JPH1045630A - 新規なグラフト共重合体、それを用いた薬剤、及びそれを用いて薬物を特定細胞に取り込ませる方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イオン性化合物からな
る群から選択される薬物と安定な複合体を形成し、該薬
物を特定の細胞または組織へ送達することを可能とし、
さらには該薬物の細胞質内への移行性を向上させること
が可能な化合物を提供すること。 【解決手段】 ポリカチオン性アミノ酸に生体膜親和性
基を導入してなるポリカチオン性誘導体と、特定細胞に
対して標的性を示す標的リガンドとを含むことを特徴と
するグラフト共重合体。特に、下記一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒはアルキル基、Ｘ₁及びＸ₂はそれぞれ水素原
子］で表わされるグラフト共重合体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なグラフト共
重合体、それを用いた薬剤、及びそれを用いて薬物を特
定細胞に取り込ませる方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】遺伝子工学の急速な発展により、様々な
分子生物学的手法の開発が行われ、遺伝子情報の解析お
よび遺伝子の機能解明がなされている。さらに、このよ
うにして得られた成果を治療方法等に応用する試みが数
多く行われている。

【０００３】その中でも、最も進歩の著しい分野の１つ
として遺伝子治療分野があげられる。種々の遺伝性疾患
における原因遺伝子の発見、解読が行われ、遺伝子治療
は基礎的実験の段階から、実際の臨床応用の段階までに
発展しつつある。例えば、米国においては、１９９５年
６月までに８１の遺伝子治療プロトコールがＮＩＨの組
換えＤＮＡ委員会（ＲＡＣ）で承認され、先天性免疫不
全症、家族性高コレステロール血症、嚢胞性線維症等の
遺伝性疾患および各種の癌を対象とし、既に２００人以
上の患者に対して臨床試験が行われている（実験医学Ｖ
ｏｌ．１２，Ｎｏ．３，３０３−３０７（１９９
４））。

【０００４】遺伝子治療は病気を細胞レベルの根本から
治療できる方法ではあるが、臨床応用における大きな技
術的課題の１つとして、外来遺伝子を効率良く安全に標
的細胞へ導入する方法についていくつかの問題が指摘さ
れている。即ち、遺伝子治療は、異常（病原）遺伝子を
そのままにして、新しい（正常）遺伝子を付け加える付
加遺伝子療法（Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ）と、異常遺伝子を正常遺伝子で置き換
える置換遺伝子療法（ＲｅｐｌａｃｅｍｅｎｔＧｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ）に大別されるが、いずれの療法の場
合にも、正常遺伝子を効率良く安全に標的細胞へ導入す
る方法が必要とされる。

【０００５】例えば、１９８０年代初期にはマイクロイ
ンジェクションなど物理的手法の応用が試みられたが、
遺伝子の導入効率が低く、安定に導入することができ
ず、さらには大量細胞培養技術の限界等の問題点があっ
た。

【０００６】また、外来遺伝子を効率良く標的細胞に導
入するためのキャリアーとなる組換えウイルス（ウイル
スベクター）が開発され、初めて遺伝子治療の臨床応用
が可能となった。現在、遺伝子治療への使用が検討され
ているウイルスベクターには、以下に示すようにいくつ
かの種類が知られているが、これらは一般的に生産方法
が非常に複雑であると同時に、それぞれの安全性を保証
する方法が確立されていないという問題点がある。例え
ば、遺伝子治療に使用可能なウイルスベクターとして、
現在最も注目されているウイルスベクターは、マウス白
血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ：Ｍｏｌｏｎｅｙ Ｍｕｒｉ
ｎｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｖｉｒｕｓ）由来のレトロウ
イルスベクターであり、本ウイルスの増殖様式の利点を
利用したものである。レトロウイルスは、エンベロープ
をもつＲＮＡウイルスであり、そのエンベロープ蛋白と
宿主細胞側のレセプターが結合することにより細胞内に
侵入する。侵入後、単一鎖ウイルスＲＮＡが逆転写酵素
により二重鎖ＤＮＡに変換され、感染細胞ゲノムＤＮＡ
に組み込まれる。しかしながら、このような組み込みが
起こるためには、細胞が***増殖していなければならな
い。従って、実用的に一番問題となるのは、非***細胞
に遺伝子導入できない点である。そのため、多くの先天
性代謝異常症で問題となる神経細胞の遺伝子修復が行え
ない。神経細胞以外にも、遺伝子治療の対象細胞となっ
ている造血幹細胞、肝細胞、筋細胞なども、通常はほと
んど静止期にあるため、遺伝子導入効率は低い。体外に
取り出した細胞については、遺伝子導入効率を高めるた
めに***を促進するような処理を行うことが可能である
が、生体内でこれらの細胞に遺伝子導入を行うことは難
しい。

【０００７】また、アデノウイルスベクターは非***細
胞へも遺伝子が導入できるものとして最近注目されてい
る。しかし、アデノウイルスベクターでは外来遺伝子が
標的細胞ゲノムＤＮＡ内に組み込まれないため、数週問
から長くても数カ月で遺伝子導入の効果はなくなってし
まう。そのため遺伝子導入を頻繁に繰り返す必要があ
り、患者への肉体的、身体的な負担の増加、抗アデノウ
イルス抗体が産生されることによる遺伝子導入効率の低
下などが問題となっている。現在、嚢胞性線維症の治療
のためにアデノウイルスベクターを経気管支鏡的に肺に
投与する臨床試験が開始されているが、アデノウイルス
粒子の免疫原性および細胞毒性に起因するとみられる炎
症反応が発生する可能性が指摘されている。

【０００８】さらに、へルペスウイルスベクターは神経
細胞への外来遺伝子導入が可能なベクターとして期待さ
れているが、細胞毒性が強く、さらにウイルス自体のゲ
ノムサイズが１５０ｋｂと非常に大きいために開発は進
んでいない。さらに、ＨＩＶベクターはウイルス自体の
宿主特性により、ＣＤ４陽性Ｔリンパ球に対して特異的
遺伝子導入を可能とするベクターとして開発された（Ｓ
ｈｉｍａｄａ Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉ
ｎｖｅｓｔ．，８８，１０４３（１９９１））。しかし
ながら、ＨＩＶベクターには最大の欠点として野生株混
入の可能性という問題がある。また、ＡＡＶ（Ａｄｅｎ
ｏ‐Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ）ベクターに関
しては、野生型のＡＡＶは第１９染色体の特定の位置に
組み込まれることが見出され、遺伝子組み込み位置をタ
ーゲティングできるベクターとして注目された。しかし
最近の研究によると、組換えＡＡＶベクターはこの特性
を失っており、外来遺伝子は染色体の非特異的位置に組
み込まれると指摘されている。さらにＡＡＶベクターは
導入できる外来遺伝子のサイズに限界があり、５ｋｂ以
下の遺伝子しかベクター内にパッケージングできないと
いう欠点もある。

【０００９】一方、ウイルスベクター以外にも、各種の
人工的な遺伝子導入システムを用いて遺伝子治療を行お
うとする試みが多くなされている。例えば、正電荷を有
する脂質による遺伝子−脂質複合体が遺伝子治療用非ウ
イルスキャリアーとして開発されている。しかしなが
ら、これらのキャリアーは、大量に用いた場合に細胞毒
性が高い等の問題点が指摘されている（Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３，３２３‐３２７
（１９９２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８９，７９３４‐７９３８（１９
９２）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２６９，
１２９１８‐１２９２４（１９９４）、特表平６‐５０
５９８０、特表平６‐５０７１５８）。

【００１０】また、核酸およびその誘導体が負電荷を有
することを利用し、正電荷を有する合成高分子誘導体と
の間で静電的複合体を形成させることにより、標的とな
る細胞もしくは細胞内へ遺伝子を送達させることを試み
た研究報告もなされている（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ
Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３，３２３‐３２７（１９９
２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，Ｖｏｌ．８９，７９３４‐７９３８（１９９２）、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２６９，１２９１
８‐１２９２４（１９９４）、特表平６‐５０５９８
０、特表平６‐５０７１５８）。しかしながら、従来の
正電荷を有する合成高分子誘導体は、単独で用いた場合
には細胞毒性が高いことが指摘されている（Ｂｉｏｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１，１４９‐１５
３（１９９０））。それと同時に、これら従来の合成高
分子誘導体が生体内へ投与された場合は、異物として認
識されることにより、アナフィラキシーショック等の免
疫系への影響も問題点とされている。

【００１１】さらには、異物として認識されにくいとい
う理由から、生体由来の核タンパク質を用いた試みも検
討されている。核タンパク質は、核酸およびその誘導体
と特異的に結合する性質を有していることから、静電的
複合体を形成することにより、遺伝子導入用ベクターと
なり得る可能性がある。核タンパク質であるヒストンタ
ンパク質を用い、それらをプラスミドＤＮＡ用のキャリ
アーとして研究をおこなっている例がある（Ｙａｓｕｆ
ｕｍｉ Ｋａｎｅｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，Ｖｏｌ．２４３，３７５‐３７８（１８８９）、Ｍ
ｉｒｊａｍ Ｂｒｅｅｕｗｅｒ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ
Ｓ．Ｇｏｌｄｆａｒｂ，Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．６０，９９
９‐１００８（１９９０）、Ｊｉａｎ Ｃｈｅｎ，ｅｔ
ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖ
ｏｌ．５，４２９‐４３５（１９９４））。しかし、こ
れらの例においても、遺伝子を細胞に取り込ませる方法
についてのみ検討されており、必ずしも多くの細胞種に
おいて遺伝子の発現効率を向上させることを目的として
いるわけではなく、多くの細胞種において遺伝子を効率
よく細胞質内に導入するためのベクターとしては必ずし
も充分ではないという問題がある。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】このように、従来は、
（１）ＤＮＡ等と充分に安定な複合体を形成する点、
（２）ＤＮＡ等を特定の細胞または組織へ選択性よく送
達させる点、及び（３）ＤＮＡ等を細胞質内へ充分に取
り込ませる点の全ての要件を充分に満たすキャリアーは
未だ存在しなかった。

【００１３】そこで、本発明の目的は、ＤＮＡ、ＲＮＡ
及び陰イオン性化合物からなる群から選択される薬物と
安定な複合体を形成し、該薬物を特定の細胞または組織
へ送達することを可能とし、さらには該薬物の細胞質内
への移行性を向上させることが可能な化合物を提供する
ことにある。

【００１４】本発明の他の目的は、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び
陰イオン性化合物からなる群から選択される薬物を特定
の細胞または組織へ送達しかつ細胞質内へ充分に取り込
ませることが可能な薬物を提供することにある。

【００１５】また、本発明の更に他の目的は、ＤＮＡ、
ＲＮＡ及び陰イオン性化合物からなる群から選択される
薬物を特定の細胞または組織へ送達しかつ細胞質内へ充
分に取り込ませることが可能な方法を提供することにあ
る。

【００１６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究した結果、特定の構造を有するグ
ラフト共重合体を用いることによって上記従来の問題点
を解決することが可能なことを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【００１７】すなわち、本発明は、ポリカチオン性アミ
ノ酸に生体膜親和性基を導入してなるポリカチオン性誘
導体と、特定細胞に対して標的性を示す標的リガンドと
を含むことを特徴とするグラフト共重合体にある。

【００１８】また、本発明は、ポリカチオン性アミノ酸
に生体膜親和性基を導入してなるポリカチオン性誘導体
と、特定細胞に対して標的性を示す標的リガンドとを含
むことを特徴とするグラフト共重合体と、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａ及び陰イオン性化合物からなる群から選択される薬物
とを含むことを特徴とする薬剤にある。

【００１９】さらに、本発明は、ポリカチオン性アミノ
酸に生体膜親和性基を導入してなるポリカチオン性誘導
体と、特定細胞に対して標的性を示す標的リガンドとを
含むことを特徴とするグラフト共重合体を用いて、ＤＮ
Ａ、ＲＮＡ及び陰イオン性化合物からなる群から選択さ
れる薬物を特定細胞に取り込ませることを特徴とする方
法にある。

【００２０】上記本発明のグラフト共重合体にあって
は、主としてポリカチオン性アミノ酸によってＤＮＡ、
ＲＮＡ又は陰イオン性化合物といった薬物との安定な複
合体形成が達成され、主として生体膜親和性基によって
前記薬物の細胞質内への移行性向上が達成され、更に主
として標的リガンドによって特定の細胞または組織への
送達性が達成される。従って、このようなグラフト共重
合体を含有する本発明の薬剤並びにかかるグラフト共重
合体を用いる本発明の方法によれば、ＤＮＡ、ＲＮＡ又
は陰イオン性化合物といった薬物が安定な複合体の形で
特定の細胞または組織へ送達され、そして細胞質内へ充
分に取り込まれる。

【００２１】

【発明の実施の形態】以下、本発明のグラフト共重合
体、並びにそれを用いた本発明の薬剤及び方法をそれぞ
れの実施の形態に即してさらに詳しく説明する。

【００２２】先ず、本発明のグラフト共重合体について
説明する。

【００２３】本発明のグラフト共重合体は、前述のよう
に、ポリカチオン性アミノ酸に生体膜親和性基を導入し
てなるポリカチオン性誘導体と、特定細胞に対して標的
性を示す標的リガンドとを含む。

【００２４】本発明にかかるポリカチオン性アミノ酸
は、治療用、診断用等のＤＮＡ、ＲＮＡ又は陰イオン性
化合物とイオン性結合を形成するものであり、ポリリジ
ン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン、ポリアルギニ
ン、並びにリジン、ヒスチジン、オルニチン及びアルギ
ニンのうちの少なくとも一つを含むアミノ酸共重合体が
好ましいものとして挙げられ、特にリジンオリゴマー
（ポリリジン）が好ましい。ポリリジンを使用すると特
にＤＮＡ等と強力な結合が形成されかつＤＮＡ等のリン
酸基間のイオン反発が和らげられ、得られる複合体がよ
り安定化する傾向にあるからである。

【００２５】また、前記ポリカチオン性アミノ酸は、数
平均重合度（アミノ酸数）が８〜１００のものであるこ
とが好ましく、１０〜４０のものであることがより好ま
しい。上記数平均重合度が８未満ではアミノ酸のカチオ
ン量が少な過ぎるため、アニオン性であるＤＮＡ等との
複合体形成が困難となる傾向にあり、他方、１００を超
えると複合体の立体障害が生じるため、薬物としての機
能を果たさなくなる傾向にあるからである。

【００２６】本発明にかかる生体膜親和性基は、生体膜
親和性を向上させて薬物の細胞への導入を向上させる官
能基であり、炭素数が４〜１８でありかつ不飽和数が０
〜４である脂肪族炭化水素基、コレステロール誘導体、
及びホスファチジルエタノールアミン誘導体が好ましい
ものとして挙げられ、特に炭素数が４〜１８のアルキル
基が好ましい。上記炭素数が４未満では疎水性が低下
し、生体膜との親和性が低下する傾向にあり、他方、１
８を超えると逆に疎水性が過剰になり過ぎて生体膜との
親和性が低下する傾向にあるからである。

【００２７】本発明にかかる標的リガンドは、特定の細
胞又は組織に対する特異性を示すものであり、抗体、酵
素、糖鎖、核酸、合成アミノ酸、ポリエチレングリコー
ル、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、生体
由来多糖、及びそれらの修飾体（誘導体）が挙げられ、
更に好ましいものとしては以下のものが挙げられる。す
なわち、ガラクトース残基を有するポリスチレン誘導体
（対肝細胞特異性）、ヒアルロン酸誘導体（対肝細胞特
異性）、抗ＣＤ４抗体の誘導体（対リンパ球特異性）、
細胞接着因子の誘導体（対内皮細胞特異性）、抗ＣＥＡ
抗体の誘導体（対ガン細胞特異性）、トランスフェリン
の誘導体（対血液脳関門特異性）等が挙げられる。

【００２８】なお、本発明のグラフト共重合体は、上記
の生体膜親和性基を導入してなるポリカチオン性誘導体
と上記の標的リガンドとを含むグラフト共重合体であれ
ばよく、これらは好ましくは脂肪族炭化水素基、特に好
ましくはビニル基及び／又はメタクリロイル基、によっ
て結合される。

【００２９】また、本発明のグラフト共重合体は、主鎖
部分の数平均重合度が１０〜２００であり、かつ側鎖部
分の数（分枝数）が１〜１００であることが好ましい。
主鎖部分の数平均重合度が１０未満ではリガンドの不足
によって細胞から認識されなくなる傾向にあり、他方、
２００を超えると分子量が大きくなり、細胞への取り込
みが低下すること及び生体内での代謝が悪くなる傾向に
あるからである。また、側鎖部分の数が１００を超える
と分子量が大きくなり、細胞への取り込みが低下するこ
と及び生体内での代謝が悪くなる傾向にあるからであ
る。

【００３０】なお、本発明のグラフト共重合体において
上記標的リガンドの重合体とポリカチオン性誘導体のう
ちいずれが主鎖部分（幹重合体）となるかは特に制限さ
れないが、好ましくは標的リガンドの重合体が主鎖部分
（幹重合体）となり、ポリカチオン性誘導体が側鎖部分
（枝重合体）となる。

【００３１】次に、本発明のグラフト共重合体として特
に好ましいものについて説明する。すなわち、下記一般
式（Ｉ）：

【００３２】

【化２】

【００３３】［式中、Ｒは炭素数が４〜１８のアルキル
基であり、Ｘ₁及びＸ₂はそれぞれ水素原子であり、ａは
１０〜２００、好ましくは５０〜１００、の整数であ
り、ｂは１〜１００、好ましくは１〜２０、の整数であ
り、ｐは８〜１００、好ましくは１０〜４０、の整数で
ある］で表わされるグラフト共重合体が特に好ましい。
上記一般式（Ｉ）で表わされるグラフト共重合体によれ
ば、実施例の説明で詳述するように、特定のＤＮＡが安
定な複合体の形で肝細胞に選択的に送達され、そして同
細胞質内に充分に取り込まれる傾向にあるからである。

【００３４】なお、上記一般式中のａ及びｂが上記範囲
外では細胞や組織に対する特異性が低下すること及び細
胞内への取り込みが低下する傾向にあり、またｐが上記
範囲外ではＤＮＡ等との複合体形成及び薬物としての機
能を果たさなくなる傾向にある。

【００３５】次に、本発明のグラフト共重合体を製造す
るための方法について説明する。

【００３６】かかるグラフト共重合体の合成方法として
は、 ｉ）幹重合体上の重合開始点から単量体を重合して枝重
合体を成長させる方法、 ii）枝重合体の片末端に重合性の基が導入されたいわゆ
るマクロモノマーと、幹重合体を生成するための単量体
との共重合による方法 のいずれも採用可能であるが、後者の方法が好ましい。

【００３７】そして、上記ii）の合成方法において、上
記標的リガンドをチオール誘導体、マレイミド誘導体、
カルボン酸誘導体又はビニル誘導体とし、他方上記ポリ
カチオン性誘導体をチオール誘導体、マレイミド誘導
体、カルボン酸誘導体又はビニル誘導体とし（マクロモ
ノマー：反応中間物質）、これらを共有結合により共重
合せしめる方法が特に好ましい。この方法によれば、本
発明のグラフト共重合体を効率良く製造することが可能
な傾向にあるからである。

【００３８】なお、本発明にかかるポリカチオン性アミ
ノ酸誘導体の合成方法は、望ましい重合度等に応じて適
宜選択されるが、例えば以下に示す重合方法が挙げられ
る。すなわち、例えば、ε−カルボオベンゾキシ−リジ
ン−Ｎ−カルボン酸無水物およびベンジル−セリン−Ｎ
−カルボン酸無水物を、片末端アミノ基のポリエチレン
オキシド（分子量２００〜２５０，０００）等の第１級
アミンを開始剤として重合させる方法である。この場
合、ポリエチレンオキシド−ポリアミノ酸ブロックコポ
リマーにおけるポリアミノ酸部分の分子量は、特には限
定されないが５００〜５０，０００であることが望まし
い。

【００３９】また、本発明にかかるポリカチオン性アミ
ノ酸に前記生体膜親和性基を導入する方法としては、次
に示す有機合成法により実施することも可能である。す
なわち、例えば、ｎ−ブチルアミン、ｎ−ヘキシルアミ
ン等のアルキルアミンを開始剤としてＺ−リジンのＮ−
カルボン酸無水物（ＮＣＡ）を重合させ、ついでＮ末端
をアシル化し、さらにアミノ基を脱保護して疎水的な末
端を持つポリリジンマクロモノマーを合成することが可
能である。

【００４０】次に、本発明の薬剤、並びに薬物を細胞に
取り込ませる本発明の方法について説明する。

【００４１】本発明の薬剤は、前述のように、前記本発
明のグラフト共重合体と、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イオン
性化合物からなる群から選択される薬物とを含むもので
ある。また、本発明の方法は、前記本発明のグラフト共
重合体を用いて、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イオン性化合物
からなる群から選択される薬物を前記特定細胞に取り込
ませる方法である。

【００４２】本発明のグラフト共重合体によって細胞内
に導入可能な核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）の大きさ、種類
等は特に限定されないが、例えば、線状二本鎖ＤＮＡ、
環状二本鎖ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡが採用
可能である。また、本発明のグラフト共重合体によって
細胞内に導入可能な陰イオン性化合物としては、プラバ
スタチン、ジゴキシン、フェニルブタゾン、ワルファリ
ン、クロルチアシド、インシュリン、カルシトニン等が
挙げられる。

【００４３】また、本発明のグラフト共重合体を使用す
ることにより、細胞に有用なタンパク質をコードする構
造遺伝子を導入して、該遺伝子を発現させることが可能
になる。例えばアンチセンスを導入して特定の遺伝子の
制御を行うことが可能となる。さらに、本発明のグラフ
ト共重合体はリボザイム、トリプレックス、アプタマー
等のキャリアーとしても利用可能である。なお、オリゴ
ヌクレオチドとしては、ホスホジエステル体、ホスホロ
チオエート体、またはその他の誘導体を好ましく使用可
能である。

【００４４】本発明のグラフト共重合体の使用量につい
ては特に限定されることなく、使用目的に応じて最適化
される。例えば、核酸１μｍｏｌに対して約０．１〜１
０００μｍｏｌのグラフト共重合体を使用することが好
ましい。

【００４５】本発明のグラフト共重合体は、さらに、患
者から標的細胞を体外に取り出し、目的とする遺伝子を
導入した後に再びその細胞を患者の体内に戻すという自
家移植による遺伝子治療（ｅｘ ｖｉｖｏ 遺伝子治
療）にも、遺伝子を直接患者に投与する遺伝子治療（ｉ
ｎ ｖｉｖｏ 遺伝子治療）にも好ましく使用できるも
のである。また、遺伝子治療方法として、異常（原因）
遺伝子をそのままにして、新しい（正常）遺伝子を付け
加える方法（Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｇｅｎｅ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ）と、異常遺伝子を正常遺伝子で置き換え
る方法（Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ）があるが、どちらにも好ましく使用できる。

【００４６】本発明のグラフト共重合体を用いた薬剤
（調製剤）の投与方法は特に限定されず、経口的並びに
非経口的に投与することが可能であり、注射、経皮、経
粘膜、経鼻又は経口投与が好ましい。この場合、本発明
のグラフト共重合体の使用量は、その使用方法、使用目
的等により異なるが、例えば、核酸を含むキャリアーと
して注射投与して用いる場合には、例えば、１日量約
０．１μｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇを投与するのが好
ましく、より好ましくは、１日量約１μｇ／ｋｇ−５０
ｍｇ／ｋｇである。

【００４７】なお、本発明の薬剤の剤形は特に制限され
ず、用途等に応じて注射剤、貼付剤、経口投与剤等の剤
形が適宜採用される。また、本発明の薬剤の剤形等に応
じて、薬理学的に許容される範囲の添加剤、例えば賦形
剤、安定化剤、溶剤、溶解助剤、分散剤、が前記グラフ
ト共重合体及び前記薬物に適宜加えられる。

【００４８】

【実施例】以下、実施例に基づいて本発明をより具体的
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。

【００４９】実施例１［一方の末端にメタクリロイル
基、他方の末端にアルキルアミン基を有するリジンオリ
ゴマーの合成］ １−１：（アルキルアミン基をＣ末端に有するＺ−保護
リジンオリゴマーの合成） 先ず、ｅ−Ｚ（カルボベンゾキシ）−リジン Ｎ−カル
ボン酸無水物（ＮＣＡ：図１中の化合物（２））を既知
の手法により合成し、再結晶法により精製した。次に、
５．３ｇ（１７．３ｍｍｏｌ）のＮＣＡを脱水ジメチル
ホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍｌ）に溶かし、所定量
（ＮＣＡの１／１０、１／２０あるいは１／４０当量）
のｎ−ドデシルアミン（図１中の化合物（１））を重合
開始剤（Ｉ）として加え、室温で２日間反応させた。そ
の後、大過剰（約１リットル）のエチルエーテルに反応
後のＤＭＦ溶液を滴下し、リジンオリゴマーを沈殿物と
して得た。そして、得られたリジンオリゴマーをＤＭＦ
／エチルエーテル系で再結晶させて精製し、減圧下乾燥
させて、ドデシルアミン基をＣ末端に有するリジンオリ
ゴマーを得た。

【００５０】なお、上記の反応過程におけるＮＣＡ／開
始剤比（［Ｍ］／［Ｉ］比）を表１に示すように変える
ことにより、得られるリジンオリゴマーの数平均重合度
及び数平均分子量を制御した。

【００５１】また、ｎ−ドデシルアミンのかわりにｎ−
ブチルアミン、ｎ−ヘキシルアミンを使用した以外は上
記方法と同様にして、それぞれブチルアミン基あるいは
ヘキシルアミン基をＣ末端に有するリジンオリゴマー
（図１中の化合物（３））を得た。

【００５２】得られたリジンオリゴマーの数平均重合度
及び数平均分子量を表１に示す。

【００５３】

【表１】

【００５４】１−２：（Ｚ−保護リジンオリゴマーのＮ
末端へのメタクリロイル基の導入） １−１で得られたリジンオリゴマー２００ｍｇを脱水Ｄ
ＭＦ５ｍｌに溶解した。この溶液に、メタクリロイルク
ロライド７５ｍｇおよびトリエチルアミン１４８ｍｇを
加え室温で３時間反応させた。その後、反応後のＤＭＦ
溶液を大過剰のエチルエーテル（約１００ｍｌ）に加
え、沈殿したオリゴマーを回収した。さらに、得られた
オリゴマーをＤＭＦ／エチルエーテル系で再結晶させて
精製した。

【００５５】得られたオリゴマーを¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆中）により測定したところ、表２に示すＮＭ
Ｒシグナルが検出された。従って、得られたオリゴマー
は、Ｃ末端にアルキルアミン基、Ｎ末端にメタクリロイ
ル基が導入されたＺ−保護リジンオリゴマー（図１中の
化合物（４））であることが確認された。

【００５６】

【表２】

【００５７】１−３：（アルキルアミン基をＣ末端に、
メタクリロイル基をＮ末端に有するＺ−保護リジンオリ
ゴマーからのＺ−基の脱保護） １−２で得られたオリゴマー１００ｍｇを、１ｍｌのト
リフロロ酢酸と０．２５ｍｌのチオアニソールとの混合
物に溶解し、室温で３時間反応させた。その後、反応溶
液を大過剰のエチルエーテル（約５０ｍｌ）に加え、沈
殿したオリゴマーを回収した。さらに、得られたオリゴ
マーをＤＭＦ／エチルエーテル系で再結晶させて精製し
た。

【００５８】得られたオリゴマーを¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ
中）により測定したところ、表３に示すＮＭＲシグナル
が検出された。従って、得られたオリゴマーは、１−２
で得られたＺ−保護リジンオリゴマー（図１中の化合物
（４））からＺ基が脱保護されたリジンオリゴマー（図
１中の化合物（５））であることが確認された。また、
ＮＭＲシグナルからは、脱保護過程における副反応は検
出されなかった。

【００５９】

【表３】

【００６０】実施例２（機能性オリゴマーと肝特異性合
成高分子（ＰＶＬＡ）との共重合体の合成） ガラクトース残基を有するスチレン誘導体であるＮ−Ｐ
−ビニルベンジル−Ｄ−ラクトンアミド（ＶＬＡ：図１
中の化合物（６））のポリマー（ＰＶＬＡ）を標的リガ
ンドとして用いた。そして、ＰＶＬＡと実施例１で得ら
れたリジンオリゴマー（図１中の化合物（５））との共
重合体｛ＰＶＬＡ−リジンオリゴマー誘導体（ＰＶＬＡ
／ＰＬＬグラフト共重合体）｝を、実施例１で得られた
メタクリロイル基を末端に有するリジンオリゴマーのラ
ジカル重合性を利用し、合成標的リガンドＰＶＬＡのモ
ノマーであるＶＬＡとの共重合反応により以下のように
して合成した。

【００６１】先ず、重合管中にＶＬＡ １ｇと実施例１
で得られたリジンオリゴマー０．１〜０．３ｇとをジメ
チルスルフォキシド５ｍｌに溶解した。これにＮ、Ｎ’
−アゾビス（イソブチロニトリル）を最終濃度２０ｍＭ
になるように加え、脱気後封管し、６０℃で２日間反応
させた。その後、重合管を開管し、反応溶液を透析チュ
ーブに移して２週間水に対して透析し、内容物を凍結乾
燥して重合体を得た。得られた重合体を¹Ｈ−ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ₆中）により測定したところ、表４に示
すＮＭＲシグナルが検出された。このようにリジンオリ
ゴマーおよびＰＶＬＡ双方に由来するシグナルが観察さ
れ、ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体（図１中の化合
物（７））が合成されていることが確認された。

【００６２】また、¹Ｈ−ＮＭＲにより各ＰＶＬＡ／Ｐ
ＬＬグラフト共重合体中のリジン含量を測定した結果を
表５に示す。

【００６３】

【表４】

【００６４】

【表５】 実施例３（ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体のプラス
ミドＤＮＡとの結合性評価試験） 実施例２で得られたＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体
｛Ｂ１０２（ブチル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリリジン
含量１４ｗｔ％）、Ｂ２０２（ブチル末端、ＰＬＬ２０
量体、ポリリジン含量１４ｗｔ％）、Ｈ１０２（ヘキシ
ル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリリジン含量１４ｗｔ
％）｝とプラスミドＤＮＡとの複合体形成能を、以下の
ようにしてゲル電気泳動により観察した。

【００６５】すなわち、６．８ｋｂｐのプラスミドＤＮ
Ａ（ｐＳＶ：ｐＳＶβ−ガラクトシダーゼコントロール
プラスミド、プロメガ社製）とＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフ
ト共重合体とをさまざまな比（図２に示すチャージ比）
で混合した後、アガロースゲル電気泳動で解析した。得
られた電気泳動図（ゲルのバンドのトレース図）を図２
（ａ）〜図２（ｃ）に示す。

【００６６】複合体のバンドは、コントロール（プラス
ミドＤＮＡのみ）のバンドよりも泳動距離が短いことよ
り、複合体が形成されていることが確認された。また、
図２（ａ）〜図２（ｃ）から明らかなように、いずれの
ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体においてもチャージ
比１以上で複合体のバンドが現れていることから、チャ
ージ比１以上でプラスミドＤＮＡと完全に複合体を形成
していることが確認された。

【００６７】実施例４（ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重
合体のオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ）との結合性評価試
験） 実施例２で得られたＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体
｛Ｂ１０２（ブチル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリリジン
含量１４ｗｔ％）、Ｂ２０２（ブチル末端、ＰＬＬ２０
量体、ポリリジン含量１４ｗｔ％）、Ｈ１０２（ヘキシ
ル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリリジン含量１４ｗｔ
％）｝とオリゴヌクレオチドとの複合体形成能を、以下
のようにしてゲル電気泳動により観察した。

【００６８】すなわち、オリゴヌクレオチド（４０ｍｅ
ｒ）とＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体とをさまざま
な比（図３に示すチャージ比）で混合した後、ポリアク
リルアミド電気泳動でフリーのオリゴヌクレオチド量を
解析した。得られた電気泳動図（ゲルのバンドのトレー
ス図）を図３（ａ）〜図３（ｃ）に示す。

【００６９】図３（ａ）〜図３（ｃ）から明らかなよう
に、Ｂ１０２においてはチャージ比２０のレーンでフリ
ーのオリゴヌクレオチド（複合体を形成していないも
の）が全く観察されなくなり、Ｂ２０２においてはチャ
ージ比１０のレーンでフリーのオリゴヌクレオチドが全
く観察されなくなり、Ｈ１０２においてはチャージ比５
のレーンでフリーのオリゴヌクレオチドが全く観察され
なくなった。従って、いずれのＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフ
ト共重合体においてもオリゴヌクレオチドと完全に複合
体を形成しており、しかもヘキシル基を有するグラフト
共重合体はブチル基を有するものより更に結合性が高い
ことが確認された。

【００７０】実施例５（ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重
合体とオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ）との複合体の安定
性評価試験） オリゴヌクレオチドおよびＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共
重合体／オリゴヌクレオチド複合体をそれぞれ血清（Ｆ
ＣＳ（牛胎児血清）５０％）で処理した。オートラジオ
グラフィのパターンから血清中の安定性を確認したとこ
ろ、オリゴヌクレオチド単独では３０分でほとんど分解
されるのに対し、上記複合体ではかなり安定であること
が確認された。

【００７１】また、ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル
電気泳動）後のゲルを切り出し、液体シンチレーション
で上記複合体から解離されたオリゴヌクレオチドを直接
測定し、これを定量した。

【００７２】なお、上記複合体から解離されたオリゴヌ
クレオチドを定量する際、複合体に関与していないフリ
ーのオリゴヌクレオチドをバックグラウンドとして除く
必要があるため、ＰＡＡ（ポリアクリル酸）を添加した
場合のフリーのオリゴヌクレオチドの定量値からＰＡＡ
を添加しない場合の値を差し引いた値をインタクトのオ
リゴヌクレオチド量とした。

【００７３】そして、血清（ＦＣＳ５０％）処理時間０
の時において上記複合体に結合しているオリゴヌクレオ
チド量を１００％として、血清処理時間経過に伴うその
量の減少を観察し、得られた結果を図４に示す。

【００７４】図４から明らかなように、複合体形成時間
（複合体を形成させるための反応時間）が３時間の場
合、Ｂ１０−２０（ブチル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリ
リジン含量２０ｗｔ％）を用いた複合体の安定性がやや
低かったものの、Ｈ１０−２０（ヘキシル末端、ＰＬＬ
１０量体、ポリリジン含量２０ｗｔ％）を用いた複合体
及びＢ２０−２０（ブチル末端、ＰＬＬ２０量体、ポリ
リジン含量２０ｗｔ％）を用いた複合体にあっては少な
くとも５時間程度まではオリゴヌクレオチドが多量に分
解されてしまうことはないことが確認された。

【００７５】また、複合体形成時間を２４時間にしてＢ
２０−２０／オリゴヌクレオチド複合体を得てみたとこ
ろ、得られた複合体は、形成時間が３時間の場合の複合
体と殆ど同様の安定性であった。

【００７６】実施例６（ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重
合体とオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ）との複合体の、肝
ガン由来細胞に対する相互作用評価試験） テキサスレッドで蛍光標識を付したオリゴヌクレオチド
とＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体とを混合した後、
アシアロ糖タンパク質レセプター（ＡＳＧＰＲ）を持つ
肝ガン由来細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）培養系に加え、３７℃
で２時間培養させた。その後、上記の細胞培養系を洗
浄、固定した後、共焦点レーザー走査顕微鏡によりテキ
サスレッドの発色による蛍光像を観察した。得られた蛍
光像及び透過光像の写真を図５（ａ）〜（ｆ）に示す。

【００７７】なお、図５（ａ）及び図５（ｂ）はそれぞ
れオリゴヌクレオチドのみを用いた場合の蛍光像及び透
過光像であり、図５（ｃ）及び図５（ｄ）はそれぞれＨ
１０−１４（ヘキシル末端、ＰＬＬ１０量体、ポリリジ
ン含量１４ｗｔ％）とオリゴヌクレオチドとの複合体を
用いた場合の蛍光像及び透過光像であり、図５（ｅ）及
び図５（ｆ）はそれぞれＨ４０−１４（ヘキシル末端、
ＰＬＬ４０量体、ポリリジン含量１４ｗｔ％）とオリゴ
ヌクレオチドとの複合体を用いた場合の蛍光像及び透過
光像である。

【００７８】図５（ａ）〜（ｆ）から明らかなように、
ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体の存在によりオリゴ
ヌクレオチドは細胞内に取り込まれ、その取り込み量は
１０倍量のフリーオリゴヌクレオチドを細胞と相互作用
させたときと同様、あるいはそれより多かった。すなわ
ち、ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合体が、ＨｅｐＧ２
細胞へのオリゴヌクレオチドの取り込みを促進すること
が確認された。

【００７９】また、Ｈ２０−１４（ヘキシル末端、ＰＬ
Ｌ２０量体、ポリリジン含量１４ｗｔ％）とオリゴヌク
レオチドとの複合体（共重合体／ＤＮＡ＝１／１）を用
いた場合の平面蛍光像、断面蛍光像及び平面透過光像の
写真をそれぞれ図６（ａ）〜（ｃ）に示す。

【００８０】細胞の蛍光断面像を観察したところ（図６
（ｂ））、細胞内に明るい赤色の発色が見られ、オリゴ
ヌクレオチドが細胞内部まで導入されていることが確認
された。

【００８１】実施例７（ＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重
合体とオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ）との複合体の、細
胞選択性評価試験） 実施例６と同様に、テキサスレッドで蛍光標識を付した
オリゴヌクレオチドとＰＶＬＡ／ＰＬＬグラフト共重合
体とを混合した後、ＡＳＧＰＲを持つＨｅｐＧ２細胞培
養系及びＡＳＧＰＲを持たないＰＡＮＣ細胞培養系にそ
れぞれ加え、３７℃で２時間培養させた。その後、上記
の細胞培養系を洗浄、固定した後、共焦点レーザー走査
顕微鏡によりテキサスレッドの発色による蛍光像を観察
した。得られた蛍光像及び透過光像の写真を図７（ａ）
〜（ｄ）に示す。

【００８２】なお、図７（ａ）及び図７（ｂ）はそれぞ
れＨｅｐ Ｇ２細胞培養系に添加した場合の蛍光像及び
透過光像であり、図７（ｃ）及び図７（ｄ）はそれぞれ
ＰＡＮＣ細胞培養系に添加した場合の蛍光像及び透過光
像である。また、共重合体としてはＨ４０−１２（ヘキ
シル末端、ＰＬＬ４０量体、ポリリジン含量１２ｗｔ
％）を用い、ＤＮＡ／共重合体の比率は２／１である。

【００８３】図７（ａ）〜（ｄ）から明らかなように、
ＰＡＮＣ細胞に比べてＨｅｐ Ｇ２細胞においてより強
い赤色の発色が観察されており、従ってＰＶＬＡ／ＰＬ
Ｌグラフト共重合体によってオリゴヌクレオチドが細胞
特異選択的にＨｅｐ Ｇ２細胞に送達されていることが
確認された。

【００８４】

【発明の効果】以上、詳しく説明した通り、本発明のグ
ラフト共重合体によれば、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イオン
性化合物からなる群から選択される薬物と安定な複合体
が形成され、該薬物を特定の細胞または組織へ送達しか
つ細胞質内への移行性を向上させることが可能となる。

【００８５】従って、このようなグラフト共重合体を含
有する本発明の薬剤並びにかかるグラフト共重合体を用
いる本発明の方法によれば、ＤＮＡ、ＲＮＡ又は陰イオ
ン性化合物といった薬物を安定な複合体の形で特定の細
胞または組織へ送達し、そして細胞質内へ充分に取り込
ませることが可能となる。

【００８６】それゆえ、上記本発明のグラフト共重合体
は、その性質に基づき、各種遺伝子疾患、あるいはエイ
ズ等のウイルス病に対する遺伝子治療薬の生体内運搬体
として有用となる。また、本発明のグラフト共重合体
は、ウイルスをはじめとして、遺伝子工学技術による種
々の有用動植物の創出にも大きく寄与するものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のグラフト共重合体の合成経路の一例を
示す化学反応式図である。

【図２】（ａ）〜（ｃ）はぞれぞれ、本発明のグラフト
共重合体とプラスミドＤＮＡとの結合性を解析した結果
を示すアガロースゲル電気泳動図である。

【図３】（ａ）〜（ｃ）はぞれぞれ、本発明のグラフト
共重合体とオリゴヌクレオチド（ＤＮＡ）との結合性を
解析した結果を示すポリアクリルアミド電気泳動図であ
る。

【図４】本発明のグラフト共重合体とオリゴヌクレオチ
ド（ＤＮＡ）との複合体の血清処理時安定性を示すグラ
フである。

【図５】（ａ）及び（ｂ）はそれぞれオリゴヌクレオチ
ドのみを肝ガン由来細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）に取り込ませ
た状態を示す蛍光写真及び透過光写真であり、（ｃ）〜
（ｆ）はそれぞれ本発明のグラフト共重合体を用いてオ
リゴヌクレオチドをＨｅｐ Ｇ２細胞に取り込ませた状
態を示す蛍光写真及び透過光写真である。

【図６】（ａ）〜（ｃ）はそれぞれ本発明のグラフト共
重合体を用いてオリゴヌクレオチドをＨｅｐ Ｇ２細胞
に取り込ませた状態を示す平面蛍光写真、断面蛍光写真
及び平面透過光写真である。

【図７】（ａ）及び（ｂ）はそれぞれ本発明のグラフト
共重合体を用いてオリゴヌクレオチドをＨｅｐ Ｇ２細
胞に取り込ませた状態を示す蛍光写真及び透過光写真で
あり、（ｃ）及び（ｄ）はそれぞれ本発明のグラフト共
重合体を用いてオリゴヌクレオチドをＰＡＮＣ細胞に取
り込ませた状態を示す蛍光写真及び透過光写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 後藤 武 茨城県つくば市観音台１−25−11 久光製 薬株式会社筑波研究所内 (72)発明者 米村 圭史 茨城県つくば市観音台１−25−11 久光製 薬株式会社筑波研究所内 (72)発明者 野崎 周英 熊本県熊本市武蔵ケ丘５−26−１ (72)発明者 上野 哲郎 熊本県菊池郡合志町豊岡すずかけ台2527− 108

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ポリカチオン性アミノ酸に生体膜親和性
   基を導入してなるポリカチオン性誘導体と、特定細胞に
   対して標的性を示す標的リガンドとを含むことを特徴と
   するグラフト共重合体。
2. 【請求項２】 前記ポリカチオン性アミノ酸が、ポリリ
   ジン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン、ポリアルギニ
   ン、並びにリジン、ヒスチジン、オルニチン及びアルギ
   ニンのうちの少なくとも一つを含むアミノ酸共重合体か
   らなる群から選択されかつ数平均重合度が８〜１００で
   あるアミノ酸であり、 前記生体膜親和性基が、炭素数が４〜１８でありかつ不
   飽和数が０〜４である脂肪族炭化水素基、コレステロー
   ル誘導体、及びホスファチジルエタノールアミン誘導体
   からなる群から選択される基である、ことを特徴とする
   請求項１記載のグラフト共重合体。
3. 【請求項３】 前記標的リガンドが、抗体、酵素、糖
   鎖、核酸、合成アミノ酸、ポリエチレングリコール、ポ
   リアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、生体由来多
   糖、及びそれらの修飾体からなる群から選択される少な
   くとも一つであることを特徴とする請求項１又は２記載
   のグラフト共重合体。
4. 【請求項４】 前記グラフト共重合体の主鎖部分の数平
   均重合度が１０〜１００であり、該グラフト共重合体の
   側鎖部分の数が１〜５０であることを特徴とする請求項
   １〜３のうちのいずれか一項記載のグラフト共重合体。
5. 【請求項５】 前記ポリカチオン性アミノ酸がリジンオ
   リゴマーであり、前記生体膜親和性基が炭素数が４〜１
   ８のアルキル基であり、かつ前記標的リガンドがガラク
   トース残基を有するポリスチレン誘導体であることを特
   徴とする請求項１〜４のうちのいずれか一項記載のグラ
   フト共重合体。
6. 【請求項６】 下記一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ｒは炭素数が４〜１８のアルキル基であり、Ｘ
   ₁及びＸ₂はそれぞれ水素原子であり、ａは１０〜２００
   の整数であり、ｂは１〜１００の整数であり、ｐは８〜
   １００の整数である］で表わされることを特徴とする請
   求項１〜５のうちのいずれか一項記載のグラフト共重合
   体。
7. 【請求項７】 請求項１〜６のうちのいずれか一項記載
   のグラフト共重合体と、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イオン性
   化合物からなる群から選択される薬物とを含むことを特
   徴とする薬剤。
8. 【請求項８】 請求項１〜６のうちのいずれか一項記載
   のグラフト共重合体を用いて、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び陰イ
   オン性化合物からなる群から選択される薬物を前記特定
   細胞に取り込ませることを特徴とする方法。