JPH09176083A - New compound f-12509a - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain the above new compound having inhibiting action on sphingosine kinase and capable of converting to a medicine useful for preventing or treating arteriosclerosis, diabetes mellitus, thrombosis, etc. SOLUTION: This compound is a compound F-12509 of the formula or its pharmacologically permissible salt and has the following physicochemical properties. Appearance, pale orange substance; solubility, soluble in an organic solvent such as methanol, ethyl acetate, chloroform or dimethyl sulfoxide; color test, positive to 50% sulfuric acid and iodine; molecular formula, C21 H28 04 ; molecular weight, 344 (observed value due to high resolution E1-MS method: [M] +344.1985); specific rotation, [α]<25> D, -96 deg. (C 0.25, in methanol), etc. The compound is obtained by culturing Trichopezizella-barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. Sank 25395 (FERM-BP-5230) strain which is F-12509A producing microorganism belonging to the genus Trichopezizella and collecting from culture mixture.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬、殊にスフィ
ンゴシンキナーゼ阻害剤として有用な新規化合物Ｆ−１
２５０９Ａに関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound F-1 which is useful as a medicine, particularly as a sphingosine kinase inhibitor.
2509A.

【０００２】[0002]

【従来の技術】スフィンゴ脂質は従来、グリセロリン脂
質およびコレステロールとならぶ細胞膜の主要な構成成
分の一つと考えられてきた。グリセロリン脂質は細胞膜
構造の維持だけでなく、その代謝産物として多くの生理
活性物質を産生させることが知られてきた。しかし、ス
フィンゴ脂質についてはその代謝産物の生理活性につい
ては最近までほとんど知られていなかった。近年、セラ
ミドなどのさまざまなスフィンゴ脂質の代謝産物がアポ
トーシスの誘導や細胞増殖刺激作用などの生理活性を示
すことが知られるようになり、スフィンゴ脂質の代謝酵
素が生理的反応や種々の病態の原因に密接に関連する可
能性が示唆されるようになった［Hannun,Y. A. and Obe
id, L. M. (1995) TIBS, 20, 73-77 参照] 。2. Description of the Related Art Sphingolipids have heretofore been considered as one of the major constituents of cell membranes along with glycerophospholipids and cholesterol. Glycerophospholipids have been known not only to maintain the cell membrane structure but also to produce many physiologically active substances as metabolites thereof. However, about sphingolipids, little was known about the physiological activity of its metabolites until recently. In recent years, it has become known that various metabolites of sphingolipids such as ceramide exhibit physiological activities such as induction of apoptosis and cell growth stimulating action, and the metabolic enzymes of sphingolipids cause physiological reactions and various pathological conditions. Have been suggested to be closely related to [Hannun, YA and Obe
id, LM (1995) TIBS, 20, 73-77].

【０００３】スフィンゴ脂質の代謝酵素には、細胞膜の
主要な構成成分であるスフィンゴミエリンを中心とし
て、その生合成にはたらくもの、分解に働くもの、さら
にガングリオシドなどの糖脂質へ合成、分解に働くもの
など、さまざまな酵素が知られている。これらのうち、
スフィンゴシンキナーゼは、スフィンゴ脂質の分解系に
作用する酵素であり、スフィンゴシンをリン酸化しスフ
ィンゴシン−１−リン酸を生成させる［Buehrer, B.M.,
et al. (1993) Advances in Lipid Research, 26, 59-
67参照］。該酵素の基質であるスフィンゴシンや、該酵
素反応の生成物であるスフィンゴシン−１−リン酸につ
いても、最近多くの生理活性が報告されるようになっ
た。Sphingolipid metabolizing enzymes, mainly sphingomyelin, which is a major constituent of cell membranes, act on their biosynthesis, act on their decomposition, and further act on their synthesis and decomposition into glycolipids such as gangliosides. Various enzymes are known. Of these,
Sphingosine kinase is an enzyme that acts on the degradation system of sphingolipids and phosphorylates sphingosine to produce sphingosine-1-phosphate [Buehrer, BM,
et al. (1993) Advances in Lipid Research, 26, 59-
67]. Recently, many physiological activities have been reported for sphingosine which is a substrate of the enzyme and sphingosine-1-phosphate which is a product of the enzymatic reaction.

【０００４】スフィンゴシンキナーゼの基質であるスフ
ィンゴシンについてはプロテインキナーゼＣ（以下「Ｐ
ＫＣ」という）を阻害することが知られており、ＰＫＣ
の活性化剤であるホルボールエステルの作用を多くの細
胞系で打ち消すことが明らかになっている。たとえば、
ホルボールエステルにより引き起こされた血小板凝集
や、好中球の活性化、白血病細胞の分化などがスフィン
ゴシンにより抑制されることが報告されている［Hannu
n, Y. A. and Corinne, M. L. (1993) Biochimicaet Bi
ophysica Acta, 1154, 223-236参照］。Regarding sphingosine, which is a substrate of sphingosine kinase, protein kinase C (hereinafter referred to as "P
It is known to inhibit PKC) and PKC
It has been shown to abolish the action of phorbol ester, which is an activator of A. For example,
It has been reported that sphingosine inhibits phorbol ester-induced platelet aggregation, neutrophil activation, and leukemia cell differentiation [Hannu
n, YA and Corinne, ML (1993) Biochimicaet Bi
See Ophysica Acta, 1154, 223-236].

【０００５】また、スフィンゴシンはその他種々の情報
伝達経路に対して作用することも報告されている。［Ha
nnun, Y. A. and Corinne, M. L. (1993) Biochimica e
t Biophysica Acta, 1154, 223-236参照］。これらの情
報伝達経路は癌の進展、免疫、炎症、糖代謝、血液凝固
などの反応に密接に関連することが知られている。It has also been reported that sphingosine acts on various other signal transduction pathways. [Ha
nnun, YA and Corinne, ML (1993) Biochimica e
t Biophysica Acta, 1154, 223-236]. It is known that these signaling pathways are closely related to reactions such as cancer progression, immunity, inflammation, glucose metabolism, and blood coagulation.

【０００６】また、ある種の白血病細胞においては、網
膜芽腫遺伝子産物（retinoblastomagene product ）を
介する増殖抑制経路を、スフィンゴシンが活性化するこ
とが知られている。スフィンゴシンのこの作用はＰＫＣ
の阻害作用とは無関係であり、網膜芽腫遺伝子産物を脱
リン酸化して活性化し、細胞を細胞周期のＧ０／Ｇ１期
に留めることにより、白血病細胞の増殖を抑制する［Ha
nnun, Y. A. and Corinne, M. L. (1993) Biochimica e
t Biophysica Acta, 1154, 223-236参照］。In some leukemia cells, sphingosine is known to activate the growth inhibitory pathway via the retinoblastoma gene product. This action of sphingosine is PKC
It is irrelevant to the inhibitory effect of erythrocytes, and suppresses the proliferation of leukemic cells by dephosphorylating and activating the retinoblastoma gene product and keeping the cells in the G0 / G1 phase of the cell cycle [Ha.
nnun, YA and Corinne, ML (1993) Biochimica e
t Biophysica Acta, 1154, 223-236].

【０００７】一方、スフィンゴシン−１−リン酸には、
線維芽細胞に対する増殖刺激作用が認められている。血
小板由来増殖因子（以下「ＰＤＧＦ」という）や血清の
線維芽細胞増殖刺激作用は、第二メッセンジャーとして
のスフィンゴシン−１−リン酸の作用を介したものであ
ることが最近明らかになった［Olivera, A. and Spiege
l, S., (1993) Nature ,365, 557-560および Spiegel,
S. et al, (1994) Breast Cancer Research and Treatm
ent, 31, 337-348参照］。なお、該作用もＰＫＣの阻害
作用とは無関係と考えられている。線維芽細胞以外の細
胞では、平滑筋細胞においてスフィンゴシンが細胞増殖
作用を示すことが知られているが［Yacobs, L. S. and
Kester, M., (1993) Am. J. Physiol., 265, C740-C747
参照］、この現象においても線維芽細胞と同様の作用機
作で細胞増殖が調節されていると考えられている。On the other hand, sphingosine-1-phosphate contains
A proliferation stimulating effect on fibroblasts is recognized. It has recently been revealed that the platelet-stimulating growth factor (hereinafter referred to as "PDGF") and serum stimulating fibroblast proliferation are mediated by the action of sphingosine-1-phosphate as a second messenger [Olivera]. , A. and Spiege
l, S., (1993) Nature, 365, 557-560 and Spiegel,
S. et al, (1994) Breast Cancer Research and Treatm
ent, 31, 337-348]. It is considered that this action is also unrelated to the PKC inhibitory action. In cells other than fibroblasts, sphingosine is known to have a cell proliferating effect on smooth muscle cells [Yacobs, LS and
Kester, M., (1993) Am. J. Physiol., 265, C740-C747
See also], in this phenomenon, it is considered that cell growth is regulated by the same mechanism of action as fibroblasts.

【０００８】スフィンゴシン−１−リン酸のその他の作
用としては、ホスホリパーゼＤの活性化、細胞内カルシ
ウム・イオン・プール（intracellular stores）からの
カルシウム放出の促進［Spiegel, S. et al, (1994) Br
east Cancer Research and Treatment, 31, 337-348 参
照］、癌細胞の細胞運動（cell motility ）とファゴキ
ネシス（phagokinesis）の抑制［Hannun, Y. A. and Co
rinne, M. L. (1993)Biochimica et Biophysica Acta,
1154, 223-236参照］等が知られている。Other effects of sphingosine-1-phosphate include activation of phospholipase D and promotion of calcium release from intracellular calcium ion pools (Spiegel, S. et al, (1994). Br
east Cancer Research and Treatment, 31, 337-348], suppression of cancer cell motility and phagokinesis [Hannun, YA and Co.
rinne, ML (1993) Biochimica et Biophysica Acta,
1154, 223-236] and the like are known.

【０００９】以上のごとく、スフィンゴシンやスフィン
ゴシン−１−リン酸はさまざまな生理作用を有してお
り、その細胞レベルの調節をする物質は多くの病態にお
いて有用な薬理作用を有することが期待される。特に、
スフィンゴシンキナーゼを阻害すると、細胞内のスフィ
ンゴシンの量が増え、スフィンゴシン−１−リン酸の量
が減少し、その結果スフィンゴシンの持つ作用が強調さ
れ、スフィンゴシン−１−リン酸の持つ作用が抑制され
ると考えられる。As described above, sphingosine and sphingosine-1-phosphate have various physiological actions, and substances that regulate their cellular levels are expected to have useful pharmacological actions in many pathological conditions. . Especially,
Inhibiting sphingosine kinase increases the intracellular sphingosine amount and decreases the sphingosine-1-phosphate amount. As a result, the action of sphingosine is emphasized and the action of sphingosine-1-phosphate is suppressed. it is conceivable that.

【００１０】例えばＰＤＧＦは、平滑筋細胞の増殖と遊
走を刺激することを介して血管病変の進展に重要な役割
を果たすと考えられているが、該作用機作においてはス
フィンゴシン−１−リン酸が第二メッセンジャーとして
機能すると考えられている。従って、その経路を遮断す
れば、高脂血症における動脈硬化症、糖尿病性血管障
害、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の再狭窄等の予
防または治療に有用と考えられる。[0010] For example, PDGF is considered to play an important role in the development of vascular lesions by stimulating proliferation and migration of smooth muscle cells. In this mechanism of action, sphingosine-1-phosphate is used. Is believed to function as a second messenger. Therefore, if the pathway is blocked, it is considered to be useful for prevention or treatment of arteriosclerosis in hyperlipidemia, diabetic angiopathy, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), and the like.

【００１１】また、スフィンゴシンが示す血小板凝集の
阻害や血液凝固第Ｘ因子によるプロトロンビンの活性化
の阻害などの作用は、いずれも血栓の形成を抑制する作
用であり、該作用を持つ化合物は、心疾患等の血栓形成
を原因とするさまざまな疾患の予防または治療に有用と
考えられる。Further, the effects of sphingosine, such as the inhibition of platelet aggregation and the inhibition of prothrombin activation by blood coagulation factor X, are the actions of suppressing the formation of thrombus, and the compound having the action is It is considered to be useful for the prevention or treatment of various diseases caused by thrombus formation such as diseases.

【００１２】さらに、最近、セリンパルミトイルトラン
スフェラーゼ（serine palmitoyl transferase）に対す
る微生物由来の阻害剤がスフィンゴシンに良く似た構造
を持ち、しかも強力な免疫抑制作用を持つことが報告さ
れた［Sasaki, S. et al, (1994) J Antibiotics, 47,
420-433 および Miyake, Y. et al, (1995) Biochem.Bi
ophys. Res. Comm. 211, 396-403 参照］。スフィンゴ
シンもセリンパルミトイルトランスフェラーゼのダウン
レギュレーション作用を有する［Hannun, Y. A. and Co
rinne, M. L. (1993) Biochimica et Biophysica Acta,
1154, 223-236参照］ことから、スフィンゴシンキナー
ゼの阻害剤は新たな免疫抑制剤となる可能性も考えられ
る。Furthermore, it was recently reported that a microbial-derived inhibitor of serine palmitoyl transferase has a structure very similar to sphingosine and has a strong immunosuppressive action [Sasaki, S. et. al, (1994) J Antibiotics, 47,
420-433 and Miyake, Y. et al, (1995) Biochem.Bi.
Ophys. Res. Comm. 211, 396-403]. Sphingosine also has a down-regulating effect on serine palmitoyl transferase [Hannun, YA and Co
rinne, ML (1993) Biochimica et Biophysica Acta,
1154, 223-236], suggesting that sphingosine kinase inhibitors may become new immunosuppressants.

【００１３】スフィンゴシンやスフィンゴシン−１−リ
ン酸は各種癌細胞に対して、その増殖や遊走に作用する
ことが報告されている［Spiegel, S., et al. (1994) B
reast Cancer Research and Treatment, 31, 337-348参
照］。癌細胞の種類や条件によって成績はさまざまでは
あるが、癌の種類によってはスフィンゴシンキナーゼの
阻害剤が制癌や転移の阻止に働く可能性も考えられる。It has been reported that sphingosine and sphingosine-1-phosphate act on proliferation and migration of various cancer cells [Spiegel, S., et al. (1994) B
reast Cancer Research and Treatment, 31, 337-348]. The results vary depending on the type and condition of the cancer cell, but it is also possible that an inhibitor of sphingosine kinase may work to suppress cancer and prevent metastasis depending on the type of cancer.

【００１４】以上のことから、スフィンゴシンキナーゼ
に対する特異的な阻害剤は、抗動脈硬化剤、抗糖尿病
剤、抗血栓剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、制癌剤、癌転移
抑制剤、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の再狭窄等
の予防または治療剤としての開発が有望視される。From the above, specific inhibitors for sphingosine kinase are anti-atherosclerotic agents, anti-diabetic agents, anti-thrombotic agents, anti-inflammatory agents, immunosuppressants, anticancer agents, cancer metastasis inhibitors, percutaneous coronary arteries. Development as a prophylactic or therapeutic agent for restenosis after plastic surgery (PTCA) is promising.

【００１５】現在、スフィンゴシンキナーゼの阻害剤と
して知られている物質には、スフィンゴシンの構造類似
物質であるジヒドロスフィンゴシンやジメチルスフィン
ゴシンなどが知られているが、その阻害に必要な濃度は
それぞれ２０μＭ、５０μＭであり［Bornfeldt, K.
E., et al, (1995) J Cell Biol., 130, 193-206および
Spiegel, S. et al, (1994) Breast Cancer Research a
nd Treatment 31, 337-348 参照］、また細胞内で代謝
されることも十分考えられるため、強力かつ特異的な阻
害剤とはいいがたい。また、薬剤としての体内への吸収
性や血中での安定性においても問題点が多いと考えられ
る。このような観点から、スフィンゴシンキナーゼに対
して特異的な阻害作用を示し、かつ新規構造を有する生
理活性物質が望まれている。Currently, as substances known as inhibitors of sphingosine kinase, dihydrosphingosine and dimethylsphingosine, which are structurally similar substances of sphingosine, are known, and the concentrations required for their inhibition are 20 μM and 50 μM, respectively. And [Bornfeldt, K.
E., et al, (1995) J Cell Biol., 130, 193-206 and
Spiegel, S. et al, (1994) Breast Cancer Research a
nd Treatment 31, 337-348] and can be metabolized intracellularly, so it cannot be said to be a potent and specific inhibitor. In addition, it is considered that there are many problems in terms of absorbability into the body as a drug and stability in blood. From such a viewpoint, a physiologically active substance having a novel structure and showing a specific inhibitory action on sphingosine kinase is desired.

【００１６】[0016]

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、スフ
ィンゴシンキナーゼに対して特異的な阻害作用を示し、
かつ新規構造を有する化合物、該化合物の製造方法およ
び該化合物を含むことからなる医薬を提供することにあ
る。DISCLOSURE OF THE INVENTION The object of the present invention is to show a specific inhibitory action on sphingosine kinase,
Another object of the present invention is to provide a compound having a novel structure, a method for producing the compound, and a medicine containing the compound.

【００１７】[0017]

【課題を解決するための手段】本発明は、 （１） 下記の式（Ｉ）The present invention comprises (1) the following formula (I):

【００１８】[0018]

【化２】 Embedded image

【００１９】で表される化合物Ｆ−１２５０９Ａまたは
その薬理学的に許容される塩、 （２） 下記の性状を有する化合物Ｆ−１２５０９Ａ； １）物質の性状：淡橙色物質 ２）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒に可溶 ３）呈色試験：５０％硫酸、ヨウ素に陽性 ４）分子式：Ｃ₂₁Ｈ₂₈Ｏ₄ ５）分子量：３４４（高分解能ＥＩ−ＭＳ法による実測
値：［Ｍ］＋３４４．１９８５） （計算値：３４４．１９８７） ６）比旋光度：［α］_D ²⁵ −９６°（ｃ ０．２５、
メタノール中） ７）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（ε） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは以下の
通りである。Compound F-12509A represented by or a pharmacologically acceptable salt thereof, (2) Compound F-12509A having the following properties; 1) Property of substance: pale orange substance 2) Solubility: methanol , Ethyl acetate, chloroform,
Soluble in organic solvents such as dimethylsulfoxide 3) Color test: 50% sulfuric acid, positive for iodine 4) Molecular formula: C ₂₁ H ₂₈ O ₄ 5) Molecular weight: 344 (Actual value by high resolution EI-MS method: [M ] +344.1985) (Calculated value: 344.1987) 6) Specific rotation: [α] _D ²⁵ −96 ° (c 0.25,
7) Ultraviolet absorption spectrum: λ _max nm (ε) The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as follows.

【００２０】290 (14700), 477 (500)、 メタノール−0.01N 水酸化ナトリウム溶液中で測定した
紫外線吸収スペクトルは以下の通りである。The UV absorption spectra measured in 290 (14700), 477 (500) and methanol-0.01N sodium hydroxide solution are as follows.

【００２１】235sh (9700), 327 (22400), 530 (200) ８）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは次に示す通り
である。235sh (9700), 327 (22400), 530 (200) 8) Infrared absorption spectrum: ν _max cm ^{-1 The} infrared absorption spectrum measured in the liquid film is as follows.

【００２２】3310, 2965, 1645, 1620, 1360, 1320, 11
90 ９） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ） 重クロロホルム中、内部基準にテトラメチルシランを使
用して測定した核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨｚ）
は以下の通りである。3310, 2965, 1645, 1620, 1360, 1320, 11
90 9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (360 MHz) measured by using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated chloroform.
Is as follows.

【００２３】7.78 (1H, br s), 5.97 (1H, s), 4.68 (1
H, d, J=1.5Hz) ,4.66 (1H, d, J=1.5Hz), 2.66 (1H, d
d, J=14, 11Hz) ,2.54 (1H, dd, J=14, 3Hz), 2.40 (1
H, br d, J=11Hz),2.32 (1H, ddd, J=13, 4, 2.5Hz),
1.94 (1H, dt, J=13, 5Hz),1.79 (1H, br dt, J=12.5,
3Hz), 1.72 (1H, m), 1.68-1.50 (2H, m),1.41 (1H, dd
d, J=13, 3.5, 1.5Hz), 1.35 (1H, m), 1.32 (1H, m),
1.25 (1H, m), 1.17 (1H, dd, J=12, 2.5Hz), 0.88 (3
H, s),0.82 (3H, s), 0.77 (3H, s)（27個の水素が観測
された。） １０）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ） 重クロロホルム中、内部基準に重クロロホルムを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル（９０ＭＨｚ）は以下
の通りである。7.78 (1H, s), 5.97 (1H, s), 4.68 (1
H, d, J = 1.5Hz), 4.66 (1H, d, J = 1.5Hz), 2.66 (1H, d
d, J = 14, 11Hz), 2.54 (1H, dd, J = 14, 3Hz), 2.40 (1
H, br d, J = 11Hz), 2.32 (1H, ddd, J = 13, 4, 2.5Hz),
1.94 (1H, dt, J = 13, 5Hz), 1.79 (1H, br dt, J = 12.5,
3Hz), 1.72 (1H, m), 1.68-1.50 (2H, m), 1.41 (1H, dd
d, J = 13, 3.5, 1.5Hz), 1.35 (1H, m), 1.32 (1H, m),
1.25 (1H, m), 1.17 (1H, dd, J = 12, 2.5Hz), 0.88 (3
H, s), 0.82 (3H, s), 0.77 (3H, s) (27 hydrogens were observed.) 10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) internal standard in deuterated chloroform The nuclear magnetic resonance spectrum (90 MHz) measured using deuterated chloroform is as follows.

【００２４】148.6 (s), 117.0 (s), 106.6 (t), 102.1
(d), 55.6 (d), 54.1 (d),42.1 (t), 40.1 (s), 38.8
(t), 38.3 (t), 33.6 (q), 33.6 (s),24.5 (t), 21.8
(q), 19.5 (t), 18.8 (t), 14.1 (q)（17個の炭素のみ
観測された。） １１）高速液体クロマトグラフィー： カラム：コスモシル 5５Ｃ１８ＡＲ、４．６φ×１５０
ｍｍ（ナカライテスク社製） 溶媒：メタノール−０．２％リン酸トリエチルアミン
（ｐＨ３．３）＝７：３ 流速：１ｍｌ／分 検出波長：２１０ｎｍ 保持時間：８．０分； またはその薬理学的に許容される塩、 （３） トリコペジゼラ（Trichopezizella ）属に属す
るＦ−１２５０９Ａ生産菌を培養し、その培養物よりＦ
−１２５０９Ａを採取することを特徴とするＦ−１２５
０９Ａの製造法、 （４） トリコペジゼラ属に属するＦ−１２５０９Ａ生
産菌がTrichopezizella barbata (Kunze ex Fr.) Rait
v. ＳＡＮＫ ２５３９５（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２３
０）株である、（３）に記載の製造法、 （５） Ｆ−１２５０９Ａまたはその薬理学的に許容さ
れる塩を含むことからなる医薬、 （６） Ｆ−１２５０９Ａまたはその薬理学的に許容さ
れる塩を含むことからなるスフィンゴシンキナーゼ阻害
剤、に関する。148.6 (s), 117.0 (s), 106.6 (t), 102.1
(d), 55.6 (d), 54.1 (d), 42.1 (t), 40.1 (s), 38.8
(t), 38.3 (t), 33.6 (q), 33.6 (s), 24.5 (t), 21.8
(q), 19.5 (t), 18.8 (t), 14.1 (q) (Only 17 carbons were observed.) 11) High performance liquid chromatography: Column: Cosmocil 55C18AR, 4.6φ × 150
mm (manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) Solvent: methanol-0.2% triethylamine phosphate (pH 3.3) = 7: 3 Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 210 nm Retention time: 8.0 min; or pharmacologically Acceptable salts, (3) F-12509A-producing bacteria belonging to the genus Trichopezizella are cultivated, and F
F-125 characterized by collecting -12509A
(4) The F-12509A-producing strain belonging to the genus Trichopezella is Trichopezizella barbata (Kunze ex Fr.) Rait
v. SANK 25395 (FERM BP-523
0) strain, the production method according to (3), (5) a medicament comprising F-12509A or a pharmacologically acceptable salt thereof, (6) F-12509A or a pharmacologically thereof. A sphingosine kinase inhibitor comprising an acceptable salt.

【００２５】本発明者らは、微生物二次代謝産物中より
スフィンゴシンキナーゼ阻害作用を有する物質を検索し
た結果、土壌より分離したトリコペジゼラ（Trichopezi
zella ）属に属するTrichopezizella barbata (Kunze e
x Fr.) Raitv. ＳＡＮＫ ２５３９５（ＦＥＲＭ ＢＰ
−５２３０）株の培養物から、スフィンゴシンキナーゼ
に対する阻害作用を有する新規化合物Ｆ−１２５０９Ａ
が生産されることを見出し、本発明を完成した。The present inventors searched for substances having a sphingosine kinase inhibitory action from secondary microbial metabolites, and as a result, found that Trichopeziella (Trichopeziella) isolated from soil.
zella) belonging to the genus Trichopezizella barbata (Kunze e
x Fr.) Raitv. SANK 25395 (FERM BP
-5230) strain culture product of novel compound F-12509A having an inhibitory effect on sphingosine kinase
Was produced, and the present invention was completed.

【００２６】本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａは、該化
合物の有する互変異性により、以下に示すように、
（Ｉ）の構造から、そのオルトキノン体である（ＩＩ）
の構造に変化したり、また逆に（ＩＩ）の構造から
（Ｉ）の構造に変化することがある。The compound F-12509A of the present invention is, as shown below, due to the tautomerism of the compound:
From the structure of (I), its orthoquinone form (II)
The structure may change to the structure of (I), or vice versa.

【００２７】[0027]

【化３】 Embedded image

【００２８】本発明においては、（Ｉ）または（ＩＩ）
の構造を有する化合物を以下「Ｆ−１２５０９Ａ」とい
う。In the present invention, (I) or (II)
Hereinafter, the compound having the structure of will be referred to as "F-12509A".

【００２９】さらに、本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａ
は種々の立体異性体を有する。本発明においては、これ
ら異性体の等量および非等量混合物がすべて単一の式で
示されている。従って、本発明はこれらの異性体および
これらの異性体の混合物をもすべて含むものである。Further, the compound F-12509A of the present invention
Has various stereoisomers. In the present invention, equal and unequal mixtures of these isomers are all represented by a single formula. Therefore, the present invention also includes all of these isomers and mixtures of these isomers.

【００３０】本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａは、当業
者に周知の方法を用いて塩にすることができる。本発明
はそのようなＦ−１２５０９Ａの塩も包含する。その様
な塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リ
チウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグ
ネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム
塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩など
の金属塩、アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチ
ルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グル
コサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エ
チレンジアミン塩、N-メチルグルカミン塩、グアニジン
塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロ
ヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミ
ン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノー
ルアミン塩、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン塩、ピペラ
ジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン塩のような有機塩などのアミン
塩及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オリニ
チン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなア
ミノ酸塩を挙げることが出来る。The compound F-12509A of the present invention can be salified using methods well known to those skilled in the art. The present invention also includes such salts of F-12509A. Such salts are preferably alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt, lithium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt, magnesium salt, aluminum salt, iron salt, zinc salt, copper salt. , Metal salts such as nickel salt and cobalt salt, inorganic salts such as ammonium salt, t-octylamine salt, dibenzylamine salt, morpholine salt, glucosamine salt, phenylglycine alkyl ester salt, ethylenediamine salt, N-methylglucamine Salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N-dibenzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, diethanolamine salt, N-benzylphenethylamine salt, piperazine salt, tetramethylammonium salt, tris ( Hydroxymethyl) Amine salts such as organic salts such as Minometan salts and glycine salts, lysine salts, arginine salts, Orinichin, glutamate, amino acid salts such as aspartate and the like.

【００３１】また、本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａ
は、溶剤和物となることがある。例えば、大気中に放置
したり、または再結晶をすることにより、水分を吸収
し、吸着水が付いたり、水和物となる場合がある。その
ようなＦ−１２５０９Ａの溶剤和物もまた本発明に包含
される。Further, the compound of the present invention F-12509A
May be a solvate. For example, it may be left in the atmosphere or recrystallized to absorb water, become adsorbed with water, or become a hydrate. Such F-12509A solvates are also included in the invention.

【００３２】さらに本発明は、生体内において代謝され
てＦ−１２５０９Ａに変換される化合物、いわゆるプロ
ドラッグもすべて含むものである。Further, the present invention includes all compounds which are metabolized in the living body and converted into F-12509A, so-called prodrugs.

【００３３】[0033]

【発明の実施の形態】本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａ
はTrichopezizella barbata (Kunze ex Fr.)Raitv. Ｓ
ＡＮＫ ２５３９５株を適当な培地で培養し、該培養物
から採取することにより得られる。Ｆ−１２５０９Ａ生
産菌は盤菌類であるので、その同定には子実体の菌学的
性状の観察が不可欠である。そこで、標本の切片を凍結
ミクロトームにより得て、その菌学的性状を観察した。
また、培養性状はポテトデキストロースアガー（以下
「ＰＤＡ」という：３９ｇポテトデキストロースパウダ
ー（日水製薬（株）社製）、／１リットル蒸留水）に接
種して観察した。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The compound F-12509A of the present invention.
Is Trichopezizella barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. S
It can be obtained by culturing the ANK 25395 strain in an appropriate medium and collecting it from the culture. Since the F-12509A-producing bacterium is a disc fungus, observation of the mycological properties of the fruiting body is essential for its identification. Therefore, a section of the specimen was obtained by a freezing microtome, and its mycological properties were observed.
The culture properties were observed by inoculating potato dextrose agar (hereinafter referred to as “PDA”: 39 g potato dextrose powder (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) / 1 liter distilled water).

【００３４】Ｆ−１２５０９Ａ物質生産菌ＳＡＮＫ ２
５３９５株の菌学的性状は次の通りである。子嚢盤は質
上に表在し、群生する。該子嚢盤は無柄もしくは短い柄
を持ち、乾燥時は球形から円盤状またはつぶれた円盤状
で、縁が内部に巻き込む。水に戻すと円盤状となり、子
実層は灰橙色である。毛は大部分真直であるが、しばし
ば褶曲し、強く湾曲するかコイル状に巻くこともある。
毛は多細胞よりなり、明褐色を呈し、先端部へむかって
淡色となる。毛の幅は基部から不変である（幅３〜５μ
ｍ、長さ最大で２５０μｍ）が、先端部が腺状に膨大す
ることもある。子嚢は円筒状棍棒形で、基部にかぎ形構
造があり、先端部は亜円錐形である。子嚢胞子は楕円形
から紡錘形、しばしばやや湾曲し、殆ど１隔壁を有す
る。托外皮層は明〜淡褐色で、内外２層よりなる。外層
は多角菌組織から円形菌組織、内層は密に交織する絡み
合い菌組織である。本菌株のＰＤＡ上での生育は、次の
通りである。２３℃２週間で直径１６ｍｍに達する。菌
糸は一部埋没し、一部は表在する。わずかに気菌糸が発
達し、コロニーはビロード状を呈し、全体に平坦または
中央部でやや盛り上がる。コロニーは中央部で褐色、外
縁部に向かって淡色となる。コロニー裏面は暗褐色で、
放射状のしわを有する。F-12509A substance-producing bacterium SANK 2
The mycological properties of the 5395 strain are as follows. Ascos are superficial in quality and form clusters. The ascidian has an unpatterned or short stalk, and when dry, has a spherical shape to a disk shape or a crushed disk shape, and the rim is wound inside. When it is returned to water, it becomes disc-shaped and the grain layer is gray-orange. The bristles are mostly straight, but often fold and may be strongly curved or coiled.
The hair is multicellular, has a light brown color, and becomes a pale color toward the tip. The width of the hair is unchanged from the base (width 3-5μ
m, and the maximum length is 250 μm), but the tip may swell in a glandular shape. The asci are cylindrical club-shaped, with a hook-shaped structure at the base and a subconical shape at the tip. Ascospores are elliptical to spindle-shaped, often slightly curved, with almost one septum. The outer skin layer is light to light brown and consists of two inner and outer layers. The outer layer is a polymycobacterial tissue to a circular bacterial tissue, and the inner layer is a densely interwoven entangled bacterial tissue. The growth of this strain on PDA is as follows. The diameter reaches 16 mm at 23 ° C. for 2 weeks. Some hyphae are buried and some are superficial. Slightly developing aerial hyphae, the colony has a velvety appearance, and is flat or slightly raised in the center. The colony becomes brown in the center and becomes lighter toward the outer edge. The back of the colony is dark brown,
Has radial wrinkles.

【００３５】以上の菌学的性状から、本菌株に該当する
ものを検索したところ、ヘインズの文献［Haines, J.H.
(1974) Notes on the genus Trichopezizella with de
scriptions of new taxa Mycologia, 66, 213-241 参
照］に記載されているTrichopezizella barbata (Kunze
ex Fr.) Raitv.と一致した。よって、本菌をTrichope
zizella barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. ＳＡＮＫ ２
５３９５と同定した。該菌株は平成７年９月１２日付で
工業技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託され、受
託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５２３０が付された。From the above mycological properties, a search for a strain corresponding to this strain was carried out, and it was found in the Haines document [Haines, JH
(1974) Notes on the genus Trichopezizella with de
Description of new taxa Mycologia, 66, 213-241]], Trichopezizella barbata (Kunze
ex Fr.) Rait v. Therefore,
zizella barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. SANK 2
It was identified as 5395. The strain was internationally deposited on September 12, 1995 at the Institute of Biotechnology, Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science, and was given the deposit number FERM BP-5230.

【００３６】周知の通り、盤菌類は自然界において、ま
たは人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線放射、
化学薬品処理等）により、変異を起こしやすく、本発明
のＳＡＮＫ ２５３９５株もその点は同じである。本発
明にいうＳＡＮＫ ２５３９５株はそのすべての変異株
を包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝子工
学的方法、例えば、組換え、形質導入、形質転換等によ
り得られたものも包含される。すなわち、Ｆ−１２５０
９Ａを生産するＳＡＮＫ ２５３９５株、それらの変異
株およびそれらと明確に区別されない菌株はすべてＳＡ
ＮＫ ２５３９５株に包含される。As is well known, discophytes can be used naturally or artificially (eg UV irradiation, radiation irradiation,
Mutation is liable to occur due to chemical treatment, etc.), and the same applies to the SANK 25395 strain of the present invention. The SANK 25395 strain referred to in the present invention includes all mutants thereof. Further, these mutants also include those obtained by genetic engineering methods such as recombination, transduction, transformation and the like. That is, F-1250
The 9A-producing SANK 25395 strain, mutants thereof and strains not clearly distinguished from them are all SA.
It is included in the NK 25395 strain.

【００３７】本発明の新菌株を分離するのに際し使用さ
れる分離培地としては炭素源、窒素源、無機イオン及び
有機栄養源より選択されたものを適宜含有する培地であ
れば合成または天然培地の何れでも使用可能である。該
栄養源としては、従来真菌類や放線菌類の菌株の培養に
利用されている公知のものが利用できる。例えば、炭素
源としては、グルコース、シュークロース、澱粉、グリ
セリン、水飴、糖蜜、大豆油などが使用できる。また、
窒素源としては大豆粉、コーンスチーブリカー、生イー
スト、ジャガイモ、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
などを使用しうる。このほか必要に応じて炭酸カルシウ
ム、リン酸塩等の無機塩類を添加するほか、菌株の発育
を助け、Ｆ−１２５０９Ａの生産を促進するような有機
及び無機物を適当に添加することができる。The separation medium used for separating the novel strain of the present invention may be a synthetic or natural medium as long as it is a medium appropriately containing a carbon source, a nitrogen source, an inorganic ion and an organic nutrient source. Either can be used. As the nutrient source, a known source conventionally used for culturing strains of fungi and actinomycetes can be used. For example, as a carbon source, glucose, sucrose, starch, glycerin, starch syrup, molasses, soybean oil and the like can be used. Also,
As the nitrogen source, soybean flour, corn steep liquor, raw yeast, potato, ammonium sulfate, sodium nitrate and the like can be used. In addition to inorganic salts such as calcium carbonate and phosphate, if necessary, organic and inorganic substances that help the growth of the strain and promote the production of F-12509A can be added appropriately.

【００３８】培養法としては、一般の抗生物質を生産す
る方法と同じく液体培養法、特に深部培養法が適してい
る。培養は好気的条件で行われ、培養に好適な温度は１
８〜２４℃であるが、最も好適には２０℃である。Ｆ−
１２５０９Ａの生産は、振とう培養の場合、通常１０〜
１２日で最高値に達する。As the culturing method, the liquid culturing method, particularly the submerged culturing method, is suitable as in the method for producing general antibiotics. The culture is carried out under aerobic conditions, and the suitable temperature for the culture is 1
It is 8 to 24 ° C, but most preferably 20 ° C. F-
The production of 12509A is usually 10 to 10 in the case of shaking culture.
The maximum value is reached in 12 days.

【００３９】培養終了後、培養液中の菌体あるいは上清
中に存在するＦ−１２５０９Ａを培養液の容量程度のア
セトンあるいはアセトニトリル等の有機溶媒を添加し混
合することにより抽出する。抽出物中に存在する固形部
分を、珪藻土をろ過操作助剤とするろ過操作または遠心
分離によって分別し、そのろ液または上清中に存在する
Ｆ−１２５０９Ａを、スフィンゴシンキナーゼ活性を指
標にして、その物理的性状を利用し抽出精製する。例え
ば、該抽出液中に存在するＦ−１２５０９Ａは、まず濃
縮操作で混在する有機溶媒を除去した後に、ｐＨ３程度
の酸性条件下で水と混和しない有機溶媒、例えばブタノ
ール、メチルエチルケトン、酢酸エチル、クロロホル
ム、塩化エチレン、塩化メチレンなどを単独で、または
それらを適宜組み合わたものを添加することにより抽出
精製することができる。あるいは吸着剤として、例えば
活性炭または吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−
２、ＸＡＤ−４（ローム アンド ハース社製）もしく
はダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＯ−２０、ＣＨＰ−２０
Ｐ、ＨＰ−５０（三菱化成（株）社製）等を使用するこ
とができる。Ｆ−１２５０９Ａを含む液を上記のごとき
吸着剤の層を通過させることにより不純物を吸着させて
取り除くか、またはＦ−１２５０９Ａを吸着させた後、
メタノール水、アセトン水、ブタノール水などを用いて
溶出させることにより得られる。さらに、このようにし
て得られたＦ−１２５０９Ａは、シリカゲル、フロリジ
ルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィ
ー、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）等
を用いた分配カラムクロマトグラフィー、セファデック
スＧ−２５（ファルマシア社製）等を用いたゲルろ過ク
ロマトグラフィー、または順相もしくは逆相カラムを用
いた高速液体クロマトグラフィーで精製することができ
る。After completion of the culture, F-12509A present in the bacterial cells in the culture medium or in the supernatant is extracted by adding and mixing an organic solvent such as acetone or acetonitrile in a volume of the culture medium. The solid portion present in the extract is separated by filtration or centrifugation using diatomaceous earth as a filtration operation aid, and F-12509A present in the filtrate or supernatant is used as an index for sphingosine kinase activity. It is extracted and purified by utilizing its physical properties. For example, F-12509A present in the extract may be an organic solvent that is immiscible with water under acidic conditions of about pH 3, such as butanol, methyl ethyl ketone, ethyl acetate, and chloroform, after first removing the mixed organic solvent by a concentration operation. , Ethylene chloride, methylene chloride and the like, or by adding a combination thereof as appropriate, extraction and purification can be carried out. Alternatively, as an adsorbent, for example, activated carbon or an adsorbent resin, Amberlite XAD-
2, XAD-4 (made by Rohm and Haas) or Diaion HP-10, HO-20, CHP-20
P, HP-50 (made by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), etc. can be used. Impurities are adsorbed and removed by passing a liquid containing F-12509A through a layer of the adsorbent as described above, or after adsorbing F-12509A,
It can be obtained by eluting with methanol water, acetone water, butanol water or the like. Further, the F-12509A thus obtained is subjected to adsorption column chromatography using a carrier such as silica gel and Florisil, partition column chromatography using Sephadex LH-20 (manufactured by Pharmacia), Sephadex. It can be purified by gel filtration chromatography using G-25 (Pharmacia) or high performance liquid chromatography using a normal phase or reverse phase column.

【００４０】本発明の化合物Ｆ−１２５０９Ａのスフィ
ンゴシンキナーゼ阻害活性を測定する方法は以下の通り
である［Schroepfer J. R. et al, (1970) J Biol. Che
m. 245, 3084-3090 参照］。すなわち、まず、酵素溶液
としてウイスターイマミチ系雄性ラットの細胞質可溶性
画分を調製する。酵素溶液と、アデノシン三リン酸（以
下「ＡＴＰ」という）、塩化マグネシウム、エチレンジ
アミン四酢酸（以下「ＥＤＴＡ」という）、メルカプト
エタノールを含むリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．
４）、検体溶液、および、プロピレングリコールに溶解
した基質（［３− ³Ｈ］−Ｄ−エリスロ−スフィンゴシ
ン（ＮＥＮ社製））を混合し、３７℃で保温することに
よりスフィンゴシンキナーゼ反応を行う。次に、濃アン
モニア水を加えることにより反応を停止させ、クロロホ
ルム：メタノール（２：１、v/v ）を加えて抽出操作を
施し、得られた上層中の放射活性を液体シンチレーショ
ンカウンターで測定する。スフィンゴシンキナーゼ活性
の算出は、上層に移行した放射活性の割合で示すことが
できる。即ち、基質の ³Ｈ−スフィンゴシンが ³Ｈ−ス
フィンゴシン−１−リン酸になり、有機層より水層に移
行した割合を測定し、酵素活性を算出する。The method for measuring the sphingosine kinase inhibitory activity of the compound F-12509A of the present invention is as follows [Schroepfer JR et al, (1970) J Biol. Che.
m. 245, 3084-3090]. That is, first, a cytosolic soluble fraction of Wistar Imamitic male rat is prepared as an enzyme solution. A potassium phosphate buffer (pH 7.) containing an enzyme solution, adenosine triphosphate (hereinafter referred to as "ATP"), magnesium chloride, ethylenediaminetetraacetic acid (hereinafter referred to as "EDTA"), and mercaptoethanol.
4), the sample solution, and the substrate was dissolved in propylene glycol - mixing ([3- ³ H] -D- erythro sphingosine (NEN Co.)), the sphingosine kinase reaction by incubating at 37 ° C.. Next, the reaction is stopped by adding concentrated ammonia water, chloroform: methanol (2: 1, v / v) is added, extraction operation is performed, and the radioactivity in the obtained upper layer is measured by a liquid scintillation counter. . The sphingosine kinase activity can be calculated by the ratio of radioactivity transferred to the upper layer. That is, the ratio of the substrate ³ H-sphingosine converted to ³ H-sphingosine-1-phosphate and transferred from the organic layer to the aqueous layer is measured, and the enzyme activity is calculated.

【００４１】なお、スフィンゴシンキナーゼの活性測定
は上記に限定されず、例えば基質に放射性の³²Ｐ−ＡＴ
Ｐを用いるシュピーゲルらの方法［Olivera A. and Spi
egelS., (1993) Nature, 365, 557-560参照］等、いか
なる方法を用いてもよい。The measurement of sphingosine kinase activity is not limited to the above. For example, ³² P-AT that is radioactive as a substrate is used.
The method of Spiegel et al. Using P [Olivera A. and Spi
egel S., (1993) Nature, 365, 557-560]] and the like.

【００４２】本発明のＦ−１２５０９Ａまたはその薬理
学上許容される塩は種々の形態で投与される。その投与
形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散
剤、シロップ剤等による経口投与、または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、坐剤等による非経口投与
を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従
って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭
剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の
製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用
いて製剤化することができる。The F-12509A of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof is administered in various forms. Examples of the dosage form include oral administration by tablets, capsules, granules, powders, syrups, etc., or parenteral administration by injections (intravenous, intramuscular, subcutaneous), drops, suppositories, etc. You can These various preparations are commonly used in the pharmaceutical preparation technical field such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, solubilizing agents, suspending agents, coating agents, and the like, in accordance with the usual methods for the main drug. It can be formulated using known adjuvants.

【００４３】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、
炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等
の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロッ
プ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメ
チルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸
カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥澱
粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭
酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレ
ンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウ
ム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊
剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の
崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナ
トリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿
剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状
ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸
末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等が例示でき
る。さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、
たとえば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルム
コーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることがで
きる。In the case of molding in the form of tablets, those conventionally known in this field can be widely used as carriers, such as lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch,
Excipients such as calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid; binding of water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, shellac, methylcellulose, potassium phosphate, polyvinylpyrrolidone, etc. Agents: dry starch, sodium alginate, agar powder, laminaran powder, sodium hydrogen carbonate, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, sodium lauryl sulfate, disintegrating agents such as stearic acid monoglyceride, starch, lactose, white sugar, stearin, cacao Decay inhibitor for butter, hydrogenated oil, etc .; Absorption promoter for quaternary ammonium salt, sodium lauryl sulfate, etc .; Moisturizer for glycerin, starch, etc .; Adsorbent for starch, lactose, kaolin, bentonite, colloidal silicic acid, etc. ; Purification Torque, stearate, boric acid powder, lubricants such as polyethylene glycol can be exemplified. Further tablets are tablets coated with normal skin as needed,
For example, a sugar-coated tablet, a gelatin-coated tablet, an enteric-coated tablet, a film-coated tablet, a double tablet, or a multi-layer tablet can be used.

【００４４】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
ブドウ糖、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カ
オリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガン
ト末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン寒
天等の崩壊剤等が例示できる。In the case of molding in the form of pills, those conventionally known in this field can be widely used as carriers, for example, excipients such as glucose, lactose, cocoa butter, starch, hydrogenated vegetable oil, kaolin, talc and the like; Arabic. Examples thereof include rubber powder, tragacanth powder, binders such as gelatin and ethanol, and disintegrating agents such as laminaran agar.

【００４５】坐剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
ポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコー
ル、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グ
リセリド等を挙げることができる。In the case of molding in the form of suppositories, those conventionally known in this field can be widely used as carriers, for example, polyethylene glycol, cocoa butter, higher alcohols, esters of higher alcohols, gelatin, semisynthetic glycerides and the like. Can be mentioned.

【００４６】注射剤として調製される場合には、液剤お
よび懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ま
しく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形する
に際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているも
のをすべて使用でき、例えば水、エタノール、プロピレ
ングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることがで
きる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに十
分な量の食塩、ブドウ糖、あるいはグリセリンを医薬製
剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩
衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。When prepared as an injection, the solution and suspension are preferably sterilized and isotonic with blood, and when formed into a solution, emulsion or suspension, they are diluted. All of the agents conventionally used in this field can be used, for example, water, ethanol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol,
Examples thereof include polyoxylated isostearyl alcohol and polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters. In this case, a sufficient amount of salt, glucose, or glycerin for preparing an isotonic solution may be contained in the pharmaceutical preparation, and a usual solubilizer, buffer, soothing agent, etc. May be added.

【００４７】さらに必要に応じて着色剤、保存剤、香
料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有せしめてもよ
い。If desired, colorants, preservatives, fragrances, flavors, sweeteners and other pharmaceuticals may be contained.

【００４８】上記医薬製剤中に含まれる有効成分化合物
の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通
常全組成物中１−７０重量％、好ましくは１−３０重量
％含まれる量とするのが適当である。The amount of the active ingredient compound contained in the above-mentioned pharmaceutical preparation is not particularly limited and may be appropriately selected within a wide range, but it is usually 1-70% by weight, preferably 1-30% by weight in the total composition. Is appropriate.

【００４９】上記医薬製剤の投与方法は特に限定はな
く、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾
患の程度等に応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、液
剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には
経口投与される。また注射剤の場合には単独であるいは
ブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投
与され、さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮
下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投
与される。The administration method of the above-mentioned pharmaceutical preparation is not particularly limited, and it is determined according to various preparation forms, patient's age, sex and other conditions, degree of disease and the like. For example, tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules are orally administered. Further, in the case of an injection, it is administered alone or mixed with an ordinary replenisher such as glucose or amino acid, and is intravenously administered. Further, if necessary, it is intramuscularly, intradermally, subcutaneously or intraperitoneally administered. In the case of suppositories, they are administered rectally.

【００５０】その使用量は症状、年齢、体重、投与方法
および剤形等によって異なるが、通常は成人に対して１
日あたり、上限として１０００ｍｇ（好ましくは５００
ｍｇ）であり、下限として０．０１ｍｇ（好ましくは
０．１ｍｇ、さらに好ましくは１ｍｇ）を投与すること
ができる。The amount used varies depending on symptoms, age, weight, administration method, dosage form, etc., but is usually 1 for an adult.
The maximum daily dose is 1000 mg (preferably 500 mg).
0.01 mg (preferably 0.1 mg, more preferably 1 mg) can be administered as the lower limit.

【００５１】[0051]

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を詳細に説明す
るが、本発明はこれに限定されるものではない。The present invention will be described in detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

【００５２】実施例１．Ｆ−１２５０９Ａ （１−１）Ｆ−１２５０９Ａ生産菌の培養 Trichopezizella barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. ＳＡ
ＮＫ ２５３９５株を、５００ｍｌ容の三角フラスコ
（種フラスコ）中の８０ｍｌの滅菌した培養培地に無菌
的に接種し、ロータリー振とう機を用いて、２０℃、２
１０ｒｐｍで７日間前培養を行った。 Example 1. F-12509A (1-1) Culture of F-12509A-producing bacterium Trichopezizella barbata (Kunze ex Fr.) Raitv. SA
NK 25395 strain is aseptically inoculated into 80 ml of sterilized culture medium in a 500 ml Erlenmeyer flask (seed flask), and the mixture is rotatably shaken at 20 ° C. for 2 days.
Preculture was carried out at 10 rpm for 7 days.

【００５３】本実施例において用いられた培地の組成は
以下の通りである。The composition of the medium used in this example is as follows.

【００５４】 グリセロール ３０ｇ グルコース ３０ｇ 大豆粉 １０ｇ イースト・エキストラクト ２．５ｇ 可溶性澱粉 ２０ｇ ゼラチン ２．５ｇ 硝酸アンモニウム ２．５ｇ 消泡剤 （ＣＢ−４２２：日本油脂（株）社製）０．２ｍｇ イオン交換水 １０００ｍｌ ｐＨ６．５（滅菌前）。Glycerol 30 g Glucose 30 g Soybean flour 10 g Yeast extract 2.5 g Soluble starch 20 g Gelatin 2.5 g Ammonium nitrate 2.5 g Defoamer (CB-422: manufactured by NOF Corporation) 0.2 mg Ion-exchanged water 1000 ml pH 6.5 (before sterilization).

【００５５】７日間の前培養後、滅菌した上述の組成の
培養培地８０ｍｌを含む５００ｍｌの三角フラスコ１０
本に前培養液をそれぞれ１ｍｌ入れ、２０℃で１０日
間、２１０ｒｐｍのロータリー振とう機で本培養を行っ
た。After preculture for 7 days, 500 ml Erlenmeyer flask 10 containing 80 ml of sterilized culture medium having the above composition.
1 ml of each preculture liquid was placed in a book and main culture was carried out at 20 ° C. for 10 days on a rotary shaker at 210 rpm.

【００５６】（１−２）単離精製 三角フラスコ１０本分の培養液８００ｍｌに等量のアセ
トンを加え１時間撹拌した。この混合物を３０００ｒｐ
ｍ、１０分、遠心分離を行い、上清を減圧濃縮してアセ
トンを除去した。次にこれを６Ｎ塩酸でｐＨ３に調整
し、等量の酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を
飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減
圧濃縮して褐色の油状物質５７０ｍｇを得た。これを少
量のジメチルスルフォキシドに溶解し、以下の様に調製
用高速液体クロマトグラフィー（以下「ＨＰＬＣ」とい
う）で精製した。即ち、約２０ｍｇづつ、７０％アセト
ニトリル- トリエチルアミン（０．５％）リン酸緩衝液
（ｐＨ３）で平衡化したＨＰＬＣカラム（コスモシル・
５Ｃ１８−ＡＲ、２０φ×２５０ｍｍ；ナカライテスク
社製）にチャージし、同じ溶媒で９．９ｍｌ/ 分の流速
で展開した。２１０ｎｍの吸収を検出し、約２６分にで
るピークを分取した。この分取を繰り返し、分取した溶
液をまとめ減圧濃縮してアセトニトリルを除去した。さ
らにこの溶液を等量の酢酸エチルで２回抽出し、酢酸エ
チル層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。これを減圧濃縮して黄燈色の粉末物質として約
２００ｍｇのＦ−１２５０９Ａ物質を得た。(1-2) Isolation and Purification An equal amount of acetone was added to 800 ml of the culture solution for 10 Erlenmeyer flasks and stirred for 1 hour. 3000 rp for this mixture
After 10 minutes of centrifugation, the supernatant was concentrated under reduced pressure to remove acetone. Then it was adjusted to pH 3 with 6N hydrochloric acid and extracted twice with an equal volume of ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure to give a brown oily substance (570 mg). This was dissolved in a small amount of dimethyl sulfoxide and purified by preparative high performance liquid chromatography (hereinafter referred to as "HPLC") as follows. That is, about 20 mg each, an HPLC column (Cosmocil®) equilibrated with 70% acetonitrile-triethylamine (0.5%) phosphate buffer (pH 3).
5C18-AR, 20φ × 250 mm; manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) and developed with the same solvent at a flow rate of 9.9 ml / min. The absorption at 210 nm was detected, and the peak at about 26 minutes was collected. This collection was repeated, and the collected solutions were combined and concentrated under reduced pressure to remove acetonitrile. Further, this solution was extracted twice with an equal amount of ethyl acetate, the ethyl acetate layer was washed with saturated saline and then dried over anhydrous sodium sulfate. This was concentrated under reduced pressure to obtain about 200 mg of the F-12509A substance as a yellowish yellow powder substance.

【００５７】実施例２．スフィンゴシンキナーゼ阻害活
性の測定 （２−１）酵素液の調製 スフィンゴシンキナーゼの酵素源としてラット肝臓を用
い、まず以下のようにその細胞質可溶性画分を調製し
た。４匹のウイスターイマミチ系雄性ラット（１２週
齢）を頚動脈放血後、肝臓を摘出した。摘出した肝臓を
０．１５Ｍの塩化ナトリウム水溶液で軽く濯ぎ、細かく
スライスした後、予め４℃に冷却した０．１Ｍのリン酸
バッファー（ｐＨ７．４）８０ｍｌを加え、４℃条件
下、ポッターのホモジナイザーを用いて肝細胞の破砕を
行った。次に、得られた細胞破砕液を4℃条件下、５０
０×ｇ、１５分の遠心分離を行い、上清を更に、４℃条
件下、１００００×ｇで３０分間の遠心分離を行った。
得られた上清を４℃条件下、１０５０００×ｇで６０分
間の超遠心分離を行った。その上清を用いて更に硫安分
画を行い、２５％飽和から５５％飽和の間で沈澱する画
分を回収した。得られた沈澱を予め４℃に冷却したバッ
ファーＡ（１ｍＭ ＥＤＴＡ，１ｍＭ メルカプトエタ
ノール、２０％グリセロール、０．１Ｍ リン酸カリウ
ム緩衝液、ｐＨ７．４）２０ｍｌに溶解した。その溶液
をバッファーＡ中で一晩透析し、得られた溶液を酵素溶
液とした。この酵素溶液はスフィンゴシンキナーゼの活
性測定時まで−８０℃にて凍結保存し、使用時にバッフ
ァーＡで蛋白質濃度０．５ｍｇ／ｍｌになる様に調製し
た。 Example 2. Sphingosine kinase inhibitory activity
Sex Measurement (2-1) Preparation of Enzyme Solution Using rat liver as an enzyme source of sphingosine kinase, its cytosolic soluble fraction was prepared as follows. Four Wistar Imamiti male rats (12 weeks old) were exsanguinated from the carotid artery, and the liver was extracted. The extracted liver was lightly rinsed with 0.15 M sodium chloride aqueous solution and finely sliced, and then 80 ml of 0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) pre-cooled to 4 ° C. was added, and under the condition of 4 ° C., a potter homogenizer. Was used to disrupt hepatocytes. Next, the obtained cell lysate is treated at 4 ° C. for 50 minutes.
Centrifugation was performed at 0 × g for 15 minutes, and the supernatant was further centrifuged at 10,000 × g for 30 minutes at 4 ° C.
The obtained supernatant was subjected to ultracentrifugation at 105,000 × g for 60 minutes at 4 ° C. Ammonium sulfate fractionation was further carried out using the supernatant, and the fraction that precipitated between 25% saturation and 55% saturation was recovered. The obtained precipitate was dissolved in 20 ml of buffer A (1 mM EDTA, 1 mM mercaptoethanol, 20% glycerol, 0.1 M potassium phosphate buffer, pH 7.4) which had been cooled to 4 ° C. in advance. The solution was dialyzed overnight in buffer A, and the obtained solution was used as an enzyme solution. This enzyme solution was cryopreserved at −80 ° C. until the time of measuring the activity of sphingosine kinase, and was adjusted to a protein concentration of 0.5 mg / ml with buffer A at the time of use.

【００５８】（２−２）酵素阻害活性の測定 スフィンゴシンキナーゼの阻害活性の測定は、シェーフ
ァーらの方法［Schroepfer J. R. et al, (1970) J Bio
l. Chem. 245, 3084-3090 参照］に準じて、ラット肝臓
細胞質可溶性画分を酵素源に、［３− ³Ｈ］−Ｄ−エリ
スロ−スフィンゴシン（ＮＥＮ社製）を基質に用いて行
った。即ち、先ず酵素溶液（蛋白質濃度０．５μｇ／ｍ
ｌ）１００μｌ、バッファーＢ（１０ｍＭ ＡＴＰ、２
０ｍＭ塩化マグネシウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ
メルカプトエタノール、０．１Ｍ リン酸カリウム緩衝
液、ｐＨ７．４）１００μｌ、微生物より抽出した検体
１０μｌ並びにプロピレングリコールに溶解した基質
（３− ³Ｈ−スフィンゴシン）１０μｌを混合し、３７
℃で２０分、インキュベートすることによりスフィンゴ
シンキナーゼ反応を行った。次に、濃アンモニア水５０
μｌを加えることにより反応を停止させ、クロロホル
ム：メタノール（２：１（ｖ／ｖ））を７５０μｌ加え
て抽出操作を施し、得られた上層７０μｌを９６穴プレ
ート（ルーマプレート：パッカード社製）に加えて一晩
放置し乾燥させた後、９６穴プレート用液体シンチレー
ションカウンター（トップカウント：パッカード社製）
にて放射活性を測定した。スフィンゴシンキナーゼ活性
の算出は、上層に移行した放射活性の割合で示した。即
ち、基質の ³Ｈ−スフィンゴシンが ³Ｈ−スフィンゴシ
ン−１−リン酸になり、有機層より水層に移行した割合
を測定し、酵素活性を算出した。なお、反応系に加えた
基質量は一定であるので、酵素活性は上層のみの放射活
性を測定することにより算出される。(2-2) Measurement of enzyme inhibitory activity The inhibitory activity of sphingosine kinase was measured by the method of Schaefer et al. [Schroepfer JR et al, (1970) J Bio
.. l Chem 245, according to 3084-3090 Browse, rat liver cytosol soluble fraction as an enzyme source, [3- ³ H] -D- erythro - was performed using the substrate sphingosine (NEN Co.) . That is, first, the enzyme solution (protein concentration 0.5 μg / m
l) 100 μl, buffer B (10 mM ATP, 2
0 mM magnesium chloride, 1 mM EDTA, 1 mM
Mercaptoethanol, 0.1M potassium phosphate buffer, pH 7.4) 100 [mu] l, the substrate was dissolved in the sample 10 [mu] l and propylene glycol was extracted from the microorganisms (3- ³ H- sphingosine) 10 [mu] l were mixed, 37
The sphingosine kinase reaction was performed by incubating at 20 ° C. for 20 minutes. Next, concentrated ammonia water 50
The reaction was stopped by adding μl, and 750 μl of chloroform: methanol (2: 1 (v / v)) was added for extraction operation, and 70 μl of the obtained upper layer was added to a 96-well plate (Luma plate: Packard). In addition, after left overnight to dry, liquid scintillation counter for 96-well plate (Top Count: Packard)
Was measured for radioactivity. The sphingosine kinase activity was calculated by the ratio of the radioactivity transferred to the upper layer. That is, the ratio of the substrate ³ H-sphingosine converted to ³ H-sphingosine-1-phosphate and transferred from the organic layer to the aqueous layer was measured, and the enzyme activity was calculated. Since the mass of the substrate added to the reaction system was constant, the enzyme activity was calculated by measuring the radioactivity of only the upper layer.

【００５９】この方法で測定した、スフィンゴシンキナ
ーゼ反応を５０％阻害するのに必要なＦ−１２５０９Ａ
の濃度は０．９４μｇ／ｍｌであった。F-12509A required for 50% inhibition of sphingosine kinase reaction measured by this method
Was 0.94 μg / ml.

【００６０】製剤例１ 上記処方の粉末を混合し、６０メッシュのふるいを通し
た後、この粉末を２５０ｍｇの３号ゼラチンカプセルに
入れ、カプセル剤とする。Formulation Example 1 After mixing the powder having the above formulation and passing through a 60-mesh sieve, the powder is placed in a 250 mg No. 3 gelatin capsule to prepare a capsule.

【００６１】製剤例２ 上記処方の粉末を混合し、打錠機により打錠して、１錠
２００ｍｇの錠剤とする。Formulation Example 2 The powders of the above formulation are mixed and compressed with a tableting machine to give 200 mg tablets.

【００６２】この錠剤は必要に応じて糖衣を施すことが
できる。The tablets may be sugar-coated as needed.

【００６３】[0063]

【発明の効果】以上の如く、本発明の化合物Ｆ−１２５
０９Ａはスフィンゴシンキナーゼに対する阻害作用を有
しており、該化合物を含むことからなる薬剤により動脈
硬化症、糖尿病、血栓症、炎症性疾患、自己免疫疾患、
癌の進展や転移、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の
再狭窄などの予防または治療に有用である。As described above, the compound F-125 of the present invention is used.
09A has an inhibitory effect on sphingosine kinase, and a drug containing the compound causes arteriosclerosis, diabetes, thrombosis, inflammatory disease, autoimmune disease,
It is useful for prevention or treatment of cancer progression and metastasis, restenosis after percutaneous coronary angioplasty (PTCA), and the like.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＰ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＰ ＡＤＳ ＡＤＳ ＡＤＵ ＡＤＵ ＡＥＤ ＡＥＤ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｐ 7/66 Ｃ１２Ｐ 7/66 Ａ //(Ｃ１２Ｐ 7/66 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 荻田 健 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 細矢 剛 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Internal reference number FI Technical display location A61K 31/12 ADP A61K 31/12 ADP ADS ADS ADU ADU AED AED C12N 9/99 C12N 9/99 C12P 7/66 C12P 7/66 A // (C12P 7/66 C12R 1: 645) (72) Inventor Ken Ogita 1-58 Hiromachi, Shinagawa-ku, Tokyo Sankyo Co., Ltd. (72) Inventor Hosoya Tsuyoshi Mikyogaoka, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture Sankyo Co., Ltd.

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 下記の式（Ｉ） 【化１】 で表される化合物Ｆ−１２５０９Ａまたはその薬理学的
に許容される塩。(1) The following formula (I): The compound F-12509A represented by or its pharmacologically acceptable salt. 【請求項２】 下記の性状を有する化合物Ｆ−１２５０
９Ａ； １）物質の性状：淡橙色物質 ２）溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒に可溶 ３）呈色試験：５０％硫酸、ヨウ素に陽性 ４）分子式：Ｃ₂₁Ｈ₂₈Ｏ₄ ５）分子量：３４４（高分解能ＥＩ−ＭＳ法による実測
値：［Ｍ］＋３４４．１９８５） （計算値：３４４．１９８７） ６）比旋光度：［α］_D ²⁵ −９６°（ｃ ０．２５、
メタノール中） ７）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（ε） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは以下の
通りである。 290 (14700), 477 (500)、 メタノール−0.01N 水酸化ナトリウム溶液中で測定した
紫外線吸収スペクトルは以下の通りである。 235sh (9700), 327 (22400), 530 (200) ８）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは次に示す通り
である。 3310, 2965, 1645, 1620, 1360, 1320, 1190 ９） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ） 重クロロホルム中、内部基準にテトラメチルシランを使
用して測定した核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨｚ）
は以下の通りである。 7.78 (1H, br s), 5.97 (1H, s), 4.68 (1H, d, J=1.5H
z) ,4.66 (1H, d, J=1.5Hz), 2.66 (1H, dd, J=14, 11H
z) ,2.54 (1H, dd, J=14, 3Hz), 2.40 (1H, br d, J=11
Hz),2.32 (1H, ddd, J=13, 4, 2.5Hz), 1.94 (1H, dt,
J=13, 5Hz),1.79 (1H, br dt, J=12.5, 3Hz), 1.72 (1
H, m), 1.68-1.50 (2H, m),1.41 (1H, ddd, J=13, 3.5,
1.5Hz), 1.35 (1H, m), 1.32 (1H, m),1.25 (1H, m),
1.17 (1H, dd, J=12, 2.5Hz), 0.88 (3H, s),0.82 (3H,
s), 0.77 (3H, s)（27個の水素が観測された。） １０）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ） 重クロロホルム中、内部基準に重クロロホルムを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル（９０ＭＨｚ）は以下
の通りである。 148.6 (s), 117.0 (s), 106.6 (t), 102.1 (d), 55.6
(d), 54.1 (d),42.1 (t), 40.1 (s), 38.8 (t), 38.3
(t), 33.6 (q), 33.6 (s),24.5 (t), 21.8 (q), 19.5
(t), 18.8 (t), 14.1 (q)（17個の炭素のみ観測され
た。） １１）高速液体クロマトグラフィー： カラム：コスモシル 5５Ｃ１８ＡＲ、４．６φ×１５０
ｍｍ（ナカライテスク社製） 溶媒：メタノール−０．２％リン酸トリエチルアミン
（ｐＨ３．３）＝７：３ 流速：１ｍｌ／分 検出波長：２１０ｎｍ 保持時間：８．０分； またはその薬理学的に許容される塩。2. A compound F-1250 having the following properties:
9A; 1) Property of substance: pale orange substance 2) Solubility: methanol, ethyl acetate, chloroform,
Soluble in organic solvents such as dimethylsulfoxide 3) Color test: 50% sulfuric acid, positive for iodine 4) Molecular formula: C ₂₁ H ₂₈ O ₄ 5) Molecular weight: 344 (Actual value by high resolution EI-MS method: [M ] +344.1985) (Calculated value: 344.1987) 6) Specific rotation: [α] _D ²⁵ −96 ° (c 0.25,
7) Ultraviolet absorption spectrum: λ _max nm (ε) The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol is as follows. The ultraviolet absorption spectra measured in 290 (14700), 477 (500), methanol-0.01N sodium hydroxide solution are as follows. 235sh (9700), 327 (22400), 530 (200) 8) Infrared absorption spectrum: ν _max cm ^{-1 The} infrared absorption spectrum measured in the liquid film is as shown below. 3310, 2965, 1645, 1620, 1360, 1320, 1190 9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated chloroform (360 MHz )
Is as follows. 7.78 (1H, br s), 5.97 (1H, s), 4.68 (1H, d, J = 1.5H
z), 4.66 (1H, d, J = 1.5Hz), 2.66 (1H, dd, J = 14, 11H
z), 2.54 (1H, dd, J = 14, 3Hz), 2.40 (1H, br d, J = 11
Hz), 2.32 (1H, ddd, J = 13, 4, 2.5Hz), 1.94 (1H, dt,
J = 13, 5Hz), 1.79 (1H, br dt, J = 12.5, 3Hz), 1.72 (1
H, m), 1.68-1.50 (2H, m), 1.41 (1H, ddd, J = 13, 3.5,
1.5Hz), 1.35 (1H, m), 1.32 (1H, m), 1.25 (1H, m),
1.17 (1H, dd, J = 12, 2.5Hz), 0.88 (3H, s), 0.82 (3H,
s), 0.77 (3H, s) (27 hydrogens were observed.) 10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Measured in deuterated chloroform using deuterated chloroform as an internal standard. The nuclear magnetic resonance spectrum (90 MHz) is as follows. 148.6 (s), 117.0 (s), 106.6 (t), 102.1 (d), 55.6
(d), 54.1 (d), 42.1 (t), 40.1 (s), 38.8 (t), 38.3
(t), 33.6 (q), 33.6 (s), 24.5 (t), 21.8 (q), 19.5
(t), 18.8 (t), 14.1 (q) (Only 17 carbons were observed.) 11) High performance liquid chromatography: Column: Cosmosil 55C18AR, 4.6φ × 150
mm (manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) Solvent: methanol-0.2% triethylamine phosphate (pH 3.3) = 7: 3 Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 210 nm Retention time: 8.0 min; or pharmacologically Acceptable salt. 【請求項３】 トリコペジゼラ（Trichopezizella ）属
に属するＦ−１２５０９Ａ生産菌を培養し、その培養物
よりＦ−１２５０９Ａを採取することを特徴とするＦ−
１２５０９Ａの製造法。3. An F- characterized in that an F-12509A-producing bacterium belonging to the genus Trichopezizella is cultured and F-12509A is collected from the culture.
Manufacturing method of 12509A. 【請求項４】 トリコペジゼラ属に属するＦ−１２５０
９Ａ生産菌がTrichopezizella barbata (Kunze ex Fr.)
Raitv. ＳＡＮＫ ２５３９５（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２
３０）株である、請求項３に記載の製造法。4. F-1250 belonging to the genus Trichopezella
9A-producing strain is Trichopezizella barbata (Kunze ex Fr.)
Raitv. SANK 25395 (FERM BP-52
30) The method according to claim 3, which is a strain. 【請求項５】 Ｆ−１２５０９Ａまたはその薬理学的に
許容される塩を含むことからなる医薬。5. A medicine comprising F-12509A or a pharmacologically acceptable salt thereof. 【請求項６】 Ｆ−１２５０９Ａまたはその薬理学的に
許容される塩を含むことからなるスフィンゴシンキナー
ゼ阻害剤。6. A sphingosine kinase inhibitor comprising F-12509A or a pharmacologically acceptable salt thereof.