JPH10117773A - ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株 - Google Patents
ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明の課題は、現存する弱毒化ＰＲＲＳＶ
ウィルス株と比較して異なる弱毒特性の所望の特徴を有
するヨーロッパ血清型の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株を
提供することにある。さらに本発明の課題は、この種の
生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株の製造方法を提供すること
にある。 【解決手段】 本発明は、マクロファージに対し非感染
性である独特の特徴を持ったブタ生殖および呼吸症候群
（ＰＲＲＳ）ウィルスのヨーロッパ株である。
ウィルス株と比較して異なる弱毒特性の所望の特徴を有
するヨーロッパ血清型の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株を
提供することにある。さらに本発明の課題は、この種の
生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株の製造方法を提供すること
にある。 【解決手段】 本発明は、マクロファージに対し非感染
性である独特の特徴を持ったブタ生殖および呼吸症候群
（ＰＲＲＳ）ウィルスのヨーロッパ株である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ブタ生殖および呼
吸症候群ウィルス（ＰＲＲＳＶ）のヨーロッパ血清型の
生弱毒株、この種の株の生産方法、それに基づくワクチ
ン、並びにこの種のワクチンの製造方法に関するもので
ある。
吸症候群ウィルス（ＰＲＲＳＶ）のヨーロッパ血清型の
生弱毒株、この種の株の生産方法、それに基づくワクチ
ン、並びにこの種のワクチンの製造方法に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】１９８７年、当時まで未知であったブタ
の病気が北米で検出され、その後にそこからカナダまで
伝染した［Ｈ．ヒル；プロシーディング・オブ・ミステ
リー・スワイン・ディジーズ・コミティー・ミーティン
グ、１９９０年１０月６日、デンバー、コロラド、家畜
保護協会、マジソン・ウィ、ＵＳＡ：ケファバー等；ア
メリカン・アソシェーション・スワイン・プラクト・ニ
ュースレター、第１巻、第１〜９頁（１９８９）］。流
産および呼吸病の両者を誘発するという事実を特徴とす
る病気は最初にミステリー・スワイン・ディジーズ（Ｍ
ＳＤ）と呼ばれた。現在、米国およびカナダでは、この
病気はブタ不妊症および呼吸症候群（ＳＩＲＳ）として
も知られる。
の病気が北米で検出され、その後にそこからカナダまで
伝染した［Ｈ．ヒル；プロシーディング・オブ・ミステ
リー・スワイン・ディジーズ・コミティー・ミーティン
グ、１９９０年１０月６日、デンバー、コロラド、家畜
保護協会、マジソン・ウィ、ＵＳＡ：ケファバー等；ア
メリカン・アソシェーション・スワイン・プラクト・ニ
ュースレター、第１巻、第１〜９頁（１９８９）］。流
産および呼吸病の両者を誘発するという事実を特徴とす
る病気は最初にミステリー・スワイン・ディジーズ（Ｍ
ＳＤ）と呼ばれた。現在、米国およびカナダでは、この
病気はブタ不妊症および呼吸症候群（ＳＩＲＳ）として
も知られる。
【０００３】１９９０年以来、この病気はヨーロッパで
も見られ、先ず最初にドイツ国で発生し、次いでオラン
ダおよびベルギーでも発生し、さらに病気は現在ではヨ
ーロッパ全体に伝染している。ヨーロッパにおいて、こ
の病気はブタ生殖呼吸症候群（ＰＲＲＳ）として、およ
びブタ流行流産および呼吸症候群（ＰＥＡＲＳ）として
一般に知られている。現在、この病気は世界的にＰＲＲ
Ｓと呼ばれる。
も見られ、先ず最初にドイツ国で発生し、次いでオラン
ダおよびベルギーでも発生し、さらに病気は現在ではヨ
ーロッパ全体に伝染している。ヨーロッパにおいて、こ
の病気はブタ生殖呼吸症候群（ＰＲＲＳ）として、およ
びブタ流行流産および呼吸症候群（ＰＥＡＲＳ）として
一般に知られている。現在、この病気は世界的にＰＲＲ
Ｓと呼ばれる。
【０００４】その病理学は流産および呼吸病に限定され
ない。この病気に伴う他の徴候は次の通りである：嘔吐
（ｏｆｆ ｆｅｅｄ）、拒食症、四肢（特に耳）の青色
変化。
ない。この病気に伴う他の徴候は次の通りである：嘔吐
（ｏｆｆ ｆｅｅｄ）、拒食症、四肢（特に耳）の青色
変化。
【０００５】流産および呼吸病の両者に関する病気の病
原作用がクリスチャンソン等によるコンプリヘンシブ・
レビューに広範に記載されている［スワイン・ヘルス・
アンド・プロダクション、第２巻、第１０〜２８頁（１
９９４）］。
原作用がクリスチャンソン等によるコンプリヘンシブ・
レビューに広範に記載されている［スワイン・ヘルス・
アンド・プロダクション、第２巻、第１０〜２８頁（１
９９４）］。
【０００６】現在、この病気の原因は、アルテリビリデ
ー（Arteriviridae）の群に属する小エンベロプドＲＮ
Ａウィルスであることが知られている。
ー（Arteriviridae）の群に属する小エンベロプドＲＮ
Ａウィルスであることが知られている。
【０００７】ウェンスボート等によりなされた観察
［Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎｖｅｓｔ、第４巻、第
１３４〜１３８頁（１９９２）］およびムルトー等によ
りなされた観察［アーカイブ・バイロロジー、第１４０
巻、第１４５１〜１４６０頁（１９９５）］は、疑う余
地なくウィルスの２種の完全に異なる（血清）型、すな
わちアメリカ（血清）型およびヨーロッパ（血清）型が
存在することを明らかにした。
［Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎｖｅｓｔ、第４巻、第
１３４〜１３８頁（１９９２）］およびムルトー等によ
りなされた観察［アーカイブ・バイロロジー、第１４０
巻、第１４５１〜１４６０頁（１９９５）］は、疑う余
地なくウィルスの２種の完全に異なる（血清）型、すな
わちアメリカ（血清）型およびヨーロッパ（血清）型が
存在することを明らかにした。
【０００８】このウィルスのヨーロッパ型がベンスボー
ト等により記載されている［Ｖｅｔ．Ｑｕａｒｔｅｒｌ
ｙ、第１３巻、第１２１〜１３０頁（１９９１）］。
ト等により記載されている［Ｖｅｔ．Ｑｕａｒｔｅｒｌ
ｙ、第１３巻、第１２１〜１３０頁（１９９１）］。
【０００９】「レリースタッドウィルス」（ＬＶ）と呼
ばれるこのヨーロッパ型の株がセントラル・ベテリナリ
ー・インスチチュート、レリースタッド、オランダ国に
よるＰＣＴ ＷＯ ９２／２１３７５号と関連してイン
スチチュート・パッスール（パリ、フランス国）にＮ
ｏ．Ｉ−１１０２として寄託されている。他のヨーロッ
パ株がＥＰＡ Ｎｏ．９１，２０２，６４６．５号に記
載されており、コレクション・ナショナーレ・デ・カル
チュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オ
ブ・インスチチュート・パッスール（パリ、フランス
国）にＮｏ．Ｉ−１１４０として寄託された。最近、こ
のヨーロッパ株がコンツェルマン等により記載されてい
る［バイロロジー、第１９３巻、第３２９〜３３９頁
（１９９３）］。
ばれるこのヨーロッパ型の株がセントラル・ベテリナリ
ー・インスチチュート、レリースタッド、オランダ国に
よるＰＣＴ ＷＯ ９２／２１３７５号と関連してイン
スチチュート・パッスール（パリ、フランス国）にＮ
ｏ．Ｉ−１１０２として寄託されている。他のヨーロッ
パ株がＥＰＡ Ｎｏ．９１，２０２，６４６．５号に記
載されており、コレクション・ナショナーレ・デ・カル
チュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オ
ブ・インスチチュート・パッスール（パリ、フランス
国）にＮｏ．Ｉ−１１４０として寄託された。最近、こ
のヨーロッパ株がコンツェルマン等により記載されてい
る［バイロロジー、第１９３巻、第３２９〜３３９頁
（１９９３）］。
【００１０】アメリカ型のウィルスはベンフィールド等
により記載されている［Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ、第４巻、第１２７〜１３３頁（１９９
２）］。アメリカ型の菌株はＮｏ．ＶＲ−２３３２とし
てＡＴＣＣに寄託されており、ＰＣＴ ＷＯ ９３／０
３７６０号およびヨーロッパ特許出願第０，５２９，５
８４号に挙げられている。アメリカ血清型の弱毒株はヨ
ーロッパ特許出願第０，５２９，５８４号に記載されて
いる。この株は寄託されたアメリカＶＲ−２３３２株か
ら直接に得られる。したがって、この株がワクチン接種
された動物は、ヨーロッパ株による感染に対し効率的保
護が得られない。これは、ヨーロッパ血清型に対するワ
クチンの基礎として使用すべくヨーロッパ血清型の生弱
毒株の開発を必要とした。
により記載されている［Ｊ．Ｖｅｔ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ、第４巻、第１２７〜１３３頁（１９９
２）］。アメリカ型の菌株はＮｏ．ＶＲ−２３３２とし
てＡＴＣＣに寄託されており、ＰＣＴ ＷＯ ９３／０
３７６０号およびヨーロッパ特許出願第０，５２９，５
８４号に挙げられている。アメリカ血清型の弱毒株はヨ
ーロッパ特許出願第０，５２９，５８４号に記載されて
いる。この株は寄託されたアメリカＶＲ−２３３２株か
ら直接に得られる。したがって、この株がワクチン接種
された動物は、ヨーロッパ株による感染に対し効率的保
護が得られない。これは、ヨーロッパ血清型に対するワ
クチンの基礎として使用すべくヨーロッパ血清型の生弱
毒株の開発を必要とした。
【００１１】ヨーロッパ特許出願ＥＰ ０，６７６，４
６７号において、ヨーロッパ血清型の生弱毒株が初めて
開示された。ヨーロッパ血清型の弱毒株の例はウィルス
株ＰＲＲＳ ＣおよびＰＲＲＳ Ｄであって、コレクシ
ョン・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・ミクロオ
ルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチュート・
パッスール（パリ、フランス国）に受託番号Ｉ−１３８
７（株Ｄ）および受託番号Ｉ−１３８８（株Ｃ）として
寄託されている。
６７号において、ヨーロッパ血清型の生弱毒株が初めて
開示された。ヨーロッパ血清型の弱毒株の例はウィルス
株ＰＲＲＳ ＣおよびＰＲＲＳ Ｄであって、コレクシ
ョン・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・ミクロオ
ルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチュート・
パッスール（パリ、フランス国）に受託番号Ｉ−１３８
７（株Ｄ）および受託番号Ｉ−１３８８（株Ｃ）として
寄託されている。
【００１２】これら株はＰＲＲＳＶに対する生弱毒化ワ
クチンの基礎として効果的である。しかしながら、これ
らは或る程度の毒力がまだ残留する。したがって、代案
の弱毒化ＰＲＲＳＶ株およびこの種のウィルスの製造方
法が望まれる。
クチンの基礎として効果的である。しかしながら、これ
らは或る程度の毒力がまだ残留する。したがって、代案
の弱毒化ＰＲＲＳＶ株およびこの種のウィルスの製造方
法が望まれる。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、現存
する弱毒化ＰＲＲＳＶウィルス株と比較して異なる弱毒
特性の所望の特徴を有するヨーロッパ血清型の生弱毒化
ＰＲＲＳウィルス株を提供することにある。さらに本発
明の課題は、この種の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株の製
造方法を提供することにある。
する弱毒化ＰＲＲＳＶウィルス株と比較して異なる弱毒
特性の所望の特徴を有するヨーロッパ血清型の生弱毒化
ＰＲＲＳウィルス株を提供することにある。さらに本発
明の課題は、この種の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス株の製
造方法を提供することにある。
【００１４】
【課題を解決するための手段】これら課題は、マクロフ
ァージに対し感染性でないと言う独特の特徴を有するヨ
ーロッパ血清型の生弱毒化ＰＲＲＳウィルスを提供する
本発明により解決される。これは、この種の株がマクロ
ファージに対しまだ感染性である親株よりも弱毒化した
特性をブタにて示す実施例にて示される。
ァージに対し感染性でないと言う独特の特徴を有するヨ
ーロッパ血清型の生弱毒化ＰＲＲＳウィルスを提供する
本発明により解決される。これは、この種の株がマクロ
ファージに対しまだ感染性である親株よりも弱毒化した
特性をブタにて示す実施例にて示される。
【００１５】「マクロファージに対し非感染性」という
表現は次のように理解せねばならない：本発明による＜
１０4組織培養感染性投与量（ＴＣＩＤ）50の量は、感
染の７日後でさえマクロファージ培養物に対し目に見え
るＣＰＥを与えない。典型的なマクロファージ感染性Ｐ
ＲＲＳＶ野性株は、１ ＴＣＩＤ50以上の感染粒子投与
量にて完全ＣＰＥを与える。
表現は次のように理解せねばならない：本発明による＜
１０4組織培養感染性投与量（ＴＣＩＤ）50の量は、感
染の７日後でさえマクロファージ培養物に対し目に見え
るＣＰＥを与えない。典型的なマクロファージ感染性Ｐ
ＲＲＳＶ野性株は、１ ＴＣＩＤ50以上の感染粒子投与
量にて完全ＣＰＥを与える。
【００１６】ヨーロッパ血清型のウィルスは、ヨーロッ
パＰＲＲＳウィルスＬＶ［インスチチュート・パッスー
ルにＩ−１１０２として寄託されたＣＤＩ−ＮＬ−２．
９１］に対する抗血清のパネルによる免疫ペルオキシダ
ーゼ モノレイヤー・アッセイにて、アメリカＰＲＲＳ
ウィルスＳＩＲＳＶ（ＡＴＣＣ ＶＲ−２３３２）に対
する抗血清のパネルとの反応と比較し、より高い血清タ
イターを示すことを特徴とする。
パＰＲＲＳウィルスＬＶ［インスチチュート・パッスー
ルにＩ−１１０２として寄託されたＣＤＩ−ＮＬ−２．
９１］に対する抗血清のパネルによる免疫ペルオキシダ
ーゼ モノレイヤー・アッセイにて、アメリカＰＲＲＳ
ウィルスＳＩＲＳＶ（ＡＴＣＣ ＶＲ−２３３２）に対
する抗血清のパネルとの反応と比較し、より高い血清タ
イターを示すことを特徴とする。
【００１７】本発明の他の特徴は、本発明による生弱毒
化ＰＲＲＳ株の製造方法を提供することである。現在、
全てのヨーロッパＰＲＲＳＶ株は感染動物のマクロファ
ージから得られ、次いで可能ならばＭＡ １０４細胞も
しくはそのクローンに増殖につき保持される。本発明に
よる方法は、非−ＭＡ １０４細胞に対するＭＡ １０
４−増殖ＰＲＲＳウィルスの適応に関する。これら非−
ＭＡ １０４細胞は、たとえば限定された寿命期間を有
する細胞または確立された不滅細胞ラインとすることが
できる。一般に、非−ＭＡ １０４細胞は哺乳動物細胞
である。哺乳動物非−ＭＡ １０４細胞はたとえばＢＨ
Ｋ細胞ライン、ＣＲＦＫ細胞ラインおよびマジン・ダル
ビー・ボビン腎臓細胞ラインのような汎用目的の細胞ラ
インまたは、たとえばブタ睾丸細胞もしくはブタ腎臓細
胞のようなブタ細胞であり、或いはこれらはたとえばベ
ロ細胞のような非−ＭＡ １０４霊長類細胞とすること
ができる。天然宿主細胞以外の細胞に対するＰＲＲＳＶ
の適応は、次のように行いうる標準的方法からなってい
る：特定ＰＲＲＳウィルス分離物を、ブタ細胞またはウ
ィルスが増殖しうる他の非ブタ起源の感受性細胞（たと
えばＭＡ １０４細胞）を含有する培地で増殖させる。
増殖の後、ＰＲＲＳＶを、細胞培養液および／または細
胞を集めた後に細胞培養液および／または細胞を適応用
の他の細胞型で継代（ｐａｓｓａｇｅ）させて回収す
る。最初に１種の非−ＭＡ １０４細胞ラインに適応さ
せた株は、さらに弱毒化すべく他の非−ＭＡ １０４細
胞ラインに適応させることができる。所望ならば、この
適応過程をさらに他の非−ＭＡ１０４細胞で反復するこ
ともできる。種々異なる温度での増殖に対する適応は弱
毒化過程の１部とすることができる。非−ＭＡ １０４
細胞で継代させた後、非−マクロファージ感染特性が小
継代数の後に得られる。５継代数、一般にマスターシー
ドウィルスを得るのに必要な継代数にて、しばしば本発
明による非−マクロファージ−感染性ウィルスを得るの
に充分である。
化ＰＲＲＳ株の製造方法を提供することである。現在、
全てのヨーロッパＰＲＲＳＶ株は感染動物のマクロファ
ージから得られ、次いで可能ならばＭＡ １０４細胞も
しくはそのクローンに増殖につき保持される。本発明に
よる方法は、非−ＭＡ １０４細胞に対するＭＡ １０
４−増殖ＰＲＲＳウィルスの適応に関する。これら非−
ＭＡ １０４細胞は、たとえば限定された寿命期間を有
する細胞または確立された不滅細胞ラインとすることが
できる。一般に、非−ＭＡ １０４細胞は哺乳動物細胞
である。哺乳動物非−ＭＡ １０４細胞はたとえばＢＨ
Ｋ細胞ライン、ＣＲＦＫ細胞ラインおよびマジン・ダル
ビー・ボビン腎臓細胞ラインのような汎用目的の細胞ラ
インまたは、たとえばブタ睾丸細胞もしくはブタ腎臓細
胞のようなブタ細胞であり、或いはこれらはたとえばベ
ロ細胞のような非−ＭＡ １０４霊長類細胞とすること
ができる。天然宿主細胞以外の細胞に対するＰＲＲＳＶ
の適応は、次のように行いうる標準的方法からなってい
る：特定ＰＲＲＳウィルス分離物を、ブタ細胞またはウ
ィルスが増殖しうる他の非ブタ起源の感受性細胞（たと
えばＭＡ １０４細胞）を含有する培地で増殖させる。
増殖の後、ＰＲＲＳＶを、細胞培養液および／または細
胞を集めた後に細胞培養液および／または細胞を適応用
の他の細胞型で継代（ｐａｓｓａｇｅ）させて回収す
る。最初に１種の非−ＭＡ １０４細胞ラインに適応さ
せた株は、さらに弱毒化すべく他の非−ＭＡ １０４細
胞ラインに適応させることができる。所望ならば、この
適応過程をさらに他の非−ＭＡ１０４細胞で反復するこ
ともできる。種々異なる温度での増殖に対する適応は弱
毒化過程の１部とすることができる。非−ＭＡ １０４
細胞で継代させた後、非−マクロファージ感染特性が小
継代数の後に得られる。５継代数、一般にマスターシー
ドウィルスを得るのに必要な継代数にて、しばしば本発
明による非−マクロファージ−感染性ウィルスを得るの
に充分である。
【００１８】
【発明の実施の形態】好適実施形態において、この方法
は適応用の細胞として非−ＭＡ １０４霊長類細胞を使
用する。非−ＭＡ １０４霊長類細胞への適応の後、さ
らに他の適応を他の任意の適する細胞で行いうることも
明かである。
は適応用の細胞として非−ＭＡ １０４霊長類細胞を使
用する。非−ＭＡ １０４霊長類細胞への適応の後、さ
らに他の適応を他の任意の適する細胞で行いうることも
明かである。
【００１９】より好適な実施形態において、この方法は
適応用の非−ＭＡ １０４霊長類細胞としてベロ細胞を
使用する。
適応用の非−ＭＡ １０４霊長類細胞としてベロ細胞を
使用する。
【００２０】このようにして得られた生弱毒株の非−マ
クロファージ感染特性の検査はマクロファージにおける
得られたウィルス株のインビトロでの増殖が存在しない
ことを試験して容易に行うことができる。
クロファージ感染特性の検査はマクロファージにおける
得られたウィルス株のインビトロでの増殖が存在しない
ことを試験して容易に行うことができる。
【００２１】マクロファージ培養物の作成およびマクロ
ファージ感染性ウィルスの増殖の両者に関する標準的技
術は当業界にて公知であり、たとえばＷＯ ９３／０７
８９８号に記載されている。標準条件下で分離および増
殖されたマクロファージに基づく簡単な試験システム
は、本発明による生弱毒化ＰＲＲＳ株をまだマクロファ
ージ感染特性を保持する他の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス
から区別する試験システムと同様である。１つの可能な
試験システムを実施例２に説明する。
ファージ感染性ウィルスの増殖の両者に関する標準的技
術は当業界にて公知であり、たとえばＷＯ ９３／０７
８９８号に記載されている。標準条件下で分離および増
殖されたマクロファージに基づく簡単な試験システム
は、本発明による生弱毒化ＰＲＲＳ株をまだマクロファ
ージ感染特性を保持する他の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス
から区別する試験システムと同様である。１つの可能な
試験システムを実施例２に説明する。
【００２２】本発明によるＰＲＲＳＶ株の弱毒特性は、
２種の株：Ｉ−１１４０（すなわちオランダ国にて１９
９１年に分離された病原性ＰＲＲＳＶ株）およびＩ−１
３８７（すなわち低病原性ＰＲＲＳＶ野性株）［両株は
コレクション・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・
ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチ
ュート・パッスール（パリ、フランス国）にその各番号
で寄託］から出発して例示することができる。これら親
株はマクロファージに対し感染性である。これら親株の
うち、本発明による弱毒化された非−マクロファージ−
感染性株を実施例１に記載するように作成した。マクロ
ファージ−感染特性を実施例２に記載したように判定し
た。
２種の株：Ｉ−１１４０（すなわちオランダ国にて１９
９１年に分離された病原性ＰＲＲＳＶ株）およびＩ−１
３８７（すなわち低病原性ＰＲＲＳＶ野性株）［両株は
コレクション・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・
ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチ
ュート・パッスール（パリ、フランス国）にその各番号
で寄託］から出発して例示することができる。これら親
株はマクロファージに対し感染性である。これら親株の
うち、本発明による弱毒化された非−マクロファージ−
感染性株を実施例１に記載するように作成した。マクロ
ファージ−感染特性を実施例２に記載したように判定し
た。
【００２３】次の株を試験用に入手した： １． Ｉ−１１４０ ＭＡ １０４細胞にて第８８継代 ２． Ｉ−１１４０ ベロ細胞にて第６１継代 ３． Ｉ−１３８７ ＭＡ １０４細胞にて第２０継代 ２． Ｉ−１３８７ ベロ細胞にて第４９継代。
【００２４】下表は、これら株の感染特性を検査した試
験結果を示す。
験結果を示す。
【００２５】
【表１】
【００２６】さらに本発明による弱毒化につき親株とし
て極めて適するものは、他面（すなわちマクロファージ
感染性に関連しない）にて既に弱毒化されたＰＲＲＳウ
ィルスである。この種のウィルスは、上記ヨーロッパ特
許出願ＥＰ ０，６７６，４６７号に記載されている。
これらウィルス株はヨーロッパ血清型に属し、これらは
コレクション・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・
ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチ
ュート・パッスール（パリ、フランス国）にＮｏ．Ｉ−
１４０１として寄託されたハイブリドーマＡ２７により
生産されるモノクローナル抗体Ａ２７に対し反応性であ
るが、インスチチュート・パッスール（パリ、フランス
国）にＮｏ．Ｉ−１４０２として寄託されたハイブリド
ーマＡ３５により生産されるモノクローナル抗体Ａ３５
に対しては反応性でない。この種のウィルスが本発明の
方法によりマクロファージに対し非感染性にされれば、
これらは一層安全となる。何故なら、その弱毒特性は一
方が非−マクロファージ−感染特性である２つもしくは
それ以上の異なる面に依存するからである。したがって
本発明の一層好適な実施形態において、本発明による生
弱毒化ＰＲＲＳＶはコレクション・ナショナーレ・デ・
カルチュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）
・オブ・インスチチュート・パッスール（パリ、フラン
ス国）にＮｏ．Ｉ−１４０１として寄託されたハイブリ
ドーマＡ２７により生産されるモノクローナル抗体Ａ２
７に対し反応性であるが、インスチチュート・パッスー
ル（パリ、フランス国）にＮｏ．Ｉ−１４０２として寄
託されたハイブリドーマＡ３５により生産されるモノク
ローナル抗体Ａ３５に対しては反応性でないという追加
特性を有する。
て極めて適するものは、他面（すなわちマクロファージ
感染性に関連しない）にて既に弱毒化されたＰＲＲＳウ
ィルスである。この種のウィルスは、上記ヨーロッパ特
許出願ＥＰ ０，６７６，４６７号に記載されている。
これらウィルス株はヨーロッパ血清型に属し、これらは
コレクション・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・
ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチ
ュート・パッスール（パリ、フランス国）にＮｏ．Ｉ−
１４０１として寄託されたハイブリドーマＡ２７により
生産されるモノクローナル抗体Ａ２７に対し反応性であ
るが、インスチチュート・パッスール（パリ、フランス
国）にＮｏ．Ｉ−１４０２として寄託されたハイブリド
ーマＡ３５により生産されるモノクローナル抗体Ａ３５
に対しては反応性でない。この種のウィルスが本発明の
方法によりマクロファージに対し非感染性にされれば、
これらは一層安全となる。何故なら、その弱毒特性は一
方が非−マクロファージ−感染特性である２つもしくは
それ以上の異なる面に依存するからである。したがって
本発明の一層好適な実施形態において、本発明による生
弱毒化ＰＲＲＳＶはコレクション・ナショナーレ・デ・
カルチュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）
・オブ・インスチチュート・パッスール（パリ、フラン
ス国）にＮｏ．Ｉ−１４０１として寄託されたハイブリ
ドーマＡ２７により生産されるモノクローナル抗体Ａ２
７に対し反応性であるが、インスチチュート・パッスー
ル（パリ、フランス国）にＮｏ．Ｉ−１４０２として寄
託されたハイブリドーマＡ３５により生産されるモノク
ローナル抗体Ａ３５に対しては反応性でないという追加
特性を有する。
【００２７】Ｉ−１３８７株から得られた本発明による
非−マクロファージ−感染性株はベロ細胞に対し継代し
た後に高度に弱毒化されるので、この生弱毒株は動物に
投与する際に、極めて安全である（実施例２以降参
照）。したがって他の一層好適な本発明の実施形態にお
いて、生弱毒化ＰＲＲＳＶはコレクション・ナショナー
レ・デ・カルチュール・デ・ミクロオルガニスメス・オ
ブ・インスチチュート・パッスール、２５ルー・ド・ド
クツール・ルー、７５７２４パリ・セデックス１５に受
託番号Ｉ−１７５８としてアクゾ・ノーベルＮＶ社によ
り寄託されたウィルス株である。この株には「ＰＲＲＳ
Ｖ株ＤＶ」という同定記号が与えられ、したがって本明
細書では株ＤＶとも称する。
非−マクロファージ−感染性株はベロ細胞に対し継代し
た後に高度に弱毒化されるので、この生弱毒株は動物に
投与する際に、極めて安全である（実施例２以降参
照）。したがって他の一層好適な本発明の実施形態にお
いて、生弱毒化ＰＲＲＳＶはコレクション・ナショナー
レ・デ・カルチュール・デ・ミクロオルガニスメス・オ
ブ・インスチチュート・パッスール、２５ルー・ド・ド
クツール・ルー、７５７２４パリ・セデックス１５に受
託番号Ｉ−１７５８としてアクゾ・ノーベルＮＶ社によ
り寄託されたウィルス株である。この株には「ＰＲＲＳ
Ｖ株ＤＶ」という同定記号が与えられ、したがって本明
細書では株ＤＶとも称する。
【００２８】本発明による生弱毒化ウィルスは、マクロ
ファージに感染する能力を持たない結果、次の理由でワ
クチンの極めて適する基礎となる：これら株はマクロフ
ァージに対し感染性でない。マクロファージは野性型Ｐ
ＲＲＳＶの主たる標的細胞および免疫系の重要細胞の１
種である。しかしながら、これらは免疫系を始動させる
能力をまだ保持している。したがって、ヨーロッパ特許
出願ＥＰ ０，６７６，４６７号に記載されたヨーロッ
パ血清型の公知の生弱毒株に基づくワクチンとは異な
り、本発明による生弱毒化ウィルスからなるワクチンは
免疫系を同時に阻害することなく免疫系を始動させる。
ファージに感染する能力を持たない結果、次の理由でワ
クチンの極めて適する基礎となる：これら株はマクロフ
ァージに対し感染性でない。マクロファージは野性型Ｐ
ＲＲＳＶの主たる標的細胞および免疫系の重要細胞の１
種である。しかしながら、これらは免疫系を始動させる
能力をまだ保持している。したがって、ヨーロッパ特許
出願ＥＰ ０，６７６，４６７号に記載されたヨーロッ
パ血清型の公知の生弱毒株に基づくワクチンとは異な
り、本発明による生弱毒化ウィルスからなるワクチンは
免疫系を同時に阻害することなく免疫系を始動させる。
【００２９】したがって本発明のウィルス株に基づくワ
クチンは、公知の弱毒株に基づくワクチンとは異なる種
類の安全性を与える。
クチンは、公知の弱毒株に基づくワクチンとは異なる種
類の安全性を与える。
【００３０】したがって、さらに他の実施形態において
本発明は、ＰＲＲＳＶ−感染に対しブタを保護するため
のワクチンを提供し、これらワクチンは上記生非−マク
ロファージ−感染性弱毒化ＰＲＲＳ株に基づくものであ
る。
本発明は、ＰＲＲＳＶ−感染に対しブタを保護するため
のワクチンを提供し、これらワクチンは上記生非−マク
ロファージ−感染性弱毒化ＰＲＲＳ株に基づくものであ
る。
【００３１】非−マクロファージ−感染性ウィルスの安
全性により、これらウィルスに基づくワクチンは典型的
には１０3〜１０10個の生ウィルス粒子を含有しうる。
全性により、これらウィルスに基づくワクチンは典型的
には１０3〜１０10個の生ウィルス粒子を含有しうる。
【００３２】本発明によるワクチンは医薬上許容しうる
キャリヤを含みうる。１種の可能なキャリヤは生理学的
食塩溶液である。他の医薬上許容しうるキャリヤは、た
とえば細胞増殖を維持すべく使用される組織培養液であ
り、そこでウィルスが感染細胞から遊離される。
キャリヤを含みうる。１種の可能なキャリヤは生理学的
食塩溶液である。他の医薬上許容しうるキャリヤは、た
とえば細胞増殖を維持すべく使用される組織培養液であ
り、そこでウィルスが感染細胞から遊離される。
【００３３】アジュバントおよび必要に応じ１種もしく
はそれ以上の乳化剤（たとえばツイーン（登録商標）お
よびスパン（登録商標））も本発明による生弱毒化ワク
チンに混入することができる。適するアジュバントは、
たとえばビタミン−Ｅ酢酸塩溶解物、水酸化アルミニウ
ム、燐酸アルミニウムもしくはアルミニウム酸化物、
（鉱物）油エマルジョン（たとえばバイオール（登録商
標）およびマルコール５２（登録商標））、並びにサポ
ニンである。イスコムにおける抗原の混入も可能なアジ
ュバントの形成法（adjuvation）である。
はそれ以上の乳化剤（たとえばツイーン（登録商標）お
よびスパン（登録商標））も本発明による生弱毒化ワク
チンに混入することができる。適するアジュバントは、
たとえばビタミン−Ｅ酢酸塩溶解物、水酸化アルミニウ
ム、燐酸アルミニウムもしくはアルミニウム酸化物、
（鉱物）油エマルジョン（たとえばバイオール（登録商
標）およびマルコール５２（登録商標））、並びにサポ
ニンである。イスコムにおける抗原の混入も可能なアジ
ュバントの形成法（adjuvation）である。
【００３４】本発明によるワクチンは好ましくは凍結乾
燥型で製造される。特に生ウィルスの乾燥組成物を凍結
乾燥により作成する場合は、安定化剤を生弱毒化ウィル
スに添加するのが有利である。適する安定化剤はたとえ
ばＳＰＧＡ［ボバルニク等、ジャーナル・バクテリオロ
ジー、第５９巻、第５０９頁（１９５０）］、炭水化物
（たとえばソルビトール、マニトール、トレハロース、
澱粉、蔗糖、デキストランもしくはグルコーズ）、蛋白
質（たとえばアルブミンもしくはカゼイン）、またはそ
の分解生成物、並びに緩衝剤（たとえばアルカリ金属燐
酸塩）である。所望ならば、上記アジュバント活性を有
する１種もしくはそれ以上の化合物も添加することがで
きる。
燥型で製造される。特に生ウィルスの乾燥組成物を凍結
乾燥により作成する場合は、安定化剤を生弱毒化ウィル
スに添加するのが有利である。適する安定化剤はたとえ
ばＳＰＧＡ［ボバルニク等、ジャーナル・バクテリオロ
ジー、第５９巻、第５０９頁（１９５０）］、炭水化物
（たとえばソルビトール、マニトール、トレハロース、
澱粉、蔗糖、デキストランもしくはグルコーズ）、蛋白
質（たとえばアルブミンもしくはカゼイン）、またはそ
の分解生成物、並びに緩衝剤（たとえばアルカリ金属燐
酸塩）である。所望ならば、上記アジュバント活性を有
する１種もしくはそれ以上の化合物も添加することがで
きる。
【００３５】本発明によるワクチンは筋肉内もしくは皮
下注射または鼻腔内、気管内、経口、皮膚（ｃｕｔａｎ
ｅ）、経皮／皮膚内又は皮膚内の各投与により投与する
ことができる。極めて便利な投与ルートは皮膚内もしく
は筋肉内投与である。したがって、好適具体例において
本発明によるワクチンは皮膚内もしくは筋肉内投与に適
するキャリヤを含む。生理学的食塩溶液が皮膚内もしく
は筋肉内投与のための簡単かつ適するキャリヤである。
下注射または鼻腔内、気管内、経口、皮膚（ｃｕｔａｎ
ｅ）、経皮／皮膚内又は皮膚内の各投与により投与する
ことができる。極めて便利な投与ルートは皮膚内もしく
は筋肉内投与である。したがって、好適具体例において
本発明によるワクチンは皮膚内もしくは筋肉内投与に適
するキャリヤを含む。生理学的食塩溶液が皮膚内もしく
は筋肉内投与のための簡単かつ適するキャリヤである。
【００３６】本発明によるワクチンは１週令、３週令、
６週令もしくは１０週令の雌ブタ、または交配前および
／または分娩の６週間前までの雌ブタ（ブースターワク
チン接種）、或いはそれぞれ半年の雄ブタ（ブースタ
ー）のワクチン接種履歴に応じてブタに投与することが
できる。
６週令もしくは１０週令の雌ブタ、または交配前および
／または分娩の６週間前までの雌ブタ（ブースターワク
チン接種）、或いはそれぞれ半年の雄ブタ（ブースタ
ー）のワクチン接種履歴に応じてブタに投与することが
できる。
【００３７】好適実施形態において本発明のワクチンは
生弱毒化ＰＲＲＳウィルスの他に、他の無関係（すなわ
ち非−ＰＲＲＳＶ−）の弱毒化もしくは失活病原体また
は他の病原体からの抗原性物質をも含む。この種の病原
体はたとえば細菌もしくは寄生虫としうるが、ウィルス
起源であってもよい。一般に、無関係の病原体またはそ
の抗原物質はブタ病原体である。
生弱毒化ＰＲＲＳウィルスの他に、他の無関係（すなわ
ち非−ＰＲＲＳＶ−）の弱毒化もしくは失活病原体また
は他の病原体からの抗原性物質をも含む。この種の病原
体はたとえば細菌もしくは寄生虫としうるが、ウィルス
起源であってもよい。一般に、無関係の病原体またはそ
の抗原物質はブタ病原体である。
【００３８】この種の追加の弱毒化もしくは失活病原体
または他の病原体からの抗原性物質をも含む本発明によ
るワクチンは、数種の感染に対する保護を同時に誘起す
るという利点を有する。抗原性物質は、免疫反応を誘発
しうる物質であると理解される。抗原性物質の例は蛋白
質、多糖類およびリポ多糖類である。
または他の病原体からの抗原性物質をも含む本発明によ
るワクチンは、数種の感染に対する保護を同時に誘起す
るという利点を有する。抗原性物質は、免疫反応を誘発
しうる物質であると理解される。抗原性物質の例は蛋白
質、多糖類およびリポ多糖類である。
【００３９】より好適な実施形態において病原体はシュ
ードラビエスウィルス、ブタインフルエンザウィルス、
ブタパルボウィルス、伝染性胃腸炎ウィルス、ロタウィ
ルス、エッシェリチア・コリ、エリシペロ・ルシオパチ
エ、ボルデテラ・ブロンチセプチカ、サルモネラ・コレ
ラスイス、ヘモフィルス・パラスイス、パスツレラ・ム
ルトシダ、ストレプトコッカス・スイス、ミコプラスマ
・ヒオニュモニアエおよびアクチノバチルス・プルーロ
ニウモニアエの群から選択される。
ードラビエスウィルス、ブタインフルエンザウィルス、
ブタパルボウィルス、伝染性胃腸炎ウィルス、ロタウィ
ルス、エッシェリチア・コリ、エリシペロ・ルシオパチ
エ、ボルデテラ・ブロンチセプチカ、サルモネラ・コレ
ラスイス、ヘモフィルス・パラスイス、パスツレラ・ム
ルトシダ、ストレプトコッカス・スイス、ミコプラスマ
・ヒオニュモニアエおよびアクチノバチルス・プルーロ
ニウモニアエの群から選択される。
【００４０】本発明によるワクチンは、本発明によれば
ヨーロッパ血清型の任意の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス分
離物から得ることができる。本発明による方法を用いて
開発された寄託ＰＲＲＳＶ株ＤＶは、極めて適するワク
チン株になる全ての特性を有する。したがって好適実施
形態において、ワクチンはインスチチュート・パッスー
ルに受託番号Ｉ−１７５８として寄託されたＰＲＲＳＶ
株ＤＶから得られる。
ヨーロッパ血清型の任意の生弱毒化ＰＲＲＳウィルス分
離物から得ることができる。本発明による方法を用いて
開発された寄託ＰＲＲＳＶ株ＤＶは、極めて適するワク
チン株になる全ての特性を有する。したがって好適実施
形態において、ワクチンはインスチチュート・パッスー
ルに受託番号Ｉ−１７５８として寄託されたＰＲＲＳＶ
株ＤＶから得られる。
【００４１】さらに他の実施形態において、本発明はＰ
ＲＲＳに対処するための生弱毒化ワクチンの製造方法を
も提供する。本発明による生弱毒化ＰＲＲＳＶに基づく
ワクチンを得る便利な方法は、適量の本発明によるウィ
ルスを医薬上許容しうるキャリヤと混合することからな
っている。
ＲＲＳに対処するための生弱毒化ワクチンの製造方法を
も提供する。本発明による生弱毒化ＰＲＲＳＶに基づく
ワクチンを得る便利な方法は、適量の本発明によるウィ
ルスを医薬上許容しうるキャリヤと混合することからな
っている。
【００４２】さらに、たとえば上記したアジュバント、
乳化剤および安定化剤のような他の物質を添加してワク
チンの性能および安定性を向上させることもできる。
乳化剤および安定化剤のような他の物質を添加してワク
チンの性能および安定性を向上させることもできる。
【００４３】実施例１：適応実験 ベロ細胞に対するＰＲＲＳＶ分離物Ｉ−１１４０の適
応：１９９１年にオランダ国で分離された病原性ＰＲＲ
ＳＶ株Ｉ−１１４０［上記した通りであって、コレクシ
ョン・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・ミクロオ
ルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチュート・
パッスール（パリ、フランス国）にこの番号にて寄託］
を先ず最初にブタ肺マクロファージで培養し、次いで次
のようにＭＡ １０４細胞にて増殖させた。
応：１９９１年にオランダ国で分離された病原性ＰＲＲ
ＳＶ株Ｉ−１１４０［上記した通りであって、コレクシ
ョン・ナショナーレ・デ・カルチュール・デ・ミクロオ
ルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ・インスチチュート・
パッスール（パリ、フランス国）にこの番号にて寄託］
を先ず最初にブタ肺マクロファージで培養し、次いで次
のようにＭＡ １０４細胞にて増殖させた。
【００４４】ＭＡ １０４細胞の半密集（confluence）
モノレイヤー（７０ｃｍ2）に、１のＭＯＩを有する８
０％密集にてＰＲＲＳＶ株を接種した。先ず最初に組織
培養培地を取出して接種を行い、次いで１ｍＬのＰＲＲ
ＳＶウィルスを添加し、モノレイヤー上に少なくとも２
時間にわたり３７℃にて放置した。この時間の後、新た
な組織培養培地を添加し、細胞をさらに湿潤ＣＯ2（５
％ＣＯ2）中で３７℃にて培養した。ＣＰＥが観察され
た際、上澄液を集めて細胞を３回にわたり凍結および解
凍させ、２０００ｒｐｍにて１０分間にわたり遠心分離
して上澄液を集めた。次いで両上澄液をプールし、これ
を使用して同じ細胞の新たなモノレイヤーに接種した。
次いで、この過程をウィルスが細胞ラインに充分適応す
ると共にマクロファージ培養物に匹敵するタイターがこ
の細胞ラインにて得られるまで反復した。この過程に際
し、ウィルスの同定を免疫蛍光分析（ＩＦＡ）によりＰ
ＲＲＳＶ特異性ポリクローナル血清およびＰＲＲＳＶ特
異性モノクローナル抗体の両者を用いて決定した。
モノレイヤー（７０ｃｍ2）に、１のＭＯＩを有する８
０％密集にてＰＲＲＳＶ株を接種した。先ず最初に組織
培養培地を取出して接種を行い、次いで１ｍＬのＰＲＲ
ＳＶウィルスを添加し、モノレイヤー上に少なくとも２
時間にわたり３７℃にて放置した。この時間の後、新た
な組織培養培地を添加し、細胞をさらに湿潤ＣＯ2（５
％ＣＯ2）中で３７℃にて培養した。ＣＰＥが観察され
た際、上澄液を集めて細胞を３回にわたり凍結および解
凍させ、２０００ｒｐｍにて１０分間にわたり遠心分離
して上澄液を集めた。次いで両上澄液をプールし、これ
を使用して同じ細胞の新たなモノレイヤーに接種した。
次いで、この過程をウィルスが細胞ラインに充分適応す
ると共にマクロファージ培養物に匹敵するタイターがこ
の細胞ラインにて得られるまで反復した。この過程に際
し、ウィルスの同定を免疫蛍光分析（ＩＦＡ）によりＰ
ＲＲＳＶ特異性ポリクローナル血清およびＰＲＲＳＶ特
異性モノクローナル抗体の両者を用いて決定した。
【００４５】ＭＡ １０４細胞におけるＩ−１１４０の
第５継代を用いて次の方法によりＣＶ１（アフリカ ミ
ドリザル腎臓）細胞に感染させた：ＣＶ１細胞を標準細
胞増殖条件下で増殖させた。
第５継代を用いて次の方法によりＣＶ１（アフリカ ミ
ドリザル腎臓）細胞に感染させた：ＣＶ１細胞を標準細
胞増殖条件下で増殖させた。
【００４６】７０〜８０％密集にて培地をＣＶ１モノレ
イヤーから取出した。ＭＡ １０４細胞の感染モノレイ
ヤーから最大ＣＰＥにて得られた上澄液を先ず最初に
０．２μｍフィルタで濾過し、次いでＣＶ１モノレイヤ
ーに載せた。３７℃および５％ＣＯ2で１日間培養した
後、培地を新たな組織培養培地で置換した。細胞をさら
に３７℃および５％ＣＯ2にて７日間にわたり培養し
た。この期間に際し毎日顕微鏡検査した。７日間の後、
細胞を３回凍結および解凍させ、上澄液を遠心分離によ
り回収すると共に０．２μｍフィルタで濾過した。濾過
された材料を次いで上記したように新たなＣＶ１細胞の
モノレイヤーを培養すべく用いた。この過程を３回行
い、第３回の後、回収されかつ濾過された上澄液をＭＡ
１０４細胞での上澄液の培養によりＰＲＲＳＶの存在
につき検査した。ＰＲＲＳＶの存在は、ＰＲＲＳＶ特異
性モノクローナル抗体Ｉ−１４０１を用いてＰＲＲＳＶ
特異性蛍光の存在により示した［モノクローナル抗体Ｉ
−１４０１はコレクション・ナショナーレ・デ・カルチ
ュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ
・インスチチュート・パッスール（パリ、フランス国）
にこの番号で寄託した］。
イヤーから取出した。ＭＡ １０４細胞の感染モノレイ
ヤーから最大ＣＰＥにて得られた上澄液を先ず最初に
０．２μｍフィルタで濾過し、次いでＣＶ１モノレイヤ
ーに載せた。３７℃および５％ＣＯ2で１日間培養した
後、培地を新たな組織培養培地で置換した。細胞をさら
に３７℃および５％ＣＯ2にて７日間にわたり培養し
た。この期間に際し毎日顕微鏡検査した。７日間の後、
細胞を３回凍結および解凍させ、上澄液を遠心分離によ
り回収すると共に０．２μｍフィルタで濾過した。濾過
された材料を次いで上記したように新たなＣＶ１細胞の
モノレイヤーを培養すべく用いた。この過程を３回行
い、第３回の後、回収されかつ濾過された上澄液をＭＡ
１０４細胞での上澄液の培養によりＰＲＲＳＶの存在
につき検査した。ＰＲＲＳＶの存在は、ＰＲＲＳＶ特異
性モノクローナル抗体Ｉ−１４０１を用いてＰＲＲＳＶ
特異性蛍光の存在により示した［モノクローナル抗体Ｉ
−１４０１はコレクション・ナショナーレ・デ・カルチ
ュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オブ
・インスチチュート・パッスール（パリ、フランス国）
にこの番号で寄託した］。
【００４７】６．６ ＴＣＩＤ50／ｍＬのＰＲＲＳＶタ
イターがＣＶ１細胞の上澄液に見られた。ＣＶ１細胞に
おけるＩ−１１４０の第１３継代を上記方法によりベロ
細胞で行った。今回は、３回の盲検継代の後にＰＲＲＳ
Ｖがベロ細胞の上澄液に検出された。このウィルスをさ
らにベロ細胞における第６１継代を行ってさらに適応さ
せた。
イターがＣＶ１細胞の上澄液に見られた。ＣＶ１細胞に
おけるＩ−１１４０の第１３継代を上記方法によりベロ
細胞で行った。今回は、３回の盲検継代の後にＰＲＲＳ
Ｖがベロ細胞の上澄液に検出された。このウィルスをさ
らにベロ細胞における第６１継代を行ってさらに適応さ
せた。
【００４８】比較のため、ＭＡ １０４細胞における親
株Ｉ−１１４０の第８８継代（したがって非−ＭＡ １
０４細胞に適応していない）を表１に対照として使用
し、ここで各種のウィルス株のマクロファージ感染性を
比較した。
株Ｉ−１１４０の第８８継代（したがって非−ＭＡ １
０４細胞に適応していない）を表１に対照として使用
し、ここで各種のウィルス株のマクロファージ感染性を
比較した。
【００４９】ベロ細胞に対するＰＲＲＳＶ分離物Ｉ−１
３８７の適応 分離物Ｉ−１３８７を先ず最初にブタ肺マクロファージ
で培養した。次いでＩ−１３８７の第５継代を上記方法
によりＭＡ １０４細胞に載せた。
３８７の適応 分離物Ｉ−１３８７を先ず最初にブタ肺マクロファージ
で培養した。次いでＩ−１３８７の第５継代を上記方法
によりＭＡ １０４細胞に載せた。
【００５０】ＭＡ １０４細胞におけるＩ−１３８７の
第３８継代を用いて、上記方法によりベロ細胞に感染さ
せた。
第３８継代を用いて、上記方法によりベロ細胞に感染さ
せた。
【００５１】ＰＲＲＳＶがベロ細胞の上澄液に検出され
た。この分離物をさらにこれら細胞での第４９継代を行
ってベロ細胞に適応させた。
た。この分離物をさらにこれら細胞での第４９継代を行
ってベロ細胞に適応させた。
【００５２】このウィルス株を安全性実験およびワクチ
ン接種実験に用い、これを実施例２および３で説明す
る。
ン接種実験に用い、これを実施例２および３で説明す
る。
【００５３】比較のため、ＭＡ １０４細胞における親
株Ｉ−１３８７の第２０継代（したがって非−ＭＡ １
０４細胞に対し適応していない）を表１に対照として用
い、ここで各種の株のマクロファージ感染性を比較し
た。
株Ｉ−１３８７の第２０継代（したがって非−ＭＡ １
０４細胞に対し適応していない）を表１に対照として用
い、ここで各種の株のマクロファージ感染性を比較し
た。
【００５４】実施例２：マクロファージ感染性試験シス
テム この試験において、表１に挙げた４種のウィルス株（上
記）を次のようにマクロファージ感染性につき検査し
た：次のようにブタ肺胞マクロファージを得た：ＳＰＦ
ブタを殺し、その肺を剔出して３０００ｍＬのＰＢＳで
洗浄した。細胞を遠心分離により集め、ＭＥＭ−培地
（ギブコ）＋１０％ＦＣＳに０．３×１０6細胞／ｍＬ
の濃度まで再懸濁させた。最後に細胞を２２５μＬ細胞
懸濁物／ウェルにて９６ウェル微小培養プレートにシー
ディングすると共にプレートをＣＯ2培養器にて４日間
貯蔵した。
テム この試験において、表１に挙げた４種のウィルス株（上
記）を次のようにマクロファージ感染性につき検査し
た：次のようにブタ肺胞マクロファージを得た：ＳＰＦ
ブタを殺し、その肺を剔出して３０００ｍＬのＰＢＳで
洗浄した。細胞を遠心分離により集め、ＭＥＭ−培地
（ギブコ）＋１０％ＦＣＳに０．３×１０6細胞／ｍＬ
の濃度まで再懸濁させた。最後に細胞を２２５μＬ細胞
懸濁物／ウェルにて９６ウェル微小培養プレートにシー
ディングすると共にプレートをＣＯ2培養器にて４日間
貯蔵した。
【００５５】滴定の直前に、ミクロタイタープレートを
空け、新たな培地を再充填した。試験すべきウィルスの
１０4ＭＡ １０４−感染性ウィルス粒子を含む２５μ
Ｌの試料をウェルに施し、１０倍シリーズ希釈物を作成
した。最後に、プレートをＣＯ2培養器にて７日間培養
した。
空け、新たな培地を再充填した。試験すべきウィルスの
１０4ＭＡ １０４−感染性ウィルス粒子を含む２５μ
Ｌの試料をウェルに施し、１０倍シリーズ希釈物を作成
した。最後に、プレートをＣＯ2培養器にて７日間培養
した。
【００５６】ＣＰＥにより測定されるマクロファージに
おける増殖は非−ＭＡ １０４−細胞に適応した株につ
き検出されなかったのに対し、非適応の対照株は予想通
りマクロファージに対し感染性であった。その結果を表
１に示す（上記参照）。
おける増殖は非−ＭＡ １０４−細胞に適応した株につ
き検出されなかったのに対し、非適応の対照株は予想通
りマクロファージに対し感染性であった。その結果を表
１に示す（上記参照）。
【００５７】実施例３：弱毒化試験 これら細胞に対するウィルスの適応が毒力の積極的弱毒
化を誘発したかどうかを試験するため、全てのウィルス
株を次の方法により妊娠雌ブタにて試験した：ＰＲＲＳ
ウィルスおよびＰＲＲＳＶ特異性抗体に対し陰性である
雌ブタに上記ＰＲＲＳＶ株の１種を妊娠の約９０日にて
感染させた。上記株の毒力を測定するため、流産した小
ブタおよび１週間以内に死亡した小ブタの頭数を測定し
た。次の結果が得られた：
化を誘発したかどうかを試験するため、全てのウィルス
株を次の方法により妊娠雌ブタにて試験した：ＰＲＲＳ
ウィルスおよびＰＲＲＳＶ特異性抗体に対し陰性である
雌ブタに上記ＰＲＲＳＶ株の１種を妊娠の約９０日にて
感染させた。上記株の毒力を測定するため、流産した小
ブタおよび１週間以内に死亡した小ブタの頭数を測定し
た。次の結果が得られた：
【００５８】
【表２】
【００５９】上記表２から結論しうるように、マクロフ
ァージ感染性を喪失したＰＲＲＳＶ株は好適な弱毒特性
を示す。
ァージ感染性を喪失したＰＲＲＳＶ株は好適な弱毒特性
を示す。
【００６０】Ｉ−１１４０につき、顕著に少ない死亡小
ブタが非−マクロファージ感染株での雌ブタの感染後に
見られた。親Ｉ−１１４０株と対比してベロ細胞に適応
したＩ−１１４０の投与量における３００倍の増加量を
投与したという事実のため、毒力における極めて著しい
減少が確認された。
ブタが非−マクロファージ感染株での雌ブタの感染後に
見られた。親Ｉ−１１４０株と対比してベロ細胞に適応
したＩ−１１４０の投与量における３００倍の増加量を
投与したという事実のため、毒力における極めて著しい
減少が確認された。
【００６１】同様な結果が、Ｉ−１３８７を雌ブタに投
与した実験でも観察される。１０7.5ＴＣＩＤ50の投与
量はまだ顕著な頭数の死亡小ブタをもたらした。しかし
ながら、非−マクロファージ感染株を用いれば毒力にお
ける顕著な低下が観察された。極めて多い投与量（１０
7.5ＴＣＩＤ50の投与量に対し１０倍の増加）で投与し
たが、顕著に低い頭数の小ブタが死亡すると判明した。
与した実験でも観察される。１０7.5ＴＣＩＤ50の投与
量はまだ顕著な頭数の死亡小ブタをもたらした。しかし
ながら、非−マクロファージ感染株を用いれば毒力にお
ける顕著な低下が観察された。極めて多い投与量（１０
7.5ＴＣＩＤ50の投与量に対し１０倍の増加）で投与し
たが、顕著に低い頭数の小ブタが死亡すると判明した。
【００６２】実施例４：安全性実験 （Ｉ）５〜６週令の小ブタにおける株ＤＶの安全性、単
一投与および高投与 ３種の実験は標的動物（すなわち若い小ブタ）のワクチ
ン接種を含んだ。これら実験の設定を表３に要約する。
一投与および高投与 ３種の実験は標的動物（すなわち若い小ブタ）のワクチ
ン接種を含んだ。これら実験の設定を表３に要約する。
【００６３】安全性試験のため、各動物をワクチン接種
に寄与しうる可能な臨床的徴候につきスクリーニングし
た。
に寄与しうる可能な臨床的徴候につきスクリーニングし
た。
【００６４】
【表３】
【００６５】結果：これら実験において、ワクチン接種
の後にはワクチン接種に起因する臨床的徴候は認められ
なかった。
の後にはワクチン接種に起因する臨床的徴候は認められ
なかった。
【００６６】結論：本発明によるウィルス株は標的動
物、すなわち若い小ブタに対し完全に安全である。
物、すなわち若い小ブタに対し完全に安全である。
【００６７】（ＩＩ）妊娠雌ブタに対する安全性 妊娠雌ブタを安全性試験のための最も敏感な動物と見な
す。何故なら、妊娠の約９０日にてＰＲＲＳウィルスで
の感染が高比率の流産およびミイラ化（３０〜１００
％）並びに生存出産小ブタの出産第１週後における高比
率の死亡をもたらすからである。
す。何故なら、妊娠の約９０日にてＰＲＲＳウィルスで
の感染が高比率の流産およびミイラ化（３０〜１００
％）並びに生存出産小ブタの出産第１週後における高比
率の死亡をもたらすからである。
【００６８】この安全性試験にて、各雌ブタには妊娠の
９４日にて筋肉内および皮膚内の両者で注射部位１ケ所
につき１０8.3ＴＣＩＤ50の大投与量を接種した。
９４日にて筋肉内および皮膚内の両者で注射部位１ケ所
につき１０8.3ＴＣＩＤ50の大投与量を接種した。
【００６９】各試験は次の項目を含んだ： −各雌ブタにおける局部的および全身的反応 −ワクチンの「取入れ」を示す出産時の雌ブタにおける
抗体レベル −雌ブタの生殖性能 −出産日に採取した小ブタの血清試料からのウィルス再
分離物。
抗体レベル −雌ブタの生殖性能 −出産日に採取した小ブタの血清試料からのウィルス再
分離物。
【００７０】結果：免疫蛍光分析で測定した抗体レベル
は全ての雌ブタにて＞８（ｌｏｇ2）であり、これはウ
ィルスが採取されたことを示す。ワクチン接種の後、５
日間にわたり温度を監視すると共に１４日間にわたり臨
床観察を行って全身的反応が観察されなかった。筋肉内
ワクチン接種後の７日における１頭のブタでのみ僅かな
局部的反応が観察された。皮膚内投与の１週間後に局部
的皮膚反応が見られた：赤色化、発熱、触診しうる斑
点、および幾つかの病巣。これら局部的皮膚反応は急速
に消失し、もはや第２週目には見られなかった。
は全ての雌ブタにて＞８（ｌｏｇ2）であり、これはウ
ィルスが採取されたことを示す。ワクチン接種の後、５
日間にわたり温度を監視すると共に１４日間にわたり臨
床観察を行って全身的反応が観察されなかった。筋肉内
ワクチン接種後の７日における１頭のブタでのみ僅かな
局部的反応が観察された。皮膚内投与の１週間後に局部
的皮膚反応が見られた：赤色化、発熱、触診しうる斑
点、および幾つかの病巣。これら局部的皮膚反応は急速
に消失し、もはや第２週目には見られなかった。
【００７１】生殖性能の結果を表４に要約する：
【００７２】
【表４】
【００７３】生存した小ブタの頭数は少なくとも公称平
均数（ハンドブック・ボア・デ・バーケンショウデリジ
ＩＳＢＮ ９０−８００９９９−３−７にしたがい＞＝
１０．０８）であると思われる。これは、これら同じ雌
ブタにて従来見られた生殖性能に完全に一致する。
均数（ハンドブック・ボア・デ・バーケンショウデリジ
ＩＳＢＮ ９０−８００９９９−３−７にしたがい＞＝
１０．０８）であると思われる。これは、これら同じ雌
ブタにて従来見られた生殖性能に完全に一致する。
【００７４】結論：この実験にて流産を誘発する妊娠の
最適時点における極めて高い投与量にて投与したが、Ｐ
ＲＲＳウィルス感染の臨床徴候は観察されなかった。
最適時点における極めて高い投与量にて投与したが、Ｐ
ＲＲＳウィルス感染の臨床徴候は観察されなかった。
【００７５】実施例５：ワクチン接種−チャレンジ実験 ２回のワクチン接種−チャレンジ実験にて、本発明によ
るＰＲＲＳウィルスでワクチン接種した保護特性につき
検査した。両実験にて１０頭のＰＲＲＳ抗体フリーの小
ブタの群に５〜６週令にて１０3.5〜１０6.9ＴＣＩＤ50
の範囲で変化するタイターにてワクチン株ＤＶ ＰＲＲ
Ｓウィルスをワクチン接種した（表２参照：群１３１お
よび１３５）。これら実験において、安全性および伝染
性の面も検査した。ワクチン接種の４週間後、これら小
ブタには鼻腔内にて１０5ＴＣＩＤ50の異質野性型ＰＲ
ＲＳウィルスを接種した。ワクチン接種およびウィルス
接種の後、血清学的反応をワクチン接種動物にて監視す
ると共に、ワクチン接種動物と直接接触させたセンチネ
ル動物および同じ建物内であるが物理的に分離した場所
（異なるブタ小屋）に入れた対照についても監視した。
るＰＲＲＳウィルスでワクチン接種した保護特性につき
検査した。両実験にて１０頭のＰＲＲＳ抗体フリーの小
ブタの群に５〜６週令にて１０3.5〜１０6.9ＴＣＩＤ50
の範囲で変化するタイターにてワクチン株ＤＶ ＰＲＲ
Ｓウィルスをワクチン接種した（表２参照：群１３１お
よび１３５）。これら実験において、安全性および伝染
性の面も検査した。ワクチン接種の４週間後、これら小
ブタには鼻腔内にて１０5ＴＣＩＤ50の異質野性型ＰＲ
ＲＳウィルスを接種した。ワクチン接種およびウィルス
接種の後、血清学的反応をワクチン接種動物にて監視す
ると共に、ワクチン接種動物と直接接触させたセンチネ
ル動物および同じ建物内であるが物理的に分離した場所
（異なるブタ小屋）に入れた対照についても監視した。
【００７６】ワクチンの保護特性を判定する主たる基準
は、チャレンジ後の種々の時間で得られた血清からの再
分離されたチャレンジ株の量である。再分離は２種の異
なるパラメータで判定した：チャレンジウィルスが再分
離されうる時間、および再分離の時点におけるウィルス
のタイターを測定した。
は、チャレンジ後の種々の時間で得られた血清からの再
分離されたチャレンジ株の量である。再分離は２種の異
なるパラメータで判定した：チャレンジウィルスが再分
離されうる時間、および再分離の時点におけるウィルス
のタイターを測定した。
【００７７】結果 血清学的反応 ワクチン接種およびチャレンジの後にｌｏｇ2単位にて
ＩＦＡで測定した抗体タイターをワクチン接種体、セン
チネルおよび対照につき表５に示す。
ＩＦＡで測定した抗体タイターをワクチン接種体、セン
チネルおよび対照につき表５に示す。
【００７８】
【表５】
【００７９】最高の抗体タイターが実験１３１にて見ら
れた。この実験は、明瞭な抗体反応が既にワクチン接種
の２週間後に検出されうることを示した。両実験にて、
ワクチン接種動物におけるタイターは対照におけるより
もずっと高く、同様にチャレンジ後も同様であった。こ
れは特に実験１３１の場合であった。筋肉内および皮膚
内投与後の実験１３５で測定された血清学的反応も匹敵
するものであった。恐らく、観察された最低のタイター
および最も遅いブースター反応は１０3.5ＴＣＩＤ50の
投与量でワクチン接種した群に見られたが、試験したこ
の最低の投与量でも顕著なタイターが得られた。センチ
ネル：４頭の動物のうち２頭が実験１３１にて血清変化
し、実験１３５では１２頭のうち１頭であった。両実験
にて、ワクチン接種体と同じ区域に保たれたが物理的に
分離された対照では血清変化が見られなかった。
れた。この実験は、明瞭な抗体反応が既にワクチン接種
の２週間後に検出されうることを示した。両実験にて、
ワクチン接種動物におけるタイターは対照におけるより
もずっと高く、同様にチャレンジ後も同様であった。こ
れは特に実験１３１の場合であった。筋肉内および皮膚
内投与後の実験１３５で測定された血清学的反応も匹敵
するものであった。恐らく、観察された最低のタイター
および最も遅いブースター反応は１０3.5ＴＣＩＤ50の
投与量でワクチン接種した群に見られたが、試験したこ
の最低の投与量でも顕著なタイターが得られた。センチ
ネル：４頭の動物のうち２頭が実験１３１にて血清変化
し、実験１３５では１２頭のうち１頭であった。両実験
にて、ワクチン接種体と同じ区域に保たれたが物理的に
分離された対照では血清変化が見られなかった。
【００８０】再分離（チャレンジ）ウィルス 血清に見られた平均ＰＲＲＳＶタイター（ｌｏｇ10）
（各群につき平均）をワクチン接種体、センチネルおよ
び対照につき表６に示す。
（各群につき平均）をワクチン接種体、センチネルおよ
び対照につき表６に示す。
【００８１】
【表６】
【００８２】実験１３１にて、チャレンジウィルスはワ
クチン接種動物から再分離されなかった。実験１３５に
おいて、再分離割合および再分離の期間における顕著な
低下が、非ワクチン接種対照と対比して全ての群で見ら
れた。１０3.5ＴＣＩＤ50の投与量にて筋肉内ワクチン
接種した群における低下率に関する効果は他の群におけ
るよりも僅かに低かった。
クチン接種動物から再分離されなかった。実験１３５に
おいて、再分離割合および再分離の期間における顕著な
低下が、非ワクチン接種対照と対比して全ての群で見ら
れた。１０3.5ＴＣＩＤ50の投与量にて筋肉内ワクチン
接種した群における低下率に関する効果は他の群におけ
るよりも僅かに低かった。
【００８３】実験１３１における４頭のセンチネルのう
ち２頭のみがワクチン接種後に血清変化し、実験１３５
では１２頭の動物のうち１頭のみが血清変化した。同じ
群の他の１頭のセンチネル動物（ｉ．ｍ．１０4.5）に
て、ＰＲＲＳウィルスがチャレンジの時点で分離され、
これは恐らくワクチンウィルスであった。
ち２頭のみがワクチン接種後に血清変化し、実験１３５
では１２頭の動物のうち１頭のみが血清変化した。同じ
群の他の１頭のセンチネル動物（ｉ．ｍ．１０4.5）に
て、ＰＲＲＳウィルスがチャレンジの時点で分離され、
これは恐らくワクチンウィルスであった。
【００８４】結論：明瞭な抗体反応がワクチン接種の２
週間後に既に検出でき、これは高タイターである。
週間後に既に検出でき、これは高タイターである。
【００８５】筋肉内および皮膚内投与の後の血清学的反
応は匹敵するものである。１０3.5ＴＣＩＤ50の投与量
でさえ顕著なタイターが得られる。非ワクチン接種対照
と対比し、全ての群にて再分離は見られず或いは顕著に
減少した再分離割合および再分離の期間が見られた。ウ
ィルスは極めて低い割合でのみ直接対照に伝染する。こ
の伝染割合にて、ワクチンウィルスは数回の複製にて明
確となり、これは本発明によるウィルス株の弱毒化特性
を示す。
応は匹敵するものである。１０3.5ＴＣＩＤ50の投与量
でさえ顕著なタイターが得られる。非ワクチン接種対照
と対比し、全ての群にて再分離は見られず或いは顕著に
減少した再分離割合および再分離の期間が見られた。ウ
ィルスは極めて低い割合でのみ直接対照に伝染する。こ
の伝染割合にて、ワクチンウィルスは数回の複製にて明
確となり、これは本発明によるウィルス株の弱毒化特性
を示す。
Claims (13)
- 【請求項１】 マクロファージに対し感染性でないこと
を特徴とするヨーロッパ血清型の生弱毒化ブタ生殖およ
び呼吸症候群ウィルス（ＰＲＲＳＶ）。 - 【請求項２】 コレクション・ナショナーレ・デ・カル
チュール・デ・ミクロオルガニスメス（ＣＮＣＭ）・オ
ブ・インスチチュート・パッスール（フランス国、パ
リ）にＮｏ．Ｉ−１４０１として寄託したハイブリドー
マＡ２７により産生されたモノクローナル抗体Ａ２７に
対し反応性であるが、インスチチュート・パッスール
（フランス国、パリ）にＮｏ．Ｉ−１４０２として寄託
したハイブリドーマＡ３５により産生されたモノクロー
ナル抗体Ａ３５に対しては反応性でないことを特徴とす
る請求項１に記載の生弱毒化ＰＲＲＳＶ。 - 【請求項３】 インスチチュート・パッスールに受託番
号Ｉ−１７５８として寄託された株であることを特徴と
する請求項２に記載の生弱毒化ＰＲＲＳＶ。 - 【請求項４】 ヨーロッパ血清型のＭＡ １０４増殖Ｐ
ＲＲＳＶを非−ＭＡ１０４哺乳動物細胞に適応させるこ
とを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の生
弱毒化ＰＲＲＳＶの製造方法。 - 【請求項５】 非−ＭＡ １０４霊長類細胞を非−ＭＡ
１０４哺乳動物細胞として使用することを特徴とする
請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 ベロ細胞を非−ＭＡ １０４霊長類細胞
として使用することを特徴とする請求項５に記載の方
法。 - 【請求項７】 請求項１〜３のいずれか一項に記載の生
弱毒化ＰＲＲＳＶと医薬上許容しうるキャリヤとからな
ることを特徴とするＰＲＲＳＶ感染に対しブタを保護す
るためのワクチン。 - 【請求項８】 １種もしくはそれ以上の非−ＰＲＲＳＶ
弱毒化もしくは失活病原体またはその抗原物質をさらに
含むことを特徴とする請求項７に記載のワクチン。 - 【請求項９】 非−ＰＲＲＳＶ病原体がシュードラビエ
スウィルス、ブタインフルエンザウィルス、ブタパルボ
ウィルス、伝染性胃腸炎ウィルス、ロタウィルス、エッ
シェリチア・コリ、エリシペロ・ルシオパチエ、ボルデ
テラ・ブロンチセプチカ、サルモネラ・コレラスイス、
ヘモフィルス・パラスイス、パスツレラ・ムルトシダ、
ストレプトコッカス・スイス、ミコプラスマ・ヒオニュ
ーモニアエおよびアクチノバチルス・プルーロニューモ
ニアエから選択されることを特徴とする請求項８に記載
のワクチン。 - 【請求項１０】 皮膚内もしくは筋肉内の投与に適する
キャリヤを含むことを特徴とする請求項７〜９のいずれ
か一項に記載のワクチン。 - 【請求項１１】 凍結乾燥型であることを特徴とする請
求項７〜１０のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項１２】 請求項１〜３のいずれか一項に記載の
生弱毒化ＰＲＲＳＶを医薬上許容しうるキャリヤと混合
することを特徴とするＰＲＲＳＶに対処するための生弱
毒化ワクチンの製造方法。 - 【請求項１３】 インスチチュート・パッスールに受託
番号Ｉ−１７５８として寄託された生弱毒化ＰＲＲＳＶ
を混合のため使用することを特徴とする請求項１２に記
載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL96202804.9 | 1996-10-09 | ||
| EP96202804 | 1996-10-09 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007190153A Division JP2007320963A (ja) | 1996-10-09 | 2007-07-20 | ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10117773A true JPH10117773A (ja) | 1998-05-12 |
| JP4152462B2 JP4152462B2 (ja) | 2008-09-17 |
Family
ID=8224476
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27739797A Expired - Lifetime JP4152462B2 (ja) | 1996-10-09 | 1997-10-09 | ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株 |
| JP2007190153A Pending JP2007320963A (ja) | 1996-10-09 | 2007-07-20 | ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007190153A Pending JP2007320963A (ja) | 1996-10-09 | 2007-07-20 | ブタ生殖および呼吸症候群ウィルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5925359A (ja) |
| EP (1) | EP0835930B1 (ja) |
| JP (2) | JP4152462B2 (ja) |
| KR (1) | KR100484041B1 (ja) |
| AT (1) | ATE199022T1 (ja) |
| BR (1) | BR9705009A (ja) |
| CA (1) | CA2217882C (ja) |
| DE (1) | DE69704011T2 (ja) |
| DK (1) | DK0835930T3 (ja) |
| ES (1) | ES2157522T3 (ja) |
| GR (1) | GR3035712T3 (ja) |
| PT (1) | PT835930E (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003523727A (ja) * | 1999-04-22 | 2003-08-12 | ユナイテッド ステイツ デパートメント オブ アグリカルチャー | 単離ｊａ−１４２に基づく、豚（ポーセリン）再生産および呼吸症候群ワクチン |
| JP2008520238A (ja) * | 2004-11-19 | 2008-06-19 | インターベツト・インターナシヨナル・ベー・ベー | ブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルス株及び組成物 |
Families Citing this family (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US6592873B1 (en) * | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
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