JPH10504014A

JPH10504014A - Ｓｓｉチルホスチンと薬剤組成物

Info

Publication number: JPH10504014A
Application number: JP7515214A
Authority: JP
Inventors: レヴィッツキ，アレクサンダー; ノボグロドスキー，エイブラハム; ガジット，アビブ
Original assignee: イッサム・リサーチ・ディベロープメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブル・ユニヴァーシティ・オブ・エルサレム; エムオーアール・リサーチ・アプリケーションズ・リミテッド; レヴィッツキ，アレクサンダー
Priority date: 1993-11-24
Filing date: 1994-11-23
Publication date: 1998-04-14
Also published as: CA2177289A1; AU1293595A; DE69427130T2; WO1995014464A1; EP0731697A1; EP0731697B1; DE69427130D1; AU702800B2; IL107736A; ATE200618T1; IL107736A0

Abstract

(57)【要約】 SSIチルホスチンは、LPS 誘因毒性、TNF α誘因毒性、TNF αレベルにおけるLPS 誘因憎加、一酸化窒素生成の防止、および敗血症のショックならびに様々な免疫疾患の治療に有用である。特徴は新規化合物および薬剤組成物であり、これらの両方ともここに記載した予防方法および／または治療方法ならびに新規化合物を作る方法において使用されうる。

Description

【発明の詳細な説明】 SSI チルホスチンと薬剤組成物関連する出願本出願は引用により本明細書中に図面を含め全て取り入れられた、1993年11月 24日に出願されたイスラエル特許出願第107,736 号からの優先権を35 U.S.C．第 119 条の下に主張するものである。発明の分野本発明は概して化学、生化学、医学の分野および更に詳細にはチルホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）と炎症性疾患治療の分野に広く関連するものである。発明の背景以下の背景となる技術に関する記述は、本発明に対する先行技術として認められるものではない。グラム陰性細菌による全身性感染は敗血症ショックと呼ばれる低血圧症と多臓器不全をまねくかも知れない（モリソン，D.C.(Morrison，D.C.)とライアン，J. L.(Ryan，J.L.)，Ann．Rev．Med．38: 417-432，1987、これは全ての図面を含むその全てが本明細書に引用して取り入れられている）。グラム陰性敗血症ショックの臨床上の症候は、グラム陰性細菌の最も外側の膜にある複雑な糖脂質成分であるリポ多糖(LPS)またはエンドトキシンによる、主にあるいは専ら宿主の免疫系、とりわけマクロファージの過剰な活性化に起因するようである（ギュンター（Guenter）ら，26 J．Appl．Physiol.，780，1969;レッツ(Raetz)ら，FASEB J. ，5: 2652-2660，1991）。 LPS は、TNF-α、IL-I、IL-6並びにプロスタノイド、ロイコトリエン（ビュートラー(Beutler)とセラミ(Cerami)、57 A．Ann．Rev．Biochem.，505，1988）及び、一酸化窒素（ディング(Ding)ら、141 J．Immunol.，2407，1988 及びツァン (Zang)とモリソン(Morrison)、177 D.C．J．Exp．Med.，511，1993）などのサイトカインを生産することによって働く、免疫細胞主にマクロファージに対する強力な多面的刺激因子である。最近の報告では、LPS によって処理したネズミのマクロファージにおける41kDa タンパク質のチロシンリン酸化の活性化（ウェインスタイン，S.L.(Weinstein，S.L.)ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA，88: 414 804152，1991 ）及びLPS がp56 Lck のリン酸化を誘導することを示している（コーコラン(Corcoran)ら、J．Biol．Chem.，268: 20725-20728，1993）。 LPS によるサイトカイン放出誘導とりわけTNF-αとIL-1の放出誘導は、LPS によって誘導される致死毒性及びグラム陰性細菌による敗血症の病態生理学においておそらく中心的な事象であろう（トレーシーK.J．(Tracey K.J.)ら、Science 234: 470-474，1986）。成人呼吸困難症候群及び血管漏出症候群を含むLPS の毒性の発現の多くは、それぞれ互いに相乗的な効果を持つTNF-α（腫瘍壊死因子- α）とIL-1βによって誘導することができる（オクサワ(Okusawa)ら、81 J．C1 in．Invest．1162，1988; エバレット(Everaedt)ら、163 Biochem．Biophys．Re s．Commun．378，1989）。過剰もしくは不適切なサイトカインの生産は、リューマチ性関節炎、乾癬、AIDSに関連した悪液質などの病原性の炎症状態とも関連している。以下の文献はリューマチ性関節炎、乾癬、AIDSに関連し、また全ての図面を含むその全てが本明細書に引用により取り入れられている：エリオット(Ell iott)とミナミ(Minami)、104 Int'l Archives of Allergy and Immun.，112，19 94 ；ブロクサム(Bloxham)、9 Expert Opin．Invest．Drugs，907，1994 ；ボニファティ(Bonifati)ら、19 Clin．Exp．Dermatol．383，1994 ；タケマツ(Takem tsu)ら、5 J．Dermatol．Treat．133，1994 ；オークラスト(Aukrust)ら、169 J ．of Infectious Diseases 420，1994 ；グラス(Glass)ら、43 Neurology 2230 ，1993 ；デズーブ(Dezube)ら、6 J．Acquired Immune Deficiency Syndrome 78 7，1993。一酸化窒素、即ち反応性の窒素中間産物はマクロファージによる抗腫瘍作用と寄生物殺傷作用のいくつかの仲介に関係づけられてきた（ストゥール，D.J．(St uehr，D．J.)とマリエッタ，M.A.(Marietta，M.A.)、J．Exp．Med.，169: 1543- 1555，1989）。LPS の毒性発現のいくつかにはＮＯが介在しているかも知れない（キルボーンR.G．(Kilbourn，R.G.)、Proc.Natl．Acad．Sci．USA，87，3629-3 632，1990 ）。LPS は、それ自身あるいはIFN-γとの組み合せによってマウスの腹膜マクロファージにおいて一酸化窒素を活性化することが示されている（ディングA.H．(Ding，A.H.)、J．Immunol.，141: 2407-2412，1988.ツァンとモリソン、J．Immunol.，150: 1011-1018，1993 ）。ＮＯの生産はLPS によって誘導され、いくつかのトリホスチンによって阻害される（ツナワキ(Tsunawaki)とネイサン(Nathan)、259 J．Biol．Chem．4305，1984 ）。チルホスチンはタンパク質チロシンキナーゼの特異的な阻害剤であり、チロシンキナーゼの基質結合部位を妨害するように設計された。したがって、チルホスチンは異なるタンパク質チロシンキナーゼ及び別々の生物学的応答を選択的に阻害する能力を発揮する。チルホスチンはアレン(Allen)ら、Clin．Exp．Immunol. ，91: 141-156(1993);アナフィ(Anafi)ら、Blood 82: 12: 3524-3529(1993)；ベイカー(Baker)ら、J．Cell Sci．102: 543-555(1992); ビルダー(Bilder)ら、Am er．Physiol．Soc．pp．6363-6143: C721-C730(1990);ブラントン(Brunton)ら、 Proceedings of Amer．Assoc．Cancer Rsch．33: 558(1992);ブリッカート(Bryc kaert)ら、Experimental Cell Research 199: 255-261(1992); ドング(Dong)ら、J．Leukocyte Biology 53: 53-60(1993);ドングら、J．Immunol．151(5): 271 7-2724(1993);ガズィット(Gazit)ら、J．Med．Chem．32: 2344-2352(1989); ガズィットら、J．Med．Chem．36: 3556-3564(1993); カウアー(Kaur)ら、Anti-Ca ncer Drugs 5: 213-222(1994);カウアーら、キング(King)ら、Biochem．J．275: 413-418(1991);クオ(Kuo)ら、Cancer Letters 74: 197-202(1993);レヴィツキ( Levitzki)，A.、The FASEB J．6: 3275-3282(1992); ライアル(Lyall)ら、J．Bi ol．Chem．264: 14503-14509(1989); ピーターソン(Peterson)ら、The Prostate 22: 335-345(1993);ピルマー(Pillemer)ら、Int．J．Cancer 50:80-85(1992); ポスナー(Posner)ら、Molecular Pharmacology 45: 673-683(1993);ランドゥ(Ra ndu)ら、Biol．Pharmacology 44(5): 881-888(1992); サウロ(Sauro)とトーマス (Thomas)、Life Sciences 53: 371-376(1993);サウロとトーマス、J．Pharm．an d Experimental Therapeutics 267(3): 119-1125(1993);ウォルブリング(Wolbri ng)ら、J．Biol．Chem．269(36): 22470-22472(1994); 米国特許第5,217,999 号 ; 及びヨネダ(Yoneda)ら、Cancer Research 51:4430-4435（1991）において説明され、全ての図面を含むその全てが本明細書に引用により取り入れられている。 LPS はマクロファージにおいてタンパク質のチロシンリン酸化（ウェインシュタイン(Weinstein)ら、85，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 4148，1991 ）及びエイコサノイドの生産（グレイザー(Glaser)ら、45 Biochem．Pharmacol．711，19 93）を誘導し、いくつかのチルホスチンとハービマイシンＡはこれらの事象を阻害する（ウェインシュタインら、前出；グレイザーら、前出）。LPS はマクロファージにおいて腫瘍細胞の殺傷能を誘導し、これらの腫瘍殺傷能はいくつかのチルホスチンによってブロックすることが出来る（ドングら、53 J．Leukocyte Bi ol．53，1993）。TNF-α（コーン(Kohn)ら、267 Biochem．J.，91，1990;エヴァンス(Evans)ら、75 Blood 88，1990;ヴィーター(Vietor)ら、268 J．Biol．Chem ．18994，1993）及びIL-1β（ムノス(Munoz)ら、22 Eur．J．Immunol．1391，19 92; ガイ(Guy)ら、266 J．Biol．Chem．14343，1991）もまた標的細胞におけるチロシンリン酸化を誘導し、このリガンドによって誘導されたシグナルは特定のチルホスチン（ヤイッシュ(Yaish)ら、Science，1988;レヴィツキ(Levitzki)、 6 FASEB J．3275，1992）、ハービマイシンＡ（ドングら、前出；イワサキ(Iwas aki)ら、298 FEBS letters 240，1992）及びジェニスタイン(genistein)（グレイザーら、前出; コイン(Coyne)とモリソン、173 Biochem．Biopghys．Res．Com mun．718，1990 ）などのPTK 阻害剤によってブロックされる。発明の概要本発明は種々の疾恵、特に敗血症ショック、リューマチ性関節炎、乾癬及びHI V 感染による合併症などの炎症性疾患の予防及び／または治療に有用な製品及び方法に関連するものである。これらの疾患は、種々の疾患において主要な役割を果たすTNF-αや他のサイトカインの生産を引き起こす可能性をもつ多様な因子（例えばLPS）による免疫系の過剰な活性化を含む。特筆すべきは新規な化合物と薬学上の組成物であり、それらはいずれも本明細書で説明する予防法及び／または治療法、ならびに新規な化合物を製造する方法において用いてもよい。したがって、提供される発明は炎症性疾患の予防または症状の緩和に有用である。この新規な化合物中の有効成分は特定のチルホスチン化合物であり、そのいくつかは新規なものであり、またいくつかは以前に記載されたものである。異なるファミリー由来の種々のチルホスチンを、病原性炎症反応の様々な状態を測定するアッセイにおいて試験した。チルホスチンの投与は、LPS を与える前及びLPS 投与後２時間までに与えたどちらの場合も、ネズミにおけるLPS によって誘導される致死的毒性を顕著に減少させる。テストしたチルホスチンは以下の第１表及び実施例に示されている。LPS によって誘導される毒性からの保護効果は、これらの因子がマクロファージの腫瘍壊死因子α（TNF α）及び一酸化窒素の生産、並びにin vivo でのTNF αの生産をブロックする能力に相関している。この阻害効果はチルホスチンがネズミのマクロファージにおけるp42^MAPKタンパク質基質のチロシンリン酸化を阻害する能力と相関がある。ある種のチルホスチンは一酸化窒素の生産やチロシンリン酸化などの限定されたクラスのin vitro活性を阻害するこどが示されている。本出願人はここでLPS によって誘導された毒性を防ぎ、LPS によって誘導されたTNF-αレベルの向上を低下させ、TNF αによって誘導された毒性を防ぐ場合にチルホスチンが示すin v itroでの有効比を示し、かつ上述のin vitro及び／またはin vivo の活性を有するあるクラスのチルホスチンを同定し、また本明細書で説明する新規なチルホスチンを同定した。多くの急性及び慢性の病原性炎症状態は過剰のまたは不適切なサイトカイン生産、特にTNF-αの生産を伴ってきた。数多くの治療用物質が、不適切なサイトカイン応答に伴う症状を減少させるためにヒトにおいてい試験されてきた。本発明のチルホスチンはそれらが経口投与され、またHAMAなどの好ましくない抗治療免疫応答を活性化しないと考えられるため、例えば抗TNF モノクローナル抗体よりも優れているかも知れない。それに加え、本発明のチルホスチンは、基本的にその作用様式が過剰なサイトカインを結合し除去するためのスポンジとして働く事である生物学的製剤よりも、ずっと少量の投与量で活性となることを可能とするような触媒性阻害剤である。したがって第一の側面では、本発明は生理学的に受け入れられる担体または希釈剤及び治療上有効な量のSSI チルホスチン化合物を含む薬学的組成物に関連するものである。「生理学的に受け入れられる担体または希釈物」とは、非毒性の物質を意味し、また当業者には良く知られた用語である。生理学的に受け入れられる担体または希釈剤の数例が本明細書に記載されている。好ましい態様では、担体または希釈剤はトリス緩衝液のように溶液のpHを緩衝するために通常用いられるものではない物質である。「治療上有効な量」とは、本発明の薬剤が一般に器官不全、痛みを伴う組織の腫れ、悪液質、ショック、低血圧などの炎症性疾患を伴う症状の軽減、あるいはそうした疾病の原因あるいはそれに寄与するものの生産、例えば一酸化窒素生産、過剰のチロシンリン酸化またはサイトカイン（例えばTNF-α）の生産をある程度まで阻害することを一般に指す「治療効果」を有する事を意味する。特に治療効果は死または臓器障害の予防または遅延を含む。治療として有用なSSI チルホスチンの投与量は「治療上有効な」量である。したがって本明細書で用いているように、「治療上有効な量」とは必要とされる治療効果を与えるSSI チルホスチンの量を意味する。この量は当業者が日常的に決めることができ、また患者がかかっている特定の病気やその重度及び患者の身長、体重、性別、年齢や病歴などのいくつかの因子によって変化するだろう。一般に、本発明のSSI チルホスチンは約1mg/kgから50mg/kg の間の投与量で提供されることが好ましい。さらに詳細には、好ましい投与量範囲のひとつは10mg/kg から40mg/kg であり、また他の投与量範囲は20mg/kg から30mg/kg である。「SSI チルホスチン」とは次の一般式、をもつ化合物を意味し、ここで R₁は-OH 、-NO₂- 、低級アルコキシ、またはC-(CH₃)₃であり； R₂は-OH または-NO₂- であり； R₃は-H、NO₂-ハロゲンまたは-C-(CH₃)₃であり； R₄は-CN または-COOH 、あるいはであり、X は-Hまたはニトロ基を意味する。「アルコキシ」とは「-O- アルキル」基を意味し、ここで「アルキル」とは直鎖、分枝鎖及び環状アルキル基を含む飽和脂肪族炭化水素を意味する。アルキル基は１から１２の炭素を含むことが好ましい。更に好ましくは、それは１から７炭素の低級アルキルであることが好ましく、さらに好ましくは１から４炭素が好ましい。アルキル基は置換されていてもよいし、または未置換でもよい。置換されている場合には、置換基は水酸基、シアノ基、アルコキシ、=O、=S、NO₂-、N( CH₃)₂、アミノ基またはSH基が好ましい。化合物SSI 3（R₁が水酸基、R₂がニトロ基、R₃が水素でありR₄がシアノ基である）またはSSI 12（R₁がメトキシ、R₂が水酸基、R₃がニトロ基、R₄がカルボキシル基である）、あるいはSSI 6（R₁がニトロ基、R₂が水酸基、R₃が水素、R₄がカルボキシル基である）が好ましい。その他の好ましい態様では、組成物は注射または経口による投与に適応させる。一般に単位投与形状には活性化合物の約1mg/ kgから50mg/kg が含まれるが（好ましいのは10mg/kg から40mg/kg 及び20mg/kg から30mg/kg の範囲である）、これは投与する経路とその化合物の正確な性質によって変化させることができる。細菌が誘導する敗血症ショックを最大限に予防または緩和するために、組成物は初期に投与されることが好ましい。本発明のもう一つの側面は、治療上有効な量のSSI チルホスチンを投与することによる炎症性疾患の治療法を提供する。好ましい化合物、投与量及び投与経路は上述の通りである。治療するために好ましい生物は哺乳類、特にマウス、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、サル及びヒトである。当業者は本発明で同定されたチルホスチンを更にテストするためにヒトにおける様々な疾患の治療のための中心的な候補として有用かも知れない種々の動物モデルに慣れている。好ましい疾患は炎症性疾患、特に敗血症ショック、リューマチ性関節炎、乾癬、及び悪液質や HIV-1、慢性肉芽踵症、結核、ハンセン病、神経炎症症状、多発性硬化症、移植片対宿主症及びかゆ状動脈硬化症などのAIDSに伴う症状からなるグループから選ばれた疾患である。もう一つの側面では、本発明はSSI 19、SSI 20、SSI 21、SSI 22、SSI 23、及びSSI 24のグループから選ばれた新規なSSI チルホスチン化合物を提供する。さらに別の側面では、本発明は本発明明細書記載の方法により、上述の新規なSSI チルホスチン化合物を作製する方法を提供する。発明のその他の側面は治療を必要とする生物に治療上有効な量のSSI チルホスチンを投与することからなる、LPS によって誘導された毒性を予防する方法を特徴とする。「LPS によって誘導された毒性」とは例えば異常なレベルもしくは上昇したレベルのLPS によって生じた死を意味する。異常なレベルもしくは上昇したレベルとは、統計的に正常人とは異なると当業者によって認識されるレベルである。好ましい態様において、SSI チルホスチンはSSI 3 、SSI 4 、SSI 6 、SS I 12、SSI 16、SSI 17及びSSI 23のグループから選ばれる。他の側面では、本発明は治療を必要とする生物に治療上有効な量のSSI チルホスチンを投与することからなる、LPS によって誘導されたTNF-αレベルの上昇を低下させる方法を特徴とする「LPS によって誘導されたTNF-αレベルの上昇」とは、ある生物におけるTNF-αの量がLPS の存在によって上昇することを意味する。TNF-αレベルの測定には例えば生物試験（バイオアッセイ）及びELISA 法を用いることができる。好ましい態様において、SSI チルホスチンはSSI 2 、SSI 3 、SSI 6 、SSI 9 、SSI 10、SSI 11及びSSI 12のグループから選ばれる。更に他の側面では、本発明は治療を必要とする生物に治療上有効な量のチルホスチンを投与することからなる、TNF-αによって誘導される毒性を予防する方法を特徴とする。「TNF-αによって誘導される毒性」とは、異常なレベルまたは上昇したレベルのTNF-αによって起きる死を意味する。好ましい態様において、SS I チルホスチンはSSI 3 、SSI 16、SSI 17、SSI 18、SSI 19及びSSI 23のグループから選ばれる。更に他の側面では、本発明はマクロファージにSSI チルホスチンを投与することからなる、NO₂-の生産を阻害する方法を特徴とする。好ましい態様において、 SSI チルホスチンはSSI 3 、SSI 6 、SSI 8 、SSI 9 、SSI 10、SSI 11、SSI 16 、SSI 17及びSSI 25のグループから選ばれる。更に他の側面では、本発明は治療を必要とする患者に治療上有効な量のSSI チルホスチンを投与することからなる、TNF-αに関連する活性によって特徴付けられる炎症の治療法を特徴とする。好ましい態様において、疾患は敗血症、乾癬、またはAIDSに関連した悪液質である。本発明の他の特徴と利点はその好ましい態様についての以下の説明及び請求の範囲から明らかであろう。好ましい態様の説明本発明は種々の炎症性疾患、特に例えばLPS などの因子による免疫系の過剰な活性化によって生ずる敗血症、及びTNF を含む過剰なレベルのサイトカインが主要な役割を果たす種々の疾患の予防及び／または治療に関連する。チルホスチン系のタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はLPS によって誘導される致死毒性からマウスを保護し、この保護はこれらの因子がマクロファージ内での腫瘍壊死因子 α（TNF-α）や一酸化窒素の生産並びにin vivo でのTNF-αの生産をブロックする性質と関連している。マウスをタンパク質チロシンキナーゼの特異的な阻害剤であるチルホスチンで前処理することにより、LPS による致死毒性が顕著に低下した（表５及び表６）。特定のチルホスチンはまた、LPS の投与２時間後に与えてもマウスにおける致死毒性を阻害した。我々は特定のチルホスチンがマウスにおいLPS によって誘導された血清TNF-αレベルの上昇を阻害することも示した。それに加え、我々は特定のチルホスチンがマウスにおいてTNF-αによって誘導される致死毒性を低下させ（表８）、またin vitroでは感受性細胞に対するTNF-αによって誘導される細胞毒性を阻害することを発見した（表４）。種々のファミリーに属するチルホスチンをin vitroにおいて活性化されたネズミ腹膜マクロファージによる、LPS によって誘導されるTNF-αの生産を阻害する性質で選択した（表１）。テストしたチルホスチンのうちSSI 3 とSSI 8 が最も強力であった。これらのチルホスチンは、100 μM 以上の濃度においてもEGF 受容体、Her-2/neu 受容体またはPDGFR に何の効果も表さない（ガズィットら、32 J．Med．Chem．2344，1989 ）。これらのチルホスチンはin vitroにおけるNO₂- （一酸化窒素の酸化産物）の生産もまた阻害する。SSI 3 とSSI 8 はin vitroにおいてTNF-αが誘導する細胞毒性のブロックに活性を持つが（表２）、SSI 6 と SSI 9（表１）には活性がない。SSI 3 はLPS 注射に先立って、例えばLPS 注射の２時間前などに投与するとLPS によって誘導される致死毒性の阻害に最も効果を示す。LPS を与えてから２時間後にチルホスチンSSI 3 を投与しても、基本的には全く保護効果が見られなかった。それとは対照的に、SSI 17はLPS を与えて２時間後に投与しても有効であった。 LPS の毒性及びグラム陰性細菌敗血症の病原性に関連したLPS に対する生物学的応答には複数のものがある。それらは単球／マクロファージ、好中球、内皮細胞、Ｂ細胞、上皮細胞、血小板及び補体に対する効果を含む。これらの応答の大部分は膜情報伝達系に関連した誘導過程の結果である。タンパク質チロシンリン酸化はLPS によるマクロファージの活性化及びTNF-αによる線維芽細胞の活性化によって増幅された。したがって、チルホスチンなどのチロシンキナーゼ阻害剤はこれらの因子によって誘導された毒性に対する保護を与え得る。示されているようにチルホスチンはLPS によって誘導される致死的毒性に対し、劇的な保護効果を示す。調べられた効果のうち、LPS によって誘導される肺の顆粒球の増加と血液リンパ球と顆粒球における変化のみはSSI 3 による影響を受けなかった。チルホスチンは高濃度のLPS（マウス当り1.5mg ）を与える前に投与すると最も効果的であり、そのうちいくつかはLPS を投与した後でも効果的であった。したがってチルホスチンがグラム陰性敗血症に続く敗血症ショックの予防について実験的または臨床的に有効であることを示唆している。チルホスチンSSI 3 によってマウスを処置するとLPS によって誘導された致死的毒性が低下した。SSI 3 の保護効果はそれによるTNF-α生産阻害及びNOの生産阻害及びタンパク質のリン酸化阻害と関連するものである。我々はLPS のLD₉₅量を使用したモデルを採用している。このような条件ではSSI 3はLPS に先立って注射するとほぼ最大の保護効果をもたらし、後から投与すると低い保護効果をもたらした。病理生理学的過程はそれがヒトで起こるときに、感染したグラム陰性細菌によるLPS の段階的な放出を実際に含む。上に述べた実験プロトコルは致死量のLPS が一度に投与されるため更に劇的である。したがって、敗血症または敗血症ショックを示す臨床的兆候が現れた直後に投与すれば、チルホスチンは敗血症ショックの予防に効果的であると予測される。チルホスチンはLPS の毒性の始動とLPS によって誘導されたサイトカインの作用を妨げるため、SSI 3 のようなPTK 阻害剤はグラム陰性細菌感染における敗血症ショックの作用の予防に効果的であろう。ステロイド（レミック(Remick)ら、 60 Laborat．Invest．766，1989 ）またはクロルプロマジン(chlorpromazine)（ガディナ(Gadina)ら、173 J．Exp．Med．1305，1991 ）などの他の薬剤はチルホスチンによって仲介されるものとは異なる機構によりLPS の毒性を阻害する。これらの薬剤もまた致死量のLPS を与える前に投与すると効果的であることが示された。これらの薬剤の組み合せによる敗血症ショックの治療は、それらを単独で用いるよりもより効果的かも知れない。腫瘍壊死因子α（TNF-α）もまた、リューマチ性関節炎及びかゆ状動脈硬化などの慢性炎症疾患の病原性において重要な働きをすることが報告されている。本発明の化合物はまたこれらの疾患の症状の緩和にも効果的であることは明らかである。これはアジュバント誘導関節炎モデル及びWHHAウサギにおけるかゆ状動脈硬化モデル系などの疾患モデル系の実験動物を用いた実験から推定できる。報告されているチルホスチンはLPS によって誘導されるTNF-αの生産とその作用を阻害するため、TNF-αに関連する他の病理生理学的条件もまたこれらの化合物によって処置できる極めて高い可能性がある。これらは結核、ハンセン病、（多発性硬化症などの）神経炎症症状及びGVH（移植片対宿主症）などのHIV-1 感染及び慢性肉芽腫症を含む。Ｉ．SSI チルホスチンはLPS によって誘導されるin vivo における致死毒性を阻害する。驚いたことに、SSI 3は例えばLPS に先立つ２時間前に投与された（腹腔内注射された）場合に、LPS によって誘導される致死毒性を顕著に阻害することが示された。LPS は1.5mg/マウスの投与量では５日以内に95% の致死率を誘導する（ 20匹中19匹）。LPS に先立つ２時間前にSSI 3 を投与（400 μg/ マウス）すると、致死率は10%（20匹中2 匹）まで低下した。PBS/DMSO対照を用いた。いずれの実験群の動物も初めの36時間の間は病気であり、動くことが出来ず、下痢であった。その後、SSI 3 によって処置された動物は徐々に回復し５日目には正常な様子になった。SSI 3 だけで処置されたマウスでは、目に見える毒性の発現はなかった。その後、SSI 3 で処置した動物の大部分は徐々に回復し、５日目には正常な様子になる。SSI 3 だけで処置されたマウスでは、目に見える毒性の発現はなかった。どちらの動物群も更に３週間観察を続け；寿命の短縮または毒性効果は全く認められなかった。マウス当り12mgまでのSSI 3 の投与（これらの実験においてマウス当りに与えられた400 μg の30倍）は、処置した動物の外見、血清学的検査並びに巨視的病理学的分析によって明らかなように、いかなる毒性も示さなかった。 LPS によって誘導される毒性に対するSSI 3 の保護効果は投与量に依存した。 LPS 処理の２時間前に投与する場合、マウス当り400 μg のSSI 3 はLPS（マウス当り1.5mg ）によって誘導された致死毒性に対する実質的に完全な保護を提供する最少量であり；一方マウス当り100 μg 及び200 μg の投与量は６日間に渡る、５個体のマウスを用いた研究において部分的な保護を提供した。対照的に、 SSI 17はLPS 処理２時間後に投与しても有効であった。SSI 3 投与のタイミングの効果もまた、LPS の投与の時間との関連において調べられた。SSI 3 をLPS 処理と同時に投与すると、LPS 処理の２時間前に投与する場合に比べ致死毒性の予防について、より低い効果を示した。LPS 処理の２時間後にSSI 3 を投与すると、６日間に渡る、５個体のマウスを用いた研究ではLPS によって誘導される致死毒性について、基本的には全く保護効果を持たなかった。これとは対照的に、SS I 17はLPS 処理２時間後に投与しても有効だった。 SSI 3 に加え、他のチルホスチン（SSI 4 、SSI 12及びSSI 6 ）もマウス当り 200 μg の濃度で、様々なレベル（SSI 6 は最高で、５匹のマウス中５匹が生き残り、続いてSSI 4 が５匹のマウス中４匹が生き残り、SSI 3 は５匹のマウス中３匹が生き残り、またSSI 12は５匹のマウス中２匹が生き残った）でLPS（マウス当り1.5mg ）によって誘導された致死毒性を阻害する場合に活性であった。SS I 3 の保護効果の程度は、それによるin vivo におけるTNF-α生産の阻害に関連している。II ．SSIチルホスチンはLPS によって誘導された血清中TNF-αレベルの増加を阻害する。 TNF-αはLPS の毒性効果の多くの仲介に関連づけられた。例えば、LPS で処置されたマウスの血清TNF-αレベルに対するSSI 3 の効果が調べられた。LPS は血清TNF-αレベルの急速な増加を誘導した。LPS 処理の２時間前に行なったマウス（６から８週令のC56BL マウス）当り400 μg のSSI 3 の投与（腹腔内注射）は、TNF-αの増加を顕著に阻害した（LPS 処理されたマウスにおけるレベルは、3 または４ng/ml に対し７から１４ng/ml のレベルであった）（表２及び表７）。我々は２時間後にマウスが眼かの破裂により採血して生物試験（バイオアッセイ）及びELISA 法を用いた。生物試験ELISA よりも若干高いレベルを与えた。この発見はLPS 処理したマウス由来の血清がTNF-αに加えて他の細胞毒性因子を含むことを示すものであろう。III ．SSI チルホスチンはin vivo においてTNF-αによって誘導される毒性を遅延する。 TNF-αによって誘導されたマウスの致死毒性に対するSSI 3 の効果が検討された。マウスは、TNF-αを単独で与えた場合には比較的TNF-αに対して抵抗性である。マウスをアクチノマイシンＤで前処理するとマウスはTNF に極めて感受性となる（ワラッチ(Wallach)ら、140 J．Immun．2994，1998）。SSI 3 は２種類のアクチノマイシンＤ：TNF 比（20:2.5及び15:1.0）において、アクチノマイシンＤ処理したマウスにおいTNF-αによって誘導された致死毒性を約１５時間まで遅延した。マウスは０時にTNF の腹腔内注射を受けた。SSI 3 TNF 腹腔内注射の２時間前にマウス当り400 μg が投与され、またアクチノマイシンＤ(ACT.D )がTNF 注射の３０分前に腹腔内に投与された。それぞれの実験群は５個体のマウスを含んでいた。アクチノマイシンＤのみの注射によっては１２０時間後に５個体の動物中２個体が死に、１４４時間後に５個体中３個体が死んだ。チルホスチンSSI 2 、3 、6 及び12については、in vitroにおいてTNF-αによる細胞毒性をも低下させた。ネズミ線維芽細胞(A9)はシクロヘキシミド（50 μ ｇ/ml ）存在下で、種々の濃度のTNFとともに２４時間インキュベーションされた。様々な濃度のチルホスチンがTNF の２時間前に添加された。２４時間後、細胞の生存率がニュートラルレッドを用いた生染色によって調べられた。平均からの偏差は8%を越えなかった。２つの追加実験でも同様の結果を得た。 TNF-α自身はマウスにおける致死性の誘導に効果を持たない。LPS による致死性にはTNF-α、IL-1、インターフェロン及びNOなどの複数のエフェクター分子の相乗効果が関与している。したがって、LPS の作用を阻害することによってより劇的な効果が得られる。しかし、異なるクラスのチルホスチンはLPS の毒性よりもTNF-αの毒性のブロックにもっと有効なことが示されることもありうる。チルホスチンSSI 16とSSI 17はin vitroにおけるTNF-αの細胞毒性の阻害について、２倍から３倍まで活性であることが見つかった。この発見は様々なセットのPTK がLPS及びTNF-αの効果を仲介し、そのため異なるチルホスチン族がこれら２つの因子に対して有効であろう。IV ．SSI チルホスチンはNO₂-生産を阻害するチルホスチンSSI 3 及びSSI 8 は、LPS で刺激していない過ヨウ素酸で活性化したネズミマクロファージとLPS で刺激した過ヨウ素酸で活性化したネズミマクロファージにおけるNO₂-の生産を効果的に阻害した。過ヨウ素酸で活性化したネズミ腹腔マクロファージを、LPS（10mg/ml ）及びSSI 3（20mM及び5mM ）非存在下、及び存在下でインキュベーションした。亜硝酸（NO₂-）レベルは本明細書で述べるように、示した時刻で上清を用いて測定された（表５）。値は３連培養の平均で表されている。平均からの偏差は5%を越えることはなかった。２つの追加実験でも同様な結果が得られた。同様な実験条件でSSI 8 は同様な効果をもっていた。Ｖ．SSI チルホスチンはチロシンリン酸化を阻害する LPS によって誘導されるネズミ腹腔マクロファージ中の42kDタンパク質のチロシンリン酸化は、細胞を前と同様に保護に必要な濃度のSSI 3 で前処理することにより阻害された。このタンパク質バンドはp42^MAPKと同定された。特異的なマクロファージタンパク質のチロシンリン酸化の原因となるPTK の性質は未だ不明であるが、しかし、最近の研究はLPS がCD14に結合してCD14に結合したタンパク質チロシンキナーゼp53/56^Lynの活性化及びp58/64^Hckの活性化を誘導することを示唆している（ステファノヴァら、前出）。VI ．投与本発明の化合物は選ばれた投与経路、つまり経口もしくは非経口投与に合った種々の形状において哺乳動物宿主に投与することが出来る。この場合における非経口投与は以下の経路：即ち静脈内、筋肉内、皮下、眼内、滑液包内及び経皮、眼内、舌下、頬を含む経上皮；並びに眼内、皮下、眼、直腸及び吸入法およびエアロゾルによる鼻腔からの吸入、エアロゾル及び直腸全身性を含む局所などの経路による投与を含む。活性化合物は例えば不活性の希釈物または同化でき、かつ食べることの出来る担体とともに経口投与してもよいし、あるいは硬質または軟質のゼラチンカプセルに封入してもよく、また錠剤状に圧縮してもよく、あるいは食物に直接取り入れられてもよい。経口による治療上の投与には、活性化合物は賦形剤とともに取り込まれ、摂取可能な錠剤及びバッカル剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハース及び同等な形状で用いることができる。このような組成物及び標品は少なくとも0.1%の活性化合物を含むべきである。もちろん組成物と標品の割合は様々であり、簡便のために単位当り重量の約2%から6%の間でも良い。このような治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投与量が得られる程度のものであろう。本発明による好ましい組成物または標品は経口投与単位が1 から1000mgの活性化合物を含むように調製されたものである。錠剤、トローチ、ピル、カプセル及びそれらの同等品は次のものも含んでも良い：すなわちトラガカントゴム、アカシアゴム、コーンスターチまたはゼラチン等の結合剤；リン酸２カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸及びそれらの同等品などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ショ糖、乳糖またはサッッカリンなどの甘味剤を添加してもよく、あるいはペパーミント、冬緑油やサクランボの香料等の香料を添加してもよい。投与単位型がカプセルである場合、それは上述のタイプの材料に加え液体の担体を含んでもよい。投与単位のコーティングあるいは時間的物理的形状を修飾するために、種々の他の材料が存在してもよい。例えば、錠剤、ピルまたはカプセルはシェラック、砂糖またはその両者でコートしてもよい。シロップまたはエリキシルは活性化合物及び甘味剤としてショ糖、保存料としてメチルパラベン及びプロピルパラベン、また色素とサクランボまたはオレンジなどの香料を含んでも良い。もちろんどのような投与単位形の調製に使う材料も薬学的に純粋であり、用いられる量では実質的に無毒であるべきである。それに加え、活性な持続的放出を行なう標品及び処方を用いてもよい。活性化合物は非経口で、もしくは腹腔内に投与してもよい。遊離塩基または薬学的に受容できる塩の状態の活性化合物の溶液は、ハイドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤とともに適度に混合することで水溶液として調製することができる。分散液はグリセロール、液状ポリエチレングリコール及びそれらの混合物中、及びオイル中で調製することも出来る。通常の保存条件及び使用条件下ではこれらの標品は微生物の増殖を防ぐために保存量を含んでいる。注射に用いるために適切な薬学的形態は無菌の水溶液か、あるいは分散液及び用時に無菌の注射可能な溶液または分散液を調製できるような無菌粉末を含む。全ての場合において、その形態は無菌でなければならず、また容易に注射できる程度に流動性を持たなければならない。それは製造及び保存条件下で安定であろうし、また細菌やかびなどの微生物による汚染から保護されていなければならない。担体は例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、溶液状ポリエチレングリコール及びそれらの同等品）、またはそれらの適当な混合物及び植物性油を含む溶剤または分散用溶液を使うことが可能である。適当な流動性は、例えばレシチンなどによるコーティングを用いるか、分散溶液の場合は求められた粒子サイズを維持することによって、また界面活性剤を用いることによって維持されるだろう。微生物の作用の防止は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロザール及びそれらの同等品などの様々な抗菌剤並びに抗カビ剤によって達成出来る。多くの場合に、例えば糖類または食塩などの等張剤を含むことが好ましいだろう。注射可能な組成物を長期に渡って吸収させるには、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を用いることで可能である。無菌の注射可能な溶液は、必要な量の活性化合物を上に列挙した様々な他の内容物とともに適当な溶媒中に求められる通りに混合し、続いて漉過滅菌することによって調製される。一般に分散液は種々の無菌の活性内容物を、基本的な分散用液と上に列挙したものから他に必要な内容物を無菌の容器に入れることによって調製される。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌粉末の場合には、好ましい調製法はあらかじめ漉過滅菌した溶液から活性内容物と全ての追加した必要な内容物の粉末が得られる真空乾燥及び凍結乾燥法である。本発明の治療用化合物は単独で哺乳動物に投与してもよいし、あるいは上で述べたような薬学的に受け入れることの出来る担体との組み合せで投与してもよいが、その比率はその化合物の溶解度及び化学的性質、投与する経路及び標準的な薬学的な慣例によって決定される。予防または治療に最も適しているであろう現在の治療用薬剤の投与量は、投与の形式、選ばれた個々の化合物及び治療を受ける特定の患者の身体的性質によって変化するだろう。一般に最初は少量の投与量が用いられ、もし必要ならその環境下で最適な効果が得られるまで少しずつ投与量を増加させるだろう。ヒトに用いる治療用の投与量は、それは１日に１回から数回のうちの種々の投与単位で与えられるであろうが、ラットを用いた生理学的研究に基づいて基本的に１日体重1kg あたり約1mg から約50mg、好ましくは１日当り約3mg から約15mgである。経口投与は一般に高い投与量を必要とする。実施例以下の実施例は、本発明の様々な好ましい実施態様を単に説明するだけのものであり、請求の範囲に定義される本発明の範囲を制限するものではない。インビトロおよびインビボにおける以下の例は、LPS により起こされる毒性の防止、TN F-α血清レベルの低下、NO₂生成におけるチルホスチン活性を示す。 SSI 17およびSSI 23は、LPS の後で投与された場合でさえ致死が起きることを防ぐ。。SSI 23は、水溶液中で非常に溶けやすく、貯蔵物(DMSO において作られる)をPBS 中で希釈後は直ちに沈殿する。アルコールおよび洗剤を含む様々な溶媒に溶けたSSI 23を注射する試みは、溶媒自身がLPS 毒性に影響を及ぼすので、続けられなかった。SSI 23の注射は、投与後に溶媒が大幅に希釈されるために、臨床的試みにおいては問題ないであろう。材料および方法 1. 材料貯蔵溶液(50mM)をDMSOにおいて作った。希釈をPBS 中で行った。大腸菌血清型 055: B5 からのリポ多糖は、フェノール抽出液を用いて調製されたものを、シグマケミカル社(Sigma Chemical Company)から得た。組み換えヒト腫瘍壊死因子- α(TNF- α)(5x10 単位/mg)を、ニュージャージィー州、ロッキーヒル(N.J.,Roc ky Hill)のレプロテック社(Reprotech,Inc.)から得た。雌のC58BL マウス(6-8週令)を使用した。マウスをバイリンソンメディカルセンター(Beilinson Medi cal Center)の動物繁殖施設において繁殖させた。 2. TNF- α測定 TNF-αの量は、ラフおよびギルフォード、ジィ．イー.(Ruff and Gilford,G.E .)、J.Immunol.125,1671-1677(1980)により記載されているようにTNF-α感受性細胞列( A9)の死滅の程度を評価することにより定量化され、この文献は図面も含めてその全体が参考としてここに編入される。簡単に言えば、マウスA9繊維芽細胞を、96凹部を有する平底微量滴定板に30,000細胞/0.1mlで播き、密集したモノレヤーを生じさせた。加湿した5% CO₂雰囲気中で37℃にて24時間インキュベーション後、シクロヘキシイミドを最終濃度50μg /ml になるまで添加し、連続希釈した試験サンプル100 μl を凹部へ添加した。さらに18時間インキュベーション後、上澄みを注意深く吸引し、単層をPBS で二度洗浄し、ニュートラルレッド (0.02%)200μl を添加した。２時間インキュベーション後、細胞を洗浄し、生存細胞により吸着された染料を50% エタノール200 μl を用いて抽出した。染料の濃度を500nm のフィルターを用いELISA 自動読み取り器により測定した。エンドゲン社( ENDOGEN Inc.)からのELISA キットをネズミTNF-αの定量化のために使用した。 3. NO₂- 測定 NOの酸化生成物であるNO₂を使用して生成するNOを測定する。マクロファージの上澄みにおける亜硝酸濃度を、微量板分析方法により測定した。上澄みのアリコート100 μl を、室温で10分間、同量のグリース試薬(１% スルファニルアミド/ 0.1% ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩/ 2.5% H₃PO₄)とともにインキュベートした。550nm における吸光度を微量板読み取り器において測定した。亜硝酸ナトリウムを標準として使用した。 4. マクロファージ培養マウスに、過ヨウ素酸ナトリウム(5mM)1mlの腹腔内注射をした。3 日から4 日後に、マクロファージをPBS で腹腔から洗い出した。40℃にて10分間170gで遠心分離後、細胞ペレットを加熱不活化した新生子牛血清10% を含むRPMI 1640 中で再懸濁した。5% CO₂/ 空気中にて、37℃で2 時間、96凹部を有するプラスチックトレーの凹部に4x10⁵細胞/凹部にて細胞を播くことにより接着したマクロファージ単層を得た。非接着細胞は吸引により除去しそして完全培地を添加した。 5. マウス血液の白血球の計測マウス血液の白血球の計測および示差分析(differential analysis)を、Cell- Dyn 1600 血液分析計(米国のセコイアターナー社( Sequoia Turner Corporati on),U.S.A.)を用いて行った。 6. チルホスチン合成チルホスチンは、1994年4 月28日に出願された米国特許出願第08/236,420号、ガジット、エー．ら(Gazit A．et al.)、J.Med.Chem．32：2344−2352（1989）およびガジット、エー．ら(Gazit A.et al.)、J.Med.Chem ．34：1897−1907(199 1)に既に記載されている方法により合成され、これらの文献は、図面も含めてその全体が参考としてここに編入される。SSI 1 、SSI 2 、SSI 3 、SSI 4および、SSI 5 の合成はすでに記載されている：ガジットら(Gazit et al.)、Me d.Chem ． 32：2344(1989)。他のチルホスチンは、上記および下記文献に記載されている方法により調製された：ガジットら(Gazit et al.)、J.Med.Chem ．34：18 97（19）およびノボグロドスキーら(Novogrodsky et al.)、Science, 264:1318 −1322(1994)、こられは図面も含めてその全体が参考としてここに編入される。 SSI 6-明黄色固体、mp-193，収率88%，NMRアセトンd₆ δ 8.92(1H，d，J=2.4H z，H₂)，8.43(1H，dd,J=8.8，2.4Hz，H₆),8.39(1H，S,ビニル),7.43(1H，d,J=8. 9Hz，H₅)。 SSI 7-明黄色固体、mp-218，収率76%，NMRアセトンd₆ δ 8.42(1H，S,ビニル) ，8.33(1H，D，J=8.0 Hz，H₅),7.91( 1H，d ,J=2.0 Hz,H₂)，7.76(1H，dd,J=8.0 ，2.0Hz，H₆)。 SSI 8-赤色固体、mp-185，収率88%，NMRアセトンd₆ δ 8.22(1H，d，J= 2.1Hz )，8.15(1H，S，ビニル)，7.86(1H，d，J= 2.1Hz)。MS-232(M+1，12%)，232(M⁺ ,100)，185(17)，183(55)，m/e。 SSI 9-黄色固体、mp-230，収率73%，NMRアセトンd₆ δ 8.34．8.02(2H，2d，J =2.0 Hz )，8.27(1H，S,ビニル)。MS-251(M+1，12%)，250(M⁺,100%)，202(M-NO₂ -H₂，27)，174(17)，130(18)，m/e。 SSI 10- 橙色固体、mp-163，収率30%，NMRアセトンd₆ δ 8.16，7.85(2H，2d ，J=2.0 Hz)，8.10( 1H，S,ビニル),7.20( 5H，m，Ph)，3.43( 2H，t，J=6.0 Hz )，2.71( 2H，t，J=6.0 Hz)，1.95( 2H，m)。MS-202( H-NO₂-CH₂ ^ph，40%)，118( 100% )，117(95)，91(70)，m/e。 SSI 11- 赤色固体、mp-237，収率92%，NMRアセトンd₆ δ 8.16，7.84(4H，2d ，J=2.0 Hz)，8.11( 2H，ビニル)，3.50−3.0( 4H，m )，1.8( 2H，m)。実施例１: SSI 19の合成 15 ml エタノール中の0.35g，2mM，3-ヒドロキシ 4- ニトロベンズアルデヒド、0.42g，2mM，SSI 26（上記、上部右側）および30mg β- アラニンを4 時間還流した。蒸発しクロマトグラフィーにかけると黄色固体が100mg，14% 収率、 mp-106で得られた。NMR アセトンd₆ δ 8.27( 1H，d，J=8.9 Hz H₅),8.24( 1H， S，ビニル)，7.77( 1H，d，J=1.9 Hz，H₂)，7.63(1H，dd，J=8.9，1.9 Hz，H₆) ，7.27( 5H，m，Ph)，3.46( 2H，q，J=7.0 Hz)，2.72( 2H，t，J=7.0 Hz)，1.96 ( 2H，五重項，J=7.0 Hz)。MS-351( M⁺，100%)，(246( M- (CH₂)₂Ph，85)217( M - NH(CH₂)₃Ph，20)，200( 25 )，186(23)，171( 40),118(80)，91(92)，m/e。実施例２: SSI 20の合成 15 ml エタノール中の0.35g，2mM，3-ニトロ 4-ヒドロキシベンズアルデヒド、0.42g，2mM，SSI 26および60mg β- アラニンを、4 時間還流した。冷却し濾過すると黄色固体が0.48g，65% 収率、mp-168で得られた。NMR CDCl₃ δ 8.6 5( 1H，d，J=2.2 Hz，H₂),8.24( 1H，S，ビニル)，8.23( 1H，dd，J=8.6，2.2 H z，H₆)，7.26( 6H，m，Ph+H₅)，3.46( 2H，q，J=7.0 Hz)，2.71( 2H，t，J=7.0 Hz)，1.96( 2H，五重項，J=7.0 Hz)。MS-351( M⁺，75)，333( M- H₂O，19)，246 (M-(CH₂)₂Ph，78)，217( M- NH(CH₂)₃Ph，42)，200( M- NO₂-(CH₂)₂Ph，69)，18 9( M- CONH(CH₂)₃Ph，9)，172(40)，171(40)，171( 217- NO₂-，28)，117(75)， 91(100)，m/e。実施例３: SSI 21の合成 15 ml エタノール中の0.55g，2.4mM，5-ブロモバニリン、0.5g，2.5mM，SSI 2 6 および40mlβ- アラニンを5 時間還流した。冷却し濾過すると黄色固体が0.71 g，71% 収率、mp-168で得られた。NMR アセトンd₆ δ 8.11( 1H，S，ビニル)， 7.86( 1H，d，J=1.9 Hz，H₆)，7.74( 1H，d，J=1.9 Hz，H₂），7.26( 5H，m，Ph )，3.96(3H，S，OCH₃)，3.44(2H，q，J=7.0 Hz)，2.71(2H，t，J=7.0 Hz)，1.95 ( 2H，五重項，J=7.0 Hz)。MS-417 , 415( M⁺1 ,70%)，416，414( M+，100%) ，311,309(M-(CH₂)₂Ph，40)，297，295( M-(CH₂)₃Ph，26)，281,279( M-(CH₂)₃P h-O，55)，231( M- Br-(CH₂)₂Ph，84)，217，215(50)，201( 45)，200(46)，117 (30)，91(52)，m/e 。実施例４: SSI 22の合成 20 ml エタノール中の0.4g，2mM，5- ニトロバニリン、0.4g，2mM，SSI 26 および40mg β- アラニンを4 時間還流した。冷却し濾過すると黄色固体が310mg ，41% 収率、mp-106で得られた。NMR アセトンd₆ δ 8.34( 1H，d，J=1.9 Hz， H₆)，8.22( 1H，S，ビニル)，8.0( 1H，d，J=1.9 Hz，H₂)，7.25( 5H，m，Ph)， 4.01(3H，S，OCH₃)，3.44( 2H，q，J=7.3 Hz)，2.71( 2H，t，J=7.3 Hz)，1.95( 2H，五重項，J=7.3 Hz)。MS-381( M⁺,100%)，276( M-(CH₂)₂Ph，30)，268(85 )，259( 276-OH，28)，246( M- NH₂(CH₂)₃Ph，43)，230(33)，223( 55)，208( 4 5)，200(30)，148(28)，117(53)，91(82)，m/e 。実施例５: SSI 23の合成 15 ml エタノール中の80mg，0.4ml，SSI 26,60mg，0.4mM，3- ヒドロキシ- 4- ニトロベンズアルデヒドおよび20mg β- アラニンを、4 時間還流した。冷却し濾過すると黄色固体が74mg，51% 収率，mp 148で得られた。NMR CDCl₃ δ 10. 54( 1H，S，OH)，8.27( 1H，S,ビニル)，8.22( 1H，d，J=8.8 Hz，H₅)，7.63( 1 H，d，J= 1.9 Hz，H₂)，7.50( 1H，dd，J=8.2 , 1.9 Hz，H₆)，7.25( 5H，m),3. 46( 2H，q，J=7.2Hz)，2.67( 2H，t，J=7.2 Hz)，1.68( 4H，m)。MS-365( M⁺,50 )，274( M-CH₂ Ph，12)，246(M-(CH₂)₂Ph，7)，217( 15),171(13)，91( 100)，m /e 。実施例６: SSI 24の合成 15 ml エタノール中の0.56g， 3.3mM 3-ヒドロキシ 4- ニトロベンズアルデヒド、0.23g，3.5mMマロンニトリルおよび25mg β- アラニンを1 時間還流した。冷却し濾過すると緑黄色固体が0.62g，86% 収率 ,mp 176で得られた。NMR アセトンd₆ δ 8.45( 1H，S,ビニル)，8.30( 1H，d，J=8.8 Hz，H₅)，7.79( 1H，S， D，J=2.0 Hz，H₂)，7.66( 1H，dd，J=8.8 , 2.0 Hz，H₆)。MS-243( M⁺ ,54%)，1 73( 46%)，159( 100%)，143( 173-NO₁ 36%)，111(159-NO₂-，72%)，m/e 。実施例７: ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるLPS 毒性および致死率の防止器官不全についてのこのモデルにおいて、マウス(（CD1）系列)に、ガラクトサミン(18 mg/ マウス)およびLPS(50 ng/マウス)を同時に腹腔内(i.p.)投与した。このモデルに使用したLPS のLD₅₀は、単独で使用したLPS のLD₅₀よりも約30,0 00倍低い。このモデルにおける主な毒性の現れは肝臓の障害であり、マウスには重度の低血糖が現れ、7-8 時間以内に死亡する。個々の動物(２マウス/ 群)において連続的に血糖を測定した。LPS またはガラクトサミンの単独での投与は血糖レベルに影響を及ぼさず( 24時間にわたりほぼ100% mg)、動物は死なない。これと対照的に、ガラクトサミンとLPS を投与された動物は重度の低血糖を示し( 7-8 時間以内に血糖値がほぼ100% mg からほぼ 25% mgまで低下することにより示される)、7-8 時間以内に死亡する。ガラクトサミンおよびLPS を投与する2 時間前にチルホスチンSSI 3 を400 μg / マウスまたはSSI 17を200μg / マウス投与すると、５日間にわたって低血糖および死亡を防いだ（血糖レベルは0 時にほぼ100% mg で、24時間後も同じであった。）。実施例８: インビトロでのLPS 誘因細胞毒に対するSSI チルホスチンの効果組み換えヒトTNF αをマウス繊維芽細胞列(A9)へ投与し、シクロヘキシミドの存在下に培養し、そして細胞の生存率を20時間後にモニターする。試験したチルホスチン( SSI 3 50 μM ;SSI 16 2μM；およびSSI 17，2 および10μM )は、T NF 毒性を様々な程度に防止する。生存細胞の割合を、対照および濃度0.2 ng/ml 、0.05 ng/mlおよび1.0 ng/ml のTNF について投与の2 時間前から投与の4時間後まで測定した。SSI 17が、使用した投与量およびTNF 添加の後で(４時間まで) 添加した場合のその効果により判断されるように最も有効であった。生存細胞の割合は、最初に急に増加し、次いでほぼ同じままであるかまたは数時間にわたってより少ない割合までゆっくり低下する。 SSI 19(2および10μM)はまた、50μM ではSSI 19自体が指標細胞A9に対し毒性であるとはいえ、TNF 毒性を防止するのに効果的であった。高濃度(50 μm)のSS I 23は、TNF の添加と同時または1 時間前に添加した場合、およびTNF を添加した後(2時間)で添加した場合でさえも、インビトロのTNF の毒性を防止するのに有効であった（生存細胞の割合は、TNF の濃度およびチルホスチンの投与時間によってほぼ30 % - 100 %の範囲である）。実施例９: ネズミ腹腔内マクロファージにおけるLPS 誘因一酸化窒素（NO）生成に対するチルホスチンの効果一酸化窒素は、敗血症の臨床的毒性において重要な役割を果たすことに関連していると思われる。チルホスチンSSI 3 、SSI 16、SSI 17およびSSI 25について、NaIO₄を用いたマウスの活性化腹腔マクロファージ((i.p.)投与後4 日で得られる)によるインビトロでのNO生成に対するこれらの阻害について試験した。チルホスチンをLPS を添加する2 時間前に添加し、NOを24時間インキュベーションした培養物からの上澄みにおいて測定した。50μm で試験した全てのチルホスチンは、LPS 誘因一酸化窒素の生成を初期レベルの40(LPSの10μg/ml)または70μM (LPS なし)からほぼ20または30μM まで著しく阻害することがわかった。実施例 10: LPS誘因致死性毒に対するチルホスチンの効果 LPS 誘因致死性毒に対する異なった投与量のSSI 17の効果を研究した。20μg/ マウスの投与量は致死率を50% まで低下させ、一方100 μg/マウスの投与量は死亡を完全に阻止した。この実験において、SSI 17はLPS を投与する２時間前に投与した。SSI 17(200 μg/マウス)は、LPS を添加する2 時間前に添加した場合と比べてLPS 添加後2 時間してから添加した場合、LPS 誘因致死性を阻止するのにほぼ同じ効果を有した( LPS 単独1.5 mg/ マウスでほぼ40% のマウス生存に対しほぼ80% のマウス生存である)。各実験群につき20または30匹のマウスで幾つかの実験を行った。 SSI 23(100 μg/マウス)もまた、LPS 処置前後2 時間で投与した場合、LPS誘因(2.5および2.2mg/マウス）致死性を阻止するのに効果的であることがわかった (2.5 mg LPS / マウスでは1 日後に生存マウス0 匹であるのに対し7 日後に生存マウス5 匹中2 匹であり、2.2mg LPS/ マウスでは7 日後に生存マウス1 匹であるのに対し5 匹中生存4 匹である)。二つの別々の実験を行った。LPS 単独(1.5 mg/マウス)に対するマウスの感受性は、各実験においてかなり異なった。SSI 17 と構造的に類似するSSI 16は、10匹のマウスで7 日にわたって400 μg/マウスでインビボにおけるLPS 誘因毒性を阻止しないが、一方SSI 17は毒性を阻止した。他の実施態様は以下の請求の範囲内である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/275 ＡＤＡＡ６１Ｋ 31/275 ＡＤＡＡＤＺＡＤＺＡＥＤＡＥＤＡＧＺＡＧＺＣ０７Ｃ 255/41 Ｃ０７Ｃ 255/41 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者レヴィッツキ，アレクサンダーアメリカ合衆国マサチューセッツ州20854, パトミック，フォール・ブリッジ・レーン 9617 (72)発明者ノボグロドスキー，エイブラハムイスラエル国76469 レホボット，スデロット・チェン 18 (72)発明者ガジット，アビブイスラエル国エルサレム，ノア・ハリム 14

Claims

【特許請求の範囲】１．(a)生理学的に許容されうる担体または希釈剤；および(b)SSI チルホスチンの治療有効量を含む薬剤組成物。２．前記SSI チルホスチンが、SSI 3 、SSI 6 およびSSI 12からなる群から選択される請求項1 の薬剤組成物。３．前記チルホスチンが、約1mg/kgから約50mg/kg の投与量で存在する請求項1 の薬剤組成物。４．治療上有効な量のSSI チルホスチンを投与することからなる炎症性疾患の治療方法。５．前記SSI チルホスチンが、SSI 3 、SSI 6 およびSSI 12からなる群から選択される請求項4 の方法。６．前記チルホスチンが、約1mg/kgから約50mg/kg の投与量で存在する請求項4 の方法。７．前記免疫疾患が、敗血症のショック、リューマチ様関節炎、乾癬、HIV-1 、慢性肉芽肺症、肺結核、らい病(leprosy)、神経性炎症症状、多発性硬化症、移植片- 宿主疾患およびアテローム性動脈硬化からなる群から選択される請求項4 の方法。８．SSI 19、SSI 20、SSI 21、SSI 22、SSI 23およびSSI 24からなる群から選択されるSSI チルホスチン化合物。９．ベンズアルデヒドまたは置換されたベンズアルデヒド化合物を、チルホスチンまたは請求項8 の最終チルホスチンに相当するマロンニトリルへ晒す工程からなる請求項8 のSSI チルホスチン化合物の製造方法。 10．SSIチルホスチンの治療有効量を治療が必要な器官へ投与することからなるL PS 誘因毒性を防止する方法。 11．前記SSI チルホスチンが、SSI 3 、SSI 4 、SSI 6 、SSI 12、SSI 16、SSI1 7およびSSI 23からなる群から選択される請求項10の方法。 12．SSIチルホスチンの治療有効量を治療が必要な器官へ投与することからなるT NF-αレベルにおけるLPS 誘因増加を低下する方法。 13．前記SSI チルホスチンが、SSI 2 、SSI 3 、SSI 6 、SSI 9 、SSI 10、SSI 11、SSI 12、SSI 17およびSSI 23からなる群から選択される請求項12の方法。 14．チルホスチンを治療が必要な器官へ投与することからなるTNF-α誘因毒性を防止する方法。 15．前記SSI チルホスチンが、SSI 3 、SSI 16、SSI 17、SSI 18、SSI 19および SSI 23からなる群から選択される請求項14の方法。 16．SSI チルホスチンをマクロファージへ投与することからなるNO₂の生成の阻害方法。 17．前記チルホスチンが、SSI 3 、SSI 6 、SSI 8 、SSI 9 、SSI 10、SSI 11、 SSI 16、SSI 17、SSI 23およびSSI 25からなる群から選択される請求項16の方法。 18．SSI チルホスチンの治療有効量を投与することからなる活性に関連するTNF- αが特徴的な炎症の治療方法。 19．前記炎症が、敗血症、乾癬およびAIDS関連悪液質からなる群から選択される疾患に関連するものである請求項18の方法。