたは存在しない。この細胞 培養研究は、皮膚アロマターゼが男性ホルモン依存性であることを示し、そして このことは、男性において活性レベルがより高いことに対する説明となり得る。 本発明者らは、現在、男性脱毛症の処置における局所アロマターゼインヒビタ ーのパイロットトライアルが正しいとするのに十分な情報を有すると考えている 。本発明者らは、4OH-アンドロステンジオンを、その生化学的特性および毒性が 十分に特徴づけられ、そしてこれはヒトにおける使用が既に認可されている（乳 ガンの処置において）ことから使用した。実験 細胞培養物 真皮乳頭細胞 真皮乳頭細胞培養物を公開された方法（Messenger 1984、Messengerら 1985） を用いて樹立した。簡単にいえば、ヒト頭皮およびあごひげ組織を、良性皮膚病 巣（例えば、母斑、嚢包）の日常的な切除の副産物として得た。発育相毛包を解 剖により取り出した。次いで、真皮乳頭を立体顕微鏡下で顕微解剖により分離し 、そして培養容器（35mmプラスチックペトリ皿）に移した。乳頭を、５％CO₂を 含む加湿雰囲気下で、10％プールされたヒト血清を含有するダルベッコ最少必須 培地(DMEM)において37℃でインキュベートした。細胞増殖は３〜14日後に生じた 。 細胞をコンフルエントまで培養し、そして次いで標準細胞培養技術を用いて25cm² フラスコに継代した。次の継代は３：１分離比であった。 皮膚線維芽細胞 皮膚線維芽細胞培養物を真皮乳頭細胞培養物と同じ皮膚サンプルから樹立した 。毛包間真皮を解剖により取り出し、そしてメスで小片に切断した。次いで、組 織小片を35mmプラスチックペトリ組織培養皿中に置き、そして培養培地で覆った （上記と同様）。細胞増殖は３〜14日後に生じ、そして次いで培養物を上記のよ うに処理した。 Messenger AG(1984)Cell culture of dermal papillae isloated from humanhai r follicles．J Invest Dermatol 82，548 Messenger AG，Senior HJ，Temple A，Pope FM，Bleehen SS(1985)In vitro pro perties of dermal papilla cells cultured from human hair follicles．Br J Dermatol 113，768 アロマターゼアッセイ トリチウム化水放出アッセイを用いて細胞および組織におけるアロマターゼ活 性を測定した。この方法は発表されている（LephartおよびSimpson 1991）。こ の方法は、アンドロステンジオンのアロマ化の間に１β位から水素原子が放出さ れるという事実に依存する。 ・細胞を24ウェルプレートに播種し、そしてコンフルエントになるまで培養した 。 ・培養培地を流し出し、そして細胞を新鮮な無血清培地で洗浄した。 ・次いで、アロマターゼ基質を含有する血清を含有しないDMEM１mlを各々のウェ ルに添加した。 ・使用した基質は１β³H-アンドロステンジオンであった。１β³H-アンドロステ ンジオンのアロマ化の間の³H放出は、トリチウム化水として測定し得る。 ・細胞を基質とともに１〜４時間（通常２時間）インキュベートした。 ・培地を流し出し、そしてクロロホルムおよび活性炭で連続的に抽出して、未代 謝の基質を除去した。活性炭を遠心分離で除去し、そして水性上清のアリコート 中に（³H₂Oとして）存在する放射能を、シンチレーションカウンターで計数した 。 ・細胞層をTriton Xで取り出し、そしてタンパク質含量を標準法を使用して測定 した。 ・各々の細胞株における酵素活性についての速度論値を確立するために、細胞を 一定の濃度範囲（0.2〜3.0μCi/ml）の基質とともにインキュベートした。Vmax およびKmをラインウィーバーバークプロットから算出した。 ・いくつかの実験において、細胞を、アロマターゼアッセイの前に一定の濃度範 囲のテストステロンおよびジヒドロテストステロンとともに24時間インキュベー トした。 ・いくつかの実験において、細胞を、アロマターゼアッセイの前に一定の濃度範 囲のデキサメタゾンとともに18時間インキュベートした。 ・いくつかの実験において、4OHアンドロステンジオン（アロマターゼのインヒ ビター）を、アロマターゼ基質とのインキュベーションの間に培養ウェルに添加 した。一定の濃度範囲のインヒビターおよび基質を使用した。 Lephart ED，Simpson ER（1991）Assay of aromatase activity．Methods in En zymology 206，477-483 組織サンプルにおけるアロマターゼ 同じ基本的な技術を組織サンプルにおけるアロマターゼの測定に用いた。 ・皮膚サンプルを良性の病巣の日常的な切除の副産物として得た。組織を、液体 窒素中で急速に凍結し、そして液体窒素フリーザーで保存した。 ・組織を融解し、計量し、次いでメスを用いて細断した。 ・組織サンプルを、１μCi/mlの１β³H-アンドロステンジオンおよびNADPH源を 含有する無血清DMEM中でインキュベートした。インキュベーションを４時間行っ た。 ・培地を抽出し、そして上記のように計数した。 ・各サンプルについて、組織を25nmolの4OHアンドロステンジオンの存在下およ び非存在下で基質とインキュベートした。アロマターゼを、4OHアンドロステン ジオンによって抑制された活性として計算した。 mRNAの測定 ・細胞を75cm²フラスコ中でコンフルエントまで培養した。 ・ChomczynskiおよびSacchi(1987)の方法を用いてRNAを抽出した。 ・モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素を用いてcDNAを合成した。このcDNA をポリメラーゼ連鎖反応（PCR）に用いた。 ・PCRプライマー： ・10μlのRT（逆転写酵素）産物を以下の試薬と混合した： ５μlの10×反応緩衝液 ３μlの25mM MgCl₂ 0.4μlのTaq DNAポリメラーゼ（５単位/μl） 30.6μlの水 0.5μlの15μMの各プライマーを水中に含むプライマー ・混合物をミネラルオイルで重層し、そして28回のPCRサイクルを行った。産物 を1.2％エチジウムブロマイドで染色したアガロースゲルで検査した。PCR産物を Sac 1で消化し、その同一性を確認した。 ・mRNAの半定量のためにRT産物を連続的に２倍希釈した（すなわち、１、２、４ 、８、16、32）。 Chomczyski P，Sacchi N（1987）Single step method of RNA isolation by aci d ganidium-thiocyanate-phenol-chloroform extraction．Analyt Biochem 162 156-159実施例１ アロマターゼインヒビターを含有する局所調製物の代表的な処方は、以下の通り である： ５％ プロピレングリコール 10％ エタノールまたはイソプロピルアルコール 85％ 水 0.2〜10％w/v 4-OHアンドロステンジオン 4-OHアンドロステンジオンをエタノールまたはイソプロピルアルコール、およ びプロピレングリコール中に溶解する。次いで、この溶液を撹拌しながら水で希 釈し、頭皮への適用に適したローション剤を得る。 市販の保存剤（例えば、ヒドロキシベンゾエートの１つ）が、製品の保存期間 を増大させるために、必要に応じて添加され得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ Ｐ Ｃ０７Ｋ 14/81 Ｃ０７Ｋ 14/81 16/40 16/40 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．美容剤としてのアロマターゼインヒビターの使用。 ２．脱毛を処置または防止するための美容方法であって、アロマターゼインヒビ ターを処置されるべき領域に投与する工程を包含する、美容方法。 ３．前記アロマターゼインヒビターが、以下に列挙されるインヒビターの任意の １つまたはそれ以上を含む、請求項２に記載の美容方法： アミノグルテチミド、4-OHアンドロステンジオン、6-ヒドロキシミノ-アンドロ ステンジオン、9,10-ジメチル1,2-ベンズアントラセン、1,4,6-アドロスタトリ エン3,17-ジオン、アタメスタン、エキセムスタン、ファドロゾール、ボロゾー ル、1,2,4-トリアゾール-3-アラニン、およびログレチミド。 ４．前記アロマターゼインヒビターが、アロマターゼ酵素の少なくとも一部分に 対して惹起された抗体を含む、請求項２に記載の美容方法。 ５．アロマターゼインヒビターに対して惹起された、脱毛の防止における美容手 順において用いられる抗体。 ６．毛髪成長の後退の軽減または脱毛症の緩和のための調製物の製造におけるア ロマターゼインヒビターの使用。 ７．前記調製物が、ローション剤の形態で、適切な賦形剤と共に局所適用のため に処方される、請求項６に記載のアロマターゼインヒビターの使用。 ８．前記調製物が、クリーム剤、シャンプー剤、コンディショナー剤、またはス プレー剤の形態をとる、請求項６に記載のアロマターゼインヒビターの使用。 ９．前記アロマターゼインヒビターが、前記調製物から皮膚および適当な皮膚細 胞に容易に吸収されることから選択される、請求項６から８のいずれかに記載の アロマターゼインヒビターの使用。 １０．アロマターゼのレセプター媒介性男性ホルモン制御が抑制または防止され るように、男性ホルモンレセプターに選択的に結合するように適合された薬剤の 、美容剤としての使用。 １１．前記薬剤が、前記レセプターに結合し得るが、レセプター媒介性応答を生 じさせ得ないアンタゴニストである、請求項１０に記載の薬剤の使用。 １２．前記アンタゴニスト剤が、合成により生成され得るか、または天然に存在 し得るか、あるいは天然に存在する男性ホルモンの操作された形態であり得、例 えば、該アンタゴニスト剤が、関連のレセプターに結合し、その結果ブロックし 得るが、レセプター媒介性応答を生じさせ得ない天然に存在する男性ホルモンの 形態を含み得る、請求項１１に記載の薬剤の使用。 １３．アロマターゼインヒビターおよび男性ホルモンレセプターアンタゴニスト を含む、医薬品および／または美容剤。 １４．前記アロマターゼインヒビターおよび前記男性ホルモンレセプターアンタ ゴニストが、対応するアロマターゼおよびレセプターの細胞濃度に関連する比率 で提供される、請求項１３に記載の医薬品および／または美容剤。 １５．前記インヒビターが、アロマターゼ酵素の少なくとも一部分に対して惹起 された抗体（ポリクローナルまたはモノクローナル）である、請求項１３または 請求項１４に記載の医薬品および／または美容剤。 １６．脱毛を処置または防止するための美容方法であって、アロマターゼインヒ ビターおよび男性ホルモンレセプターアンタゴニストを継続的または同時のいず れかで投与する工程を包含する、美容方法。 １７．前記アロマターゼインヒビターが、本明細書中において列挙されるインヒ ビター（例えば、4-OHアンドロステンジオン）の任意の１つまたはそれ以上を含 む、請求項１６に記載の脱毛を処置または防止するための美容方法。 １８．前記男性ホルモンレセプターアンタゴニストが、例えば、酢酸シプロテロ ンである、請求項１６または１７に記載の脱毛を処置または防止するための美容 方法。 １９．個体が毛髪成長後退または脱毛症の素因を有するか否かを検出するための 美容方法であって、該検出が、該個体において脱毛症の傾向がある種々の皮膚部 位から細胞のサンプルを採取し、これらの細胞を培養し、それらのアロマターゼ 活性を測定し、そしてこの活性を、コントロール群内のヒトについてのコントロ ール値および脱毛を患うヒトからの値と比較する工程による、美容方法。 ２０．個体が、本願のアロマターゼインヒビター調製物での処置から恩恵を受け そうであるか否かを検出するための、請求項１９に記載の美容方法の使用。