JPH10158189A - Anti-endotoxin agent and composition for oral cavity - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain the subject anti-endotoxin agent capable of excellently suppressing intracellular toxin activity, applicable for preventing and treating periodontal diseases, comprising a peptide containing a specific acid as an active ingredient. SOLUTION: This agent comprises a peptide containing lysine, isoleucine, glycine and leucine as an active ingredient. Preferably, the peptide further contains histidine, proline, threonine, cystine, valine, tyrosine, glutamine, as asparagine, alanine and aspartic acid. The agent is preferably administered once to several times daily so as to make the dose of the peptide 0.001-10g/adult daily.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、歯周病細菌内毒素
を中和し、かつ歯周病原因菌の付着を抑制することがで
きるほか、細菌感染によるエンドトキシンショックの治
療にも有効な抗内毒素剤、及びこれを配合した口腔用組
成物に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention is capable of neutralizing endotoxin of periodontal disease bacteria and suppressing the adhesion of periodontal disease-causing bacteria, and is also effective in treating endotoxin shock caused by bacterial infection. The present invention relates to an endotoxin agent and an oral composition containing the same.

【０００２】[0002]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】歯周疾
患の病原性因子としては、付着因子（線毛、レクチン様
リガンド）、内毒素、組織破壊性酵素（コラゲナーゼ、
トリプシン様酵素）、白血球抵抗因子（莢膜、スーパー
オキサイドデスムターゼ、ロイコトリエン）及び細胞毒
性代謝物（硫化水素、脂肪酸）などがある。なかでも細
菌内毒素は、直接あるいは間接的に歯周組織に対して炎
症を惹起したり、歯槽骨吸収を促進したりすることが確
認されている。BACKGROUND OF THE INVENTION Pathogenic factors for periodontal disease include adhesin (pilus, lectin-like ligand), endotoxin, tissue destructive enzymes (collagenase,
Trypsin-like enzymes), leukocyte resistance factors (capsule, superoxide desmutase, leukotriene) and cytotoxic metabolites (hydrogen sulfide, fatty acids). Among them, it has been confirmed that bacterial endotoxin directly or indirectly induces inflammation in periodontal tissue and promotes alveolar bone resorption.

【０００３】従来、内毒素の関与する歯周疾患の予防、
治療の提案としては、マクロライド系抗生物質による歯
周組織再生の前処置剤（特開平７−２６７８６７号公
報）、オクタデシルプロピルジメチルアンモニウム固定
の水不溶性固体による内毒素吸着除去剤（特開平８−２
６９５４号公報）がある。しかし、これらを歯周疾患の
予防、治療に応用するには、耐性菌の出現、副作用、歯
牙へのステイン付着の問題等があり、この点の解決が望
まれる。Conventionally, prevention of periodontal disease involving endotoxin,
As treatment proposals, pretreatment agents for periodontal tissue regeneration with macrolide antibiotics (JP-A-7-267867), and endotoxin adsorption-removal agents with water-insoluble solids fixed with octadecylpropyldimethylammonium (JP-A-8-26787) 2
No. 6954). However, application of these to the prevention and treatment of periodontal disease involves the emergence of resistant bacteria, side effects, the problem of stain attachment to teeth, and the like.

【０００４】本発明は、上記要望に応えるためになされ
たもので、優れた細菌内毒素活性抑制作用を有する上、
長期間使用しても安全でしかもペプチドの保有する細菌
の歯牙、粘膜に対する付着抑制も期待でき、歯周疾患の
予防、治療に応用可能な抗内毒素剤及びこれを配合した
口腔用組成物を提供することを目的とする。[0004] The present invention has been made in order to meet the above-mentioned demand, and has an excellent inhibitory activity on bacterial endotoxin activity.
An anti-endotoxin agent that is safe even for long-term use and can be expected to inhibit the adhesion of bacteria possessed by the peptide to teeth and mucous membranes, and can be applied to the prevention and treatment of periodontal disease, and an oral composition containing the same. The purpose is to provide.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者は、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結
果、リジン、イソロイシン、グリシン及びロイシンを含
むペプチドが、インビトロ細菌内毒素活性抑制試験（エ
ンドスペシー法）で内毒素活性を抑制すること、家兎皮
内毒性試験による内毒素活性抑制試験で発赤、腫脹、出
血性壊死を抑制すること、更に、ポルフィロモナス・ジ
ンジバリス等の歯周病原因菌の付着を抑制するなど、優
れた抗内毒素効果を有し、上記ペプチドが抗内毒素の有
効成分として有用であると共に、特に歯周病細菌内毒素
を中和しかつ歯周病原因菌の付着を抑制する効果を奏す
ることから口腔用組成物の歯周病細菌内毒素中和及び歯
周病細菌付着抑制のための有効成分として効果的に用い
られることを知見し、本発明をなすに至ったものであ
る。Means for Solving the Problems and Embodiments of the Invention The present inventors have conducted intensive studies to achieve the above object, and as a result, the peptide containing lysine, isoleucine, glycine and leucine was found to have an in vitro bacterial endotoxin activity. Inhibition of endotoxin activity by inhibition test (Endospecy method), suppression of redness, swelling, and hemorrhagic necrosis by endotoxin activity inhibition test by rabbit skin endotoxin test, and teeth of Porphyromonas gingivalis etc. It has an excellent anti-endotoxin effect, such as inhibiting the adhesion of periodontal disease-causing bacteria, and the above peptide is useful as an active ingredient of anti-endotoxin. It is found to be effective as an active ingredient for neutralizing periodontal disease endotoxin and inhibiting the adhesion of periodontal disease bacteria in oral compositions because it has an effect of suppressing the adhesion of pathogenic bacteria Are those able to complete the present invention.

【０００６】従って、本発明は、（１）リジン、イソロ
イシン、グリシン及びロイシンを含むペプチドを有効成
分とする抗内毒素剤、及び（２）この抗内毒素剤を含有
する口腔用組成物を提供する。Accordingly, the present invention provides (1) an anti-endotoxin agent comprising a peptide containing lysine, isoleucine, glycine and leucine as an active ingredient, and (2) an oral composition containing the anti-endotoxin agent. I do.

【０００７】以下、本発明につき更に詳述する。本発明
の抗内毒素剤は、上述したように、リジン、イソロイシ
ン、グリシン及びロイシンを含むペプチドを有効成分と
するものである。この場合、ペプチドはこれらのアミノ
酸を含めばよく、上記アミノ酸の配列順序は特に制限は
なく、上記アミノ酸の間に他のアミノ酸が介在したもの
であってもよいが、特には、リジン、イソロイシン、グ
リシン及びロイシンに加えて更にフェニルアラニン及び
メチオニンを含むものが好適であり、とりわけこれらが Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ 又は Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ の配列順序のアミノ酸群を含むものが好適である。ま
た、リジン、イソロイシン、グリシン及びロイシンに加
えて更にヒスチジン、プロリン、スレオニン、システィ
ン、バリン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、ア
ラニン及びアスパラギン酸の１種又は２種以上、特に７
〜１２種を含むものが好適である。Hereinafter, the present invention will be described in more detail. As described above, the anti-endotoxin agent of the present invention contains a peptide containing lysine, isoleucine, glycine and leucine as an active ingredient. In this case, the peptide may include these amino acids, and the sequence of the amino acids is not particularly limited, and another amino acid may be interposed between the amino acids.In particular, lysine, isoleucine, Those containing phenylalanine and methionine in addition to glycine and leucine are particularly preferred, especially those comprising Lys-Phe-Ile-Gly-Leu-Met or Lys-Leu-Phe-Gly-Ile-Met. Those containing are preferred. Further, in addition to lysine, isoleucine, glycine and leucine, one or more of histidine, proline, threonine, cysteine, valine, tyrosine, glutamine, asparagine, alanine and aspartic acid, particularly 7
Those containing up to 12 types are preferred.

【０００８】また、上記ペプチドは、上記アミノ酸を含
む構成アミノ酸数は６〜２０個であることが好ましい。It is preferable that the peptide has 6 to 20 constituent amino acids including the amino acids.

【０００９】上記ペプチドとしては、 ペプチドＩ：Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ
−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ペプチドＩＩ：Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌ
ｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ペプチドＩＩＩ：Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｉ
ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ を好ましい例としてあげることができる。[0009] As the above-mentioned peptide, peptide I: Lys-Phe-Ile-Gly-Leu
-Met-NH ₂ peptide II: Lys-Leu-Phe-Gly-Il
e-Met-NH ₂ peptide III: Ile-His-Pro-Thr-I
le-Leu-Cys-Val-Tyr-Gly-Ly
s-Leu-Gln-Lys-Asn-Gly-Ala
-Asp-Leu-Ala is a preferred example.

【００１０】本発明にかかるペプチドは、口腔用組成物
に配合して使用されるほか、これを抗内毒素剤としてそ
のまま経口的使用に供してもよいが、１種以上の医薬的
に許容される医薬補助剤と組み合わせた経口医薬組成物
又は非経口医薬組成物として使用してもよい。[0010] The peptide of the present invention may be used by blending it into an oral composition, or may be used as it is as an anti-endotoxin for oral use as it is, but it may be one or more pharmaceutically acceptable ones. May be used as an oral or parenteral pharmaceutical composition in combination with a pharmaceutical adjuvant.

【００１１】上記経口医薬組成物の形態としては、錠剤
（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆
粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）等
の固形製剤及び懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤等の液
状薬剤が挙げられる。このような組成物は、公知の方法
によって製造することができ、この種の組成物の製造に
通常用いられる担体、賦形剤を配合して調製し得る。The form of the oral pharmaceutical composition includes solid preparations such as tablets (including sugar-coated tablets and film-coated tablets), pills, granules, powders, capsules (including soft capsules), suspensions, and emulsions. , Liquid, syrup and the like. Such a composition can be produced by a known method, and can be prepared by blending carriers and excipients usually used for producing such a composition.

【００１２】固形製剤とする場合は、慣用の賦形剤（無
水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、乳糖、コーンスタ
ーチ、結晶セルロース等）、結合剤（カルボキシメチル
セルロース、ポリビニルピロリドン等）、潤滑剤（ステ
アリン酸マグネシウム、タルク等）、崩壊剤（デンプ
ン、カルボキシメチルセルロースカルシウム等）、その
他矯味剤、甘味剤及び着色剤等を含有することができ
る。When a solid preparation is used, conventional excipients (silicic anhydride, synthetic aluminum silicate, lactose, corn starch, crystalline cellulose, etc.), binders (carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, etc.), lubricants (stearic acid) Magnesium, talc, etc.), disintegrants (starch, carboxymethylcellulose calcium, etc.), other flavoring agents, sweetening agents, coloring agents and the like can be contained.

【００１３】液状製剤とする場合は、水性もしくは油性
の懸濁液、溶液又はシロップ等とすればよく、また使用
に際して適当なビヒクルで再溶解し得る乾燥物であって
もよい。このような液状製剤は、普通に用いられる乳化
剤（レシチン、ソルビタンモノオレエート等）、乳化助
剤（ソルビットシロップ、メチルセルロース、ゼラチン
等）、非水性ビヒクル（ココナッツ油、落花生油等）、
その他酸化防止剤、着色剤及び香味料等を含有すること
ができる。When a liquid preparation is used, it may be an aqueous or oily suspension, solution or syrup, or a dry product which can be redissolved with a suitable vehicle at the time of use. Such liquid preparations include commonly used emulsifiers (lecithin, sorbitan monooleate, etc.), emulsifiers (sorbitol syrup, methylcellulose, gelatin, etc.), non-aqueous vehicles (coconut oil, peanut oil, etc.),
In addition, it may contain an antioxidant, a coloring agent, a flavor and the like.

【００１４】上記非経口医薬組成物の形態としては、注
射剤、筋肉注射剤又は点滴注射剤、軟膏剤、ゲル剤、坐
剤等が挙げられる。このような注射剤は、公知の方法、
即ち上記ペプチドを通常注射剤に用いられる無菌の水性
もしくは油性液に溶解、懸濁又は乳化することによって
製造することができる。注射用の水溶液としては、生理
食塩水、ブドウ糖やその他の補助液を含む等張液等が挙
げられ、必要に応じて適当な懸濁化剤、例えばカルボキ
シメチルセルロースナトリウム、非イオン性活性剤等を
併用してもよい。調製された注射液は、通常適当なアン
プルに充填して用いることができる。Examples of the form of the parenteral pharmaceutical composition include injections, intramuscular injections or infusions, ointments, gels, suppositories and the like. Such injections can be prepared by known methods,
That is, the peptide can be produced by dissolving, suspending or emulsifying the peptide in a sterile aqueous or oily liquid commonly used for injections. Aqueous solutions for injection include physiological saline, isotonic solutions containing dextrose and other auxiliary liquids, and, if necessary, suitable suspending agents such as sodium carboxymethylcellulose, nonionic active agents and the like. You may use together. The prepared injection solution can be usually used by filling it into an appropriate ampoule.

【００１５】ペプチドの投与量は、投与方法、投与回数
及び患者の年齢、体重及び性別に応じて適宜増減される
が、通常、成人１日当り０．００１〜１０ｇ、特に０．
０１〜５ｇの範囲となることが好ましい。ペプチドの投
与は、１日の投与量が上記範囲内となるように１日に１
回〜数回投与すると好適である。The dose of the peptide may be appropriately increased or decreased depending on the method of administration, the number of administrations and the age, weight and sex of the patient.
It is preferably in the range of 01 to 5 g. The administration of the peptide is performed once a day so that the daily dose is within the above range.
It is preferred to administer once to several times.

【００１６】本発明の口腔用組成物は、上記ペプチドを
含有するものであるが、その配合量は組成物全体の０．
００１〜５％（重量％、以下同様）、特に０．０１〜３
％とすることが好ましい。The composition for oral cavity of the present invention contains the above-mentioned peptide.
001 to 5% (% by weight, hereinafter the same), particularly 0.01 to 3%
% Is preferable.

【００１７】本発明の口腔用組成物は、練歯磨、液状歯
磨等の歯磨類、洗口剤、口腔用軟膏、うがい用錠剤、ト
ローチ、キャンディ、チューインガムなどとして調製さ
れるが、これら口腔用組成物を調製する場合、その種類
に応じて通常使用されている成分を用いることができ、
これらの成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲
で通常量とすることができる。The oral composition of the present invention is prepared as dentifrice such as toothpaste and liquid dentifrice, mouthwash, oral ointment, gargle tablet, troche, candy, chewing gum and the like. When preparing a product, it is possible to use components commonly used depending on the type,
The addition amount of these components can be a usual amount as long as the effects of the present invention are not hindered.

【００１８】例えば、歯磨類の場合は、研磨剤、粘結
剤、粘稠剤、界面活性剤、甘味剤、防腐剤、香料、着色
剤、上記以外の各種有効成分などを配合し得、これら成
分を水と混合して製造することができる。For example, in the case of dentifrices, abrasives, binders, thickeners, surfactants, sweeteners, preservatives, fragrances, coloring agents, various active ingredients other than those described above, and the like can be blended. It can be produced by mixing the components with water.

【００１９】ここで研磨剤としては、沈降性シリカ、シ
リカゲル、アルミノシリケート、ジルコノシリケート等
のシリカ系研磨剤、第２リン酸カルシウム２水和物及び
無水和物、ピロリン酸カルシウム、炭酸カルシウム、水
酸化アルミニウム、アルミナ、炭酸マグネシウム、第３
リン酸マグネシウム、ゼオライト、ケイ酸ジルコニウ
ム、合成樹脂系研磨剤などが好適に用いられる。Examples of the abrasive include silica abrasives such as precipitated silica, silica gel, aluminosilicate and zirconosilicate, dibasic calcium phosphate dihydrate and anhydrate, calcium pyrophosphate, calcium carbonate, aluminum hydroxide , Alumina, magnesium carbonate, tertiary
Magnesium phosphate, zeolite, zirconium silicate, synthetic resin abrasives and the like are preferably used.

【００２０】粘結剤としては、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、カラギ
ーナン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、カー
ボポール、グアガム、モンモリロナイト、ゼラチンなど
が好適に用いられる。As the binder, sodium carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, carrageenan, sodium alginate, xanthan gum, carbopol, guar gum, montmorillonite, gelatin and the like are preferably used.

【００２１】粘稠剤としては、グリセリン、ソルビッ
ト、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、
キシリット、マルチット、ラクチットなどが好適に用い
られる。Examples of the thickener include glycerin, sorbitol, propylene glycol, polyethylene glycol,
Xylit, maltit, lactit, and the like are preferably used.

【００２２】界面活性剤としては、アニオン界面活性
剤、カチオン界面活性剤、非イオン性界面活性剤等を配
合し得、具体的にはラウリル硫酸ナトリウム、α−オレ
フィンスルホン酸ナトリウム、Ｎ−アシルサルコシネー
ト、Ｎ−アシルグルタメート、２−アルキル−Ｎ−カル
ボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム
ベタイン、Ｎ−アシルタウレート、ショ糖脂肪酸エステ
ル、アルキロールアマイド、ポリオキシエチレン硬化ヒ
マシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プルロニッ
ク、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートな
どが好適に用いられる。As the surfactant, an anionic surfactant, a cationic surfactant, a nonionic surfactant and the like can be blended, and specific examples thereof include sodium lauryl sulfate, sodium α-olefin sulfonate, and N-acyl sulfonate. Cosinate, N-acyl glutamate, 2-alkyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylimidazolinium betaine, N-acyl taurate, sucrose fatty acid ester, alkylol amide, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyglycerin Fatty acid esters, pluronics, polyoxyethylene sorbitan monostearate and the like are preferably used.

【００２３】甘味剤としては、サッカリンナトリウム、
ステビオサイド、ステビアエキス、パラメトキシシンナ
ミックアルデヒド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコ
ン、ペリラルチンなどが挙げられる。As sweeteners, sodium saccharin,
Examples include stevioside, stevia extract, paramethoxycinnamic aldehyde, neohesperidyl dihydrochalcone, and perillartin.

【００２４】防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エス
テル、安息香酸ナトリウムなどが挙げられる。Examples of the preservative include paraoxybenzoate, sodium benzoate and the like.

【００２５】香料としては、ｌ−メントール、カルボ
ン、アネトール、リモネン等のテルペン類又はその誘導
体などが好適である。As the fragrance, terpenes such as 1-menthol, carvone, anethole, limonene and the like, and derivatives thereof are preferable.

【００２６】着色剤としては、青色１号、黄色４号、二
酸化チタンなどが好適である。As the coloring agent, Blue No. 1, Yellow No. 4, titanium dioxide and the like are preferable.

【００２７】各種有効成分としては、フッ化ナトリウ
ム、フッ化カリウム、フッ化アンモニウム、フッ化第１
スズ、モノフルオロリン酸ナトリウムなどのフッ化物、
正リン酸のカリウム塩、ナトリウム塩等の水溶性リン酸
化合物、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、
ヒノキチオール、アスコルビン酸、塩化リゾチーム、グ
リチルリチン酸及びその塩類、塩化ナトリウム、トラネ
キサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、酢酸ｄｌ−ト
コフェロール、アズレン、グリチルレチン酸、銅クロロ
フィリンナトリウム、グルコン酸銅等の銅化合物、乳酸
アルミニウム、塩化ストロンチウム、硝酸カリウム、ベ
ルベリン、ヒドロキサム酸及びその誘導体、トリポリリ
ン酸ナトリウム、ゼオライト、デキストラナーゼ、ムタ
ナーゼ、アミラーゼ、メトキシエチレン、無水マレイン
酸共重合体、ポリビニルピロリドン、エピジヒドロコレ
ステリン、ジヒドロコレステロール、クエン酸亜鉛、ト
ウキ、オウバク、チョウジ、ローズマリー、オウゴン、
ベニバナなどの抽出物、α−ビサボロール、クロルヘキ
シジン塩類、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニ
ウム、トリクロロカルバニリドなどが挙げられる。The various active ingredients include sodium fluoride, potassium fluoride, ammonium fluoride and primary fluoride.
Fluorides such as tin and sodium monofluorophosphate,
Water-soluble phosphoric acid compounds such as potassium phosphate and sodium salt of orthophosphoric acid, allantoinchlorohydroxyaluminum,
Hinokitiol, ascorbic acid, lysozyme chloride, glycyrrhizic acid and salts thereof, sodium chloride, tranexamic acid, epsilon aminocaproic acid, dl-tocopherol acetate, azulene, glycyrrhetinic acid, copper chlorophyllin sodium, copper compounds such as copper gluconate, aluminum lactate, chloride Strontium, potassium nitrate, berberine, hydroxamic acid and derivatives thereof, sodium tripolyphosphate, zeolite, dextranase, mutanase, amylase, methoxyethylene, maleic anhydride copolymer, polyvinylpyrrolidone, epidihydrocholesterine, dihydrocholesterol, zinc citrate , Touki, bakaku, clove, rosemary, ogon,
Extracts such as safflower, α-bisabolol, chlorhexidine salts, cetylpyridinium chloride, benzethonium chloride, trichlorocarbanilide and the like.

【００２８】[0028]

【発明の効果】本発明の抗内毒素剤及びこれを配合した
口腔用組成物は、優れた細菌内毒素活性抑制作用を有す
る上、長期間使用しても安全で、しかも細菌の歯牙、粘
膜に対する付着抑制効果を有し、歯周疾患の予防、治療
に応用可能である。また、本発明の抗内毒素剤は、細菌
感染によるエンドトキシンショックの治療にも有効であ
る。Industrial Applicability The anti-endotoxin agent of the present invention and an oral composition containing the same have excellent bacterial endotoxin activity-inhibiting activity, are safe even when used for a long period of time, and have bacterial tooth and mucous membranes. It has an effect of suppressing adhesion to the skin, and can be applied to the prevention and treatment of periodontal disease. The anti-endotoxin agent of the present invention is also effective for treating endotoxin shock caused by bacterial infection.

【００２９】[0029]

【実施例】以下、実験例と実施例を示し、本発明を具体
的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるも
のではない。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to experimental examples and examples, but the present invention is not limited to the following examples.

【００３０】なお、下記例で、ペプチドＩ、ペプチドＩ
Ｉ、ペプチドＩＩＩは下記の通りである。 ペプチドＩ：Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ
−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ペプチドＩＩ：Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌ
ｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ペプチドＩＩＩ：Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｉ
ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−ＡｌａIn the following examples, peptide I, peptide I
I and peptide III are as follows. Peptide I: Lys-Phe-Ile-Gly-Leu
-Met-NH ₂ peptide II: Lys-Leu-Phe-Gly-Il
e-Met-NH ₂ peptide III: Ile-His-Pro-Thr-I
le-Leu-Cys-Val-Tyr-Gly-Ly
s-Leu-Gln-Lys-Asn-Gly-Ala
-Asp-Leu-Ala

【００３１】〔実験例１〕 インビトロ内毒素活性抑制
試験 エンドスペシー法（生化学工業（株））を変法した下記
方法により、内毒素活性抑制試験を行った。歯周病の原
因菌の１つであるアクチノバシルス・アクチノマイセテ
ムコミタンスＹ４又はポルフィロモナス・ジンジバリス
３８１の内毒素（以下、Ａ．ａ．ＬＰＳ、Ｐ．ｇ．ＬＰ
Ｓと記す）の１μｇ／ｍｌと各種薬剤（１×１０^-4Ｍ）
の１ｍｌとを３７℃、３０分間インキュベーション後、
Ａ．ａ．ＬＰＳ又はＰ．ｇ．ＬＰＳが１００ｐｇ／ｍｌ
になるように希釈して、エンドスペシーによる内毒素活
性抑制を評価した。結果を表１，２に示す。EXPERIMENTAL EXAMPLE 1 In Vitro Endotoxin Activity Inhibition Test An endotoxin activity inhibition test was performed by the following method, which was a modification of the Endospecy method (Seikagaku Corporation). Endotoxin of Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4 or Porphyromonas gingivalis 381, one of the causative bacteria of periodontal disease (hereinafter Aa LPS, Pg LP)
S) and various drugs (1 × 10 ^-4 M)
After incubation for 30 minutes at 37 ° C with 1 ml of
A. a. LPS or P.S. g. LPS is 100 pg / ml
And the suppression of endotoxin activity by endospecies was evaluated. The results are shown in Tables 1 and 2.

【００３２】[0032]

【表１】 [Table 1]

【００３３】[0033]

【表２】 [Table 2]

【００３４】〔実験例２〕 家兎皮内毒性試験による内
毒素活性抑制試験 Ｐｒｉｍａｒｙ ｓｋｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ 家兎腹部皮内に内毒素又は内毒素とペプチドの混合液
（注射前に３７℃，３０分間反応）を０．１ｍｌ注射し
た。４８時間後に注射部位の発赤、腫脹の大きさ（縦×
横）を測定して、内毒素活性抑制を評価した。結果を表
３に示す。[Experimental Example 2] Endotoxin activity inhibition test by rabbit skin endotoxicity test Primary skin reaction Endotoxin or a mixture of endotoxin and peptide in rabbit abdominal skin (reacted at 37 ° C. for 30 minutes before injection) Was injected 0.1 ml. 48 hours later, the size of redness and swelling at the injection site (vertical ×
Side) was measured to evaluate the inhibition of endotoxin activity. Table 3 shows the results.

【００３５】[0035]

【表３】 [Table 3]

【００３６】局所シュワルツマン反応 （Ｌｏｃａｌ Ｓｃｈｗａｒｚｍａｎ ｒｅａｃｔｉｏ
ｎ） Ｐｒｉｍａｒｙ ｓｋｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ判定後、
家兎耳静脈にＡ．ａ．ＬＰＳ１００μｇ／ｋｇ（体重）
注射し、２４時間後に皮内注射部位の紅斑、出血性壊死
の大きさ（縦×横）を測定することで内毒素活性抑制を
評価した。結果を表４に示す。[0036] Local Schwarzman reaction (Local Schwarzman reaction)
n) After determining the Primary skin reaction,
A. In the rabbit ear vein. a. LPS 100 μg / kg (body weight)
24 hours after the injection, suppression of endotoxin activity was evaluated by measuring the size (length × width) of erythema and hemorrhagic necrosis at the intradermal injection site. Table 4 shows the results.

【００３７】[0037]

【表４】 [Table 4]

【００３８】〔実験例３〕 ポルフィロモナス・ジンジ
バリス（Ｐ．ｇ．）３８１の付着抑制実験 トリチュウムをラベルしたＰ．ｇ．３８１（１．２×１
０⁸ｃｅｌｌｓ）とヒト唾液処理したハイドロオキシア
パタイトビーズ２ｍｇ及びペプチド１００μｇをＫＣｌ
緩衝液４００μｌ中、室温で１時間反応させた。インキ
ュベーション後、ハイドロオキシアパタイトビーズに吸
着した細菌と吸着しない細菌を分離するために１００％
Ｐｅｒｃｏｌｌで処理した。Ｐ．ｇ．吸着したハイドロ
オキシアパタイトビーズをＫＣｌ緩衝液で洗浄後、放射
活性を測定して、ペプチドの付着阻害率を求めた。結果
を表５に示す。[Experimental Example 3] Adhesion suppression experiment of Porphyromonas gingivalis (Pg) 381 Tritium-labeled P. g. 381 (1.2 × 1
0 ⁸ cells) and human saliva treated with hydroxyapatite beads 2mg and peptide 100 [mu] g KCl
The reaction was carried out for 1 hour at room temperature in 400 μl of buffer. After incubation, 100% to separate the bacteria adsorbed on the hydroxyapatite beads and the bacteria not adsorbed
Treated with Percoll. P. g. After washing the adsorbed hydroxyapatite beads with a KCl buffer, the radioactivity was measured to determine the peptide adhesion inhibition rate. Table 5 shows the results.

【００３９】[0039]

【表５】 [Table 5]

【００４０】〔実験例４〕薬剤の副作用に関して、ラッ
トを用いた試験を行った。ラット（雄，８週齢）を一群
１０匹として三群用意し、各群にペプチドＩ，ＩＩ，Ｉ
ＩＩを１日当り５０ｍｇ／ｋｇをそれぞれ経口投与し、
１０日間各ラットの生死を観察したが、死亡例はなく、
各ペプチドの副作用は認められなかった。[Experimental Example 4] A test using rats was conducted for side effects of the drug. Three groups of rats (male, 8 weeks old) were prepared in groups of 10, and peptides I, II, and I were assigned to each group.
II was orally administered at 50 mg / kg each day,
The life and death of each rat was observed for 10 days.
No side effect of each peptide was observed.

【００４１】以下、実施例を示す。 〔実施例１〕 練歯磨 炭酸カルシウム ５０．００ ％ グリセリン ２０．００ カラギーナン ０．５０ カルボキシメチルセルロース １．００ ラウリルジエタノールアマイド １．００ ショ糖モノラウレート ２．００ 香料 １．００ サッカリン ０．１０ Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ０．８０ 水 残 計 １００．００ ％Examples will be described below. [Example 1] Toothpaste Calcium carbonate 50.00% Glycerin 20.00 Carrageenan 0.50 Carboxymethylcellulose 1.00 Lauryldiethanolamide 1.00 Sucrose monolaurate 2.00 Fragrance 1.00 Saccharin 0.10 Lys- Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH ₂ 0.80 water balance 100.00%

【００４２】 〔実施例２〕 液状歯磨 水酸化アルミニウム ２５．００ ％ グリセリン ４０．００ ソルビット １５．００ カルボキシメチルセルロース ０．２０ プロピレングリコール ２．００ ラウリル硫酸ナトリウム １．５０ モノラウリン酸デカグリセリル １．００ 香料 １．００ サッカリンナトリウム ０．１０ Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ０．２０ 水 残 計 １００．００ ％Example 2 Liquid Toothpaste Aluminum Hydroxide 25.00% Glycerin 40.00 Sorbit 15.00 Carboxymethyl Cellulose 0.20 Propylene Glycol 2.00 Sodium Lauryl Sulfate 1.50 Decaglyceryl Monolaurate 1.00 Fragrance 1 0.000 Sodium saccharin 0.10 Lys-Leu-Phe-Gly-Ile-Met-NH ₂ 0.20 Water Residue 100.00%

【００４３】 〔実施例３〕 口腔用軟膏 流動パラフィン １５．００ ％ セタノール １０．００ グリセリン ２０．００ ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル ５．００ 香料 ０．５０ サッカリンナトリウム ０．１０ Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ− Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ− Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ ０．５０ 水 残 計 １００．００ ％[Example 3] Oral ointment Liquid paraffin 15.00% Cetanol 10.00 Glycerin 20.00 Polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester 5.00 Fragrance 0.50 Saccharin sodium 0.10 Ile-His-Pro-Thr- Ile-Leu-Cys-Val-Tyr-Gly-Lys-Leu-Gln-Lys-Asn-Gly-Ala-Asp-Leu-Ala 0.50 Water balance 100.00%

【００４４】 〔実施例４〕 洗口液 エタノール ２０．００ ％ 香料 １．００ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．３０ モノフルオロリン酸ナトリウム ０．１０ サッカリンナトリウム ０．０５ Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ０．７０ 水 残 計 １００．００ ％Example 4 Mouth Wash Solution Ethanol 20.00% Fragrance 1.00 Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.30 Sodium monofluorophosphate 0.10 Sodium saccharin 0.05 Lys-Leu-Phe-Gly-Ile -Met-NH ₂ 0.70 water remaining total 100.00%

【００４５】 〔実施例５〕 うがい用錠剤 炭酸水素ナトリウム ５４．５０ ％ クエン酸 １７．００ 無水硫酸ナトリウム １２．８０ 第２リン酸ナトリウム １０．００ ポリエチレングリコール ３．００ モノフルオロリン酸ナトリウム ０．１０ 香料 ２．００ オレイン酸 ０．１０ Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ− Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ− Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ ０．５０ 計 １００．００ ％Example 5 Gargle Tablets Sodium Bicarbonate 54.50% Citric Acid 17.00 Anhydrous Sodium Sulfate 12.80 Dibasic Sodium Phosphate 10.00 Polyethylene Glycol 3.00 Sodium Monofluorophosphate 0.10 Perfume 2.00 Oleic acid 0.10 Ile-His-Pro-Thr-Ile-Leu-Cys-Val-Tyr-Gly-Lys-Leu-Gln-Lys- Asn-Gly-Ala-Asp-Leu-Ala. 50 total 100.00%

【００４６】 〔実施例６〕 トローチ ブドウ糖 ３５．００ ％ パラチノース ３５．００ アラビアゴム ６．００ 香料 １．００ Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ０．５０ 水 残 計 １００．００ ％Example 6 Lozenges Glucose 35.00% Palatinose 35.00 Gum Arabic 6.00 Fragrance 1.00 Lys-Leu-Phe-Gly-Ile-Met-NH ₂ 0.50 Water Balance 100.00 %

【００４７】 〔実施例７〕 キャンディ 砂糖 ５０．００ ％ 水飴 ３３．００ 有機酸 ２．００ 香料 ０．２０ Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ １．００ 水 残 計 １００．００ ％Example 7 Candy sugar 50.00% starch syrup 33.00 Organic acid 2.00 Fragrance 0.20 Lys-Leu-Phe-Gly-Ile-Met-NH ₂ 1.00 Water balance 100.00 %

【００４８】 〔実施例８〕 チューインガム 砂糖 ５３．００ ％ ガムベース ２０．００ グルコース １０．００ 水飴 １６．００ 香料 ０．５０ Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ₂ ０．５０ 計 １００．００ ％Example 8 Chewing gum sugar 53.00% gum base 20.00 glucose 10.00 starch syrup 16.00 fragrance 0.50 Lys-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH ₂ 0.50 total 100. 00%

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ２３Ｇ 3/30 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＧＺ ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI A23G 3/30 A61K 37/02 AGZ

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 リジン、イソロイシン、グリシン及びロ
イシンを含むペプチドを有効成分とする抗内毒素剤。1. An anti-endotoxin comprising a peptide containing lysine, isoleucine, glycine and leucine as an active ingredient. 【請求項２】 ペプチドが更にフェニルアラニン及びメ
チオニンを含む請求項１記載の抗内毒素剤。2. The anti-endotoxin according to claim 1, wherein the peptide further comprises phenylalanine and methionine. 【請求項３】 ペプチドが更にヒスチジン、プロリン、
スレオニン、システィン、バリン、チロシン、グルタミ
ン、アスパラギン、アラニン及びアスパラギン酸を含む
ものである請求項１記載の抗内毒素剤。3. The method according to claim 1, wherein the peptide further comprises histidine, proline,
2. The anti-endotoxin according to claim 1, comprising threonine, cysteine, valine, tyrosine, glutamine, asparagine, alanine and aspartic acid. 【請求項４】 請求項１，２又は３記載の抗内毒素剤を
含有する口腔用組成物。4. An oral composition comprising the anti-endotoxin according to claim 1, 2 or 3.