JPH10505339A - 腫瘍疾患の治療のための生ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、遺伝子工学の技術により調製された３つの追加の遺伝子：ａ）免疫刺激活性をもつ細胞表面タンパク質をコードする遺伝子、ｂ）サイトカイン遺伝子及びｃ）チミジン・キナーゼ遺伝子、を含む生きた腫瘍細胞ワクチンの製造及び使用に関する。本発明の利用分野は、医薬及び遺伝子工学である。提案する生ワクチンは、シナルジスティックな抗腫瘍応答が、免疫刺激活性をコードする遺伝子の多移入により引き起こされるという事実にその効果を帰する。これは、そのワクチン細胞の信頼できる拒絶を導き、そして増殖することができる細胞がワクチンとして注射されることができるようにする。追加の安全マーカーとして、それらワクチン細胞は、それらワクチン細胞がインビボにおいて選択的に殺されることを可能にするチミジン・キナーゼ遺伝子を与えられる。免疫剌激活性をもつ遺伝子の組合せ発現は、従来技術の腫瘍細胞ワクチンに比較してそのワクチン効果を改善し、そして生きた腫瘍細胞ワクチンは、増殖することができない細胞から成るワクチンよりも有効である。本ワクチンは、癌患者の遺伝子治療における使用を意図される。

Description

【発明の詳細な説明】 腫瘍疾患の治療のための生ワクチン 説明 本発明は、腫瘍疾患に対する生ワクチン、その製造及び使用に関する。利用分 野は、医薬及び遺伝子工学である。 腫瘍疾患に対するワクチンは、長年にわたり知られている。ひじょうに頻繁に 臨床的に使用されてきた古典的なワクチンは、照射された腫瘍細胞とアジュバン ト、例えば、バチルス・カルメット−ゲリン（Bacillus Calmette-Guerin(BCG) ）又はコリネバクテリウム・パルバム（Corynebacterium parvum）の混合物から 成る。20年間の臨床的評価の後、これらのワクチンは再生産効果をもたないこと と要約されることができる（レビュー記事：Oettgen，H．及びOld，L.，History of Cancer Immurotherapy，in: Biological Therapy of Cancer，Eds．V．devi ta，S．Hellman及びS．Rosenberg，J．B．Lippincott Company 1991，p.87-119 参照）。動物モデルからの最近の結果は、いくつかのサイトカイン遺伝子（例え ば、IL２，IL４，IL７，TNF，IFNγ）の転移及び発現が、インビトロではなくイ ンビボにおいて遺伝子修飾された腫瘍細胞の成長を抑制することができることを 示した。この腫瘍成長の阻止は、トランスフェクトされたサイトカインにより誘 発された免疫応答の結果である。多くの場合、遺伝子トランスフェクトされた腫 瘍は、完全に拒絶される（レビュー記事：Blankenstein，Eur．J．Cancer，1994 出版中、参照）。類似のやり方で、Ｂ７分子、すなわち、Ｔ−リンパ球について の同時剌激活性をもつ細胞表面タンパク質の発現が、腫瘍成長を阻止することが できる。しかしながら、治療的に重要な問題は、遺伝 子トランスフェクトされた腫瘍の拒絶が、その腫瘍細胞のための長期持続性免疫 学的記憶を導くかどうかである。これは、遺伝子トランスフェクトされた腫瘍を 拒絶した動物が、遺伝子トランスフェクションにより投与されていない腫瘍細胞 をその後にも拒絶することができたという事実により認識されるであろう。これ は、限定された程度においてもそうであり、そして現在、いくつかの臨床研究が 、単一のサイトカイン遺伝子を提供された照射腫瘍細胞がワクチンとして使用さ れているという上記発見に基づいて実施されている（レビュー記事：Tepper，R. 及びMule，J.，1994 Hum，Gene The rapy 5，153-164参照）。これらの研究は、 遺伝子治療研究といわれる。ウイルス修飾された腫瘍特異的ワクチンは、DE-OS 38 06 565中に記載されており、これは、照射により及び滅菌条件下NDVウイルス により不活性化されているその後に治療されるべき患者の手術調製物からの腫瘍 細胞から成る。このワクチンの適用は、全身的に投与されたサイトカインと、そ して場合により、止血剌激性因子及び／又は抗抑制剤と共にそれを使用すること により、DE-OS 39 22 444に従って改善された。 先に使用されたワクチンの欠点は、それらの低い有効性である。この主張は、 一方において、単一のサイトカイン遺伝子によりトランスフェクトされた腫瘍細 胞のワクチン効果が、腫瘍細胞／アジュバント混合物により達成されることがで きるもの以下であることを示した先の発見の中の１に基づく（Hock et al.，199 3，Cancer Res．53，714-716）。上述のように、腫瘍細胞／アジュバント混合物 は、臨床的に有効でないと示されている。他方において、単一サイトカインの発 現又はＢ７分子単独の発現の両者のいずれも、その腫瘍の信頼できる拒絶を導か ない。すなわち、遺伝子トランスフェクトされた細胞を注射されたマウスの特定 のパーセンテージが、その サイトカイン生産の損失にしばしば関連する潜伏期間後に腫瘍を顕出する（Hock et al.，1993，PNAS 90，2774-2778）。これは、免疫刺激活性をコーディング する単一遺伝子によりトランスフェクトされている腫瘍細胞が、生きた腫瘍細胞 ワクチンとして使用されることを阻止する。 本発明の目的は、知られたワクチンの欠点、すなわち、増殖することができな い腫瘍細胞を注射しなければならない必要性と共にあるそれらの不適切な有効性 を排除することである。体内に既にある腫瘍細胞に向けての免疫系を剌激する遺 伝子操作により生ワクチンを開発することが、意図される。 本目的は、クレームに記載のワクチンにより達成される；そのサブクレームは 、好ましい態様である。 それは、クレーム12に請求するような自己又は同種系内で生産され、そしてそ れは、クレーム13〜15において請求されるように使用される。 遺伝子修飾された腫瘍細胞をもつ腫瘍疾患の治療のための本発明に係る生ワク チンは、サイトカイン遺伝子及び免疫刺激性膜タンパク質遺伝子を含んで成る。 増殖することができる自己又は同種腫瘍細胞であってさらに１以上の自殺遺伝子 を含むことができるものが、使用される。 サイトカインは、免疫細胞の分化、増殖及び活性化を誘導することができる物 質として理解される。本発明に従えば、生ワクチンは、そのサイトカイン遺伝子 として、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−７ 、インターフェロン又は顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子（GM-CSF）の ための遺伝子を含み；免疫剌激性膜タンパク質遺伝子は、Ｔ細胞を活性化する遺 伝子、特に、Ｔ細胞同時刺激性分子Ｂ７のための遺伝子である。 自殺遺伝子は、上記活性物質を毒性生成物に変換する物質である；単純ヘルペ スウイルスのチミジン・キナーゼ遺伝子（HSV-TK遺伝子）又はシトシン・デアミ ナーゼ遺伝子が特に好ましい。 生ワクチンは、特に、腫瘍疾患の治療のための治療剤として使用される。 本ワクチンのための出発点は、いずれかの望ましい腫瘍細胞（自己又は同種） であることができる。３つの治療用遺伝子がこの細胞内に導入され；この遺伝子 移入は、いずれかの望ましい方法（例えば、レトロウイルス遺伝子移入）による ものであることができる。上記３つの治療用遺伝子の各々が、構成的に作用する プロモーター（例えば、Moloney ネズミ白血病ウイルスのロング・ターミナル・ リピート、伸長因子１、サイトメガロウイルス）に結合される。３つの遺伝子の 全てが、その腫瘍細胞のゲノム内に安定して、そして室温において組み込まれる 。この３つの治療用遺伝子は、場合により、１のベクター上に存在し、又は２つ のベクターにわたり分布されることができる。首尾よい遺伝子移入は、それらの ベクター上にさらに存在するポジティブ選択マーカー（例えば、ネオマイシン遺 伝子、ハイグロマイシン遺伝子）により確立される。 第１の遺伝子はサイトカイン遺伝子（例えば、IL４，IL７）である。ほとんど のサイカインは、多くの機能をもち、そしてさまざまな免疫細胞の分化、増殖及 び活性化を誘導する。インビボにおける腫瘍細胞によるトランスフェクトされた サイトカイン遺伝子の局所的分泌は、炎症反応及びその腫瘍に対する免疫細胞（ とりわけ、Ｔリンパ球）の活性化を導く。この結果は、全てではないがほとんど の場合に、その腫瘍の拒絶である。サイトカイン遺伝子でトランスフェクトされ た腫瘍を拒絶した動物の中のほんのいくつかが、その腫瘍に対して免疫をもつ。 第２の遺伝子は、免疫刺激活性をもつ細 胞表面タンパク質（例えば、Ｂ７）をコードする。Ｂ７は、通常、抗原提示細胞 上で発現され、そしてそのリガンドCD28又はCTLA−４との相互作用を介して、Ｔ リンパ球の活性化のための同時刺激性シグナルとして役立つ。Ｂ７の非存在中、 そのＴ細胞レセプターを介して剌激されたＴリンパ球は、アネルギーの状態にも っていかれる。Ｂ７遺伝子によりトランスフェクトされた腫瘍細胞は、インビボ においてＴ細胞仲介免疫応答を刺激する。しかしながら、これは、しばしば、そ の腫瘍の拒絶を導き、そして中程度のワクチン効果をもたらす。第３の遺伝子は 、いわゆる、自殺遺伝子（例えば、単純ヘルペル・ウイルスのチミジン・キナー ゼ遺伝子、HSV-TK）である。このHSV-TKは、非毒性ガンシクロビルを毒性生成物 に変換することができる。これは、HSV-TKを発現する腫瘍細胞が、正常組織にダ メージを与えずに全身的ガンシクロビル投与により選択的に殺されることを許容 する。HSV-TK遺伝子は、その生きた腫瘍細胞ワクチンをスイッチ・オフするため の追加の安全マーカーとして役立つ。 遺伝子工学により作られた本発明に係る腫瘍細胞ワクチンは、増殖することが できない細胞が使用される場合、（例えば、照射又はマイトマイシンＣ処理によ り）その効果を失う。ヒトについて先にテストされたワクチンにおいては、その 腫瘍細胞は、腫瘍としてのワクチン細胞の成長が安全に対するリスクを提示して 以来、照射されてきた。単一遺伝子によりトランスフェクトされた腫瘍細胞とは 反対に、サイトカイン遺伝子とＢ７遺伝子の２重遺伝子移入は、100％の腫瘍拒 絶を導く。本発明により達成されることができる免疫剌激活性をコードする２つ の遺伝子のこの驚くべきシナジー効果は、ガンシクロビルによるHSV-TK遺伝子の 活性化のオプションによりさらに保護されることができる生細胞ワクチンの使用 を可能にする。本ワクチンのさらなる顕著な特徴は、サイトカインとＢ７遺伝子 の移入のために、それが、その２つの遺伝子の中の１だけでトランスフェクトさ れた細胞に比べてより高い効果を獲得しているということである。 以下の実施例によりさらに詳細に本発明を説明するつもりである。 実施例 １．腫瘍細胞内でのサイトカイン、Ｂ７とHSV-TK遺伝子の発現 サイトカイン、Ｂ７とHSV-TK遺伝子のためのcDNAsを、好適なプライマーを使 用してポリメラーゼ連鎖反応により単離し、そして適切な（レトロウイルス）ベ クター内にクローン化することができる。レトロウイルスは、知られたパッケー ジング細胞系（Pa317，Psi２）の助けを借りて生産され、そしてマウス腫瘍細胞 は、これらで感染される（形質細胞腫 J558Lと乳腺癌腫 TSA）。首尾よい遺伝子 移入は、そのベクター上にある選択マーカー（ネオマイシン遺伝子、ハイグロマ イシン遺伝子）により保証される。サイトカイン遺伝子の発現は、商業的に利用 可能なELISAs又は生物学的検定により検出される。IL４は例えば、CT.4S 細胞の IL４−依存性増殖により、IL７は、セルラインIXNのIL７−依存性増殖により、 測定されることができる。Ｂ７発現は、蛍光標識された抗−Ｂ７抗体でそれら腫 瘍細胞を染色することにより測定される。HSV-TK遺伝子の発現は、10〜14日間の 期間にわたりその培養基にガンシクロビル（１〜10μｇ／ml）を添加し、そして その腫瘍細胞の死を測定することにより、チェックされる。IL４／IL７又はＢ７ のいずれかだけ又は両遺伝子を共に発現するセルラインを作る。これらの細胞は 、さらにHSV-TK遺伝子を含む。 ２．IL４／IL７とＢ７による腫瘍細胞ワクチンの拒絶 400万の、J558L，J558-IL7，J558-B7及びJ558-IL4／B7並びに100万の、TSA，TSA -IL7，TSA-B7及びTSA-IL7／B7腫瘍細胞を、６〜８週齢の同系BALB／ｃマウス内 に皮下注射し、そしてその腫瘍増殖を、少なくとも６ヶ月の時間期間にわたりモ ニターする。非遺伝子トランスフェクト又は疑似トランスフェクト腫瘍細胞は、 全ケースにおいて腫瘍として成長する。単一遺伝子でトランスフェクトされた腫 瘍細胞だけを受容したマウスの17.6〜65％も腫瘍を顕出した。上記２つの腫瘍モ デル（J558LとTSA）のいずれにおいても、単一ケースにおいてさえも、腫瘍とし て成長することができるIL４／IL７とＢ７−同時トランスフェクト腫瘍細胞は存 在しなかった。全部で100匹のマウスを分析した。結果を表１中に要約する。 ３．ガンシクロビルによる腫瘍細胞ワクチンの拒絶 サイトカイン／Ｂ７−遺伝子でトランスフェクトされた腫瘍細胞は確かに拒絶 されるので、HSV-TK遺伝子マーカーを、HSV-TK遺伝子によりだけ標識されていた TSA細胞内での安全マーカーとしてテス トした。100万のTSA又はTSA-TK細胞を、BALB／ｃマウス内に皮下注射した。１日 後、マウスを、150mg／kg体重のガンシクロビル又は生理食塩水で、５日間の時 間期間にわたり腹膜内処置した。ガンシクロビル処置は、親TSA細胞の腫瘍成長 に対して全く影響しなかった（10／10腫瘍マウス）。TSA-TK細胞は、非処置マウ スにおいて腫瘍として成長したが（10／10腫瘍マウス）、ほんどのケースにおい て、ガンシクロビル処置マウスにおいて排除された（２／10腫瘍マウス）。従っ て、HSV-TK遺伝子は、既に、安全マーカーとして単独で作用し、そして上記のシ ナジー・サイトカイン／Ｂ７効果を伴って、その生きた腫瘍細胞の信頼できるス イッチング・オフを保証するはずである。 ４．遺伝子修飾腫瘍細胞ワクチンの効果 BALB／ｃマウスを、400万の細胞により皮下的に免疫感作した。J558L，J558-I L4，J558-B7，J558-IL／B7細胞で免疫感作された群あり、そして１群を、J558L ／ｃparvumアジュバントで免疫感作した。照射により増殖できなくされていたJ5 58L細胞を除き、全ての細胞が生きたまま注射された。３週間後、マウスを、400 万の親腫瘍細胞（接種腫瘍）を対側に注射、そしてその腫瘍成長をモニターした 。表２中に示す結果は、J558-IL4／B7細胞のワクチン効果が、J558-IL4又はJ558 -B7細胞の、あるいは、腫瘍細胞／アジュバント混合物の効果よりも大きいこと を示している。 ５．照射腫瘍細胞に比較した生のワクチン効果 患者に対して先に使用されていた腫瘍細胞ワクチンの全ては、安全性のために 照射された形態で使用されてきた。なぜなら、単一の遺伝子でトランスフェクト された腫瘍細胞又はアジュバントと混合された腫瘍細胞が、しばしば、腫瘍とし て成長するからである。上記の３倍遺伝子トランスフェクトされた腫瘍細胞が確 かに拒絶されるという発見は、それらが生ワクチンとして使用されることを可能 にする。結果として、そのワクチンの効果は、高められる。すなわち、BALB／ｃ マウスが、400万の生きた又は照射されたJ558-IL4／B7細胞で免疫感作され、そ して400万の親Ｊ558細胞で３週間後に対側に注射される場合、照射細胞で免疫感 作されたマウスの60％（６／10）が、腫瘍を顕出したが、生きた細胞により免疫 感作されたマウスの０％（０／１０）が、腫瘍を顕出しなかった。 ７．腫瘍効果 IL-7／B7.1を同時発現する細胞の種痘効果は、たった１の個々の遺伝子でトラ ンスフェクトされた細胞よりも高く、そして腫瘍細胞／アジュバント（C．parvu m）混合物よりも高い。 IL-7／B7.1同時トランスフェクトTSA細胞の種痘強さと、臨床的 に広くテストされたアジュバントC．parvumとを、又は非増殖性TSA細胞とを、比 較するために、マウスの群を、2.5×10⁵生TSA-IL7，TSA-B7.1，TSA-IL7／B7.1又 はC．parvumと混合された元の細胞で、免疫感作した。さらに、マウスを、照射 された（5000又は10,000 rad）TSA又はTSA-IL7／B7.1細胞又はマイトマイシンＣ （60μ／ml）で処理されたTSA細胞で免疫感作した。再照合として、無腫瘍マウ スを2.5×10⁵非修飾細胞（“接種”腫瘍）で別の部位に２週間後に注射した。図 １は、腫瘍、そしてすなわち、ワクチン細胞なしで成長するもの及びその後に投 与された親細胞なしで成長するものの頻度を示す。ワクチン細胞の腫瘍成長は、 その細胞が10,000radで照射されたとき又はIL-7／B7で同時トランスフェクトさ れた細胞が免疫感作のために使用されたとき、全てのマウスにおいて阻止された 。10,000radで照射された親細胞で免疫感作されたマウスの80％（８／10）と、5 000radで照射された親細胞で免疫感作されたマウスの30％（３／10）が、その後 に投与された親細胞からの腫瘍を顕出した。後者の群において、20％（２／10） が、そのワクチン細胞からの腫瘍を顕出した。同様のやり方で、マイトマイシン Ｃで処理されたTSA細胞で免疫感作されたマウスの80％（８／10）が、腫瘍を顕 出した（20％原発性腫瘍、60％“接種”腫瘍）。腫瘍細胞／C．parvum群におい ては、そのマウスの25％（５／20）が、そのワクチン細胞からの腫瘍を顕出し、 そして５％（１／20）が接種細胞から腫瘍を顕出した。TSA-B7.1ワクチン細胞を 拒絶したマウス（60％，12／20）の中で、５％（１／20）が、“接種”腫瘍を顕 出した。これに反し、TSA-IL7で前処理されたマウスが、それらのケースの25％ （５／20）を顕出し、そして５％（１／20）が、そのワクチン細胞からの腫瘍を 顕出した。一方、それら腫瘍細胞により発現されたＢ７は、比較的僅かな腫瘍拒 絶であるが、良好なワクチン 効果を導いた。一方、IL−７は、ワクチン細胞の改善された拒絶であるが、より 僅かなワクチン効果をもたらした。それ故、Ｂ7.1とIL−７は、異なる及び補完 的なやり方で、免疫系を活性化する。TSA-IL-7／B7.1ワクチン細胞だけが、全マ ウスにおいて完全に拒絶され、そしてそのマウスの19／20（95％）においてその 後に投与された親細胞の腫瘍成長に対して保護されたので、IL−７とＢ７は、シ ナルジスティックに作用する。 トランスフェクトされた腫瘍細胞を用いた上述の免疫感作実験の全てを、生細 胞を用いて実施した。さらに、その免疫感作のために使用された生きたTSA-IL-7 ／B7細胞の種痘効果を、注射前に10,000radで照射された同一細胞の効果と比較 した。生きた細胞で免疫感作されたマウスの95％（19／20）であるが、照射され た細胞で免疫感作されたマウスのたった30％（３／10）が、“接種”腫瘍を拒絶 することができた（図１）。それ故、上記ワクチンの効果は、IL−７とＢ７のシ ナジー効果及び増殖することができる細胞の使用に因る。 ８．トランスフェクト腫瘍におけるＴリンパ球の表現型の説明及び裸及びSCIDマ ウスにおける腫瘍セルラインの成長 IL-7／B7.1誘導腫瘍拒絶の細胞機構を調べるために、腫瘍浸潤Ｔ細胞の免疫蛍 光分析を実施した。このために、親TSA細胞、TSA-IL７細胞、TSA-B7.1細胞及びT SA-IL7／B7.1細胞を、Balb ｃマウスに皮下注射し、そして６，８と10日後に、 その腫瘍小結節を単離し、単一細胞懸濁液を調製し、そして細胞を、CD４，CD８ ，CD25及びCD28に対するmAbsを用いた免疫蛍光を使用して染色した。その浸潤細 胞の中のCD４⁺とCD８⁺細胞のパーセンテージを、表４中に示す、一方、CD28⁺とC D25⁺（ｐ５５ IL２レセプター）で同時発現されるCD４⁺とCD８⁺細胞を、表５中 に示す。CD４⁺とCD８⁺Ｔ細胞は 、共にその親腫瘍と比較してTSA−Ｂ７中で増幅される。TSA−IL７腫瘍において は、CD４⁺Ｔ細胞の増加が観察された。Ｔ細胞（CD４⁺とCD８⁺）は、IL７／Ｂ７ トランスフェクト腫瘍内でさらに増加されなかった。しかしながら、Ｔ細胞亜型 マーカーCD４及びCD８並びに活性化マーカーCD28及びCD25についての２重蛍光染 色は、IL７又はＢ７トランスフェクト腫瘍内で表現型として異なるＴ細胞を現し た。TSA−Ｂ７腫瘍においては、上記Ｔ細胞（CD４⁺とCD８⁺）の高パーセンテー ジが、CD28⁺であるが、ほとんどのＴ細胞は、CD25^-である。これに反し、TSA−I L７腫瘍におけるＴ細胞は、主にCD25⁺であり、そしてCD28^-は、本質的に存在し ない。比較として、ほんの少しのCD28⁺とほとんどないCD25⁺Ｔ細胞が、親腫瘍内 に検出された。TSA-IL７／Ｂ７腫瘍においては、ほとんどのCD４⁺とCD８⁺細胞が CD25⁺とCD28⁺であることは、重要なことである。IL７／Ｂ７同時トランスフェク トされた細胞だけが、確かに拒絶され、そしてひじょうに強い全身的腫瘍免疫性 を誘導するという事実（上記）との関係を考慮すると、それら腫瘍細胞による局 所的IL−７分泌及びＢ７発現は、その腫瘍に浸潤するリンパ球を活性化するため に特に好適である。IL７とＢ７の協調性の腫瘍抑制活性が、全てＴ細胞に因るこ とを立証するために、IL−７，Ｂ７，IL−７／Ｂ７でトランスフェクトされたTS A細胞、そして比較として、親で又は対照ベクターでトランスフェクトされたTSA 細胞を、裸及びSCIDマウス内に注射し、そしてその腫瘍成長動態を比較した。表 ６中に見ることができるように、IL−７分泌又は腫瘍細胞によるＢ７発現又はそ の両方のいずれも、IL−７及びＢ７誘導抗腫瘍免疫応答のためにＴ細胞が絶対に 必要であることを証明する免疫不全マウス株中の１において、腫瘍成長を遅らす ことができなかった。 上記細胞（2.5×10⁵）を、上記マウス株に皮下注射した。腫瘍の発生率及び腫 瘍の潜伏（カッコ内）を示している。

【手続補正書】 【提出日】１９９７年２月２４日 【補正内容】 請求の範囲 １．遺伝子修飾腫瘍細胞による腫瘍疾患の治療のための生ワクチンであって、 −サイトカイン遺伝子及び −免疫刺激性膜タンパク質遺伝子、 を含んで成る生ワクチン。 ２．自己又は同種系内での請求項１に記載の生ワクチンの製造方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 39/00 Ａ６１Ｋ 37/50 // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．遺伝子修飾された腫瘍細胞による腫瘍疾患の治療のための生ワクチンであ って、 −サイトカイン遺伝子及び、 −免疫剌激性膜タンパク質遺伝子、 を含んで成る生ワクチン。 ２．請求項１に記載の生ワクチンであって、その腫瘍細胞が、１又は数個の自 殺遺伝子をさらに含む生ワクチン。 ３．請求項１又は２に記載の生ワクチンであって、その腫瘍細胞が、 −サイトカイン遺伝子、 −免疫刺激性膜タンパク質遺伝子及び、 −自殺遺伝子、 を含んで成る生ワクチン。 ４．請求項１〜３のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、増殖すること ができる自己又は同種腫瘍細胞が、その腫瘍細胞として使用されるような生ワク チン。 ５．請求項１〜４のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、そのサイトカ イン遺伝子が、トランスフェクションにより得られる生ワクチン。 ６．請求項１〜５のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、サイトカイン が、免疫細胞の分化、増殖及び活性化を誘導する物質である生ワクチン。 ７．請求項１〜６のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、その腫瘍細胞 が、そのサイトカイン遺伝子として、インターロイキン２、インターロイキン４ 、インターロイキン７、インターフェロ ン又は顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子（GM-CSF）のための遺伝子を含 むような生ワクチン。 ８．請求項１〜７のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、その免疫剌激 性膜遺伝子が、Ｔ細胞を活性化するタンパク質をコードするような生ワクチン。 ９．請求項１，３又は８のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、その免 疫刺激性膜タンパク質遺伝子が、Ｔ細胞同時刺激性分子Ｂ７の遺伝子であるよう な生ワクチン。 10．請求項１〜３のいずれか１項に記載の生ワクチンであって、自殺遺伝子が 、その活性物質を毒性生成物に変換する物質であるような生ワクチン。 11．請求項１〜３のいずれか１項又は10に記載の生ワクチンであって、その自 殺遺伝子が、単純ヘルペス・ウイルスのチミジン・キナーゼ遺伝子（HSV-TK）又 はそのシトシン・デアミナーゼ遺伝子であるような生ワクチン。 12．自己又は同種系内での、請求項１〜11のいずれか１項に記載の生ワクチン の製造方法。 13．治療剤としての使用のための請求項１〜11のいずれか１項に記載の生ワク チン。 14．腫瘍疾患の治療のための、請求項１〜11のいずれか１項に記載の生ワクチ ンの使用。 15．腫瘍疾患の治療のための請求項１〜11のいずれか１項に記載の生ワクチン の製造方法。