JPH09235221A - Androgen disease treating agent containing diterpene - Google Patents
Androgen disease treating agent containing diterpeneInfo
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- JPH09235221A JPH09235221A JP8043029A JP4302996A JPH09235221A JP H09235221 A JPH09235221 A JP H09235221A JP 8043029 A JP8043029 A JP 8043029A JP 4302996 A JP4302996 A JP 4302996A JP H09235221 A JPH09235221 A JP H09235221A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は請求項１に掲げる化
合物の少なくとも１つを配合する脱毛症、多毛症、ざ瘡
および前立腺肥大、前立腺癌、などのアンドロゲン性疾
患の治療薬に関する。The present invention relates to a therapeutic agent for androgenic diseases such as alopecia, hirsutism, acne and prostatic hyperplasia, prostate cancer, etc., which comprises at least one of the compounds recited in claim 1.
【０００２】[0002]
【従来の技術】５α−ジヒドロテストステロン（ＤＨ
Ｔ）の過剰産生によって、所謂アンドロゲン性疾患−ざ
瘡、脂漏、男性型禿頭症（Ｍａｌｅ ｐａｔｔｅｒｎ
Ｂａｌｄｎｅｓｓ又は男性ホルモン型脱毛症ａｎｄｒｏ
ｇｅｎｅｔｉｃ ａｌｏｐｅｃｉａ）、多毛症、前立腺
肥大、前立腺癌など−が誘発される。このＤＨＴは標的
器官において、５α−レダクターゼにより男性ホルモン
の還元により生成される。従って、この５α−レダクタ
ーゼの活性を疎外する５α−レダクターゼ・インヒビタ
ーによる抗アンドロゲン性疾患治療薬の開発が精力的に
行われている。この５α−レダクターゼ・インヒビター
は大別するとステロイド剤と非ステロイド剤の二種類が
知られている。このうち非ステロイド剤には強力なもの
がなく、実用的にはまだ遠い現状である。ステロイド性
５α−レダクターゼには実用化のすすんでいるものもあ
る。併し、この骨格のものはステロイドホルモンの副作
用をまぬがれえない。このステロイド型の５α−レダク
ターゼインヒビターの重症副作用として感染症、消化性
潰瘍、糖尿病、精神障害、高血圧、離脱症候群、副腎不
全などが、軽傷副作用として満月様顔貌、肥満、座瘡、
多毛、月経異常、浮腫、不眠、骨粗鬆症、血栓症などが
ある。ステロイド療法は臨床効果と副作用が表裏一体と
なっているため医師の管理下でのみ使用され、臨床効果
を示す最小必要量を使用すると共に常に副作用のことを
念頭におかなければならない。2. Description of the Related Art 5α-dihydrotestosterone (DH)
T) Overproduction of so-called androgenic diseases-acne, seborrhea, male pattern baldness (Male pattern)
Baldness or androgenetic alopecia andro
genetic alopecia), hirsutism, prostatic hypertrophy, prostate cancer, etc. are induced. This DHT is produced in the target organ by the reduction of androgens by 5α-reductase. Therefore, the development of anti-androgenic disease therapeutic agents using 5α-reductase inhibitors that alienate the activity of 5α-reductase has been vigorously carried out. This 5α-reductase inhibitor is roughly classified into two types, a steroid drug and a non-steroid drug. Among them, nonsteroidal drugs are not powerful and are still far from practical. Some steroidal 5α-reductases are being put to practical use. However, those with this skeleton cannot survive the side effects of steroid hormones. Severe side effects of this steroid type 5α-reductase inhibitor include infection, peptic ulcer, diabetes, psychiatric disorders, hypertension, withdrawal syndrome, adrenal insufficiency, etc.
There are hirsutism, menstrual abnormalities, edema, insomnia, osteoporosis, thrombosis, etc. Steroid therapy is used only under the supervision of a physician because the clinical effects and side effects are two sides of the same coin, and the minimum required dose to show clinical effects must be used and the side effects must always be kept in mind.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは非ステロ
イド性５α−レダクターゼインヒビターの強力なもの
で、副作用の低い物質の開発を企図した。まず、多数の
生薬抽出物が５α−レダクターゼ阻害作用を有すること
を発見。活性の高い物質の単離、固定を行い、その実用
化を企図した。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have sought to develop a potent nonsteroidal 5α-reductase inhibitor with low side effects. First, they discovered that many herbal extracts have 5α-reductase inhibitory activity. Isolation and immobilization of highly active substances were attempted, and their practical use was attempted.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】生薬については長年にわ
たって使用されてきた安全性が高いと言われてきている
が、これはある適応症に対してであり、不特定多数に使
われる場合には安全性への対処が必要である。植物の中
には有毒のものも数多くあるため、単純に安全であると
思うのは危険である。本発明は側柏葉（Ｔｈｕｊａ ｏ
ｒｉｅｎｔａｌｉｓ），貝母（Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ
ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ），Ｔｒａｃｈｙｌｏｂｉｕｍ
ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ，Ｃｈｒｏｍｏｌａｅｎａ，ｃ
ｏｌｌｉｎａ，Ａｂｉｅｓ ｓｉｂｉｒｃａ，Ｍｉｋａ
ｎｉａ ａｌｖｉｍｉｉ，Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｒａｉ
ｍｏｎｄｉｉ等の生薬の抽出物のスクリーニングを試
み、非ステロイド化合物で５α−レダクターゼ阻害作用
が強く副作用の少ないジテルペン類を見出し、本発明を
完成した。Means for solving the problem It has been said that crude drugs which have been used for a long time have high safety, but this is for certain indications, and when used in unspecified large numbers, Security needs to be addressed. Given that many plants are toxic, it is dangerous to simply consider them safe. The present invention is based on
rientalis), shellfish (Fritillaria)
thunbergii), Trachylobium
verrucosum, Chromolaena, c
ollina, Abies sibirca, Mika
nia alvimii, Nicotiana rai
Screening of extracts of crude drugs such as C. mondii was attempted, and diterpenes which are nonsteroidal compounds, which have strong 5α-reductase inhibitory action and have few side effects, were completed, and thus completed the present invention.
【０００５】本発明に用いるジテルペノイド例えば８
（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１９−カルボ
ン酸、例えば次のように抽出、単離精製される。ソクハ
クヨウ末に約５倍量のヘキサンを加え加熱還流する。こ
れをろ過して、ろ液と残さに分ける。ろ液の溶媒を減圧
留去して得られた残留物に、元のソクハクヨウの２倍量
の６０％エタノールを加えて溶解する。溶解せずに残っ
た部分をろ過して除去し、ろ液の溶媒を減圧留去して得
られる固形物をＡ成分とする。Ａ成分の抽出・分画はこ
こに記載した方法に限定されるわけでなく、たとえばｎ
−ヘキサンに代えて石油エーテル・石油ベンジン・ベン
ゼンなども使用しうる。ただし、記載した方法が効率的
で収量も高い。成分Ａをｎ−ヘキサン：酢酸エチルの展
開溶媒でシリカゲルオープンカラムに通した後、硝酸銀
をコーティングしたＴＬＣで展開して阻害物質のスポッ
トをかきとり、精製のため再度シリカゲルオープンカラ
ムに通し試料とする。以上をフローチャートとして表１
に示す。The diterpenoid used in the present invention, for example, 8
(17), 12,14-Labdatriene-19-carboxylic acid, for example, extracted and isolated and purified as follows. Approximately 5 times the amount of hexane is added to the powder of sokuhakuyou and heated to reflux. This is filtered and separated into a filtrate and a residue. The solvent of the filtrate is distilled off under reduced pressure, and the residue obtained is dissolved by adding 60% ethanol which is twice as much as the original sokuhaku. The portion remaining without being dissolved is removed by filtration, and the solid obtained by distilling off the solvent of the filtrate under reduced pressure is referred to as component A. The extraction / fractionation of the A component is not limited to the method described here, and for example, n
-Petroleum ether, petroleum benzine, benzene, etc. may be used instead of hexane. However, the described method is efficient and yields high. Component A is passed through a silica gel open column with a developing solvent of n-hexane: ethyl acetate, developed with TLC coated with silver nitrate to scrape the spot of the inhibitor, and passed through the silica gel open column again for purification to obtain a sample. The above is shown as a flowchart in Table 1.
Shown in
【０００６】[0006]
【表１】 [Table 1]
【０００７】Ａ成分からの５αレダクターゼ阻害物質の
単離精製し、構造解析を試みた。Ａ成分をシリカゲルカ
ラムに通し、ＵＶ吸収のある成分を単離したが、構造異
性体が一緒になっているため、硝酸銀分取ＴＬＣで処理
しそれぞれを単離した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、１３
−ＣＮＭＲスペクトル、マススペクトル、赤外吸収スペ
クトル、紫外線吸収スペクトル、施光度を測定し、異性
体は１Ｈ−ＮＭＲより１２位と１４位の結合定数がそれ
ぞれ１７．３Ｈｚ，７．９Ｈｚであり、赤外吸収スペク
トルに、それぞれ９９１ｃｍ-1、７７１ｃｍ-1の吸収が
あることから、（Ｚ）および（Ｅ）−ラブダ−８（２
０），１２，１４−トリエン１９カルボン酸であること
が確認された。５α−レダクターゼ阻害活性を測定した
結果を下記に示す。Isolation and purification of a 5α reductase inhibitor from the component A was carried out, and structural analysis was attempted. The component A was passed through a silica gel column to isolate components having UV absorption. However, since structural isomers were combined, the components were treated with silver nitrate preparative TLC to isolate each. 1H-NMR spectrum, 13
-CNMR spectrum, mass spectrum, infrared absorption spectrum, ultraviolet absorption spectrum, and optical rotation were measured, and the isomers had binding constants of 17.3 Hz and 7.9 Hz at the 12-position and 14-position, respectively, according to 1H-NMR. outside the absorption spectrum, respectively 991Cm -1, since there is absorption of 771cm -1, and (Z) (E) - Rabuda -8 (2
It was confirmed to be 0), 12,14-triene 19 carboxylic acid. The results of measuring the 5α-reductase inhibitory activity are shown below.
【０００８】[0008]
【表２】 以上の結果により、成分Ａの中の５α−レダクターゼに
対する阻害活性をもつ成分はジテルペノイド（Ｅ）−ラ
ブダ−８（２０），１２，１４トリエン−１９−カルボ
ン酸と推定した。さらに、請求項１に記載の８（２
０），１２，１４−ラブダトリエン；８（２０），１
２，１４−ラブダトリエン−１９−オール等は、例えば
Ａｕｓｔ．Ｊ．ＣＨＥＭ．，１９６７，２０，１５７、
Ｊ．Ｏｒｇ．ＣＨＥＭ．１９６５，３０，４２９に記載
されている方法により得られる。[Table 2] From the above results, it was estimated that the component having inhibitory activity against 5α-reductase in component A was diterpenoid (E) -labda-8 (20), 12,14 triene-19-carboxylic acid. Furthermore, 8 (2 according to claim 1
0), 12, 14-Labdatriene; 8 (20), 1
2,14-Labdatrien-19-ol and the like are described, for example, in Aust. J. CHEM. , 1967, 20, 157,
J. Org. CHEM. 1965, 30, 429.
【０００９】５α−レダクターゼ阻害作用を測定するた
めの粗酵素液は以下のように調整した。A crude enzyme solution for measuring the 5α-reductase inhibitory activity was prepared as follows.
【００１０】[0010]
【表３】 [Table 3]
【００１１】得られた粗酵素液を用いて、以下の方法に
より５α−レダクターゼ阻害作用を測定した。Using the resulting crude enzyme solution, 5α-reductase inhibitory activity was measured by the following method.
【００１２】[0012]
【表４】 [Table 4]
【００１３】本発明により得られたソクハクヨウ抽出物
（成分Ａ）、成分Ａより単離精製したトランス−コミュ
ン酸（ｔｒａｎｓ−ｃｏｍｍｕｎｉｃ ａｃｉｄ）およ
び従来の技術によるフルタマイドおよびシプロテロンと
をイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での５α−レダク
ターゼ阻害作用活性について比較した結果をグラフに示
す。阻害活性率の計算方法は下記の通りである。[0013] The soybean fennel extract obtained according to the present invention (component A), trans-communic acid isolated and purified from component A, and flutamide and cyproterone according to the prior art are in vitro. 5) are shown in the graph. The calculation method of the inhibitory activity rate is as follows.
【００１４】[0014]
【数１】 [Equation 1]
【００１５】[0015]
【発明の実施形態】以下に実施態様をかかげて本発明を
説明する。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be described below with reference to embodiments.
【００１６】実施例１ ざ瘡に対する作用 ざ瘡患者を各郡男女３名（２０代）を選び、本発明ロー
ションを塗布させた。ざ瘡用ローションの処方は次のと
おりである。Example 1 Effect on acne Three acne patients (20s and 30s) in each county were selected and treated with the lotion of the present invention. The formulation of the acne lotion is as follows:
【００１７】[0017]
【表５】 ─────────────────────────── エタノール ５０％ １−３−プチレングリコール ２０ ＨＣＯ−６０ ３ ジテルペン類 １ 精製水 ２６ ─────────────────────────── 塗布はタカロフェン石鹸で洗顔後に行い、１日２回、２
ヵ月間継続させた。ざ瘡の程度はコメド（主としてＷｈ
ｉｔ ｈｅａｄ）と丘疹、膿疱の混合型で、中度のもの
と診断した。ざ瘡治療効果のスコアは、完治を３点、半
分治癒を２点、３割治癒を１点、改善せずを０点とし
た。最高点は１８点、最低点は０点となる。TABLE 5 Ethanol 50% 1-3-butylene glycol 20 HCO-60 3 Diterpenes 1 Purification Water 26 行 い Apply after washing face with Takarofen soap, twice a day, 2 times
Continued for months. The degree of acne depends on comed (mainly Wh
It was diagnosed as a mixed type of it head, papules and pustules, and moderate. The score for the acne treatment effect was 3 points for complete cure, 2 points for half cure, 1 point for 30% cure, and 0 point for no improvement. The highest score is 18 points and the lowest score is 0 points.
【００１８】[0018]
【表６】 [Table 6]
【００１９】治療効果は明らかであり、各ジテルペノイ
ド間には明らかな差異は認められなかった。効果の男女
差もあまり明らかでなかった。ざ瘡治療剤としては例え
ば下記の処方が使用される。The therapeutic effect was clear, with no apparent difference between the diterpenoids. The gender difference in efficacy was not so clear. For example, the following formulation is used as a therapeutic agent for acne.
【００２０】[0020]
【表７】 重量％ トランス・ジテルペン ０．０１〜１．０ 合成シリカアルミナ １．０〜３．０ （タカロフェン） 尿素 ２．０ サリチル酸ナトリウム ０．２ 溶媒で１００にするTable 7% by weight trans diterpene 0.01-1.0 Synthetic silica alumina 1.0-3.0 (Tacarophene) Urea 2.0 Sodium salicylate 0.2 Make 100 with solvent
【００２１】ジテルペン０．１％、タカロフェン３％の
前記処方の効果は中等度のざ瘡患者♂１３名、♀４４名
（１９才〜５１才）に４ヵ月投与して、完治５名、発疹
数１／３以下に減少（著効）５２名であった。The effect of the above-mentioned formulation of diterpene 0.1% and tacarophene 3% was shown to be moderately acne patients ♂13, ♀44 (19-51 years old) for 4 months, 5 cured completely, rash The number was reduced to several thirds or less (remarkably effective), and the number was 52.
【００２２】実施例２ 男性型禿頭症に対するジテルペンの治療効果。 男性および女性の男性ホルモン性脱毛症に対する、本発
明品の作用を検討した。以下の処方により、脱毛の治療
薬を調整した。Example 2 Therapeutic effect of diterpene on male pattern baldness. The effect of the product of the present invention on male and female androgenetic alopecia was examined. The following prescriptions were used to control the treatment of hair loss.
【００２３】[0023]
【表８】 ─────────────────────────── エタノール ５０％ プロピレングリコール １０ ＨＣＯ−６０ ３ ジテルペン類 １ 精製水 ３６ ─────────────────────────── ここには男性の禿頭症（男性型禿頭症）のＶ期に対する
治療効果を示す。被試験者は男性２７才〜４５歳、各群
５例ずつあった。１日２回６ヵ月にわたって頭部に塗布
した。治療効果は頭頂脱毛巣の面積の減少、発毛密度に
より評価した。脱毛面積１／５以下、密度２／３以上増
加−１０点、面積１／３以下、密度１／３以上−７点、
面積１／２以下、密度１／５以上−４点 面積薬２０％
減少、密度１０％以上増加−２点 面積殆ど変化なく、
密度増加明瞭−１点 変化なし０点[Table 8] {Ethanol 50% propylene glycol 10 HCO-60 3 Diterpenes 1 Purified water 36} ──────────────────────── Here we show the therapeutic effect of male baldness (male baldness) on the V stage. The test subjects were males aged 27 to 45 years old, 5 in each group. It was applied to the head twice a day for 6 months. The therapeutic effect was evaluated based on the reduction in parietal bald patch area and hair growth density. Depilation area 1/5 or less, density 2/3 or more increase -10 points, area 1/3 or less, density 1/3 or more -7 points,
Area 1/2 or less, Density 1/5 or more-4 points Area medicine 20%
Decrease, Density 10% or more increase-2 points Area almost unchanged,
Density increase clear-1 point No change 0 point
【００２４】[0024]
【表９】 各ジテルペノイド間の治療効果には大差なくすべて明確
な治療効果が認められた。[Table 9] The treatment effects among the diterpenoids were not significantly different, and all had clear treatment effects.
【００２５】実施例３ 毛深い男性をえらび、実験を行った。男性は５名、２５
〜４８才であった。両側の下肢伸（展）側中央に約巾２
ｃｍ、長さ３ｃｍの面積の抜毛巣を作成した。抜け毛は
ワックスで行った。この抜毛巣の１側には５０％エタノ
ールを、他側にはトランス コミュン酸（ｔｒａｎｓ
ｃｏｍｍｕｎｉｃ ａｃｉｄ）０．１％含有５０％エタ
ノール溶液を１日２回連続塗布した。３ヵ月後の成績は
下記の如くであった。Example 3 A hairy male was selected and an experiment was conducted. 5 men, 25
I was 48 years old. Width 2 at the center of both lower limb extension (extension) sides
A hair follicle having an area of 3 cm in length and 3 cm in length was prepared. Hair loss was performed with wax. One side of the hair follicle has 50% ethanol and the other side has trans-communic acid (trans).
(Communic acid) A 50% ethanol solution containing 0.1% was continuously applied twice a day. The results after three months were as follows.
【００２６】[0026]
【表１０】 [Table 10]
【００２７】実施例４ 特発性多毛症の女性５名（２０〜３５才）に治療を行っ
た。即ち０．１％トランス コミュン酸−５０％エタノ
ール溶液を右側前腕にワックス抜毛後、１日２回塗布し
た。抜毛は１ヵ月毎に行った。下表にその成績を総括し
た。Example 4 Five women (20-35 years old) with idiopathic hirsutism were treated. That is, a 0.1% trans-communic acid-50% ethanol solution was applied to the right forearm twice a day after wax removal. Hair removal was performed every month. The following table summarizes the results.
【００２８】[0028]
【表１１】 測定はワックス抜毛の布には付着した毛について行っ
た。[Table 11] The measurement was performed on the hair attached to the waxed cloth.
【００２９】実施例５ 抗前立腺癌効果 ７週齢雄ＢＡＬＢ／ＣＡ−ｎｕ／ｎｕマウスの背側部皮
下にＨＯＮＤＡ株を、また６週齢雄ＢＡＬＢ／ＣＡ−ｎ
ｕ／ｎｕマウスの背側部皮下にＲ３３２７−Ｇを移植し
た。それぞれの腫瘍が一定の大きさに達した時点で郡分
けし、投与を開始した。トランス コミュン酸及び対照
のフルタミドを経ロゾンデで１日１回２８日間反覆投与
した薬剤は０．５％ＣＭＣ溶液に懸濁投与、対照群には
０．５ＣＭＣ溶液のみを経口投与した。 腫瘍体積（ｍｍ3 ）＝長径（ｍｍ）×短径2 （ｍｍ2 ）
／２ で腫瘍の体積を求めた。抗腫瘍効果は対照群の腫瘍体積
に対して５０％以上の増殖抑制効果を示し、且つ、ｔ−
検定により有意差（Ｐ＜０．０５）を示す群を有効と判
定した。アンドロゲン依存性ヒト前立腺癌ＨＯＮＤＡ株
はマウスの精巣を摘出すると縮小した。このＨＯＮＤＡ
株癌に対し、ｔｒａｎｓ ｃｏｍｍｕｎｉｃ ａｃｉｄ
は投与量に依存してその増殖を有意に抑制した。対照薬
のフルタミドも抑制効果を示したが、試験薬に比べかな
り弱く、試験薬２０ｍｇ／ｋｇ投与群とフルタミド２０
０ｍｇ／ｋｇ投与群がほぼ同等の抑制作用を示した。ア
ンドロゲン依存性ラット前立腺癌Ｒ３３２７−Ｇ担癌ヌ
ードマウスの精巣を摘出しても、移植時に２５ｍｇ／マ
ウスのテストステロン エナンサット（Ｔｅｓｔｏｓｔ
ｅｒｏｎｅ ｅｎａｎｔｈａｔ）を投与すると増殖は抑
制されなかった。このマウスに対してもｔｒａｎｓ ｃ
ｏｍｍｕｎｉｃ ａｃｉｄは用量依存的な増殖抑制効果
を示した。その効果はフルタミドに比べかなり強いもの
であった。Example 5 Anti-prostatic Cancer Effect 7-week-old male BALB / CA-nu / nu mice were subcutaneously subcutaneously with the HONDA strain and 6-week-old male BALB / CA-n
R3327-G was implanted subcutaneously on the dorsal side of u / nu mice. When each tumor reached a certain size, it was divided and administration was started. Transcommunic acid and a control, flutamide, were repeatedly administered once a day for 28 days by translosonde, and the drug was suspended in a 0.5% CMC solution, and the control group was orally administered only the 0.5 CMC solution. Tumor volume (mm 3) = major axis (mm) × minor axis 2 (mm 2)
The tumor volume was determined at / 2. The antitumor effect shows a growth inhibitory effect of 50% or more with respect to the tumor volume of the control group, and the t-
A group showing a significant difference (P <0.05) by the test was determined to be effective. The androgen-dependent human prostate cancer HONDA strain shrank when the testes of mice were removed. This HONDA
Trans common acid for cancer
Significantly inhibited its growth in a dose-dependent manner. The control drug flutamide also showed an inhibitory effect, but it was considerably weaker than the test drug, and the test drug 20 mg / kg administration group and flutamide 20
The 0 mg / kg administration group showed almost the same inhibitory effect. Even if the testis of an androgen-dependent rat prostate cancer R3327-G tumor-bearing nude mouse is excised, at the time of transplantation, 25 mg / mouse of testosterone enansat (Testest) is used.
The growth was not suppressed by administration of erone enanthat. Trans c
Ommunic acid showed a dose-dependent growth inhibitory effect. The effect was much stronger than flutamide.
【図１】本発明により得られたソクハクヨウ抽出物（成
分Ａ）、成分Ａより単離精製したトランス−コミュン酸
と、従来技術によるフルタマイド及びシプロテロンとを
イン・ビトロでの５α−レダクターゼ阻害作用活性につ
いて比較した結果をグラフに示した図である。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 shows the in vitro 5α-reductase inhibitory activity of a soybean extract (component A) obtained according to the present invention, trans-communic acid isolated and purified from component A, and flutamide and cyproterone according to the prior art. FIG. 7 is a graph showing the result of comparison for.
【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成８年１２月２７日[Submission date] December 27, 1996
【手続補正１】[Procedure amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】特許請求の範囲[Correction target item name] Claims
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【特許請求の範囲】[Claims]
【手続補正２】[Procedure amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００５[Correction target item name] 0005
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【０００５】本発明に用いるジテルペノイド例えば８
（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１９−酸は、
例えば次のように抽出、単離精製される。ソクハクヨウ
末に約５倍量のヘキサンを加え加熱還流する。これをろ
過して、ろ液と残さに分ける。ろ液の溶媒を減圧留去し
て得られた残留物に、元のソクハクヨウの２倍量の６０
％エタノールを加えて溶解する。溶解せずに残った部分
をろ過して除去し、ろ液の溶媒を減圧留去して得られる
固形物をＡ成分とする。Ａ成分の抽出・分画はここに記
載した方法に限定されるわけでなく、たとえばｎ−ヘキ
サンに代えて石油エーテル・石油ベンジン・ベンゼンな
ども使用しうる。ただし、記載した方法が効率的で収量
も高い。成分Ａをｎ−ヘキサン：酢酸エチルの展開溶媒
でシリカゲルオープンカラムに通した後、硝酸銀をコー
ティングしたＴＬＣで展開して５α−レダクターゼの阻
害物質のスポットをかきとり、精製のため再度シリカゲ
ルオープンカラムに通し試料とする。以上をフローチャ
ートとして表１に示す。The diterpenoid used in the present invention, for example, 8
(17), 12,14-Rabdatriene-19-acid is
For example, extraction, isolation and purification are performed as follows. Approximately 5 times the amount of hexane is added to the powder of sokuhakuyou and heated to reflux. This is filtered and separated into a filtrate and a residue. The solvent obtained by evaporating the solvent of the filtrate under reduced pressure was added to a residue obtained by adding twice the amount of
% Ethanol to dissolve. The portion remaining without being dissolved is removed by filtration, and the solid obtained by distilling off the solvent of the filtrate under reduced pressure is referred to as component A. The extraction and fractionation of the component A is not limited to the method described herein, and for example, petroleum ether, petroleum benzene, benzene, etc. may be used instead of n-hexane. However, the described method is efficient and yields high. Component A was passed through a silica gel open column with a developing solvent of n-hexane: ethyl acetate, developed by TLC coated with silver nitrate to scrape off spots of 5α-reductase inhibitor, and again purified. The sample is passed through a silica gel open column. The above is shown in Table 1 as a flowchart.
【手続補正３】[Procedure 3]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００７[Correction target item name] 0007
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【０００７】Ａ成分からの５α−レダクターゼ阻害物質
の単離精製をし、構造解析を試みた。Ａ成分をシリカゲ
ルカラムに通し、ＵＶ吸収の最も強い物質を単離したと
ころ、１Ｈ ＮＭＲスペクトルよりδ６〜７に四重線、
δ５〜５．５に三重線のピークが２つずつあり、積分値
が０．７と１の三重線、四重線のペアで吸収を持つ似た
ような構造をした物質が２つ含まれるものと考えられる
ため、硝酸銀をコーティングした分取ＴＬＣでそれぞれ
の分離を試みた。構造解析は、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭ
Ｒスペクトル、マススペクトル、赤外線吸収スペクト
ル、紫外線吸収スペクトル、旋光度を測定した結果、Ｌ
ａｂｄａｎｅ骨格を持つ８（１７），１２，１４−ラブ
ダントリエン−１９−酸（８（１７），１２，１４−Ｌ
ａｂｄａｔｒｉｅｎ−１９−ｏｉｃａｃｉｄ）と推定し
た。また、立体構造の解明では、赤外吸収スペクトルに
おいて、それぞれに９９０ｃｍ−１，７７０ｃｍ−１に
吸収が認められることから、（Ｅ）−および（Ｚ）−が
存在するものと推定。１ＨＮＭＲスペクトルにおける各
プロトン間のＮＯＥＳＹ及びＣＯＳＹスペクトルの検討
を行い、これらは（Ｅ）−および（Ｚ）−８（１７），
１２，１４−ラブダントリエン−１９−酸であると決定
した。[0007] A 5α-reductase inhibitor was isolated and purified from the A component, and its structural analysis was attempted. The component A was passed through a silica gel column to isolate the substance having the strongest UV absorption. From the 1 H NMR spectrum, a quadruplet at δ6 to 7,
There are two triplet peaks at δ5 to 5.5, and two substances with similar structures having absorptions in triplet and quadruple pairs with integrated values of 0.7 and 1 are included. Therefore, each separation was attempted by preparative TLC coated with silver nitrate. Structural analysis was performed by 1 H and 13 C NM
As a result of measuring the R spectrum, mass spectrum, infrared absorption spectrum, ultraviolet absorption spectrum, and optical rotation,
8 (17), 12,14-labdantriene-19-acid having an abdane skeleton (8 (17), 12,14-L
abdatien-19-oicacid). Further, the elucidation of the three-dimensional structure, in the infrared absorption spectrum, 990 cm -1, from the observed absorption to 770 cm -1, respectively, (E) - presumed to exist - and (Z). The NOESY and COSY spectra between each proton in the 1 H NMR spectrum were examined, and these were (E)-and (Z) -8 (17),
It was determined to be 12,14-labdantriene-19-acid.
【手続補正４】[Procedure amendment 4]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００８[Correction target item name] 0008
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【０００８】[0008]
【表２】 以上の結果により、成分Ａの中の５α−レダクターゼに
対する阻害活性をもつ成分はジテルペノイド（Ｅ）−８
（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１９−酸と推
定した。さらに、請求項１に記載の８（１７），１２，
１４−ラブダトリエン；８（２０），１２，１４−ラブ
ダトリエン−１９−オール等は、例えばＡｕｓｔ．Ｊ．
ＣＨＥＭ．，１９６７，２０，１５７、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃ
ＨＥＭ．１９６５，３０，４２９に記載されている方法
により得られる。[Table 2] According to the above results, the component having an inhibitory activity on 5α-reductase in the component A is a diterpenoid (E) -8
(17) It was estimated to be 12,14-labdatriene-19-acid . Further, 8 (17), 12,
14-labdatriene; 8 (20), 12,14-labdatrien-19-ol and the like are described, for example, in Aust. J.
CHEM. , 1967, 20, 157; Org. C
HEM. 1965, 30, 429.
【手続補正５】[Procedure Amendment 5]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１３[Correction target item name] 0013
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００１３】本発明により得られたソクハクヨウ抽出物
（成分Ａ）、成分Ａより単離精製したトランス−コミュ
ン酸（ｔｒａｎｓ−ｃｏｍｍｕｎｉｃ ａｃｉｄ）およ
び従来の技術によるフルタマイドおよびシプロテロンと
をイン・ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での５α−レダク
ターゼ阻害作用活性について比較した結果をグラフに示
す。尚、コミュン酸とは８（１７），１４−ラブダトリ
ン−１９−酸の別称である。阻害活性率の計算方法は下
記の通りである。[0013] The soybean fennel extract obtained according to the present invention (component A), trans-communic acid isolated and purified from component A, and flutamide and cyproterone according to the prior art are in vitro. 5) are shown in the graph. Incidentally, commonic acid is another name of 8 ( 17 ), 14-labdatrin-19-acid. The calculation method of the inhibitory activity rate is as follows.
【手続補正６】[Procedure correction 6]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１８[Correction target item name] 0018
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００１８】[0018]
【表６】 [Table 6]
【手続補正７】[Procedure amendment 7]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２４[Name of item to be corrected] 0024
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００２４】[0024]
【表９】 各ジテルペノイド間の治療効果には大差なくすべて明確
な治療効果が認められた。[Table 9] The treatment effects among the diterpenoids were not significantly different, and all had clear treatment effects.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＤＵ Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＤＵＢ // Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI Technical display area A61K 35/78 ADU A61K 35/78 ADUB // C12N 9/99 C12N 9/99
Claims (4)
ンス型のジエンを持つジテルペン（６−ヒドロキシ−８
（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１８−カルボ
ン酸；８（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１８
−カルボン酸；７−ヒドロキシ−８（１７），１２，１
４−ラブダトリエン−１８−カルボン酸；１２，１４−
ラブダジエン−３，８−ジオール；１２，１４−ラブダ
ジエン−６，８−ジオール；２，１４−ラブダジエン−
７，８−ジオール；１２，１４−ラブダジエン−８，１
１−ジオール；１２，１４−ラブダジエン−８，１８−
ジオール；１２，１４−ラブダジエン−６，８，ジオー
ル；１２，１４−ラブダジエン−１，８，１８−トリオ
ール；１２，１４−ラブダジエン−６，７，８−トリオ
ール；１２，１４−ラブダジエン−６，８，１８−トリ
オール；１１，１３−ラブダジエン−８−オール；１
２，１４−ラブダジエン−８−オール；８（１７），１
２，１４−ラブダトリエン；７，１２，１４−ラブダト
リエン−６，１７−ジオール；８（１７），１２，１４
−ラブダトリエン−３，１９−ジオール；８（１７），
１２，１４−ラブダトリエン−１８，１９−ジオール；
８（１７）１２，１４−ラブダトリエン−３−オール；
８（１７），１２，１４−ラブダトリエン−７−オー
ル；８（１７），１２，１４−ラブダトリエン−１９−
オール等）のうち少なくとも１種を配合する脱毛治療
薬。1. A diterpene (6-hydroxy-8) having a trans-diene at carbon 12 and 14-positions of a labdane skeleton.
(17), 12,14-Labdatriene-18-carboxylic acid; 8 (17), 12,14-Labdatriene-18
-Carboxylic acid; 7-hydroxy-8 (17), 12,1
4-Labdatriene-18-carboxylic acid; 12,14-
Rhabdadiene-3,8-diol; 12,14-Rhabdadiene-6,8-diol; 2,14-Rhabdadiene-
7,8-diol; 12,14-labdadiene-8,1
1-diol; 12,14-labadien-8,18-
Diol; 12,14-Labadhadiene-6,8, Diol; 12,14-Labadhadiene-1,8,18-triol; 12,14-Labadhadiene-6,7,8-triol; 12,14-Labadhadiene-6. 8,18-Triol; 11,13-Labadajene-8-ol; 1
2,14-Labadien-8-ol; 8 (17), 1
2,14-labdatriene; 7,12,14-labdatriene-6,17-diol; 8 (17), 12,14
-Labdatriene-3,19-diol; 8 (17),
12,14-Labdatriene-18,19-diol;
8 (17) 12,14-labdatrien-3-ol;
8 (17), 12,14-Labdatriene-7-ol; 8 (17), 12,14-Labdatriene-19-
Hair loss remedy that contains at least one of all).
とも１種を配合した多毛症治療薬2. A therapeutic agent for hirsutism comprising at least one diterpene according to claim 1.
とも１種を配合するざ瘡の治療薬3. A treatment for acne comprising at least one of the chemical substances according to claim 1.
とも１種を配合する前立腺肥大、前立腺癌の治療薬。4. A therapeutic agent for prostatic hypertrophy and prostate cancer, comprising at least one of the chemical substances according to claim 1.
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8043029A JP2838069B2 (en) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | Drug for treating androgenic diseases containing diterpene |
| CA002178528A CA2178528C (en) | 1995-06-09 | 1996-06-07 | Therapeutics containing 5alpha - reductase inhibitors |
| US08/659,847 US5773005A (en) | 1995-06-09 | 1996-06-07 | Purified flavonoid and diterpene 5α-reductase inhibitors from thuja orientalis for androgen-related diseases |
| EP96109269A EP0747048A3 (en) | 1995-06-09 | 1996-06-10 | Diterpenes and flavonoids as 5-alpha-reductase inhibitors |
| DE0747048T DE747048T1 (en) | 1995-06-09 | 1996-06-10 | Diterpenes and flavonoids as 5-alpha reductase inhibitors |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8043029A JP2838069B2 (en) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | Drug for treating androgenic diseases containing diterpene |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09235221A true JPH09235221A (en) | 1997-09-09 |
| JP2838069B2 JP2838069B2 (en) | 1998-12-16 |
Family
ID=12652527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8043029A Expired - Lifetime JP2838069B2 (en) | 1995-06-09 | 1996-02-29 | Drug for treating androgenic diseases containing diterpene |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2838069B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100858627B1 (en) * | 2006-10-09 | 2008-09-17 | 주식회사 코리아나화장품 | Cosmetic Composition for Inhibiting Secretion of Sebum containing Extract of Fritillaria verticillata as Active Ingredient |
-
1996
- 1996-02-29 JP JP8043029A patent/JP2838069B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100858627B1 (en) * | 2006-10-09 | 2008-09-17 | 주식회사 코리아나화장품 | Cosmetic Composition for Inhibiting Secretion of Sebum containing Extract of Fritillaria verticillata as Active Ingredient |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2838069B2 (en) | 1998-12-16 |
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