JPH09512547A

JPH09512547A - ４−ニトロ−δ▲上４▼−３−ケトステロイドを介した４−アミノ−δ▲上４▼−３−ケトステロイドの製造方法

Info

Publication number: JPH09512547A
Application number: JP7528246A
Authority: JP
Inventors: ヴアイントラウプ，フイーリプ・エム; ゲイツ，シンシア・エイ; アンジエラストロ，マイクル・アール; カラン，テイモシー・テイー; フリン，ゲアリー・エイ; キン，チー−シン・アール
Original assignee: メリル・フアーマシユウテイカルズ・インコーポレイテツド
Priority date: 1994-05-02
Filing date: 1995-04-11
Publication date: 1997-12-16
Also published as: CN1147258A; IL113532A0; EP0758340A1; EP0758340B1; US5990328A; NO964627L; AU2244995A; IL113532A; DK0758340T3; FI964410A0; WO1995029932A1; ES2128052T3; HUT75523A; DE69507139D1; NO964627D0; US5750744A; DE69507139T2; NZ283974A; FI964410A; GR3029433T3

Abstract

(57)【要約】本発明は４−ニトロ−Δ⁴−３−ケトステロイドの製造方法、ステロイドC_17-20リアーゼおよび５α−還元酵素の阻害剤としてのその使用、および順次、a)式(II)の出発化合物を相当する熱力学的ジエノレートが生成するのに十分な時間高められまたは適当な温度で強塩基の有効量と反応させ、次いで中性ニトロ化剤を添加することにより４−ニトロステロイドを形成すること；そして、次いでb)４−ニトロステロイドを適当な還元剤と反応させること、包含する式(Ｉ)の化合物の新しい製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】４−ニトロ−Δ⁴−３−ケトステロイドを介した４− アミノ−Δ⁴−３−ケトステロイドの製造方法発明の背景本発明は一般的にアンドロゲンおよび／またはエストロゲンの阻害剤化合物、 C_17-20リアーゼ、C_17α−ヒドロキシラーゼおよび５α−還元酵素の阻害剤としてのその使用、および４−アミノ−Δ⁴−３−ケトステロイドの製造方法に関する。アンドロゲンおよびエストロゲンの生合成は、主に、二重作用酵素ステロィド C_17-20リアーゼおよびC_17α−ヒドロキシラーゼの作用により制御されている。C_17-20 リアーゼは17β位に２個の炭素側鎖を有するステロイドの変換を触媒するのに対し、C_17α−ヒドロキシラーゼは17α位にこのような分子のヒドロキシル基を付加する。C_17-20リアーゼの作用はテストステロン、５α−ジヒドロテストステロンおよびエストロゲン、主にエストロンおよびエストラジオールの形成のために重要な前駆体分子を形成する。C_17-20リアーゼの有効な阻害は、アンドロゲンおよびエストロゲンの両方のステロイド類の形成を抑制する際に有用であり、このため、このようなアンドロゲンおよび／またはエストロゲンが悪く作用するような疾病の状態または疾病の治療において有用である。酵素ステロイド５α−還元酵素はジヒドロテストステロンまたはDHT(17β−ヒドロキシ−５α−アンドロスタン−３−オン)へのテストステロンの変換を触媒する。DHTはテストステロンよりも強力なアンドロゲンであり、特定の組織における末端臓器エフェクターとして、特に成長の媒介において作用する。この酵素を効果的に阻害することは、DHTの形成の防止に有用であり、従って、アンドロゲン依存性疾患、特にDHTが悪く作用するような疾患の治療において有用である。前記した阻害剤は、アンドロゲンおよび／またはエストロゲンの経路の種々の段階に作用し、各々種々のアンドロゲンおよび／またはエストロゲン依存性疾患の治療における治療上の有用性を有することが知られているため、このような阻害剤の合成のための代替法も有用であると考えられる。本出願に記載した方法により得られる４−アミノステロイド誘導体の特定のものは1988年７月12日に発行された米国特許第4,757,061号、1992年６月９日に発行された米国特許第5,120,8 40号、および1992年９月１日に発行された米国特許第5,143,909号に記載されている。これらの化合物の開示された３段階合成では4,5−エポキシステロイド誘導体の形成、次いで、ナトリウムアジド処理による４−アジドステロイド誘導体の形成を行なう。４−アジドステロイド誘導体はその後還元されて４−アミノステロイド誘導体となる。この合成におけるナトリウムアジドの使用は、化合物が本来不安定であるため、健康に対し有害である。熟練した化学者は僅か少量のナトリウムアジドを使用するため、実験室における小規模の上記工程は安全に実施できる。しかしながら、４−アミノステロイド誘導体の大規模の工業的生産には大量のナトリウムアジドおよびその誘導体の酸であるヒドラゾ酸が必要である。大量のナトリウムアジドおよびヒドラゾ酸を高温で使用するこの合成方法には、人体および環境に対する大きな危険が伴う。環境および健康に対する危険は化学プラントの適切な設計により低減できるが、このような施設に関る経費は制約要因となり、本質的な危険性はなお完全には取り除かれない。４−アジド中間体を介した４−アミノ−Δ⁴− ステロイドの３段階の合成を反応図Ａに図示する。以前のSchaub等(Tetrahedron，20:373(1964))およびSuginome等（J．Bull．Ch em．Soc．Jap．62:1343(1989)）の記載したΔ⁴−３−ケトステロイドのニトロ化の試みでは相当する２−ニトロステロイドが形成された。これは、ニトロ化が熱力学的ジエノレートである3,5−ジエノレートよりはむしろ動的な2,4−ジエノレートを介して進行することから、起り得ることであるとされていた。４−ニトロステロイドの形成には、2,3−ジエノレートに対抗して3,5−ジエノレートの生成を支援するような条件が必要である。発明の要旨本発明は、相当する3,5−ジエノレートのニトロ化生成物である４−ニトロ− ３−ケトステロイドの形成を介した４−アミノ−３−ケトステロイドの製造のための新しい方法を提供する。本発明は下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、シクロプロピルアミノ、アセチルチオアルカン、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり；ＲおよびR₁は一緒になって=0、即ち17位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₅およびR₆は一緒になって=0、即ち11位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして、し；符号はα型の置換基（紙の面の下方）を指し；符号はβ型の置換基（紙の面の上方）を指し；そして更に上記説明の限定のために、条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕の化合物の製造のための新しい方法であって、順次、下記段階： a) 下記式：は上記したとおり定義される〕の出発化合物を相当する熱力学的ジエノレートを形成するのに十分な時間高められまたは適当な温度で強塩基有効量と反応させ、次いで中性のニトロ化剤を添加して４−ニトロステロイドを生成すること；次いで、 b) ４−ニトロステロイドを適当な還元剤と反応させること；および c) 場合により４−アミノステロイドを薬学的に許容される塩に変換することを包含する上記方法を提供する。ニトロ化後修飾が必要な場合はこれは知られた手順で通常のように行なうことができる。例えば、以下の反応図に記載するとおり、４−ニトロテストステロンのC₁₇ヒドロキシル基の酸化により相当する17−ケトンが得られる。保護基の除去は下記の反応図に示すとおり行なうことができる。本発明は更に、C_17-20リアーゼ、C_17α−ヒドロキシラーゼおよび／または５ α−還元酵素の阻害剤として有用な特定の４−ニトロステロイドを提供する。これらの化合物は、下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、 C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、シクロプロピルアミノ、アセチルチオアルカン、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり；ＲおよびR₁は一緒になって=0、即ち17位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₅およびR₆は一緒になって=0、即ち11位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そしてし；符号はα型の置換基（紙の面の下方）を指し；符号はβ型の置換基（紙の面の上方）を指し；そして更に上記説明の限定のために、条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕により表わされる。本発明は更に、本発明の化合物の有効阻害量を投与することを包含するステロイドC_17-20リアーゼ、C_17α−ヒドロキシラーゼおよび／または５α−還元酵素を阻害するための方法を提供する。発明の詳述出発物質は知られたものを用いるか、または知られた方法により得てよい。本明細書中では、「C₁-C₆アルカノイル」という用語は炭素原子１〜６個の直鎖または分枝鎖のアルカノイル基を指す。この用語の範囲に含まれるものはホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ヘキサノイル等である。本明細書中では、「C₁-C₄アルカノール」という用語は、ヒドロキシ官能基少なくとも１つを有するが各炭素原子に連結したヒドロキシ基が１つを超えないような、炭素原子１〜４個の直鎖または分枝鎖のアルコール基を指す。この用語の範囲に含まれるものはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−１−プロパノール、２ −メチル−２−プロパノール、1,2−ジヒドロキシエタノール、1,3−ジヒドロキシイソプロパノール等である。本明細書中では、「C₁-C₆アルキル」という用語は炭素原子１〜６個の飽和の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。この用語の範囲に含まれるものはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等である。本明細書中では、「C₁-C₈アルキル」という用語は炭素原子１〜８個の飽和の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。この用語の範囲に含まれるものはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等である。本明細書中では、「C₁-C₄アルカンチオール」という用語はチオール官能基を有する炭素原子１〜４個の飽和の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。この用語の範囲に含まれるものはメチルチオール、エチルチオール、プロピルチオール、イソプロピルチオール、ｎ−ブチルチオール、イソブチルチオール、ｔ−ブチルチオール等である。本明細書中では、「アセチルチオアルカン」という用語はアセチルチオール官能基を有する炭素原子１〜８個の飽和の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。この用語の範囲に含まれるものは、アセチルチオメチル、アセチルチオエチル、アセチルチオプロピル、アセチルチオイソプロピル、アセチルチオブチル、アセチルチオ−ｓ−ブチル、アセチルチオ−ｔ−ブチル等である。本明細書中では、「C₁-C₆アルカノイルオキシ」という用語はカルボキシラト、官能基を有する炭素原子１〜８個の飽和の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を指す。この用語の範囲に含まれるものはホルミルオキシ、アセトキシ、プロピオニルオキシ、イソプロピオニルオキシ、ｎ−ブチリルオキシ、ｓ−ブチリルオキシ、ｔ−ブチリルオキシ、ｎ−ペンタノイルオキシ、ｓ−ペンタノイルオキシ、ｔ −ペンタノイルオキシ、ｎ−ヘキサノイルオキシ等である。本明細書中では、「薬学的に許容される塩」という用語は、当業者が容易に判断できるものであり、患者に対して多大な毒性作用を示すことがなく望ましい製薬操作性と製剤特性を有するような酸付加塩を指す。このような塩は無機塩および有機塩のいずれであることもでき、含水塩でも、または実質的に無水であってもよい。適当な塩を形成するような代表的な無機酸は塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および金属塩、例えばオルトリン酸１水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムを包含する。適当な塩を形成する代表的な有機酸はモノ、ジおよびトリカルボン酸を包含する。このような酸の限定しない例は酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタール酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、ケイヒ酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸および、スルホン酸類、例えばメタンスルホン酸および２−ヒドロキシスルホ安息香酸および２−ヒドロキシエタンスルホン酸である。上記した反応図は、本発明の工程を説明するものであり、ここでは、Δ⁴−３ −オンステロイドはまずΔ^3,5−ジエノレートを生成するのに十分強力な塩基の有効量と反応させることによりニトロ化して相当する４−ニトロ化合物とする。「強塩基有効量」とは、適当な反応条件下Δ⁴−３−オン出発物質をその熱力学的ジエノレートに変換するのに適する強度と濃度の塩基を指す。適当な反応条件の選択においては、厳密な塩基とその濃度は、他の反応条件の関数であり、使用する置換基の数と種類、反応時間、溶媒および温度により異なる。即ち、６位ステロイド炭素における脱保護を介した熱力学的ジエノレート中間体の形成のパラメーターに関する一般的な指針は後に記載する。使用可能な「強塩基」の範囲は、金属アルコレート等も包含するが、好ましくは炭素原子３〜６個の分枝鎖アルコールの塩である。最も好ましくは、これらの分枝鎖アルコールは炭素原子３〜５個を有する。例えばカリウムｔ−ブトキシドが好ましい。強塩基の「有効量」は、ステロイド上の酸性プロトンの数により異なる。「酸性プロトン」とは容易に解離するもの、例えばOH、CO₂H、NHである。各酸性プロトンごとに、更に１当量の塩基を用いる。本明細書に記載した典型的な塩基および「非酸性プロトン」含有ステロイドを用いた場合、量はステロイド化合物に対して少なくとも２モル当量となる。好ましくは２〜４モル当量であり、最も好ましくは酸性プロトンのみ約２モル当量である。ニトロ化反応におけるジエノレート中間体の形成において、当業者は反応の温度と時間の間の可変領域を容易に理解できるであろう。高められた温度では当然ながら反応時間は短く、より低温では反応時間は長くなる。本発明の実施においては、「高められた温度」とは、約50℃〜約100℃、好ましくは50℃〜83℃であり、最も好ましくは約83℃である。高められた温度では、「相当する熱力学的ジエノレートを形成するのに十分な時間」とは約15分〜８時間、好ましくは約15分〜約180分であり、最も好ましい反応時間は約60分である。より低い温度では、「適当な温度」の範囲は約15℃〜約50℃、好ましくは17℃ 〜約30℃であり、最も好ましくは約20〜約25℃である。これらの温度では、「熱力学的ジエノレートを形成するのに十分な時間」とは約15分〜48時間、好ましくは約１時間〜24時間であり、最も好ましくは約10時間〜24時間である。反応収率はより低い反応温度をより長い反応時間で用いることにより上昇させることができ、そのほうが本発明の実施においては好ましい。本発明の方法で好都合に用いる特定の溶媒は上記温度範囲の下限に凍結温度を有する場合があるため、僅かに加温するか、または溶媒を反応体の１つと混合した後に、これらのより低い温度で反応を進めることが必要である場合がある。ニトロ化を行なうために適する溶媒は、炭素原子２〜５個を有する直鎖または分枝鎖のアルカンから誘導した何れかのアルコールであることができる。特に望ましいものは第２および第３アルコールである。例えば、エタノールまたはイソプロパノールは効果的に用いてよいが、ｔ−アミルアルコールおよびｔ−ブチルアルコールが好ましい。最も好ましい溶媒はｔ−ブタノールである。ニトロ化は何れかの中性ニトロ化剤、例えばアルキルニトレートを用いて行なうことができる。特定のアルキルニトレートの選択は反応性と経費を考慮して決定する。適当なアルキルニトレートは炭素原子３〜８個を有する何れかの飽和の直鎖または分枝鎖の有機ニトレートである。好ましいアルキルニトレートには、イソプロピルニトレート、イソブチルニトレートおよび２−エチルヘキシルニトレートが包含される。最も好ましいアルキルニトレートはイソプロピルニトレートである。適当な還元剤による４−ニトロステロイド化合物の還元は、いずれかの知られた方法により、例えば化学的にまたは触媒作用により、行なってよい。典型的な化学触媒には、1)酢酸中金属亜鉛；2)塩化アンモニウムの存在下または非存在下のメタノール中金属亜鉛；3)エタノール中塩化第一スズ；または4)エタノール中鉄および酢酸が包含される。効果的な触媒系には、エタノールのようなアルコール溶媒中、Lindlar触媒（鉛およびキノリンを添加(poisoned)した炭酸カルシウム上のパラジウム）が包含される。その他の系も触媒水素化に用いてよく、例えば、メタノール中パラジウム／活性炭およびギ酸アンモニウム、エタノール中パラジウム／活性炭およびトリフルオロ酢酸、またはエタノール中パラジウム／硫酸バリウムを用いてよい。ステロイドC_17-20リアーゼの阻害剤としての本発明の化合物のインビトロ酵素阻害活性は、ラットまたはカニクイザルの精巣組織由来酵素のミクロソーム標品を用いて明らかにすることができた。ミクロソームをカニクイザルまたはラットの精巣組織から分離した。被験化合物をジメチルスルホキシドに溶解し、0.05Ｍリン酸カリウム緩衝液(カニクイザルリアーゼ活性の場合はpH7.4、ラットリアーゼ活性の場合はpH7.2)中に希釈し、所望の濃度の被験化合物を得た。DMSOの最終分析濃度は0.1％(v/v)とした。分析系には、１Ｍ NADPH、５mMグルコース−６− ホスフェート、１IU/mLグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼおよびミクロソーム蛋白を総容量0.2ml中に含有するNADPH再生系を含有させた。時間依存性C_17-20リアーゼ不活性化を測定するために、被験化合物を０〜40分間34℃で、20〜62μg／mlミクロソーム蛋白、0.05Ｍリン酸カリウム緩衝液、pH7.4および、上記したNADPH再生系と共にインキュベートした。次に検体180μLずつを取り出し、酵素活性について分析した。検体各々を〔7-³H〕−17α−ヒドロキシプレグネノロン（11.2mCi／ミリモル；検体当たり0.2μCi）＋未標識の17α−ヒドロキシプレグネノロンに添加し、検体当たり0 .3μMの総基質濃度とし、次に、34℃で６分間インキュベートした。被験化合物による可逆阻害を測定するたるめに、基質と阻害剤（または対照群では緩衝液中 DMSO）を同時に他の分析成分に添加することにより反応を開始した。カニクイザルリアーゼに対して用いる基質は７−³H−17α−ヒドロキシプレグネノロンとし、これは0.3μM基質の最終濃度とした。ラットリアーゼ活性分析については、使用基質は〔1,2-³H〕−17α−ヒドロキシプロゲステロンとし、総基質濃度0.1μM (Km＝0.096μM)とした。分析系全体はラットおよびサルのリアーゼの両方に対し６分間34℃でインキュベートした。ステロイド５α−還元酵素の阻害剤としての本発明の化合物の活性は、実験動物前立腺組織由来の５α−還元酵素のミクロソーム標品を用いて測定した。詳しくは、ミクロソームをカニクイザル前立腺組織から単離した。ミクロソーム標品の蛋白濃度を測定した後に試料を使用した。カニクイザル前立腺５α−還元酵素活性の個々の分析系には、0.1Ｍリン酸カリウム−クエン酸ナトリウム緩衝液、p H5.6、0.1％ウシ血清アルブミン（w/v）、1.0mMナトリウムEDTA、７〜96mgのミクロソーム蛋白、1.0mM NADPH、5.0mMグルコース−６−ホスフェート、１IU／m Lグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、〔1,2-³H〕−テストステロン（0.15μCi）、所望の基質濃度を得るための未標識テストステロン、およびDM SOに溶解し、次に0.1％(v/v)DMSOの最終分析濃度となるように0.1Ｍカリウム−ナトリウムクエン酸塩緩衝液（50:50）中に希釈した阻害剤を含有させた。同様の緩衝液と阻害剤を含有しないDMSOを対照群分析に用いた。バックグラウンドの放射能は酵素以外はすべての成分を含有する分析系から求めた。分析は２連で行なった。テストステロンを添加することにより反応を開始し、Dubnoff振とう培養器中25℃で3 0分間インキュベートした。分析系の総容量は100μLとした。これらの条件下30 分までは分析は時間に対して直線的であった。阻害を調べるための化合物をテストステロンと同時に添加した。IC₅₀の測定のために、Km値の単一の濃度のテストステロンを用いた。テストステロンのKm値は複数の実験で測定し、カニクイザル５α−還元酵素に対して0.025μM〜0.091μM の範囲であった。各分析はクロロホルム：メタノール（２：１）５mlを添加することにより終了した。次に基質と生成物を与える担体ステロイド（各々2.5μg）および蒸留脱イオン水0.8mlを各分析系に添加した。リアーゼ分析の担体ステロイドは17α−ヒドロキシプレグネノロン、デヒドロエピアンドロステロンおよびアンドロスト− ５−エン−3β,17β−ジオール（カニクイザルリアーゼ分析）または17α−ヒドロキシプロゲステロン、アンドロステンジオンおよびテストステロン（ラットリアーゼ活性）とした。テストステロン、ジヒドロテストステロンおよび3,17−アンドロスタンジオールは担体ステロイドとして５α−還元酵素分析に添加した。放射標識および未標識のステロイドはMooreとWilson(Methods in Enzymol.，O'M alley，B.W.とHardlan，J.G.編，36，1975，pp.466-473)の方法により抽出した。ステロイドを含有する有機層を窒素ガスで蒸発させた。リアーゼ分析のために残存物をヘキサン中18％テトラヒドロフラン(v/v)に溶解した。５α−還元酵素分析のためには、乾燥ステロイド残留物をヘキサン中３％(v/v )イソプロパノールに溶解した。次にステ (10μm；４×250mm)上、ヘキサン中３％〜7.5％イソプロパノール勾配、次いでヘキサン中75％(v/v)イソプロパノールのアイソラクティック条件下、分離した。ステロイドピーク中の放射能は、リアーゼおよび５α−還元酵素の両方について、Radiomatic HS型およびＡ515型Flo-One検出器を用いて測定した。各分析系の酵素活性は基質から生成物への％変換から計算し、結果は対照群に対する％阻害として表示した。これらの実験から得られたデータを６通りの濃度の阻害剤を組み込んだ適切な２パラメーターモデルに当てはめて、IC₅₀値を求めた。上記方法を用いて化合物を試験した場合、得られた結果は以下の通りである。(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンのI C₅₀は、サル精巣C_17-20リアーゼに対しては41nMであり、ラット精巣C_17-20リアーゼに対しては86nMであり、そして、前立腺サル５α−還元酵素に対しては17nM であった。カニクイザル精巣リアーゼについて上記方法を用いて化合物を試験した場合、以下の結果が得られた。ステロイドC_17-20リアーゼ、５α−還元酵素および／またはC_17α−ヒドロキシラーゼの阻害において、「有効阻害量」とは、酵素阻害作用が達成されるような化合物の量である。所望の阻害水準を達成するために必要な厳密な量は、酵素濃度、表面積、温度およびその他の典型的な実験パラメーターの関数であり、当業者の行なう実験的変動の範囲内である。典型的には、このような化合物を実際の患者に投与する際には、最小有効量は治療効果が得られる量である。投与する化合物の厳密な量は主に患者の体質と体型により広範囲に変動する。例えば投与する患者、および治療すべき症状の重症度に応じて、投与する化合物の有効阻害量は、１日当たり約0.625〜62.5mg／kg体重、好ましくは一日当たり約0.5〜30mg ／kqである。経口投与のための単位用量には、例えば、本発明の化合物10〜500m gが含有される。あるいは、本発明の化合物は非経腸経路により、または移植片として投与できる。以下の実施例は本発明を説明するために示すものであり本発明を制限する意図はない。本明細書中、特段の記載が無い限り「室温」とは約20℃〜約23℃とする。第１段階：４−ニトロステロイドの調製実施例１ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンカリウムｔ−ブトキシド(1.70ｇ、15mM)および(20S)−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン（1.65ｇ、５mM）をｔ−ブタノール（25ml）中で混合し、75分間アルゴン雰囲気下還流温度で加熱した。次にイソプロピルニトレート（0.51mL、５mM）を還流反応混合物に添加し、発熱反応を起こした。１分後、反応容器を熱源からはなし、放冷して室温とした。次に冷却した混合物に酢酸（５ml）を添加して酸性とし、一夜撹拌した。次に混合物をジクロロメタンで希釈し、これにより合成された生成物が可溶化するのに十分な分離相を形成した。その後、固体を濾過して除き、ジクロロメタンで洗浄した。濾液と洗液中の物質を合わせ、濃縮した。次に残留物を再度ジクロロメタンに溶解し、次にシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。この物質を水性アセトンから結晶化させて白色の針状物とした（融点166〜168℃）。 IR 3435，1696，1623(m)，1633 cm^-1 MS（CI）376(100％，M＋1)，358(30％，M＋1−H₂O) ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.73(3H，s，C₁₈-Me)，1.06(d，C₂₀-Me)， C₂₁-CH₂) 元素分析値 C₂₂H₃₃NO₄・(0.2)H₂O：計算値： C 69.70 H 8.80 N 3.62 測定値： C 69.78 H 9.13 N 3.40 この化合物は以下の構造を有していた。実施例１Ａ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンカリウムｔ−ブトキシド(1.70ｇ、15mM)および(20S)−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン（1.65ｇ、５mM）をｔ−ブタノール中で混合し、 90分間アルゴン雰囲気下還流温度で加熱した。次に複合物を室温に冷却し、イソプロピルニトレート（0.51mL、５mM）で１回処理した。18時間後、反応容器の内容物を酢酸５mlで酸性化し、その後、ジクロロメタンで希釈した。次に固体を濾過して除去し、更にジクロロメタンで洗浄した。濾液と洗液残存物を実施例１に記載の通り精製し、結晶化した(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。実施例１Ｂ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンカリウムｔ−ブトキシド(1.70ｇ、15mM)および(20S)−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン（1.65ｇ、５mM）をｔ−ブタノール（25ml）中で混合し、アルゴン雰囲気下３時間室温で撹拌した。次にこの複合物に、１塊としてイソプロピルニトレート（0.51ml、５mM）を添加し、その後、複合物を一夜撹拌した。次に、酢酸（５ml）を添加した。１時間後、反応容器中に残存する固体を濾去し、ジクロロメタンで洗浄した。合わせた濾液と洗液残存物を実施例１に記載の通り精製し、結晶化した(20S)−20−ヒドロキシメチル−４ −ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。実施例１Ｃ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンｔ−ブタノール中のカリウムｔ−ブトキシド(7.6ｇ、67.8mM)および(20S)−20 −ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン(6.6ｇ、20mM)をアルゴン雰囲気下60分間還流温度で加熱した。次に１回でイソブチルニトレート（2.34ml、 20mM）を添加した。更に20分間還流した後、反応容器を室温に冷却した。次に酢酸（10ml）を添加し、反応容器を18時間撹拌した後、複合物をジクロロメタン(2 00ml)で希釈した。固体を分離し、洗浄し、洗液残存物と合わせ、その後、実施例１に記載の通り精製し、結晶化した(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。実施例１Ｄ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンカリウムｔ−ブトキシド（7.6ｇ、67.8mM）および(20S)−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン(6.6ｇ、20mM)をｔ−ブタノール中で合わせ、120分間還流温度で加熱した。次に２−エチルヘキシルニトレート( 3.56ml、20M)を１回で添加した。10分後、反応容器を室温に冷却した。次に反応を酢酸（９ml）でクエンチングし、一夜撹拌した。ジクロロメタン（200ml）で希釈した後、固体を分離し、洗浄し、洗液残存物と合わせ、その後実施例１に記載の通り精製し、結晶化した(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。実施例１Ｅ (20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンｔ−ブタノール(91ml)中の(20S)−ヒドロキシメチル−プレグノ−４−エン− ３−オン(6.18ｇ、18.7ミリモル)を1.5時間還流温度でカリウムｔ−ブトキシド（6.43ｇ、57.3ミリモル、３モル当量）と反応させた。20分かけてイソプロピルニトレート（2.9ml、1.6モル当量）を滴下添加し、その後、反応混合物を放冷して室温とし、次に一夜撹拌した(12〜18時間)。次に反応混合物を酢酸（6.2ml）で処理し、室温で１時間撹拌し、水(400ml)に注ぎこんだ。ジクロロメタン(４× 100ml)で抽出し、有機層を全て合わせ、硫酸マグネシウム上に乾燥した。濾過後、濾液を真空下に蒸発させ、得られた赤みがかった油状物をシリカゲルカラム濾過により精製した（ヘキサン：ジエチルエーテル：塩化メチレン−４：２：１、 2.5Ｌ次いで２：２：１、１Ｌ）。適切な画分を合わせて濃縮し、得られた物質を、混濁するまで水を添加しながら沸騰プロパノールから再結晶させ、標題化合物（2.66ｇ）を得た。実施例２ 17β−ヒドロキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン実施例１に記載の方法で、テストステロン(2.88ｇ、10mM)、カリウムｔ−ブトキシド（3.40ｇ、30mM）およびイソプロピルニトレート（1.01ml）を反応させて 17β−ヒドロキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンを得た。融点 158〜160℃（アセトン−ヘキサン）。 IR 3533，1689，1615(m)，1635 cm^-1 MS（CI）334(100％，M＋1)，316(50％，M＋1-H₂O) ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.80(3H，s，C₁₈-Me)，1.30(s，C₁₉-Me)，3.66(1H，t，C₁₇ -H) この化合物は以下の構造を有していた。上記結晶化の際の濾液と洗液を合わせて無水酢酸（３ml）およびピリジン（６ ml）で処理した。室温で一夜放置した後、反応混合物を１時間水と共に撹拌した。液体を傾潟することにより得られた粘稠な固体をクロマトグラフィーで精製し、17β−アセトキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンを得た。融点216〜217℃（水性アセトン）。 IR（CDCl₃）1725，1695，1623(m)，1536，1256 cm^-1 MS（CI）376(100％，M＋1)，316(35％，M＋1-AcOH) ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.84(3H，s，C₁₈-Me)，1.30(s，C₁₉-Me)，2.05(s，COMe)， 5.62(1H，dd，C₁₇-H) この化合物は以下の構造を有していた。前に記載した通り、17β−ヒドロキシ−４−ニトロステロイドは以下の実施例に記載する通り修飾して相当する17−オンにすることができる。実施例２Ａ４−ニトロアンドロスト−４−エン−3,17−ジオン −６℃に冷却したアセトン(900ml)中の17β−ヒドロキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン（４−ニトロテストステロン、10.56ｇ、31.7mM）の溶液をJones試薬（10.0ml）で処理した。過剰な試薬をメタノールで分解した後、固体を濾過して除去した。濾液を例えば真空下ロータリーエバホレーターにより濃縮し、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、４− ニトロアンドロスト−４−エン−3,17−ジオンを得た。融点205〜205.5℃（分解）（アセトン−ヘキサン）。 IR 1738，1622，1533，1373 cm-¹ MS（CI）332(100％，M＋1) ¹H-NMR（CDCl₃）0.93(s，C₁₈-Me)，1.13(s，C₁₉-Me) 化合物は以下の構造を有していた。実施例３ 17β−ヒドロキシ−７α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン 17β−ヒドロキシ−７α−メチルテストステロン（11.2ｇ、37.0mM）、カリウムｔ−ブトキシド（8.29ｇ、73.9mM）およびイソプロピルニトレート（3.76ml）を実施例１の方法で反応させ、17β−ヒドロキシ−７α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンを得た。融点229〜230℃（分解）（アセトン− ヘキサン）。 IR（CHCl₃）3614，1694，1658(m)，1623，1536 cm^-1 MS（CI）348(100％，M＋1)，330(40％，M＋1−H₂O) ¹H-NMR（CDCl₃）0.89(d，C₇-Me)，0.91(s，C₁₈-Me)，1.16(s，C₁₉-Me)，3.68( t，C₁₇-H) 化合物は以下の構造を有していた。 17β−ヒドロキシステロイドは以下の実施例に記載の方法で相当する17−オンに変換される。実施例３Ａ７α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン−3,17−ジオンアセトン(400ml)中の17β−ヒドロキシ−７α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン(4.2ｇ、12.1mM)の溶液を０℃に冷却し、Jones試薬（ 4.0ml）で処理した。過剰な試薬がある場合はメタノールを添加して分解した。固体を濾去し、濾液を濃縮して緑色の固体とした。この物質をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、７α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン−3,17−ジオンを得た（水性アセトン）。 IR（CHCl₃）1735，1697，1625(m)，1537 cm^-1 MS（CI）346(100％，M＋1)，328(50％，M＋1-H₂O) ¹H-NMR（CDCl₃）0.86(3H，d，C₇-H)，0.93(3H，S，C₁₈-Me)，1.33(s，C₁₉-Me) 化合物は以下の構造を有していた。実施例４ 11α,17β−ジヒドロキシ−17α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン −３−オン 11α,17β−ジヒドロキシ−17α−メチルアンドロスト−４−エン−３−オン（6.37ｇ、20.0mM）、カリウムｔ−ブトキシド（6.73ｇ、60.0mM）およびイソプロピルニトレート（2.02ml）を実施例１の方法で反応させ、固体泡状物として11 α,17β−ジヒドロキシ−17α−メチル−４−ニトロアンドロスト−４−エン− ３−オンを得た。 IR 3435，1691，1618(m)，1533，1373 cm^-1 MS（CI）364(100％，M＋1)，346(30％，M＋1-H₂O)，328(37％，M＋1-2H₂O) ¹H-NMR（CDCl₃）0.93(3H，s，C₁₈-Me)，1.21(s，C₁₉-Me)，1.43(s，C₁₇-Me)， 4.08(1H，dt，C₁₁-H) 化合物は以下の構造を有していた。実施例５ 20,21−ジヒドロキシ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンアセトニド 20,21−ジヒドロキシプレグノ−４−エン−３−オン−21−アセテート(6.73ｇ、18.0mM)、カリウムｔ−ブトキシド(5.78ｇ、51.5mM)およびイソプロピルニトレート(1.6ml)を実施例１の方法で反応させ、20,21−ジヒドロキシ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンを得た。水性アセトンから再結晶させて相当するアセトニドを得た。融点221〜223℃（分解）。 IR 1693，1622(m)，1535，1371 cm^-1 MS（CI）418(55％，M＋1)，101(100％) ¹H-NMR（CDCl₃）0.90(3H，s，C₁₈-Me)，1.03(s，C₁₉-Me)，1.33(s，Me)，1.37 (s，Me)，3.46-3.54(1H，m，C₂₀-H)，3.93-4.05(2H，m，C₂₁-CH₂) 化合物は以下の構造を有していた。アセトニド基は以下の実施例の方法により20,21−ジ酸化炭素から除去した。実施例５Ａ 20,21−ジヒドロキシ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンメタノール中の実施例５の再結晶濾液から得た20,21−ジヒドロキシ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンアセトニドを短時間加温することにより溶液の形成を容易にした。次に反応容器を室温に冷却し、５％塩酸水溶液（10ml）を添加した。４時間撹拌した後、反応混合物を炭酸カリウム水溶液で中和し、真空下に濃縮した。残存物を希塩酸とジクロロメタンとに分配した。次に有機層を分離し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、濃縮して得られた黄色の泡状物を、次にシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、20,21−ジヒドロキシ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３− オンを得た。融点183〜185℃（水性メタノール）。 IR（CHCl₃）3628，3587，1693，1622，1535，1373 cm^-1 MS（CI）378(100％，M＋1)，342(35％，M＋1-2H₂O) ¹H-NMR 0.92(3H，s，C₁₈-Me)，1.30(3H，s，C₁₉-Me)，3.34-3.44(1H，m，C₂₀- H)，3.61-3.72(2H，m，C₂₁-CH₂) 化合物は以下の構造を有していた。実施例６ 17β−シクロプロピルオキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン 17β−シクロプロピルオキシアンドロスト−４−エン−３−オン(9.70ｇ、29. 5mM)、カリウムｔ−ブトキシド（7.0ｇ、62.4mM）およびイソプロピルニトレート（2.99ml）を実施例１の方法で反応させ、17β−シクロプロピルオキシ−４− ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンを得た。融点137〜38℃（メタノール）。 IR（CHCl₃）1695，1622(m)，1535，1373 cm^-1 MS（CI）374(100％，M＋10)，316(20％，M＋1-c-C₃H₅-O) ¹H-NMR（CDCl₃）0.38-0.61(4H，m)，0.80(3H，s，C₁₈-Me)，1.29(s，C₁₉-Me) ，3.25-3.33(1H，m，シクロプロピル-CHO)，3.44(1H，t，C₁₇-H) 化合物は以下の構造を有していた。上記ニトロ化のための出発物質は以下の通り調製した。アセトン(1.9Ｌ)中の17β−シクロプロピルオキシ−アンドロスト−５−エン −３β−オール(19.36ｇ、58.9mM)の溶液を−３℃まで冷却し、次にJones試薬(2 0ml)で処理した。過剰の試薬をメタノールで分解した。固体を濾過して除去した。濾液を濃縮して得られた緑色の油状物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで精製して17β−シクロプロピルオキシアンドロスト−４−エン−３− オン（11.0ｇ、57％）を得た。上記酸化のための出発物質(17β−シクロプロピルオキシ−アンドロスト−５ −エン−３β−オール)はAngelastroとBlohmの米国特許第4,966,897号に記載の通り製造した。実施例６Ａ 17β−（シクロプロポキシ）−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンカリウムｔ−ブトキシド（109ｇ、0.97モル、2.1モル当量）を室温窒素下10分間かけてｔ−ブタノール（２Ｌ）中の17β−（シクロプロピルオキシ）−アンドロスト−４−エン−３−オン（150ｇ、0.46モル）の撹拌溶液に添加した。室温で18時間撹拌を継続し、次に室温で30分かけてｔ−ブタノール（50ml）中のイソプロピルニトレート（48.2ｇ、0.46モル、1.0モル当量）を添加した。更に一日室温で撹拌した後、氷酢酸(130ml)を25分かけて添加し、更に18時間撹拌を継続した。その後、塩化メチレン(1.5Ｌ)および塩水(飽和塩化ナトリウム、800mL)を添加し、溶液を更に10分間撹拌した。次に有機層を分離し硫酸マグネシウム上に乾燥した。得られたスラリーを濾過し、濾液を濃縮(35℃／40 Torr)し、暗赤色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(SiO₂、溶離剤：酢酸エチル／ヘキサン５：95、酢酸エチル／ヘキサン１：９および酢酸エチル／ヘキサン 15 ：85)で精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせて濃縮（30℃／40 Torr ）し、得られた固体をヘキサン(350ml)中で撹拌した。濾過し、固体を乾燥して黄色の固体として標題化合物（68ｇ、40％）を得た。上記のような濃縮および再クロマトグラフィーの後、濾液から更に化合物が得られた（８ｇ、５％）。融点 133〜134℃。 IR（KBr）3437，3090，2945，2870，1693，1624，1531，1450，1373，1346，1 332，1211，1188，1170，1076，1062，1035，1012，962，794，765 cm^-1 ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.50(4H，2×シクロプロピル-CH₂)，0.80(3H，s，C₁₈-Me) ，1.30(3H，s，C₁₉-Me)，3.3(3H，m，シクロプロピルのOCH)，3.44(1H，C₁₇-H) MS（CI，CH₄）m/z（相対強度）374(100％，M＋1) 元素分析値 C₂₂H₃₁NO₄: 計算値： C 70.75 H 8.37 N 3.75 測定値： C 70.99 H 8.44 N 3.56 実施例７４−ニトロ−アンドロスト−４−エン−３−オン−17β−カルボン酸アンドロスト−４−エン−３−オン−17β一カルボン酸(3.63ｇ、11.4ミリモル)、カリウムｔ−ブトキシド(４ｇ、35.3ミリモル)およびイソプロピルニトレート(1.9ml)を実施例１の方法で反応させ、４−ニトロ−21−アンドロスト−４ −エン−３−オン−17β−カルボン酸を得た。融点205〜208℃、分解。 IR（CHCl₃）3034，2970，1697，1535，1373 cm^-1 MS（CI）362(100％，M＋1) ¹H-NMR δ（CDCl₃）0.79(3H，s，C₁₈-Me)，1.3(3H，s，C₁₉-Me) 化合物は下記の構造を有していた。実施例８３−ヒドロキシ−４−ニトロアンドロスト−3,5−ジエン−17β−ｔ−ブチルカルボキサミド磁気撹拌子およびガス導入口を備えた250ml容の丸底フラスコに、カリウムｔ −ブトキシド(8.5ｇ、75ミリモル)およびｔ−ブチルアルコール（75ml）を入れた。アンドロスト−４−エン−３−オン−17β−カルボキサミド(9.3ｇ、25ミリモル)を添加し、溶液を20分間アルゴン雰囲気下65℃で撹拌した。強い発熱を伴いながら、イソプロピルニトレート(2.8ml、28ミリモル)を添加し、溶液を１時間かけて25℃まで冷却した。酢酸（7.5ml）を添加し、沈殿を濾過し、濾液を濃縮した。得られた暗色のガム状物をジクロロメタンに溶解し、水で洗浄し、濃縮し、30〜50％酢酸エチル／ヘキサンを用いて300mLのシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、ジクロロメタン／ヘキサンから結晶化させた生成物44 1mg(1.05ミリモル)を得た。融点207〜208.5℃（分解）。 IR(KBr): 3441，2967，2943，2916，2885，2847，1693，1670，1624，1535，1 508，1475，1452，1390，1367 cm^-1 UV（EtOH）λ_max＝242 nM; ε＝13,100 ¹H-NMR（CDCl₃）: δ4.40(s，1H)，2.52-2.60(m，2H)，1.4-2.46(m，16H)，1. 35(s，9H)，1.31(s，3H)，1.03-1.32(m，4H)，0.74(s，3H)ppm 元素分析値 C₂₄H₃₆N₂O₄：計算値： C 69.20％ H 8.71％ N 6.72％測定値： C 69.33％ H 8.63％ N 6.60％化合物は以下の構造を有していた。実施例９Ａ 20−アセチルチオメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オン 20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オン（750mg、2 .0ミリモル）（実施例１で調製）およびトシルクロリド（400mg、2.1ミリモル）の溶液をピリジン（２ml）中に調製し、12時間25℃で撹拌した。24時間後、残存物をジクロロメタン(２ml)に再度溶解し、更にトシルクロリド（４0mg）を添加した。更に12時間撹拌した後、水２滴を添加し、混合物を30分間撹拌し、ジクロロメタン（50ml）、水（50ml）、10％塩酸（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。この物質を濃縮し、酢酸エチル：ヘキサン（１：１）の50：50溶液から血漿化させ、黄色の固体を得た。融点181℃〜182℃。上記方法により調製したトシレート(529mg)を乾燥ジメチルホルムアミド（10m l）中に溶解し、炭酸セシウム(163mg、0.5ミリモル)およびチオ酢酸（86mg、1.1 ミリモル）をメタノール(３ml)中に溶解し、蒸発させることにより新しく調製したセシウムチオアセテートに添加した。24時間後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、水で洗浄し、濃縮し、ジクロロメタン／ヘキサン（４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーに付した。所望の生成物を含有する画分を濃縮し、ヘキサンから結晶化させてチオエステル225mgを得た。別法として、上記方法により調製したトシレートを以下の方法で置換して相当するチオアセチル化合物とすることができる。炭酸セシウム（163mg、0.5ミリモル）をメタノール（２ml）およびチオ酢酸(90mg、1.1ミリモル)に溶解した。均質な溶液を真空下に濃縮した。残存物をトシレート（529mg、1.0ミリモル）と共にジメチルホルムアミド（３ml）中に溶解した。得られた溶液を18時間窒素雰囲気下25℃で撹拌した。上記方法で調製したセシウムチオアセテート（1.0ミリモル）の別の溶液（ジメチルホルムアミド1.0ml）を反応容器に添加した。変換終了（TLCで測定）後、１Ｎ塩酸（１ml）を添加し、得られた溶液を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。化合物は以下の構造を有していた。実施例９Ｂ 20−メルカプトメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オン実施例９Ａで製造したチオアセテート（65mg、0.15ミリモル）をメタノール２ mlおよびTHF １ml中に１Ｎ LiOH 0.3mlと共に溶解した。１時間撹拌した後、酢酸0.1mlを添加した。溶液を酢酸エチルに抽出し、水で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。生成物を酢酸1.0ml中に溶解し、約50℃に加熱し、真空下に濃縮して明黄色の固体を（30mg）得た。化合物は以下の構造を有していた。実施例 10 17β−シクロプロピルアミノ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンｔ−ブタノール（60ml）中の17β−シクロプロピルアミノ−４−エン−３−オン(4.61g、14.07ミリモル)およびカリウムｔ−ブトキシド(4.74g、42.22ミリモル、３モル当量)の溶液を１時間還流下に加熱した。イソプロピルニオレート(1. 43ml、14.07ミリモル、１モル当量)を溶液還流中に１回で添加した。反応混合物をゆっくり室温に戻し、その後、氷酢酸（20ml）およびジクロロメタン（20ml）を反応混合物に添加して赤橙色の沈澱を溶解した。反応混合物を一夜室温で放置した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキを白色になるまでジクロロメタンで洗浄した。濾液を更にジクロロメタン(200ml)で希釈し、その後、半飽和濃度の塩化ナトリウム水溶液(200ml)で洗浄し、その後、同量の半飽和塩化ナトリウム水溶液および重炭酸ナトリウム飽和水溶液よりなる溶液(200ml)で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上に乾燥し、真空下に濃縮し、シリカゲル上のクロマトグラフィー(ジクロロメタン／メタノール 19：１)で精製し、固体の黄色い泡状物として17β−シクロプロピルアミノ−４−ニトロアンドロスト−４−エン− ３−オンを得た。 ¹H-NMR（300 MHz，CDCl₃）δ0.75(s，3H，C₁₉-Me)，1.30(s，3H，C₁₈-Me)ppm IR（KBr）3435，2944，2870，1695，1533，1371，1013，766 cm^-1 MS（EI）＝372（M⁺）化合物は以下の構造を有していた。第２段階：ステロイド４−ニトロ−Δ⁴−３−オンから４−アミノ −Δ⁴−３−オンステロイド化合物への還元Ａ．接触還元実施例 11 ４−アミノ−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン無水エタノール（28ml）中の20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４ −エン−３−オン（2.01ｇ、5.35mM）の溶液を準じ、Lindlar触媒(５％ Pd／CaC O₃＋5.2％ Pb，0.81ｇ)およびキノリン（37μl）で処理し、24時間40〜55psiの水素下に保持した。次に混合物をセライトで濾過し、濾液を濃縮して得られた黄色の固体をショートパスクロマトグラフィーで精製して４−アミノ−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オンを得た。融点180〜185℃（水性イソプロパノール）。 IR 3512，3470，3384，1648，1614，1576 cm^-1 MS（CI）346(100％，M＋1)，328(30％，M＋1-H₂O) ¹H-NMR 0.72(3H，s，C₈-Me)，1.02(d，C₂₁-Me)，1.15(s，C₁₉-Me)，2.6-3.2(v .br，NH₂)，3.36(1H，dd，0.5・C₂₂-CH₂)，3.63(1H，dd，0.5・C₂₂−CH₂) この化合物は以下の構造を有していた。実施例 12 17β−シクロプロピルオキシ−４−アミノアンドロスト−４−エン−３−オン無水エタノール(125ml)中の17β−シクロプロピルオキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オン（4.36ｇ、11.6mM）の溶液をLindlar触媒、次いでキノリン(80ml)で処理した。混合物を約117時間１気圧の水素下に撹拌した。反応混合物を活性炭を乗せたセライトで濾過し、無水エタノールで洗浄した。合わせた濾液を濃縮して褐色の液体（3.7ｇ）とし、塩化メチレンに溶解し、ヘキサン／酢酸エチル（１：４）で調製したシリカゲルカラムに搭載し、ヘキサン：酢酸エチル（１：４）で溶離しながらフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有画分を合わせて濃縮し、得られた明黄色のガラス状物を放置により結晶化させた（2.3ｇ）。結晶をメタノールに溶解し、綿花で濾過し、結晶化が始まるまで水を滴下添加した。混合物を再度一夜冷凍した（12〜18時間）。結晶を濾過して集め、冷水性メタノールおよび水で洗浄し、次に真空下に乾燥して明黄色の固体として４−アミノ−17β−（シクロプロピルオキシ）−アンドロスト −４−エン−３−オン（1.97ｇ）を得た。 IR（KBr）ν3458，3372，1674，1622(m)，1585 cm^-1 元素分析値 C₂₂H₃₃NO₂：計算値： C 76.92 H 9.68 N 4.08 測定値： C 76.86 H 10.04 N 4.08 ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.38-0.61(4H，m，2×CH₂)，0.79(3H，s，C₁₈-Me)，1.15(s ，C₁₉-Me)，3.27＋3.44＋ca.3.4(4H，シクロプロポキシ-H，C₁₇-H，NH₂，m＋t， v.br.) UV（EtOH）λ 294(ε 7570，1g.ε 3.879) MS／CI 344(100％，M＋1)，286(30％，M＋1-C₃H₅OH) この化合物は以下の構造を有していた。実施例 12A ４−アミノ−17β−（シクロプロピルオキシ）−アンドロスト−４−エン−３− オン塩酸塩 35℃のメタノール（200ml）中の17β−（シクロプロピルオキシ）−４−ニトロ−アンドロスト−４−エン−３−オン（10ｇ、26.7ミリモル）の撹拌溶液にLi ndlar触媒（４ｇ、5.9％ Pd＋5.4％ Pd／CCP3(CaCO₃)，D.R．Engelhard，Seneca ，SC）およびキノリン(0.2ｇ、1.6ミリモル)を窒素雰囲気下に添加した。得られた混合物をParr振とう器に入れ、20時間50psiで室温水素雰囲気下に振とうしたところ、約３モル当量の水素が消費された。触媒を濾過して除去した。上記方法を約９回（８×10ｇ規模＋１×７ｇ規模）反復し、生成した溶液を濾過して合わせた。二酸化ケイ素(SiO₂、550ｇ)を溶液に添加し、混合物を減圧下( 10 Torr)、10〜15℃で濃縮した。SiO₂と生成物の混合物をフラッシュカラム（20 cm内径、SiO₂５kg充填）に投入し、カラムを順次ヘキサン中15％（20Ｌ）、20％（20Ｌ）次いで30％（40Ｌ）酢酸エチルで溶離した。生成物含有画分を合わせ、減圧下（10℃、30 Torr）に濃縮し、黄色の溶液を得た(600ml)。溶液を酢酸エチル中1.8Ｍ塩酸(75ml)で４℃で処理した。得られたスラリーをアセトン（200ml）および塩化メチレン（100ml）で希釈した。30分撹拌した後、固体を濾過して集め、アセトン(300ml)で洗浄し、乾燥して標題化合物（34ｇ、37％）を得た。融点206〜207℃。濾液を濃縮して液体(300ml)とし、固体を回収して生成物の第２の収量（3.4ｇ、４％）を得た。融点203〜204℃。 IR（KBr）3445，3086，2945，2872，2555，1967，1791，1682，1641 cm^-１ ¹H-NMR（CDCl₃）δ0.50(4H，m，2×シクロプロピル-CH₂)，0.76(3H，s，C₁₈-M e)，1.21(3H，s，C₁₉-CH₃)，3.2(1H，m，シクロプロピルのOCH)，3.39(1H，t，C₁₇ -H)，9.6(3H，br.s，NH₃) MS（CI）m／z 344（100％，M⁺）元素分析値 C₂₂H₃₄NO₂Cl・(0.6)H₂O：計算値： C 68.05 H 9.07 N 3.61 測定値： C 68.18 H 9.06 N 3.52 実施例 13 17β−シクロプロピルアミノ−４−アミノプレグノ−４−エン−３ −オン 17β−シクロプロピルアミノ−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オン（67 0mg，1.80ミリモル）を無水エタノール(11ml)に溶解し、Lindlar触媒（268mg）次いでキノリン(３μL)で処理した。溶液を18時間常圧(約760mm／mg)で水素雰囲気下激しく撹拌した。反応混合物を濾過し、エタノール（100ml）およびジクロロメタン(100ml)で洗浄した。溶媒を真空下に除去し、生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィー(塩化メチレン／CH₂OH，47：３)で精製し、黄色の油状物を得たが、これは、結晶化して黄色味を帯びた固体となった。融点149〜150℃（ジエチルエーテル）。 IR（KBr）：3474，3366，2945，1616，1577 cm^-1 MS（Cl／CH₄）〔M⁺＋H〕＝343 ¹H-NMR（33 MHz，CDCl₃）δ0.73(3H，s，C₁₈-Me)，1.15(3H，s，C₁₉-Me)，2.6 6(1H，t，C₁₇-H) ¹³C-NMR（75MHz，CDCl₃）δ6.464，7.185，11.289，20.803，23.682，24.757 ，29.683，29.753，30.914，32.860，34.899，35.307，37.904，42.453，52.910 ，54.549，69.014，132.938，138.860，194.343 化合物は以下の構造を有していた。Ｂ．化学的還元実施例 14 ４−アミノ−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オン無水エタノール(4.8ml)中の20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４ −エン−３−オン（0.52ｇ、1.38ml）の溶液に塩化第一スズ（2.1ｇ）を１回で添加して混合し、次に、６時間70℃で加熱した。次に反応容器を室温に冷却し、 10分間かけて重炭酸ナトリウム（９ｇ）で慎重に溶液を中和した。次に得られたスラリーを濾過し、褐色の固体を分離し、次に、10％フッ化水素酸（25ml）および酢酸エチル（25ml）中で撹拌した。フッ化水素／酢酸エチル処理を反復した。各濾過で得られた有機層を合わせ、硫酸マグネシウム上に乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残存物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、Weintraubへの米国特許第5,218,110号およびWeintraub等への米国特許第5,120,840号（両文献とも参考のために本明細書に組み込まれる）に記載の物質と同様な白色固体として４−アミノ−20−ヒドロキシメチルプレグノ−４−エン−３−オンを得た。この化合物は下記の構造を有していた。実施例 14 ４−アミノ−17−シクロプロピルオキシアンドロスト−４−エン−３−オン酢酸（10ml）中の17−シクロプロピルオキシ−４−ニトロアンドロスト−４− エン−３−オン(1.0ｇ、2.71mM)の溶液を亜鉛粉(1.0ｇ)で処理した。合わせたものを室温で1.5時間激しく撹拌した。亜鉛塩を濾過して除き、酢酸エチルで洗浄した。合わせた濾液と洗液を合わせ、濃縮して得られた黄色の固体を酢酸エチルに再溶解し、３回１Ｍ塩酸(150ml)で抽出した。合わせた酸抽出液を水酸化ナトリウム（pH14）で中和し、更にエーテルで抽出した。次に合わせた有機層を硫酸ナトリウム上に乾燥し、濃縮して４−アミノ−17−シクロプロピルオキシアンドロスト−４−エン−３−オン（0.59ｇ）を得た。融点100〜102℃（水性メタノール）。 IR 3354，1662，1620，1581 cm^-1 MS（CI）344(100％，M＋1) ¹H-NMR 0.37-0.61(4H，m，2×シクロプロピル CH₂)，0.79(3H，s，C₁₈-Me)，1 .16(s，C₁₉-Me)，3.25-3.33(m，シクロプロピル-CHO)，3.44(t，C₁₇-H) この化合物は下記の構造を有していた。実施例 16 20−アセチルチオメチル−４−アミノプレグノ−４−エン−３−オン 20−（チオアセチル）メチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オン（17 3mg、0.40ミリモル）および亜鉛粉300mgを氷酢酸２ml中30分間撹拌した。混合物を酢酸エチル（50ml）中に注ぎこみ、重炭酸ナトリウム飽和水溶液３×50mlで洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。融点173〜176℃。化合物は下記の構造を有していた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アンジエラストロ，マイクル・アールアメリカ合衆国オハイオ州 45040．メイソン．シーダーノウル9853 (72)発明者カラン，テイモシー・テイーアメリカ合衆国オハイオ州 45236．シンシナテイ．デイアークロスパークウエイ 9251．アパートメント２ビー (72)発明者フリン，ゲアリー・エイアメリカ合衆国オハイオ州 45243．シンシナテイ．ユークリツドロード7121 (72)発明者キン，チー−シン・アールアメリカ合衆国オハイオ州 45241．シンシナテイ．ウツドクロフトドライブ7381

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、アセチルチオアルカン、シクロプロピルアミノ、ｔ−ブチルカルボキシアミド、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして、示し；ＲとR₁は一緒になって、そして／またはR₅とR₆は一緒になって=0を示すが；条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕の化合物の製造方法、ただし、順次下記段階： a) 下記式：物を相当する熱力学的3,5−ジエノレートを形成するのに十分な時間高められた温度で強塩基有効量と反応させ、次いで中性のニトロ化剤を添加して４−ニトロステロイドを生成すること；次いで、 b) ４−ニトロステロイドを適当な還元剤と反応させることを包含する上記方法。２．化合物が(17S)−シクロプロピルオキシ−アンドロスト−４−エン−３−オンである請求項１記載の方法。３．化合物が(20S)−４−アミノ−21−ヒドロキシ−20−メチルプレグノ−４− エン−３−オンである請求項１記載の方法。４．強塩基がカリウムｔ−ブトキシドおよびカリウムｔ−アミレートよりなる群から選択される請求項１記載の方法。５．強塩基の有効量が約２〜約４モル当量である請求項４記載の方法。６．強塩基の有効量が約２モル当量である請求項５記載の方法。７．高められた温度が約17℃〜約100℃である請求項１記載の方法。８．高められた温度が約50℃〜約83℃である請求項７記載の方法。９．高められた温度が約83℃である請求項８記載の方法。 10．熱力学的ジエノレートを生成するのに十分な時間が約５分〜８時間である請求項１記載の方法。 11．熱力学的ジエノレートを生成するのに十分な時間が約15分〜約180分である請求項10記載の方法。 12．熱力学的ジエノレートを生成するのに十分な時間が約60分である請求項11記載の方法。 13．中性ニトロ化剤が炭素原子３〜８個を有する飽和の直鎖または分枝鎖の有機ニトレートである請求項１記載の方法。 14．アルキルニトレートがイソプロピルニトレート、イソブチルニトレートおよび２−エチルヘキシルニトレートよりなる群から選択される請求項13記載の方法。 15．適当な還元剤が、酢酸中の金属亜鉛のような物質およびLindlar触媒のような触媒よりなる群から選択される請求項14記載の方法。 16．下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、シクロプロピルアミノ、アセチルチオアルカン、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり；ＲおよびR₁は一緒になって=0、即ち17位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₅およびR₆は一緒になって=0、即ち11位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕の化合物。 17．(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４−エン−３−オンである請求項16記載の方法。 18．17β−シクロプロピルオキシ−４−ニトロアンドロスト−４−エン−３−オンである請求項16記載の化合物。 19．下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロポキシ、アセチルチオアルカン、シクロプロピルアミノ、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり；ＲおよびR₁は一緒になって=0、即ち17位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₅およびR₆は一緒になって=0、即ち11位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして、条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕の化合物の有効阻害量を投与することを包含するステロイド５α−還元酵素を阻害するための方法。 20．投与する化合物が(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４ −エン−３−オンである請求項19記載の方法。 21．下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、シクロプロピルアミノ、アセチルチオアルカン、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり；ＲおよびR₁は一緒になって=0、即ち17位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₅およびR₆は一緒になって=0、即ち11位の炭素に二重結合する酸素を示し； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして、条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素であり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素である〕の化合物の有効阻害量を投与することを包含するステロイドC_17-20リアーゼを阻害するための方法。 22．投与する化合物が17β−シクロプロポキシ−４−ニトロアンドロスト−４− エン−３−オンである請求項21記載の方法。 23．投与する化合物が(20S)−20−ヒドロキシメチル−４−ニトロプレグノ−４ −エン−３−オンである請求項21記載の方法。 24．投与する化合物が(20S)−20−メルカプトメチル−４−ニトロプレグノ−４ −エン−３−オンである請求項21記載の方法。 25．下記式：〔式中、ＲはOH、C₁-C₆アルカノイル、C₁-C₆アルカノイルオキシ、C₁-C₄アルカノール、COCH₂OH、CO₂H、CONR₇R₈、シクロプロピルオキシ、アセチルチオアルカン、シクロプロピルアミノ、ｔ−ブチルカルボキシアミド、2,2−ジメチルジオキソラン−４−イル、1,2−ジヒドロキシエチルおよびC₁-C₄アルカンチオールであり； R₁は水素、ヒドロキシまたはC₁-C₆アルキルであり； R₂、R₃およびR₄は各々独立して水素またはC₁-C₆アルキルであり； R₅およびR₆は各々独立して水素またはOHであり； R₇は水素またはC₁-C₈アルキルであり； R₈はC₁-C₈アルキルであり；そして、し；ＲとR₁は一緒になって、そして／またはR₅とR₆は一緒になって=0を示すが；条件として、ＲがOHである場合は、R₁は水素またはC₁-C₄アルキルあり；そして条件としてR₅がOHである場合は、R₆は水素であり、そしてR₆がOHである場合は、R₅は水素である〕の化合物の製造方法、ただし、順次、下記段階： a) 下記式：物を相当する熱力学的3,5−ジエノレートを形成するのに十分な時間適当な温度で強塩基有効量と反応させ、次いで中性のニトロ化剤を添加して４−ニトロステロイドを生成すること；次いで b) ４−ニトロステロイドを適当な還元剤と反応させること、 c) 場合により薬学的に許容される塩に変換することを包含する上記方法。 26．化合物が(17S)−４−アミノ−シクロプロピルオキシ−アンドロスト−４− エン−３−オンである請求項25記載の方法。 27．化合物が(20S)−４−アミノ−21−ヒドロキシ−20−メチルプレグノ−４− エン−３−オンである請求項25記載の方法。 28．化合物が塩酸４−アミノ−21−ヒドロキシ−20−メチルプレグノ−４−エン −３−オンである請求項25記載の方法。 29．適当な温度が約17℃〜約30℃である請求項25記載の方法。 30．適当な温度が約20℃〜約25℃である請求項25記載の方法。