JPH09313169A - 酵母エキスの製造法 - Google Patents
酵母エキスの製造法Info
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- JPH09313169A JPH09313169A JP8137880A JP13788096A JPH09313169A JP H09313169 A JPH09313169 A JP H09313169A JP 8137880 A JP8137880 A JP 8137880A JP 13788096 A JP13788096 A JP 13788096A JP H09313169 A JPH09313169 A JP H09313169A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】うま味を増強するＬ−グルタミン酸の菌体内濃
度が高い酵母を育種する方法を開発し、Ｌ−グルタミン
酸含量の高い酵母エキスを製造する方法を提供する。 【解決手段】酵母の細胞膜の構造・機能に障害を与える
薬剤に耐性を有し、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積す
る能力が向上した酵母変異株を取得した。これを用いる
て酵母エキスを製造した。
度が高い酵母を育種する方法を開発し、Ｌ−グルタミン
酸含量の高い酵母エキスを製造する方法を提供する。 【解決手段】酵母の細胞膜の構造・機能に障害を与える
薬剤に耐性を有し、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積す
る能力が向上した酵母変異株を取得した。これを用いる
て酵母エキスを製造した。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は細胞膜の構造・機能
を障害する薬剤に耐性を有し、菌体内にＬ−グルタミン
酸を蓄積する能力が向上した酵母、及び該酵母を用いる
酵母エキスの製造法に関する。 【０００２】 【従来の技術】天然系調味料は天然・自然・健康・本格
・高級・グルメといったキーワードで表せうる時流の中
でその需要が拡大し続けており、酵母エキスも天然系調
味料の発展とともにその市場規模が拡大している。酵母
エキスの製造には一般にビール酵母やパン酵母、トルラ
属酵母等が利用されており、ビール醸造で副生するビー
ル酵母を用いる場合では、ビール品質の設計範囲内で酵
母の選定・改良が行われており、エキス製造だけを目的
とした酵母でないがために、エキスを製造した場合に不
快な臭いがしたり、うま味が足りないの等品質の点から
必ずしも満足のいくものではないことが指摘されてい
る。 【０００３】これらを解決する方法として酵母を育種改
良して好ましい味や風味を持つ酵母を造成し、これを用
いて酵母エキスを製造する方法がある。風味という点で
はノルバリン耐性を付与した酵母を用いることにより、
エステル類やアルコール類等の香気成分を増加させた例
が知られおり（ジャーナル・オブ・ジィ・インスティテ
ュート・オブ・ブリューイング、第７６巻、８４３頁〜
８４７頁、１９８１年）これを用いたアルコール飲料の
製造が報告されている。しかしながら、うま味等の呈味
を変えた例は知られいない。 【０００４】うま味等の呈味を増強するものとしてＬ−
グルタミン酸ナトリウム、５’−イノシン酸ナトリウ
ム、５’−グアニル酸ナトリウムが知られており、調味
料として用途に応じて食品に添加されている。 【０００５】 【本発明が解決しようとする課題】本発明の目的はうま
味を増強する物質であるＬ−グルタミン酸を菌体内に蓄
積する能力の高い酵母を効率良く育種する方法を開発
し、育種された酵母を用いてよりＬ−グルタミン酸含量
の高い酵母エキス製造する方法を見いだすことにある。
上記課題はこれまでになかったものであり、すなわち、
課題自体が新規なのである。 【０００６】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、６−ジア
ゾ−５−オキソ−ノルロシン等のグルタミン代謝拮抗物
質に対する耐性を付与した酵母変異株がＬ−グルタミン
酸を菌体内に高い濃度で蓄積すること、本変異株を用い
て酵母エキスを調製したところ、エキス中のＬ−グルタ
ミン酸濃度が高く、官能評価の結果では、うま味が増
し、風味、あつ味、こく等呈味に優れる酵母エキスであ
ることを見いだした。 【０００７】しかしながら、６−ジアゾ−５−オキソ−
ノルロイシン耐性を付与した酵母変異株の中には菌体内
Ｌ−グルタミン酸濃度が親株と変わらず、むしろ菌体外
Ｌ−グルタミン酸蓄積量が向上したものもあった。ま
た、６−ジアゾ−５−オキソ−ノルロイシン耐性を付与
した酵母変異株であって菌体内Ｌ−グルタミン酸濃度が
高まった変異株であっても、菌体外に多量のＬ−グルタ
ミン酸を蓄積していた。 【０００８】本発明者らは、Ｌ−グルタミン酸を著量生
産する酵母変異株が生合成するＬ−グルタミン酸を特異
的に菌体内にとどめさせることができれば、菌体内Ｌ−
グルタミン酸濃度が高い酵母を育成でき、その結果Ｌ−
グルタミン酸含量の高い、より呈味に優れた酵母エキス
を調製することが可能になると考えた。 【０００９】そこで本発明者らは、この様な新たな課題
を解決すべくさらに検討した結果、酵母にその細胞膜の
構造・機能に障害を与える薬剤に対する耐性を付与する
ことにより、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積する能力
の高い酵母を効率良く作出できることを見いだし、本発
明を完成させるに至った。 【００１０】本発明は以下の通りである。 （１）細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に耐性を
有し、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積する能力が向上
した酵母。 （２）細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤がナイス
タチンである前記（１）記載の酵母。 （３）酵母がヤロウィア・リポリティカである前記
（１）または（２）記載の酵母。 （４）前記（１）ないし（３）記載の酵母を用いること
を特徴とする酵母エキスの製造方法。 【００１１】 【発明の実施の形態】 【００１２】本発明に用いられる酵母としてはサッカロ
マイセス属に属する酵母（サッカロマイセス・セレビシ
エ、サッカロマイセス・ウバルム、サッカロマイセス・
シュバリエ、サッカロマイセス・ロゼイ等）トルラスポ
ラ属に属する酵母（例えばトルラスポラ・デルブルツ
キ）、クライベロマイセス属に属する酵母（例えばクラ
イバロマイセス・サーモトレランス）、ピヒア属に属す
る酵母（例えばピヒア・メンブラネファシエンス）、ヤ
ロウィア属に属する酵母（例えばヤロウィア・リポリテ
ィカ）等が挙げられる。 【００１３】本発明で用いられる細胞膜の構造・機能に
障害を与える薬剤としては、例えばアンホテリシンＢや
ナイスタチン等のポリエン系抗生物質やエコナゾール、
ミコナゾール、ケトコナゾール等のエルゴステロール合
成を阻害する抗生物質が挙げられる。これらの抗生物質
は市販のものを用いることが出来る。特に好ましい薬剤
としてはナイスタチンが挙げられる。 【００１４】本発明の酵母は細胞膜の構造・機能に障害
を与える薬剤に耐性を有し、かつ菌体内のＬ−グルタミ
ン酸濃度が向上した酵母であり、かかる性質を有してい
れば菌体内Ｌ−グルタミン酸濃度の向上に効果の見られ
る他の薬剤、例えば６−ジアゾ−５−オキソ−ノルロイ
シンや本発明で用いたブロモピルビン酸等に対する抵抗
性を有していても良い。 【００１５】細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に
対する耐性を親株に付与するには、親株を紫外線照射す
るか、あるいは変異誘発剤（例えばＮ−メチル−Ｎ’−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルフ
ォン酸等）で処理した後、親株が生育できないような濃
度の細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤を含む寒天
培地で生育可能な菌株を採取すればよい。 【００１６】細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に
耐性な変異株とは、親株と比較したときに同薬剤に対し
てより強い耐性を有する株のことである。 【００１７】本発明の酵母は細胞膜の構造・機能に障害
を与える薬剤に耐性を有し、かつ菌体内Ｌ−グルタミン
酸濃度が向上した酵母である。例えば以下のものがあ
る。ヤロウィア・リポリティカ ＡＪ１４７１８ 【００１８】本発明における酵母を培養し、菌体を得る
ために用いられる培地は、炭素源、無機塩類、その他必
要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を含
有する通常の栄養培地である。合成培地または天然培地
のいずれも使用可能である。培地に使用される炭素源、
窒素源は、培養される酵母の利用可能なものならばよ
い。 【００１９】炭素源としてはグルコース、グリセロー
ル、マニトール、エタノール、ｎ−パラフィン等が用い
られる。また乳酸やクエン酸等の有機酸も単独あるいは
他の炭素源と併用して用いることができる。 【００２０】窒素源としては尿素、アンモニア、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等が用いられる。 【００２１】有機微量栄養素としては、アミノ酸、ビタ
ミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するペプ
トン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が用
いられ、生育にアミノ酸や、ビタミン等を要求する野生
株や栄養要求性変異株を培養する場合には要求される栄
養素を補添することが必要である。 【００２２】無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム
塩、鉄塩、亜鉛塩、カルシウム塩等が用いられる。 【００２３】培養方法は、培養温度２０ないし３７℃
で、ｐＨを３ないし８に制御しつつ通気培養を行う。培
養中にｐＨが下がる場合には、炭酸カルシウムを加える
か、アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和
する。かくして１０時間ないし４日間程度培養すること
により酵母菌体が得られる。 【００２４】得られた菌体から酵母エキスを調製するに
は、遠心分離により培養ブロスから菌体を回収し、公知
の方法に従って行えばよい。例えばトルエンや酢酸エチ
ルを菌体当り１〜２％添加し、温度４５〜５０℃で自己
消化を行い、エキス分を減圧濃縮し、噴霧乾燥により粉
末酵母エキスが得られる。 【００２５】 【実施例】次に実施例によって本発明をさらに詳細に説
明する。 【００２６】 【実施例１】ヤロウィア・リポリティカＡＪ５００４か
らブロモピルビン酸耐性株の分離 自然界から分離されたヤロウィア・リポリティカＡＪ５
００４（アグリカルチュラル アンド バイオロジカル
ケミストリー、第３３巻、１５８頁〜１６７頁、１９
６９年）を胞子形成培地（１％酢酸カリウム、０．１％
酵母エキス、０．０５％グルコース）にて１ないし２日
間３０℃で培養後、０．８５％生理食塩水にて洗浄し、
最終１ｍｇ／ｍｌのザイモリアーゼ５０００を含む０．
８５％生理食塩水に懸濁し、３０℃で１２０分間処理し
た。さらにポアサイズ６０μｍナイロンメンブレンで濾
過し、胞子を回収した。エチルメタンスルホン酸を最終
濃度３０μｌ／ｍｌとなるように添加した０．１Ｍリン
酸緩衝液（最終濃度２．５％のグルコースを含む）に懸
濁し、３０℃で６０分間の変異処理を行った。遠心分離
の後、胞子を０．１Ｍリン酸緩衝液で洗浄し、ブロモピ
ルビン酸０．５ｇ／ｌを含む最少培地（ディフコ イー
ストナイトロジェンベース ウィズアウトアミノ アシ
ド ０．６７％、グルコース ２％、寒天 ２％）に塗
布し、３０℃で３〜７日間培養した。 【００２７】ピルビン酸の代謝拮抗物質として知られる
ブロモピルビン酸はヤロウィア・リポリティカＡＪ５０
０４の生育を阻害し、０．５ｇ／Ｌのブロモピルビン酸
を含む最少培地上ではヤロウィア・リポリティカＡＪ５
００４の生育は認められなかった。 【００２８】ブロモピルビン酸を含む最少培地上に出現
したコロニーを釣り上げ、同一組成の最少培地上で単コ
ロニー分離を行った後、菌体調製用培地（ｎ−パラフィ
ン８０ｇ／ｌ、硝酸アンモニウム ２０ｇ／ｌ、リン酸
２水素カリウム ２ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム７水和物
１ｇ／ｌ、硫酸第一鉄７水和物 １０ｍｇ／ｌ、硫酸
亜鉛７水和物 ４０ｍｇ／ｌ、チアミン ６μｇ／ｌ、
炭酸カルシウム ２０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０）を２０ｍｌ
注入した５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２日間３
０℃でシード培養した後、同一組成の培地２０ｍｌを注
入した５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、３０℃で５
日間培養した後、培養ブロスを遠心し、上清中のＬ−グ
ルタミン酸濃度をバイオテックアナライザーＡＳ２００
（旭化成社製）で測定した結果、培養ブロス中に２３０
ｍｇ／ｌのＬ−グルタミン酸を蓄積するＮ４６株（ＡＪ
１４７１７）を見いだした。 【００２９】 【実施例２】ブロモピルビン酸耐性株Ｎ４６（ＡＪ１４
７１７）からナイスタチン耐性株の分離 【００３０】実施例１で用いた方法によりブロモピルビ
ン酸耐性株Ｎ４６（ＡＪ１４７１７）の胞子を調製し、
最終１０ｍＭになるようにＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンを添加した１Ｍソルビトール溶
液に懸濁し、３０℃で２０分間の変異処理を行った。遠
心分離後、変異処理した胞子を１Ｍソルビトール溶液で
洗浄し、ナイスタチン１ｇ／ｌを含む最少培地に塗布し
た。ブロモピルビン酸耐性株Ｎ４６株（ＡＪ１４７１
７）はナイスタチン１ｇ／ｌを含む最少培地上では全く
生育できなかった。 【００３１】３０℃で３〜７日間培養後、１ｇ／ｌナイ
スタチンを含有する最少培地に出現したコロニーを釣り
上げ、同一組成の培地で単コロニー分離した後、実施例
１で用いた菌体調製用培地５ｍｌを注入した５０ｍｌ容
大型試験管に植菌し、３０℃で５日間培養した。培養終
了後培養ブロス１ｍｌをエッペンドルフチューブに採
り、密閉し、沸騰しているウオーターバス中に３０分間
浸漬し、菌体内の遊離Ｌ−グルタミン酸を抽出した。遠
心分離により抽出残査を除いたのち、上清のＬ−グルタ
ミン酸濃度をバイオテックアナライザーＡＳ２００で測
定し、測定値を菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度
とした。一方、菌体外グルタミン酸濃度は培養ブロスを
遠心分離し、得られた上清中のＬ−グルタミン酸濃度を
測定し、測定値を菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度とした。
菌体内のＬ−グルタミン酸濃度は菌体内外を併せたＬ−
グルタミン酸濃度から菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度を引
いた値で表せうる。 【００３２】分離し、培養評価した１３株のナイスタチ
ン耐性株の内、菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度
が親株であるＮ４６株（ＡＪ１４７１７）よりも高い株
が９株存在した（図１）。１３株の内、菌体外のＬ−グ
ルタミン酸濃度が親株に比し顕著に向上した株は１株だ
けであった。菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度が
向上した９株では、菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度が親株
より顕著に増加したものはなく、親株と同等、もしくは
低下しており、ナイスタチン耐性付与により菌体内のＬ
−グルタミン酸濃度が顕著に向上したことが明らかにな
った。 【００３３】菌体内外のＬ−グルタミン酸濃度が最も高
かったナイスタチン耐性株ＡＪ１４７１８では菌体内に
７００ｍｇ／ｌ（菌体乾燥重量当り３．５％）、菌体外
に２０ｍｇ／ｌのＬ−グルタミン酸を蓄積した。 【００３４】実施例１の菌体調製培地の炭素源のみをｎ
−パラフィンからグルコース（８％）に変更して培養評
価を行った。培養評価菌株をＹＰＤ寒天培地（ディフコ
バクト イーストエキストラクト１％、ディフコ バ
クトペプトン２％、グルコース２％、寒天２％）にて３
０℃で２間培養し、寒天プレート全面に生育した内の１
／１６プレート分を菌体調製用培地（炭素源グルコー
ス）５ｍｌを注入した５０ｍｌ容大型試験管に植菌し、
３０℃にて５日間培養し、菌体内外、及び菌体内のＬ−
グルタミン酸濃度を測定したところＡＪ１４７１８はＬ
−グルタミン酸を菌体内に５３０ｍｇ／ｌ、菌体外に４
２ｍｇ／ｌ蓄積し、一方親株であるブロモピルビン酸耐
性株Ｎ４６（ＡＪ１４７１７）では菌体内に１９８ｍｇ
／ｌ、菌体外に４９ｍｇ／ｌ蓄積していた。炭素源をグ
ルコースに変更しても炭素源をｎ−パラフィンとした場
合と同様にナイスタチン耐性株では菌体内のＬ−グルタ
ミン酸濃度が顕著に向上していることが明かとなった。 【００３５】 【発明の効果】本発明の方法により酵母菌体内のＬ−グ
ルタミン酸濃度を高めることができ、本発明の方法によ
り育種された酵母を用いることによりＬ−グルタミン酸
含量の高い酵母エキスを製造することが可能となる。 【００３６】ヤロウィア・リポリティカＡＪ１４７１７
は、平成８年５月２９日に工業技術院生命工学工業技術
研究所（郵便番号３０５ 日本国茨城県つくば市東一丁
目１番３号）に寄託されており、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ
−１５６５３が付与されている。ヤロウィア・リポリテ
ィカＡＪ１４７１８は、平成８年５月２９日に工業技術
院生命工学工業技術研究所（郵便番号３０５ 日本国茨
城県つくば市東一丁目１番３号）に寄託されており、受
託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５６５４が付与されている。
を障害する薬剤に耐性を有し、菌体内にＬ−グルタミン
酸を蓄積する能力が向上した酵母、及び該酵母を用いる
酵母エキスの製造法に関する。 【０００２】 【従来の技術】天然系調味料は天然・自然・健康・本格
・高級・グルメといったキーワードで表せうる時流の中
でその需要が拡大し続けており、酵母エキスも天然系調
味料の発展とともにその市場規模が拡大している。酵母
エキスの製造には一般にビール酵母やパン酵母、トルラ
属酵母等が利用されており、ビール醸造で副生するビー
ル酵母を用いる場合では、ビール品質の設計範囲内で酵
母の選定・改良が行われており、エキス製造だけを目的
とした酵母でないがために、エキスを製造した場合に不
快な臭いがしたり、うま味が足りないの等品質の点から
必ずしも満足のいくものではないことが指摘されてい
る。 【０００３】これらを解決する方法として酵母を育種改
良して好ましい味や風味を持つ酵母を造成し、これを用
いて酵母エキスを製造する方法がある。風味という点で
はノルバリン耐性を付与した酵母を用いることにより、
エステル類やアルコール類等の香気成分を増加させた例
が知られおり（ジャーナル・オブ・ジィ・インスティテ
ュート・オブ・ブリューイング、第７６巻、８４３頁〜
８４７頁、１９８１年）これを用いたアルコール飲料の
製造が報告されている。しかしながら、うま味等の呈味
を変えた例は知られいない。 【０００４】うま味等の呈味を増強するものとしてＬ−
グルタミン酸ナトリウム、５’−イノシン酸ナトリウ
ム、５’−グアニル酸ナトリウムが知られており、調味
料として用途に応じて食品に添加されている。 【０００５】 【本発明が解決しようとする課題】本発明の目的はうま
味を増強する物質であるＬ−グルタミン酸を菌体内に蓄
積する能力の高い酵母を効率良く育種する方法を開発
し、育種された酵母を用いてよりＬ−グルタミン酸含量
の高い酵母エキス製造する方法を見いだすことにある。
上記課題はこれまでになかったものであり、すなわち、
課題自体が新規なのである。 【０００６】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、６−ジア
ゾ−５−オキソ−ノルロシン等のグルタミン代謝拮抗物
質に対する耐性を付与した酵母変異株がＬ−グルタミン
酸を菌体内に高い濃度で蓄積すること、本変異株を用い
て酵母エキスを調製したところ、エキス中のＬ−グルタ
ミン酸濃度が高く、官能評価の結果では、うま味が増
し、風味、あつ味、こく等呈味に優れる酵母エキスであ
ることを見いだした。 【０００７】しかしながら、６−ジアゾ−５−オキソ−
ノルロイシン耐性を付与した酵母変異株の中には菌体内
Ｌ−グルタミン酸濃度が親株と変わらず、むしろ菌体外
Ｌ−グルタミン酸蓄積量が向上したものもあった。ま
た、６−ジアゾ−５−オキソ−ノルロイシン耐性を付与
した酵母変異株であって菌体内Ｌ−グルタミン酸濃度が
高まった変異株であっても、菌体外に多量のＬ−グルタ
ミン酸を蓄積していた。 【０００８】本発明者らは、Ｌ−グルタミン酸を著量生
産する酵母変異株が生合成するＬ−グルタミン酸を特異
的に菌体内にとどめさせることができれば、菌体内Ｌ−
グルタミン酸濃度が高い酵母を育成でき、その結果Ｌ−
グルタミン酸含量の高い、より呈味に優れた酵母エキス
を調製することが可能になると考えた。 【０００９】そこで本発明者らは、この様な新たな課題
を解決すべくさらに検討した結果、酵母にその細胞膜の
構造・機能に障害を与える薬剤に対する耐性を付与する
ことにより、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積する能力
の高い酵母を効率良く作出できることを見いだし、本発
明を完成させるに至った。 【００１０】本発明は以下の通りである。 （１）細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に耐性を
有し、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積する能力が向上
した酵母。 （２）細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤がナイス
タチンである前記（１）記載の酵母。 （３）酵母がヤロウィア・リポリティカである前記
（１）または（２）記載の酵母。 （４）前記（１）ないし（３）記載の酵母を用いること
を特徴とする酵母エキスの製造方法。 【００１１】 【発明の実施の形態】 【００１２】本発明に用いられる酵母としてはサッカロ
マイセス属に属する酵母（サッカロマイセス・セレビシ
エ、サッカロマイセス・ウバルム、サッカロマイセス・
シュバリエ、サッカロマイセス・ロゼイ等）トルラスポ
ラ属に属する酵母（例えばトルラスポラ・デルブルツ
キ）、クライベロマイセス属に属する酵母（例えばクラ
イバロマイセス・サーモトレランス）、ピヒア属に属す
る酵母（例えばピヒア・メンブラネファシエンス）、ヤ
ロウィア属に属する酵母（例えばヤロウィア・リポリテ
ィカ）等が挙げられる。 【００１３】本発明で用いられる細胞膜の構造・機能に
障害を与える薬剤としては、例えばアンホテリシンＢや
ナイスタチン等のポリエン系抗生物質やエコナゾール、
ミコナゾール、ケトコナゾール等のエルゴステロール合
成を阻害する抗生物質が挙げられる。これらの抗生物質
は市販のものを用いることが出来る。特に好ましい薬剤
としてはナイスタチンが挙げられる。 【００１４】本発明の酵母は細胞膜の構造・機能に障害
を与える薬剤に耐性を有し、かつ菌体内のＬ−グルタミ
ン酸濃度が向上した酵母であり、かかる性質を有してい
れば菌体内Ｌ−グルタミン酸濃度の向上に効果の見られ
る他の薬剤、例えば６−ジアゾ−５−オキソ−ノルロイ
シンや本発明で用いたブロモピルビン酸等に対する抵抗
性を有していても良い。 【００１５】細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に
対する耐性を親株に付与するには、親株を紫外線照射す
るか、あるいは変異誘発剤（例えばＮ−メチル−Ｎ’−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルフ
ォン酸等）で処理した後、親株が生育できないような濃
度の細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤を含む寒天
培地で生育可能な菌株を採取すればよい。 【００１６】細胞膜の構造・機能に障害を与える薬剤に
耐性な変異株とは、親株と比較したときに同薬剤に対し
てより強い耐性を有する株のことである。 【００１７】本発明の酵母は細胞膜の構造・機能に障害
を与える薬剤に耐性を有し、かつ菌体内Ｌ−グルタミン
酸濃度が向上した酵母である。例えば以下のものがあ
る。ヤロウィア・リポリティカ ＡＪ１４７１８ 【００１８】本発明における酵母を培養し、菌体を得る
ために用いられる培地は、炭素源、無機塩類、その他必
要に応じてアミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素を含
有する通常の栄養培地である。合成培地または天然培地
のいずれも使用可能である。培地に使用される炭素源、
窒素源は、培養される酵母の利用可能なものならばよ
い。 【００１９】炭素源としてはグルコース、グリセロー
ル、マニトール、エタノール、ｎ−パラフィン等が用い
られる。また乳酸やクエン酸等の有機酸も単独あるいは
他の炭素源と併用して用いることができる。 【００２０】窒素源としては尿素、アンモニア、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等が用いられる。 【００２１】有機微量栄養素としては、アミノ酸、ビタ
ミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含有するペプ
トン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆蛋白分解物等が用
いられ、生育にアミノ酸や、ビタミン等を要求する野生
株や栄養要求性変異株を培養する場合には要求される栄
養素を補添することが必要である。 【００２２】無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム
塩、鉄塩、亜鉛塩、カルシウム塩等が用いられる。 【００２３】培養方法は、培養温度２０ないし３７℃
で、ｐＨを３ないし８に制御しつつ通気培養を行う。培
養中にｐＨが下がる場合には、炭酸カルシウムを加える
か、アンモニア水、アンモニアガス等のアルカリで中和
する。かくして１０時間ないし４日間程度培養すること
により酵母菌体が得られる。 【００２４】得られた菌体から酵母エキスを調製するに
は、遠心分離により培養ブロスから菌体を回収し、公知
の方法に従って行えばよい。例えばトルエンや酢酸エチ
ルを菌体当り１〜２％添加し、温度４５〜５０℃で自己
消化を行い、エキス分を減圧濃縮し、噴霧乾燥により粉
末酵母エキスが得られる。 【００２５】 【実施例】次に実施例によって本発明をさらに詳細に説
明する。 【００２６】 【実施例１】ヤロウィア・リポリティカＡＪ５００４か
らブロモピルビン酸耐性株の分離 自然界から分離されたヤロウィア・リポリティカＡＪ５
００４（アグリカルチュラル アンド バイオロジカル
ケミストリー、第３３巻、１５８頁〜１６７頁、１９
６９年）を胞子形成培地（１％酢酸カリウム、０．１％
酵母エキス、０．０５％グルコース）にて１ないし２日
間３０℃で培養後、０．８５％生理食塩水にて洗浄し、
最終１ｍｇ／ｍｌのザイモリアーゼ５０００を含む０．
８５％生理食塩水に懸濁し、３０℃で１２０分間処理し
た。さらにポアサイズ６０μｍナイロンメンブレンで濾
過し、胞子を回収した。エチルメタンスルホン酸を最終
濃度３０μｌ／ｍｌとなるように添加した０．１Ｍリン
酸緩衝液（最終濃度２．５％のグルコースを含む）に懸
濁し、３０℃で６０分間の変異処理を行った。遠心分離
の後、胞子を０．１Ｍリン酸緩衝液で洗浄し、ブロモピ
ルビン酸０．５ｇ／ｌを含む最少培地（ディフコ イー
ストナイトロジェンベース ウィズアウトアミノ アシ
ド ０．６７％、グルコース ２％、寒天 ２％）に塗
布し、３０℃で３〜７日間培養した。 【００２７】ピルビン酸の代謝拮抗物質として知られる
ブロモピルビン酸はヤロウィア・リポリティカＡＪ５０
０４の生育を阻害し、０．５ｇ／Ｌのブロモピルビン酸
を含む最少培地上ではヤロウィア・リポリティカＡＪ５
００４の生育は認められなかった。 【００２８】ブロモピルビン酸を含む最少培地上に出現
したコロニーを釣り上げ、同一組成の最少培地上で単コ
ロニー分離を行った後、菌体調製用培地（ｎ−パラフィ
ン８０ｇ／ｌ、硝酸アンモニウム ２０ｇ／ｌ、リン酸
２水素カリウム ２ｇ／ｌ、硫酸マグネシウム７水和物
１ｇ／ｌ、硫酸第一鉄７水和物 １０ｍｇ／ｌ、硫酸
亜鉛７水和物 ４０ｍｇ／ｌ、チアミン ６μｇ／ｌ、
炭酸カルシウム ２０ｇ／ｌ、ｐＨ５．０）を２０ｍｌ
注入した５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、２日間３
０℃でシード培養した後、同一組成の培地２０ｍｌを注
入した５００ｍｌ容坂口フラスコに植菌し、３０℃で５
日間培養した後、培養ブロスを遠心し、上清中のＬ−グ
ルタミン酸濃度をバイオテックアナライザーＡＳ２００
（旭化成社製）で測定した結果、培養ブロス中に２３０
ｍｇ／ｌのＬ−グルタミン酸を蓄積するＮ４６株（ＡＪ
１４７１７）を見いだした。 【００２９】 【実施例２】ブロモピルビン酸耐性株Ｎ４６（ＡＪ１４
７１７）からナイスタチン耐性株の分離 【００３０】実施例１で用いた方法によりブロモピルビ
ン酸耐性株Ｎ４６（ＡＪ１４７１７）の胞子を調製し、
最終１０ｍＭになるようにＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジンを添加した１Ｍソルビトール溶
液に懸濁し、３０℃で２０分間の変異処理を行った。遠
心分離後、変異処理した胞子を１Ｍソルビトール溶液で
洗浄し、ナイスタチン１ｇ／ｌを含む最少培地に塗布し
た。ブロモピルビン酸耐性株Ｎ４６株（ＡＪ１４７１
７）はナイスタチン１ｇ／ｌを含む最少培地上では全く
生育できなかった。 【００３１】３０℃で３〜７日間培養後、１ｇ／ｌナイ
スタチンを含有する最少培地に出現したコロニーを釣り
上げ、同一組成の培地で単コロニー分離した後、実施例
１で用いた菌体調製用培地５ｍｌを注入した５０ｍｌ容
大型試験管に植菌し、３０℃で５日間培養した。培養終
了後培養ブロス１ｍｌをエッペンドルフチューブに採
り、密閉し、沸騰しているウオーターバス中に３０分間
浸漬し、菌体内の遊離Ｌ−グルタミン酸を抽出した。遠
心分離により抽出残査を除いたのち、上清のＬ−グルタ
ミン酸濃度をバイオテックアナライザーＡＳ２００で測
定し、測定値を菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度
とした。一方、菌体外グルタミン酸濃度は培養ブロスを
遠心分離し、得られた上清中のＬ−グルタミン酸濃度を
測定し、測定値を菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度とした。
菌体内のＬ−グルタミン酸濃度は菌体内外を併せたＬ−
グルタミン酸濃度から菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度を引
いた値で表せうる。 【００３２】分離し、培養評価した１３株のナイスタチ
ン耐性株の内、菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度
が親株であるＮ４６株（ＡＪ１４７１７）よりも高い株
が９株存在した（図１）。１３株の内、菌体外のＬ−グ
ルタミン酸濃度が親株に比し顕著に向上した株は１株だ
けであった。菌体内外を併せたＬ−グルタミン酸濃度が
向上した９株では、菌体外Ｌ−グルタミン酸濃度が親株
より顕著に増加したものはなく、親株と同等、もしくは
低下しており、ナイスタチン耐性付与により菌体内のＬ
−グルタミン酸濃度が顕著に向上したことが明らかにな
った。 【００３３】菌体内外のＬ−グルタミン酸濃度が最も高
かったナイスタチン耐性株ＡＪ１４７１８では菌体内に
７００ｍｇ／ｌ（菌体乾燥重量当り３．５％）、菌体外
に２０ｍｇ／ｌのＬ−グルタミン酸を蓄積した。 【００３４】実施例１の菌体調製培地の炭素源のみをｎ
−パラフィンからグルコース（８％）に変更して培養評
価を行った。培養評価菌株をＹＰＤ寒天培地（ディフコ
バクト イーストエキストラクト１％、ディフコ バ
クトペプトン２％、グルコース２％、寒天２％）にて３
０℃で２間培養し、寒天プレート全面に生育した内の１
／１６プレート分を菌体調製用培地（炭素源グルコー
ス）５ｍｌを注入した５０ｍｌ容大型試験管に植菌し、
３０℃にて５日間培養し、菌体内外、及び菌体内のＬ−
グルタミン酸濃度を測定したところＡＪ１４７１８はＬ
−グルタミン酸を菌体内に５３０ｍｇ／ｌ、菌体外に４
２ｍｇ／ｌ蓄積し、一方親株であるブロモピルビン酸耐
性株Ｎ４６（ＡＪ１４７１７）では菌体内に１９８ｍｇ
／ｌ、菌体外に４９ｍｇ／ｌ蓄積していた。炭素源をグ
ルコースに変更しても炭素源をｎ−パラフィンとした場
合と同様にナイスタチン耐性株では菌体内のＬ−グルタ
ミン酸濃度が顕著に向上していることが明かとなった。 【００３５】 【発明の効果】本発明の方法により酵母菌体内のＬ−グ
ルタミン酸濃度を高めることができ、本発明の方法によ
り育種された酵母を用いることによりＬ−グルタミン酸
含量の高い酵母エキスを製造することが可能となる。 【００３６】ヤロウィア・リポリティカＡＪ１４７１７
は、平成８年５月２９日に工業技術院生命工学工業技術
研究所（郵便番号３０５ 日本国茨城県つくば市東一丁
目１番３号）に寄託されており、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ
−１５６５３が付与されている。ヤロウィア・リポリテ
ィカＡＪ１４７１８は、平成８年５月２９日に工業技術
院生命工学工業技術研究所（郵便番号３０５ 日本国茨
城県つくば市東一丁目１番３号）に寄託されており、受
託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５６５４が付与されている。
【図面の簡単な説明】
【図１】ナイスタチン耐性株の菌体内外を併せたＬ−グ
ルタミン酸濃度を評価した結果である。縦軸にはＬ−グ
ルタミン酸濃度を、横軸にはナイスタチン耐性株の菌株
番号を示した。Ｎ４６は親株である。
ルタミン酸濃度を評価した結果である。縦軸にはＬ−グ
ルタミン酸濃度を、横軸にはナイスタチン耐性株の菌株
番号を示した。Ｎ４６は親株である。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所
(Ｃ１２Ｎ 1/16
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(Ｃ１２Ｎ 15/01
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(Ｃ１２Ｐ 13/14
Ｃ１２Ｒ 1:645）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求頁１】細胞膜の構造・機能を障害する薬剤に耐性
を有し、菌体内にＬ−グルタミン酸を蓄積する能力が向
上した酵母。 【請求頁２】薬剤がナイスタチンである請求頁１記載の
酵母。 【請求頁３】酵母がヤロウィア・リポリティカである請
求頁１記載の酵母。 【請求頁４】請求頁１ないし３記載の酵母を用いること
を特徴とする酵母エキスの製造方法。
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|---|---|---|---|---|
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| WO2010058527A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | グルタミン酸高含有酵母の製造方法 |
| WO2010058616A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | グルタミン酸高含有酵母の製造方法 |
| WO2010058551A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | アミノ酸高含有酵母の製造方法 |
| WO2010058558A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | アラニン高含有酵母の製造方法 |
| JP2012179021A (ja) * | 2011-03-02 | 2012-09-20 | Hitachi Zosen Corp | 廃棄物からエタノールを製造する方法 |
| US10827771B2 (en) | 2015-04-28 | 2020-11-10 | Tablemark Co., Ltd. | Method for producing yeast extract, yeast extract obtained thereby, seasoning composition, and food |
-
1996
- 1996-05-31 JP JP13788096A patent/JP3896606B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009123019A1 (ja) | 2008-03-31 | 2009-10-08 | 株式会社 興人 | 酵母変異株と酵母エキス |
| US20160331015A1 (en) * | 2008-03-31 | 2016-11-17 | Kohjin Co., Ltd. | Yeast mutant and yeast extract |
| US9084435B2 (en) | 2008-03-31 | 2015-07-21 | Kohjin Co., Ltd. | Yeast mutant and yeast extract |
| JP4503700B1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-07-14 | アサヒビール株式会社 | グルタミン酸高含有酵母の製造方法 |
| WO2010058558A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | アラニン高含有酵母の製造方法 |
| JP2010148517A (ja) * | 2008-11-18 | 2010-07-08 | Asahi Breweries Ltd | グルタミン酸高含有酵母 |
| WO2010058551A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | アミノ酸高含有酵母の製造方法 |
| JP2011115180A (ja) * | 2008-11-18 | 2011-06-16 | Asahi Breweries Ltd | グルタミン酸高含有酵母の製造方法 |
| JP4757944B2 (ja) * | 2008-11-18 | 2011-08-24 | アサヒビール株式会社 | 酵母エキス |
| US9005683B2 (en) | 2008-11-18 | 2015-04-14 | Asahi Group Holdings, Ltd. | Method for producing yeast with high glutamic acid content |
| JP5730579B2 (ja) * | 2008-11-18 | 2015-06-10 | アサヒグループホールディングス株式会社 | アミノ酸高含有酵母の製造方法 |
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| WO2010058527A1 (ja) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | アサヒビール株式会社 | グルタミン酸高含有酵母の製造方法 |
| JP2012179021A (ja) * | 2011-03-02 | 2012-09-20 | Hitachi Zosen Corp | 廃棄物からエタノールを製造する方法 |
| US10827771B2 (en) | 2015-04-28 | 2020-11-10 | Tablemark Co., Ltd. | Method for producing yeast extract, yeast extract obtained thereby, seasoning composition, and food |
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