JPH10337194A - 新規微生物及びアミノ酸の製造法 - Google Patents
新規微生物及びアミノ酸の製造法Info
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- JPH10337194A JPH10337194A JP24533297A JP24533297A JPH10337194A JP H10337194 A JPH10337194 A JP H10337194A JP 24533297 A JP24533297 A JP 24533297A JP 24533297 A JP24533297 A JP 24533297A JP H10337194 A JPH10337194 A JP H10337194A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒドロキシ酸から対応するアミノ酸へ高効率
・高収率で変換する能力を有する微生物を用いて、光学
活性メチオニン等の光学活性α−アミノ酸の実用的な製
造法を提供すること。 【解決手段】 一般式 ＲＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨで表さ
れるα−ヒドロキシ酸に、該α−ヒドロキシ酸のヒドロ
キシ基をアミノ基に変換する能力を有するアースロバク
ター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、又はフォトバク
テリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する
微生物の培養液、該菌体、該菌体処理物を作用させ、一
般式 ＲＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨで表される光学活性α−
アミノ酸を製造する。
・高収率で変換する能力を有する微生物を用いて、光学
活性メチオニン等の光学活性α−アミノ酸の実用的な製
造法を提供すること。 【解決手段】 一般式 ＲＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨで表さ
れるα−ヒドロキシ酸に、該α−ヒドロキシ酸のヒドロ
キシ基をアミノ基に変換する能力を有するアースロバク
ター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、又はフォトバク
テリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する
微生物の培養液、該菌体、該菌体処理物を作用させ、一
般式 ＲＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨで表される光学活性α−
アミノ酸を製造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、α−ヒドロキシ酸
からの光学活性α−アミノ酸の製造法、及びα−ヒドロ
キシ酸を光学活性α−アミノ酸に変換する能力を有する
新規な微生物に関する。
からの光学活性α−アミノ酸の製造法、及びα−ヒドロ
キシ酸を光学活性α−アミノ酸に変換する能力を有する
新規な微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、光学活性α−アミノ酸の製造法と
して、直接醗酵法，光学分割法等が一般的に知られてい
る。また、ヒドロキシ酸を原料としてアミノ酸に変換す
る方法があり、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属等に属する微生物を用いる方法（日本農芸化学会
誌、４８巻、第５号、２９７〜３１１頁、１９７４）、
精製酵素と化学修飾された補酵素を用いる方法（ＤＥ３
３０７０９４（１９８４））等が知られている。また、
生体内蔵器中でヒドロキシ酸がアミノ酸に変換されるこ
と（Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ,１１４，１７１６−１７
２３（１９８４））も知られている。
して、直接醗酵法，光学分割法等が一般的に知られてい
る。また、ヒドロキシ酸を原料としてアミノ酸に変換す
る方法があり、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）属等に属する微生物を用いる方法（日本農芸化学会
誌、４８巻、第５号、２９７〜３１１頁、１９７４）、
精製酵素と化学修飾された補酵素を用いる方法（ＤＥ３
３０７０９４（１９８４））等が知られている。また、
生体内蔵器中でヒドロキシ酸がアミノ酸に変換されるこ
と（Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ,１１４，１７１６−１７
２３（１９８４））も知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述の光学活性アミノ
酸の製造法の中で、直接醗酵法はアミノ酸の種類によっ
ては製造が困難であるなどの問題点をもっていた。ま
た、光学分割法では、一般にラセミ体の半分のみしか利
用できない。一方、ヒドロキシ酸からのアミノ酸への変
換は、菌体を培養するための栄養源が必要であったり、
高価な酵素や補酵素、生体臓器等を必要とするなど経済
性、実用性に問題があった。本発明の課題は、前駆体で
あるヒドロキシ酸から対応するアミノ酸へ高効率・高収
率で変換する能力を有する微生物を用いる、光学活性メ
チオニン等の光学活性α−アミノ酸の実用的な製造法を
提供することにある。
酸の製造法の中で、直接醗酵法はアミノ酸の種類によっ
ては製造が困難であるなどの問題点をもっていた。ま
た、光学分割法では、一般にラセミ体の半分のみしか利
用できない。一方、ヒドロキシ酸からのアミノ酸への変
換は、菌体を培養するための栄養源が必要であったり、
高価な酵素や補酵素、生体臓器等を必要とするなど経済
性、実用性に問題があった。本発明の課題は、前駆体で
あるヒドロキシ酸から対応するアミノ酸へ高効率・高収
率で変換する能力を有する微生物を用いる、光学活性メ
チオニン等の光学活性α−アミノ酸の実用的な製造法を
提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、比較的安
価に入手できるラセミ体のα−ヒドロキシ酸アンモニウ
ム塩を、微生物を用いることによって、他の高価な副原
料を消費することなく光学活性α−アミノ酸に変換する
ことを目標として設定した。そして、この目標達成のた
めアミノ酸の蓄積を指標にして数々の菌の選択を行い、
本発明のフォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１
０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１９）等の微生物を見出
し、この微生物を用いた光学活性アミノ酸の製造法を確
立し、本発明を完成するに至った。
価に入手できるラセミ体のα−ヒドロキシ酸アンモニウ
ム塩を、微生物を用いることによって、他の高価な副原
料を消費することなく光学活性α−アミノ酸に変換する
ことを目標として設定した。そして、この目標達成のた
めアミノ酸の蓄積を指標にして数々の菌の選択を行い、
本発明のフォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１
０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１９）等の微生物を見出
し、この微生物を用いた光学活性アミノ酸の製造法を確
立し、本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、一般式（１） ＲＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨ （１） （式中、Ｒは直鎖又は分岐鎖状のＣ1-11アルキル基、Ｃ
1-11ハロアルキル基、Ｃ2-11のアルケニル基、ヒドロキ
シＣ1-11アルキル基、Ｃ1-11アルコキシＣ1-11アルキル
基、Ｃ1-11アルキルチオＣ1-6アルキル基又はヘテロ原
子を含んでもよいＣ7-9 アラルキル基、ヒドロキシ、ア
ミノ、ハロゲン、低級アルキル基等の置換基を有しても
よいアリール基を示す。）で表されるα−ヒドロキシ酸
に、該α−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基をアミノ基に変
換する能力を有するアースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ）属、又はフォトバクテリウム（Ｐｈｏｔｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の培養液、該菌
体、該菌体処理物を作用させることを特徴とする一般式
（２） ＲＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ （２） （式中、Ｒは前記と同じ意味を表す。）で表される光学
活性α−アミノ酸の製造法に関する。
1-11ハロアルキル基、Ｃ2-11のアルケニル基、ヒドロキ
シＣ1-11アルキル基、Ｃ1-11アルコキシＣ1-11アルキル
基、Ｃ1-11アルキルチオＣ1-6アルキル基又はヘテロ原
子を含んでもよいＣ7-9 アラルキル基、ヒドロキシ、ア
ミノ、ハロゲン、低級アルキル基等の置換基を有しても
よいアリール基を示す。）で表されるα−ヒドロキシ酸
に、該α−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基をアミノ基に変
換する能力を有するアースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ）属、又はフォトバクテリウム（Ｐｈｏｔｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の培養液、該菌
体、該菌体処理物を作用させることを特徴とする一般式
（２） ＲＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ （２） （式中、Ｒは前記と同じ意味を表す。）で表される光学
活性α−アミノ酸の製造法に関する。
【０００６】ここで用いられる微生物としては、アース
ロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フォトバ
クテリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属す
る微生物である。特に、その微生物は、フォトバクテリ
ウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１１９）が好ましい。
ロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、フォトバ
クテリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属す
る微生物である。特に、その微生物は、フォトバクテリ
ウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−
１６１１９）が好ましい。
【０００７】また、本発明は、α−ヒドロキシ酸に、該
α−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基をアミノ基に変換する
能力を有する微生物の培養液、該菌体、該菌体処理物を
作用させるに際し、反応中に中性アミノ酸を添加するこ
とを特徴とする光学活性α−アミノ酸の製造法に関す
る。
α−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基をアミノ基に変換する
能力を有する微生物の培養液、該菌体、該菌体処理物を
作用させるに際し、反応中に中性アミノ酸を添加するこ
とを特徴とする光学活性α−アミノ酸の製造法に関す
る。
【０００８】さらに、本発明は、α−ヒドロキシ酸を光
学活性α−アミノ酸に変換する能力を有する微生物、フ
ォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）、特にフォトバクテリ
ウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６１１９）に関する。
学活性α−アミノ酸に変換する能力を有する微生物、フ
ォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）、特にフォトバクテリ
ウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６１１９）に関する。
【０００９】上記式（１）において、Ｒは、メチル、エ
チル、イソプロピル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブ
チル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル
基等の直鎖又は分岐鎖状のＣ1-11アルキル基、クロロメ
チル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロ
エチル等のＣ1-11ハロアルキル基、ビニル、アリル、ク
ロチル基等のＣ2-11のアルケニル基、ヒドロキシメチ
ル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、１
−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、３−
ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシイソプロピル、１
−ヒドロキシブチル、２−ヒドロキシブチル、３−ヒド
ロキシブチル、２−ヒドロキシｓｅｃ−ブチル基等のヒ
ドロキシＣ1-11アルキル基、メトキシメチル、２−メト
キシエチル、エトキシメチル、２−エトキシエチル、１
−メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル
基等のＣ1-11アルコキシＣ1-11アルキル基、メチルチオ
メチル、１−メチルチオエチル、２−メチルチオエチ
ル、１−メチルチオプロピル、２−メチルチオプロピ
ル、３−メチルチオプロピル、１−メチルチオブチル、
２−メチルチオブチル、３−メチルチオブチル、４−メ
チルチオブチル、エチルチオメチル、１−メチルチオエ
チル、２−エチルチオエチル、１−エチルチオプロピ
ル、２ーエチルチオプロピル、３−エチルチオプロピ
ル、１−エチルチオブチル、２−エチルチオブチル、３
−エチルチオブチル、４−エチルチオブチル基等のＣ
1-11アルキルチオＣ1-11アルキル基、又は、ベンジル、
４−ヒドロキシベンジル、α−メチルベンジル、α，α
−ジメチルベンジル、２−ピリジルメチル、３−ピリジ
ルメチル、４−ピリジルメチル、２−フリルメチル、３
−フリルメチル、２−チエニルメチル、３−チエニルメ
チル、４−イミダゾイルメチル、３−インドリルメチル
基等のヘテロ原子を含んでもよい Ｃ7-9アラルキル基、
フェニル、ｐ−ヒドロキシフェニル、ｐ−アミノフェニ
ル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メチルフェニル基等の置
換基を有してもよいアリール基等を表す。
チル、イソプロピル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブ
チル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル
基等の直鎖又は分岐鎖状のＣ1-11アルキル基、クロロメ
チル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロ
エチル等のＣ1-11ハロアルキル基、ビニル、アリル、ク
ロチル基等のＣ2-11のアルケニル基、ヒドロキシメチ
ル、１−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシエチル、１
−ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシプロピル、３−
ヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシイソプロピル、１
−ヒドロキシブチル、２−ヒドロキシブチル、３−ヒド
ロキシブチル、２−ヒドロキシｓｅｃ−ブチル基等のヒ
ドロキシＣ1-11アルキル基、メトキシメチル、２−メト
キシエチル、エトキシメチル、２−エトキシエチル、１
−メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル
基等のＣ1-11アルコキシＣ1-11アルキル基、メチルチオ
メチル、１−メチルチオエチル、２−メチルチオエチ
ル、１−メチルチオプロピル、２−メチルチオプロピ
ル、３−メチルチオプロピル、１−メチルチオブチル、
２−メチルチオブチル、３−メチルチオブチル、４−メ
チルチオブチル、エチルチオメチル、１−メチルチオエ
チル、２−エチルチオエチル、１−エチルチオプロピ
ル、２ーエチルチオプロピル、３−エチルチオプロピ
ル、１−エチルチオブチル、２−エチルチオブチル、３
−エチルチオブチル、４−エチルチオブチル基等のＣ
1-11アルキルチオＣ1-11アルキル基、又は、ベンジル、
４−ヒドロキシベンジル、α−メチルベンジル、α，α
−ジメチルベンジル、２−ピリジルメチル、３−ピリジ
ルメチル、４−ピリジルメチル、２−フリルメチル、３
−フリルメチル、２−チエニルメチル、３−チエニルメ
チル、４−イミダゾイルメチル、３−インドリルメチル
基等のヘテロ原子を含んでもよい Ｃ7-9アラルキル基、
フェニル、ｐ−ヒドロキシフェニル、ｐ−アミノフェニ
ル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メチルフェニル基等の置
換基を有してもよいアリール基等を表す。
【００１０】式（１）で表されるα−ヒドロキシ酸のよ
り具体的な例としては、天然アミノ酸の前駆体となりえ
る化合物、例えば、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキ
シプロピオン酸、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタ
ン酸、２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸、リンゴ
酸、２−ヒドロキシグルタール酸、２−ヒドロキシ−３
−フェニルプロピオン酸、２−ヒドロキシイソバレリア
ン酸、ロイシン酸、フェニル乳酸、ｐ−ヒドロキシ−３
−フェニル乳酸、マンデル酸、２−ヒドロキシ酪酸等が
ある。
り具体的な例としては、天然アミノ酸の前駆体となりえ
る化合物、例えば、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキ
シプロピオン酸、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタ
ン酸、２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸、リンゴ
酸、２−ヒドロキシグルタール酸、２−ヒドロキシ−３
−フェニルプロピオン酸、２−ヒドロキシイソバレリア
ン酸、ロイシン酸、フェニル乳酸、ｐ−ヒドロキシ−３
−フェニル乳酸、マンデル酸、２−ヒドロキシ酪酸等が
ある。
【００１１】
【発明の実施の態様】本発明のアミノ酸製造の原料とな
るα−ヒドロキシ酸アンモニウム塩は対応するシアノヒ
ドリンを加水分解することにより容易に合成することが
できる。また、シアノヒドリンは、対応するアルデヒド
に青酸を付加反応させることにより容易に合成すること
ができる。このα−ヒドロキシ酸アンモニウム塩は入手
の容易な点でラセミ体（対掌体の混合物）が好ましい
が、対掌体（エナンチオマー）混合比率は、特に限定さ
れるものでなく、いかなる混合比でもよい。
るα−ヒドロキシ酸アンモニウム塩は対応するシアノヒ
ドリンを加水分解することにより容易に合成することが
できる。また、シアノヒドリンは、対応するアルデヒド
に青酸を付加反応させることにより容易に合成すること
ができる。このα−ヒドロキシ酸アンモニウム塩は入手
の容易な点でラセミ体（対掌体の混合物）が好ましい
が、対掌体（エナンチオマー）混合比率は、特に限定さ
れるものでなく、いかなる混合比でもよい。
【００１２】本発明のアミノ酸製造に用いられる微生物
は、一般式（１）で表されるα−ヒドロキシ酸のヒドロ
キシ基をアミノ基に変換する能力を有する微生物であ
る。例えば、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）属、フォトバクテリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属する微生物である。具体的には、理化
学研究所（微生物系統保存施設）から入手可能なアース
ロバクター・ニコチアネ（Ａｒｔｈｏｒｏｂａｃｔｅｒ
ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）ＪＣＭ １３３３や、フォト
バクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６１１９）等の菌株を例示することができ
る。
は、一般式（１）で表されるα−ヒドロキシ酸のヒドロ
キシ基をアミノ基に変換する能力を有する微生物であ
る。例えば、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ）属、フォトバクテリウム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属する微生物である。具体的には、理化
学研究所（微生物系統保存施設）から入手可能なアース
ロバクター・ニコチアネ（Ａｒｔｈｏｒｏｂａｃｔｅｒ
ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）ＪＣＭ １３３３や、フォト
バクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１６１１９）等の菌株を例示することができ
る。
【００１３】本発明に含まれるフォトバクテリウム・ア
ングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕ
ｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１
９）は、５．０ｇ／１の２−ヒドロキシ−４−メチルチ
オブタン酸を含む液体培地（酵母エキス０．２ｇ／ｌ、
硫酸アンモニウム５．０ｇ／ｌ、リン酸二カリウム１．
０ｇ／ｌ、食塩１．０ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム・７水
和物２．０ｇ／ｌ、硫酸第一鉄・７水和物０．１ｇ／
ｌ、塩化マンガン・４水和物０．０１ｇ／ｌを含む。ｐ
Ｈ＝７．０）で集積培養して、生育する微生物として、
環境中より分離した新菌株である。
ングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕ
ｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１
９）は、５．０ｇ／１の２−ヒドロキシ−４−メチルチ
オブタン酸を含む液体培地（酵母エキス０．２ｇ／ｌ、
硫酸アンモニウム５．０ｇ／ｌ、リン酸二カリウム１．
０ｇ／ｌ、食塩１．０ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム・７水
和物２．０ｇ／ｌ、硫酸第一鉄・７水和物０．１ｇ／
ｌ、塩化マンガン・４水和物０．０１ｇ／ｌを含む。ｐ
Ｈ＝７．０）で集積培養して、生育する微生物として、
環境中より分離した新菌株である。
【００１４】本菌の菌学的性質を以下に示す。 細菌の形及び色 ：短桿菌、乳白色 グラム染色性 ：陰性 運動性 ：＋ 硝酸塩の還元 ：＋ 亜硝酸塩の還元 ：＋ ゼラチンの液化 ：− オキシダーゼ ：＋ カタラーゼ ：＋ ウレアーゼ ：＋ １０℃での生育 ：− ３７℃での生育 ：− 食塩濃度０％で生育 ：− 食塩濃度６％で生育 ：＋ Ｏ−Ｆテスト ：Ｆ ＤＮＡのＧＣ含量 ：４３．５２％ 無機窒素の利用 ：硝酸塩、アンモニウム塩を利用可能 炭水化物の資化性 ：グルコース、ラクトース、リボース、アラ ビノース、キシロース、フラクトース、マ ンノースを資化する
【００１５】以上の菌学的性質をバージーズ マニュア
ル オブ システマティック バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）に基づいて検索した結
果、本菌はフォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏ
ｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）に該当す
る新菌株と判断された。本菌は、２−ヒドロキシ−４−
メチルチオブタン酸に作用して、対応するアミノ酸であ
るＬ−メチオニンに変換する能力に特に優れている。そ
こで本発明者らは、本菌をフォトバクテリウム・アング
スタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔ
ｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３菌と命名し、工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託した（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１
９）。
ル オブ システマティック バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）に基づいて検索した結
果、本菌はフォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏ
ｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）に該当す
る新菌株と判断された。本菌は、２−ヒドロキシ−４−
メチルチオブタン酸に作用して、対応するアミノ酸であ
るＬ−メチオニンに変換する能力に特に優れている。そ
こで本発明者らは、本菌をフォトバクテリウム・アング
スタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔ
ｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３菌と命名し、工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託した（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１
９）。
【００１６】本発明のアミノ酸製造の際に用いる菌の培
養のために用いられる培地は、微生物が資化しうる炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要ならば、有機栄養源
を含む通常の培地である。炭素源としては、グルコース
等の炭水化物、エタノール、グリセロール等のアルコー
ル類、有機酸等が適宜使用される。窒素源としては、硝
酸塩、アンモニウム塩、アミノ酸等が用いられる。無機
イオンとしては、ナトリウムイオンが、フォトバクテリ
ウム・アングスタムＮＳＳＣ１０３３菌の生育には必須
であるが、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、鉄
イオン等が必要に応じ使用される。有機栄養源として
は、ビタミン、アミノ酸等及びこれらを含有するコーン
スティープリカー、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキ
ス等が適宜用いられる。必要な菌体を得るための培養は
好気的条件下に、ｐＨ６ないし８、温度１５ないし３０
℃の適切な範囲に制御しつつ行えばよい。
養のために用いられる培地は、微生物が資化しうる炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要ならば、有機栄養源
を含む通常の培地である。炭素源としては、グルコース
等の炭水化物、エタノール、グリセロール等のアルコー
ル類、有機酸等が適宜使用される。窒素源としては、硝
酸塩、アンモニウム塩、アミノ酸等が用いられる。無機
イオンとしては、ナトリウムイオンが、フォトバクテリ
ウム・アングスタムＮＳＳＣ１０３３菌の生育には必須
であるが、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、鉄
イオン等が必要に応じ使用される。有機栄養源として
は、ビタミン、アミノ酸等及びこれらを含有するコーン
スティープリカー、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキ
ス等が適宜用いられる。必要な菌体を得るための培養は
好気的条件下に、ｐＨ６ないし８、温度１５ないし３０
℃の適切な範囲に制御しつつ行えばよい。
【００１７】本発明の微生物を用いるアミノ酸の製造に
おいて、ヒドロキシ酸に微生物を作用させる方法は、ヒ
ドロキシ酸塩を含む培養培地中で微生物を接触させても
よいし、菌体又は菌体処理物を水溶液中で該塩に接触さ
せてもよい。培養液中で微生物を作用させることによ
り、ヒドロキシ酸塩をアミノ酸に変換させる方法として
は、培養当初よりヒドロキシ酸塩を含む培地を用いても
よいし、また、培養途中にヒドロキシ酸塩を培地に添加
してもよい。ヒドロキシ酸塩の濃度を０．１〜３０％、
好ましくは０．５〜１０％として、上記の方法により１
ないし５日間反応を行うことにより、高濃度の光学活性
アミノ酸が生成蓄積される。一方、微生物の菌体又は菌
体処理物を水溶液にて、ヒドロキシ酸塩と接触させて作
用させる場合には、上記の方法により６ないし７２時間
程度菌の培養を行い、微生物を十分増殖させることによ
り菌体を得る。菌体の使用法としては、菌体を含む培養
液をそのまま使用してもよいし、また、菌体を培養液よ
り分離回収したのち、洗浄して用いてもよいし、洗浄せ
ずに使用してもよい。菌体処理物としては、機械的粉砕
菌体、超音波で処理した菌体、凍結融解を施した菌体、
凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、リゾチーム等の酵素
で処理した菌体、界面活性剤やトルエン等で処理した菌
体、菌体の蛋白画分、菌株より精製した酵素等が適宜用
いられる。
おいて、ヒドロキシ酸に微生物を作用させる方法は、ヒ
ドロキシ酸塩を含む培養培地中で微生物を接触させても
よいし、菌体又は菌体処理物を水溶液中で該塩に接触さ
せてもよい。培養液中で微生物を作用させることによ
り、ヒドロキシ酸塩をアミノ酸に変換させる方法として
は、培養当初よりヒドロキシ酸塩を含む培地を用いても
よいし、また、培養途中にヒドロキシ酸塩を培地に添加
してもよい。ヒドロキシ酸塩の濃度を０．１〜３０％、
好ましくは０．５〜１０％として、上記の方法により１
ないし５日間反応を行うことにより、高濃度の光学活性
アミノ酸が生成蓄積される。一方、微生物の菌体又は菌
体処理物を水溶液にて、ヒドロキシ酸塩と接触させて作
用させる場合には、上記の方法により６ないし７２時間
程度菌の培養を行い、微生物を十分増殖させることによ
り菌体を得る。菌体の使用法としては、菌体を含む培養
液をそのまま使用してもよいし、また、菌体を培養液よ
り分離回収したのち、洗浄して用いてもよいし、洗浄せ
ずに使用してもよい。菌体処理物としては、機械的粉砕
菌体、超音波で処理した菌体、凍結融解を施した菌体、
凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、リゾチーム等の酵素
で処理した菌体、界面活性剤やトルエン等で処理した菌
体、菌体の蛋白画分、菌株より精製した酵素等が適宜用
いられる。
【００１８】反応法としては、菌体培養液、又は菌体も
しくは菌体の処理物を溶解又は懸濁した水溶液にヒドロ
キシ酸塩を添加し、温度５〜５０℃、好ましくは１０〜
４０℃、ｐＨ５〜１１、好ましくは７〜９に保ちつつ静
置又は撹拌すればよい。この際、適切な緩衝液を用いる
のが望ましい。ヒドロキシ酸塩の濃度は０．１〜３０重
量％、好ましくは０．５〜１０重量％であり、必要なら
ば、ヒドロキシ酸塩は反応液中に追補添加される。この
方法により１ないし２４時間で水溶液中には高収率で、
光学活性アミノ酸が生成蓄積される。上記ヒドロキシ酸
塩としては、アンモニウム塩が好ましい。そして、かか
るヒドロキシ酸のアンモニウム塩を反応系内に添加する
代わりに、ヒドロキシ酸と塩化アンモニウムや硝酸アン
モニウム等のアンモニウム塩とを反応系内に添加するこ
ともできるし、また、ヒドロキシ酸のナトリウム塩やカ
リウム塩と、塩化アンモニウムや硝酸アンモニウム等の
アンモニウム塩とを反応系内に添加することもできる。
しくは菌体の処理物を溶解又は懸濁した水溶液にヒドロ
キシ酸塩を添加し、温度５〜５０℃、好ましくは１０〜
４０℃、ｐＨ５〜１１、好ましくは７〜９に保ちつつ静
置又は撹拌すればよい。この際、適切な緩衝液を用いる
のが望ましい。ヒドロキシ酸塩の濃度は０．１〜３０重
量％、好ましくは０．５〜１０重量％であり、必要なら
ば、ヒドロキシ酸塩は反応液中に追補添加される。この
方法により１ないし２４時間で水溶液中には高収率で、
光学活性アミノ酸が生成蓄積される。上記ヒドロキシ酸
塩としては、アンモニウム塩が好ましい。そして、かか
るヒドロキシ酸のアンモニウム塩を反応系内に添加する
代わりに、ヒドロキシ酸と塩化アンモニウムや硝酸アン
モニウム等のアンモニウム塩とを反応系内に添加するこ
ともできるし、また、ヒドロキシ酸のナトリウム塩やカ
リウム塩と、塩化アンモニウムや硝酸アンモニウム等の
アンモニウム塩とを反応系内に添加することもできる。
【００１９】生成アミノ酸として、グリシン、アラニ
ン、バリン、ロイシン、セリン、トレオニン、メチオニ
ン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、エ
チオニン、リジン、ノルロイシン、ヒスチジン、チロシ
ン、フェニルグリシン、ｐ−ヒドロキシフェニルグリシ
ン、２−アミノ酪酸等を挙げることができる。
ン、バリン、ロイシン、セリン、トレオニン、メチオニ
ン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、エ
チオニン、リジン、ノルロイシン、ヒスチジン、チロシ
ン、フェニルグリシン、ｐ−ヒドロキシフェニルグリシ
ン、２−アミノ酪酸等を挙げることができる。
【００２０】また、この反応において、反応速度の向上
と反応経路の有効な制御のために、ある種の添加物を加
えてもよい。添加物として、中性アミノ酸が有効であ
る。一般にはＬ−体が好ましいが、Ｄ−体でも有効なも
のがある。そして、菌体を使用する場合、反応後に菌体
を分離回収し、そのまま、あるいは水、生理食塩水又は
適当な緩衝液で洗浄した後、再度同条件での反応に用い
ることができる。菌体を反復使用すれば経済的に有利で
ある。
と反応経路の有効な制御のために、ある種の添加物を加
えてもよい。添加物として、中性アミノ酸が有効であ
る。一般にはＬ−体が好ましいが、Ｄ−体でも有効なも
のがある。そして、菌体を使用する場合、反応後に菌体
を分離回収し、そのまま、あるいは水、生理食塩水又は
適当な緩衝液で洗浄した後、再度同条件での反応に用い
ることができる。菌体を反復使用すれば経済的に有利で
ある。
【００２１】以上の方法により生成された光学活性α−
アミノ酸は、再結晶等の方法により分離精製することが
できる。本発明により得られるアミノ酸水溶液は、他に
副原料等を含まないため、容易に能率良くアミノ酸を分
離精製することができるものであり、生成したアミノ酸
はＬ−体の立体構造を有している。かくして光学活性α
−アミノ酸を経済的に有利に製造することができる。
アミノ酸は、再結晶等の方法により分離精製することが
できる。本発明により得られるアミノ酸水溶液は、他に
副原料等を含まないため、容易に能率良くアミノ酸を分
離精製することができるものであり、生成したアミノ酸
はＬ−体の立体構造を有している。かくして光学活性α
−アミノ酸を経済的に有利に製造することができる。
【００２２】
【実施例】以下、実施例によって、本発明を更に具体的
に説明するが、これにより本発明は何ら限定されるもの
でない。
に説明するが、これにより本発明は何ら限定されるもの
でない。
【００２３】実施例１ １２１℃で１５分間滅菌した下記の組成の培地２ｍｌを
１０ｍｌ容アルミキャップ付き試験管中に入れ、同じ組
成の寒天培地（寒天１５％）で３０℃で一晩培養したフ
ォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３菌
（工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１６１１９）を１白金耳接種し、３０℃で４８時
間振盪培養した。
１０ｍｌ容アルミキャップ付き試験管中に入れ、同じ組
成の寒天培地（寒天１５％）で３０℃で一晩培養したフ
ォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３菌
（工業技術院生命工学工業技術研究所寄託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１６１１９）を１白金耳接種し、３０℃で４８時
間振盪培養した。
【００２４】 ２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン酸（ａｑ．７０％） ２．９ｇ／ｌ グルコース １０．０ｇ／ｌ コーンスティープリカー ２０．０ｇ／ｌ 食塩 １．０ｇ／ｌ リン酸三カリウム ０．５ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．５ｇ／ｌ 塩化アンモニウム ２．０ｇ／ｌ 培養液中の２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン酸
は、収率９５．５％という高収率で、メチオニンに変換
された。
は、収率９５．５％という高収率で、メチオニンに変換
された。
【００２５】この培養液の一部６００μｌ中より、菌体
を遠心分離により採取し、生理食塩水０．３ｍｌで１回
洗浄し、遠心分離により菌体を集めた。この菌体（湿菌
体重量９．６ｍｇ相当）を２−ヒドロキシ−４−メチル
チオブタン酸０．５０ｍｇ及び塩化アンモニウム０．５
３ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．６）０．
１２ｍｌに添加して、３５℃で２４時間振盪し反応を行
った。反応終了後、遠心分離により、菌体を除いた。高
速液体クロマトグラフ法により、０．２２ｍｇのメチオ
ニンの生成を確認した。収率は３９．１％であった。培
養中及び反応で生成したメチオニンは、キラルプレート
（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ社製、展開液；メタノー
ル：水：アセトニトリル＝１：１：４）による分析によ
り、いずれもＬ−体であると判明した。
を遠心分離により採取し、生理食塩水０．３ｍｌで１回
洗浄し、遠心分離により菌体を集めた。この菌体（湿菌
体重量９．６ｍｇ相当）を２−ヒドロキシ−４−メチル
チオブタン酸０．５０ｍｇ及び塩化アンモニウム０．５
３ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．６）０．
１２ｍｌに添加して、３５℃で２４時間振盪し反応を行
った。反応終了後、遠心分離により、菌体を除いた。高
速液体クロマトグラフ法により、０．２２ｍｇのメチオ
ニンの生成を確認した。収率は３９．１％であった。培
養中及び反応で生成したメチオニンは、キラルプレート
（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ社製、展開液；メタノー
ル：水：アセトニトリル＝１：１：４）による分析によ
り、いずれもＬ−体であると判明した。
【００２６】実施例２ 実施例１と同様の方法により得たフォトバクテリウム・
アングスタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１
０．０ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオ
ブタン酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ
及びＬ−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス
緩衝液（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、３５℃
で２３．５時間振盪して反応を行った。反応終了後、同
様に遠心分離により菌体を除き、高速液体クロマトグラ
フ法により定量し、０．５２ｍｇのＬ−メチオニンの生
成を確認した。収率は９３．５％であった。
アングスタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１
０．０ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオ
ブタン酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ
及びＬ−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス
緩衝液（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、３５℃
で２３．５時間振盪して反応を行った。反応終了後、同
様に遠心分離により菌体を除き、高速液体クロマトグラ
フ法により定量し、０．５２ｍｇのＬ−メチオニンの生
成を確認した。収率は９３．５％であった。
【００２７】実施例３ 実施例１の方法により得たフォトバクテリウム・アング
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２７．８ｍＭ２−ヒドロキシ−４−メチ
ルチオブタン酸、５０ｍＭ塩化アンモニウム及び各種ア
ミノ酸を含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．６）０．
１２ｍｌに添加して、３５℃で２４時間振盪して反応を
行った。反応終了後、遠心分離により、菌体を分離した
上清のメチオニン生成量を高速液体クロマトグラフ法に
より定量した。反応結果を第１表に示す。
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２７．８ｍＭ２−ヒドロキシ−４−メチ
ルチオブタン酸、５０ｍＭ塩化アンモニウム及び各種ア
ミノ酸を含む５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．６）０．
１２ｍｌに添加して、３５℃で２４時間振盪して反応を
行った。反応終了後、遠心分離により、菌体を分離した
上清のメチオニン生成量を高速液体クロマトグラフ法に
より定量した。反応結果を第１表に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】実施例４ 実施例１の方法により得たフォトバクテリウム・アング
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン
酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ及びＬ
−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、各種温度で所
定時間振盪して反応を行った。反応結果を第２表に示
す。
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン
酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ及びＬ
−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、各種温度で所
定時間振盪して反応を行った。反応結果を第２表に示
す。
【００３０】
【表２】
【００３１】実施例５ 実施例１の方法により得たフォトバクテリウム・アング
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン
酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ及びＬ
−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、４０℃で２４
時間振盪して反応を行った。反応終了後、菌体を水で１
回洗浄し、再び、上記と同じ反応に供した。この反応を
３回反復した。３回の反復による収率の実質的低下はみ
られなかった。反応結果を第３表に示す。
スタムＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．０
ｍｇ相当）を、２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン
酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム０．５３ｍｇ及びＬ
−グルタミン０．８８ｍｇを含む５０ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、４０℃で２４
時間振盪して反応を行った。反応終了後、菌体を水で１
回洗浄し、再び、上記と同じ反応に供した。この反応を
３回反復した。３回の反復による収率の実質的低下はみ
られなかった。反応結果を第３表に示す。
【００３２】
【表３】
【００３３】実施例６ 供試菌として、アースロバクター・ニコチアネ（Ａｒｔ
ｈｏｒｏｂａｃｔｅｒｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）ＪＣＭ
１３３３及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）ｓｐ．ＮＳ２１４（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７７）を用
いた。１２１℃で１５分間滅菌した下記の組成の培地２
ｍｌを１０ｍｌ容アルミキャップ付き試験管中に入れ、
同じ組成の寒天培地（寒天１５％）で３０℃で一晩培養
した上記それぞれの菌株を１白金耳接種し、３０℃で４
８時間振盪培養したところ、いずれの培養液中の２−ヒ
ドロキシ−４−メチルチオブタン酸も効率よくメチオニ
ンに変換されていた。
ｈｏｒｏｂａｃｔｅｒｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）ＪＣＭ
１３３３及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ）ｓｐ．ＮＳ２１４（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７７）を用
いた。１２１℃で１５分間滅菌した下記の組成の培地２
ｍｌを１０ｍｌ容アルミキャップ付き試験管中に入れ、
同じ組成の寒天培地（寒天１５％）で３０℃で一晩培養
した上記それぞれの菌株を１白金耳接種し、３０℃で４
８時間振盪培養したところ、いずれの培養液中の２−ヒ
ドロキシ−４−メチルチオブタン酸も効率よくメチオニ
ンに変換されていた。
【００３４】 ２−ヒドロキシ−４−メチルチオブタン酸（ａｑ．７０％） ２．９ｇ／ｌ グルコース １０．０ｇ／ｌ コーンスティープリカー ２０．０ｇ／ｌ 食塩 １．０ｇ／ｌ リン酸三カリウム ０．５ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．２ｇ／ｌ 塩化アンモニウム ２．０ｇ／ｌ
【００３５】次に、上記培養液の一部それぞれ６４０μ
ｌ中より、菌体を遠心分離により採取し、生理食塩水
０．３ｍｌで１回洗浄し、遠心分離により菌体を集め
た。得られたそれぞれの菌体を、２−ヒドロキシ−４−
メチルチオブタン酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム
０．５３ｍｇ及びＬ−グルタミン０．８８ｍｇを含む５
０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．３）０．１２ｍｌに添加
して、３５℃で２３時間振盪し反応を行った。反応終了
後、遠心分離により、菌体を除いた。
ｌ中より、菌体を遠心分離により採取し、生理食塩水
０．３ｍｌで１回洗浄し、遠心分離により菌体を集め
た。得られたそれぞれの菌体を、２−ヒドロキシ−４−
メチルチオブタン酸０．５０ｍｇ、塩化アンモニウム
０．５３ｍｇ及びＬ−グルタミン０．８８ｍｇを含む５
０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．３）０．１２ｍｌに添加
して、３５℃で２３時間振盪し反応を行った。反応終了
後、遠心分離により、菌体を除いた。
【００３６】アースロバクター・ニコチアネ ＪＣＭ
１３３３における、高速液体クロマトグラフ法により求
めたメチオニンの収率と原料基質（２−ヒドロキシ−４
−メチルチオブタン酸）の回収率は、それぞれ５２．１
％及び３４．７％であり、またシュードモナス ｓｐ．
ＮＳ２１４（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７７）においては、そ
れぞれ５５．６％及び２５．５％であった。
１３３３における、高速液体クロマトグラフ法により求
めたメチオニンの収率と原料基質（２−ヒドロキシ−４
−メチルチオブタン酸）の回収率は、それぞれ５２．１
％及び３４．７％であり、またシュードモナス ｓｐ．
ＮＳ２１４（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７７）においては、そ
れぞれ５５．６％及び２５．５％であった。
【００３７】実施例７ 実施例１の方法により得たフォトバクテリウム アング
スタム ＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．
０ｍｇ相当）を、８３ｍＭ 塩化アンモニウム及び５０
ｍＭ Ｌ−グルタミンを含む５０ｍＭ トリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、２７．８ｍＭ
の各種のラセミ体ヒドロキシ酸を加えて３５℃で所定時
間振盪して反応を行った。反応終了後、遠心分離により
菌体を分離した上清のアミノ酸生成量を逆相カラムによ
る高速液体クロマトグラフ法又はニンヒドリン発色ＴＬ
Ｃのクロマトスキャナー（４８５ｎｍの反射吸収、ＤＲ
−２島津製作所製）により定量した。生成物の立体構造
はキラルプレートによりいずれもＬ−体に対応するもの
と判明した。反応結果を第４表に示す。
スタム ＮＳＳＣ１０３３菌の菌体（湿菌体重量１０．
０ｍｇ相当）を、８３ｍＭ 塩化アンモニウム及び５０
ｍＭ Ｌ−グルタミンを含む５０ｍＭ トリス緩衝液
（ｐＨ８．６）０．１２ｍｌに添加して、２７．８ｍＭ
の各種のラセミ体ヒドロキシ酸を加えて３５℃で所定時
間振盪して反応を行った。反応終了後、遠心分離により
菌体を分離した上清のアミノ酸生成量を逆相カラムによ
る高速液体クロマトグラフ法又はニンヒドリン発色ＴＬ
Ｃのクロマトスキャナー（４８５ｎｍの反射吸収、ＤＲ
−２島津製作所製）により定量した。生成物の立体構造
はキラルプレートによりいずれもＬ−体に対応するもの
と判明した。反応結果を第４表に示す。
【００３８】
【表４】
【００３９】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の微生物
は、特に光学活性アミノ酸の製造に適するものであり、
反応収率が良く、反復使用が可能である。また、一種類
の菌体をそのまま使用しての生産が可能であり、特別の
精製操作、補酵素等の添加、特別な副原料も必要としな
いので、光学活性α−アミノ酸を極めて高効率・高収率
かつ経済的に有利に製造できる。
は、特に光学活性アミノ酸の製造に適するものであり、
反応収率が良く、反復使用が可能である。また、一種類
の菌体をそのまま使用しての生産が可能であり、特別の
精製操作、補酵素等の添加、特別な副原料も必要としな
いので、光学活性α−アミノ酸を極めて高効率・高収率
かつ経済的に有利に製造できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:06）
Claims (6)
- 【請求項１】 一般式（１） ＲＣＨ（ＯＨ）ＣＯＯＨ （１） （式中、Ｒは直鎖又は分岐鎖状のＣ1-11アルキル基、Ｃ
1-11ハロアルキル基、Ｃ2-11のアルケニル基、ヒドロキ
シＣ1-11アルキル基、Ｃ1-11アルコキシＣ1-11アルキル
基、Ｃ1-11アルキルチオＣ1-6アルキル基又はヘテロ原
子を含んでもよいＣ7-9 アラルキル基、置換基を有して
もよいアリール基を示す。）で表されるα−ヒドロキシ
酸に、該α−ヒドロキシ酸のヒドロキシ基をアミノ基に
変換する能力を有するアースロバクター（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ）属、又はフォトバクテリウム（Ｐｈｏｔ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の培養液、該
菌体、該菌体処理物を作用させることを特徴とする一般
式（２） ＲＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨ （２） （式中、Ｒは前記と同じ意味を表す。）で表される光学
活性α−アミノ酸の製造法。 - 【請求項２】 微生物が、フォトバクテリウム・アング
スタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔ
ｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１９）
である請求項３記載の光学活性α−アミノ酸の製造法。 - 【請求項３】 反応中に中性アミノ酸を添加することを
特徴とする請求項１又は２記載の光学活性α−アミノ酸
の製造法。 - 【請求項４】 光学活性α−アミノ酸が、メチオニンで
ある請求項１〜３のいずれか記載の光学活性α−アミノ
酸の製造法。 - 【請求項５】 α−ヒドロキシ酸を光学活性α−アミノ
酸に変換する能力を有するフォトバクテリウム・アング
スタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔ
ｕｍ）。 - 【請求項６】 フォトバクテリウム・アングスタム（Ｐ
ｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）が、
フォトバクテリウム・アングスタム（Ｐｈｏｔｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｓｔｕｍ）ＮＳＳＣ１０３３
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６１１９）である請求項５記載の微
生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24533297A JPH10337194A (ja) | 1997-04-08 | 1997-09-10 | 新規微生物及びアミノ酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8923497 | 1997-04-08 | ||
| JP9-89234 | 1997-04-08 | ||
| JP24533297A JPH10337194A (ja) | 1997-04-08 | 1997-09-10 | 新規微生物及びアミノ酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10337194A true JPH10337194A (ja) | 1998-12-22 |
Family
ID=26430668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24533297A Pending JPH10337194A (ja) | 1997-04-08 | 1997-09-10 | 新規微生物及びアミノ酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10337194A (ja) |
-
1997
- 1997-09-10 JP JP24533297A patent/JPH10337194A/ja active Pending
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