JPH09510688A

JPH09510688A - Ｃｘｃインタークリン分子のペプチド阻害剤

Info

Publication number: JPH09510688A
Application number: JP7516716A
Authority: JP
Inventors: コーエン，アレン・バリー; ミラー，エドマンド・ジェイ; 真一郎林; クルドウスカ，アンナ・ケイ; タトゥル，ロナルド・アール
Original assignee: ボード・オヴ・リージェンツ，ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・テキサス・システム
Priority date: 1993-12-15
Filing date: 1993-12-15
Publication date: 1997-10-28
Also published as: AU6014794A; AU685079B2; WO1995016702A1; FI962413A0; FI962413A; NO962549L; KR100290224B1; KR960706503A; EP0734394A1; NO962549D0

Abstract

(57)【要約】 CXCインタークリン分子の作用を阻害し、調節するためのペプチドに基づく組成物および方法が開示されている。記述されている抗ロイキネートペプチドは、IL-8、GRO、MIP2βの好中球への結合と好中球の活性化を阻害する。これらのペプチドは、化学走性を阻害するのに必要な濃度よりも25倍も低い濃度で、IL-8によって誘導される酵素放出を阻害することから特に有利で、このためこれらのペプチドは、とりわけ成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、嚢胞性線維症、慢性気管支炎等の多様な炎症性疾患の治療に理想的なものとなっている。

Description

【発明の詳細な説明】ＣＸＣインタークリン分子のペプチド阻害剤背景技術米国政府は、NHLBIの補助金番号ROI-HLに従って、本発明に権利を有する。１．発明の分野本発明は、一般にサイトカインの作用の分野、特にCXCインタークリン分子の作用を阻害し、調節するための方法と組成物に関する。インターロイキン８（IL -8）、特にIL-8によって誘導される好中球による分解酵素の放出を優先的に阻害するペプチド組成物を開示する。これらの組成物は、成人呼吸窮迫症候群（ARDS ）および嚢胞性線維症を含む種々の炎症性疾患の治療に使用できる。２．関連技術の説明 IL-8は、それらのＮ末端配列要素に基づいて命名された、CXCインタークリン群に属するサイトカインの一員である。この群には、特に成長関連オンコジーン（GRO、またはGRO/MGSA）とマクロファージ炎症タンパク質2β（MIP2β）として知られるペプチド分子も含まれる。IL-8は、約５kDのペプチドで、約72アミノ酸長で、この長さは、異なる種類の細胞において行われる翻訳後処理によって変わる(Yoshimura et al.，1989; Hebert et al.，1990; Strieter et al.，1989)。 IL-8遺伝子は、ブドウ球菌エンテロトキシンＡにより刺激されたヒト血液の単核細胞によって転写された遺伝子を分析することによって初めて同定された(Schim id & Weissman，1987)。IL-8の産生は、腫瘍壊死因子およびインターロイキン１によって誘導されることが知られている(Strieter et al.,1990)。 IL-8は好中球の少なくとも２つの異なるレセプターと相互作用する(Holmes et al.，1991; Murphy & Tiffany，1991)。レセプターはGTP-結合タンパク質に結合され、IL-8の信号を細胞内に伝達することが可能となる(Wu et al.，1993)。G ROおよびMIP2β等のインタークリン群に属する物質の殆どが、このレセプターの１つと結合し、IL-8は両方のIL-8レセプターに結合する(LaRosa et al.，1992; Cerretti et al.，1993)。IL-8の三次元構造がNMR（Clore et al.，1990）とエックス線結晶学（Clore & Gronenborn，1992; Baldwin et al.，1991）によって解明されている。自由に移動できるアミノ末端に３つのβプリーツシート構造が続き、カルボキシル末端にαヘリックスが位置している(Oppenheim et al.，199 1)。いくつかの証拠によると、アミノ末端とカルボキシル末端の両者がそのレセプターの結合に関与していることが示唆されている(Clore et al.，1990; Clark -Lewis et al.，1991; Moser et al.，1993)。 CXCインタークリンの特定の機能が、数カ所の研究所によって研究されている( Yoshimura et al.，1989; Schoroder et al.，1988; Peveri et al.，1988)。例えば、IL-8ペプチドの主な機能は、好中球の化学走性と活性化を刺激する能力や (Larsen et al.，1989; Shoroder et al.，1988; Peveri et al.，1988)、血管形成を促進する能力（Koch et al.，1992）に関係しているように見える。例えば表面接着因子または大腸菌エンドトキシン（リポ多糖またはLPSとしても知られる）等の物質により好中球が「供給」されると、IL-8もエラスターゼおよびミエロペルオキシエダーゼ等の好中球酵素の放出を刺激する。好中球の炎症反応は、生体を侵襲する細菌の分解に不可欠であるが、不適切な好中球の活性化は幾つかの問題を引き起こす。例えば、好中球が肺に引きつけられ、適切に供給されると、好中球は分解酵素を肺組織の中に放出する。これによって、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）が引き起こされることがある(Weiland et al .，1986; Idell et al.，1985)。ARDSは細菌感染症によって発症し、突然重度の血圧低下（ショック）とその他多くの損傷を身体に引き起こす。最近の研究により、IL-8がARDS患者の肺における主な好中球活性化因子であることが証明されており(Miller et al.，1992)、霊長類のエンドトキシンショックモデルも原因物質としてIL-8を示唆している(Van Zee et al.，1991)。 IL-8が重要な病理学的役割を果たしていると考えらていれる他の疾患および病変の炎症性浸出液の中にも高濃度のIL-8が認められている(Brennan et al.，199 0; Miller & Idell,1992; Miller et al.，1992)。例えば、IL-8は、慢性関節リウマチ(Brennan et al.，1990; Seitz et al.，1991)と偽痛風(Miller & Bresfo rd，1993)における炎症の媒介物質である可能性が示唆されており、また嚢胞性線維症(McElvaney et al.,Nakamura et al.，1992; Bedard et al.，1993)における役割が示唆されている。従って、IL-8機能の調節は、種々の疾病状態の抑制に優れた方法と思われる。最近、IL-8の合成を減少できる化合物の同定に多少の進歩が認められている。このような化合物として、IL-4、酸素遊離基スキャベンジャー、分泌性白血球プロテアーゼ阻害剤、インターフェロンガンマ等が挙げられるが(Standiford et a l.，1990; DeForge et al.，1992; McElvaney et al.，1992; Cassatella et al .，1993a; 1993b)、このような研究はIL-8阻害剤に関するものではない。プロテインキナーゼＣ阻害剤、IL-4、抗IL-8抗体等の他の多様な組成物も、IL-8作用を調節することが報告されている(Lam et al.，1990; Stanford et al.，1992; Mu lligan et al.，1993)。残念ながら、これらの化合物は、臨床状況でIL-8阻害剤として使用するための候補としては理想からは程遠い。ペプチドIL-8阻害剤の同定にも多少の進歩が認められているが、そのような研究の殆どがIL-8分子そのものの一部に焦点を合わせたものである(Miller et al. ，1990; Gayle et al.，1993)。例えば、本発明者等は、合成ペプチドと、特にI L-8のアミノ末端ペプチドが、IL-8の好中球への結合と好中球の化学走性を阻害することを明らかにした(Miller et al.，1990; Miller et al.，1993)。Ｎ末端ペンタペプチドIL-8阻害剤も報告されている(Goodman et al.，1991)。残念ながら、現在までIL-8に由来するペプチドの阻害機能は不完全で不十分であることが証明されている。 IL-8等のCXCインタークリンに対する特に有効なペプチド阻害剤を同定する必要性が未だに存在することから、現在、IL-8分子そのもの以外の組成物を検討しなくてはならないことは明白である。化学走性よりも好中球の酵素放出を優先的に阻害するペプチドの同定が特に有用と思われる。と言うのは、これによって好中球が肺の中に入り、細菌の侵襲から守ることが可能となる上に、組織障害を引き起こさないからである。発明の概要本発明は、IL-8、GRO（GRO/MGSA）、MIP2β等のCXCインタークリン分子の作用を調節し、阻害するための新しい方法と組成物を提供することによって、従来の技術の欠点を克服することを目的としている。ここに開示するペプチドと薬剤組成物は、IL-8、GRO、MIP2βの好中球への結合を減少させ、IL-8によって誘導される好中球の活性化を阻害する。これらのペプチド製剤は、好中球の化学走性を阻害するのに必要な濃度よりも顕著に低い濃度で、IL-8によって誘導される酵素の放出を阻害できることから特に有用である。種々の疾病、特にCXCインタークリンの制限されない作用が一定の役割を果たしている疾患を治療する方法も提供されている。本発明は一般に、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Xaa₁（RRWWCX；配列番号２３）（この場合、Xaa₁はいずれのアミノ酸残基でもよい）を含む比較的小さなペプチドが、IL-8等のCXCインタークリン分子の強力な阻害剤であるという、発明者等の驚くべき発見に基づいている。ここに使用されているように「CXCインタークリン群分子」と「CXCインタークリン」という言葉は、そのＮ末端領域にC XC配列モチーフを含むペプチドインタークリンのグループを集合的に意味するために使用されている。CXCインタークリンには、IL-8、GRO、MIP2α、MIP2β、EN A78が含まれることは公知であり、それらの分子全てと、CXCモチーフを含む他のいずれのインタークリンポリペプチドが、本出願に使用されているようにこの言葉の範囲に入ることは理解されるであろう。本発明の阻害作用を持つペプチドは「抗ロイキネート」と呼ぶことができる。配列RRWWCX（配列番号２３）のある種のヘキサマーペプチドが、黄色ブドウ球菌に対する抗細菌活性を有することが過去に明らかにされている(Houghten et al. ，1991)。しかし、このようなペプチドが、ここに開示されている抗サイトカイン／インタークリン、抗好中球および抗炎症活性を有することを示唆した情報が提示されたことは今までなかった。従って、幾つかの点で、本発明は、GRO、MIP2α、MIP2β等のCXCインタークリンを阻害する方法、特にIL-8を阻害する方法に関する。ここに使用されるように、「CXCインタークリンを阻害する」という言葉は、CXCインタークリンの生物学的作用を減少させる過程を意味する。これは、好中球等のCXCインタークリンの標的細胞上のIL-8レセプターの１つとCXCインタークリンが結合するのを阻害することによって特に評価できるが、CXCインタークリンの阻害を測定するためにどの方法を使用しても構わない。 IL-8という言葉は、過去に好中球-活性化因子、単核球由来の好中球の化学走性因子および好中球活性化ペプチド-１として知られていたサイトカイン組成物を指すために使用される。ここに使用されるように、「IL-8を阻害する」という言葉は、一般にIL-8の生物学的活性を減少または減弱することを意味する。これには、IL-8の公知の作用のいずれか、あるいは全ての阻害が含まれる。これらの作用には、レセプターの結合または細胞質ゾルのカルシウム濃度等の細胞下作用や、顆粒球の漸増または活性化等の細胞作用の調節が含まれ、また炎症および血管形成等の生理学的作用にも影響する。好ましい実施例において、本出願で言及されているIL-8機能の阻害とは、好中球（多形核好中球、PMN）のような顆粒球に対するIL-8作用の阻害である。これは、ここに開示されているように、多くの細胞および生理学的方法により決定できる。例えば、精製レセプター組成物または好中球に対するIL-8の結合阻害を測定することによって、IL-8によって誘導される好中球の化学走性または血管外遊出の阻害を測定することによって、IL-8によって刺激される好中球の酵素放出（例えば、ミエロペルオキシダーゼ、βグルクロニダーゼまたはエラスターゼ放出）の阻害を測定することによって、あるいはウサギの皮膚炎症モデルを使用する in vivoの抗炎症効果を評価することによって決定できる。 IL-8の阻害、または更にGROまたはMIP2βの阻害を測定する好ましい方法は、インタークリンの好中球への結合量の減少を測定する方法である。これが最も簡単でわかりやすい方法である。更に、特定のインタークリンのそのレセプターへの結合は、好中球または他の種類の細胞に対する他のいすれの作用よりも優先されなくてはならない。IL-8、GROまたはMIP2αまたはMIP2βの好中球への結合の阻害によって例示される、インタークリンの「阻害」とは、特定のペプチドまたは組成物が検出可能な程度までインタークリンの結合を阻害できる能力を意味する。すなわち、ペプチドまたは組成物が存在しない場合に観察される程度以下に、結合を減少させる能力を意味する。 CXCインタークリンの好中球への結合の阻害は、％結合阻害率として表され、値が高い程、阻害剤の効果が高いことを表している。好ましいペプチドは一般に、より高い％結合阻害率を示す。もちろん、計算される％結合阻害率は、CXCインタークリンの濃度および特定のペプチドまたは組成物の濃度等の正確な分析条件に依存する。表１Ａ、１Ｂ、５Ａおよび５Ｂのデータを得るために使用された条件を使用して、特定のペプチドに阻害活性があるかどうかを決定することができる。しかし、特に正確な定量データあるいは比較データを得たい場合には、例えば、約20μM（図１および９を得るために使用）のオーダーのより低濃度のペプチドを使用する等の、より識別力の高い条件を使用することも可能である。いずれの場合でも、ペプチドまたは類似体がIL-8等のCXCインタークリンを阻害できるかどうかは、ここに開示されているような分析法を用いて容易に決定できる。 CXCインタークリン阻害剤の作用機序を理解することは、それらを実際に利用することとは無関係であるが、本発明のペプチド阻害剤がより低濃度で、IL-8によって誘導される化学走性よりも、IL-8によって誘導される好中球の酵素の放出を優先的に阻害できることに言及することは重要である。この意味で、「阻害する」という言葉は、本発明と関連付けて使用される場合には、特定の好中球の機能が他の機能よりも顕著に阻害されることから、「調節する」ということも意味している。 IL-8によって誘導される化学走性を阻害するのに必要な濃度より約25倍も低い濃度で、IL-8によって誘導される好中球の分解酵素の放出を阻害できるというペプチドの阻害能は、過去の研究から予想されていた重要な発見である。このことは、好中球を障害部位でなお漸増しながら、正常に放出される酵素の有害な作用を顕著に減少できることを意味する。この特性のため、その小さなサイズと相まって、これらのペプチドは種々の治療プロトコル、特に肺障害の治療に使用するのに理想的なものとなる。本発明に従って、IL-8、GROまたはMIP2の阻害等のCXCインタークリンの阻害を達成するために、あるいは好中球の化学走性よりも好中球の酵素放出を優先的に達成するために、一般にCXCインタークリン群の分子または顆粒球または好中球等のインタークリン標的細胞に、ここに開示されている群の中の一ペプチドを含む生物学的に有効量の組成物を接触させる。「接触」過程は、阻害剤内の活性ペプチドを、CXCインタークリンペプチドまたは標的細胞上に存在するそれらのレセプターの１つ、または両方に接触させ、それらの機能的相互作用を減少または阻害することによる過程である。科学的には興味深い点であるが、特定の細胞に伝達されるCXCインタークリンの信号は本発明の実施には無関係である。 CXCインタークリンまたは標的細胞を、ペプチドを含む組成物と接触させるには、ペプチドまたは組成物を、好中球等の標的細胞とインタークリンにin vitro に加えるだけでよい。あるいは、生物学的に有効量の薬剤学的に許容可能な形態のペプチドまたは組成物を動物に投与してもよい。この場合、同ペプチドは生体内の体液中で、例えば好中球またはマクロファージおよびインタークリンと接触することになる。このような状況では、「接触」は単に組成物を動物に投与することによって達成される。ほとんどのペプチド薬剤処方も利用できる。それらには、静脈内投与、筋肉内投与および皮下投与等の非経口投与製剤のほか、吸入剤、エーロゾル、スプレー製剤、そして、クリーム、軟膏、ゲル等の局所塗布用ペプチド製剤、さらに、脂質末端を有するペプチド、ミセルまたはリポソームおよび除放剤用にデザインされた生体適合性を有するコーティング内に活性ペプチドを組み入れた除放カプセル等の中にカプセル化されたその他の製剤が含まれるが、これらに限定されない。 ARDS患者の肺水腫液（Miller et al.，1992）および嚢胞性線維症患者の痰(Ri chman-Eisenstat et al.，1993)、胸膜浸出がある患者の胸膜間隙（Miller & Id ell，1993)、数種類の関節疾患患者の関節液(Brennan et al.，1990; Miller & Bresford,1993)、関節炎患者の乾癬斑および滑液（Lam et al.，1990）の中のIL -8濃度が上昇することは公知である。不適切な好中球の活性化が、このような疾患の全てと、虚血性および再潅流による心筋障害（DeFroge et al.，1992）に関係している。IL-8の好中球補充阻害作用により、肺の炎症がin vivoで減少することが明らかにされており(Mulligan et al.，1993)、またここに使用されているタイプのin vitro研究がin vivoの活性を予測することが認められていることから（引用することにより本明細書の一部をなすものとする米国特許第5,079,22 8号を参照）、本出願に開示されているIL-8によって誘導される好中球の活性化阻害が良好に行われれば、これらのペプチドを広く臨床応用できることが支持される。従って、本発明はCXCインタークリン、特にIL-8がある役割を果たしている多種多様な疾患、特に炎症成分を有する疾患の治療方法も提供する。これには、慢性気管支炎、嚢胞性線維症、肺浸出、喘息およびARDS等の気管支の炎症を含む肺障害と肺疾患のほか、乾癬および皮膚炎等の皮膚疾患や、慢性関節リウマチ等の関節の疾患の患者を治療し、また偽痛風、炎症性腸疾患または心筋梗塞後の再潅流による心臓障害の治療等のその他の臨床状況における炎症を一般に減少させることが含まれる。これらのペプチドは、例えば、細胞増殖を伴う癌およびその他の疾患を治療するために、リンパ球の増殖を抑制する増殖抑制剤としても利用できる。上記の疾患のいずれか１つ、あるいは好中球の活性により影響され、炎症を特徴とするその他の疾患を治療するために、特定の炎症またはIL-8を伴う疾患を有する患者を同定し、続いて患者に好ましくは非経口的に、ここに開示されている群の１種類以上のペプチドを含む生物学的に有効量の薬剤組成物を投与する。もちろん、治療される疾患に従って、一般に特定の医薬製剤が調製される。例えば、皮膚疾患を治療する方法の場合、塗布用クリームまたはゲル製剤が使用され、肺疾患を治療する方法においては、注入可能な製剤が使用され、またはスプレー、エーロゾルまたは吸入剤を使用することも可能である。身体の他の部分の炎症を減少させる方法では、非経口投与用に製剤化されたペプチドまたは、除放用にデザインされた生体適合性コーティングに組み込まれたペプチドを使用することができる。リポソームによるカプセル化を利用することも可能で、これは、投与される化合物の効果を増大し、半減期を顕著に延長することが知られている。このような医薬製剤の全てを調製するための種々の組成物と技術は、本発見に照らして、本技術に精通する者にとって一般に公知である。適切な医薬組成物と関連する投与法の詳細に関しては、引用することにより本明細書の一部をなすものとするRemington's Pharmaceutical Science，第16版，1980，Mack Publishing Co．を参照されたい。 IL-8またはCXCインタークリンの阻害は、生物学的に有効量の阻害ペプチドを使用することによって達成され得る。ここに使用される、「生物学的に有効量の」ペプチドまたは組成物とは、IL-8または特定のインタークリンの作用を阻害する有効量を意味する。例えば、IL-8の阻害に関しては、適量とは、特に化学走性と比較して、好中球の酵素放出を減少させるための有効量である。ここに開示されているように、例えば約100μMから約20μMの濃度のように、種々の濃度のペプチドがin vitroで極めて有効である。従って、ペプチドの局所濃度が同程度に得られる臨床投与量が、特に有用であると予想される。勿論、臨床状況においては、投与されるペプチド組成物の分量と容量は、宿主動物と、治療される状況と投与経路によって左右される。投与しなくてはならない活性ペプチドの正確な量は、医師の判断に基づき、患者固有の場合がある。しかし、ここに提示されているデータに照らせば、ヒトに使用される適量の範囲は単純である。例えば、ARDSまたは嚢胞性線維症の治療には、約0.83mg／kg体重／時（mg/kg/hr）から約16.56mg/kg/hr、好ましくは約0.83mg/kg/hrから約4.14mg/ kg/hr、より好ましくは1.66mg/kg/hrの活性ペプチドを患者１人あたりに投与することが考えられる。本発明に従って、IL-8、GRO、MIP2αまたはMIP2β等のCXCインタークリン阻害組成物は、アミノ酸配列RRWWCX（配列番号２３）をその配列中に含む一般に６から約14残基長の比較的小さなペプチドを含む組成物である。「ペプチド」とはこの場合少なくとも１つのペプチドを意味し、一般式RRWWCX（配列番号２３）に従う配列を含む１つまたはそれ以上のペプチドを意味することがある。本発明に包含される比較的小さなペプチドは、６から14または15残基長であり、正確な長さは本発明の重要な特徴ではない。より小さなペプチドを利用することによって多くの利点が得られる。例えば、大規模合成の費用がかからず、比較的容易であること、組織に浸透し易く、免疫原性が低い等の薬理学的特性が改善されること等が挙げられる。配列RRWWCX（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む以外に、ペプチドは種々のアミノ酸から成る他の短いペプチジル配列を含んでよい。例えば、ある実施例において、ペプチドは配列RRWWCX（配列番号２３）またはRRWWCXX（配列番号５７）の反復配列を含むことができる。これらは、例えば短いターゲティング配列、標識、標識残基、ペプチドの半減期を延長あるいは安定性を増大させると考えられるアミノ酸、あるいはIL-8等のインタークリンの阻害作用を有する限り、あらゆる目的に望ましい追加残基を含む特定の追加配列も含むことができる。これらは、ここに記述されている簡単な分析法により容易に決定することができる。ペプチドに含めることが可能なアミノ酸には、普通に見られる全アミノ酸が含まれる。本技術において一般に行われているように、２通りのアミノ酸命名法が互換性を以て本出願において使用されている。アラニン＝Ala(A); アルギニン＝ Arg(R); アスパラギン酸＝Asp(D); アスパラギン＝Asn(N); システイン＝Cys(C) ; グルタミン酸＝Glu(E); グルタミン＝Gln(Q); グリシン＝Gly(G); ヒスチジン＝His(H); イソロイシン＝Ile(I); ロイシン＝Leu(L); リジン＝Lys(K); メチオニン＝Met(M); フェニルアラニン＝Phe(F); プロリン＝Pro(P); セリン＝Ser(S) ; トレオニン＝Thr(T); トリプトファン＝Trp(W); チロシン＝Tyr(Y); バリン＝ Val(V)。いわゆる、以下の希有アミノ酸または修飾アミノ酸も、本発明のペプチドに含めることができる。２-アミノアジピン酸、３-アミノアジピン酸、β-アラニン（β-アミノプロピオン酸）、２-アミノ酪酸、４-アミノ酪酸（ピペリジン酸）、６-アミノカプロン酸、２-アミノヘプタノン酸、２-アミノイソ酪酸、３-アミノイソ酪酸、２-アミノピメリン酸、2,4-ジアミノ酪酸、デスモシン、2,2'-ジアミノピメリン酸、2,3-ジアミノプロピオン酸、Ｎ-エチルグリシン、Ｎ-エチルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロ-ヒドロキシリジン、３-ヒドロキシプロリン、４-ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ-イソロイシン、Ｎ-メチルグリシン、イソデスモシン、アロ-イソロイシン、Ｎ-メチルグリシン（サルコシン）、Ｎ-メチルイソロイシン、Ｎ-メチルバリン、ノルバリンン、ノルロイシンおよびオルニチン。本発明の抑制作用を持つ組成物には、生物学的に保護するために修飾されたペプチドを含む。ヒトに投与される場合、生物学的に保護されたペプチドは、保護されていないペプチドよりも幾つかの利点を有し、米国特許第5,028,592号（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）に開示されているように、保護されたペプチドはしばしば薬理活性が増大する。これは今回の場合にも同様に認められた。従って、本発明は、アシル化されたペプチドまたはペプチド、好ましくはＮ末端でアシル化されたペプチドを含む組成物を包含する。この場合、実質的にいずれのアシル基でも利用できるが、発明者等は特定のペプチドのＮ末端にアシル基を付加すると、得られたペプチドも、驚くべきIL-8等のインタークリン阻害作用を有することを見いだした。阻害作用を持つペプチド組成物には、Ｃ末端で修飾されたペプチド、すなわちNH₂基付加されたペプチドも含まれる。特に好ましい実施例において、アシル化されたＮ末端とアミド化されたＣ末端残基の両方を持つペプチドは、天然タンパク質とペプチドの構造に極めて近似していると考えられているため好ましい。本発明において使用される組成物は、Ｌ-アミノ酸、Ｄ-アミノ酸またはその混合物を含むペプチドも含めることができる。Ｄ-アミノ酸だけで構成されたペプチドが強力な阻害活性を持つという所見は特に重要である。と言うのは、そのようなペプチドは人体に本来認められるプロテアーゼに対する抵抗性を有することが知られており、免疫原性が低く、従ってより長時間の生物学的半減期を持つものと予想できるからである。本発明の抗インタークリンおよび抗IL-8組成物は一般に、配列番号１または配列番号２４から４２に提示されているアミノ酸配列を含む１つ以上のペプチドを含む。特定の実施例において、短いヘキサマーペプチドが好ましい場合がある。このような場合には、阻害組成物は一般に、配列番号１または配列番号２４から４２に提示されているアミノ酸配列を含む１つ以上のペプチドを含む。別の実施例において、本発明の阻害組成物は、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Xaa₂（配列番号２）の配列を含む１つ以上のペプチドを含むことができる。このような場合、可変部位の１つはアルギニンと定義され、残りのXaa₂はいずれのアミノ酸残基でも可能である。このような配列の具体例は、配列番号３から２２に提示されている。短いヘプタマーペプチドが好まし場合には、組成物は一般に下記に提示されているアミノ酸配列に従うアミノ酸配列を含む１つ以上のペプチドを含む：本発明は、アミノ酸配列Gln Ile Pro Arg Arg Ser Trp Cys Arg Phe Leu Phe （配列番号５２）を有するペプチドを、単独あるいはより好ましくは上記の１つ以上の他のペプチドと組み合わせて使用することも想定している。このドデカマー（dodecamer）の使用に成功したことは、より長いペプチドでも成功するという事実と、生物学的機能が同等である複数の特定のペプチドが活性を有するという事実を示している。従って、このような活性同等物は全て本発明の範囲に入る。ここに記述されている阻害方法に使用するための組成物は、唯一の活性ペプチジル種を含むことができる。あるいは、約40または約45個までの異なるペプチドを含むことができる。2、3、5、10、15、20、30または45個程度の異なるペプチドから成る組成のように、種々なあらゆる組み合わせが考えられる。アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg（配列番号１）および／またはアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Cys（配列番号４）を有するペプチドから成る組成は、特に有用と思われるが、本発明はいずれにせよ、これらのペプチドに限定されるものではない。この点から、血漿中半減期および安定性等のin vitro活性以外の検討事項を、臨床的実施に好ましいペプチドを最終的に選択する際、考慮した方がよいことに言及することは重要である。種々のアミノ酸に置換することによるこれらのパラメータに及ぼす影響は、すぐに測定でき、in vivoで使用するための至適ペプチドまたはペプチドの組み合わせをデザインするために結果を利用できる。 RRWWCX（配列番号２３）配列要素は、本発明のペプチドの重要な特徴である。しかし、これは特定の生物学的機能が同等の物質を本発明の範囲から除外するものではない。例えば、発明者等は、RRWWCX（配列番号２３）の最初のトリプトファンを、活性をわずかしか喪失せずに、例えばセリンと置換することによって交換できることを発見した。従って、本発明に包含される同等物の一例は、配列RR XWCX（配列番号５８）のペプチドである。「同等なアミノ酸」とは、親水性または疎水性指数が互いに±２以内、より好ましくは±１以内、最も好ましくは±0. 5以内のアミノ酸と定義できる。勿論、「機能的に同等」であるためには、ペプチドは、ここに開示されているような分析方法を用いて簡単に決定できる、インタークリンまたはアミノ酸阻害活性をなお保持していなくてはならない。ここに記述されるペプチジル化合物に加えて、発明者等は、ペプチド模倣物質と呼ばれる他の立体的に類似の化合物を、ペプチド構造の重要な部分を模倣して調製できることも考えている。このような化合物は、本発明のペプチドと同様に使用できるため、やはり機能的に同等な物質である。構造的にも機能的にも同等な物質の産生は、本技術に精通する者にとって公知のモデリングと化学的デザインの技術によって達成できる。このような立体的に類似している物質が全て本発明の発明の範囲に入ることは理解できるであろう。本発明に使用するためのペプチドおよび組成物は、多様な方法のいずれか１つによって調製できる。本発明のペプチドを調製する好ましい方法の１つは、自動ペプチド合成方法によるものと考えられる。合成ペプチドは、自動ペプチド合成装置を用いて簡単に調製され、その操作方法は本技術に精通する者にとって一般に公知である。この方法は、例えば一旦治療用に特定のペプチドが選択されてしまえば、特定のペプチドの大量調製に一般に好ましい方法の１つである。阻害ペプチドと、その生物学的機能が同等な物質を調製する別の好ましい方法は、Houghten et al.，(1991)によって記述され、国際特許出願PCT公開WO92/093 00に開示されている組み合わせペプチドライブラリー法を使用する方法である。これらの開示内容は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。これらの方法は、RRWWCXのように、実質的に予め決定された配列を持ち、種々のアミノ酸が１箇所以上に付加されている多数のペプチドを調製し、分析するのに特に有用である。これらの方法は、本発明の組成物の処方に直接使用するためのペプチド混合物を合成するために、あるいはそれに続く個々の合成に使用するために特に活性を有するペプチドを同定するために使用することができる。所望であれば、ペプチドは分子生物学的方法によっても調製でき、「組み換えペプチド」をペプチドを発現する組み換え宿主細胞から得ることができる。これを達成するには、本技術に精通する者にとって公知である、所望のペプチドの配列に基づき、特定のオリゴヌクレオチドを調製し、次いでそのオリゴヌクレオチドを現在市販されている多くの発現ベクターのいずれか１つのような、発現ベクターの中に挿入する。続いて、ベクターを用いて原核または真核宿主細胞を形質転換すると、そこでベクターは所謂組み換えペプチドの発現を命令し、次に組み換え宿主細胞から組み換えペプチドを精製することができる。この方法は、本技術においては標準的な実施法である（Sambrook et al.，1989を参照）。図面の簡単な説明以下の図面は、本発明の明細書の一部を形成し、本発明の幾つかの点を更に明らかにするために含まれている。ここに提示されている具体的な実施例の詳細な説明と共に、これらの図面の１つ以上を参照することによって、本発明を更に理解することができる。図１。Ac-RRWWCX（配列番号２３）シリーズによる結合阻害。Ac-RRWWC（配列番号５６）と６番目に標準的なタンパク質アミノ酸のいずれか１個を含む構造を有する２０種類のペプチドを検討した。Ｘ軸の表示は、カルボキシル末端位の残基を示す（配列番号１および２４から４２）。この試験においては、好中球を1p Mの¹²⁵I標識IL-8と20μMの各ペプチドと共にインキュベーションした。図２。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）によるIL-8の結合阻害。0.1％のBSAを含む 0.2mlのPBS中の好中球（1×10⁶）を、1nMの¹²⁵I標識IL-8と濃度を増加させたAc- RRWWCR-NH₂（配列番号１）と、4℃で90分間インキュベーションした。これらのデータは、４回の試験を代表するものである。図３Ａ。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の存在下における飽和試験。Lundon Ｉを使用して計算された最良適合曲線による結合等温曲線。結合分析はペプチドが存在しない場合（○）、10μM（●）、20μM（△）、または40μM（▲）のペプチドの存在下に、¹²⁵I標識IL-8の濃度を増加させて実施した。各データの点は、結合全体から、標識されていないIL-8が過剰に存在する条件下の非特異的結合を減じることによって計算された特異的結合を表している。図３Ｂ。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の存在下における飽和試験。スキャッチャードプロット。結合分析はペプチドが存在しない場合（○）、10μM（●）、20μM（△）、または40μM（▲）のペプチドの存在下に、¹²⁵I標識IL-8の濃度を増加させて実施した。図４。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の存在下における結合阻害試験。好中球を、1nMの¹²⁵I標識IL-8と非標識IL-8の濃度を増加させて、10μMのAc-RRWWCR-NH₂ （配列番号１）が存在する条件（●）または存在しない条件（○）で実施した。図５。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）のIL-8、C5a、ロイコトリエンB₄の好中球への結合に対する作用。結合分析は、1nMの¹²⁵I標識IL-８（●）、0.25nMの¹²⁵I 標識C5a(△)、または0.4nMの³H標識ロイコトリエンB₄（▲）と濃度を増加させた Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）を用いて実施した。多重比較のために分散分析を使用した。有意差があった場合には、ペプチドを含まない場合の結合と、ペプチドを含む場合の結合の差を、Sheffes検定を用いて検定した。***はp＜0.001。図６。細胞毒性試験。クロムで標識された好中球を、濃度を増加させたAc-RRW WCR-NH₂（配列番号１）と共に0.1％BSAを含むPBS中で4℃で90分間（●）、あるいは1％BSAを含むRPMI-1640培地中で37℃で30分間（○）インキュベーションした。多重比較のために分散分析を使用した。有意差があった場合には、ペプチドを含まない場合の％溶解率と、ペプチドを含む場合の％溶解率の差を、Sheffes検定を用いて検定した。***はp＜0.001。図７。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の好中球の化学走性に対する作用。化学走性は、上下の小室に濃度を増加させたAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の存在下に実施した。下の小室に加えた刺激物質は、10nM IL-8（●）、10nM fMLP（■）、または対照として培地のみ（○）であった。多重比較のために分散分析を使用した。有意差があった場合には、ペプチドを含まない場合の移動距離と、ペプチドを含む場合の移動距離の差を、Sheffes検定を用いて検定した。***はp＜0.001 。図８。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）のβグルクロニダーゼ放出に対する効果。サイトカラシンＢにより前処理された好中球を、100nM IL-8（●）、100nM fM LP（■）、100nM C5a（△）または100nM ロイコトリエンB₄（▲）またはいずれの刺激物質も含まず（○）に、Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の濃度を増加させて、37℃で30分間インキュベーションした。基質としてフェノールフタレイン- グルクロン酸を使用して、上清のβグルクロニダーゼ活性を測定した。多重比較のために分散分析を使用した。有意差があった場合には、ペプチドを含まない場合の移動距離と、ペプチドを含む場合の移動距離の差を、Sheffes検定を用いて検定した。*はp＜0.05、**はp＜0.01、***はp＜0.001。図９。全てＤ-アミノ酸のAc-rrwwcrx-NH₂（配列番号２）シリーズによる結合阻害。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）をＤ-アミノ酸を使用して合成し、20種類の標準的タンパク質のＤ-アミノ酸をそれぞれ７番目の一に加えた（配列番号３から２２）。Ｘ軸の表示は、カルボキシル末端位の残基を示している。10μMの各ペプチドを使用して、結合試験を実施した。Ｌ-アミノ酸により調製されたAc-RR WWCR-NH₂（配列番号１）を対照として使用した。図１０。Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）は、GROとMIP2βのヒト好中球への結合を阻害する。放射性ヨウ素で標識されたMIP2βとGRO/MGSAを種々の濃度のAc-R RWWCR-NH₂と混合し、室温で15分間インキュベーションした。好中球の懸濁液（0 .1％BSAを含む160μlのPBS中に1×I0⁶個の細胞）を40μlの混合物に加え、氷上で90分間インキュベーションした。遠心分離法により油層から、細胞に結合された放射能を遊離の放射能から分離した。％結合阻害値は以下のように計算された。この場合、Ｂはペプチドの存在下に結合された放射能で、Ｔはペプチドが存在しない条件で結合された放射能で、NSPは過剰の標識されていないリガンドの存在下に結合された放射能である。好ましい実施例の詳細な説明 CXCインタークリン、IL-8作用と阻害作用を持つペプチド。 IL-8は、好中球を活性化する分子として同定された(Schroder et al.，1988; Peveri et al.，1988; Yoshimura et al.，1987)。IL-8は、細菌のリポ多糖（LP S）、腫瘍壊死因子またはインターロイキン１等の刺激物質により、単核球-マクロファージおよび内皮細胞によって主に産生され、fMLP、C5a、またはロイコトリエンB₄等の化学走性アゴニストと通常の好中球活性化特性を分担している(Bag giolini et al.，1992)。IL-8は、好中球の化学走性と同時に、酵素放出と呼吸バースを刺激し得る。IL-8は、CXCインタークリンと呼ばれるペプチド分子群の一員であり、CXCインタークリンは全てその末端領域にCXC配列モチーフを持つ。 CXCインタークリンには、GRO、MIP2αまたはMIP2βが含まれ、より最近ではENA7 8も含まれる。 IL-8の機能は、好中球表面膜のIL-8レセプターによって仲介される。最近の研究により、IL-8が少なくとも２つの異なるレセプターに結合するのに対し、インタークリン群に属する他の物質はそのレセプターの１つに高い親和力で結合することが明らかにされた(Holmes et al.，1991; Murphy & Tiffany，1991; LaRosa et al.，1992; Cerretti et al.，1993)。これらのレセプターは、他の化学走性アゴニストのレセプターとは別のものである(Dohlman et al.，1987)。 IL-8は、数種類の関節疾患患者の関節液に(Brennan et al.，1990)、胸腔内浸出のある患者の胸腔内に(Miller & Idell，1993)、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）患者の肺水腫液に(Miller et al.，1992)、高濃度に認められている。IL-8濃度の上昇は、嚢胞性線維症患者を対象として最近の種々の研究においても明らかに証明されている(Richman-Eisenstat et al.，1993; McElvaney et al.，1992; N akamura et al.，1992; Bedard et al.，1993)。 IL-8は好中球を活性化し、好中球は強力な抗菌細胞であるが、好中球はある種の酵素を放出することによって重度の組織損傷を引き起こす可能性がある。従って、IL-8はこれらの疾患とその他の炎症性疾患の病因において重要と考えられている。従って、発明者等は、IL-8の機能を調節することが、種々の疾患や病態、特にARDSと嚢胞性線維症を抑制するための優れた方法であるとの仮説を立てた。最近、IL-8の機能の変更を試みる種々の研究結果が報告されている。これらには、IL-8の合成を阻害することに成功したことを示す幾つかの研究が含まれる(S tandiford et al.，1992; Lam et al.，1990)。また、抗ヒトIL-8が、免疫障害ラットにおいて肺の炎症を改善することが報告されている(Mullingan et al.，1 993)。嚢胞性線維症患者の気道のIL-8分泌が、報告されている所によれば、好中球のエラスターゼの分泌性ロイコプロテアーゼ阻害剤によって減少された(McElv aney et al.，1992)。更に、IL-8産生が、酸素遊離基スキャベンジャーによって LPSによって刺激される全血において阻害されたことが明らかにされている(DeFo rge et al.，1992)。最後に、２つのサイトカイン、インターフェロンガンマ(Ca ssatella et al.，1993a; 1993b)とインターロイキン４（Standiford et al.，1 990）がIL-8の合成を阻害した。しかし、このような研究によって、特に有効な IL-8阻害剤、あるいは特定の好中球反応をそれ以外の反応よりも優先的に阻害できる阻害剤はまだ生成されていない。 IL-8とそのレセプターの相互作用に関する研究も行われている。これから、IL -8分子の一部と同じ構造を持つ特定のペプチド阻害剤が同定されている。例えば、Gayleと共同研究者等は、ウサギのIL-8のレセプターのアミノ末端に位置する4 4個のアミノ酸が、IL-8の結合と機能の中等度に良好な阻害剤であることを見い出した(Gayle et al.，1993)。本発明者等は、合成ペプチド、特にIL-8のアミノ末端のペプチドが、アミノ末端の好中球への結合と好中球の化学走性を阻害することを見いだした(Miller et al.，1990; Miller et al.，1993)。Ｎ末端ペンタペプチドIL-8阻害剤も報告されている(Goodman et al.，1991)。それにもかかわらず、IL-8分子の構造に関する知見からは有効なペプチド阻害剤はまだ開発されていない。従って、この目的を達成するために、本発明者等は、400グループのヘキサペプチドのライブラリをスクリーニングすることによって、IL-8阻害活性に関して、種々のその他のペプチド組成物を分析した。これらのスクリーニング分析において、¹²⁵I標識インターロイキン-8（10^-12M）を100 μlペプチドと混合してから、好中球に加え、4℃で90分間インキュベーションした。パラフィンとシリコーン油の混合物の高密度クッションによる遠心分離法により、結合された放射能を、結合されていない放射能から分離し、好中球に結合された¹²⁵Iをガンマ線スペクトロメータでカウントし、結果を阻害されたIL-8結合のパーセントとして表すことができた。これらの研究において、配列RRWWCX（配列番号２３）（末端のアミノ酸はどのアミノ酸でもよい。）のヘキサマーは、有効なIL-8阻害剤であることが見いだされた。ある種のRRWWCX-型のペプチドは、抗ブドウ球菌特性を示すことが過去に見いだされている（Houghten et al.，1991）が、これらのペプチドが抗サイトカインまたは抗炎症活性を有することを示唆する他の機能特性は報告されていない。本発明者等は、RRWWCRが、GROおよびMIP2βのヒト好中球への結合を減少させた所見によって、GRO、MIP2等の他のCXCインタークリンも有効に阻害することを明らかにした。 RRWWCX（配列番号２３）シリーズのペプチドは全て抗IL-8活性を有するが(表１および１Ｂ)、ペプチドRRWWCR（配列番号１）が特に有効であることが認められた。より長いタンパク質の配列に存在するペプチドに似せるために修飾された、アミノ末端にアセチル基、カルボキシル末端にアミノ基が付いたこのペプチドの一形態（Ac-RRWWCR-NH₂; 配列番号１）は、これらの試験の焦点の１つとなった。 Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）は、¹²⁵I標識IL-8の好中球への特異的結合を阻害し、見かけのK_Iは約10μMで、同じペプチドのアセチル化されていない形態よりも約２倍有効であった。正確なK_I値は、ポジティブな協同作用が存在するため得られなかった。ペプチドが存在しない場合のIL-8の結合等温線は、コンピュータープログラムLundon Iを使用して分析すると、１部位モデルに最も良好に適合した。スキャッチャードプロットにおいてより低いIL-8濃度データが得られたことの説明の１つとして、低濃度のIL-8濃度では親和性の高い結合が隠蔽されたことが挙げられる。しかし、最近の研究により、２つの異なるクラスのIL-8レセプターにIL-8がほぼ同等の親和力で結合していることが明らかにされている(Lee e t al.，1982; Schmacher et al.，1992)。従って、１部位モデルとしてのこの結合部位のB_maxの推定値は、２つのクラスのレセプターのB_maxの合計を表しており、K_dの推定値はこれらのレセプターに共通である。ペプチドが存在する場合、結合等温線は２部位モデルに非常に良好に適合する。Ac-RRWWCR-NH₂が存在する場合の結合等温線の分析により、このペプチドがIL- 8の結合を抑制し、２つのクラスのレセプターを異なる程度は異なっていることが明らかにされた。結合パラメータの推定値から、レセプターの１つのクラスのレセプターの親和力は10μMのペプチドによって抑制されたことから、競合的阻害が示唆される。もう１つのクラスのレセプターを非競合的に阻害するためには、より高濃度のペプチドが必要である。本阻害ペプチドの活性はIL-8に特異的である。Ac-RRWWCR-NH₂はC5aまたはロイコトリエンB₄の好中球への結合、ホルミル-L-Met-L-Leu-L-Phe（fMLP）により誘導される化学走性またはfMLP、C5aまたはロイコトリエンB₄により誘導されるβ グルクロニダーゼの放出を阻害せず、また、好中球の化学走性または酵素放出を引き起こす内在性能力も持たない。これらの観察結果は、Ac-RRWWCR-NH₂のようなペプチドが、IL-8のレセプター結合を変更した結果、IL-8により誘導されるヒト好中球の活性化を阻害し得ることを示唆している。更に、Ac-RRWWCR-NH₂構造に基づくヘキサマーとヘプタマーペプチドは、化学走性よりも酵素放出を優先的に阻害するものと考えられる。事実Ac-RRWWCR-NH₂ は、50μMの濃度で10nMのIL-8によって誘導される好中球の化学走性を顕著に抑制し、酵素放出を引き起こすのに10倍以上のIL-8が必要であるのに、2μMの濃度でβグルクロニダーゼの放出を有意に顕著に抑制することが明らかにされている。このより低い濃度で化学走性よりも優先的に酵素放出を阻害することは、特に重要で驚くべき発見であり、これによってこの種のペプチドは成人呼吸窮迫症候群の患者の肺障害の治療に理想的なものとなる。上記の発見も、好中球の異なる機能を発揮するためには、IL-8が異なるクラスのレセプターに結合しなくてはならない可能性を示唆している。本発明の利用そのものには重要ではないが、このことから、本発明のペプチドは、IL-8レセプターと好中球の機能を更に解明するための研究手段として利用するのに適したものとなる。次に、全てのアミノ酸がＤ-アミノ酸であるAc-rrwwcrx-NH₂（配列番号２）を含む２組目のペプチドの阻害活性を検討した。RRWWCRX（配列番号２）シリーズのペプチドが全て抗IL-8活性を持つことが再度認められた（表５Ａおよび５Ｂ）。しかし、Ac-rrwwcrc-NH₂（配列番号４）が最良の阻害剤であり、Ac-rrwwcr-NH₂（配列番号１）のほぼ４倍も強力であることが見いだされた。この観察結果は、哺乳動物のプロテアーゼがＤ-アミノ酸ペプチドとタンパク質を分解できないことから、重大な意味を持つ可能性がある(Togo et al.，1989)。従って、Ｄ-アミノ酸ペプチド阻害剤は、in vivoで寿命がより長いものと予想される。他の多様な合成ペプチドも、IL-8の好中球への結合阻害能を標準的分析法で検討した。これらのペプチドは、IL-8のアミノ末端の類似体であるか、あるいはRR WWCR（配列番号２）の６つの残基の内５つを持つタンパク質データベース（PIR またはスイス-プロット(Swiss-Prot)）に認められるタンパク質の断片であった。後者のペプチドは、テキサス州オースチンにある高性能計算センター（the Ce nter for High Performance Computing）のCRAYコンピューターに存在するデータベースを探索するIGSUITEプログラムを使用して、RRWWCR（配列番号１）のPIR およびスイス-プロット(Swiss-Prot)データベースを探索することによって同定された。データベース内のタンパク質で６つのアミノ酸全てを含んでいたデータはなかった。過去の研究により、IL-8の72個のアミノ酸の内、4、5、6番目に位置するGlu、 Leu、Argが好中球への結合に重要であり(Clore et al.，1992; Clark-Lewis et al.，1991)、IL-8のアミノ末端ペプチドがIL-8の好中球への結合と化学走性を阻害する（Miller et al.，1993）ことが明らかにされている。従って、発明者等は、IL-8に類似のAc-KELRCQ-NH₂（配列番号５４）とELRCQCIKTY（配列番号４９、インタークリンペプチドのC-X-Cモチーフを含んでいる）を、そのCysを含まない類似体である、ELRSQSKTY（配列番号５０）とERLMQMKTY（配列番号５１）と共に検討した。これらのペプチドはいずれも、IL-8の好中球への結合を阻害できなかった。次に、発明者等は、RRWWCR（配列番号１）が、IL-8に関連する生理的機能を持っていると思われる他のペプチドに存在しているかどうかを明らかにするために、タンパク質データベースを探索した。２つのペプチドが、RRWWCR（配列番号１）の６つの残基の内５つを含み、既知のタンパク質の中に含まれていたことから、研究用に同定され、選択された。それらは、GWRRWWCDAVLY（配列番号５３）とQI PRRSWCRFLF（配列番号５２）であった。前者のペプチドは、「細胞表面糖タンパク質CD11c前駆体-ヒト白血球接着レセプターp150,95アルファ鎖」に含まれ、後者は3',5'-サイクリックGMPホスホジエステラーゼベータ鎖-ウシに含まれていた (Ocvchinnikov et al.，1987; 受託番号、S00251)。これらの類似体の１つ、すなわちQIPRRSWCRFLF（配列番号５２）は、IL-8の好中球への結合を約60％阻害したが、この活性はAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）よりも低い。この配列が抽出されたタンパク質、ウシの3',5'-サイクリックGMPホスホジエステラーゼが、IL-8機能に生理学的役割を果たしている可能性は低いが、これを完全に除外することはできない。この研究から得られた最も重要なデータは、RRWWCR（配列番号１）が、活性を僅かに喪失するだけで修飾され得ることを示唆している。もう１つのペプチド、GRRWWCDAVLY（配列番号５３）に活性が無いことは、RRWWCR（配列番号１）の中の最後のArgをAspに変えると、Ac-rrwcc d（配列番号２６）の活性が僅かであるという観察結果によって支持されているように、IL-8の好中球への結合能を大きく減じることを示唆している。従って、ここに提示されている実施例は、IL-8の好中球への結合と好中球の活性化を阻害できる新しい一連のペプチド阻害剤の同定法を詳細に示すものである。RRWWCX（配列番号２３）とRRWWCRX（配列番号１）型のペプチド阻害剤は、僅か６個ないし７個の残基長で、Ｄ-アミノ酸も活性化を有する点で、従来報告されている阻害剤を凌ぐ明らかな利点を有する。このクラスの阻害剤は、成人呼吸窮迫症候群等のIL-8の抑制されない作用によって引き起こされる疾病の治療に有用と思われる。これらの阻害剤は、容易に阻害されない化学走性によって、好中球の肺への進入を可能にするが、続いて有害な酵素の放出を優先的に阻害する点で、明らかな利点を有する(McGuire et al.，1982)。多種多様の治療用途に加え、本発明のペプチドと組成物は他の実施例においても有用である。これらには、例えばIL-8阻害剤の分析にポジティブコントロールとして種々のバイオアッセイに利用する、IL-8レセプターの相互作用と機能を更に解明するために利用する、抗体産生に利用する等が挙げられる。生物学的機能が同等な物質幾つかの生物学的機能が同等な物質は、本発明の範囲に入ると考えられる。生物学的機能が同等なアミノ酸の概念は、本技術に精通する者にとって公知であり、タンパク質またはペプチドの構造に修飾および変更を加えることが可能で、それでもなお同様の、あるいはその他の望ましい特性を得ることができるという知識によって具体化される。しかし、生物学的機能が同等なタンパク質またはペプチドの定義には、分子の定義された部分の中で変更可能な数には限度があり、それでもなお生物学的活性は許容できる程度に同等であり、重要な活性部位または構造的に必須の残基は変更できないという概念が伴うことも、熟練技術者は十分理解するであろう。従って、生物学的機能が同等なペプチドはここでは、大部分あるいは全てではない幾つかのアミノ酸が置換されているペプチドと定義される。特に、ヘキサマーまたはヘプタマーペプチドに関しては、約２個のみ、より好ましくは１個のアミノ酸だけが特定のペプチドの範囲内で置換されているものと考えられる。もちろん、異なる置換が行われた異なる多数のペプチドを作製でき、本発明に従って利用できる。ペプチド内の限られた数の残基を置換する観点から、レセプターと細胞等の構造に関する相互結合能により、あるいはこれらの部位に結合する他の分子との競合能によって測定できるように、機能を明らかに低下させずに、特定のアミノ酸を他のアミノ酸に置換できることは公知である。タンパク質またはペプチドの生物学的機能活性を規定するのは、その相互作用および競合作用能であることから、ペプチド配列（あるいは勿論その基礎となっているDNAコーディング配列）において、特定のアミノ酸を置換し、それにもかかわらず、同様のペプチドあるいは、改善された特性さえ得ることが可能である。アミノ酸の置換は一般に、アミノ酸側鎖の置換基の相対的類似性に基づく。例えば、その疎水性、親水性、電荷、サイズ等である。アミノ酸側鎖置換基のサイズ、形状、種類の分析から、アルギニン、リジン、ヒスチジンは全てプラスに荷電された残基であり、アラニン、グリシン、セリンは全て同様のサイズであり、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンは全て一般に類似の形態を持つ。従って、これらの検討事項に基づき、アルギニンと、リジンと、ヒスチジン、そして、アラニンと、グリシンと、セリン、さらに、フェニルアラニンと、トリプトファンと、チロシンは、ここに生物学的機能が同等な物質と定義されている。より定量的な置換を行うために、アミノ酸の疎水性指数を考慮できる。各アミノ酸に、疎水性と電荷特性に基づき、疎水性指数を割り当てた。これらは次ぎの通りである。イソロイシン（＋4.5）; バリン（＋4.2）; ロイシン（＋3.8）; フェニルアラニン（＋2.8）; システイン／シスチン（＋2.5）; メチオニン（＋ 1.9）;アラニン（＋1.8）; グリシン（−0.4）; トレオニン（−0.7）; セリン（−0.8）; トリプトファン（−0.9）; チロシン（−1.3）; プロリン（−1.6） ; ヒスチジン（−3.2）; グルタミン酸塩（グルタミン酸）（−3.5）; グルタミン（−3.5）; アスパラギン酸塩（アスパラギン酸）（−3.5）; アスパラギン（ −3.5）; リジン（−3.9）; アルギニン（−4.5）。タンパク質の生物学的機能の相互作用を検討する際の疎水性アミノ酸指数の重要性は、本技術において一般に理解されている（Kyte & Doolittle，1982，引用することにより本明細書の一部をなすものとする）。ある種のアミノ酸を、類似の疎水性指数またはスコアを持つ他のアミノ酸に置換することができ、なお同様の生物学的活性を保持できることは公知である。疎水性指数に基づき置換する場合には、疎水性指数が±２以内のアミノ酸の置換が好ましく、±１以内が特に好ましく、±0.5以内は更に好ましい。引用することにより本明細書の一部をなすものとする米国特許第4,554,101号に開示されているように、類似のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて行うことも可能である。米国特許第4,554,101号において、以下の親水性指数がアミノ酸残基に割り当てられている。アルギニン（＋3.0）; リジン（＋3.0）; アスパラギン酸塩（アスパラギン酸）（＋3.0±1）; グルタミン酸塩（グルタミン酸）（＋3.0±1）; セリン（＋0.3）; アスパラギン（＋0.2）; グルタミン（＋0.2）; グリシン（0）;プロリン（−0.5±1）; トレオニン（−0.4）; アラニン（−0. 5）; ヒスチジン（−0.5）; システイン（−1.0）; メチオニン（−1.3）; バリン（−1.5）; ロイシン（−1.8）; イソロイシン（−1.8）; チロシン（−2.3） ; フェニルアラニン（−2.5）; トリプトファン（−3.4）。特定のアミノ酸を、類似の親水性指数を持つ他のアミノ酸に置換することができ、なお同様の生物学的活性を保持できることは公知である。親水性指数に基づき置換する場合には、疎水性指数が±２以内のアミノ酸の置換が好ましく、±１以内が特に好ましく、±0.5以内は更に好ましい。医薬製剤本発明のペプチドおよび組成物を、IL-8等のCXCインタークリンまたは好中球が関与している、あるいは不適切なあるいは増強された炎症反応が認められる様々な疾患の治療に利用することができる。本発明は特に、喘息、気管支炎、嚢胞性線維症およびARDSに伴う肺の炎症の治療に適している。ARDSや嚢胞性線維症等の疾病を治療するには、静注、筋注または皮下注射等の非経口投与が最も好ましい投与経路と考えられるが、エーロゾルまたは吸入剤も使用できる。スプレーおよび吸入剤は、小滴が十分微細で、サイズが均一であり、霧が細気管支に到達できる場合に限り有効である。粒子サイズは、エーロゾルまたは吸入剤により治療薬を投与する場合非常に重要である。肺腔に透過するための至適粒子サイズは、0. 5から7μmのオーダーである。加圧エーロゾルにより微細な霧が産生されるならば、その利用が有利と思われる。このような治療法と治療所要が実施例VIIIに詳細に記述されている。種々の臨床状態における炎症の治療に、本発明が利用できるため、多くの種類の薬剤ペプチド製剤が考えられる。本発明の治療または薬剤組成物は、肺あるいはその他を治療する場合でも、一般に薬剤学的に許容可能な媒質に溶解または分散された、有効量の比較的小さなインタークリンまたはIL-8阻害ペプチドを含む。「薬剤学的に許容可能な」という言葉は、人体に投与された時、アレルギー、毒性またはその他の副作用を引き起こさない分子全体および組成物を指す。薬剤学的に許容可能な媒質または担体には、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤と吸収遅延剤等の全てが含まれる。薬剤活性物質にこのような媒質および薬剤を使用することは本技術において公知である。従来の媒質または薬剤が活性成分に適合しない場合以外は、治療組成物にそれらを使用することが考えられる。補足用活性成分も、本発明の治療組成物に含めることができる。例えば、インタークリン、IL-8、好中球を阻害するペプチドを、IL-8由来Ｎ末端ペプチド、IF N-γ、酸素遊離基スキャベンジャー等のその他の薬剤と組み合わせて、治療用ペプチド混合物を調製することもできる。活性成分として右旋性ペプチドを含む、インタークリン、IL-8、好中球阻害ペプチドを含む薬剤または薬理組成物の調製は、本発明の発見に照らして、本技術に精通する者にとって公知である。所望であれば、このような組成物は、液体溶液または懸濁液の注入剤として、溶液あるいは懸濁液に使用するのに適した固体、注入前の液体として、経口投与用錠剤またはその他の固体として、徐放剤として、あるいはクリーム、ローション、うがい薬、および実施例VIIIの吸入剤とエーロゾルを含む現在使用されているその他の形態として、調製できる。遊離塩基または薬剤学的に許容可能な塩として、活性ペプチドおよび化合物の溶液を、ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と共に、水に適切に混合して調製することができる。分散液も、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物と油の中に調製できる。通常の保存および使用条件で、これらの調製品は、微生物の増殖を防止する保存薬を含む。注入用に適した滅菌溶液は、種々の疾病の治療に有用と思われ、血液中または炎症の正確な部位に投与できる。注入に適した薬剤形態には、滅菌水溶液または分散液および、滅菌注入溶液または分散液を即座に調製するための滅菌粉末が含まれる。全例において、薬剤形態は滅菌されなくてはならず、簡単に注入できる程度の液体でなくてはならない。製造および保存条件でで安定でなくてはならず、細菌および真菌等の微生物の汚染作用から保護されなくてはならない。ペプチドは、中性または塩の形態で組成物に調製され得る。薬剤学的に許容可能な塩には、酸を付加した塩（ペプチドの遊離アミノ基によって形成される）が含まれ、例えば塩酸または燐酸等の無機酸、あるいは酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸によって形成される。遊離カルボキシル基によって形成される塩も、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化鉄等の無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から得られる。担体も、例えば水、エタノール、多価アルコール（例えば、グリセロール、オプロピレングリコール、液体ポリエチレンングリコール等）、およびその適切な混合物、および植物油等を含む溶媒または分散媒が可能である。レシチン等のコーティングを使用することにより、分散液の場合には必要な粒子サイズを維持することにより、界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。微生物作用は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の種々の抗菌剤と抗真菌剤により防止できる。多くの場合、例えば糖または塩化ナトリウム等の等張剤を含めるのが好ましい。注入可能な組成物の吸収遅延は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収遅延剤の使用により可能である。滅菌注射液は、必要量の活性化合物を必要に応じて上記の種々の他ん成分と共に適切な溶媒に含め、続いて濾過滅菌して調製される。一般に、分散液は、種々の滅菌活性成分を、基本的な分散媒と必要な上記の他の成分を含む滅菌媒質の中に含めて調製される。滅菌注射液を調製するための滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法は真空乾燥法と凍結乾燥法で、これによって予め滅菌濾過された溶液から活性成分と所望の追加成分が得られる。筋肉内注射用のより高濃度の溶液も考えられる。この観点から、非常に迅速な透過性が得られ、高濃度の活性ペプチドまたは薬剤を小さな部位に投与できることから溶媒としてDMSOを利用するのが好ましい。クリーム、軟膏、ゲル等の局所塗布用ペプチド製剤も考えられる。油性または水溶性軟膏基剤の調製法も本技術において公知である。例えば、これらの組成物は、植物油、動物脂質を含んでよく、より好ましくは石油から得られる半固形炭化水素を含む。使用される個々の成分には、白色軟膏、黄色軟膏、セチルエステルろう、オレイン酸、オリーブ油、パラフィン、ワセリン、白色ワセリン鯨ろう、グリセリン軟膏、白ろう、黄ろう、ラノリン、脱水ラノリン、モノステアリン酸グリセリドが含まれる。グリコールエーテルと誘導体、ポリエチレングリコール、ステアリン酸ポリオキシル40、ポリソルベート等の種々の水溶性軟膏基剤も利用できる。所望ならば、例えば経皮吸収貼付剤、イオン導入法または電子輸送法により、経皮投与も利用できる。眼科用緩衝液も本発明の範囲に入る。これらは、網膜の血管新生に関連する疾患に罹患した患者に使用できる。ペプチドがpHの変化を引き起こす可能性があるので、緩衝化が必要である。眼科用製剤は従来の製剤法に従って調製できる。例えば、“Remington's Pharmaceutical Science（レミントンの製薬科学）”第15 版、1488-1501ページを参照（Mack Publishing Co.，イーストン、ペンシルバニア州）。適切な眼科用製剤は一般にここに開示されている新しいジペプチド、ペプチドまたは薬剤を、薬剤学的に許容可能な溶液、懸濁液または軟膏中に約0.01ないし約１重量％含む。眼科用製剤は好ましくは滅菌緩衝液の形態で、所望により保存剤、緩衝剤、等張剤、酸化防止剤、安定剤、ノナン湿潤剤または清澄剤、増粘剤等の添加成分を含む。このような溶液に使用するのに適切な防腐剤には、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサール等が含まれる。適切な緩衝液は、pHをほぼpH6からpH8に、好ましくはほぼpH7からpH7.5に維持するのに十分量のホウ酸、重炭酸ナトリウムおよびカリウム、ホウ酸ナトリウムおよびカリウム、炭酸ナトリウムおよびカリウム、酢酸ナトリウム、燐酸ナトリウム等を含む。適切な等張剤は、デキストラン、デキストラン70、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウム等で、眼科用溶液と同等の塩化ナトリウムは0.9±0.2％の範囲にある。適切な酸化防止剤と安定剤には、重亜硫酸ナトリウム、異性重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、チオ尿素等が含まれる。適切な湿潤剤または清澄剤には、ポリソルベート80、ポリソルベート20、ポロキサマー282、チロキサポールが含まれる。適切な増粘剤には、デキストラン40、デキストラン70、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース等が含まれる。製剤化にあたり、治療薬は投与形態に合った方法で、薬理学的に有効な量を投与される。製剤は、上記の注入可能な溶液のような種々の投与形態で簡単に投与されるが、除放カプセル等も使用可能である。典型的には、ペプチドを分散させるのに必要な最小容量の組成物が利用される。適切な投与法も多様であるが、まず化合物を投与し、結果をモニタリングしてから、調節した用量を更に何回も投与するのが典型的である。例えば、非経口投与の場合、適切に緩衝化され、必要な場合には等張水溶液を調製し、静注、筋注、皮下投与に調製され、投与され、腹腔内投与用まで調製、投与される。１回投与量が1mLの等張NaCl溶液に溶解され、1000mLの皮下注入液に加えるか、あるいは提案された注入部位に注入される（例えば、“Remington's Pharmaceutical S cience（レミントンの製薬科学）”第15版、1035-1038ページおよび1570-1580ページを参照）。幾つかの実施例において、活性化合物を経口投与することができる。これは、一般に消化酵素によるタンパク分解に抵抗性がある、あるいは抵抗性が与えられた薬剤に関して考えられる。このような化合物には、右旋性ペプチドや、化学的にデザインあるいは修飾された薬剤、およびペプチダーゼとリパーゼによる分解を防止するために除放カプセルにペプチドとリポソームを含む製剤が含まれる。経口製剤には、不活性な希釈剤、または同化可能な食用に適した担体と組み合わせた化合物や、ハードまたはソフト外殻カプセルに包まれた化合物、錠剤の中に圧縮された化合物、あるいは食物に直接含めた化合物が含まれる。経口投与に関しては、活性化合物を賦形剤と合わせることが可能で、経口錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤等が含まれる。このような組成物と製剤は一般に、少なくとも0.1％の活性化合物を含む。勿論、組成物と製剤の割合を変えることは可能で、好都合には単位重量の約2％から約60％である。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投与を達成できる量である。錠剤、トローチ、丸剤、カプセル等には以下も含まれる。トラガントガム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチン等の結合剤や、燐酸カルシウム等の賦形剤、そしてコーンスターチ、イモデンプン、アルギン酸等の崩壊剤、さらにステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤のほか、スクロース、乳糖またはサッカリン等の甘味料を添加でき、あるいはペパーミント、冬緑油またはチェリーフレーバー等の香料を添加できる。投与単位形態がカプセルの場合、上記の物質に加えて、液体担体を添加できる。他に種々の物質をコーティング剤として、あるいは物理的投与単位形態を変えるために含めることができる。例えば、錠剤、丸剤またはカプセルはシェラック、砂糖またはその両者でコーティングすることができる。エリキシルのシロップは、活性化合物と、甘味料としてスクロースを、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベンを、着色料および香料としてチェリーまたはオレンジフレーバーを含めることができる。勿論、どのような投与単位形態を調製する場合でも、使用される材料は全て薬剤学的に純粋で、使用される分量に毒性が実質的に認められないものでなくてはならない。更に、活性化合物を除放製剤および処方に含めることができる。以下の実施例は、本発明の好ましい具体例を提示するために記載されたものである。本技術に精通する者は、この後の実施例に開示されている技術が、本発明を実施する際十分機能することを考慮した、発明者によって発見された技術であり、従って本発明の実施にあたりより好ましい方法と見なしてよいことを理解するはずである。しかし、本技術に精通する者は、本発見に照らして、開示されている具体的な実施例において多くの変更が可能であり、なおかつ本発明の精神と範囲を逸脱することなく、同様の結果が得られることを理解するはずである。実施例Ｉ IL-8のヘキサマーペプチド阻害剤最初に、配列RRWWCX（配列番号２３）（Ｘはどのアミノ酸でもよい）のヘキサマーペプチドが、IL-8の阻害剤として作用するかどうかを明らかにするために、一連の研究を実施した。最初のスクリーニング分析は、特定のペプチドがIL-8のヒト好中球への結合を阻害する能力を明らかにすることに基づいている。Ａ．ヒト好中球の調製好中球を入手するために、人体を利用することは、人体実験に関する研究所の審査委員会によって承認された。好中球の調製に関しては、ヒト血液を酵素放出試験用にはヘパリンで、他の試験用には0.33％クエン酸ナトリウムで抗凝血処理した。化学走性と酵素放出試験のために、Boyumの方法により好中球をデキストラン沈降法と赤血球溶解により分離した(Kohler & Milstein，1975)。結合試験と細胞毒性試験のために、Percoll（Pharmacia Fine Chemicals，ピスカタウェイ、ニュージャージー州）の勾配で好中球を更に90〜93％まで精製した(Kohler & Milstein，1975)。Ｂ． IL-8結合分析組み換えヒトIL-8（72個のアミノ酸; Pepro Tech Inc.，ロッキーヒル、ニュージャージー州）を、HunterおよびGreenのクロラミンＴ法（Hunter & Green）により、¹²⁵Iで放射能標識した。以下のように、Besemer et al.，(1989)の方法に従って結合試験を実施した: 被験ペプチドの存在下と非存在下に、0.1％ウシ血清アルブミン（BSA）を含む燐酸緩衝液pH7.4（PBS）の中に入れた好中球を、標識リガンドと共に平衡に達するまで4℃で90分間インキュベーションし、続いてパラフィン油（Fisher Scientific，フェアローン、ニュージャージー州）とシリコーン油（Serve Co.，ニューヨーク、ニューヨーク州）の混合物から成るクッションを通して、Beckman B ミクロ遠心分離器により12,000×gで３分間遠心分離した。次にガンマー線スペクトロメーターでペレットと上清をカウントした。非特異的結合は、非標識リガンドが100倍過剰に存在した場合の結合を測定したものと推定された。結合定数はコンピュータープログラムLundon ＩとLundon IIを用いて計算された。Ｃ．ペプチド RRWWCR-タイプのペプチドは、αアミノ基を保護するためにtBOCを使用して（S tewart & Young，1969）サンディエゴのHoughton Pharmaceutical Company によって合成された。合成ペプチドは全て、調製的C18逆相カラム（Waters Co.，ニューベッドフォード、マサチューセッツ州）を使用して高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）で精製した。0.1％トリフルオロ酢酸（TFA）から0.1％TFA中の80 ％アセトニトリルの勾配を用いてペプチドを溶出した。アミノ酸分析と配列決定によりペプチドの組成を確認した。Ｄ．統計分析本実施例および以下の実施例の全てにおいて、データは平均値と標準偏差（S. D.）の変動で表されている。分散が等しく、集団が正規分布しており、２群だけを比較する場合には、有意差はSheffe検定によって決定した。分散とSheffe検定の分析結果を用いて、多重比較を行った。Ｅ．結果これらの試験において、10^-12MのIL-8を用いてペプチド濃度100μMで阻害のスクリーニングを実施した。最初の一連の試験において、Ｘを各標準タンパク質アミノ酸に次々に変えたRRWWCX（配列番号２３）のカルボキシル末端残基を付けた 20種類のペプチドを合成した。表１Ａと表１Ｂに示すように、最初の一連の試験において、幾つかのアミノ酸はIL-8結合を完全に阻害した。表１Ａと１Ｂに表示されているデータは同じデータで、簡単に比較できるように、表１Ａは阻害率（％）の順に、表１Ｂは配列番号の順に表示されている。RRWWCD（配列番号２６）、RRWWCE（配列番号２７）、RRWWCN（配列番号３５）、RRWWCQ（配列番号３７）以外の全てのヘキサマーペプチドが非常に顕著な阻害活性を持つことは明らかである。表１の予備データはRRWWCN（配列番号３５）が阻害活性を持たないことを示しているものの、その後の試験によりこのペプチドが実際にはある程度の阻害特性を示すことが明らかにされた（図１）。表１Ａと表１Ｂに示すように、最初の試験において、幾つかのアミノ酸はIL-8 結合を完全に阻害した。そこで、相対的有効性を評価するために、低濃度のペプチドを用いてこの群を再評価した。これらの試験において、Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）が、IL-8の好中球への結合を阻害する最も強力な阻害剤であることが見いだされた（図１）。図１のデータは、RRWWCX（配列番号２３）がこの条件において他のよりも有意に優れていることを示している。もう１つの初回試験において、RRWWCR（配列番号１；Ac-RRWWCR-NH₂）のアセチル化誘導体が、IL-8の好中球への結合阻害に関して、アセチル化されていないペプチドの約２倍有効であることが明らかとなった。実施例II RRWWCRのIL-8結合阻害作用の速度論本実施例に記述されている試験において、実施例IIに詳細に記述されている方と同じ方法を用いた。平均EC₅₀は、複数の結合阻害曲線から、13.7±0.6μMと決定された（これらの分析の代表曲線を図２に示す）。もしも、阻害機序が、単一部位モデルによる純粋に競合的であれば、推定K_Iは約10μMであった。しかし、機序はより複雑であった。通常の単一部位モデルよりも結合阻害曲線が急勾配であり、ヒル係数値が高い（1.5〜1.7）ことから、ポジティブの協同作用の存在が示唆された。Lundon IIコンピュータープログラムを使用して分析したところ、曲線は、1、2、3部位モデルのいずれともよく適合しなかったが、IL-8は好中球の少なくとも２つの異なるレセプターと反応することが知られている。従って、各クラスのレセプターに関して個々のK_Iを推定することは困難であった。 RRWWCR（配列番号１）によるIL-8結合阻害の速度論を決定した。Ac-RRWWCR-NH₂ が存在せず、３種類の濃度のペプチドが存在する場合のIL-8結合等温線を図３ａに示す。ペプチドが存在しない場合のスキャッチャードプロットは、IL-8の２つの異なるレセプターへの結合を示さなかった（図３ｂ）。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）が存在する場合のプロットは非線形で、Lundon Ｉコンピュータープログラムを用いて分析したところ、２部位モデルと矛盾しなかった。K_dとB_maxの推定変化量を表２に示す。データは、１群のIL-8レセプターは10μMのペプチドでその親和力が低下し、もう１群のレセプターはペプチド濃度の上昇と共に、B_maxが低下した。結合速度論の特徴を更に明らかにするために、10μM Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の存在下に非標識IL-8を用いて結合阻害分析を実施した（図４）。Ac-RRW WCR-NH₂（配列番号１）が存在する場合と、存在しない場合の２つの結合阻害曲線を、Lundon IIを用いて分析し、２部位モデルに良好に適合することが明らかにされた。レセプターの親和力が低い状態が出現した所見は認められなかった。 K_dとB_maxの推定変化量は、10μMのペプチドが存在すると、親和力が高い部位だけにその親和力とB_maxの低下が生じることを示している（表３）。実施例III IL-8結合阻害に対するRRWWCRの特異性リガンド-レセプター結合に対するAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の特異性を検討するために、発明者等は、ペプチドがヒト¹²⁵I-C5aまたは³H-ロイコトリエンB₄ のヒト好中球への結合を減少させるかどうかを検討した。組み換えヒト補体第５成分(C5a)（Sigma Chemical Co.，セントルイス、モンタナ州）は、Enzimobead（Bio Rad，リッチモンド、カリフォルニア州）を用いて酵素的に放射性ヨウ素で標識した。トリチウム化されたロイコトリエンB₄はDu Pont Co.、ウィルミントン、デラウェア州から購入した。使用された緩衝液がそれぞれ、1mMのCaCl₂、0.5mMのMgCl₂、0.5％BSAを含むPBSと0.1％卵アルブミンと10mMのHEPES（pH7.3）を含むHBSSである以外は実施例ＩのIL-8結合に関して記述したように、過去に報告した方法で（Braunwalder et al.，1992; Sherman et al.，1988）C5aとロイコトリエンB₄の結合分析を実施した。ロイコトリエンB₄ 分析に関しては、放射能を液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。両リガンドの結合は、飽和可能で、標識されていないアゴニストによって用量依存性に阻害された。これらの試験において、100μM Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）は、C5aとロイコトリエンB₄の結合には影響しないが、100nMの濃度でIL-8の結合を有意に抑制することが明らかにされた（図５）。実施例IV 好中球に対するRRWWCRの細胞毒性次に、発明者等は、Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）の細胞毒性能を検討した。これは、以下のように好中球から放出された⁵¹Crの量を測定することによって達成された: 10％ドナー血漿を含むRPMI-1640培地中で、好中球試料（2×10⁷/ml）を500μCiのNa₂ ⁵¹CrO₄（Du Pont Co.）と共に37℃で60分間インキュベーションした。細胞を３回洗浄し、1×10⁷/mlの濃度で培地内に再懸濁し、続いて37℃で30分間インキュベーションし、生存可能性の限界にある細胞を自然溶解させた。２回洗浄後、シリコーン処理したミクロ遠沈管内で⁵¹Cr標識好中球（5×10⁶/ml）の100 μlの部分標本を、100μlのAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）と混合した。緩衝液とインキュベーションの条件は、結合分析または化学走性分析のいずれかを想定した。インキュベーション後、試験管を4℃にて300×gで７分間遠心分離してから、上清の放射能をガンマー線スペクトロメーターでカウントした。緩衝液のみ、あるいは２％SDSを含む３本ずつの試験管を使用して、自然放出量と最大放出量をそれぞれ決定した。以下の式クロム標識細胞を0.1％BSAを含むPBS中で4℃にて90分間インキュベーションすると、溶解された細胞のパーセンテージはペプチドが500μMまでほぼコントロールレベルを維持することが見いだされた（図６）。化学走性に使用された条件では、100μMのペプチドでは全く影響を認めなかったが、500μMのペプチドは細胞のほぼ25％を障害した。実施例Ｖ好中球の機能に対するRRWWCRの作用次に、好中球の化学走性と酵素放出に対するRRWWCRの作用を検討した。Ａ．化学走性化学走性は、ZigmondおよびHirshにより報告された最前進線法（Zigmond & Hi rsh，1973）を用いて実施した。IL-8または対照をボイデンチャンバーの下のウェルに入れた。孔サイズ５ミクロン、厚さ100μmの硝酸セルロースフィルター（ Sartorius Filter，Inc.，サンフランシスコ、カリフォルニア州）をその表面に設置し、次にチャンバーを組み立てた。1％BSAを含むRPMI-1640中の好中球試料（1 ×10⁶細胞/ml）の部分標本200μlを、フィルターの上に加え、37℃で30分間インキュベーションした。次にフィルターを固定し、染色し、顕微鏡用ガラススライドに載せた。先行する２つの細胞の位置から、最前進線を決定した。各フィルターの６つの領域に関して、先行する２つの細胞がフィルターを越えて移動した距離を測定した。条件の各組み合わせに関する４つのフィルターについて、測定を行った。Ｂ．好中球の酵素放出 Goldsteinと共同研究者（Goldstein et al.，1973）の変法により、好中球の酵素放出を検討した。サイトカラシンＢ（Sigma Chemical Co.）をジメチルスルホキシド中に5mg/mlの濃度で保存し、使用直前にハンクス液に50μg/mlの濃度で希釈した。サイトカラシンＢ、200μlを、HBSS中の6.25×10⁶細胞/mlの好中球懸濁液1mlに加え、サイトカラシンＢの最終濃度を10μg/mlとした。次に溶液を96 ウェルプレートの中で、室温で10分間インキュベーションした。刺激剤100μlを加え、この細胞懸濁液を37℃で30分間インキュベーションした。プレートを遠心分離し、100μlの上清を除去した。βグルクロニダーゼ測定のために、96ウェルプレートの中で、上清の40μlの部分標本を10μlの0.01Mフェノールフタレイン- 0グルクロン酸（Sigma Chemical Co.）と40μlの0.1M燐酸ナトリウム、pH4.6と混合した。37℃で16時間インキュベーション後、200μlの0.2Mグリシン、pH10.4 を各ウェルに加え、酵素活性としてOD₅₄₀を測定した。Ｃ．結果 Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）は、好中球の化学走性または酵素放出に全く影響を与えなかった。細胞の移動をチェッカーボード分析は、Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）が好中球に対し、化学走性は持たないことを示していた（表４）。図７および８に示される対照試験において、このペプチドは、好中球の化学走性に全く影響を与えず、細胞からのβグルクロニダーゼ放出を刺激しなかった。 Ac-RRWWCR-NH₂によるIL-8結合の阻害が、IL-8による好中球活性化の抑制に関係していることを確認するために、発明者等は、化学走性とβグルクロニダーゼ放出に対するペプチドの影響を検討した。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）は、50 μMのAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）濃度において、10nMのIL-8により刺激された好中球の化学走性を有意に抑制し、ホルミル-L-メチオニル-L-ロイシル-L-フェニルアラニン（fMLP）により誘導された化学走性に全く影響を与えなかった（図７）。Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）は、化学走性に必要な濃度よりも低い濃度である2μMの濃度で、100nMのIL-8によって刺激されたβグルクロニダーゼの放出を阻害したが、fMLP、C5a、またはロイコトリエンB₄によって刺激された酵素放出には影響を与えなかった（図８）。実施例VI 更なるIL-8ペプチド阻害剤 Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）に関連するその他のペプチドがIL-8阻害剤として作用するかどうかを決定し、それらの相対的有効性を決定するために、更に一連の試験を実施した。本実施例に記述されている試験では、実施例Ｉに詳細に記述されている方法と同じ方法を使用した。Ａ．ヘプタマーペプチドこの一連の試験において、発明者等は、７番目のアミノ酸を追加したRRWWCR（配列番号１）のＤ-アミノ酸類似体を検討した。ヘプタマー試験において、RRWWC RX（配列番号２）のカルボキシル残基を、各標準タンパク質アミノ酸のそれぞれに順に変えて、20種類のペプチドを合成した。最初のヘプタマー試験では、表５Ａと表５Ｂに示すように、幾つかのペプチドがIL-8に対する非常に強力な阻害作用を示した。表５Ａと５Ｂに表示されているデータは同じデータで、簡単に比較できるように、表５Ａは阻害率（％）の順に、表５Ｂは配列番号の順に表示されている。全てのヘプタマーペプチドがこれらの条件において、有意な阻害活性を持つことは明白である。ヘプタマーの相対的有効性を決定するために、それらの阻害剤効果を低濃度で測定した。カルボキシル末端にD-システインを持つペプチド（RRWWCRC; 配列番号４）が、この群の次に有効なペプチドよりもほぼ56％以上有効であり、Ac-RRW WCR-NH₂（配列番号１；図９）よりも有効であることが見いだされた。10μMの濃度でＬ-アミノ酸ペプチドであるAc-RRWWCR-NH₂（配列番号１）により20％阻害したのに対し、Ac-rrwwcrc-NH₂（配列番号４）はIL-8の好中球への結合を80％阻害した。Ｂ．その他のペプチド発明者等は、IL-8のアミノ末端部分に関係するか、あるいは他のタンパク質中に認められ、RRWWCR（配列番号１）の６つの残基の中の５つを有する幾つかの追加ペプチドも検討した。ペプチドELRCQCIKTY、ERLSQSIKTY、ELRMQMIKTY、QIPRRS WCRFLF、GWRRWWCDAVLY（それぞれ配列番号４９から５３）は、Meienhoferと共同研究者(Meienhofer et al.，1979)およびArshady et al.(1979)によって報告されているように、αアミノ基を保護するために9-フルオレニルメトキシカルボニル（fMOC）基を使用し、431ペプチド合成装置（Applied Biosystems、フォスターシティー、カリフォルニア州）を利用してタイラーのテキサス大学衛生センターにおいて合成された。合成ペプチドは全て、調製的逆相カラム（Waters Co.，ニューベッドフォード、マサチューセッツ州）を使用して、高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）で精製された。0.1％トリフルオロ酢酸（TFA）から0.1％TFA 中の80％アセトニトリルの勾配を用いてペプチドを溶出した。ペプチドの組成は、UTHCのProtein Core施設によりアミノ酸分析と配列決定により確認された。この一連の試験において、Ac-RRWWCR-NH₂（配列番号１）とQIPRRSWCRFLF（配列番号５２）がIL-8の好中球への結合を阻害した（表６）。実施例VII GROおよびMIP2βの好中球への結合阻害他のCXCインタークリン阻害能に関しても、Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）を検討した。本実施例は、IL-8阻害に加えて、Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）は、ヒト好中球に対するGROとMIP2βの結合を有効に阻害することを示している。ボルテン-ハンター試薬を用いてMIP2βおよびGRO/MGSAを放射性ヨウ素標識した。放射性ヨウ素標識成分を、種々の濃度のAc-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）と混合し、室温で15分間インキュベーションした。好中球懸濁液（0.1％BSAを含む 160μlのPBS中に1×I0⁶個の細胞を含む。）を40μlの混合物に加え、氷上で90分間インキュベーションした。油層を通して遠心分離することにより、細胞に結合された放射能を、遊離放射能から分離した。結合された放射能は、結合されたCX Cインタークリンペプチドを示すものである。Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）が存在する場合の結合阻害率（％）は以下のように計算した。式中、Ｂはペプチドが存在する場合の結合された放射能で、Ｔはペプチドが存在しない場合の結合された放射能で、NSPは標識されていないリガンドが過剰に存在する場合の結合された放射能である。これらの試験において、Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）は1nMのIL-8の好中球への結合を、用量依存性に阻害し、EC₅₀はほぼ25μMであった（図１０）。図１０に示すように、Ac-RRWWCX-NH₂（配列番号２３）は、1nMのGROと1nMのMIP2βの好中球への結合を同様に有効に抑制することも見いだされた。実施例VIII 治療製剤と治療プロトコル本実施例は、IL-8阻害剤のin vivo作用の特徴を更に明らかにするために、また動物またはヒトの治療プロトコルにおいてそれらを利用するために、発明者等が考えた技術を示すことを目的としている。Ａ． In vivoの炎症に対するIL-8阻害剤の効果動物モデル試験の前に、ヒト血清および血漿中のプレ-インキュベーション、種々のプロテアーゼによる処理、および温度およびpHに対する安定性試験等のin vitro安定性試験をペプチドに関して実施される。Ｄ-アミノ酸ペプチドが活性を有し、in vivoで安定性を増強するらしいことは既に判明している。発明者等は、臨床試験に移行する前に、IL-8阻害剤のin vivo特性と効果を検討することを提案する。本技術におけるルーチンの方法で、ペプチドの最も適切な形態、用量、毒性の可能性を動物試験において決定する。例えば、放射能標識ペプチドを使用して種々の経路で投与されたペプチドのバイオアベイラビリティーと半減期を決定し、それらの寿命と組織分布を検討することができる。更に安定性を強化したい場合には、末端に脂質を付けたペプチド、表面活性剤様ミセル、ペプチドマルチマーあるいは半透過性薬物放出カプセルの形態でペプチドを投与することも可能である。ペプチドの生物学的効果は、種々のヒト疾患モデルにおいて決定できる。例えば、IL-8はウサギの皮膚において好中球の蓄積と水腫を引き起こすことが認められている(Rampart et al.，1989)。従って、ウサギ皮膚炎症モデルを使用して、好中球蓄積と水腫を有効に阻害できるペプチドの用量が決定される。このモデルは、炎症の評価が容易なため有用である。最も適切なペプチド投与経路は、in v ivo比較試験において簡単に決定できる。特別な一実施例において、ニュージーランドアルビノラビットに外側耳静脈から¹²⁵I標識ヒト血清アルブミンを注入できる。次に、数カ所に被験化合物、すなわち好中球を引きつけるアゴニストとIL-8阻害ペプチド、アゴニストと対照ペプチド、およびアゴニスト単独を経皮的に注入できる。２時間後、皮膚の全厚みの直径1cmの検体を打ち抜いて取り出し、固定し、Wright-Giemsaで染色するか、あるいはミエルペルオキシダーゼに関する検討と好中球蓄積と水腫または組織損傷に関する組織学的検査を行う。他の皮膚生検検体をガンマーカウンターでカウントし、注入された皮膚へのアルブミン流量を評価する。次に、阻害剤投与後の皮膚の炎症を、同じ時間の対照と比較できる。理想的には同じ動物で実施する。少なくとも各実験群につき４回の測定を行うことを推奨する。Ｂ． ARDSのIL-8阻害剤治療ヒトの成人呼吸窮迫症候群（ARDS）の最良のモデルは、恐らくミニブタの循環血液中にグラム陰性菌を導入したものであろう。ヒトのARDSと同様に、このARDS モデルにおいてIL-8が主要な好中球アクチベーターであるかどうかを決定するために、ヒトで実施されたのと同様の試験法を用いてこのモデルを使用する。ミニブタにおいて、静脈内および肺内経路によるIL-8投与の効果を評価する。最初の段階で、上記で評価されたように、肺への好中球の流入と酵素放出を引き起こすのに最適な経路によりIL-8をミニブタに投与する。これらの好中球作用を妨げるために使用する適切な用量を決定するために、特に酵素放出は抑制するが、好中球の流入は抑制しないペプチドの用量を決定するために、目的のペプチドを投与する。次の段階で、循環血液中のグラム陰性菌により引き起こされたミニブタの急性肺障害モデルを使用する。目的のペプチドを動物に投与し、ペプチドの肺障害抑制効果を評価する。気管支肺胞液中の好中球の数、肺実質への酵素放出量、循環血液から肺へのタンパク質漏出の程度をこの試験の指標として使用する。 IL-8が肺への好中球流入、酵素放出および／または肺に対するARDS様組織損傷を引き起こすならば、目的のペプチドを投与し、好中球の機能を抑制するために使用する適切な用量を決定する。これらの試験において、種々の用量の放射能標識ペプチドをまず投与する。次に、血漿濃度と放射能の形態を決定する。これらのデータから、血漿クリアランス、半減期、定常状態の分布量を測定し、最も有効な用量範囲を決定するために利用できる。Ｃ．治療プロトコル全ての新薬に必ず付随する注意事項により、本発明のIL-8ペプチド阻害剤と組成物はまだヒトを対象とした臨床試験は実施されていない。しかし、認められたモデルにおけるそれらの明らかなin vitro活性は、抗炎症剤としての本発明の有用性を示すものと考えられる。臨床試験は正式な過程を経て、当然FDA の手順に従って実施されるであろう。以下の具体的方法は、種々の臨床状況で本発明を実施するために、本発明者等によって現在考えられている最良の方法である。 IL-8のペプチド阻害剤を含む薬剤組成物は、気管支の炎症、嚢胞性線維症、胸腔内進出、喘息、気管支炎、ARDS等の肺疾患のほか、乾癬および皮膚炎等の皮膚疾患、そして慢性関節リウマチ等の関節の疾患、さらに偽痛風、炎症性腸疾患、再潅流後の心筋障害または癌および細胞増殖の増加に伴うその他の疾患の治療にも有用であることが証明されるものと考えられる。これらのペプチドは、ARDS、慢性気管支炎および嚢胞性線維症等の肺の炎症の抑制に特に適すると考えられるので、これらの疾患の適切な治療法を記述する。 ARDSまたは嚢胞性線維症の治療には、好ましくは、静注、筋注、皮下注射等の非経口投与を使用する。しかし、エーロゾルまたは吸入剤も使用できる。非経口投与用ペプチド製剤、特に注入可能な製剤の調製法は、本明細書の好ましい実施例に詳細に記述されている。本発明に関連する方法を使用したい場合には、幾つかの吸入剤が以下に記述されている。吸入剤は薬物または化合物を患者の呼吸樹に到達するために設計された医薬製剤である。投与された吸入剤または霧は、患部に到達し、気管支および鼻道の充血症状を緩和する。経鼻または経口により呼吸経路内に吸入剤を投与できる。吸入液の投与は、霧が気管支に到達できるように、小滴が十分微細で均質な場合に限り有効である。吸入剤として、しばしば通気剤としても知られるもう１つの製品群は、微細に粉末化された薬物あるいは液体薬物から成り、液化ガス推進薬の中に薬物の溶液または懸濁液を含む薬剤エーロゾル等の特別な投与システムを使用することによって、気道に投与される。適切なバルブおよびオーラルアダプターから放出されると、計量された用量の吸入剤が患者の気道に発射される。粒子の大きさはこの種の製剤の投与にとって非常に重要である。肺胞腔内に浸透させる至適粒子サイズは、0.5から7μmのオーダーであることが報告されている。加圧エーロゾルにより微細な霧が産生されるため、それらの利用は極めて有利である。本明細書に記述されている抗IL-8ペプチドを単一薬剤または合剤として静脈内投与することによって、ARDSと嚢胞性線維症の炎症を減弱することができるものと考えられる。投与される用量範囲は、約500から約1000mg／日、あるいは約0.8 3mg/kg体重／時（mg/kg/hr）から約16.56mg/kg/hrと推定される。勿論、好中球の活性化と炎症に関連する他の多くの疾患を治療するために、IL -8阻害剤のその他の多様な医薬製剤を調製し、使用できることを忘れてはならない。ここに開示され、クレームされた組成物および方法の全ては、本開示の内容に照らして不当に負担となる実験を行わなくても、調製し、実施することが可能である。本発明の組成物および方法は、好ましい実施例の観点から報告されているが、本発明の概念、精神および範囲を逸脱することなく、組成物、方法および記述されている方法の段階または一連の段階に、変更を加えることが可能であることは本技術に精通する者にとって明らかである。より具体的には、化学的かつ生理学的に関連性のある特定の物質を、ここに記述されている物質と置換して、同様のあるいは類似の結果が達成されることは明らかである。本技術に精通する者にとって明らかなこのような類似性のある置換物および変更は、添付の請求の範囲に規定されているように、本発明の精神、範囲および概念の範囲内にあるものと考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＣＤＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＳＡＣＬＡＣＬＡＤＡＡＢＧＡＤＳＡＤＡ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者林真一郎アメリカ合衆国、75703 テキサス、タイラー、シグペン・ドライヴ 202、アパートメント 1220 (72)発明者クルドウスカ，アンナ・ケイアメリカ合衆国、75703 テキサス、タイラー、シャイロー・ロード 710、アパートメント 1228 (72)発明者タトゥル，ロナルド・アールアメリカ合衆国、92025 カリフォルニア、エスコンディド、ヴィスタ・デル・センブラド 2704

Claims

【特許請求の範囲】１． CXCインタークリン分子またはインタークリン標的細胞を、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Xaa₁（配列番号２３）（Xaa₁は、いずれのアミノ酸残基でもよい）を含む６から約14残基長のペプチドから成る生物学的有効量の組成物と接触させることから成る、CXCインタークリン群分子の阻害方法。２． CXCインタークリン群分子がIL-8である、請求項１記載の方法。３． CXCインタークリン群分子がGROである、請求項１記載の方法。４． CXCインタークリン群分子がMIP2βである、請求項１記載の方法。５．組成物がアシル化されたペプチドから成る、請求項１記載の方法。６．組成物がＮ末端がアシル化されたペプチドを含む、請求項５記載の方法。７．組成物がＣ末端がアミド化されたペプチドを含む、請求項１記載の方法。８．組成物がＮ末端がアシル化され、Ｃ末端がアミド化されたペプチドを含む、請求項１記載の方法。９．組成物がＤ-アミノ酸のペプチドを含む、請求項１記載の方法。１０．組成物がＬ-アミノ酸のペプチドを含む、請求項１記載の方法。１１．組成物がＬ-アミノ酸のペプチドとＤ-アミノ酸のペプチドを含む、請求項１記載の方法。１２．組成物がＬ-アミノ酸とＤ-アミノ酸の両方を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１３．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg（配列番号１）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１４．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Ala（配列番号２４）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１５．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Cys（配列番号２５）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１６．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Asp（配列番号２６）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１７．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Glu（配列番号２７）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１８．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Phe（配列番号２８）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。１９．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Gly（配列番号２９）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２０．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys His（配列番号３０）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２１．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Ile（配列番号３１）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２２．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Lys（配列番号３２）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２３．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Leu（配列番号３３）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２４．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Met（配列番号３４）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２５．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Asn（配列番号３５）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２６．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Pro（配列番号３６）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２７．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Gln（配列番号３７）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２８．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Ser（配列番号３８）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。２９．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Thr（配列番号３９）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。３０．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Val（配列番号４０）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。３１．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Trp（配列番号４１）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。３２．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Tyr（配列番号４２）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。３３．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Xaa₂（配列番号２）（ Xaa₂はいずれのアミノ酸残基でもよい）を含むペプチドを含む、請求項１記載の方法。３４．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Ala（配列番号３）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。３５．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Cys（配列番号４）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。３６．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Asp（配列番号５）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。３７．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Glu（配列番号６）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。３８．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Phe（配列番号７）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。３９．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Gly（配列番号８）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４０．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg His（配列番号９）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４１．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Ile（配列番号１０）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４２．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Lys（配列番号１１）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４３．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Leu（配列番号１２）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４４．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Met（配列番号１３）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４５．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Asn（配列番号１４）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４６．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Pro（配列番号１５）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４７．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Gln（配列番号１６）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４８．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Arg（配列番号１７）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。４９．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Ser（配列番号１８）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。５０．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Thr（配列番号１９）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。５１．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Val（配列番号２０）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。５２．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Trp（配列番号２１）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。５３．組成物がアミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Tyr（配列番号２２）を含むペプチドを含む、請求項３３記載の方法。５４．組成物がアミノ酸配列Gln Ile Pro Arg Arg Ser Trp Cys Arg Phe Leu Phe（配列番号５２）を含むペプチドを更に含む、請求項１記載の方法。５５．組成物が配列番号１、配列番号３から配列番号２２、配列番号２４から配列番号４２または配列番号５２に提示されているアミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列を持つ、２ないし４１個の異なるペプチドを含む、請求項１記載の方法。５６．組成物が２個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。５７．組成物が５個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。５８．組成物が１０個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。５９．組成物が２０個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。６０．組成物が３０個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。６１．組成物が４１個の異なるペプチドを含む、請求項５５記載の方法。６２．組成物がArg Arg Trp Trp Cys Arg（配列番号１）を含むペプチドと、A rg Arg Trp Trp Cys Arg Cys（配列番号４）を含むペプチドを含む、請求項５５記載の方法。６３．組成物が薬理学的に許容可能な形態の医薬組成である、請求項１記載の方法。６４．医薬組成物が、注入剤、経鼻スプレー、吸入剤、エーロゾル、クリーム、ゲル、ミセルまたはリポソームによるカプセル形態として製剤化された、あるいは生体適合除放カプセルに組み入れられた、請求項６３記載の方法。６５．医薬組成物が、静脈内、筋肉内、または皮下注入剤として製剤化された、請求項６４記載の方法。６６．医薬組成物が、経鼻スプレー、吸入剤、またエーロゾルとして製剤化された、請求項６４記載の方法。６７． CXCインタークリン群分子またはインタークリン標的細胞が動物の体内に存在し、有効量の医薬組成物が前記動物に投与される、請求項６３記載の方法。６８．好中球とIL-8を含む組成物を、化学走性よりも、好中球の酵素放出を減少させるのに有効な量の、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Xaa₁（配列番号２３）（Xaa₁は、いずれのアミノ酸残基でもよい）を含む６から約14残基長のペプチドを含む組成物に接触させることを含む、好中球の化学走性よりも、好中球の酵素放出を優先的に減少させるための方法。６９．好中球とIL-8が動物の体内に存在し、有効量の医薬組成物が前記動物に薬理学的に許容可能な形態で投与される、請求項６８記載の方法。７０．炎症のある動物に、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Xaa₁（配列番号２３）（Xaa₁は、いずれのアミノ酸残基でもよい）を含む６から約14残基長のペプチドを含む生物学的有効量の医薬組成物を投与することを含む、炎症を減少させる方法。７１．炎症が成人呼吸窮迫症候群（ARDS）または嚢胞性線維症に関係している、請求項７０記載の方法。７２． CXCインタークリン群分子を阻害でき、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp C ys Xaa₁ Xaa₂（配列番号５７）（Xaa₁とXaa₂はいずれのアミノ酸残基でもよい）を含む、約7 から約14残基長のペプチドを含む薬理学的に許容可能な形態の医薬組成物。７３．組成物がIL-8を阻害できるペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７４．組成物がGROを阻害できるペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７５．組成物がMIP2βを阻害できるペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７６．組成物がＮ末端でアシル化されたペプチドまたはＣ末端でアミド化されたペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７７．組成物がＮ末端でアシル化され、Ｃ末端でアミド化されたペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７８．組成物が、アミノ酸配列Arg Arg Trp Trp Cys Arg Xaa₂（配列番号２）（Xaa₂はいずれのアミノ酸残基でもよい。）を含むペプチドを含む、請求項７２記載の医薬組成物。７９．組成物が、配列番号３から配列番号２２に提示されているアミノ酸配列のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むペプチドを含む、請求項７８記載の医薬組成物。８０．組成物が、配列番号３から配列番号２２に提示されているアミノ酸配列のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む、２個から20個の異なるペプチドを含む、請求項７９記載の医薬組成物。８１．組成物が、注入剤、経鼻スプレー、吸入剤、エーロゾル、クリーム、ゲル、ミセルまたはリポソームによるカプセル形態として製剤化された、あるいは生体適合性除放カプセルに組み入れられた、請求項７２記載の医薬組成物。８２． IL-8、GROまたはMIP2βを阻害できるペプチドで、配列番号３から配列番号２２に提示されているアミノ酸配列のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む７から約14残基長のペプチド。