JPH09263579A - Piperidine derivative and drug carrier containing the derivative as constituent component - Google Patents
Piperidine derivative and drug carrier containing the derivative as constituent componentInfo
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- JPH09263579A JPH09263579A JP8076260A JP7626096A JPH09263579A JP H09263579 A JPH09263579 A JP H09263579A JP 8076260 A JP8076260 A JP 8076260A JP 7626096 A JP7626096 A JP 7626096A JP H09263579 A JPH09263579 A JP H09263579A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なピペリジン
誘導体およびそれを構成成分とする薬物担体に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel piperidine derivative and a drug carrier containing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】近年、リポソーム、エマルジョン、リピ
ッドマイクロスフェアなどの閉鎖小包を薬物担体として
ドラッグデリバリーシステム（以下、ＤＤＳと称す）に
応用しようとする研究が盛んに行われている。これら閉
鎖小包は一般的にリン脂質あるいはその誘導体、または
ステロールやリン脂質以外の脂質等を基本膜構成成分と
して調製される、しかしながら、これら基本構成成分の
みでは、閉鎖小包同士の凝集、体内における滞留性の低
下などの実際に応用していくうえでの様々な面での困難
を克服することはできなかった。さらに、実際にＤＤＳ
製剤として目的の部位に薬物に到達させることは非常に
困難であった。2. Description of the Related Art In recent years, active studies have been conducted to apply closed packages such as liposomes, emulsions and lipid microspheres to drug delivery systems (hereinafter referred to as DDS) as drug carriers. These closed parcels are generally prepared using phospholipids or derivatives thereof, or lipids other than sterols and phospholipids as basic membrane constituents. However, these basic constituents alone cause aggregation of closed parcels and retention in the body. It was not possible to overcome difficulties in various aspects of practical application such as a decrease in sex. In addition, the actual DDS
It was very difficult to reach the target site as a drug product.
【０００３】そこで、薬物封入率の向上および閉鎖小包
の細胞接着性の向上を目的として、ステアリルアミン等
のカチオン化脂質を少量配合することにより、閉鎖小包
体の表面を生理的ｐＨ範囲でカチオン化する試みも行わ
れている。特にＤＮＡを含むカチオン性のリポソームは
ＤＮＡの細胞中への移動、すなわち、トランスフェクシ
ョンを促進することが知られているが、さらに導入効
率、発現率、安全性の高いものが切望されている。しか
し、カチオン化脂質として選択できる脂質は限られてお
り、安全性が高く、高機能を発現する薬物担体用カチオ
ン化脂質の開発が強く望まれている。現在のところ、そ
のようなカチオン化脂質としては、米国特許第４８９７
３５５号、米国特許第５３３４７６１号、日本特許公報
特開平２−２９２２４６号、日本特許公報特開平４−１
０８３９１号が報告されているが十分な効果は得られて
いない。[0003] Therefore, for the purpose of improving the drug encapsulation rate and the cell adhesion of the closed parcel, a small amount of a cationized lipid such as stearylamine is mixed to cationize the surface of the closed parcel in a physiological pH range. Attempts are also being made. In particular, cationic liposomes containing DNA are known to promote the transfer of DNA into cells, that is, transfection, but those with higher transduction efficiency, expression rate, and safety are eagerly desired. However, lipids that can be selected as cationized lipids are limited, and there is a strong demand for the development of cationized lipids for drug carriers that are highly safe and exhibit high functions. At present, such cationized lipids include US Pat.
No. 355, U.S. Pat. No. 5,334,761, Japanese Patent Publication No. 2-292246, Japanese Patent Publication No. 4-1.
No. 08391 has been reported, but no sufficient effect has been obtained.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】従って、効率良くかつ
安全にＤＮＡを細胞中へ導入でき、またＤＮＡの細胞中
への移動以外の目的、例えば血管内皮損傷部位、腎炎、
腎ガン、肺炎、肺ガン、肝炎、肝ガン、膵ガン、リンパ
腫などの患部に確実に、効率良くかつ安全に薬物のター
ゲッティングが行えＤＤＳ療法に有効な薬物担体の開発
が強く望まれている。Therefore, DNA can be efficiently and safely introduced into cells, and the purpose other than the transfer of DNA into cells, such as vascular endothelial injury site, nephritis,
There is a strong demand for the development of a drug carrier that can reliably and efficiently target drugs to affected areas such as kidney cancer, pneumonia, lung cancer, hepatitis, liver cancer, pancreatic cancer, and lymphoma and that is effective for DDS therapy.
【０００５】従って本発明の目的は、核酸、ポリヌクレ
オチド、遺伝子およびその類縁体を細胞へ効率良くしか
も安全にトランスフェクションを行える薬物担体、およ
びそれを形成しうるカチオン化脂質を提供することであ
る。また本発明の目的は薬物、ペプチドおよびタンパク
質を目的の部位に効果的に送達する薬物担体、およびそ
れを形成しうるカチオン化脂質および薬物担体を提供す
ることである。Therefore, it is an object of the present invention to provide a drug carrier capable of efficiently and safely transfecting a nucleic acid, a polynucleotide, a gene and its analog into cells, and a cationized lipid capable of forming the drug carrier. . It is also an object of the present invention to provide drug carriers that effectively deliver drugs, peptides and proteins to the site of interest, and cationized lipids and drug carriers that can form them.
【０００６】[0006]
（１）下記一般式１で示されるピペリジン誘導体。 (1) A piperidine derivative represented by the following general formula 1.
【０００７】[0007]
【化３】 Embedded image
【０００８】式１中、Ｒ1は、水素、炭素数１〜８のア
ルキル基またはアルケニル基であり、Ｒ2及びＲ3は、同
一または異なって、水素（ただし、Ｒ2及びＲ3が共に水
素の場合は除く）、炭素数１〜２５のアルキル基または
アルケニル基であり、Ｒ4は、水素、炭素数１〜８のア
ルキル基またはアルケニル基、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ
−であり、ｍは、０または１であり、ｎは、０または１
〜１０の整数を示す。また分子内に不斉炭素が存在する
場合、その化合物はラセミ体、光学活性体のいずれでも
良い。In formula 1, R 1 is hydrogen, an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, R 2 and R 3 are the same or different, and hydrogen (provided that R 2 and R 3 are both Hydrogen is excluded), an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 25 carbon atoms, R 4 is hydrogen, an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, and X is —O— or —S.
-, M is 0 or 1 and n is 0 or 1
And an integer of 10 to 10. When an asymmetric carbon is present in the molecule, the compound may be racemic or optically active.
【０００９】（２）下記一般式２で示されるピペリジン
誘導体。(2) A piperidine derivative represented by the following general formula 2.
【００１０】[0010]
【化４】 Embedded image
【００１１】式２中、Ｒ1及びＲ5は、同一または異なっ
て、炭素数１〜８のアルキル基またはアルケニル基であ
り、Ｒ2及びＲ3は、同一または異なって、水素（ただ
し、Ｒ2及びＲ3が共に水素の場合は除く）、炭素数１〜
２５のアルキル基またはアルケニル基であり、Ｒ4は、
水素、炭素数１〜８のアルキル基またはアルケニル基、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ｍは、０または１で
あり、ｎは、０または１〜１０の整数を示す。また分子
内に不斉炭素が存在する場合、その化合物はラセミ体、
光学活性体のいずれでも良い。In the formula 2, R 1 and R 5 are the same or different and are an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, and R 2 and R 3 are the same or different and are hydrogen (provided that R 2 and R 3 are both hydrogen), carbon number 1 to
25 is an alkyl group or an alkenyl group, and R 4 is
Hydrogen, an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms,
X is -O- or -S-, m is 0 or 1, and n is 0 or an integer of 1-10. When an asymmetric carbon is present in the molecule, the compound is racemic,
Any of optically active substances may be used.
【００１２】（３）上記（１）乃至（２）に記載のピペ
リジン誘導体を構成成分とする薬物担体。 （４）前記薬物担体に診断および／または治療するため
の薬物を封入してなる上記（３）に記載の薬物担体。 （５）前記担体の径が０.０２〜２５０μｍである微小
粒子よりなる上記（３）乃至（４）に記載の薬物担体。 （６）前記担体が巨大分子、微集合体、微粒子、微小
球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのうちの
少なくとも一つから構成される上記（３）乃至（５）に
記載の薬物担体。(3) A drug carrier containing the piperidine derivative described in (1) or (2) above as a constituent. (4) The drug carrier according to (3), wherein the drug carrier is encapsulated with a drug for diagnosis and / or treatment. (5) The drug carrier according to the above (3) to (4), which comprises fine particles having a diameter of 0.02 to 250 μm. (6) The drug carrier according to the above (3) to (5), wherein the carrier comprises at least one of macromolecules, microaggregates, fine particles, microspheres, nanospheres, liposomes and emulsions.
【００１３】（７）前記担体がリン脂質あるいはその誘
導体、および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその
誘導体、および／または安定化剤、および／または酸化
防止剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する
上記（３）乃至（６）に記載の薬物担体。 （８）前記診断および／または治療するための薬物が、
核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体であ
る上記（３）乃至（７）に記載の薬物担体。 （９）前記診断および／または治療するための薬物が、
抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、酵素阻害剤、抗生物質、抗
酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、アンジオテ
ンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗
剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害
剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮細
胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メ
サンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、
免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤あるいはラジカ
ルスカベンチャーである上記（３）乃至（７）に記載の
薬物担体。(7) The carrier comprises a phospholipid or its derivative, and / or a lipid other than the phospholipid or its derivative, and / or a stabilizer, and / or an antioxidant, and / or another surface-modifying agent. The drug carrier according to any one of (3) to (6) above, which is contained. (8) The drug for diagnosing and / or treating is
The drug carrier according to any of (3) to (7) above, which is a nucleic acid, a polynucleotide, a gene, or an analog thereof. (9) The drug for diagnosis and / or treatment is:
Anti-inflammatory agent, anti-cancer agent, enzyme agent, enzyme inhibitor, antibiotic, antioxidant, lipid uptake inhibitor, hormone agent, angiotensin converting enzyme inhibitor, angiotensin receptor antagonist, smooth muscle cell proliferation / migration inhibitor, Platelet aggregation inhibitor, chemical mediator release inhibitor, vascular endothelial cell growth or inhibitor, aldose reductase inhibitor, mesangial cell growth inhibitor, lipoxygenase inhibitor,
The drug carrier according to the above (3) to (7), which is an immunosuppressant, an immunostimulant, an antiviral agent or a radical scavenger.
【００１４】（１０）前記診断および／または治療する
ための薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体
である上記（３）乃至（７）に記載の薬物担体。 （１１）前記診断および／または治療するための薬物
が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘導体
である上記（３）乃至（７）に記載の薬物担体。 （１２）前記診断および／または治療するための薬物
が、タンパク質またはペプチドである上記（３）乃至
（７）に記載の薬物担体。 （１３）前記診断および／または治療するための薬物
が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核
磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である上記
（３）乃至（７）に記載の薬物担体。(10) The drug carrier according to the above (3) to (7), wherein the drug for diagnosis and / or treatment is glycosaminoglycan and its derivative. (11) The drug carrier according to the above (3) to (7), wherein the drug for diagnosing and / or treating is an oligo and / or a polysaccharide, and a derivative thereof. (12) The drug carrier according to the above (3) to (7), wherein the drug for diagnosis and / or treatment is a protein or peptide. (13) The drug for diagnosing and / or treating is various in-vivo diagnostic agents such as an X-ray contrast agent, a radioisotope-labeled nuclear medicine diagnostic agent, and a diagnostic agent for nuclear magnetic resonance diagnosis. The drug carrier according to 7).
【００１５】[0015]
【発明の実施の形態】本発明の化合物は、いずれも新規
化合物であり、一般式（１）で表される化合物は下記一
般式（３）で表されるカルボン酸誘導体に、カルボン酸
活性化剤を反応させてカルボキシル基における反応性誘
導体に導き、ついで、下記一般式（４）で表されるアミ
ン誘導体と反応させることによって製造することができ
る。また必要に応じ公知の方法により保護基を脱離させ
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The compounds of the present invention are all novel compounds, and the compound represented by the general formula (1) is converted into a carboxylic acid derivative represented by the following general formula (3) by carboxylic acid activation. It can be produced by reacting an agent to give a reactive derivative at a carboxyl group and then reacting it with an amine derivative represented by the following general formula (4). If necessary, the protecting group is removed by a known method.
【００１６】[0016]
【化５】 Embedded image
【００１７】式３中、Ｒ1は、水素、炭素数１〜８のア
ルキル基またはアルケニル基、適当な保護基（例えばベ
ンジルオキシカルボニル基）であり、Ｒ4は、水素、炭
素数１〜８のアルキル基またはアルケニル基、Ｘは、−
Ｏ−または−Ｓ−であり、ｍは、０または１であり、ｎ
は、０または１〜１０の整数を示す。In the formula 3, R 1 is hydrogen, an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, a suitable protecting group (for example, a benzyloxycarbonyl group), and R 4 is hydrogen or 1 to 8 carbon atoms. Is an alkyl group or an alkenyl group, X is-
O- or -S-, m is 0 or 1, and n
Represents 0 or an integer of 1 to 10.
【００１８】[0018]
【化６】 [Chemical 6]
【００１９】式４中、Ｒ2及びＲ3は、同一または異なっ
て、水素（ただしＲ2及びＲ3が共に水素の場合は除
く）、炭素数１〜２５のアルキル基またはアルケニル基
を示す。In the formula 4, R 2 and R 3 are the same or different and each represents hydrogen (except when both R 2 and R 3 are hydrogen), an alkyl group having 1 to 25 carbon atoms or an alkenyl group.
【００２０】カルボン酸誘導体（３）とカルボン酸活性
化剤との反応において、カルボン酸活性化剤としては、
例えば塩化チオニル、五塩化リン、クロロギ酸エステル
（クロロギ酸メチル、クロロギ酸エチル）、塩化オキサ
リル、カルボジイミド類（例えば、Ｎ,Ｎ′−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳ
Ｃ））、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリ
ス（ジメチルアミノ）−ホスホニウム ヘキサフルオロ
ホスフェート（ＢＯＰ）などがあげられるが、カルボジ
イミド類とＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、４−ジ
メチルアミノピリジンまたはヒドロキシコハク酸イミド
を併用してもよい。この反応は通常、例えば塩化メチレ
ン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テトラ
ヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジメチルエーテ
ル、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエ
ーテル類、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ,Ｎ−ジメ
チルアセトアミドまたはこれらの混合溶媒などの存在下
に行われる。反応温度は通常−１０℃〜５０℃である。In the reaction between the carboxylic acid derivative (3) and the carboxylic acid activator, the carboxylic acid activator is
For example, thionyl chloride, phosphorus pentachloride, chloroformate (methyl chloroformate, ethyl chloroformate), oxalyl chloride, carbodiimides (eg, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1-ethyl-3-
(3-Dimethylaminopropyl) carbodiimide (WS
C)), benzotriazol-1-yl-oxy-tris (dimethylamino) -phosphonium hexafluorophosphate (BOP), and the like, including carbodiimides and N-hydroxybenzotriazole, 4-dimethylaminopyridine or hydroxysuccinic acid. An imide may be used in combination. This reaction is usually carried out by using halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, ethers such as tetrahydrofuran (THF), dioxane, dimethyl ether, diethyl ether and isopropyl ether, N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide. Alternatively, it is carried out in the presence of a mixed solvent thereof. The reaction temperature is usually -10 ° C to 50 ° C.
【００２１】この反応において、カルボン酸活性化剤と
して、塩化チオニル、塩化オキサリルまたは五塩化リン
を用いた場合は反応性誘導体として酸ハロゲン化物が得
られ、カルボン酸活性化剤としてクロロギ酸エステルを
用いた場合には反応性誘導体とした混合酸無水物が得ら
れ、またカルボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を
用いた場合には反応性誘導体として活性エステルが得ら
れる。In this reaction, when thionyl chloride, oxalyl chloride or phosphorus pentachloride is used as the carboxylic acid activator, an acid halide is obtained as a reactive derivative, and chloroformic acid ester is used as the carboxylic acid activator. In that case, a mixed acid anhydride as a reactive derivative is obtained, and when a carbodiimide is used as a carboxylic acid activator, an active ester is obtained as a reactive derivative.
【００２２】カルボン酸誘導体（３）のカルボキシル基
における反応性誘導体とアミン誘導体（４）との反応
は、該反応誘導体が酸ハロゲン化物である場合は例えば
塩化メチレン、テトラヒドロフラン、アセトンなどの溶
媒中、脱酸剤（ピリジン、トリエチルアミン、炭酸カリ
ウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウムなど）の
存在下に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度
は−５０℃〜１００℃、好ましくは−１０℃〜３０℃で
ある。該反応性誘導体が活性エステルまたは混合酸無水
物である場合はカルボン酸誘導体（３）のカルボン酸活
性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中で行うこと
ができる。この場合の反応温度は通常０〜３０℃で反応
時間は通常１〜５時間である。When the reactive derivative at the carboxyl group of the carboxylic acid derivative (3) is reacted with the amine derivative (4), when the reactive derivative is an acid halide, for example, in a solvent such as methylene chloride, tetrahydrofuran or acetone, It is carried out under anhydrous or hydrous conditions in the presence of a deoxidizing agent (pyridine, triethylamine, potassium carbonate, potassium hydrogen carbonate, sodium hydrogen carbonate, etc.). The reaction temperature is -50 ° C to 100 ° C, preferably -10 ° C to 30 ° C. When the reactive derivative is an active ester or a mixed acid anhydride, it can be carried out in a solvent similar to the solvent used in the reaction of the carboxylic acid derivative (3) with the carboxylic acid activator. In this case, the reaction temperature is usually 0 to 30 ° C., and the reaction time is usually 1 to 5 hours.
【００２３】また、一般式（２）で示される化合物は、
一般式（１）で示される化合物と同様にカルボン酸誘導
体（５）とアミン誘導（４）を反応させることにより製
造できる。または、一般式（１）で示される化合物を公
知の方法に従い、アルキル化またはアルケニル化するこ
とにより製造することができる。Further, the compound represented by the general formula (2) is
It can be produced by reacting a carboxylic acid derivative (5) with an amine derivative (4) in the same manner as the compound represented by the general formula (1). Alternatively, it can be produced by alkylating or alkenylating the compound represented by the general formula (1) according to a known method.
【００２４】[0024]
【化７】 Embedded image
【００２５】式５中、Ｒ1及びＲ5は、同一または異なっ
て、炭素数１〜８のアルキル基またはアルケニル基であ
り、Ｒ4は、水素、炭素数１〜８のアルキル基またはア
ルケニル基、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ｍは、
０または１であり、ｎは、０または１〜１０の整数を示
す。In the formula 5, R 1 and R 5 are the same or different and each is an alkyl group or alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, and R 4 is hydrogen, an alkyl group or alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms. , X is —O— or —S—, and m is
0 or 1, and n represents 0 or an integer of 1 to 10.
【００２６】このように製造されるピペリジン誘導体
（１）および（２）は、自体公知の分離、精製手段（例
えば、クロマトグラフィー、再結晶）などにより単離採
取することができる。The piperidine derivatives (1) and (2) thus produced can be isolated and collected by a separation / purification means known per se (eg, chromatography, recrystallization) and the like.
【００２７】本発明の担体は、粒径が０.０２〜２５０
μｍ、とりわけ０.０５〜０.４μｍの大きさが好まし
い。また、その構造は様々な形態が考えられ、限定する
必要はないが、特にその内部に薬物を高濃度封入するこ
とのできる潜在的機能を有する、巨大分子、微集合体、
微粒子、微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジ
ョンのうちより少なくとも一つ以上からなることが最も
望ましい。The carrier of the present invention has a particle size of 0.02 to 250.
The size is preferably μm, especially 0.05 to 0.4 μm. Further, its structure may have various forms, and it is not necessary to limit the structure, but in particular, a macromolecule, a microaggregate, or a macromolecule having a potential function capable of encapsulating a drug therein at a high concentration,
Most preferably, it comprises at least one or more of fine particles, microspheres, nanospheres, liposomes and emulsions.
【００２８】本発明において、薬物担体の構成成分とし
ては、上記の形態を形成できるものであれば特にその配
合に限定する必要はないが、その安全性や、生体内にお
いて安定性を考慮すると、リン脂質あるいはその誘導
体、リン脂質以外の脂質あるいはその誘導体、または安
定化剤、酸化防止剤、その他の表面修飾剤の配合が望ま
しい。In the present invention, the constituents of the drug carrier are not particularly limited to the composition as long as they can form the above-mentioned form, but considering their safety and stability in vivo, It is desirable to add a phospholipid or its derivative, a lipid other than phospholipid or its derivative, or a stabilizer, an antioxidant and other surface modifiers.
【００２９】リン脂質としては、ホスファチジルコリン
（＝レシチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファ
チジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジル
イノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等
の天然あるいは合成のリン脂質、またはこれらを常法に
したがって水素添加したもの等を挙げることができる。As the phospholipid, natural or synthetic phospholipids such as phosphatidylcholine (= lecithin), phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, sphingomyelin, and cardioribine, or these are usually used. Examples thereof include those hydrogenated according to the method.
【００３０】安定化剤としては、膜流動性を低下させる
コレステロールなどのステロール、あるいはグリセロー
ル、シュクロースなどの糖類が挙げられる。酸化防止剤
としては、トコフェロール同族体すなわちビタミンＥな
どが挙げられる。トコフェロールには、α、β、γ、δ
の４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも
使用できる。Examples of the stabilizer include sterols such as cholesterol, which reduce membrane fluidity, and sugars such as glycerol and sucrose. Antioxidants include tocopherol homologs, ie, vitamin E and the like. Tocopherol includes α, β, γ, δ
There are four isomers, but any of them can be used in the present invention.
【００３１】その他の表面修飾剤としては、親水性高分
子やグルクロン酸、シアル酸、デキストランなどの水溶
性多糖類の誘導体が挙げられる。前記親水性高分子とし
ては、ポリエチレングリコール、デキストラン、プルラ
ン、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無
水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マ
レイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸、アミロー
ス、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキ
ストリン、ペクチン、カラギーナンなどが挙げられる。
その中でもポリエチレングリコールは血中滞留性を向上
させる効果が顕著である。Other surface modifiers include hydrophilic polymers and derivatives of water-soluble polysaccharides such as glucuronic acid, sialic acid and dextran. Examples of the hydrophilic polymer include polyethylene glycol, dextran, pullulan, ficoll, polyvinyl alcohol, styrene-maleic anhydride alternating copolymer, divinyl ether-maleic anhydride alternating copolymer, synthetic polyamino acid, amylose, amylopectin, chitosan. , Mannan, cyclodextrin, pectin, carrageenan and the like.
Among them, polyethylene glycol has a remarkable effect of improving blood retention.
【００３２】また前記親水性高分子は、長鎖脂肪族アル
コール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、
またはグリセリン脂肪酸エステル等の疎水性化合物と結
合させた誘導体を用いることによって、疎水性化合物部
位を薬物担体（例えばリポソーム）の膜へ安定に挿入す
ることができる。そのことにより、薬物担体表面に親水
性高分子を存在させることができる。本発明において具
体的に用いることができる親水性高分子誘導体として
は、ポリエチレングリコール−フォスファチジルエタノ
ールアミン等が挙げられる。The hydrophilic polymer is a long chain aliphatic alcohol, sterol, polyoxypropylene alkyl,
Alternatively, by using a derivative bonded to a hydrophobic compound such as glycerin fatty acid ester, the hydrophobic compound site can be stably inserted into the membrane of a drug carrier (for example, a liposome). Thereby, the hydrophilic polymer can be present on the surface of the drug carrier. Examples of the hydrophilic polymer derivative that can be specifically used in the present invention include polyethylene glycol-phosphatidylethanolamine and the like.
【００３３】本発明において、薬物担体に封入する薬剤
としては、診断および／または治療の目的に応じて薬学
的に許容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または
診断用物質を用いることができる。封入する薬剤の性質
としては、基本的にはどの物質においても問題ないが、
担体の表面が陽電荷を持つ特徴から、電気的に中性ある
いはアニオン性である物質の方が高封入率が期待でき
る。In the present invention, as the drug encapsulated in the drug carrier, a pharmaceutically acceptable pharmacologically active substance, physiologically active substance or diagnostic substance can be used according to the purpose of diagnosis and / or treatment. . As for the nature of the drug to be encapsulated, basically any substance is acceptable,
Since the surface of the carrier has a positive charge, an electrically neutral or anionic substance can be expected to have a higher encapsulation rate.
【００３４】封入する治療するための薬剤の種類として
は、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定されるも
のではない。具体的には、核酸、ポリヌクレオチド、遺
伝子およびその類縁体、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、抗
生物質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、
アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受
容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝
集阻害剤、ケミカルメデイエーターの遊離阻害剤、血管
内皮細胞の増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素
阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナー
ゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、ラ
ジカルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド等が挙げ
られる。The type of the therapeutic drug to be encapsulated is not particularly limited as long as it does not impair the formation of the drug carrier. Specifically, nucleic acids, polynucleotides, genes and their analogs, anti-inflammatory agents, anticancer agents, enzyme agents, antibiotics, antioxidants, lipid uptake inhibitors, hormonal agents,
Angiotensin-converting enzyme inhibitor, Angiotensin receptor antagonist, Smooth muscle cell proliferation / migration inhibitor, Platelet aggregation inhibitor, Chemical mediator release inhibitor, Vascular endothelial cell growth promoter or inhibitor, Aldose reductase inhibitor , Mesangial cell growth inhibitors, lipoxygenase inhibitors, immunosuppressants, immunostimulants, antiviral agents, radical scavengers, proteins, peptides and the like.
【００３５】また、封入する診断するための薬剤の種類
としては、薬物担体の形成を損ねないがぎり特に限定さ
れるものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、放射性同
位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬等が
挙げられる。The type of drug to be encapsulated for diagnosis is not particularly limited as long as it does not impair the formation of the drug carrier. Specific examples include X-ray contrast agents, radioisotope-labeled nuclear medicine diagnostic agents, and nuclear magnetic resonance diagnostic agents.
【００３６】本発明の薬物担体は常法によって容易に得
ることができるが、その一例を以下に示す。フラスコ内
に一般式（１）乃至（２）で示されるピペリジン誘導体
およびリン脂質等の他の担体構成成分を、クロロホルム
等の有機溶媒により混合し、有機溶媒を留去後真空乾燥
することによりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次
に、当該フラスコ内に薬物を加え、激しく攪拌すること
により、リポソーム分散液を得る。得られたリポソーム
分散液を遠心分離し、上清をデカンテーションし封入さ
れなかった薬物を除去することにより、薬物担体を分散
液として得ることができる。また、上記の各構成成分を
混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させることに
より得ることもできる。The drug carrier of the present invention can be easily obtained by a conventional method, one example of which is shown below. The flask is prepared by mixing the piperidine derivative represented by the general formulas (1) and (2) and other carrier constituents such as phospholipid in an flask with an organic solvent such as chloroform, distilling off the organic solvent and vacuum drying. A thin film is formed on the inner wall. Next, a drug is added to the flask and vigorously stirred to obtain a liposome dispersion liquid. The drug carrier can be obtained as a dispersion by centrifuging the obtained liposome dispersion and decanting the supernatant to remove the drug not encapsulated. It can also be obtained by mixing the above-mentioned respective components and discharging the mixture under high pressure using a high-pressure discharge type emulsifier.
【００３７】[0037]
【実施例】次に実施例、試験例を挙げて本発明をさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に
限定されるものではない。 （実施例１） Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピペリジン−４−イル
−オキシ）アセトアミドの合成 １−（ベンジルオキシカルボニル）−４−（カルボキシ
メトキシ）ピペリジン１.１７ｇ、ジオクタデシルアミ
ン２.０９ｇとベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ
−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフル
オロホスフェ−ト１.９５ｇのＮ,Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）（２０ｍｌ）−塩化メチレン（２０ml）
溶液に、氷冷下、トリエチルアミン１.２１ｇを加え、
室温で一夜攪拌した。水を加え酢酸エチルで抽出し、有
機層を順に希酸、水、希アルカリ、水で洗い、無水硫酸
マグネウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。残渣をシリカ
ゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム溶出画分
より Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１−（ベンジルオ
キシカルボニル）ピペリジン−４−イル−オキシ）アセ
トアミド３.１４ｇを得た（収率１００％、油状物
質）。The present invention will be described in more detail with reference to examples and test examples, but the present invention is not limited to these examples and test examples. Example 1 Synthesis of N, N-Dioctadecyl-2- (piperidin-4-yl-oxy) acetamide 1 .- (Benzyloxycarbonyl) -4- (carboxymethoxy) piperidine 1.17 g, dioctadecylamine 2. 09 g and benzotriazol-1-yl-oxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate 1.95 g N, N-dimethylformamide (DMF) (20 ml) -methylene chloride (20 ml)
1.21 g of triethylamine was added to the solution under ice cooling,
Stirred overnight at room temperature. Water was added and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with dilute acid, water, dilute alkali and water in that order, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel chromatography, and 3.14 g of N, N-dioctadecyl-2- (1- (benzyloxycarbonyl) piperidin-4-yl-oxy) acetamide was obtained from the fraction eluted with chloroform (yield 100 %, Oily substance).
【００３８】水素雰囲気下、 Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−
２−（１−（ベンジルオキシカルボニル）ピペリジン−
４−イル−オキシ）−アセトアミド１.８９ｇ、１０％
パラジウム炭素５００mgのエタノール（１５ml）懸濁液
を一夜攪拌した。触媒を濾過後、濾液を減圧濃縮した。
残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、５％メタ
ノール−クロロホルム溶出画分よりＮ,Ｎ−ジオクタデ
シル−２−（ピペリジン−４−イル−オキシ）アセトア
ミド５４０mgを得た（収率３４％、無色結晶、融点８９
−９０℃）。このものの機器分析デ−タは、下記の式
（６）の構造を支持する。Under a hydrogen atmosphere, N, N-dioctadecyl-
2- (1- (benzyloxycarbonyl) piperidine-
4-yl-oxy) -acetamide 1.89 g, 10%
A suspension of 500 mg of palladium on carbon in ethanol (15 ml) was stirred overnight. After filtering the catalyst, the filtrate was concentrated under reduced pressure.
The residue was subjected to silica gel chromatography, and 540 mg of N, N-dioctadecyl-2- (piperidin-4-yl-oxy) acetamide was obtained from the fraction eluted with 5% methanol-chloroform (yield 34%, colorless crystals, Melting point 89
-90 ° C). The instrumental analysis data of this product supports the structure of the following formula (6).
【００３９】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ppm）：４.
１５（２Ｈ,ｓ），３.８２−３.７６（１Ｈ,ｍ），３.
３９−３.０８（８Ｈ,ｍ），２.２１−１.９９（４Ｈ,
ｍ），１.５８−１.４６（４Ｈ,ｍ），１.３４−１.１
９（６０Ｈ,ｍ），０.８８（６Ｈ,ｔ,Ｊ＝６.８０Hz） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ） ６６４（Ｍ＋１） 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ (ppm): 4.
15 (2H, s), 3.82-3.76 (1H, m), 3.
39-3.08 (8H, m), 2.21-1.99 (4H,
m), 1.58-1.46 (4H, m), 1.34-1.1.
9 (60H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.80Hz) FAB-MS (m / z) 664 (M + 1)
【００４０】[0040]
【化８】 Embedded image
【００４１】（実施例２） Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１−メチルピペリジン
−４−イル−オキシ）アセトアミドの合成 Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（ピペリジン−４−イル
−オキシ）アセトアミド１.３３ｇ、ホルマリン（３７
％）１７９mgとギ酸１mlの混合溶液を９０℃で２時間攪
拌した。希酸を加え、減圧濃縮し、希アルカリを加え塩
化メチレンで抽出し、有機層を順に希アルカリ、水で洗
い、無水硫酸マグネウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。
残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、５％メタ
ノール−クロロホルム溶出画分よりＮ,Ｎ−ジオクタデ
シル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル−オキ
シ）アセトアミド１.２４ｇを得た（収率９２％、無色
結晶、融点５０℃）。このものの機器分析デ−タは、下
記の式（７）の構造を支持する。(Example 2) Synthesis of N, N-dioctadecyl-2- (1-methylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide N, N-dioctadecyl-2- (piperidin-4-yl-oxy) Acetamide 1.33 g, formalin (37
%) 179 mg and formic acid 1 ml were stirred at 90 ° C. for 2 hours. Dilute acid was added, the mixture was concentrated under reduced pressure, diluted alkali was added, and the mixture was extracted with methylene chloride. The organic layer was washed successively with diluted alkali and water, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
The residue was subjected to silica gel chromatography, and 1.24 g of N, N-dioctadecyl-2- (1-methylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide was obtained from the fraction eluted with 5% methanol-chloroform (yield 92 %, Colorless crystals, melting point 50 ° C.). The instrumental analysis data of this product supports the structure of the following formula (7).
【００４２】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ppm）：４.
１４（２Ｈ,ｓ），３.５２−３.４３（１Ｈ,ｍ），３.
２８（２Ｈ,ｔ,Ｊ＝８.００Hz），３.２３（２Ｈ,ｔ,Ｊ
＝８.００Hz），２.８０−２.７１（２Ｈ,ｍ），２.３
７−２.１８（２Ｈ,ｍ），２.３１（３Ｈ,ｓ），２.０
３−１.９３（２Ｈ,ｍ），１.７７−１.６４（２Ｈ,
ｍ），１.６０−１.４６（４Ｈ,ｍ），１.３１−１.．
２３（６０Ｈ,ｍ)，０.８８（６Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.４Hz） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ） ６７８（Ｍ＋１） 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ (ppm): 4.
14 (2H, s), 3.52-3.43 (1H, m), 3.
28 (2H, t, J = 8.0 Hz), 3.23 (2H, t, J
= 8.00 Hz), 2.80-2.71 (2H, m), 2.3
7-2.18 (2H, m), 2.31 (3H, s), 2.0
3-1.93 (2H, m), 1.77-1.64 (2H,
m), 1.60-1.46 (4H, m), 1.31-1.
23 (60H, m), 0.88 (6H, t, J = 7.4Hz) FAB-MS (m / z) 678 (M + 1)
【００４３】[0043]
【化９】 Embedded image
【００４４】（実施例３） Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１,１−ジメチルピペリ
ジン−４−イル−オキシ）アセトアミドの合成 Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１−メチルピペリジン
−４−イル−オキシ）アセトアミド１.２４ｇの塩化メ
チレン（２０ml）溶液に、ヨウ化メチル７７９mgを加
え、一夜還流攪拌した。反応溶液を減圧留去した。残渣
をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、５％メタノー
ル−クロロホルム溶出画分よりＮ,Ｎ−ジオクタデシル
−２−（１,１−ジメチルピペリジン−４−イル−オキ
シ）アセトアミド７３０mgを得た（収率４９％、無色結
晶、融点２１４−２１７℃、再結晶アセトニトリル）。
このものの機器分析データは、下記の式（８）の構造を
支持する。Example 3 Synthesis of N, N-dioctadecyl-2- (1,1-dimethylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide N, N-Dioctadecyl-2- (1-methylpiperidine-4) To a solution of 1.24 g of -yl-oxy) acetamide in methylene chloride (20 ml) was added 779 mg of methyl iodide, and the mixture was stirred under reflux overnight. The reaction solution was distilled off under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel chromatography, and 750 mg of N, N-dioctadecyl-2- (1,1-dimethylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide was obtained from the fraction eluted with 5% methanol-chloroform (yield 49 %, Colorless crystals, melting point 214-217 ° C., recrystallized acetonitrile).
Instrumental analysis data for this one supports the structure of equation (8) below.
【００４５】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（ppm）：４.
２２（２Ｈ,ｓ），３.９３−３.８８（１Ｈ,ｍ），３.
８３−３.６３（２Ｈ,ｍ），３.５５（３Ｈ,ｓ），３.
４３（３Ｈ,ｓ），３.２７（２Ｈ,ｔ,Ｊ＝８.０Hz），
３.１０（２Ｈ,ｔ,Ｊ＝８.０Hz），２.３４−２.２２
（２Ｈ,ｍ），２.１５−２.０３（２Ｈ,ｍ），１.６０
−１.４６（４Ｈ,ｍ），１.３３−１.１９（６０Ｈ,
ｍ），０.８８（３Ｈ,ｔ,Ｊ＝７.８Hz） 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ (ppm): 4.
22 (2H, s), 3.93-3.88 (1H, m), 3.
83-3.63 (2H, m), 3.55 (3H, s), 3.
43 (3H, s), 3.27 (2H, t, J = 8.0Hz),
3.10 (2H, t, J = 8.0Hz), 2.34-2.22
(2H, m), 2.15-2.03 (2H, m), 1.60
-1.46 (4H, m), 1.33-1.19 (60H,
m), 0.88 (3H, t, J = 7.8Hz)
【００４６】[0046]
【化１０】 Embedded image
【００４７】（実施例４）実施例１で合成したＮ,Ｎ−
ジオクタデシル−２−（ピペリジン−４−イル−オキ
シ）アセトアミドを３μＭ、コレステロールを６μＭ、
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）を２
１μＭを容量１０mlのナス型フラスコに秤りとり１mlの
クロロホルムにて完全に溶解する。エバポレータにより
クロロホルムを減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜を形
成した。ついで０.５μＭのカルセインを含む１０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液１mlをフラスコに加え、激しく
浸透攪拌することにより、リポソーム（ＭＬＶ）分散液
を得た。Example 4 N, N-synthesized in Example 1
Dioctadecyl-2- (piperidin-4-yl-oxy) acetamide 3 μM, cholesterol 6 μM,
Dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) 2
1 μM is weighed in a round-bottomed flask having a volume of 10 ml and completely dissolved with 1 ml of chloroform. Chloroform was distilled off under reduced pressure using an evaporator to form a lipid thin film on the inner wall of the flask. Then 10 mM containing 0.5 μM calcein
A liposome (MLV) dispersion was obtained by adding 1 ml of Tris-HCl buffer to the flask and vigorously osmotic stirring.
【００４８】（実施例５）実施例４と同様にして、実施
例２で合成したＮ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１−メ
チルピペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミド３μ
Ｍ、コレステロール６μＭ、ジパルミトイルホスファチ
ジルコリン（ＤＰＰＣ）２１μＭおよびカルセインを含
むリポソーム分散液を得た。Example 5 In the same manner as in Example 4, N, N-dioctadecyl-2- (1-methylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide 3 μm synthesized in Example 2 was used.
A liposome dispersion liquid containing M, cholesterol 6 μM, dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) 21 μM and calcein was obtained.
【００４９】（実施例６）実施例４と同様にして、実施
例３で合成したＮ,Ｎ−ジオクタデシル−２−（１−ジ
メチルピペリジン−４−イル−オキシ）アセトアミド３
μＭ、コレステロール６μＭ、ジパルミトイルホスファ
チジルコリン（ＤＰＰＣ）２１μＭおよびカルセインを
含むリポソーム分散液を得た。Example 6 In the same manner as in Example 4, N, N-dioctadecyl-2- (1-dimethylpiperidin-4-yl-oxy) acetamide 3 synthesized in Example 3 was used.
A liposome dispersion liquid containing μM, cholesterol 6 μM, dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) 21 μM and calcein was obtained.
【００５０】（試験例１） カルセインの封入率の測定 カルセインのリポソームへの封入率は、次のように求め
た。５０倍の希釈した調製したリポソーム懸濁液４０μ
ｌを２.０mlの１０ｍＭＴｒｉｓ―ＨＣｌ緩衝液に添加
し、蛍光強度を測定する（励起波長４９０nm，蛍光波長
５３０nm）。この時の蛍光強度をＦｔとする。つぎに１
０mMＣｏＣｌ2水溶液を２０μｌ添加しリポソームに封
入されなかったカルセインを消光させ、リポソームの内
部に封入されたカルセインの蛍光を測定する。この時の
蛍光強度をＦｉｎとする。さらに２０％ＴｒｉｔｏｎＸ
―１００溶液を２０μｌ添加することにより、リポソー
ムを破壊し、すべてのカルセインをＣｏ2+と結合させ消
光させる。この時の蛍光強度を、Ｆｑとする。リポソー
ムの保持効率は以下の式にて計算される。(Test Example 1) Measurement of encapsulation rate of calcein The encapsulation rate of calcein in liposomes was determined as follows. Prepared liposome suspension 40μ diluted 50 times
1 is added to 2.0 ml of 10 mM Tris-HCl buffer, and the fluorescence intensity is measured (excitation wavelength 490 nm, fluorescence wavelength 530 nm). The fluorescence intensity at this time is Ft. Next 1
20 μl of 0 mM CoCl 2 aqueous solution is added to quench the calcein not encapsulated in the liposome, and the fluorescence of calcein encapsulated inside the liposome is measured. The fluorescence intensity at this time is Fin. 20% more TritonX
The liposomes are destroyed by adding 20 μl of -100 solution, and all calcein is bound to Co 2+ and quenched. The fluorescence intensity at this time is defined as Fq. The retention efficiency of liposomes is calculated by the following formula.
【００５１】保持効率（％）＝（Ｆｉｎ−Ｆｑ×ｒ）／
（Ｆｔ−Ｆｑ× ｒ）×１００Retention efficiency (%) = (Fin−Fq × r) /
(Ft-Fq * r) * 100
【００５２】式中のｒは、リポソーム懸濁液および薬物
の添加に伴う反応液の体積変化を補正した値で本実験で
はｒ＝（２.０＋０.０４＋０.０２＋０.０２）／２.０
＝１.０４である。結果を表１に示す。In the formula, r is a value corrected for the volume change of the reaction liquid due to the addition of the liposome suspension and the drug, and in this experiment, r = (2.0 + 0.04 + 0.02 + 0.02) /2.0.
= 1.04. The results are shown in Table 1.
【００５３】[0053]
【表１】 [Table 1]
【００５４】（実施例７）実施例１で合成したＮ,Ｎ−
ジオクタデシル−２−（ピペリジン−４−イル−オキ
シ）アセトアミドを１０μＭ、ジラウロイルホスファチ
ジルコリン（ＤＬＰＣ）を２０μＭ、ジオレオイルホス
ファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を２０μＭ秤
りとり、１mlのクロロホルム溶液Ａとする。クロロホル
ム溶液Ａの２０μｌを容量１０mlのナス型フラスコに取
りさらに１mlのクロロホルムを加えた。エバポレータに
よりクロロホルムを減圧留去しフラスコ内壁に脂質薄膜
を形成した。β-galactosodaseの遺伝子を組み込んだプ
ラスミドｐｃＤＮＡ／Ａｍｐ（Invitrogen社）２０μｇ
を溶解した水溶液１mlをフラスコ内に加え、激しく浸透
攪拌することによりＤＮＡ封入リポソームを得た。(Example 7) N, N-synthesized in Example 1
Dioctadecyl-2- (piperidin-4-yl-oxy) acetamide (10 μM), dilauroylphosphatidylcholine (DLPC) (20 μM) and dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) (20 μM) are weighed to obtain 1 ml of chloroform solution A. 20 μl of chloroform solution A was placed in a round-bottomed flask having a volume of 10 ml, and 1 ml of chloroform was added. Chloroform was distilled off under reduced pressure using an evaporator to form a lipid thin film on the inner wall of the flask. 20 μg of plasmid pcDNA / Amp (Invitrogen) incorporating the β-galactosodase gene
1 ml of an aqueous solution in which DNA was dissolved was added to the flask and vigorously agitated to obtain a DNA-encapsulated liposome.
【００５５】（試験例２） 細胞の調製とトランスフェクション 細胞：大日本製薬株式会社より購入した、Ｃｏｓ―１細
胞（ATCC No. CRL-1650）を１０％牛胎児血清（ＦＣ
Ｓ）を含むIscove'ｓ modified Dulbecco's medium（IM
DM）を用いて５％ＣＯ2，９５％Ｏ2，３７℃のインキュ
ベータ中で継代培養した。(Test Example 2) Preparation of cells and transfection Cells: Cos-1 cells (ATCC No. CRL-1650) purchased from Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. were diluted with 10% fetal calf serum (FC).
S) including Iscove's modified Dulbecco's medium (IM
Subculture was carried out in an incubator at 37 ° C. in 5% CO 2 , 95% O 2 , using DM).
【００５６】トランスフェクション：１０％ＦＣＳ Ｉ
ＭＤＭ培地（１ml）を添加した、６穴マルチウェルプレ
ートに約２×１０4のＣｏｓ−１細胞を加え細胞培養を
行った。約２４時間培養後ＦＣＳを含まない新鮮培地と
交換し、０.２μｇのＤＮＡを含むリポソーム懸濁液を
加える。１６時間培養後、１０％ＦＣＳ ＩＭＤＭ培地
にて培地交換し、さらに４８時間培養した。細胞を、ホ
ルムアルデヒドで固定し、β-galactosidaseの基質であ
る、５-bromo-４chloro-３-indolyl-β-galactopyranos
ide（X-gal）を加え、β-galactosidaseを発現した細胞
を同定した。発色した細胞の全体に対する割合は、画像
処理により測定した。結果を表２に示す。Transfection: 10% FCS I
About 2 × 10 4 Cos-1 cells were added to a 6-well multiwell plate to which MDM medium (1 ml) was added, and cell culture was performed. After culturing for about 24 hours, the medium is replaced with a fresh medium without FCS, and a liposome suspension containing 0.2 μg of DNA is added. After culturing for 16 hours, the medium was replaced with 10% FCS IMDM medium, and the cells were further cultivated for 48 hours. Cells are fixed with formaldehyde and 5-bromo-4chloro-3-indolyl-β-galactopyranos, a substrate for β-galactosidase.
Ide (X-gal) was added to identify cells that expressed β-galactosidase. The ratio of the colored cells to the whole was measured by image processing. Table 2 shows the results.
【００５７】[0057]
【表２】 [Table 2]
【００５８】（急性毒性）ＩＣＲ系雄性マウス（５週
齢）を用いて経口および静脈内投与により急性毒性試験
を行った結果、本発明の化合物のＬＤ50はいずれも３２
０mg/kg以上であり有効性に比べて高い安全性が確認さ
れた。(Acute toxicity) An acute toxicity test was carried out by oral and intravenous administration in ICR male mice (5 weeks old). As a result, the LD 50 of the compound of the present invention was 32.
It was 0 mg / kg or more, confirming higher safety than efficacy.
【００５９】[0059]
【発明の効果】上述した通り、本発明により新規ピペリ
ジン誘導体が供給される。本発明のピペリジン誘導体を
構成成分とする薬物担体は、試験例に示されるように、
従来の薬物担体に比べ細胞への薬物の導入効率が高いこ
とが明らかとなった。このような特徴から、薬学的に許
容し得る薬理的活性物質、生理的活性物質または診断用
物質を封入させた本発明の薬物担体は、治療および診断
という目的に対して非常に効果的である。As described above, the novel piperidine derivative is provided by the present invention. The drug carrier containing the piperidine derivative of the present invention as a constituent component, as shown in Test Examples,
It was revealed that the drug introduction efficiency into cells is higher than that of conventional drug carriers. Due to such characteristics, the drug carrier of the present invention encapsulating a pharmaceutically acceptable pharmacologically active substance, physiologically active substance or diagnostic substance is very effective for the purpose of treatment and diagnosis. .
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 9/50 Ａ６１Ｋ 31/70 31/70 31/71 ＡＤＺ 31/71 ＡＤＺ 31/715 31/715 45/00 ＡＢＣ 38/00 ＡＢＤ 38/43 ＡＢＥ 38/55 ＡＢＮ 51/00 ＡＣＢ 45/00 ＡＢＣ ＡＤＮ ＡＢＤ ＡＤＳ ＡＢＥ ＡＤＵ ＡＢＮ ＡＤＹ ＡＣＢ ＡＥＥ ＡＤＮ ＡＥＭ ＡＤＳ ＡＥＮ ＡＤＵ ＡＥＰ ＡＤＹ ＡＥＱ ＡＥＥ 47/22 Ｄ ＡＥＭ Ｃ ＡＥＮ 49/00 Ａ ＡＥＰ Ｃ ＡＥＱ 49/04 Ａ 47/22 Ｃ０７Ｄ 211/34 211/54 49/00 211/62 Ａ６１Ｋ 9/14 Ｇ 49/04 37/02 Ｃ０７Ｄ 211/34 37/48 211/54 37/64 211/62 43/00 //(Ａ６１Ｋ 47/22 49/02 Ａ 47:24） Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Office reference number FI Technical display location A61K 9/50 A61K 31/70 31/70 31/71 ADZ 31/71 ADZ 31/715 31/715 45/00 ABC 38/00 ABD 38/43 ABE 38/55 ABN 51/00 ACB 45/00 ABC ADN ABD ADS ABE ADU ABN ADY ACB AEE ADN AEM ADS AEN ADU AEP ADY A 47 A / A EYE AAD AAE AAD AE AAD AE AAD AAE AAD AEP C AEQ 49/04 A 47/22 C07D 211/34 211/54 49/00 211/62 A61K 9/14 G 49/04 37/02 C07D 211/34 37/48 211/54 37/64 211/62 43/00 // (A61K 47/22 49/02 A 47:24)
Claims (13)
体。 【化１】 式１中、Ｒ1は、水素、炭素数１〜８のアルキル基また
はアルケニル基であり、Ｒ2及びＲ3は、同一または異な
って、水素（ただし、Ｒ2及びＲ3が共に水素の場合は除
く）、炭素数１〜２５のアルキル基またはアルケニル基
であり、Ｒ4は、水素、炭素数１〜８のアルキル基また
はアルケニル基、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり、ｍ
は、０または１であり、ｎは、０または１〜１０の整数
を示す。また分子内に不斉炭素が存在する場合、その化
合物はラセミ体、光学活性体のいずれでも良い。1. A piperidine derivative represented by the following general formula 1. Embedded image In the formula 1, R 1 is hydrogen, an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, R 2 and R 3 are the same or different and are hydrogen (provided that both R 2 and R 3 are hydrogen. Is an alkyl group or alkenyl group having 1 to 25 carbon atoms, R 4 is hydrogen, an alkyl group or alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, X is —O— or —S—, and m
Is 0 or 1, and n is 0 or an integer of 1 to 10. When an asymmetric carbon is present in the molecule, the compound may be racemic or optically active.
体。 【化２】 式２中、Ｒ1及びＲ5は、同一または異なって、炭素数１
〜８のアルキル基またはアルケニル基であり、Ｒ2及び
Ｒ3は、同一または異なって、水素（ただし、Ｒ2及びＲ
3が共に水素の場合は除く）、炭素数１〜２５のアルキ
ル基またはアルケニル基であり、Ｒ4は、水素、炭素数
１〜８のアルキル基またはアルケニル基、Ｘは、−Ｏ−
または−Ｓ−であり、ｍは、０または１であり、ｎは、
０または１〜１０の整数を示す。また分子内に不斉炭素
が存在する場合、その化合物はラセミ体、光学活性体の
いずれでも良い。2. A piperidine derivative represented by the following general formula 2. Embedded image In Formula 2, R 1 and R 5 are the same or different and each has 1 carbon atom.
~ 8 alkyl group or alkenyl group, R 2 and R 3 are the same or different and are hydrogen (provided that R 2 and R 3
3 are both hydrogen), an alkyl group or an alkenyl group having 1 to 25 carbon atoms, R 4 is hydrogen, an alkyl group or alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, and X is —O—
Or -S-, m is 0 or 1, and n is
0 or an integer of 1 to 10 is shown. When an asymmetric carbon is present in the molecule, the compound may be racemic or optically active.
誘導体を構成成分とする薬物担体。3. A drug carrier comprising the piperidine derivative according to claim 1 or 2 as a constituent.
るための薬物を封入してなる請求項３に記載の薬物担
体。4. The drug carrier according to claim 3, wherein the drug carrier is encapsulated with a drug for diagnosis and / or treatment.
る微小粒子よりなる請求項３乃至請求項４に記載の薬物
担体。5. The drug carrier according to claim 3, which comprises fine particles having a diameter of 0.02 to 250 μm.
微小球、ナノ小球、リポソームおよびエマルジョンのう
ちの少なくとも一つから構成される請求項３乃至請求項
５に記載の薬物担体。6. The carrier is a macromolecule, a fine aggregate, a fine particle,
The drug carrier according to claim 3, comprising at least one of a microsphere, a nanosphere, a liposome, and an emulsion.
および／またはリン脂質以外の脂質あるいはその誘導
体、および／または安定化剤、および／または酸化防止
剤、および／またはその他の表面修飾剤を含有する請求
項３乃至請求項６に記載の薬物担体。7. The carrier is phospholipid or a derivative thereof,
7. The drug carrier according to claim 3, further comprising a lipid other than phospholipid or a derivative thereof, and / or a stabilizer, and / or an antioxidant, and / or another surface modifier.
物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁
体である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。8. The drug carrier according to claim 3, wherein the drug for diagnosing and / or treating is a nucleic acid, a polynucleotide, a gene or an analog thereof.
物が、抗炎症剤、抗癌剤、酵素剤、酵素阻害剤、抗生物
質、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、アン
ジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体
拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻
害剤、ケミカルメデイエーターの遊離抑制剤、血管内皮
細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、
メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害
剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤あるいはラ
ジカルスカベンチャーである請求項３乃至請求項７に記
載の薬物担体。9. The drug for diagnosing and / or treating is an anti-inflammatory agent, anti-cancer agent, enzyme agent, enzyme inhibitor, antibiotic, antioxidant, lipid uptake inhibitor, hormone agent, angiotensin converting enzyme inhibitor. , Angiotensin receptor antagonist, smooth muscle cell proliferation / migration inhibitor, platelet aggregation inhibitor, chemical mediator release inhibitor, vascular endothelial cell proliferation or inhibitor, aldose reductase inhibitor,
The drug carrier according to claim 3, which is a mesangial cell growth inhibitor, a lipoxygenase inhibitor, an immunosuppressant, an immunostimulant, an antiviral agent, or a radical scavenger.
薬物が、グリコサミノグリカンおよびその誘導体である
請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。10. The drug carrier according to claim 3, wherein the drug for diagnosis and / or treatment is glycosaminoglycan and a derivative thereof.
薬物が、オリゴおよび／または多糖、およびそれらの誘
導体である請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。11. The drug carrier according to claim 3, wherein the drug for diagnosing and / or treating is an oligo- and / or polysaccharide and a derivative thereof.
薬物が、タンパク質またはペプチドである請求項３乃至
７に記載の薬物担体。12. The drug carrier according to claim 3, wherein the drug for diagnosing and / or treating is a protein or peptide.
薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断
薬、核磁気共鳴診断用診断薬等の各種体内診断薬である
請求項３乃至請求項７に記載の薬物担体。13. The drug for diagnosing and / or treating is various in-vivo diagnostic agents such as X-ray contrast agents, radioisotope-labeled nuclear medicine diagnostic agents, and nuclear magnetic resonance diagnostic diagnostic agents. The drug carrier according to claim 7.
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1996
- 1996-03-29 JP JP07626096A patent/JP3930919B2/en not_active Expired - Fee Related
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| WO2000038736A1 (en) * | 1998-12-24 | 2000-07-06 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Medicinal preparations |
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| WO2001000174A1 (en) * | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Terumo Kabushiki Kaisha | Liposomes |
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