JPH10279491A - インターロイキン４産生抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 経皮吸収性や安定性、安全性、価格に優れ
た、効力の強いインターロイキン４産生抑制剤、ならび
に該抑制剤を含有する、アトピー性皮膚炎に対して予防
あるいは治療効果を有する皮膚外用剤、抗アレルギー剤
を提供する。 【解決手段】 インターロイキン４産生抑制剤の有効成
分として、イラクサ、海藻、カノコソウ、ゲンチアナ、
ゲンノショウコ、コウホネ、シモツケソウ、シャクヤ
ク、スイカズラ、スギナ、セイヨウノコギリソウ、タイ
ム、チャ、ツボクサ、ユーカリから選ばれる１種または
２種以上の植物またはその抽出物を使用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、インターロイキン
４産生抑制剤、該インターロイキン４産生抑制剤を含有
するアトピー性皮膚炎に対して予防あるいは治療効果を
有する皮膚外用剤、および抗アレルギー剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン４は、ヒトまたは、動
物の免疫応答細胞であるＴリンパ球より産生される物質
であり、Ｂリンパ球に作用してＩｇＥやＩｇＧ４といっ
た抗体の産生を増強することが知られている。ＩｇＥ
は、花粉症、アレルギー性の眼炎および鼻炎、アトピー
性皮膚炎、喘息など種々のアレルギー性疾患の患者に多
く見出される抗体であり、これらアレルギー性疾患の発
症に深く関与していることが古くから知られている。Ｉ
ｇＥは、肥満細胞に存在するＩｇＥレセプターに結合
し、ＩｇＥがそのレセプターに結合した肥満細胞は、体
内に侵入したアレルギー物質、すなわちアレルゲンのＩ
ｇＥへの結合によってヒスタミンなどの炎症性化学物質
を遊離する。ヒスタミン遊離は種々のアレルギー症状、
すなわち、かゆみ、紅斑、くしゃみ、鼻水などの症状を
引き起こす。このようにインターロイキン４は、上述の
メカニズムを介することにより、アレルギー性疾患の発
症に強く関与している。

【０００３】また最近の研究により、インターロイキン
４はＩｇＥやＩｇＧ４といった抗体の産生増強作用に加
えて、炎症部位への炎症性細胞の浸潤促進作用を有する
ことが見出され、アレルギー性疾患の発症における重要
性がますます注目されている。また、アレルギー性疾患
のひとつであるアトピー性皮膚炎においては、その皮膚
や血液中にインターロイキン４、インターロイキン５、
インターロイキン１０などの特定のサイトカインを多く
産生するタイプのＴリンパ球（タイプ２ヘルパーＴリン
パ球、Ｔｈ２細胞）が多く見出されることがわかってお
り、アトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患における
Ｔｈ２細胞の関与が問題視されている。インターロイキ
ン５は好酸球を活性化し炎症性の物質の産生を促進する
物質であり、実際アトピー性皮膚炎患者の皮膚には好酸
球浸潤や好酸球由来の炎症性物質が多く見出されてい
る。インターロイキン１０は細菌やウイルスの感染防御
に機能するインターフェロンの産生を抑制する作用を有
した物質であり、アトピー性皮膚炎患者がしばしば黄色
ブドウ球菌に易感染性であることの原因の１つとなって
いると考えられる。

【０００４】インターロイキン４は、上述のように抗体
産生や細胞浸潤を促進する働きに加えて、未成熟なＴリ
ンパ球（タイプ０ヘルパーＴリンパ球、Ｔｈ０細胞）を
インターロイキン４を多く産生するタイプの成熟Ｔリン
パ球（Ｔｈ２細胞）へと分化させる働きをも有してい
る。従って、インターロイキン４産生抑制剤の提供は、
ＩｇＥの産生抑制剤、ヒスタミン遊離抑制剤、ＩｇＥや
ヒスタミンの作用の抑制剤などの従来アレルギー性疾患
に行われてきた治療法および予防法と比較して、アトピ
ー性皮膚炎などのアレルギー性疾患を、より根本から、
治療および予防する方法を提供するものである。

【０００５】さらに、インターロイキン４は多機能物質
であり、皮膚の様々なトラブルと関係があるものと考え
られる。インターロイキン４は角化細胞に作用してイン
ターロイキン６の産生を増強する作用を有しており、皮
膚の炎症に関与すると考えられる。またインターロイキ
ン４によって刺激された肥満細胞は、エンドセリンに反
応してヒスタミン遊離を起こすことが知られている。エ
ンドセリンは紫外線によって角化細胞から産生されるこ
とを考えると、紫外線によるかゆみへの関与も十分考え
られる。インターロイキン４は、線維芽細胞に作用して
コラーゲン合成能を修飾することも知られており、しわ
およびたるみに関与する可能性もある。従って、インタ
ーロイキン４産生抑制剤は、アトピー性皮膚炎などのア
レルギー疾患の治療及び予防に有効であることに加え
て、その他のインターロイキン４の関与するトラブル、
すなわち、かゆみ、しわ、しみ、水虫、口内炎等のトラ
ブルの治療および予防に有効であることが期待できる。

【０００６】インターロイキン４の産生を抑制する物質
としては、これまでに唯一、ＩＰＤ１１５１Ｔに代表さ
れる一群のスルホニウム誘導体が知られており（Japan.
J.Pharmacol. 61. 27-30(1993), Japan. J. Pharmaco
l. 61. 31-39(1993)）、経口薬に配合されてアトピー性
皮膚炎などのアレルギー疾患の治療に使用されている。
しかしながら、その効力は十分ではなく、経皮吸収性や
安定性、安全性、価格に優れた、効力の強いインターロ
イキン４産生抑制剤が必要とされていた。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的と
するところは、経皮吸収性や安定性、安全性、価格に優
れた、効力の強いインターロイキン４産生抑制剤を提供
することにあり、さらには、特にアトピー性皮膚炎に対
して予防あるいは治療効果を有する皮膚外用剤、ならび
に抗アレルギー剤を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】かかる実情に鑑み、本発
明者らは種々の植物またはその抽出物等についてマウス
の感作リンパ球を培養系にて抗原惹起する実験系を用い
てインターロイキン４産生抑制剤の探索を鋭意検討した
ところ、種々の植物またはその抽出物等にインターロイ
キン４産生抑制効果のあることを見出した。さらには、
動物実験によって、これらのインターロイキン４産生抑
制剤が、アトピー性皮膚炎やアレルギー疾患治療剤とし
て有用であることを見出し、本発明を完成するに至っ
た。

【０００９】すなわち、本発明はイラクサ、海藻、カノ
コソウ、ゲンチアナ、ゲンノショウコ、コウホネ、シモ
ツケソウ、シャクヤク、スイカズラ、スギナ、セイヨウ
ノコギリソウ、タイム、チャ、ツボクサ、ユーカリから
選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物を
有効成分とするインターロイキン４産生抑制剤を提供す
るものである。また、本発明は、イラクサ、海藻、カノ
コソウ、ゲンチアナ、ゲンノショウコ、コウホネ、シモ
ツケソウ、シャクヤク、スイカズラ、スギナ、セイヨウ
ノコギリソウ、タイム、チャ、ツボクサ、ユーカリから
選ばれる１種または２種以上の植物またはその抽出物を
有効成分とするインターロイキン４産生抑制剤を少なく
とも１種類以上含有することを特徴とする、皮膚外用剤
あるいは抗アレルギー剤を提供するものである。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明におけるイラクサは、イラ
クサＵｒｔｉｃａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａまたはＵ
ｒｔｉｃａ ｄｉｏｉｃａ（Urticaceae）の葉または根
である。本発明における海藻は、コンブ属（Laminari
a）などの褐藻類（Phaeophyta）、イギス属（Ceramiu
m）などの紅藻類（Rhodophyta）、緑藻類（Chlorophyt
a）の全藻または雌株（胞子葉または成実葉）である。
本発明におけるカノコソウは、オミナエシ科（Valerian
aceae）の多年草であるカノコソウＶａｌｅｒｉａｎａ
ｆａｕｒｉｅｉまたはその他の近縁植物の根およひ根
茎である。本発明におけるゲンチアナは、リンドウ科
（Gentianaceae）の植物ゲンチアナＧｅｎｔｉａｎａｌ
ｕｔｅａの根および根茎である。本発明におけるゲンノ
ショウコは、フクロソウ科（Geraniaceae）の多年草ゲ
ンノショウコＧｅｒａｎｉｕｍ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ
の地上部である。本発明におけるコウホネは、スイレン
科（Nymphaeaceae）の多年草コウホネＮｕｐｈａｒ ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｍの根茎である。本発明におけるシモツ
ケソウは、バラ科のセイヨウナツユキソウＦｉｌｉｐｅ
ｎｄｕｌａｕｌｍａｒｉａ（Rasaceae）の花序である。

【００１１】本発明におけるシャクヤクは、ボタン科
（Paeoniaceae）の植物シャクヤクＰａｅｏｎｉａ ｌ
ａｃｔｉｆｌｏｒａ（Paeonia albiflora）またはその
他近縁植物の根である。本発明におけるスイカズラは、
スイカズラ科（Caprifoliacea）の落葉低木であるスイ
カズラ（Lonicera japonica）またはその他同属植物の
花、葉または茎である。本発明におけるスギナは、トク
サ門（Calamophyta）スギナ科（Equisetaceae）に属す
る多年生シダ植物スギナ（Equisetumarvense）の全草で
ある。本発明におけるセイヨウノコギリソウは、キク科
（Compositae）の多年生草本セイヨウノコギリソウＡｃ
ｈｉｌｌｅａ ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍの頭花または全
草である。本発明におけるタイムは、シソ科（Labiata
e）の小低木タイムＴｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ
またはその同属植物タチジャコウソウＴｈｙｍｕｓ ｖ
ｕｌｇａｒｉｓの地上部である。本発明におけるチャ
は、ツバキ科（Theaceae）の常緑低木チャＴｈｅａ ｓ
ｉｎｅｎｓｉｓの葉から製したものである。本発明にお
けるツボクサは、セリ科（Umbelliferae）の植物ツボク
サＣｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａの葉および茎で
ある。本発明におけるユーカリは、フトモモ科（Myrtac
eae）の常緑高木ユーカリノキＥｕｃａｌｙｐｔｕｓ
ｇｌｏｂｕｌｕｓまたはその他近縁植物の葉である。

【００１２】本発明に使用される種々のある植物または
その抽出物について、イラクサについて養毛効果（特開
平０２−４８６１７）、海藻については日焼け防止効果
（特開平０７−２４２５２３）、抗酸化効果（特開平０
７−２４７４７９、特開平０７−３００５８１）、カノ
コソウについてはテストステロン５α−リダクターゼ作
用（特開平０４−３４２５３５）、プロテアーゼ阻害作
用（特開平０６−２５０００）、ゲンチアナについては
スーパーオキシド消去作用（特開平０４−５２３７）、
美白作用（特開平０４−２７３８０８）、ゲンノショウ
コについてはテストステロン５α−リダクターゼ作用
（特開昭６０−１４６８２９）、シミ防止作用（特開昭
６０−２１４７２１、特開昭６１−１２２２０９）、ヒ
アルロニダーゼ失活作用（特開平０２−１１５２０）、
スーパーオキシド消去作用（特開平０４−５２３７）、
コウホネについては日焼け後のほてり・かみそりまけ・
肌荒れ等防止作用（特開昭６２−５１６０６）、洗浄に
よる肌のつっぱり感やかさつき感の防止作用（特開昭６
３−５７６９６）、シモツケソウについては痩身作用
（特開昭６１−１５５３０５）、シャクヤクについては
テストステロン５α−リダクターゼ作用（特開昭６０−
１４６８２９）、ヒアルロニダーゼ失活作用（特開平０
２−１１５２０）、スーパーオキシド消去作用（特開平
０４−５２３７）、抗菌作用（特開平０６−２７９２５
６）、スイカズラについては肥満細胞ヒスタミン遊離抑
制作用（特開平０６−１８３９９１）、インターフェロ
ン誘起作用（特開昭５７−１１８５１９）、抗酸化作用
（特開平０３−５６５８５）、スギナについてはパーマ
処理した毛髪へのパーマ保持性付与効果および毛髪への
弾力性付与効果（特開平０２−１７２９０７）、コウジ
酸またはその誘導体の抗炎症作用を相乗的に高め白色作
用の発現を高める効果（特開平０７−２５７６２）、セ
イヨウノコギリソウについてはテストステロン５α−リ
ダクターゼ作用（特開平０５−２５５１０２）、チロシ
ナーゼ生合成阻害効果（特開平０８−１０４６４６）、
タイムについては活性酸素抑制効果（特開平０８−１１
９８６９）、チャについてはリパーゼ阻害作用（特開平
０１−９０１３１）、ヒアルロニダーゼ阻害作用（特開
平０１−１２８９３３）、ツボクサについてはフケ防止
作用（特開昭６３−９６１１７）、美白作用（特開平０
８−１３３９５２）、ユーカリについては整腸効果・糖
質の吸収抑制効果・コレステロール***促進効果（特開
平０６−１３３７３２）、などを有することが知られて
いる。また、ある植物またはその抽出物についてはすで
に一般の皮膚外用剤、化粧料として知られているものも
あるが、本発明に使用されるすべての植物またはその抽
出物について、インターロイキン４産生抑制効果を有す
ることについては、全く知られていなかった。

【００１３】本発明に使用される植物またはその抽出物
においては、当該植物体をそのまま乾燥粉砕して用いて
も、抽出して用いても良い。その抽出方法は、その粉砕
物を通常３〜１００℃で水および／または石油エーテ
ル、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、四塩化炭素、トル
エン、ベンゼン、ジクロロメタン、クロロホルム、エー
テル、酢酸エチル、ブタノール、アセトン、プロパノー
ル、エタノール、メタノール、プロピレングリコール、
１，３−ブチレングリコール等の１種または２種以上の
混合物、好ましくはエタノール、プロピレングリコー
ル、１，３−ブチレングリコール、および水の１種また
は２種以上の混合物、例えば水性アルコールを用い、通
常３〜７０℃で抽出処理して得られる。本発明に使用さ
れる種々の植物またはその抽出物は、種々の抽出法を利
用して抽出しても良いが、市販品を利用することができ
る。この抽出物はそのままインターロイキン４産生抑制
剤等の有効成分として用いることができるが、該抽出物
をさらに適当な分離手段、例えばゲル濾過やシリカゲル
カラムクロマト法、高速液体クロマト法などにより活性
の高い画分を分画して用いることもできる。

【００１４】本発明のインターロイキン４産生抑制剤は
細胞毒性が低く、外用および内服のいずれの方法でも投
与可能である。本発明のインターロイキン４産生抑制剤
を含有する皮膚外用剤組成物には、前記抽出物類の他、
通常使用される外用基材、他の薬効成分等を配合でき
る。ここで用いられる外用基材としては、油性基剤をベ
ースとするもの、油／水、水／油型の乳化系基剤をベー
スとするもの、および、水をベースとするもののいずれ
でもあっても良い。

【００１５】油性基剤としては、特に制限はなく例え
ば、植物油、動物油、合成油脂肪酸、天然／合成のグリ
セリド等が挙げられる。また、保湿剤、紫外線吸収剤、
アルコール類、キレート類、pH調整剤、防腐剤、増粘
剤、色素、香料等を任意に組み合わせて配合することが
できる。また、上記薬効成分としては特に制限はなく、
例えば鎮痛消炎剤、殺菌消毒剤、ビタミン類、皮膚柔軟
化剤等を必要に応じて適宜使用できる。これら皮膚外用
組成物の形態としては、軟膏、クリーム、乳液、化粧
水、パック、ファンデーション等が挙げられる。前記イ
ンターロイキン４産生抑制剤の配合量、投与量は、化粧
品、医薬品、医薬部外品として通常の範囲内のものであ
れば特に制限はないが、通常は有効成分として成人１日
あたり０．１〜２０００mgの範囲で用いられる。

【００１６】

【実施例】次に、本発明をさらに詳細に説明するために
実施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例に何ら限定
されるものではない。

【００１７】植物抽出物の調製

【００１８】（製造例１）イラクサの葉の乾燥粉砕物１
００ｇに５０％のプロピレングリコール１リットルを加
え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再
度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽
出物３．８ｇをシロップとして得た。

【００１９】（製造例２）海藻（ケルプ）全藻の乾燥粉
砕物１００ｇに８０％プロピレングリコール１リットル
を加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。
得られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した
後再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去
し抽出物２．８ｇをシロップとして得た。

【００２０】（製造例３）カノコソウの根の乾燥粉砕物
１００ｇに精製水１リットルを加え、室温で時々攪拌し
ながら７日間抽出を行った。得られた抽出液を濾過し、
濾液を５℃で３日間静置した後再度濾過して上澄みを
得、これを濃縮して溶剤を除去し抽出物３．２ｇをシロ
ップとして得た。

【００２１】（製造例４）ゲンチアナの根茎の乾燥粉砕
物１００ｇに５０％エタノール１リットルを加え、室温
で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得られた抽出
液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再度濾過し
て上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽出物３．
７ｇをシロップとして得た。

【００２２】（製造例５）ゲンノショウコの地上部の乾
燥粉砕物１００ｇに５０％エタノール１リットルを加
え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再
度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽
出物５．１ｇをシロップとして得た。

【００２３】（製造例６）コウホネの乾燥粉砕物１００
ｇに１，３−ブチレングリコール１リットルを加え、室
温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得られた抽
出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再度濾過
して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽出物
４．２ｇをシロップとして得た。

【００２４】（製造例７）シモツケソウの花序の乾燥粉
砕物１００ｇに５０％１，３−ブタンジオール１リット
ルを加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行っ
た。得られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置
した後再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を
除去し抽出物５．３ｇをシロップとして得た。

【００２５】（製造例８）シャクヤクの根の乾燥粉砕物
１００ｇに５０％１，３−ブタンジオール１リットルを
加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得
られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後
再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し
抽出物３．８ｇをシロップとして得た。

【００２６】（製造例９）スイカズラの花の乾燥粉砕物
１００ｇに５０％１，３−ブタンジオール１リットルを
加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得
られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後
再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し
抽出物４．４ｇをシロップとして得た。

【００２７】（製造例１０）スギナの全草の乾燥粉砕物
１００ｇに５０％プロピレングリコール１リットルを加
え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再
度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽
出物３．４ｇをシロップとして得た。

【００２８】（製造例１１）セイヨウノコギリソウの全
草の乾燥粉砕物１００ｇに２０％１，３−ブタンジオー
ル、２０％プロピレングリコールを含む水１リットルを
加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得
られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後
再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し
抽出物３．８ｇをシロップとして得た。

【００２９】（製造例１２）タイム（Thymus serpyllu
m）の地上部の乾燥粉砕物１００ｇに２０％１，３−ブ
タンジオール、２０％プロピレングリコールを含む水１
リットルを加え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を
行った。得られた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間
静置した後再度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶
剤を除去し抽出物３．５ｇをシロップとして得た。

【００３０】（製造例１３）チャの葉から製された緑茶
の乾燥粉砕物１００ｇに２０％１，３−ブタンジオー
ル、３０％エタノールを含む水１リットルを加え、室温
で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得られた抽出
液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再度濾過し
て上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽出物６．
３ｇをシロップとして得た。

【００３１】（製造例１４）ツボクサの葉の乾燥粉砕物
１００ｇに５０％プロピレングリコール１リットルを加
え、室温で時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再
度濾過して上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽
出物４．９ｇをシロップとして得た。

【００３２】（製造例１５）ユーカリの葉の乾燥粉砕物
１００ｇに５０％プロピレングリコールを加え、室温で
時々攪拌しながら７日間抽出を行った。得られた抽出液
を濾過し、濾液を５℃で３日間静置した後再度濾過して
上澄みを得、これを濃縮して溶剤を除去し抽出物３．５
ｇをシロップとして得た。

【００３３】つぎに、イラクサ、海藻、カノコソウ、ゲ
ンチアナ、ゲンノショウコ、コウホネ、シモツケソウ、
シャクヤク、スイカズラ、スギナ、セイヨウノコギリソ
ウ、タイム、チャ、ツボクサ、ユーカリから選ばれる１
種または２種以上の植物またはその抽出物が優れたイン
ターロイキン４産生抑制活性を有し、アトピー性皮膚炎
に予防あるいは治療効果を有する皮膚外用剤、抗アレル
ギー剤等として有用であることについて試験例により具
体的に説明する。

【００３４】（試験例１） インターロイキン４産生抑
制能の測定 Ｂａｌｂ／ｃマウスに、２００μｇの蛋白質抗原（カサ
ガイヘモシアニン）をフロイントの完全アジュバントと
共に皮下注射し感作した。７日後、リンパ節を摘出し、
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ
（以下「ＰＢＳ」と略す）中で解して、リンパ球の懸濁
液を調製した。調製したリンパ球を９６穴プレートに１
ウェル当たり４×１０⁵ 細胞の濃度でまき、製造例１か
ら１５で得られた植物抽出物を最終濃度０．０１％とな
る様に添加した１０％牛血清加ＲＰＭＩ １６４０培地
を用いて３７℃、一晩培養した後、蛋白質抗原（カサガ
イヘモシアニン）を添加した（最終濃度１０μｇ／m
l）。さらに３日間の培養の後、その培養上清をＥＬＩ
ＳＡ法による定量に供した。

【００３５】ＥＬＩＳＡ法による定量は、以下の様にし
て行った。５０μｌの４μｇ／ml抗インターロイキン４
抗体あるいは２μｇ／ml抗インターロイキン２抗体（い
ずれもＰＢＳ溶液）をＥＬＩＳＡプレートに加えて４℃
で一晩インキュベートした。０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２
０を含むＰＢＳ（以下、「ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ」と略
す）でプレートを洗浄の後、３％Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒ
ｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ（以下、「ＢＳＡ」と略す）を含
むＰＢＳを加えて、室温で２時間インキュベートしプレ
ートのブロッキングを行った。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗
浄の後、７０μｌのサンプルすなわち培養上清を添加
し、室温で４時間インキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅ
ｅｎで洗浄の後、１００μｌの２μｇ／mlビオチン標識
抗インターロイキン４抗体あるいはビオチン標識抗イン
ターロイキン２抗体（いずれも３％のＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ溶液）を加えて室温で４５分間インキュベートした。
ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄の後、１００μｌのＡＢＣ溶
液（Avidin-peroxidase とBiotinのComplex、Vectstain
社のＡＢＣキットを使用）を加え、室温で３０分間イ
ンキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄の後、１
００μｌの基質溶液（ＡＢＴＳ）を加えて発色反応を行
い、プレートリーダーで４０５nmの吸光度を測定した。
インターロイキン４およびインターロイキン２産生抑制
率を、溶媒コントロールに対する抑制率を算出し、植物
抽出物のサイトカイン抑制効果を判定した。すなわちイ
ンターロイキン４およびインターロイキン２産生抑制率
（％）（以下の表中では、それぞれ「ＩＬ４抑制率」、
「ＩＬ２抑制率」と略記する）は、植物抽出物を含有し
ない抽出溶液のみを加えたときのインターロイキン産生
を何％抑制するかを示すものである。

【００３６】また、植物抽出物の細胞毒性を調べるた
め、ＭＴＴアッセイを行った。ＭＴＴアッセイには、Ｍ
ＴＴアッセイキット（ケミコン社）を使用した。ＭＴＴ
とは、生細胞のミトコンドリアによって分解されて薄い
黄色から濃い青色に変化する物質であり、ＭＴＴアッセ
イにより植物抽出物の細胞毒性を知ることができる。ア
ッセイは使用説明書に従って行い、溶媒コントロールに
対する抑制率を算出し、植物抽出物の細胞毒性を判定し
た。ＭＴＴ分解活性抑制率（％）は、植物エキスを含有
しない抽出溶媒のみを加えたときのＭＴＴ分解活性を何
％抑制するかを示すものである。すなわち、毒性の高い
ものほど抑制率は高い。その結果、表１に示した植物抽
出物について、インターロイキン４産生抑制効果が認め
られた。また、これらの植物抽出物にインターロイキン
２産生抑制効果は認められず、抑制効果はインターロイ
キン４に特異的であった。さらに、これらの植物抽出物
の細胞毒性は極めて弱いものであった。したがって、こ
れらの植物抽出物は、インターロイキン４の産生によっ
て引き起こされる、アトピー性皮膚炎に対する外用剤や
抗アレルギー剤として有用なものである。

【００３７】

【表１】

【００３８】つぎに、さらに本発明を詳細に説明するた
めに、皮膚におけるインターロイキン４産生抑制効果の
試験例について述べる。 （試験例２）製造例１から１５で得られた植物抽出物に
ついて、Ｂａｌｂ／ｃマウスを用いた動物実験系により
皮膚インターロイキン４産生抑制効果を評価した。Ｂａ
ｌｂ／ｃマウスに、２００μｇの蛋白質抗原（カサガイ
ヘモシアニン）をフロイントの完全アジュバントと共に
皮下注射し感作した。感作後、耳介部の皮膚に表２に示
した植物のエタノール抽出物（１％）を１０μｌ、一日
２回塗布した。感作一週間後、５０μｇの蛋白質抗原
（カサガイヘモシアニン）を耳介部に皮下注射し、惹起
した。惹起の２４時間後に耳介部を切除し、背側の皮膚
より、ＡＧＰＣ法（ニッポンジーン社ＩＳＯＧＥＮを使
用）で全ＲＮＡを精製した。

【００３９】１００μｌのＰＣＲ反応液当たり２００ng
の全ＲＮＡに由来するｃＤＮＡを使用し、インターロイ
キン４のプライマーを用いたＰＣＲを行った。ＰＣＲに
使用したインターロイキン４のプライマーは、５′−Ａ
ＧＴＴＧＴＣＡＴＣＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＴＣＴＣ−
３′と５′−ＣＧＡＧＴＡＡＴＣＣＡＴＴＴＧＣＡＴＧ
ＡＴＧＣＴＣ−３′である。ＰＣＲには、最終濃度０．
５Ｍ（１００μｌの反応液当たり５０pmole）のプライ
マーを使用した。ＰＣＲは、反応が飽和していないサイ
クル数すなわち３０サイクル行った。ＰＣＲの１サイク
ルは、９４℃、１分の変性反応、６０℃、２分のアニー
ル反応、７２℃、１．５分の伸張反応を行った。５μｌ
のＰＣＲ反応液を１％アガロースゲルで電気泳動分画し
たのち、ゲルをエチジウムブロマイド染色して、ＦＭ−
ＢＩＯ１００（日立製作所製）を用いてゲル中のＰＣＲ
産物を検出しおよびその蛍光強度を測定した。インター
ロイキン４およびインターロイキン２産生抑制率を、溶
媒コントロールに対する抑制率として算出し、植物抽出
物のサイトカイン抑制効果を判定した。すなわちインタ
ーロイキン４およびインターロイキン２産生抑制率
（％）は、植物抽出物を含有しない抽出溶媒のみを塗布
したときのインターロイキン遺伝子発現を何％抑制する
かを示すものである。結果は表２に示した通りであり、
これらの植物抽出物は、インターロイキン４の産生を特
異的に抑制するものであった。したがって、これらの植
物抽出物は、インターロイキン４の産生によって引き起
される、アトピー性皮膚炎に対する外用剤や抗アレルギ
ー剤として有用なものである。

【００４０】

【表２】

【００４１】つぎに、各製造例で得られた植物の抽出物
を使用して、各種の製剤を調製した実施例を以下に説明
する。

【００４２】（実施例１）製造例１で得られたイラクサ
抽出物１ｇ、コレステロール０．５ｇ、コレステリルイ
ソステアレート１ｇ、ポリエーテル変性シリコーン１．
５ｇ、環状シリコーン２０ｇ、メチルフェニルポリシロ
キサン２ｇ、メチルポリシロキサン２ｇ、硫酸マグネシ
ウム０．５ｇ、５５％エタノール５ｇ、カルボキシメチ
ルキサン０．５ｇ、精製水を混合しクリーム１００ｇと
した。

【００４３】（実施例２）製造例２で得られた海藻抽出
物１ｇ、製造例１０で得られたスギナ抽出物１ｇ、コレ
ステロール０．５ｇ、コレステリルイソステアレート１
ｇ、ポリエーテル変性シリコーン１．５ｇ、環状シリコ
ーン２０ｇ、メチルフェニルポリシロキサン２ｇ、メチ
ルポリシロキサン２ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、５
５％エタノール５ｇ、カルボキシメチルキサン０．５
ｇ、精製水を混合しクリーム１００ｇとした。

【００４４】（実施例３）製造例３で得られたカノコソ
ウ抽出物１ｇ、製造例４で得られたゲンチアナ抽出物１
ｇ、コレステロール０．５ｇ、コレステリルイソステア
レート１ｇ、ポリエーテル変性シリコーン１．５ｇ、環
状シリコーン２０ｇ、メチルフェニルポリシロキサン２
ｇ、メチルポリシロキサン２ｇ、硫酸マグネシウム０．
５ｇ、５５％エタノール５ｇ、カルボキシメチルキサン
０．５ｇ、精製水を混合しクリーム１００ｇとした。

【００４５】（実施例４）製造例４で得られたゲンチア
ナ抽出物１ｇ、製造例６で得られたコウホネ抽出物１
ｇ、製造例９で得られたスイカズラ抽出物１ｇ、コレス
テロール０．５ｇ、コレステリルイソステアレート１
ｇ、ポリエーテル変性シリコーン１．５ｇ、環状シリコ
ーン２０ｇ、メチルフェニルポリシロキサン２ｇ、メチ
ルポリシロキサン２ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、５
５％エタノール５ｇ、カルボキシメチルキサン０．５
ｇ、精製水を混合しクリーム１００ｇとした。

【００４６】（実施例５）製造例５で得られたゲンノシ
ョウコ抽出物３ｇ、コレステリルイソステアレート３
ｇ、流動パラフィン１０ｇ、グリセリルエーテル１ｇ、
グリセリン１０ｇ、白色ワセリン７３ｇを混合し、軟膏
とした。

【００４７】（実施例６）製造例２で得られた海藻抽出
物５０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース８０ｇ、軽質
無水ケイ酸２０ｇ、乳糖５０ｇ、結晶セルロース５０
ｇ、タルク５０ｇを常法により直径９mm、重量２００mg
の錠剤とした。

【００４８】（実施例７）製造例３で得られたカノコソ
ウ抽出物５０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース８０
ｇ、軽質無水ケイ酸２０ｇ、乳糖５０ｇ、結晶セルロー
ス５０ｇ、タルク５０ｇを常法により直径９mm、重量２
００mgの錠剤とした。

【００４９】（実施例８）製造例２で得られた海藻抽出
物４０ｇ、結晶セルロース５０ｇ、乳糖７５ｇ、軽質無
水ケイ酸１０ｇを常法によりカプセル剤とした。

【００５０】（実施例９）製造例６で得られたコウホネ
抽出物４０ｇ、結晶セルロース５０ｇ、乳糖７５ｇ、軽
質無水ケイ酸１０ｇを常法によりカプセル剤とした。

【００５１】（実施例１０）製造例２で得られた海藻抽
出物１００ｇ、乳糖１００ｇ、ヒドロキシプロピルセル
ロース１００ｇ、およびタルク７．５ｇを常法により顆
粒剤とした。

【００５２】（実施例１１）製造例６で得られたコウホ
ネ抽出物１００ｇ、乳糖１００ｇ、ヒドロキシプロピル
セルロース１００ｇ、およびタルク７．５ｇを常法によ
り顆粒剤とした。

【００５３】（実施例１２）製造例２で得られた海藻抽
出物１０ｇ、コーンスターチ４ｇ、結晶セルロース４０
ｇ、カルボキシメチルセルロースカルシウム５ｇ、軽質
無水ケイ酸０．５ｇ、ステアリン酸マグネシウム０．５
ｇを混合し、打錠機にて圧縮成形して直径９mm、重量２
００mgの錠剤とした。

【００５４】（実施例１３）製造例３で得られたカノコ
ソウ抽出物１０ｇ、結晶セルロース８４．５ｇ、ステア
リン酸マグネシウム０．３ｇを均一に混合し、圧縮成形
した後に粉砕し、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム５ｇとステアリン酸マグネシウム０．２ｇを加えて混
合し、打錠機にて圧縮成形して直径９mm、重量２００mg
の錠剤とした。

【００５５】（実施例１４）製造例６で得られたコウホ
ネ抽出物５ｇ、製造例６で得られたサイコ抽出物５ｇ、
結晶セルロース５５ｇ、１０％ヒドロキシプロピルセル
ロースエタノール溶液３５ｇを均一に混合し、捏和し
た。押出造粒機により造粒後乾燥し、篩別して顆粒剤と
した。

【００５６】（実施例１５）製造例７で得られたシモツ
ケソウ抽出物５ｇ、製造例６で得られたサイコ抽出物５
ｇ、結晶セルロース５５ｇ、１０％ヒドロキシプロピル
セルロースエタノール溶液３５ｇを均一に混合し、捏和
した。押出造粒機により造粒後乾燥し、篩別して顆粒剤
とした。

【００５７】（実施例１６）製造例９で得られたスイカ
ズラ抽出物５ｇ、製造例６で得られたサイコ抽出物５
ｇ、結晶セルロース５５ｇ、１０％ヒドロキシプロピル
セルロースエタノール溶液３５ｇを均一に混合し、捏和
した。押出造粒機により造粒後乾燥し、篩別して顆粒剤
とした。

【００５８】（実施例１７）製造例１４で得られたツボ
クサ抽出物５ｇ、製造例６で得られたサイコ抽出物５
ｇ、結晶セルロース５５ｇ、１０％ヒドロキシプロピル
セルロースエタノール溶液３５ｇを均一に混合し、捏和
した。押出造粒機により造粒後乾燥し、篩別して顆粒剤
とした。

【００５９】

【発明の効果】本発明のインターロイキン４産生抑制剤
は、経皮吸収性や安定性、安全性、価格に優れ、強い効
力を有する。またかかる抑制剤を含有する皮膚外用剤お
よび抗アレルギー剤は、アトピー性皮膚炎に対して予防
または治療効果を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｋ Ｗ 7/48 7/48 35/80 35/80 Ｚ (72)発明者 藤倉 芳明 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 近藤 秀彦 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 市川 義章 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 芋川 玄爾 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 イラクサ、海藻、カノコソウ、ゲンチア
   ナ、ゲンノショウコ、コウホネ、シモツケソウ、シャク
   ヤク、スイカズラ、スギナ、セイヨウノコギリソウ、タ
   イム、チャ、ツボクサ、ユーカリから選ばれる１種また
   は２種以上の植物またはその抽出物を有効成分とするイ
   ンターロイキン４産生抑制剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載のインターロイキン４産生
   抑制剤を少なくとも１種類以上含有することを特徴とす
   る、アトピー性皮膚炎に予防あるいは治療効果を有する
   皮膚外用剤組成物。
3. 【請求項３】 請求項１記載のインターロイキン４産生
   抑制剤を少なくとも１種類以上含有することを特徴とす
   る、抗アレルギー剤。