JPH09297141A - Ｃ型肝炎ウイルス感染症診断薬 - Google Patents

Ｃ型肝炎ウイルス感染症診断薬

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JPH09297141A
JPH09297141A JP8112442A JP11244296A JPH09297141A JP H09297141 A JPH09297141 A JP H09297141A JP 8112442 A JP8112442 A JP 8112442A JP 11244296 A JP11244296 A JP 11244296A JP H09297141 A JPH09297141 A JP H09297141A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 より高感度で迅速に多数の検体を測定できる
ＨＣＶ感染症診断薬ならびに診断法を提供する。 【解決手段】 ＨＣＶ抗原と、ＨＣＶ抗原とキャリアー
タンパク質との化学結合により調製した複合抗原とを固
相に感作させて得られるＣ型肝炎ウイルス感染症診断
薬、ならびに該Ｃ型肝炎ウイルス感染症診断薬を検体試
料に添加し、担体粒子の凝集度を測定することからなる
Ｃ型肝炎ウイルス感染症の診断法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫凝集反応を利
用してＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症を検出する診
断薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】Ｃ型肝炎は１９８８年、米国のカイロン
社の研究グループによってＨＣＶ遺伝子がウイルスに先
立って発見された。このＨＣＶに対する抗体を検出する
ために各種組換え抗原や合成ペプチドが検討され、ＨＣ
Ｖ関連抗体を検出するキットが開発されている。また、
検出方法としては、寒天ゲル拡散法、対向免疫電気泳動
法、放射免疫測定法、酵素免疫測定法、受身赤血球凝集
法、ラテックス凝集法などがある。
【０００３】ＨＣＶ関連抗体を検出するために用いられ
るＨＣＶ抗原タンパクとしては、構造領域タンパクとし
てコアおよびエンベロープタンパク、非構造領域タンパ
クとしてＮＳ１〜ＮＳ５タンパクが知られている。１つ
のＨＣＶ抗原タンパクのみでは検出感度が十分高くな
く、特異性にも問題があるので、構造領域と非構造領域
のタンパクを適宜組み合わせて用いられている（Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 89:10011-10015, 1992）。ま
た、さらに検出感度を高めるための試みもなされてい
る。例えば、粒子凝集法では、感作するＨＣＶ抗原の数
をさらに増やしたり、ＨＣＶ抗原活性ポリペプチドを加
熱処理したり（特開平６−１００２２７３号）、あるい
はＨＣＶ抗原タンパクとキャリアータンパクとの融合タ
ンパクを親水性粒子に感作して用いる（特開平７−１９
８７２３号）などが行われている。
【０００４】また、抗原として合成ペプチドを用いる試
みもなされているが、合成ペプチドを用いた場合には一
般に検出感度が低くなると言われている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】したがって、より高感
度で迅速に多数の検体を測定できるＨＣＶ感染症診断薬
ならびに診断法が求められている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成すべく鋭
意検討した結果、グルタルアルデヒド法を用いて、キャ
リアータンパク質と各種Ｃ型肝炎ウイルスのコア抗原、
ＮＳ３抗原、ＮＳ４抗原およびＮＳ５抗原を化学結合し
た複合抗原を担体粒子に感作させることにより、高感度
化が可能となった。またこの複合抗原を使用することに
より、粒子の安定性についても大幅に改善することが可
能となった。
【０００７】本発明は、ＨＣＶ抗原と、ＨＣＶ抗原とキ
ャリアータンパク質との化学結合により調製した複合抗
原とを固相に感作させて得られるＣ型肝炎ウイルス感染
症診断薬を提供する。
【０００８】キャリアータンパク質としては、水溶性タ
ンパクであれば特に制限はないが、好ましくは分子量１
０，０００〜１，０００，０００、より好ましくは３
０，０００〜１５０，０００であり、具体的にはウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）、卵白アルブミン、ヘモシアニ
ンなどが好適に用いられる。この他にも、水溶性合成高
分子、例えばポリビニルアルコール、デキストランなど
も使用できる。
【０００９】固相としては、担体粒子、ミクロタイター
プレート、試験管などを使用できる。担体粒子を用いる
ことが好ましい。担体粒子としては、通常粒子凝集法の
診断薬で用いられる公知の粒子を用いることができる。
例えば、ポリスチレンラテックスのような疎水性粒子、
粒子表面にアミノ基、カルボキシル基などの親水基を有
する共重合ラテックス粒子、赤血球、ゼラチン粒子など
を用いることができる。より好ましくはポリスチレンラ
テックスが用いられる。
【００１０】本発明の診断薬で使用するＨＣＶ抗原タン
パク質は、公知のＨＣＶの構造領域タンパク質や非構造
タンパク質である。構造領域タンパク質としては、コア
タンパク、非構造領域タンパク質としてはＮＳ３タンパ
ク、ＮＳ４タンパク、およびＮＳ５タンパクを使用でき
る。なお、これらの抗原タンパク質のアミノ酸およびヌ
クレオチド配列については文献（特表平５−５０８２１
９号）に記載されている。抗原タンパク質の由来につい
てはＨＣＶ抗原活性を有するものであれば特に制限され
ず、天然から単離したもの、化学合成によるもの、およ
び遺伝子組換え法により製造したものを使用できる。抗
原タンパク質としてはこれらの領域のタンパク質のうち
の種々の長さのペプチドを用いることができ、好ましく
は、少なくとも１つのエピトープを含む８個以上のアミ
ノ酸からなるペプチドを用いる。より好ましくは、分子
量１，０００〜５，０００の合成ペプチドを用いる。ペ
プチドは当業界で公知の方法、例えば固相合成法、フラ
グメント縮合法、または古典的溶液合成法を用いて合成
することができる。好ましくは文献（Merrifield,J. A
m. Chem. Soc. 85:2149, 1963）に記載の固相ペプチド
合成法により製造できる。なお、本発明では、コア、Ｎ
Ｓ３、ＮＳ４、ＮＳ５のそれぞれの抗原タンパク質とし
て、少なくとも１つ以上の異なるエピトープを含む１種
類以上の抗原を組み合わせて、これらを直接あるいはキ
ャリアータンパク質との複合抗原として担体粒子に感作
することができる。後述する実施例ではコア抗原として
特表平５−５０８２１９号記載のコア領域のうちのアミ
ノ酸４９〜６８を含むペプチドを使用し、ＮＳ４ペプチ
ドとして特表平５−５０８２１９号記載のＮＳ４領域の
うちのアミノ酸１７０６〜１７２５、１７１８〜１７３
７および１７２４〜１７４３を含むペプチドを使用し、
またＮＳ５ペプチドとして特表平５−５０８２１９号記
載のＮＳ５領域のうちのアミノ酸２２８７〜２３０６、
２２９９〜２３１８および２３１１〜２３３０を含むペ
プチドを使用し、またＮＳ３抗原としては特表平５−５
０８２１９号記載のＮＳ３領域のうちのアミノ酸１１９
２〜１４５７のペプチドを使用したが、これに限定され
ない。
【００１１】上記抗原タンパク質のそれぞれをキャリア
ータンパク質と化学結合により結合して複合抗原を調製
する。抗原タンパク質は直接担体粒子に感作させるより
も複合抗原として感作させた方が検出感度のよいことが
見いだされた。ただし、本発明で使用したＮＳ３抗原の
ように分子量が１０，０００以上のものについては顕著
な差は観察されず、したがってそのような抗原タンパク
質を直接担体粒子に感作し、他の抗原タンパク質を複合
抗原として感作させてもよい。キャリアータンパク質と
抗原タンパク質との結合には公知の方法を用いることが
でき、例えば、カルボジイミド法、過ヨウ素酸法、マレ
イミド法、グルタルアルデヒド法などを用いることがで
きる。グルタルアルデヒドによる架橋により行うことに
よって反応性が増大するのでグルタルアルデヒド法を用
いることが好ましい。また、キャリアータンパク質と抗
原タンパク質は、分子数の比で、約１：３〜１：２０、
好ましくは約１：４〜１：９、より好ましくは約１：６
〜１：８の割合で混合して複合抗原を調製する。このよ
うにして調製した複合抗原を公知の方法により担体粒子
と結合（感作）する。例えば、物理的吸着、化学的吸着
によって行うことができる。上述したように、ＮＳ３抗
原はキャリアータンパク質と複合抗原を形成することな
く直接担体粒子に感作することもできるが、これも同様
の方法を用いることができる。感作は緩衝作用のある緩
衝液中で行い、例えばリン酸緩衝液、グリシン緩衝液、
トリス緩衝液、酢酸緩衝液を用い、好ましくはｐＨ３〜
８、より好ましくはｐＨ４〜５で行う。
【００１２】本発明はまた、上記Ｃ型肝炎ウイルス感染
症診断薬を検体試料に添加し、担体粒子の凝集度をフロ
ーサイトメーターで測定することからなるＣ型肝炎ウイ
ルス感染症の診断法を提供する。本発明のＣ型肝炎ウイ
ルス感染症診断薬は、検体試料中に抗ＨＣＶ抗体が存在
する場合にはこれも反応して凝集を生じる。生じた凝集
は目視、あるいは濁度、吸光度などでも測定は可能であ
るが、フローサイトメータの原理を応用した全自動免疫
凝集測定装置（例えば東亜医用電子社製のＰＡＭＩＡ−
３０TM）を用いて凝集粒子の大きさを光学的に測定する
ことにより迅速かつ高感度、高精度に測定することがで
きる。すなわち、試料をシースフロー機構によりフロー
セル中に導き、１列に並べて通過させる。ここにレーザ
ー光を照射して生じる散乱光の強度を測定することによ
っても凝集の程度を知ることができる。凝集粒子数
（Ｐ：Ｐｏｌｙｍｅｒ）と未凝集粒子数（Ｍ：Ｍｏｎｏ
ｍｅｒ）を計数する。このＰとＭからＰ／Ｔ（Ｔ＝Ｐ＋
Ｍ）を演算し、あらかじめ得られたカットオフ値からＨ
ＣＶ抗体の有無を定性判定するものである。この方法を
用いることによって、ＨＣＶ抗体をより高感度に検出す
ることができる。また、粒径を適当なものとすれば、電
気抵抗法を用いた血液分析装置や粒度分析測定装置によ
り測定することも可能である。ただし検出器の目詰まり
などの問題を考慮すると、光学的な方法で測定する方が
好ましい。
【００１３】
【発明の効果】本発明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬
を用いるとＣ型肝炎ウイルスへの感染を感度よく、かつ
市販の診断薬よりも早期に診断することが可能である。
すなわち、ＨＣＶ抗体が陽性化していく過程で同一人か
ら経時的に採血した数検体から構成されるパネル血清
（例えば、ＨＣＶセロコンバージョンパネル、輸入販売
元：協和メディックス、製造元：ＢＯＳＴＯＮ ＢＩＯ
ＭＥＤＩＣＡ，ＩＮＣ）を用いて試験したところ、本発
明のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬は、従来の赤血球を
用いる受動血球凝集法（ＰＨＡ）、酵素免疫検定法（Ｅ
ＩＡ）、および酵素免疫ソルベント検定法（ＥＬＩＳ
Ａ）に比べてより早期に、すなわち感染初期にＨＣＶへ
の感染を検出できることが明らかとなった。
【００１４】また、本発明の診断薬と、同じ抗原を用い
るがキャリアータンパク質と複合抗原を調製することな
く直接感作することによって製造した診断薬とを比較し
たところ、本発明の診断薬の方が検出感度の優れている
ことが判明した。
【００１５】さらに、本発明の診断薬は長期保存をした
後にも検出感度が落ちず、安定な診断薬であるといえ
る。
【００１６】本発明の診断法は、ＥＬＩＳＡなどの従来
法と比較して、繁雑な洗浄工程を伴わなず、単に本発明
のＨＣＶ感染症診断薬（好ましくはＨＣＶ抗原を感作し
たラテックス粒子）を、検体試料（好ましくは被験者血
液）と混合するだけの操作によって実施することが可能
である。また、本発明の診断法は上記混合操作および測
定操作のいずれをも全自動で行う測定機による測定が可
能であり、多数の検体を測定するのに好適である。
【００１７】
【実施例】以下の実施例において本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。
【００１８】実施例１：ＨＣＶ複合抗原の調製 ＨＣＶ抗原として、ＮＳ３抗原は、特表平５−５０８２
１９号の実施例１の記載に基づいて遺伝子組換え法によ
り製造し使用した。用いたＮＳ３ペプチドはＨＣＶタン
パク質のアミノ酸１１９２〜１４５７である。
【００１９】コア抗原、ＮＳ４抗原、ＮＳ５抗原につい
ては、特表平５−５０８２１９号に記載されたアミノ酸
配列のうち、それぞれ４９〜６８、１７０６〜１７２
５、２２８７〜２３０６を含むペプチドを、ＰＥＲＫＩ
Ｎ ＥＬＭＥＲ社のペプチドシンセサイザＭｏｄｅｌ
４３１Ａを用いて合成し使用した。
【００２０】ＢＳＡ（市販品、分子量６６，０００）を
１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．０中に、０．１％（ｗ／
ｖ）の濃度で調製したもの１容量に、コア抗原（アミノ
酸４９〜６８のペプチド）を１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ
７．０中に０．１％（ｗ／ｖ）の濃度に調製したもの７
容量を添加し、最終的に１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．０
を加えて９容量となるよう調製する。その後、１％グル
タルアルデヒド水溶液を添加し反応を開始する。反応温
度は３０℃で行い、３０分後に２０％グリシン水溶液１
容量を添加して反応を停止する。
【００２１】ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５抗原についても同
様の操作を行い、１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ６〜８の緩衝
液を用い、１容量の１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ溶液に対し、
１〜８容量の０．１％（ｗ／ｖ）ＨＣＶ抗原溶液を反応
させてＨＣＶ複合抗原を調製した。
【００２２】実施例２：ＨＣＶ抗原感作ラテックスの製
造 粒径０．７８μｍのポリスチレンラテックス粒子（積水
化学工業株式会社製）を１０ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ４．０
中に５％（ｗ／ｖ）の濃度に調製し、この中に実施例１
で調製したＮＳ３複合抗原、ＮＳ４複合抗原、ＮＳ５複
合抗原をラテックス分散液１ｍｌ当たり５０μｇ添加
し、４℃で２４時間反応させた。その後遠心（１２００
０ｒｐｍ、１０分）を行い、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡを含
む０．１ＭＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．０を最初と同量添加
し粒子を分散させた。再度遠心処理を行い、同じ緩衝液
中に分散させてＨＣＶ抗原感作ラテックスとした。
【００２３】実施例３：凝集反応 検体試料（被験者血液）１０μｌに実施例２で調製した
ＨＣＶ抗原感作ラテックス（５％）１０μｌを添加し、
１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含む０．１Ｍリン酸緩衝液８０
μｌを加え、４５℃で１５分間反応させた後、ラテック
ス粒子の凝集度を測定した。この反応および測定は全自
動免疫測定装置ＰＡＭＩＡ−３０（東亜医用電子株式会
社製）を用い、前方散乱光を測定した。
【００２４】凝集度はトータルの粒子数に対する凝集し
た粒子数のパーセント（Ｐ／Ｔ％）で示される。
【００２５】測定結果を以下の表１に示す。表１から明
らかなように、ＨＣＶ抗体陽性検体において十分な凝集
度が得られている。また、ＨＣＶ抗体陰性検体ではラテ
ックスは凝集せず、ＨＣＶ抗体を含む検体試料では凝集
が認められることから、ＨＣＶ抗原で感作したラテック
ス粒子がＨＣＶ抗体と反応することによって凝集が生じ
たことがわかる。
【００２６】
【表１】
【００２７】実施例４：早期検出感度 ＨＣＶ抗体が陽性化していく過程で同一人から経時的に
採血した数検体から構成される、市販のＨＣＶセロコン
バージョンパネルＰＨＶ９０１、ＰＨＶ９０２およびＰ
ＨＶ９０３（輸入販売元：協和メディックス、製造元：
ＢＯＳＴＯＮＢＩＯＭＥＤＩＣＡ，ＩＮＣ）を用いて、
ＨＣＶ抗体陽転の早期検出感度を試験した。実施例２で
調製した診断薬を用いる本発明のカウンティングイムノ
アッセイ（ＣＩＡ）を、以下の方法を用いる他社製品と
比較した： Ａ社：赤血球を用いる受動血球凝集法（ＰＨＡ） 使用ＨＣＶ抗原：コア、ＮＳ３、ＮＳ４ Ｂ社：酵素免疫検定法（ＥＩＡ） 使用ＨＣＶ抗原：コア、ＮＳ３、ＮＳ４ Ｃ社：酵素免疫ソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ） 使用ＨＣＶ抗原：コア、ＮＳ３、ＮＳ４ 得られた結果を以下の表２、表３および表４に示す（な
お、表中のＢ社およびＣ社のデータはパネルに添付のデ
ータを記載した）。本発明の診断薬ならびに診断法を用
いると、パネルＰＨＶ９０２およびＰＨＶ９０３（これ
らのパネルの被験者は採血第１日目からＰＣＲによる抗
体検査は陽性である）において、他社のいずれの診断薬
よりも早期にＨＣＶ感染を検出できた。
【００２８】
【表２】
【００２９】
【表３】
【００３０】
【表４】
【００３１】実施例５：ＨＣＶ抗原を直接感作した診断
薬との比較 本発明の診断薬と、同じＨＣＶ抗原を直接感作して調製
した診断薬とを用いて、ＨＣＶ抗体の検出感度試験を行
った。
【００３２】ＮＳ３抗原（遺伝子組換え法により得たも
の）、コア抗原（合成法により得たペプチド）、ＮＳ４
抗原（合成法により得たペプチド）、およびＮＳ５抗原
（合成法により得たペプチド）はそれぞれＢＳＡとの複
合抗原とした後に、実施例２の方法により感作して、Ｈ
ＣＶ複合抗原感作ラテックスとした。
【００３３】対照として、同じ抗原、同じ感作条件を用
いてすべて直接感作によりＨＣＶ抗原直接感作ラテック
スを調製した。
【００３４】これらのラテックスを用いて、実施例３の
方法により、ＨＣＶ抗体陽性の検体試料（Ａ〜Ｅ）およ
びＨＣＶ抗体陰性の検体（Ｆ〜Ｊ）の凝集度（Ｐ／Ｔ
％）を測定した。カットオフ値（複合抗原感作ラテック
スで１．９５％；抗原直接感作ラテックスで１．０１
％）を考慮して各検体のＨＣＶ抗体陽性または陰性を判
定した。得られた結果を以下の表５に示す。
【００３５】
【表５】 検体試料 複合抗原感作ラテックス 抗原直接感作ラテックス 凝集度（％） 判定 凝集度（％） 判定 Ａ １５．８７ 陽性 ０．３４ 陰性 Ｂ ６６．２８ 陽性 ２４．３６ 陽性 Ｃ ３５．２８ 陽性 ６．３５ 陽性 Ｄ ５０．９８ 陽性 １５．５６ 陽性 Ｅ １７．８８ 陽性 ０．５５ 陰性 Ｆ ０．４６ 陰性 ０．３４ 陰性 Ｇ ０．５６ 陰性 ０．３６ 陰性 Ｈ ０．７９ 陰性 ０．３５ 陰性 Ｉ ０．６２ 陰性 ０．５６ 陰性 Ｊ ０．６５ 陰性 ０．５５ 陰性
【００３６】ＨＣＶ抗体陽性検体である検体試料Ａおよ
びＥにおいて、抗原を直接感作した診断薬ではＨＣＶ抗
体を検出できなかったが、本発明による複合抗原を感作
した診断薬では検出可能であった。
【００３７】実施例６：長期保存安定性試験 実施例５のＨＣＶ抗原感作ラテックス５％（ｗ／ｖ）、
０．１Ｍ ＰＢＳ、ｐＨ７．０懸濁液を冷蔵保存し、試
薬の保存安定性を試験した。得られた結果を以下の表６
に示す。
【００３８】
【表６】 ＨＣＶ抗体陰性プール血清 ＨＣＶ抗体陽性プール血清 複合抗原感作 直接感作 複合抗原感作 直接感作 ０カ月 ０．７１％ ０．７５％ ４１．９０％ １２．４６％ １カ月 ０．７１％ ０．７２％ ４０．８５％ １１．５６％ ３カ月 ０．７５％ １．０２％ ４６．８３％ １０．７９％ ６カ月 ０．７８％ １．２２％ ４３．４７％ １０．６２％ ９カ月 ０．８２％ １．５０％ ４３．８６％ ９．７９％ １２カ月 ０．７５％ １．６２％ ４１．６２％ ８．６２％ １３カ月 ０．７８％ １．９７％ ４３．３５％ ８．６５％ カットオフ値 複合抗原感作 直接感作 ０カ月 ２．３５％ １．２５％ １カ月 ２．５１％ １．３５％ ３カ月 ２．５６％ １．５６％ ６カ月 ２．５５％ １．８２％ ９カ月 ２．２５％ ２．１０％ １２カ月 ２．３３％ ２．３２％ １３カ月 ２．４４％ ２．５７％
【００３９】以上の結果から明らかなように、複合抗原
感作ラテックスは１３カ月の長期保存後でも凝集度が安
定していた。一方、直接感作ラテックスでは、ＨＣＶ抗
体陰性プール血清を用いた試験では凝集度が長期保存と
ともに徐々に上昇し、ＨＣＶ抗体陽性プール血清を用い
た試験では凝集度が徐々に低下し、またカットオフ値が
徐々に上昇することが観察された。
【００４０】実施例７：ＨＣＶ抗原感作ラテックスの製
造（２） ＨＣＶ抗原として、実施例１と同じものを用い、ＮＳ３
抗原を複合抗原とせずに直接感作した以外は、実施例２
と同様に操作を行い、ＨＣＶ抗原感作ラテックスと調製
した。
【００４１】実施例８：ＨＣＶ抗原感作ラテックスの製
造（３） ＮＳ３抗原は、実施例１と同じものを用い、コア抗原と
して、前記公報（特表平５−５０８２１９号）記載のア
ミノ酸４９〜６８のペプチド、ＮＳ４抗原として、同じ
くアミノ酸１７０６〜１７２５、１７１８〜１７３７の
ペプチド、ＮＳ５抗原として、同じくアミノ酸２２８７
〜２３０６、２２９９〜２３１８のペプチドを用い、実
施例１と同様に１容量の１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ溶液に対
し、１〜８容量の０．１％（ｗ／ｖ）ＨＣＶ抗原溶液を
反応させてＨＣＶ複合抗原を調製し、実施例２と同様に
ＨＣＶ抗原感作ラテックスを調製した。
【００４２】実施例９：ＨＣＶ抗原感作ラテックスの製
造（４） ＮＳ３抗原は、実施例１と同じものを用い、コア抗原と
して、前記公報記載のアミノ酸４９〜６８のペプチド、
ＮＳ４抗原として、同じくアミノ酸１７０６〜１７２
５、１７１８〜１７３７、１７２４〜１７４３のペプチ
ド、ＮＳ５抗原として、同じくアミノ酸２２８７〜２３
０６、２２９９〜２３１８、２３１１〜２３３０のペプ
チドを用い、実施例１と同様に１容量の１％（ｗ／ｖ）
ＢＳＡ溶液に対し、１〜８容量の０．１％（ｗ／ｖ）Ｈ
ＣＶ抗原溶液を反応させてＨＣＶ複合抗原を調製し、実
施例２と同様にＨＣＶ抗原感作ラテックスを調製した。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年５月８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＨＣＶ抗原と、ＨＣＶ抗原とキャリアー
    タンパク質との化学結合により調製した複合抗原とを固
    相に感作させて得られるＣ型肝炎ウイルス感染症診断
    薬。
  2. 【請求項２】 ＨＣＶ抗原が、コア抗原、ＮＳ３抗原、
    ＮＳ４抗原およびＮＳ５抗原から選ばれたものである請
    求項１記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
  3. 【請求項３】ａ．コア抗原とキャリアータンパク質との
    化学結合により調製した複合抗原、 ｂ．ＮＳ３抗原、またはＮＳ３抗原とキャリアータンパ
    ク質との化学結合により調製した複合抗原、 ｃ．ＮＳ４抗原とキャリアータンパク質との化学結合に
    より調製した複合抗原、 ｄ．ＮＳ５抗原とキャリアータンパク質との化学結合に
    より調製した複合抗原、 から選択される３種以上のＨＣＶ抗原を固相に感作させ
    て得られる請求項１または２記載のＣ型肝炎ウイルス感
    染症診断薬。
  4. 【請求項４】 ＨＣＶ抗原が、ＨＣＶ抗原活性を有する
    少なくとも１つ以上の異なるエピトープを含む１種以上
    である請求項１〜３のいずれかに記載のＣ型肝炎ウイル
    ス感染症診断薬。
  5. 【請求項５】 キャリアータンパク質がＢＳＡ、卵白ア
    ルブミンまたはヘモシアニンから選択される請求項１〜
    ４のいずれかに記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
  6. 【請求項６】 固相が担体粒子である請求項１〜５のい
    ずれかに記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
  7. 【請求項７】 担体粒子が疎水性粒子である請求項６記
    載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
  8. 【請求項８】 疎水性粒子がポリスチレンラテックスで
    ある請求項７記載のＣ型肝炎ウイルス感染症診断薬。
  9. 【請求項９】 請求項６記載のＣ型肝炎ウイルス感染症
    診断薬を検体試料に添加し、担体粒子の凝集度を測定す
    ることからなるＣ型肝炎ウイルス感染症の診断法。
  10. 【請求項１０】 凝集度をフローサイトメータで測定す
    る請求項９記載のＣ型肝炎ウイルス感染症の診断法。
  11. 【請求項１１】 フローサイトメータによる測定が前方
    散乱光を測定することによって行う請求項１０記載のＣ
    型肝炎ウイルス感染症の診断法。
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