HUT75523A

HUT75523A - Process for the preparation of 4-amino-delta 4-3-ketosteroids via 4-nitro-delta 4-3-ketosteroids

Info

Publication number: HUT75523A
Application number: HU9603035A
Authority: HU
Inventors: Michael R Angelastro; Timothy T Curran; Gary A Flynn; Cynthia A Gates; Chi-Hsin R King; Philip M Weintraub
Original assignee: Merrell Pharma Inc
Priority date: 1994-05-02
Filing date: 1995-04-11
Publication date: 1997-05-28
Also published as: CN1147258A; IL113532A0; EP0758340A1; EP0758340B1; US5990328A; NO964627L; AU2244995A; IL113532A; DK0758340T3; FI964410A0; WO1995029932A1; ES2128052T3; DE69507139D1; NO964627D0; US5750744A; DE69507139T2; NZ283974A; FI964410A; GR3029433T3; US5869475A

Description

KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY • · ·· ·

Ο Ο ^r.';

62.988/SM

Eljárás 4-amino-A⁴-3-ketoszteroidok előállítására 4-nitro-A⁴-3-ketoszteroidokon keresztül

Merrell Pharmaceuticals Inc., Cincinnati, Ohio, Amerikai Egyesült Államok

Feltalálók: WEINTRAUB Philim Parvin, Cincinnati,

GATES Cynthia Ann, Fairfield,

ANGELASTRO Michael Richard, Mason, C t < n o /'tv j CURRAN Timothy Thomas, Cincinnati,

FLYNN Gary Alán, Cincinnati,

KING Chi-Hsin Richard, Cincinnati,

Ohio, Amerikai Egyesült Államok ο d .

A bejelentés napja: 1995. április 11.

r í t

Elsőbbsége: 1994. május 2. (08/231,433) Amerikai Egyesült Államok

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/US95/04399

A nemzetközi közzététel száma: WO 95/29932

A technika állása

A találmány tárgya általános androgén és/vagy esztrogén gátló vegyületek, azok felhasználása a C₁₇_₂₀ Ház, a C_16l,-hidroxiláz és az 5«-reduktáz gátlására és módszer a 4-amino-A⁴-3-ketoszteroidok előállítására.

- 2 Az androgén és esztrogén bioszintéziseket a C₁₇.₂₀ Ház és C₁₇„-liázhidroxiláz szteroid duálisan aktiváló enzimek hatása szabályozza. Míg a C₁₇.₂₀liáz katalizálja a két szénatomos mellékláncot tartalmazó szteroidok átalakulását a Ι/β-helyzetben, a C_17l,-liáz-hidroxiláz az ilyen molekulához a 17<x-helyzetben hidroxil-csoportot köt. A C₁₇._2O liáz működése fontos prekurzor molekulákat valósít meg tesztoszteronf, 5</.-dihidroxi-tesztoszteront és az esztrogéneket, főként az esztront és az extradiolt képezve. Hatékony gátlása a C₁₇_₂₀Háznak mind az androgén, mind az esztrogén szteroidok képződésének gátlására használható és ily módon felhasználható olyan betegségek vagy elváltozások kezelésére, ahol ezeknek az endrogéneknek és/vagy esztrogéneknek káros szerepe van.

Az 5<x reduktáz enzim a tesztoszteron átalakulását katalizálja dihidrotesztoszteronná vagy DHT-vé ('^-hidroxi-5u-androsztán-3-on). A DHT a tesztoszteronnál potenciálisan erősebb androgén és bizonyos szövetekben, különösen a kötőszövet növekedésében mint egy vég-organikus effektor működik. Ennek az enzimnek a hatékony gátlása felhasználható a DHT képződésének megőrzésére és ily módon felhasználható az androgén függő elváltozások kezelésére, különösen azokban az esetekben, melyekben a DHT alapvető káros szerepet játszik.

Mint az előzőekben említett inhibitorok az androgén és/vagy esztrogén bioszintézis különböző lépéseire hatnak, mindegyiknek ismert a terápiás alkalmazása a különböző androgén és/vagy esztrogén függő elváltozások kezelésére és kívánatos alternatív eljárások kidolgozása ezen inhibitorok szintézisére. Bizonyos 4-amino-szteroid származékokat melyeket a jelen bejelentésben ismertetett eljárással állítunk elő, a 4,767,061 számú amerikai egyesült

62.988/SM

államokbeli szabadalmi leírás ismertet (engedélyezve 1988. július 12.), továbbá az 1992. június 9-én engedélyezett 5,120,840 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás és az 1992. szeptember 1-jén engedélyezett 5,143,909 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ír le. Ezen leírások a vegyületek háromlépéses szintézisét ismertetik, belefoglalva a 4,5-epoxi-szteroid származékok képződését, melyet nátrium-aziddal történő kezeléssel 4-azido-szteroid származékká alakítanak. A 4-azido-szteroid származékokat ezután redukálva a 4-amino-szteroid származékokhoz jutnak. Ezekben a szintézisekben a nátrium-azid felhasználása egészségi kockázatot jelent a vegyület instabilitása miatt. Az átlagos szakember biztonságosan kis méretben ezen eljárást végre tudja hajtani laboratóriumban, azonban csupán kis mennyiségű nátrium-azid használható. Nagy mennyiségű ipari termelés során azonban a 4-amino-szteroid származék előállítása nagy mennyiségű nátrium-azid felhasználását és annak sok származékát a hidrazoilsav alkalmazását követeli.

Ezen szintézisben, mely nagy mennyiségű nátrium-azidot és hidrazoilsavat igényel, a megemelt hőmérséklet is jelentős kockázatot jelent az emberi életre és környezetre. A környezeti és egészségi kockázatok a megfelelő kémiai üzemek tervezésével csökkenthetők, azonban az ilyen költségek korlátozóak és az ilyen rizikók sem szüntethetők teljesen meg. A 4-amino-A⁴-szteroid háromlépéses szintézisét 4-azido-intermedieren keresztül grafikusan az A reakcióvázlat mutatja.

A A⁴-3-ketoszteroidok nitrálására tett korábbi erőfeszítéseket Saub és munkatársai a Tetrahedron 20:373 (1964) irodalmi helyen ismerteti, továbbá

Suginome és munkatársai J. Bull, Chem. soc. Jap. 62:1343 (1989) publikációban, arról számolnak be, hogy a megfelelő 2-nitro-szteroid képződik a nitrálás

62.988/SM • · · · · folyamán. Ez a tény azt tételezi fel, hogy a nitrálás kinetikusán a 2,4-dienoláton keresztül erőteljesebben megy végbe, mint a 3,5-dienoláton, mely termodinamikus dienolát. A 4-nitro-szteroidok képződése olyan körülményeket igényel, amely támogatja a 3,5-dienolátok képződését a 2,3-dienolátokkal szemben.

A találmány tárgya

A találmány tárgya új eljárás a 4-amino-3-ketoszteroidok előállítására 4-nitro-3-ketoszteroidok képződésén keresztül, melyek a megfelelő 3,5-dienolát nitrát termékei.

A találmány tárgya új eljárás az (I) általános képletű vegyületek - ahol a képletben

R jelentése hidroxilcsoport. 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport. 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR_zR_;í csoport, ciklopropil-oxi-csoport, ciklopropil-amino-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

R₁ jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R és Rt együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigénatom kettőskötéssel kötődik a 17-es szénatomhoz:

R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₅ és R₆ együttesen =0 atomot jelenthet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a

11-es szénatomhoz;

R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

62.988/SM • · · ·

- 5 R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport; és a gyűrűn a-----kettős vagy egyes kötést jelez:

a «ιοίil| vagy Ilin >< jelzi, hogy valamely szubsztituens α-konfigurációjú (a papír síkja alatt);

a vagy |^»jelzi, hogy valamely szubsztituens β-konfigurációjú (a papír síkja felett), azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor R! jelentése hidrogénatom; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom; - előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) valamely (II) általános képletű kiindulási vegyületet - ahol a képletben R-R_g, és 3222Ξ- továbbá -.hkiii vagy Iliin»· és kivagy to**» jelentése a fentiekben megadott - valamely hatékony mennyiségű erős bázissal, emelt hőmérsékleten vagy alkalmas hőmérsékleten a megfelelő termodinamikus dienolát kialakulásáig alkalmas ideig reagáltatunk, majd valamely neutrális és nitráló szert adagolva a 4-nitroszteroidhoz jutunk, majd

b) a 4-nitroszteroidot valamely alkalmas redukálószerrel reagáltatjuk, és

c) kívánt esetben a kapott 4-amino-szteroidot valamely gyógyászatilag elfogadható sóvá alakítjuk.

Amennyiben a nitrálás utáni modifikációra igény merül fel, ezt a szokásos módon ismert eljárásokkal hajtjuk végre. Például a 4-nitro-tesztoszteron 17-es hidroxilcsoportjának oxidációja a megfelelő 17-ketont adja, mint azt a B reakcióvázlat mutatja.

A védőcsoportok eltávolítását a C reakcióvázlat szerint hajtjuk végre.

62.988/SM

(k ί

A találmány tárgya továbbá bizonyos 4-nitro-szteroidok, melyek a C₁₇_₂₀liáz, C₁₇„-hidroxiláz és/vagy az 5</-reduktáz inhibitoraiként használhatók fel.

Ezek a vegyületek a (Ili) általános képlettel jellemezhetők, ahol a képletben R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R„ csoport, ciklopropil-oxi-csoport, ciklopropil-amino-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

R, jelentése hidrogénatom, hiroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport; Rt és R₂ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigénatom kettőskötéssel kötődik a 17-es szénatomhoz;

R₅ és R₆ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigénatom kettőskötéssel kötődik a 11-es szénatomhoz:

R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport; és a-----a gyűrűn azt jelzi, hogy a kötés egyes vagy kettős kötés;

a hiiiii vagy lm»· azt jelzi, hogy valamely szubsztituens (/-konfigurációjú (a papír síkja alatt);

a vagy azt jelzi, hogy valamely szbsztituens β-konfigurációjú (a papír síkja felett);

azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor Rí jelentése hidrogénatom; és

62.988/SM azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom.

A találmány tárgya továbbá módszer a C₁₇.₂o liáz, C_17lí-hidroxiláz és/vagy

5u-reduktáz szteroid gátlására oly módon, hogy hatékony gátló mennyiségű találmány szerinti vegyületeket adunk.

A találmány részletes leírása

A kiindulási anyagok ismertek vagy ismert módon állíthatók elő.

A leírásban használt „1-6 szénatomos alkanoil kifejezés egyenes vagy elágazó láncú alkanoil-csoportot jelent, amely 1-6 szénatomot tartalmaz, beleértjük ebbe a meghatározásba a formilcsoportot, az acetilcsoportot, a propionil-csoportot, a butirilcsoport, az izo-butiril-csoportot, a hexanoil-csoportot és hasonlókat.

Az „1-4 szénatomos alkanol kifejezés egyenes vagy elágazó láncú 1-4 szénatomos alkohol csoportot jelent, mely legalább egy hidroxil funkciós csoportot tartalmaz, de egy adott szénatomhoz egy hidroxilcsoportnál több nem kapcsolódhat. Beleértjük ebbe a kifejezésbe a metanolt, az etanolt, az n-propanolt, az izopropanolt, az n-butanolt, a 2-butanolt, a 2-metil-1-propanolt, a 2-metil-2-propanolt, az 1,2-dihidroxi-etanolt, az 1,3-dihidroxi-izopropanolt és hasonló vegyületeket.

Az „1-6 szénatomos alkil kifejezés alatt telített egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogén csoportot értünk, mely 1-6 szénatomot tartalmaz. Ilyen csoportok a metilcsoport, az etilcsoport, az n-propil-csoport, az izopropil-csoport, az n-butil-csoport, az izobutil-csoport, a terc-butil-csoport, az n-pentilcsoport, n-hexil-csoport.

62.988/SM

Az „1-8 szénatomos alkilcsoport kifejezés alatt telített egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogén csoportokat értünk, melyek 1-8 szénatomot tartalmaznak. Ilyen csoportok a metiicsoport, etilcsoport, n-propil-csoport, izopropil-csoport, n-butil-csoport, izobutil-csoport, terc-butil-csoport, n-pentil-csoport, n-hexil-csoport, n-heptil-csoport. n-oktil-csoport.

Az „1-4 szénatomos alkán-tiol kifejezés alatt telített vagy elágazó láncú

1-4 szénatomos szénhidrogén csoportot értünk, mely tiol funkciós csoportot tartalmaz. Ebbe a kifejezésbe értjük a metil-tiol-csoport, az etil-tiol-csoportot, a propil-tiol-csoportot, az izopropil-tiol-csoportot. az n-butíl-tiol-csoportot, az izobutil-tiol-csoportot, a t-butil-tiol-csoportot.

Az „acetil-tiol-alkán kifejezés alatt telített egyenes vagy elágazó láncú

1-8 szénatomos szénhidrogén csoportot értünk, mely valamely acetil-tiol funkciós csoportot tartalmaz. Ilyen csoportok az acetil-tio-metil-csoport, az acetil-tio-etil-csoport, az acetil-tio-propil-csoport, az acetil-tio-izopropil-csoport, az acetil-tio-butil-csoport, az acetil-tio-s-butil-csoport, az acetil-tio-t-butil-csoport és hasonlók.

Az „1-6 szénatomos alkanoil-oxi kifejezés alatt telített egyenes vagy elágazó láncú 1-8 szénatomos szénhidrogén csoportot értünk, mely valamely karboxilát funkciós csoportot tartalmaz. Ilyen csoportok a formiloxi-csoport, az acetoxi-csoport, a propionil-oxi-csoport, az izopropionil-oxi-csoport, az n-butiril-oxi-csoport, az s-butiril-oxi-csoport, a t-butiril-oxi-csoport, az n-pentanoil-oxi-csoport, az s-pentanoil-oxi-csoport, a t-pentanoil-oxi-csoport, az n-hexanoil-oxi-csoport és hasonlók.

A „gyógyászatilag elfogadható só kifejezés az átlagos szakember számára könnyen meghatározható és valamely savaddíciós sót jelent, melynek nincs szignifikáns toxikus hatása a betegre és megfelelő formulálási és tárolási

62.988/SM

- 9 tulajdonsággal rendelkezik. Ilyen sók akár szervetlen akár szerves sók, adott esetben azok hidrátjai vagy vízmentes szubsztanciák lehetnek. Az alkalmas szervetlen savak, melyek ilyen megfelelő sókat képeznek, a sósav, a hidrogén bromid, a kénsav, a foszforsav: a fémsók. így a nátrium-monohidrogén-ortofoszfát és a kátium-hidrogén-szulfát. A szerves savak, melyek megfelelő sókat képeznek, mono-, di- vagy tri-karbonsavak lehetnek. Ilyen savak lehetnek például az ecetsav, a glikolsav, a tejsav. a piruvinsav, a malonsav, a borostyánkő sav, a glutársav, a fumársav, a malinsav. a borkösav, a citromsav, az aszkorbinsav, a maleinsav, a hidroxi-maleinsav, a benzoesav, a hidroxi-benzoesav, s fenil-ecetsav, a fahéjsav, a szalicilsav. a 2-fenoxi-benzoesav és a szulfonsavak, így a metán-szulfonsav és a 2-hieroxi-benzoesav és a 2-hidroxi-etánszulfonsav.

A D reakcióvázlat bemutatja azt a találmány szerinti eljárást, ahol a Δ⁴-3 on szteroidot a megfelelő 4-nitro vegyületté nitráljuk oly módon, hogy először hatékony mennyiségű kielégítően erős bázissal reagáltatva kialakítjuk a Δ ' dienolátot. A „hatékony mennyiségű erős bázis kifejezés alatt valamely olyan mennyiségű és erős alkalmas bázist értünk, mely a A⁴-3-on kiindulási vegyületet alkalmas reakciókörülmények között termodinamikus dienoláttá alakítja.

Az alkalmas reakciókörülmények megválasztásában a megfelelő bázis és annak koncentrációja más reakciókörülményektől függ, így a szubsztituensek számától és típusától, a reakcióidőtől, az oldószertől és az alkalmazott hőmérséklettől. A termodinamikus dienolát intermedier képződésének paramétereit a 6-os szteroid szénatom deprotonálásán keresztül az alábbi szövegrész részletezi. A felhasználható „erős bázisok kifejezés alatt fém alkoholátokat és hasonló vegyületeket, előnyösen 3-6 szénatomos egyenes szénláncú alkoho62.988/SM

lók sóit értjük. Különösen előnyösen alkalmazhatók a 3-5 szénatomos egyenes láncú alkoholok, így például a kálium-terc-butoxid.

A „hatékony mennyiségű erős bázis a szteroidon lévő savas protonok számától függően változik. Valamely „savas proton alatt olyan csoportot értünk, amely könnyen disszociál. például hidroxilcsoport, CO₂H csoport, NH csoport. Mindegyik savas proton egy további ekvivalens bázis felhasználását igényli. A felhasznált jellegzetes bázisokat jelen leírásban a „nem savas proton” kifejezéssel jelöljük, amely a szteroidokban helyet kap és mennyiségük legalább két mól ekvivalens a szteroid vegyülethez viszonyítva. Előnyösen 2-4 molár ekvivalenst, különösen előnyösen 2 molár ekvivalenst alkalmazunk kizárólagosan a savas protonokból.

A denolát intermedier képződése a nitráiási reakcióban a szakember számára ismert módon szignifikáns módon a reakcióhőmérséklettel és a reakcióidővel befolyásolható. Megemelt hőmérsékleten rövidebb reakcióidő várható, míg alacsonyabb hőmérsékleteken alacsonyabb a reakcióidő. A találmány szerint eljárva a gyakorlatban „a megemelt hőmérséklet” 50-100°C, előnyösen 50-83°C, különösen előnyösen 83°C körüli érték. A megemelt hőmérséklet „kielégítő időtartama megfelelő termodinamikus dienolát képzéséhez” kb. 15 perc és 8 óra, előnyösen 15-180 perc. különösen előnyösen 60 perc körüli reakcióidő.

Az alacsonyabb hőmérséklet valamely „alkalmas hőmérséklet” tartomány alatt 15-50°C, előnyösen 17-30°C, különösen előnyösen 20-25°C körüli hőmérsékletet értünk. Ezeken a hőmérsékleteken „kielégítő idő a termodinamikus dienolát képzéséhez” 15 perc - 48 óra, előnyösen 1-25 óra és különösen előnyösen 10-24 óra körüli érték. A reakció kitermelése az alacsonyabb reakcióhőmérsékleten és hosszabb reakcióidővel növelhető, és ez előnyös a talál62.988/SM

- 1 1 mány szerint a gyakorlatban eljárva. Bizonyos oldószerek, melyeket előnyösen alkalmazhatunk a találmány szerinti eljárásban, a fenti hőmérsékletnél alacsonyabb végfagyáspont értékkel rendelkeznek, ily módon enyhén melegíteni és főleg keverni szükséges az oldószereket és a reaktánsokat, mielőtt a reakciót végrehajtjuk ezeken az alacsonyabb hőmérsékleteken.

A nitrálás végrehajtásához szükséges megfelelő oldószerként bármely egyenes vagy elágazó láncú 2-5 szénatomos alkán alkohol alkalmazható. Különösen előnyösen alkalmazhatók a szekunder és tercier alkoholok. Például előnyösen etanolt vagy izopropanolt használunk, hatékonyan alkalmazhatjuk a tercier-amil-alkoholt és a tercier-butil-alkoholt is. Különösen előnyös oldószer a terc-butanol.

A nitrálási reakció bármely neutrális nitráló szerrel, például alkil-nitrátokkal végrehajtható. A megfelelő alkil-nitrát kiválasztását a reaktivitás és a költségek megfontolása határozza meg. Alkalmas alkil-nitrátok bármely telített egyenes vagy elágazó láncú szerves nitrátok, melyek 3-8 szénatomot tartalmaznak. Előnyös alkil-nitrátok például az izopropil-nitrát, az izobutil-nitrát és a

2-etil-hexil-nitrát. Különösen előnyösen alkalmazható alkil-nitrát az izopropil-nitrát.

A 4-nitroszteroid vegyületek valamely alkalmas redukálószerrel történő redukciója önmagában ismert módon hajtható végre, például akár kémiai vagy katalitikus úton. Tipikus kémiai katalizátorok: 1) cink fém ecetsavban; 2) cink fém metanolban, akár ammónium-kloriddal vagy anélkül; 3) ón klorid etanolban; 4) vas ecetsavban és etanolban. Valamely hatékony katalizátor rendszer Lindlar katalizátort foglal magában (palládium kálcium-karbonátra felvíve ólommal és kinolinnal) valamely alkohol oldószerben, így például etanolban. Más rendszerek is használhatók a katalitikus hidrogénezésre, például aktív

62.988/SM ·· » ·

- 12szenes palládium és ammónium-formiát metanolban, aktivszenes palládium és trifluor-ecetsav etanolban vagy palládium bárium-szulfáton etanolban.

A találmány szerinti vegyületek in vitro enzimatikus inhibitor aktivitása C₁₇.₂₀ liáz szteroid inhibitorként patkányról vagy kinomogus majom tesztikuláris szövetből nyert enzim mikroszomális preparátumok vizsgálatával történt. A mikroszómákat a kinomogus majmokból vagy patkány tesztikuláris szövetekből izoláltuk. A vizsgált vegyületet dimetil-szulfoxidban oldottuk és 0,05M káliumfoszfát pufferban hígítottuk (a kinomogus majom liáz aktivitása esetén a pH = 7,4 és a patkány liáz aktivitása esetén a pH = 7,2) és ily módon a megfelelő tesztvegyület koncentrációt állítottuk be. A DMSO végső vizsgálati koncentrációja 0,1% (térfogat/térfogat). A vizsgálatok során NADPH regeneráló rendszert használtuk, mely 1M NADPH-t, 5 mM glükóz-6-foszfátot, 1 lU/ml glükóz-6foszfát dehidrogenázt és mikroszomális proteint foglal magában a 0,2 ml teljes térfogatban.

A C₁₇_2o liáz inaktiválásának időfüggését oly módon határoztuk meg, hogy a tesztvegyületet 20-62 pg/ml mikroszomális proteinnel, 0,05 M kálium-foszfát pufferben pH = 7,4 értéken NADPH regeneráló fentiek szerint leírt rendszerben 34°C hőmérsékleten 0-40 percen keresztül inkubáltuk. Az enzimaktivitás mérésére ezután 180 pl alikvotot vettünk a vizsgálandó anyagból. Mindegyik alikvothoz [7-³H]-17<x-hidroxi-pregnenolont adtunk (11,2 mCi/mmol; 0,2 pCi vizsgálatonként) plusz nem jelzett 17<<-hidroxi-pregnenolont adagolva a

0,3 μΜ végső teljes szubsztrát koncentrációt állítottunk be, ezután 34°C hőmérsékleten 6 percen keresztül inkubáltunk. A teszvegyület reverzibilis gátlásának meghatározására a reakciót szubsztrát és inhibitor (vagy DMSO pufferben kontrollként) adagoltunk szimultán más vizsgálandó komponensekkel. A

62.988/SM

13·*··· τ *· • · · · · · « ····· · » « ·· · ►·· V kinomogus majom liáz esetében felhasznált szubsztrát a 7-³H-17a-hidroxi-pregnenolon, melyet 0,3 μ szubsztrát végkoncentrációban kaptunk. A patkány liáz aktivitás vizsgálatára [1,2-³Hj- 17</-hidroxi-progesztelon szubsztrátot használva 0,1 μΜ szubsztrát végkoncentrációt kaptunk (K_m = 0,095 μΜ). A teljes vizsgálat során az inkubálást 34°C hőmérsékleten percen keresztül végeztük mind a patkány mind a majom liáz esetében.

A találmány szerinti vegyületek 5i/-reduktáz inhibitor aktivitását oly módon határoztuk meg, hogy laboratóriumi állatok prosztata szövetéből 5u-reduktáz enzim készítményeket mikroszomálisan preparáltunk és használtunk. A mikroszómákat specifikusan stimuláltuk a cynomolgus majom prosztata szövetből. A mikroszomális készítmények fehérje koncentrációját a minták felhasználására mértük. Az individuális vizsgálatok során a cynomolgus majom prosztata 5<x-reduktáz aktivitást 0,1 M kálium-foszfát-nátrium-citrát pufferban pH = 5,6 értéken 0,1 bovin szérum albumin (tömeg/térfogat), 1,0 mM nátrium EDTA-ban, 7-96 mg mikroszomális proteint felhasználva (1,0 mM NADPH-t,

5,0 mM glukóz-6-foszfátot és 1 lU/ml glükóz-6-foszfát dehidrogenázt, [1,2-3H]tesztoszteront (0,15 pCi) vizsgáltuk a jelzetten tesztoszteron értéke a szubsztrát kívánt koncentrációjához DMSO-ban oldott inhibitort felhasználva került vizsgálatra, mely oldás után a rendszert 0,1 M kálium-nitrát citrát pufferben (50:50) hígítottuk, a pH-t 5,6 értékre állítottuk és ily módon értük el a végső 0,1% (térfogat/térfogat) koncentrációt DMSO-ban. Ugyanaz a puffer és DMSO inhibitor nélkül került felhasználásra a kontroll vizsgálatokban. A háttér radioaktivitást valamennyi vizsgálat során meghatároztuk, eltekintve az enzimet tartalmazó vizsgálatoktól. A vizsgálatokat kétszer ismételtük. A reakciót tesztoszteron adagolásával iniciáltuk és 30 percen keresztül 25°C hőmérsékle62.988/SM ten Dubnoff® shakerben inkubáltunk. A vizsgálatokat ezen körülmények között lineárisan az időben 30 percig végeztük.

A gátlás teszteléssel a találmány szerinti vegyületeket a tesztoszteronnal együttesen adagoltuk. Az IC₅₀ érték meghatározására a K_m szinten meghatározott tesztoszteron koncentrációt használtuk. A tesztoszteron K_m értékét többszörös méréssel 0,025 pM - 0.091 pM cynomolgus 5</.-reduktáz határok között határoztuk meg.

Mindegyik vizsgálatot 5 ml kloroform:metanol (2:1) adagolásával fagyasztottuk be. Ezután mindegyik vizsgálati anyaghoz 2,5 pg vivő szteroid terméket és szubsztrátot, továbbá 0,8 ml desztillált deionizált adagoltunk. A liáz vizsgálatra vivő szteroidként 17</-hidroxi-pregnenolont, dehidroepiandroszteront és androszt-5-én-3B,17B-diolt (cynomolgus majom liáz vizsgálat) vagy 17u-hidroxi-progesztelont, androszten-diont és tesztoszteront, (patkány liáz vizsgálatra) használtunk. Vivő szteroidként tesztoszteront, dihidro-tesztoszteront és 3,17-andosztrán-diolt adtunk az 5<<-reduktáz vizsgálati anyaghoz. A radiojelzett és jelzetlen szteroidokat Moore and Wilson (Methods in Enzymol., eds. O'Malley, B.W. and Hardlan, J.G. 36, 1975, pp. 466-473) irodalmi helyen leírt módszerrel extraháltunk. A szteroidokat tartalmazó szerves fázist nitrogén atmoszférában bepároltuk. A liáz vizsgálatra a párlási maradékot 18% tetrahidrofurán/hexán rendszerben oldottuk (térfogat/térfogat%). Az 5ct-reduktáz vizsgálatokra a száraz szteroid párlási maradékot 3% (térfogat/térfogat%) izopropanol-hexán rendszerben oldottuk, majd a szteroidokat normál fázisú HPLC-t használva elválasztottuk LiCrosorb® DIOL származék szilikagél oszlopon (10 pm; 4 x 250 mm) 3%-7.5% izopropanolos-hexán gradienst alkalmazva, majd az elúciót izokratikus körülmények között 75% izopropanol/hexán

62.988/SM (térfogat/térfogat) megvalósítva folytattuk. A szteroid csúcsok radioaktivitását Radiomatic® Model HS vagí Model A515 Flo-One detektort használva mértük mindkét liáz és az 5<x-reduktáz vizsgálat során.

Az enzim aktivitást oly módon mertük, hogy százalékosan kiszámoltuk a szubsztrátnak a termékekké történő átalakulását és az eredményeket a kontrolihoz viszonyítva százalékos gátlásban fejeztük ki. A kísérleti adatokat két megfelelő paraméter módéit beépítve 6 inhibitor koncentrációnál az IC₅₀ értéket meghatároztuk. A fentiek szerint eljárva a vizsgált vegyületekkel a következő eredményeket nyertük: (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on majom tesztikulárC₁₇_2o liáz esetében 41 nM IC_S„ értéket mutatott ez az érték 86 nM a majom tesztikulárC₁₇.₂₀ liáz esetében és 17 nM a majom prosztata 5<x-reduktáz esetében. Ha a fentiek szerint vizsgált vegyületeket a cynomolgus majom tesztikuláris házzal is teszteltük, az 1. táblázat szerinti eredményeket kaptuk.

1. táblázat

Vegyület	Preinkubálás idő	Koncentráció (μΜ)	Gátlás %
17L-ciklopropil-oxi-4-	0	1	78
-nitroandroszt-4-én-3-		0,1	36
-on	40	1 0,1	95 79
(20S)-20-merkapto-	0	1	69
-metil-4-nitropregn-4-		0,1	0
-én-3-on	40	1 0,1	93 26

A C₁₇_₂₀ szteroid ház, az 5</-szteroid reduktáz és/vagy a 17a-szteroid-hidroxiláz gátlásában „a hatékony gátló mennyiség alatt a találmány szerinti vegyület olyan mennyiségét értjük, mellyel az enzim gátló hatást elérjük. A pontos mennyiség, amely a kívánt szint eléréséhez szükséges, az enzim koncentrációtól, a felület nagyságától, a hőmérséklettől és más jellegzetes kísérleti

62.988/SM

- 16paramétertől függ és a gyakorló szakember számára jól ismert. Amennyiben ilyen vegyületeket adunk a betegeknek, a minimális hatékony mennyiség az a mennyiség, amellyel a terápiás hatást elérjük. A találmány szerinti vegyületeknek a dózisa különösen a betegtől és a beteg súlyától függően széles körben. Például a kezelendő betegtől és a kezelendő elváltozás súlyosságától függően a találmány szerinti vegyületek hatékony gátló mennyisége 0,625-62,5 mg/testtömeg kg/nap, előnyösen 0,5-30 mg/testtömeg kg/nap. Orális adagolás esetén például a dózisegység 10-500 ml találmány szerinti vegyületet tartalmaz. Alternatív megoldásként a találmány szerinti vegyületeket parenterális úton vagy implantátumban adhatjuk.

A következő példákban találmányunkat illusztráljuk anélkül, hogy igényünket csupán azokra korlátoznánk. A leírásban használt kifejezésekben a „szobahőmérséklet 20-23°C hőmérsékeltet jelent.

1, Művelet: 4-nitroszteroidok előállítása

1. Példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása (1)

1,70 g (15 mmol) kálium-terc-butoxidot és 4,65 (5 mmol) (20S)-20hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont 25 ml terc-butanolban elkeverünk és az elegyet 75 percen keresztül argon atmoszférában reflux hőmérsékleten tartjuk. Ezután a refluxáló reakcióelegyhez 0,51 ml (50 mmol) izopropil-nitrátot adunk, mely exoterm reakciót eredményez. 1 perc elteltével a reakcióedényt a fűtés alól elmozdítjuk és szobahőmérsékletre hütjük. A lehűlt reakcióelegyet ezután 5 ml ecetsav adagolásával megsavanyítjuk és 1 napon keresztül keverjük. Az elegyet ezután diklórmetánnal hígítjuk, amíg elkülönült fázis nem képződik, mely elegendő a szintetizált termék oldásához. Ezután a szilárd terméket szűréssel elkülönítjük és diklór-metánban mossuk. A kapott anyagokat mind a szürletet,

62.988/SM • · · · ·

17mind a mosófolyadékot egyesítjük és bepároljuk. A párlási maradékot glikolmetánban oldjuk, oszlopkromatográfiásan szilikagélen tisztítjuk, és ily módon (20S)-20-hidroxi-metil-4-hidropregn-4-én-3-ont kapunk. Vizes acetonból ezt az anyagot átkristályosítva fehér pálcikákat kapunk. Olvadáspont 166-168°C.

IR 3435, 1696, 1623(m), 1633 cm '

MS(CI) 376 (100%, M+1), 358 (30%, Μ + 1-Η,Ο) ¹H-NMR (CDCI₃) ó 0,73 (3H, s. C_is-Me), 1,06 (d, C₂₀-Me), 1,29 (s, C₁₉-Me),

3,38 (1H, dd, 1/2.C₂₁-CH₂), 3,64 (1H, dd. 1/2.C₂₁-CH₂).

Elemanalízis adatok a C₂₂H33NO.i.(0,2)H₂O összegképletre:

számított: C, 69,70; H, 8,80; N, 3,62;

talált: C, 69,78; H, 9,13; N, 3,40.

1A példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása

1,70 g (15 mmol) kálium-terc-butoxidot és 1,65 g (5 mmol) (20S)-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont terc-butanolban elkeverünk és a keveréket 90 percen keresztül argon atmoszférában reflux hőmérsékleten tartjuk. A keveréket ezután szobahőmérsékletre hütjük és egy folyamatos adagban 0,51 ml (5 mmol) izopropil-nitráttal kezeljük. 18 óra elteltével a reakcióedény tartalmát 5 ml ecetsavval megsavanyítjuk, majd diklór-metánnal hígítjuk. A szilárd terméket elkülönítjük és további diklór-metánnal mossuk. A szürletet és a mosófolyadékot az 1. példa szerint tisztítva és átkristályosítva a (20S)-20-hidroxi-metil-4nitropregn-4-én-3-onhoz jutunk.

1B példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitro-pregn-4-én-3-on előállítása

1,70 g (15 mmol) kálium-terc-butoxidot és 1,65 g (5 mmol) (20S)-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont 25 ml terc-butanolban elegyítünk és a keveré62.988/SM ···· · · ······ • · · · · · · • ····· · · · · • · · ··· · *

- 18két 3 órán keresztül szobahőmérsékleten argon atmoszférában keverünk. A keveréket ezután egy folyamatos adagban 0.51 ml (5 mmol) izopropil-nitrátot adunk, majd a keveréket 1 napon át keverjük. Ezután 5 ml ecetsavat adagolunk. 1 óra elteltével a reakcióedényben maradt szilárd terméket szűrjük és diklór-metánnal mossuk. Az egyesített szürleteket és mosási maradékot tisztítjuk az 1. példa szerint eljárva és ily módon kristályos formában (20S)-20hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-ont kapunk.

1C példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása

7,6 g (67,8 mmol) kálium-terc-butoxidot és 6,6 g (20 mmol) (20S)-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont terc-butanolban 60 percen keresztül argon atmoszférában reflux hőmérsékletre melegítünk. Ezután egy folyamatos adagban 2,34 ml (20 mmol) izopropil-nitrátot adagolunk. 20 perc elteltével ismét refluxálunk, majd a reakcióedényt szobahőmérsékletre hütjük. 10 ml ecetsav adagolása után a reakciókeveréket 18 órán keresztül keverjük, majd a keveréket 200 ml diklór-metánnal hígítjuk. A szilárd anyagot eltávolítjuk, szűrjük és a mosási maradékkal egyesítjük, majd az 1. példa szerinti tisztítási eljárást alkalmazva jutunk a kristályos (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on-hoz.

1D példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on előállítása

7,6 g (67,8 mmol) kálium-terc-butoxidot és 6,6 g (20 mmol) (20S)-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont terc-butanolban egyesítünk és a keveréket 120 percen keresztül reflux hőmérsékleten tartjuk. Ezután egy folyamatos adagban

3,56 ml (20 mmol) 2-etil-hexil-nitrátot adagolunk. 10 perc elteltével a reakcióedényt szobahőmérsékletre hütjük. A reakciót ezután 9 ml ecetsav adagolásával befagyasztjuk és 1 napon át keverjük. 200 ml diklór-metánnal történő

62.988/SM ····· · · · ···· • · · · · · · » - ······· r r ··«······« ·· · · · · · ·

- 19higítás után a szilárd terméket eltávolítjuk, mossuk és a mosási maradékkal egyesítve az 1. példa szerinti tisztítási eljárást alkalmazva kristályos (20S)-20hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on-hoz jutunk.

1E példa (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása

6,18 g (18,7 mmol) kristályos (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3ont 91 ml terc-butanolban 6,43 g (57.3 mmol) 3 molekvivalens kálium-tercbutoxiddal reagáltatunk reflux hőmérsékleten 1,5 órán keresztül. Ezután az elegyhez cseppenként 20 perc alatt 2.9 ml (1,6 molekvivalens) izopropil-nitrátot adagolunk, majd az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre hülni és 1 napon keresztül (12-18 óra) keverjük. A reakciókeveréket ezután 6,2 ml ecetsavval kezeljük, 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük és 400 ml vízbe öntjük. 4 x 100 ml-es diklór-metános extrakció után valamennyi szerves fázist egyesítjük és magnézium-szulfát felett szárítjuk. Szűrés után a szurletet csökkentett nyomáson bepárolva vöröses olajat kapunk, melyet szilikagél szűrőn szűrve tisztítunk (hexán/Et₂O:CH₂CI₂ = 4:2:1, 2,5 liter, majd 2:2:1, 1 liter). A megfelelő fázisok egyesítése és bepárlása után a kapott anyagot átkristályosítjuk. Az átkristályosítást oly módon végezzük, hogy a forró izopropanolban képződő anyaghoz addig adagolunk vizet, míg a teljes kiválás meg nem történik, és ily módon eljárva 2,66 g cím szerinti vegyületet kapunk.

2. példa

17B-hidroxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on előállítása (2)

Az 1. példa szerint eljárva 2,88 g (10 mmol) tesztoszteront, 3,40 g (30 mmol) kálium-terc-butoxidot és 1,01 ml izopropil-nitrátot reagáltatunk és ily módon 17B-hidroxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on-hoz jutunk. Olvadáspont 158160°C (aceton-hexán)

62.988/SM

- 20IR 3533, 1689, 1615 (m), 1635 cm'

MS(CI) 334 (100%. M+1), 316 (50%, M + 1-H₂O) ¹H-NMR ó 0,80 (3H, s, C₁₈-Me). 1.30 (s. C₁₉-Me), 3,66 (1H, t, C₁₇.H).

A fenti kristályosításból származó egyesített filtrátumot és mosófolyadékot 3 ml ecetsav-anhidriddel és 6 ml piridinnel kezeljük. 1 napig szobahőmérsékleten történő állás után a reakcióelegyet vízzel 1 órán keresztül keverjük. A kivált szilárd terméket a folyadéktól dekantálással elválasztjuk, majd kromatográfiásan tisztítva 17B-acetoxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on-t kapunk. Olvadáspont 216-217°C (vizes aceton) (2j.

IR (CHCI₃) 1725, 1695, 1623(m), 1536, 1256 cm'¹

MS(CI) 376(100%, M+1), 316(35%. Μ + 1-AcOH) ’H-NMR (CDCI3) 0,84(3H, s, C,_H-Me). 1,30(s, C_t9-Me), 2,05(s, COMe),

5,62(1H, dd, C₁₇-H).

Mint azt korábban megemlítettük a 17B-hidroxi-4-nitro-szteroidok a megfelelő 17-onná alakíthatók, mint azt a következő példa ismerteti.

2A példa

4-nitroandroszt-4-én-3,17-dion előállítása (2A)

10,56 g (31,7 mmol) 17B-hidroxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on (4-nitrotesztoszteron) 900 ml acetonban elkészített oldatát -6°C-ra hütjük és 10,0 ml Jones reagenssel kezeljük. Miután a feleslegben lévő reagenst metanollal elbontottuk, a kapott szilárd terméket szűréssel elkülönítjük. A szürletet bepároljuk, például laboratóriumi forgó bepárlón csökkentett nyomáson, majd oszlopkromatográfiásal szilikagélen tisztítva a 4-nitroandroszt-4-én-3,17-dionhoz jutunk. Olvadáspont: 205-205,5°C (bomlik) (aceton-hexán).

IR 1738, 1622, 1533, 1373 cm¹

MS(CI) 332 (100%, M+1)

62.988/SM

Ή-NMR (CDCI₃) 0,93 (s, C₁₈-Me), 1.13 (s, C₁₉-Me).

3. példa

17e-hidroxi-7u-metil-4-nitroandroszt-4-én-3-on előállítása (3)

11.2 g (37,0 mmol) 17ft-hidroxi-7(/-metil-tesztoszteront, 8,29 g (73,9 mmol) kálium-terc-butoxidot és 3,76 ml izopropil-nitrátot az 1. példa szerinti módszerrel reagáltatva a'17ft-hidroxi-7u-metil-nitroandroszt-4-én-3-on-hoz jutunk. Olvadáspont 229-230°C (bomlik) (aceton-hexán).

IR (CHCI₃) 3614, 1694, 1658 (m), 1623, 1536 cm'

MS(CI) 348 (100%, M+1), 330 (40%. Μ + 1-Η-,Ο) 'H-NMR (CDCI3) 0,89 (d, C₇-Me), 0,91 (s, C₁₈-Me), 1,16 (s, C₁₉-Me), 3,68 (t, C₁₇-H).

A 17ft-hidroxi-szteroidot a megfelelő 17-onná alakíthatjuk az alábbi példa szerinti eljárással.

3A példa

7u.-metil-4-nitroandroszt-4-én-3.1 Z^dion előállítása (3A)

4.2 g (12,1 mmol) 17β-Μ0Γθχί-7(/-ΓηθύΙ-ηί{Γθ3η0Γθ5ζί-4-όη-3-οη 400 ml acetonban elkészített oldatát 0°C hőmérsékletre hütjük és 4,0 ml Jones reagenssel kezeljük. A feleslegben lévő reagenst metanol adagolásával elbontjuk. A kivált szilárd terméket szűrjük és a szűrletet bepárolva zöld színű szilárd terméket kapunk. A kapott anyagot oszlopkromatográfiásan szilikagélen tisztítva a 7(x-metil-nitroandroszt-4-én-3,17-diont kapjuk (vizes aceton).

IR (CHCI3) 1735, 1697, 1625(m). 1537 (cm¹

MS(CI) 346(100%, M+1), 328(50%, M + 1-H₂O)

Ή-NMR (CDCI3) 0,86 (3H, d, C₇-H). 0.93 (3H, s, C₁₈-Me), 1,33 (s, C₁₉-Me).

62.988/SM

4. példa

11σ,17β^ΐΜόΐΌχί-17α-ΓηθίίΙ-4-ηί{ΐΌ3Γ^Γθ5Ζί-4-όη-3-οη előállítása (4)

6,37 g (20,2 mmol) 11u,17B-dihidroxi-17u-metilandroszt-4-én-3-ont,

6,73 g (60,6 mmol) kálium-terc-butoxidot és 2,02 ml izopropil-nitrátot az 1. példa szerint eljárva reagáltatunk és ily módón szilárd hab formájában 11<ζ,17βdihidroxi-17(z-metil-4-nitroandroszt-4-en-3-on-hoz jutunk.

IR 3435, 1691, 1618(m), 1533. 1373 cm'

MS(CI) 364 (100%, M+1), 346 (30%, M+1-H₂O), 328 (37%, M + 1-2H₂O) ¹H-NMR (CDCI₃) 0,93 (2H, s. C_w-Me). 1,21 (s, C₁₉-Me), 1,43 (s, C₁₇-Me), 4,08 (1H, dt, C_irH).

5. példa

20,21 -dihidroxi-4-nitropreqn-4-én-3-on-acetonid előállítása (5)

6,73 g (18,0 mmol) 20,21-hididroxi-pregn-4-én-3-on-21-acetát, 5,78 g (51,5 mmol) kálium-terc-butoxid és 1.60 ml izopropil-nitrátot az 1. példa szerint reagáltatva a 20,21-dihidroxi-4-nitropregn-4-én-3-on-hoz jutunk. Vizes acetonból történő átkristályos után a megfelelő acetonidot kapjuk. Olvadáspont 221223°C (bomlik).

IR 1693, 1622(m), 1535, 1371 m¹

MS(CI) 418(55%, M+1), 101(100%) ¹H-NMR (CDCI₃) 0,90(3H, s, C_1B.Me). 1,03(s, C₁₉-Me), 1,33 (s, Me), 1,37(s, Me), 3,46-3,54(1 H, m, C₂₀-H), 3,93-4,05 (2H, m, C₂₁-CH₂).

Az acetonil csoport a 20,21-dioxigénezett szénatomról az alábbi példa szerint eljárva távolítható el.

62.988/SM

5Α példa

20,21-dihidroxi-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása (5A)

Az 5. példa szerinti rekristalizációs szürletből nyert 20,21 -dihidroxi-4-nitropregn-4-én-3-on oldatot metanolban melegítjük az oldatképzés elősegítése céljából. A reakcióedényt ezután szobahőmérsékletre hütjük és 10 ml 5%-os vizes sósavat adagolunk. 4 órán keverünk, majd a reakciót vizes kálium-karbonáttal semlegesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot hígított vizes sósav és glikol-metánban megosztjuk. A szerves fázist elválasztjuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk és bepárlás után sárga habot kapunk, melyet oszlopkromatográfiásan szilikagélen tisztítva a 20,21 -dihidroxi-4-nitropregn-4-én-3-on-hoz jutunk. Olvadáspont 183-185°C (vizes metanol).

IR (CHCI₃) 3628, 3587, 1693, 1622, 1535, 1373 cm''

MS(CI) 378(100%, M + 1), 342(35%. M + 1)-2H₂O) ’H-NMR 0,92(3H, s, C₁₈-Me), 1,30(3H. s, C₁₉-Me), 3,34-3,44 (1H, m, C₂₀-H), 3.61-3,72(2H, m, C₂₁-CH₂).

6. példa

17fc-cikloporpil-oxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on előállítása (6)

9,70 g (29,5 mmol) 178-ciklopropil-oxi-androszt-4-én-3-on, 7,0 g (62,4 mmol) kálium-terc-butoxid és 2,99 ml izopropil-nitrátot az 1. példa szerint eljárva reagáltatunk és ily módon a 17B-ciklopropil-oxi-4-nitroanroszt-4-én-3-on-hoz jutunk. Olvadáspont 137-138°C (metanol)

IR (CHCI3), 1695, 1622(m), 1535, 1373 (cm¹

MS(CI) 374 (100%, M+10), 316 (20%, M + 1 -c-C₃H₅-O) ¹H-NMR (CDCI3) 0,38-0,61 (4H, m), 0,80(3H, s, C₁₈-Me), 1,29 (s, C₁₉-Me), 3,253,33 (1H, m, ciklopropil-CHO), 3,44 (1H. t, C₁₇-H).

62.988/SM

- 24···· · < ·· *«·« 4 · 9· 9 j · * » · · < · · • · ···» · · · «

4· · »·· * ·

A fenti nitrálás kiindulási vegyületet az alábbiak szerint eljárva állíthatjuk elő.

19,36 g (58,9 mmol) 17β-οίΗορΓορίΙ-οχί-θηόΓθ5ζί-5-έη-3β-οΙ 1,9 liter acetonban elkészített oldatát -3 C hőmérsékletre hütjük és 20 ml Jones reagenssel kezeljük. A felesleges reagens metanolt elbontjuk. A képződött szilárd anyagot szűréssel eltávolítjuk, a szürletet bepárolva zöld olajat kapunk, melyet oszlopkromatográfiásan szilikagélen tisztítva 11,0 g 17β-οίΗορΓορίΙ-οχίandroszt-4-én-3-on-hoz jutunk. Kitermelés 57%.

A fenti oxidációs eljárás kiindulási anyaga a (17β-α'ΜορΓορίΙ-οχίandroszt-5-én-3β-ol) előállítását a 4,966,897 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti (Angelasto és Blohm).

6A példa

17B-(ciklopropoxi)-4-nitro-androszt-4-én-3-on

109 g (0,97 mól, 2,1 molekvivalens) kálium-terc-butoxidot adunk 150 g (0,46 mól) 17β-(οίΗορΓορίΙ-οχί)-3ηθΓθ5ζΜ-έη-3-οη 2 liter terc-butanolban elkészített oldatához 10 perc alatt szobahőmérsékleten nitrogén atmoszférában. A keverést szobahőmérsékleten 18 órán keresztül folytatjuk, majd 48,2 g (0,46 mól, 1,0 molekvivalens) izopropil-nitrátot adagolunk 50 ml terc-butanolban 30 perc alatt szobahőmérsékleten. Az adagolás után még egy további napon át folytatjuk a keverést szobahőmérsékleten, majd 25 perc alatt 130 ml jégecetet adunk és a keverést további 18 órán keresztül folytatjuk. Ezután 1,5 liter metilén-kloridot és sóoldatot (telített nátrium-klorid, 800 ml) adagolunk és az oldatot további 10 percen át keverjük. A szerves fázist elválasztjuk és magnéziumszulfát szárítjuk. A kapott zagyot szűrjük és a szürletet csökkentett nyomáson bepárolva 35°C/40 torr) sötét olajat kapunk. Oszlopkromatográfiás tisztítás (SiO₂, elúció: etil-acetát/hexán 5:95, etil-acetát/hexán 1:9 és etil-acetát/hexán

62.988/SM

- 2515:85). Az egyesített frakciókat, melyek a kívánt terméket tartalmazzák, egyesítjük és 30°C/40 torr csökkentett nyomáson bepároljuk és ily módon kapjuk a szilárd párlási maradékot, melyet 350 ml hexánban keverünk. Szűrünk és a szilárd terméket szárítva 68 g cím szerinti vegyületet kapunk (40%-os kitermelés) sárga szilárd termék formájában. A szürletbe bepárlás után további terméket kapunk, melyet rekromatografálva fentiek szerint eljárva további 8 g anyagot kapunk (5%). Olvadáspont 133-134'C.

IR (Kbr) 3437, 3090, 2945, 2870. 1693. 1624, 1531, 1450, 1373, 1346, 1332, 1211, 1188, 1170, 1076, 1062, 1035. 1012, 962, 794, 765 cm¹.

¹H-NMR (CDCI₃) ó 0,50 (4H, m, 2 x ciklopropil-CH₂), 0,80 (3H, s, C₁₈-Me), 1,30 (3H, s, C₁₉-Me), 3,3 (3H, m, OCH ciklopropil), 3,44 (1H, t, C,_rH).

MS (Cl, CH₄) m/z (relatív intenzitás) 374 (100%, M + 1).

Elemanalízis a 0₂₂ Η₃₁Ν04 képlet alapjan:

számított: C, 70,75; H, 8,37; N, 3,75:

talált: C, 70,99; H, 8,44 ; N, 3,56.

7, példa

4-nitro-androszt-4-én-3-on-17B-karbonsav előállítása (7)

3,63 g (11,4 mmol) 3η0Γοεζί-4-έη-3-οη-17β^3Γ0οη53ν3ί, 4 g (35,3 mmol) kálium-terc-butoxidot és 1,9 ml izopropil-nitrátot az 1. példa szerint eljárva reagáltatunk és ily módon 4-nitro-21-androszt-4-én-3-on-17ftkarbonsavhoz jutunk. Olvadáspont 205-208°C (bomlik)

IR (CHCI3) 3034, 2970, 1697, 1535, 1373 cm'¹

MS(CI) 362 (100%, M+1) ¹H-NMR <5 (CDCI3) 0,79 (3H, s, C₁₃.Me), 1,3 (3H, s, C₁₉.Me).

62.988/SM

- 268. példa

3-hidroxi-4-nitroandroszt-3.5-dién-17E-terc-butil-karboxamid előállítása (8)

250 ml-es mágneses keverővei es gázbevezetövel ellátott gömblombikba 8,5 g (75 mmol) kálium-terc-butoxidot és 75 ml terc-butil-alkoholt helyezünk. Ezután az oldathoz 9,3 g (25 mmol) androszt-4-én-3-on-178-karboxamidot adunk keverés közben 65°C hőmérsékletben argon atmoszférában 20 perc alatt. Ezután 2,8 ml (28 mmol) izopropil-nitrátot adagolunk, mely erős felmelegedést okoz és az oldatot 25°C-ra hütjük 1 óra leforgása alatt. Ezután 7,5 ml ecetsavat adagolunk, a kivált csapadékot szűrjük és a szürletet bepároljuk. A kapott sötét gumit diklór-metánnal oldjuk, vízzel mossuk, bepároljuk és 300 ml szilikagélen kromatografálva (30-50% etil-acetát/herxán eluens) 441 mg (1,05 mmol) terméket kapunk, melyet diklór-metán/hexán rendszerben kristályosítunk. Olvadáspont 207-208,5°C (bomlik).

IR (Kbr): 3441, 2967, 2943, 2916. 2885. 2847. 1693. 1670, 1624, 1535, 1508, 1475, 1452, 1390, 1367 cm'¹.

UV (EtOH) 7_max = 242 nM; >; = 13.100;

¹H-NMR (CDClg): ó 4,40 (s, 1H), 2,52-2,60 (m, 2H), 1,4-2,46 (m, 16H, 1,35 (s, 9H), 1,31 (s, 3H), 1,03-1,32 (m. 4H). 0,74 (s, 3H) ppm;

Elemanalízis a C₂4H₃₆N₂O₄ képlet alapján:

számított: C, 69,20; H, 8,71; N, 6.72:

talált: C, 69,33; H, 8,63; N, 6,60%.

62.988/SM

- 279Α példa

20-acetil-tio-metil-4-nitropreqn-4-én-3-on előállítása (9A)

750 mg (2,0 mmol) 20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on és 400 mg (2,1 mmol) tozil-klorid 2 ml piridinben elkészített oldatát 25°C hőmérsékleten 12 órán át keverjük. 24 óra után a maradékot 2 ml diklór-metánban visszaadjuk és további 40 mg tömegű tozil-kloridot adagolunk. További 12 órán át keverünk, majd 2 csepp vizet adunk a keverékhez és 30 percen át történő keverés után 50 ml diklór-metánnal és 50 ml vízzel, majd 50 ml 10%-os sósavval mosunk és az oldatot magnézium-szulfát felett szárítjuk. A kapott anyagot bepároljuk és 50:50 etil-acetát:hexánból (1:1) kristályosítva sárga szilárd terméket kapunk. Olvadáspont 181-182°C.

Az 529 mg fentiek szerint előállított tozilátot 10 ml száraz dimetilformamidban oldjuk és 163 mg (0,5 mmol) frissen elkészített Cs₂CO₃ és 86 mg (1,1 mmol) HSCOCH₃ és CsCOCH ,-ot tartalmazó 3 ml CH₃OH-ban oldjuk és bepároljuk. 24 óra elteltével a reakcióelegyet dietil-éterrel hígítjuk, vízzel mossuk, bepároljuk és oszlopkromatográfiasal tisztítva diklór-metán/hexán eluenst (4/1) használva a kapott frakciókat, mely a kívánt terméket tartalmazza, bepárolva és hexánból kristályosítva 225 mg tio-észtert kapunk.

Más eljárásváltozattal a fentiek szerint előállított tozilátot a megfelelő tioacetil vegyület előállítására az alábbiak szerint járunk el. 163 mg (0,5 mmol) Cs₂CO₃-at 2 ml metanolban oldunk, mely 90 mg (1,1 mmol) HSCOCH₃-at is tartalmaz. A homogén oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott párlási maradékot 3 ml dimetil-formamidban oldjuk 529 mg (1,0 mmol) toziláttal együtt. A kapott oldatot 25°C hőmérsékleten nitrogén atmoszférában 18 órán keresztül keverjük. Egy másik oldatot, mely 1 ml dimetil-formamidot tartalmaz, 1,0 mmol cézium-tio-acetáttal a fenti módon eljárva a reakcióelegyhez adunk.

62.988/SM

- 28Az átalakulás teljes befejezése céljából (melyet vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrzünk) 1 ml 1N sósavat adagolunk és a kapott oldatot etil-acetátban oldjuk, vízzel mossuk és magnézium-szulfát felett szárítjuk.

9B példa

20-merkapto-metil-4-nitropregn-4-én-3-on előállítása (9B)

A 9A példa szerint előállított 65 mg (0,15 mmol) tio-acetátot 2 ml metanolban, 1 ml tetrahidrofuránban és 0.3 ml 1N lítium-hidroxidban oldjuk. 1 órás keverés után 0,1 ml ecetsavat adagolunk. Az oldatot etil-acetátba rázzuk, vízzel mossuk és magnézium-szulfát felett szárítjuk. A kapott terméket 1,0 ml ecetsavban oldjuk, 50°C-ra lehűtjük és csökkentett nyomáson bepárolva 30 mg tömegű világossárga szilárd terméket kapunk.

10. példa

17β-ciklopropil-amino-4-nitroandroszt-4-én-3-on előállítása (10)

4,61 g (14,07 mmoi) 17β-οίΗορΓορίΙ-3ΐτιίηο-4-έη-3-οηΐ 4,74 g (42,22 mmol, 3 molekvivalens) kálium-terc-butoxidot 60 ml terc-butanoiban oldunk és az oldatot 1 órán keresztül reflux hőmérsékleten tartjuk. Ezután 1,43 ml (14,07 mmol, 1 molekvivalens) izopropiol-nitrátot adagolunk. Az adagolást egyszerre végezzük és az oldatot refluxáljuk. A reakcióelegyet lassan szobahőmérsékletre hütjük, majd 20 ml jégecetet és 20 ml diklór-metánt adagolunk a reakcióelegyhez a narancsvörös csapadék feloldása céljából. A reakcióelegyet ezután 1 napon keresztül szobahőmérsékleten hagyjuk. Az elegyet ezután szűrjük és a szürőlepényt diklór-metánnal fehérre mossuk. A szűrletet 200 ml további diklór-metán adagolásával hígítjuk, majd vizes nátrium-kloriddal mossuk 200 ml fél terítési koncentráció eléréséig, majd egy rész félig telített nátrium-klorid és egy rész vizes telített nátrium-dikarbonát, melynek össztérfogata 200 ml, mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomá62.988/SM • · · · ·

29són bepároljuk és szilikagélen kromatografálva (diklór-metán/metanol, 19:1) szilárd sárga hab formájában a 17B-ciklopropil-amino-4-nitroandroszt-4-én-3on-hoz jutunk.

¹H-NMR (300 MH, CDCI₃) n 0,75 (s, 3H, C_nrMe); 1,30 (s, 3H, C₁₈-Me) ppm. IR(KBr) 3435, 2944, 2870, 1695. 1533. 1371. 1013, 766 cm'¹.

MS(EI) = 372 (M⁺).

2. Művelet: a 4-nitro-_\⁴-3-on szteroid redukciója 4-amino-A⁴-3-on szteroid vegyületekké

A. Katalitikus redukció

11. példa

4-amino-20-hidroxi-metilpreqn-4-én-3-on előállítása (11)

2,01 g (5,35 mmol) 20-hidroxi-metil-4-nitropregn-4-én-3-on 28 ml absz.

etanolban elkészített oldatát sorrendben először Linglar katalizátorral (5% palládium CaCO₃-ra felvíve, 5,2% ólommal, 0,81 összsúlyban), majd 37 μΙ kinolinnal kezeljük és hidrogén atmoszférában tartjuk 40-55 p.s.i.-n 24 órán keresztül. A reakcióelegyet ezután ceíiten szűrjük, a szürletet bepároljuk és a kapott sárga szilárd anyagot short path? módszerrel eljárva a 4-amino-40hidroxi-metilpregn-4-én-3-on-hoz jutunk. Olvadáspont 180-185°C (vizes izopropanol).

IR 3512, 3470, 3384, 1648, 1614, 1576 cm'¹

MS(CI 346(100%, M+1), 328 (30%, M+1-H₂O).

¹H-NMR 0,72 (3H, s, C₈-Me), 1,02 (d. C,,-Me), 1,15 (s, C₁₉-Me), 2,6-3,2 (v.br, NH₂), 3,36(1H, dd, O,5.C₂₂-CH₂), 3,63(1H, dd, 0,5.C₂₂-CH₂).

62.988/SM

- 3012. példa

17E-ciklopropil-oxi-4-amino-androszt-4-én-3-on előállítása (12)

4,36 g (11,6 mmol) 17E-ciklopropil-oxi-4-nitro-androszt-4-én-3-on 125 ml absz. etanolban elkészített oldatát először Lindlar katalizátorral, majd 80 ml kinolinnal kezeljük. A reakcióelegyet hidrogén atmoszférában 1 atmoszféra nyomáson 117 órán keresztül keverjük. Az elegyet ezután celiten szűrjük aktív szénen keresztül és absz. etanolban mossuk. Az egyesített szürleteket mossuk és bepárlás után 3,7 tömegű barna folyadékot kapunk, melyet metilén-kloridban oldunk. A kapott terméket szilikagél oszlopra téve helyezzük (hexán/etilacetát; 1:4) és oszlopkromatográfiásan tisztítjuk hexán:etil-acetát eluens (1:4) használva.

A végterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepárlás után világos sárga terméket kapunk, melynek tömege átkristályosítás után 2,3 g. A kristályokat metanolban oldjuk, szűrjük és az oldathoz vizet csepegtetünk a kristályosodás megkezdődéséig. A reakcióelegyet 1 napon keresztül (12-18 óra) hütjük. A képződött kristályokat szűréssel elkülönítjük és hideg vizes metanollal, majd vízzel mossuk és csökkentett nyomáson szárítva 1,97 g tömegű

4-amino-17β-(οί^ορΓορΙΙ-οχί)-3η0Γθ5ζΕ4-έη-3-οη{ kapunk világos sárga szilárd termék formájában.

IR(KBr) v3458, 3372, 1674, 1622 (m). 1585 cm''.

Elemanalízis a C22H33NO2 képlet alapján:

számított: C, 76,92; H, 9.68; N, 4,08;

talált: C, 76,86; H, 10,04; N, 4,08.

¹H-NMR (CDCI3) ó 0,38-0,61 (4H, m, 2x CH₂), 0,79 (3H, s, C₁₈-Me), 1,15 (s,C₁₉-Me), 3,27 + 3,44 + ca. 3,4 (4H. ciklopropoxi-H, C₁₇-H, NH₂, m+t, v.br.)

62.988/SM <

- 31 UV(EtOH) λ 294 (r. 7574, lg.;: 3.879)

MS/CI 344(100%, M+1). 286(30%, M+1-C₃H₅OH).

12A példa

4-amino-17ft-(ciklopropoxi)-androszt-4-én-3-on hidroklorid előállítása g (26,7 mmol) 17ft-(ciklopropil-oxi)-4-nitro-androszt-4-én-3-on 200 ml metanolban elkészített oldatához keveres közben 35°C hőmérsékleten Lindlar katalizátort adunk [4 g, 5,9% Pd+5.4% Pb/CCP3 (CaCO₃), D.R. Engelhard, Seneca, SC] adagolással egyidejűleg nitrogén atmoszférában ,2 g (1,6 mmol) kinolint adunk az oldathoz. A kapott reakciókeveréket Parr rázóban keverjük és nitrogén atmoszférában szobahőmérsékleten 50 psi nyomáson 20 órán keresztül rázzuk, amíg a 3 molekvivalens hidrogén-gáz el nem fogy. A katalizátort ezután szűrései elkülönítjük.

A fenti eljárást kilencszer megismételjük (8x10 g-os méretben és 1 x 7 g-on méretben) és a kapott oldatokat szűrjük és egyesítjük. 550 g szilikondioxidot (SiO₂) adunk az oldathoz és keverés után csökkentett nyomáson (10 Torr) bepároljuk 10-15°C hőmérsékleten. A termék és az SiO₂ keverékét oszlop tetejére helyezzük (20 cm i.d., 5 kg SiO₂ tartalommal) és az oszlopot egymás utánban 15% 20 liter 20%, 20 liter és 20% és 40 liter 30% hexánban oldott etil-acetáttal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és csökkentett nyomáson bepároljuk (10°C, 30 Torr). Ily módon eljárva 600 ml sárga oldatot kapunk. Az oldatot 1,8 M sósavat tartalmazó 75 ml térfogatú etil-acetáttal 4°C-on kezeljük. A kapott zagyot 200 ml acetonnal és 100 ml CH₂CI₂-vel hígítjuk. 30 percen keresztül történő keverés után a szilárd terméket szűréssel elkülönítjük és 300 ml acetonnal mossuk, majd szárítás után 34 g cím szerinti vegyületet kapunk 37%-os kitermeléssel. Olvadáspont 206-207°C. A szürletet 300 ml térfogatra bepárolva és a kivált szilárd terméket összegyűjtve további

62.988/SM

- 32cím szerinti terméket kapunk 3,4 g tömegben 4% kitermeléssel. Olvadáspont

203-204°C.

IR (Kbr) 3445, 3086, 2945, 2872, 2555, 1967, 1791, 1682, 1641 (cm'¹.

¹ H-NMR (CDCI₃) δ 0,50 (4H, m, 2x ciklopropil-CH₂), 0,76(3H, s, C₁₈-Me), 1,21 (3H, s, C₁₉-CH₃), 3,2 (1H, m, OCH ciklopropil), 3,39 (1H, t, C₁₇-H), 9,6 (3H, br.s, NH₃).

MS (Cl) m/z 344 (100%, M+).

Elemanalízis a C₂2H₃4NO₂CI.(0,6)H₂O képletre:

számított: C, 68,05; H, 9,07; N, 3,61;

talált: C, 68,18; H, 9,06; N, 3,52.

13. példa

17β-άΜορΓθρϊ1-3ΐτιϊηο-4-3ΐ'ηίηορΓθρη-4-έη-3-οη előállítása (13)

670 mg (1,80 mmol) 17β-οίΜορΓορίΙ-3ΐ·ηίηο-4-ηίίΓορΓθ9η-4-όη-3-οηί 11 ml absz. etanolban oldunk és az oldatot 268 mg Lindlar katalizátorral kezeljük, majd a kezelést 3 μΙ kinolinnal folytatjuk. Az oldatot ezután erőteljesen hidrogén atmoszférikus nyomáson (kb. 760 mm/mg) 18 órán keresztül keverjük. A reakciókeveréket szűrjük és 100 ml metanollal és 100 ml diklór-metánnal mossuk. Az oldószereket csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a kapott terméket szilikagéllel kromatografálva (CH₂CL₂/CH₂OH eluens, 47:3) sárga színű olajat kapunk, melyet átkristályosítva sárgás szilárd termékhez jutunk. Olvadáspont 149-150°C (dietil-éter).

IR(KBr): 3474, 3366, 2945, 1616, 1577 cm'¹

MS(CI/CH4) [M⁺ + H] = 343 ¹H-NMR (33 Mhz, CDCI₃) δ 0,73(3H, s, C₁₈-Me), 1,15(3H, s, C₁₉-Me), 2,66 (1H, t, C₁₇-H)

62.988/SM

- 33····· · ·· ···· • · · · · · · • ····· · · · · •« · ··· · * ¹³C-NMR (75nhz, CDCI₃) δ 6,464, 7,185, 11,289, 20,803, 23,682, 24,757, 29,683, 29,753, 30,914, 32,860, 34,899, 35,307, 37,904, 42,453, 52,910,

54,549, 69,014, 132,938, 138,860, 194,343.

B. Kémiai redukció

14. példa

4-amino-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-on előállítása (14)

0,52 g (1,38 ml) 20-hidroxi-metil-4-nitroregn-4-én-3-ont 4,8 ml absz. etanolban oldunk és az oldt 2,1 g ón-kloriddal elegyítjük oly módon, hogy az ónkloridot egy részletben 70°C hőmérsékleten adjuk és az oldatot 70°C hőmérsékleten 6 órán keresztül tartjuk, A reakcióedényt ezután szobahőmérsékletre hűtjük és az oldatot óvatosan 9 g tömegű nátrium-bikarbonáttal semlegesítjük 10 perc alatt. A kapott zagyot szűrjük, ily módon a barna szilárd anyagot eltávolítjuk és további szűrés közben 25 ml hidrogén-fluoridot és 25 ml etil-acetátot adagolunk. A HF/etil-acetát kezelést megismételjük. A szerves fázisokat mindegyik szűrletben összegyűtjük, magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A kapott párlási maradékot oszlopkromatográfiásan tisztítva fehér szilárd termék formájában 4-amino-20-hidroxi-metil-pregn-4-én-3-ont kapunk, melyet az 5,218,110 számú amerikai egyesült államokbeli és az 5,120,840 számú amerikai egyesült államokbeli (Weintraub és munkatársai) leírásban ismertetett anyaggal azonosítottunk. Mindkét hivatkozást a jelen leírásba beépítettük.

15. példa

4-amino-17-ciklopropil-oxi-androszt-4-én-3-on előállítása (15)

1,0 g (2,71 mmol) 17-ciklopropil-oxi-4-nitroandroszt-4-én-3-on 10 ml ecetsavban elkészített oldatát 1 g cink reszelékkel kezeljük. A keveréket 1,5 órán keresztül szobahőmérsékleten erőteljesen keverjük. A cink sókat szűrés62.988/SM • · · · · ·

- 34sel eltávolítjuk és etil-acetáttal mossuk. Az szürleteket és mosófolyadékot egyesítjük és bepárlás után sárga szilárd terméket kapunk, melyet etilacetátban újra oldunk és 3 x 1 molos sósavval (150 ml) extraháljuk. Az egyesített savas extraktumokat nátrium-hidroxiddal (pH = 14) semlegesítjük és éterrel tovább extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepárlás után 0,59 g 4-amino-17-ciklopropil-oxi-androszt-4-én-3-ont kapunk. Olvadáspont 100-102°C (vizes metanol).

IR 3354, 1662, 1620, 1581 cm’¹.

MS(CI) 344(100%, M+1) ¹H-NMR 0,37-0,61 (4H, m, 2 x ciklopropil CH₂), 0,79 (3H, s, C₁₈-Me), 1,16 (s, C₁₉-Me), 3,25-3,33 (m, ciklopropil-CHO), 3,44 (t, C₁₇-H).

16. példa

20-acetil-tio-metil-4-amino-preqn-4-én-3-on előállítása (16)

173 mg (0,40 mmol) 20-(tio-acetil)-metil-4-nitropregn-4-én-3-ont és 300 mg cink reszeléket 2 ml jégecetben 30 percen keresztül keverünk. A keveréket 50 ml etil-acetátba öntjük, 3 x 50 ml telített vizes nátrium-bikarbonáttal mossuk és magnézium-szulfát felett szárítjuk. Olvadáspont 173-176°C.

62.988/SM

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletei vegyületek - ahol a képletben R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R_r csoport, ciklopropil-oxi-csoport, acetiltio-alkán-csoport, ciklopropil-amino-csoport, t-butil-karboxamid-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és

1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

Rt jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport; R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

R_g jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport; és a gyűrűn a-----kettős vagy egyes kötést jelez;

R és Rt együttesen, és/vagy R₅ és R₆ együttesen =0 atomot jelenthet; azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor Rt jelentése hidrogénatom; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom; - előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) valamely (II) általános képletű kiindulási vegyületet - ahol a képletben R-R₈, és-----jelentése a fentiekben megadott - valamely hatékony mennyiségű erős bázissal, emelt hőmérsékleten a megfelelő termodinamikus 3,5-dienolát kiala62.988/SM ····· · ·· ···· • · · · · · · • · · · · « · • ····· · · · · ·· · ··· · ·

- 36kulásáig kezelünk megfelelő ideig, majd valamely semleges nitráló szert adagolva valamely 4-nitro-szteroidot kapunk: majd b) a 4-nitro-szteroidot valamely alkalmas redukálószerrel reagáltatjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletű vegyületek oltalmi körébe tartozó vegyület a (17S)-ciklopropil-oxi-androszt-4-én-3-on.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (I) általános képletű vegyületek oltalmi körébe tartozó vegyület a (20S)-4-amino-21-hidroxi-20-metil-pregn-4-én-3-on.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az erős bázis kálium-terc-butoxid vagy kálium-terc-amilát.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az erős bázis hatékony mennyisége 2 és 4 molár ekvivalens közötti érték.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az erős bázis hatékony mennyisége 2 molár ekvivalens.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megemelt hőmérséklet 17°C - 100°C közötti érték.
8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megemelt hőmérséklet 50°C - 83°C közötti érték.
9. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megemelt hőmérséklet 83°C körüli érték.
10. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a termodinamikus dienolát kialakulásához szükséges idő 5 perc - 8 óra.
11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a termodinamikus dienolát kialakulásához szükséges idő 15 perc - 180 perc.

62.988/SM « * ‘ ····· · ·· ···· • · · · · · · • · · · · · · · · · • · · ··· · ·

- 3712. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a termodinamikus dienolát kialakulásához szükséges idő 60 perc.
13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy neutrális nitráló szerként olyan alkil-nitrátot használunk, amely valamely telített egyenes vagy elágazó szénláncú szerves nitrát és 3-8 szénatomot tartalmaz.
14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkil-nitrátként izopropil-nitrátot vagy izobutil-nitrátot vagy 2-etil-hexil-nitrátot alkalmazunk.
15. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkalmas redukáló szerként valamely kémiai szert, így valamely ecetsavas cink fémet használunk és katalizátort, így Lindlar katalizátort alkalmazunk.
16. A (III) általános képletű vegyület, ahol a képletben

R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R₈ csoport, ciklopropil-oxi-csoport, ciklopropil-amino-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

Rt jelentése hidrogénatom, hiroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

Rt és R₂ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 17-es szénatomhoz;

R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₅ és R₆ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 11-es szénatomhoz;

R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

62.988/SM • · ·

- 38R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor Rt jelentése hidrogénatom; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom.
17. A 16. igénypont szerinti (III) általános képletű vegyület körébe tartozó (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitro-pregn-4-én-3-on.
18. A 16. igénypont szerinti (III) általános képletű vegyület körébe tartozó

17β-οίΗο-ρΓορίΙοχί-4-ηΚΓθ-3η0Γθ5Ζί-4-έη-3-οη.
19. Módszer sztereóid 5<x-reduktáz gátlására, azzal jellemezve, hogy hatékony gátló mennyiségben valamely (IV) általános képletű vegyületet - ahol a képletben

R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R₈ csoport, ciklopropil-oxi-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, ciklopropil-amino-csoport, 2,2-dimetiI-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

R, jelentése hidrogénatom, hidroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R·, és R₂ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 17-es szénatomhoz;

R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₅ és R₆ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 11-es szénatomhoz;

62.988/SM « ι

- 39R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor R₁ jelentése hidrogénatom; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom - adunk.
20. A 19. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a (IV) általános képletű vegyület körébe tartozó vegyületként (20S)-20-hidroxi-metil-4-nitro-pregn-4-én-3-ont adunk.
21. Módszer a szteroid C₁₇.₂₀ liáz gátlására, azzal jellemezve, hogy effektív gátló mennyiségben valamely (IV) általános képletű vegyületet - ahol a képletben

R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R₈ csoport, ciklopropil-oxi-csoport, ciklopropil-amino-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkilcsoport;

Rt jelentése hidrogénatom, hiroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport; R! és R₂ együttesen =O atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 17-es szénatomhoz;

R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₅ és R₆ együttesen =0 atomot képezhet, mely oxigén kettőskötéssel kötődik a 11-es szénatomhoz;

R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

62.988/SM

- 40R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor R₃ jelentése hidrogénatom; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom - adunk.
22. A 21. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a 21. igénypont szerinti (IV) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó 17Bciklopropoxi-4-nitro-androszt-4-én-3-ont adunk.
23. A 21. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a 21. igénypont szerinti (IV) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó (20S)20-hidroxi-metil-4-nitro-pregn-4-én-3-ont adunk.
24. A 21. igénypont szerinti módszer, azzal jellemezve, hogy a 21. igénypont szerinti (IV) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó (20S)20-merkapto-metil-4-nitro-pregn-4-én-3-ont adunk.
25. Eljárás az (I) általános képletű vegyület - ahol a képletben

R jelentése hidroxilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoilcsoport, 1-6 szénatomos alkanoil-oxi-csoport, 1-4 szénatomos alkanolcsoport, COCH₂OH csoport, CO₂H csoport, CONR₇R_g csoport, ciklopropil-oxi-csoport, acetil-tio-alkán-csoport, ciklopropil-amino-csoport, t-butil-karboxamid-csoport, 2,2-dimetil-dioxolán-4-il-csoport, 1,2-dihidroxi-etil-csoport és 1-4 szénatomos alkán-tiol-csoport;

R-, jelentése hidrogénatom, hiroxilcsoport vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport; R₂, R₃ és R₄ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport;

R₅ és R₆ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy hidroxilcsoport;

R₇ jelentése hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport;

62.988/SM

- 41 R₈ jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport; és a gyűrűn a-----kettős vagy egyes kötést jelez;

R és R₁ együttesen, és/vagy R₅ és R₆ együttesen =0 atomot jelenthet; azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése hidroxilcsoport, akkor R₁ jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport; és azzal a feltétellel, hogy ha R₅ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₆ jelentése hidrogénatom és ha R₆ jelentése hidroxilcsoport, akkor R₅ jelentése hidrogénatom; - előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) valamely (II) általános képletű kiindulási vegyületet - ahol a képletben R-R₈, és-----jelentése a fentiekben megadott - valamely hatékony mennyiségű erős bázissal, valamely alkalmas hőmérsékleten a megfelelő termodinamikus 3,5dienolát kialakulásáig kezelünk megfelelő ideig, majd valamely neutrális nitrálószert adagolva valamely 4-nitro-szteroidot kapunk; majd

b) a 4-nitro-szteroidot valamely alkalmas redukálószerrel reagáltatjuk, és

c) kívánt esetben azt valamely gyógyászatilag elfogadható sóvá alakítjuk.
26. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó vegyület a (17S)-4-aminociklopropil-oxi-androszt-4-én-3-on.
27. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó vegyület a (20S)-4-amino-21hidroxi-20-metil-pregn-4-én-3-on.
28. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletű vegyület oltalmi körébe tartozó vegyület a 4-amino-21-hidroxi-20metil-pregn-4-én-3-on-hidroklorid.

62.988/SM

- 4229. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmas hőmérséklet 17°C - 30°C közötti érték.
30. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmas hőmérséklet 20°C - 25°C közötti érték.